CN102228512B - 一种治疗类风湿关节炎的药物及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗类风湿关节炎的药物，该药物是由下述重量份数的原料药制成的药剂：黄芪5～60份、青风藤5～15份、全蝎1～15份。本发明药物组合物治疗类风湿关节炎成本低，但疗效显著，服用安全，无毒副反应，适合长期服用。本发明还公开了该药物胶囊剂的制备方法。用本发明制备方法所制得的胶囊剂，能掩盖方中药物的腥臭味，口感好，服用方便，且较片剂和丸剂崩解快，释药迅速，所含药物不受粘合剂和压力的影响，能很快扩散到胃液中，见效快。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药药物，具体地指一种治疗类风湿关节炎的药物及制备方法。
背景技术
类风湿性关节炎(RA)是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫性疾病。临床特点为受累关节疼痛肿胀，功能下降，病变呈持续，反复发作过程，致残率较高(可达40％以上)。重症患者关节呈纤维性或骨性强直，并因关节周围肌肉萎缩、痉挛失去关节功能，致使生活不能自理。除关节症状外，还可出现关节外或内脏损害，如类风湿结节，心、肺、肾、周围神经及眼等病变。病变呈持续、反复发作。类风湿关节炎作为临床常见疑难疾病，其致残率高，直接影响患者的生活质量。
类风湿关节炎的发病机制目前并不十分清楚，但多数学者认为本病的发病机制是在感染因素，遗传因素共同作用下，在内分泌因素～下丘脑～垂体～肾上腺轴的参与下发生的自身免疫性疾病。尽管类风湿关节炎的发病机制尚未十分明确，至今无满意的治疗药物，但免疫治疗从理论上是新的非常有前途的治疗手段之一。许多针对其特异淋巴细胞或循环分子的免疫生物制剂已初步显示出有效性，预示RA的免疫治疗具有广阔的前景。
抗TNF-αMab和可溶性TNF～α受体是RA治疗中两种主要TNF抑制剂。到目前为止，已有两种生物制剂许可在欧洲和美国上市，即嵌合(鼠/人)抗TNF～αMab cA2(Infliximab，Remicade TM)和重组TNF～α受体(p75)～Fc融合蛋白(Etanercept，Enbrel TM)，二者都与TNF分子表位有高度亲和力，可中和其生物活性。最近报道在一个随机化安慰剂对照的试验中，Infliximab有抑制滑膜炎症的作用，并且使C反应蛋白(C～reaction protein，CRP)下降，IL 6也有所降低。生物制剂的治疗尽管具有疾病特异性强、靶向作用等诸多优点，但仍存在着治疗费用昂贵，必须在频繁给药的条件下才能发挥效应等问题，并且单克隆抗体的治疗还有可能诱导免疫反应。
就该病的中药治疗，目前仍以辨证施治为主，或专方专药，此外也有用单方单药者。同时还引入多种外治疗法，如药浴、针灸、按摩、磁疗、搽剂、药酒、熏蒸等。以上治疗手段，虽取得一定的进展，但缺乏公认的可靠疗效，且许多口服药物多存在毒副作用较大的情况。故寻求有效治疗类风湿性关节炎的方法，仍是医家不断研究的方向。中药作为免疫调节剂治疗RA，越来越引起研究者注视。在治疗上，目前尚无疗效理想且毒副作用小的药物。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的首要目的是提供一种成本低、疗效理想且毒副作用小的治疗类风湿关节炎的药物。
本发明的另一目的是提供上述治疗类风湿关节炎的药物的制备方法。
本发明治疗类风湿关节炎的药物是由下述重量份数的原料药制成的药剂：黄芪5～60份、青风藤5～15份、全蝎1～15份。
本发明药物的优选重量份配比范围是：黄芪10～20份、青风藤5～10份、全蝎1～5份。
本发明药物的最佳重量份配比是：黄芪10份、青风藤5份、全蝎1份。
黄芪：为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.varmongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根。黄芪性味甘、温，归肺、脾经。具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌作用。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病。其主要有效成份是皂苷和多糖类(药典规定黄芪甲苷含量不得少于0.040％)，其水煎液具有免疫调节作用，抗病原微生物作用，激素样作用等。
青风藤：为防己科植物青藤Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤茎。青风藤性味苦、辛、平，归肝、脾经，具有祛风湿、通经络、利小便作用。用于风湿痹痛，关节肿胀，麻痹。其主要有效成份是青藤碱(药典规定青藤碱含量不得少于0.50％)在沸水中有一定溶解度。
全蝎：为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体。全蝎性味辛、平，有毒。归肝经。具有息风镇痉，攻毒散结、通络止痛作用。用于小儿惊风、抽搐痉挛、中风口渴、半身不遂、破伤风、风湿顽痹、偏正头痛、疮疡、瘰疬。其活性物质蝎毒素III具有很强的镇痛作用。
本发明药物组合物可以多种方式使用，如直接加水煎煮成汤剂服用；或由上述3味原料药为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
所述的药剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液或针剂等，优选胶囊剂。这是因为：试验表明，按照提取工艺制得的浸膏与药物细粉混匀，若直接干燥后，粉碎成干浸膏粉，灌装，因其吸湿性大，流动性差，难以充填于胶囊，故需制粒后再充填于胶囊。依照以下原则，本发明将其制成颗粒：1)服用量尽可能减少；2)颗粒易制，便于生产；3)颗粒流动性好，便于灌装；4)颗粒不易吸潮，便于贮藏；5)便于质量检测。
根据上述3味中药的理化性质及药理作用，对本发明药物提取工艺及制剂工艺进行研究，得到本发明药物较为合理的制备方法。
本发明所提供的胶囊剂药物的制备方法如下：
a.按照所述重量配比称取原料药备用；
b.全蝎经干燥后，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，制得药物细粉(I)；
c.将黄芪和青风藤用水浸0.5～1小时，再用水煎煮两次，每次用8～10倍量的水煎煮1～2小时，合并煎液，静置沉淀12～24h，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.35的浸膏(II)；
d.取药物细粉(I)和浸膏(II)与乙醇混匀，制软材，20目筛制粒；
e.干燥：所制湿粒50℃～70℃烘干，过20目筛整粒，80目筛去细粉；
f.充填装入胶囊，分装，制得胶囊剂。
本发明药物的用法与用量：本发明药物的用药量取决于具体剂型，以及病人的年龄、体重、健康状况等因素。作为指导：胶囊剂，成人每次口服0.9g，每日3次，3个月为一疗程，治疗1～3个疗程。
本发明的有益效果：通过动物试验和临床研究证实，本发明药物组合物治疗类风湿性关节炎成本低，但疗效显著，总有效率达89％。其不仅能有效改善类风湿性关节炎的关节疼痛、肿胀、压痛等症状，提高双手握力，改善功能障碍，而且能纠正异常的血清ESR、CRP、RF、IgG、补体C3指标等生化异常改变。在观察期间，未发现肝肾损害及其他毒副反应，服用安全，适合长期服用。本发明药物组合物对类风湿性关节炎患者血清Th1、Th2的调节作用非常显著，对Th1水平具有显著下调作用，尤其是早、中期患者的IFN-γ水平下调非常明显；对Th2水平具有下调作用。本发明药物组合物可以明显抑制RA患者血清IFN-γ水平，调节类风湿性关节炎患者Th1/Th2分泌的细胞因子比值恢复平衡。
用本发明制备方法所制得的胶囊剂，能掩盖方中药物的腥臭味，口感好，服用方便，且较片剂和丸剂崩解快，释药迅速，所含药物不受粘合剂和压力的影响，能很快扩散到胃液中，见效快。
具体实施方式
实施例1
组成：黄芪1000g、青风藤500g、全蝎100g。
以上3味原料药共制成胶囊1000粒。
制备方法：
a.按照所述重量配比称取原料药备用；
b.全蝎经干燥后，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，制得药物细粉(I)；
c.将黄芪和青风藤用水浸0.5小时，再用水煎煮两次，第一次加入10倍量水煎煮1.5小时，第二次加入8倍量水煎煮1.0小时，合并煎液，合并煎液，静置沉淀14h，过滤，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.30的浸膏(II)；
d.取药物细粉(I)和浸膏(II)与乙醇混匀，制软材，20目筛制粒；
e.干燥：所制湿粒60℃烘干，过20目筛整粒，80目筛去细粉；
f.充填装入胶囊，分装，制成1000粒胶囊，每粒装0.3g。
所得颗粒中主要含有黄芪甲苷、青藤碱等指标成份。以上指标成份均可采用中华人民共和国药典2010年版一部的方法进行测定。
按照药典记载的薄层色谱法对黄芪甲苷、青藤碱的存在可以进行检测。同时对其性状、水分、粒度、砷盐、重金属、溶化性、微生物限度、稳定性等进行检查和测定，均符合药典的要求。按照药典记载的高效液相色谱法对黄芪甲苷及青藤碱进行测定，其含量分别在0.025mg/粒和0.10mg/粒以上。
实施例2
组成：黄芪750g、青风藤375g、全蝎375g。
以上3味原料药共制成胶囊1000粒。
制备方法：
a.按照所述重量配比称取原料药备用；
b.全蝎经干燥后，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，制得药物细粉(I)；
c.将黄芪和青风藤用水浸1小时，再用水煎煮两次，第一次加入8倍量水煎煮1小时，第二次加入10倍量水煎煮2小时，合并煎液，合并煎液，静置沉淀20h，过滤，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.20的浸膏(II)；
d.取药物细粉(I)和浸膏(II)与乙醇混匀，制软材，20目筛制粒；
e.干燥：所制湿粒65℃烘干，过20目筛整粒，80目筛去细粉；
f.充填装入胶囊，分装，制成1000粒胶囊，每粒装0.3g。
实施例3
组成：黄芪800g、青风藤600g、全蝎200g。
以上3味原料药共制成胶囊1000粒。
制备方法：
a.按照所述重量配比称取原料药备用；
b.全蝎经干燥后，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，制得药物细粉(I)；
c.将黄芪和青风藤用水浸1小时，再用水煎煮两次，第一次加入10倍量水煎煮2小时，第二次加入10倍量水煎煮2小时，合并煎液，合并煎液，静置沉淀20h，过滤，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.35的浸膏(II)；
d.取药物细粉(I)和浸膏(II)与乙醇混匀，制软材，20目筛制粒；
e.干燥：所制湿粒70℃烘干，过20目筛整粒，80目筛去细粉；
f.充填装入胶囊，分装，制成1000粒胶囊，每粒装0.3g。
动物试验
试验1本发明药物组合物对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响
1材料
1.1动物：WISTAR(维斯塔尔)大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：本发明实施例1所制得的中药组合物；正清风痛宁片，湖南正清药业有限公司提供，批准文号：国药准字Z20010174，批号：0501104。
1.3试剂：卡介苗素，由上海生物制品研究所提供，批号：200404001；液体石蜡油，由武汉中南化工试剂有限公司提供，批号：20040421；羊毛脂，上海三蒲化工有限公司，批号：20040107。
1.4仪器：2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置。
2方法
2.1模型复制：取冻干卡介苗素1支(50mg)，80℃、1h灭活，混入灭菌液体石蜡油和羊毛脂(2∶1)的混合物10ml中，制成Freund’s完全佐剂。取体重200±20g大鼠，以Freund’s完全佐剂在每鼠右后足跖皮内注射0.05ml致炎，复制佐剂性关节炎(AA)大鼠模型。
2.2分组：取大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半，随机分为6组，每组10只。具体分组情况如下：A组：正常对照组(简称：正常组)；B组：生理盐水对照组(简称：阴性组)；C组：正清风痛宁对照组(简称：阳性组)；D组：本发明组合物大剂量治疗组(简称：大剂量组)；E组：本发明组合物中剂量治疗组(简称：中剂量组)；F组：本发明组合物小剂量治疗组(简称：小剂量组)。
2.3给药剂量：
2.3.1本发明组合物：成人常用量：口服，3次/日，3粒/次，共计2.7g。根据试验大鼠与人的体表面积比例系数换算，确定大鼠服药剂量：大剂量组22g/kg/d，中剂量组11g/kg/d，小剂量组5.5g/kg/d。取胶囊内药粉，加蒸馏水配成浑悬液，浓度为0.3g/ml，0.2g/ml，0.1g/ml服用。
2.3.2正清风痛宁片剂：成人常用量：口服，每日60～120mg。根据试验大鼠与人的体表面积比例系数换算，确定大鼠服药剂量为60mg/kg/d。取正清风痛宁片剂，研磨成细粉后加入双蒸水，配置成混悬液，浓度为3mg/ml服用。
2.4试验方法：取体重200±20g大鼠，雌雄各半，随机分为6组，阴性组给予生理盐水灌胃，阳性组、大剂量组、中剂量组和小剂量组分别灌胃给药，每日1次，连续5天，第6天，分别测量大鼠右足跖容积后，复制AA模型，1小时后，再次给药1次，于造模后第3、6、18、24h各再次测定大鼠右足跖容积，以造模前后容积之差值为肿胀程度。A组(正常对照组)的大鼠不作处理。
3结果：试验结果如表1所示
表1 大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响
注：与A组比较，##P＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与C组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。
从表1可以看出，注射佐剂造模后，大鼠出现明显炎性反应，右后足跖逐渐肿胀，于造模后18h达到高峰，随后开始下降。本发明药物组合物各剂量组对AA大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用，阳性组(正清风痛宁组)也对AA大鼠原发性足跖肿胀具有明显的抑制作用，本发明药物组合物各剂量组分别与阳性组比较，组间差异均有显著意义(P＜0.05)。
试验2本发明药物组合物对大鼠佐剂性关节炎继发病变的影响
1材料
1.1动物：WISTAR大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：大鼠IL-1β(白介素-1β)试剂盒(ELS法，进口分装)；大鼠TNF-α(肿瘤坏死因子-α)试剂盒(ELS法，进口分装)；大鼠CRP(C反应蛋白)试剂盒(ELS法，进口分装)；大鼠PGE2(前列腺素E2)试剂盒(ELS法，进口分装)；由上海森雄生物制品有限公司提供，购自美国公司。Freund’s完全佐剂同试验1。
1.4仪器：ELX800酶标仪，美国产。
2方法：
2.1模型复制：同试验1。
2.2分组：同试验1。
2.3给药剂量：同试验1。
2.4试验方法：取造模1周后的动物，分别按组灌胃给药，给药体积4ml/200g，每日1次。给药21日后，以戊巴比妥钠麻醉大鼠，股动脉放血处死动物。取血及病理组织进行相应检测。
2.4.1血清指标检测：取5ml，静置30分钟，放入冷冻离心机，2500转/分离心15分钟，取血清，按试剂盒说明书要求，检测血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2含量。
2.4.2病理指标检测：将大鼠尸体浸泡于10％强力消毒冷溶液中10分钟，仰位固定，常规碘酒、酒精消毒术野。沿膝关节正中纵行切开皮肤，直至暴露出以膝关节为中心约3cm×3cm的区域，以齿镊提起髌骨，沿髌骨上沿约0.3～0.4cm处向下切割直至股骨，再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨，此时即打开膝关节腔，可见由髌骨下极向上延续有一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。用刀片完整切下并分离滑膜组织，以多聚甲醛液固定，脱水，包埋，切片，H.E.染色及特殊染色，检测一般病理变化及免疫组化PCNA表达及阳性表达颗粒数。
2.4.3滑膜组织病理改变积分标准：按炎性细胞浸润、巨噬A型细胞增生、滑膜增生、纤维组织增生，4个方面病理改变，并按以下标准分4级进行评价计分。
①炎性细胞浸润：没有炎性细胞浸润为0分，炎性细胞浸润少于20个/高倍视野(HF)为1分，20～50个/HF为2分，大于50个/HF为3分；②巨噬A型细胞增生：无巨噬A型细胞增生为0分，少于10个/HF为1分，10-20个/HF为2分，大于20个/HF为3分；③滑膜增生：滑膜细胞扁平，数量不多为0分，滑膜细胞肿胀，密集单层排列为1分，滑膜细胞肿胀，密集2层排列为2分，滑膜细胞肿胀，密集3层以上排列为3分；④纤维组织增生：无纤维组织增生为0分，平均增生少于0.2个/HF为1分，平均增生0.2～0.4个/HF为2分，平均增生大于0.4个/HF为3分。
3结果：
3.1对AA大鼠一般状况的观察：造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻，食欲下降，皮毛失去光泽，关节肿胀，跛行，耳廓充血，皮下结节表现，结合上述造模成功的筛选指针，可确定动物造模成功。
3.2对AA大鼠血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值的影响：结果见表2。
表2 对大鼠血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值的影响(pg/ml)
| 组别 | IL-1β | TNF-α | PGE2 | CRP |
| A组 | 14.05±2.67 | 14.13±3.24 | 21.59±5.73 | 17.54±3.15 |
| B组 | 30.09±2.96## | 31.25±4.35## | 62.65±9.62## | 41.38±7.52## |
| C组 | 21.11±3.48##** | 22.54±3.47##** | 41.73±10.23##** | 29.61±9.15##** |
| D组 | 23.64±3.57##** | 22.08±2.46##** | 38.76±13.16##** | 28.67±8.49##** |
| E组 | 21.08±3.78##** | 23.27±3.54##** | 40.19±15.34##** | 31.85±8.73##** |
| F组 | 21.46±376##** | 23.61±36.7##** | 42.13±14.78##** | 32.77±9.15##** |
注：与A组比较，##P＜0.01；与B组比较，**P＜0.01。
由表2得知，大鼠造模后，血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值显著升高。本发明药物组合物各剂量组均能显著降低血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值，阳性组(正清风痛宁组)也能显著降低血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值，本发明药物组合物各剂量组分别与阳性组比较，组间差异均不显著(P＞0.05)。因此，本发明组合物能明显改善AA大鼠症状，调节免疫状态，抑制细胞免疫因子生成，对关节炎具有治疗作用，对血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值的抑制作用，具有正清风痛宁相同的治疗效果。
3.3对AA大鼠滑膜组织病理积分的影响：结果见表3。
表3 对滑膜组织病理评分的影响
注：与A组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与B组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表3得知，动物造膜后，滑膜组织出现明显病理改变，炎性细胞浸润、A型细胞增生、滑膜增生、纤维组织增生。本发明药物组合物各剂量组均能显著减轻大鼠滑膜组织的病理学改变，阳性组(正清风痛宁组)也能显著减轻大鼠滑膜组织的病理学改变，本发明药物组合物各剂量组分别与阳性组比较，组间差异均不显著(P＞0.05)。因此，本发明药物组合物对AA大鼠继发性关节炎滑膜组织的病理损害具有治疗作用，此作用具有正清风痛宁相同的治疗效果。
3.4对AA大鼠滑膜组织病理的影响
3.4.1对AA大鼠滑膜组织病理改变的影响：
动物造膜后，滑膜组织出现明显病理改变：H.E.染色，光镜检测，可见滑膜组织充血，水肿，滑膜细胞增生，排列不规则，可见大量的淋巴细胞和单核细胞浸润及纤维组织增生。
本发明药物组合物各剂量组均能减轻大鼠滑膜组织的病理学改变。光镜检测，可见滑膜组织轻度充血，水肿，滑膜细胞增生不明显，淋巴细胞和单核细胞浸润较少及纤维组织增生较轻。阳性组(正清风痛宁组)也能减轻大鼠滑膜组织的病理学改变，本发明药物组合物各剂量组分别与阳性组比较，组间差异均不显著。因此，本发明药物组合物对AA大鼠继发性关节炎滑膜组织的病理损害具有治疗作用，此作用具有正清风痛宁相同的治疗效果。
3.4.2对AA大鼠滑膜免疫组化的影响：
动物造膜后，免疫组化PCNA染色，光镜检测，可见较多PCNA细胞染色阳性颗粒，免疫组化PCNA表达阳性。
本发明药物组合物各剂量组均能明显抑制滑膜组织免疫组化PCNA的阳性表达，滑膜组织PCNA细胞染色阳性颗粒数减少，滑膜细胞增值减弱。阳性组(正清风痛宁组)也能明显抑制滑膜组织免疫组化PCNA的阳性表达，本发明药物组合物各剂量组分别与阳性组比较，组间差异均不显著。因此，本发明药物组合物能明显抑制滑膜细胞的细胞增值，对AA大鼠模型关节炎具有治疗作用，其作用具有正清风痛宁相同的治疗效果。
试验3本发明药物组合物对小鼠细胞免疫功能的影响
1材料：
1.1动物：BALB/C种小鼠，体重18～22g，年龄1～2月，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料，湖北省试验动物研究中心提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：绵羊红细胞，湖北省医学科学院动物室提供。
1.4仪器：千分尺，武汉东方仪表厂；JN-A型精密扭力天平(称量250mg，分度值0.5mg)，上海第二天平厂。
2方法：
取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，A组：生理盐水对照组(简称：阴性组)；B组：正清风痛宁对照组(简称：阳性组)；C组：本发明组合物大剂量治疗组(简称：大剂量组)；D组：本发明组合物中剂量治疗组(简称：中剂量组)；E组：本发明组合物小剂量治疗组(简称：小剂量组)。B、C、D、E组同试验1的剂量灌胃给药，A组灌胃同体积的生理盐水，连续9天。其中，第4天，小鼠腹腔注射10％SRBC液0.1ml/只，第9天，小鼠右足垫注射20％SRBC液0.05ml/只，24小时后，测定小鼠左、右足垫厚度，以左、右足垫厚度之差作为足垫肿胀度。小鼠称重，再颈脱臼处死小鼠，取胸腺、脾脏称重，按10g体重计算脏器系数。
3结果：对小鼠细胞免疫功能的影响的试验结果见表4。
表4 对小鼠细胞免疫功能的影响
注：与A组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与B组比较，#P＜0.05。
从表4可知，本发明药物组合物各剂量组均能显著抑制小鼠足肿胀，大剂量组能显著降低胸腺系数及脾脏脏器系数，阳性组(正清风痛宁组)也能显著抑制小鼠足肿胀，显著降低胸腺及脾脏脏器系数。其中，足肿胀指标、胸腺系数及脾脏脏器系数指标，小剂量组与阳性组比较，差异显著(p＜0.05)。因此，本发明药物组合物对小鼠细胞免疫功能具有抑制作用。
试验4本发明药物组合物对小鼠非特特异性免疫及体液免疫功能的影响
1材料：
1.1动物：BALB/C种小鼠，体重18～22g，年龄1～2月，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料，武汉生物制品研究所试验动物中心提供。豚鼠，体重300～320g，雌雄各半，同济医科大学试验动物中心提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：溶菌酶，中科院上海生化所东风生化技术公司，批号：0211316；琼酯，青岛四方区化学试剂厂分装；溶壁微球菌，同济医学院免疫教研室提供绵羊红细胞(SRBC)，湖北省医学科学院动物室提供；补体(豚鼠心脏抽血，离心分离血清，将血清加入压积绵羊红细胞中(SRBC)中，按血清：SRBC为1∶0.2(V/V)，于4℃冰箱放置30min，以除去非特异性补体参与的溶血，离心吸取上清液，用生理盐水稀释成1∶1血清制得，备用)；新鲜豚鼠(4只)的混合血清经SRBC(10∶1)于4℃吸收30分钟后置-20℃以下备用，同济医学院免疫教研室提供；都氏试剂(NaHCO31.0g、氰化钾0.5g、高铁氰化钾0.2g，Aq溶解并加至1000mL，混匀)，同济医学院免疫教研室提供。
1.4仪器：751-分光光度计，上海医用仪器厂；千分尺，武汉东方仪表厂。
2方法：
取小鼠50只，雌雄各半，同试验3随机分为5组，分别灌胃给药。连续7天，第5天，腹腔注射补体0.1ml/只，第7天，断头处死小鼠，取血，分离血清，测定血清溶菌酶含量，用分光光度计(波长540)测定吸收度(OD)值，计算半数溶血值(HC50)。
HC50＝样品的吸收度(OD)值×稀释倍数/绵羊红细胞半数溶血时的吸收度值
3结果：
对小鼠非特异性免疫及体液免疫功能的试验影响结果见表5。
表5 对小鼠非特异性免疫及体液免疫功能的影响
注：与A组比较，*p＜0.05，**P＜0.01，与B组比较，##P＜0.01
从表5可知，本发明药物组合物中、小剂量组均能显著提高正常小鼠血清溶菌酶含量、溶血素HC50值，但小剂量作用大于中剂量，大剂量的作用不明显，而正清风痛宁则显著降低小鼠血清溶菌酶含量、溶血素HC50值，表现为免役抑制作用，与本发明组合物各组比较，差异显著。提示，本发明组合物随着药物剂量的不同，对正常小鼠非特异性免疫及体液免疫功能具有不同的影响，其中，中、小剂量对正常小鼠非特异性免疫及体液免疫功能具有促进作用，大剂量对正常小鼠非特异性免疫及体液免疫功能影响不明显，正清风痛宁对正常小鼠非特异性免疫及体液免疫功能表现为抑制作用。
试验5本发明药物组合物对对小鼠耳肿胀的影响
1材料
1.1动物：昆明种小鼠，体重25-30g，雄性；饲料：固体颗粒 鼠饲料由同济医学院试验动物学部提供
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：二甲苯(分析醇)，武汉有机合成厂生产，批号：040702。
1.4仪器：JN-A型精密扭力天平(称量250mg，分度值0.5mg)，上海第二天平厂。
2方法：
取体重25～30g小鼠50只，雄性，同试验3随机分为5组，用二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，每鼠约0.05ml。半小时后，按表6的药物浓度分别在两耳均匀涂受试药物，隔4小时将小鼠颈椎脱臼处死，每只鼠剪去左右两耳，用9mm直径打孔器，分别在相同部位打下圆耳片，用扭力天平称重。每鼠的右耳片重量减去左耳片重量，即为肿胀程度。
3结果：结果见表6。
表6 对小鼠耳肿胀的影响
| 组别 | 例数 | 浓度(g/ml) | 肿胀程度(mg) | 抑制率(％) |
| A | 10 | - | 16.1±3.18 | - |
| B | 10 | 0.06 | 11.2±3.45** | 30.43 |
| C | 10 | 2.20 | 7.6±3.18**# | 52.80 |
| D | 10 | 1.10 | 8.3±3.26**# | 48.45 |
| E | 10 | 0.55 | 10.3±4.64** | 36.02 |
注：与A组相比**P＜0.01；与B组比较#P＜0.005。
由表6得知，二甲苯致炎后，小鼠出现明显的耳肿胀炎性反应，本发明药物组合物各剂量组均能明显减轻二甲苯致的小鼠耳肿胀炎性反应。阳性组(正清风痛宁组)也能明显减轻二甲苯致的小鼠耳肿胀炎性反应。其中，中剂量组、大剂量组与阳性组比较，组间差异显著(P＜0.05)。提示：本发明药物组合物具有抗急性炎症作用，此作用较正清风痛宁强。
试验6本发明药物组合物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
1材料
1.1动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医科大学动物中心提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：36％乙酸(分析醇)，上海畲山化工厂生产，批号：040913；伊文氏蓝(进口分装)上海化学试剂采购供应站提供，批号：040301。
1.4仪器：751-G分光光度计，上海分析仪器厂。
2方法：
取体重18～22g小鼠50只，雌雄各半，同试验3随机分为5组，禁食24小时，按表7的剂量分别给药，30分钟后，尾静脉注射0.5％伊文氏蓝生理盐水液0.2ml/20g，立即以0.6％醋酸溶液(0.2ml/20g)腹腔注射，20分钟后，断头处死小鼠，剪开腹腔，用6ml生理盐水分两次冲洗腹腔，收集冲洗液，加生理盐水至10ml，1000rpm离心5分钟，取上清液，在751-G分光光计590nm波长处测定光密度(OD)值。
2.4结果：结果见表7。
表7 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
| 组别 | 例数 | 浓度(g/kg) | 腹腔洗出液OD值 | 抑制率(％) |
| 阴性组(A) | 10 | - | 0.456±0.048 | - |
| 阳性组(B) | 10 | 0.06 | 0.318±0.044** | 30.26 |
| 大剂量(C) | 10 | 22.0 | 0.26±0.047**# | 41.23 |
| 中剂量(D) | 10 | 11.0 | 0.287±0.053** | 37.06 |
| 小剂量(E) | 10 | 5.5 | 0.299±0.059** | 34.43 |
注：与A组相比**P＜0.01；与B组相比#P＜0.05。
由表7可知，醋酸致炎后，小鼠出现腹腔炎性渗出的明显急性炎性反应，本发明药物组合物各剂量组均能明显减少醋酸所致的小鼠腹腔炎性渗出，阳性组(正清风痛宁组)也能明显减少醋酸所致的小鼠腹腔炎性渗出。其中，中剂量组、大剂量组与阳性组比较，组间差异显著(P＜0.05)。因此，本发明组合物具有抗急性炎症作用，此作用较正清风痛宁强。
试验7本发明药物组合物对大鼠蛋清性关节炎的影响
1材料
1.1动物：WISTAR大鼠50只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：新鲜鸡蛋(市售)，取蛋清新鲜配成10％生理盐水胶体液。
1.4仪器：2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置。
2方法：
取WISTAR大鼠50只，体重140±20g，雌雄各半，同试验3随机分为5组。在右后肢足跖部正面上端用记号笔作一清晰标示线，排水法测定足跖体积，再按组分别给药。0.5h后，以10％蛋清生理盐水胶体液0.05ml，注入每鼠右后肢足跖部，于注射后0.5h、1h、2h、4h、6h各测定致炎后其足跖体积，计算肿胀百分率。
肿胀百分率＝(致炎后体积-致炎前体积)/致炎前体积×100％
3.4结果：结果见表8。
表8 对大鼠蛋清性足跖肿胀的影响
注：与A组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与B组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
由表8得知，蛋清致炎后大鼠出现足跖明显肿胀的急性炎性反应，本发明药物组合物各剂量组均能显著抑制大鼠足跖肿胀。致炎后0.5h即起效，1h最强，2h后逐渐降低，持续6小时，阳性组(正清风痛宁组)也能明显抑制大鼠足跖肿胀。其中，0.5h、1h、2h，大剂量组、中剂量组与阳性组比较，组间差异显著(p＜0.05，p＜0.01)。因此，本发明药物组合物具有抗急性炎症作用，此作用较正清风痛宁强。
试验8本发明药物组合物对大鼠甲醛性关节炎的影响
1材料
1.1动物：WISTAR大鼠50只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：甲醛，湖北大学化工厂，批号：040210。
1.4仪器：2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置。
2方法：取体重200±20g的WISTAR大鼠50只，雌雄各半，分组及给药剂量、方式同试验7，每日灌胃给药1次，共7天。于末次给药前采用容积法测量大鼠右后足跖体积，末次给药后1h，每鼠右后足跖部皮下注入2.5％甲醛溶液0.05ml，致炎后2h至7d，测定右后肢足跖体积，计算肿胀度。
3结果：结果见表9。
表9 对大鼠甲醛性足跖肿胀的影响
注：与A组比较，**P＜0.01；与B组比较，#P＜0.05。
从表9结果看出，甲醛致炎后2h至7d出现足趾明显肿胀的亚急性炎性反应。本发明药物组合物各剂量组均能显著抑制大鼠足跖肿胀，阳性组(正清风痛宁组)也能明显抑制大鼠足跖肿胀。大剂量组与阳性组比较，组间差异显著(P＜0.05)。因此，本发明组合物具有预防亚急性炎症作用，此作用较正清风痛宁强。
试验9本发明药物组合物对大鼠棉球肉芽肿的影响
1材料
1.1动物：WISTAR大鼠50只，体重200±20g，雌雄各半；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3仪器：JN-A型精密扭力天平，上海第二天平厂。
2方法：取WISTAR大鼠50只，体重200±20g，雌雄各半，同试验3随机分为5组。以戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，剪去鼠两侧腹股沟部体毛，碘酒消毒，75％酒精脱碘，切开1.0cm切口，将50±1mg棉球(经高压灭菌并加入氨苄青霉素1mg/0.1ml/个，60℃烤箱烘干)分别置于皮下，缝合皮肤，碘酒消毒。手术当日始，按表10的剂量，分别灌胃给药7d，每日1次，末次给药后24h，颈脱臼处死动物，打开切口，取出棉球及附着的结缔组织，剔除脂肪组织，置于60℃烘箱内烘干12小时，天平称重，将称得重量减去棉球重量(20mg)，即肉芽肿净重，计算100g体重肉芽肿净重(mg)。
3结果：结果见表10。
表10 对大鼠棉球肉芽肿的影响
| 组别 | 例数 | 剂量(g/kg) | 肉芽肿指数(mg/100g) | 抑制率(％) |
| 阴性组(A) | 10 | - | 84.5±8.17 | - |
| 阳性组(B) | 10 | 0.06 | 58.5±10.99* | 30.77 |
| 大剂量(C) | 10 | 22.0 | 45.4±8.04** | 46.27 |
| 中剂量(D) | 10 | 11.0 | 51.9±8.58* | 38.58 |
| 小剂量(E) | 10 | 5.5 | 56.2±8.87* | 33.49 |
注：与A组比较，*P＜0.01；与B组比较，#P＜0.05。
从表10结果看出，棉球致炎后，大鼠出现肉芽肿反应的慢性炎性反应。本发明药物组合物各剂量组均能显著抑制大鼠肉芽肿生成，阳性组(正清风痛宁组)也能明显抑制大鼠肉芽肿生成。大剂量组与阳性组比较，组间差异显著(P＜0.05)。因此，本发明组合物具有抗慢性炎症作用，此作用较正清风痛宁强。
试验10本发明药物组合物对小鼠热板法痛觉的影响
1材料
1.1动物：昆明种小鼠50只，雌性，体重20±2g；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3仪器：GJ-8402型热板测痛仪，宁海白石电子医药仪器厂；电子秒表，上海手表厂。
2方法：取体重18～22g雌性小鼠，置于55±0.5℃热板上，以舔后足掌动作出现时间为痛反应指针，测定痛阈值。选用10-30s痛阈值的合格小鼠50只，同试验3随机分为5组，按表11的剂量分别灌胃给药，灌胃容积0.2ml/10g。给药30、60、90、120分钟后，分别测定痛阈值，若60秒内不出现疼痛反应，按60秒计算，不再继续观察，以免烫伤小鼠足掌，影响下次测定。
3结果：结果见表11。
表11 对小鼠痛觉的影响(热板法)不同时间痛阈值(s)
注：与A组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与B组比较#p＜0.05，##p＜0.01。
从表11可以看出，①给药30分钟后，各组与A组比较，差异非常显著(P＜0.01)；B组与C组、D组比较，差异显著(P＜0.05，P＜0.01)。②给药60分钟后，各组与A组比较，差异非常显著(P＜0.01)；B组与C组比较，差异非常显著(P＜0.01)。③给药90分钟后，各组与A组比较，差异非常显著(P＜0.01)。④给药120分钟后，各组与A组比较，差异显著(P＜0.05，P＜0.01)。因此，本发明药物组合物具有镇痛作用，此作用较正清风痛宁强。
试验12本发明药物组合物对小鼠扭体法痛觉的影响
1材料
1.1动物：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重20±2g；饲料：固体颗粒鼠饲料。由同济医学院试验动物学部提供。
1.2药物：同试验1。
1.3试剂：36％乙酸(分析醇)，上海畲山化工厂生产，批号：040913。
1.4仪器：电子秒表，上海手表厂生产。
2方法：取体重18～22g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，分别灌胃给药，灌胃容积0.2ml/10g。给药30分钟后，每鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液(0.1ml/10g)，观察15分钟内，小鼠出现扭体反应的次数，计算镇痛百分率。
镇痛率＝(1-给药组平均扭体次数/阴性组平均扭体次数)×100％
3结果：结果见表12。
表12 对小鼠扭体法痛觉的影响
| 组别 | 例数 | 剂量(g/kg) | 扭体次数(次) | 镇痛率(％) |
| 阴性组(A) | 10 | - | 39.8±5.67 | - |
| 阳性组(B) | 10 | 0.06 | 25.4±8.27** | 36.18 |
| 大剂量(C) | 10 | 22.0 | 17.±6.97*** | 55.03 |
| 中剂量(D) | 10 | 11.0 | 21.9±8.16** | 44.97 |
| 小剂量(E) | 10 | 5.5 | 25.5±7.40** | 35.93 |
注：与A组比较**p＜0.01；与B组比较#p＜0.05。
由表12可知，小鼠腹腔注射醋酸后，出现扭体疼痛反应，本发明药物组合物各剂量组均能显著减少小鼠扭体次数，阳性组(正清风痛宁组)也能显著减少小鼠扭体次数。其中，大剂量组与阳性组比较，差异显著(P＜0.05)。因此，本发明组合物具有止痛作用，此作用较正清风痛宁强。
急性毒性试验
1小鼠口服最大耐受量测定
1.1目的：观察动物一次服用受试药物，经消化道对小白鼠可能产生的急性毒性反应及恢复程度，评价其临床用药的安全性。
1.2材料：
1.2.1动物：昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半；饲料：颗粒状，同济医学院试验动物学部提供。饲养：分笼封闭饲养，自由饮水，自由摄食。
1.2.2药物：本发明实施例1所制得的中药组合物，用蒸溜水配成0.24g/ml的混悬液。
1.3方法及结果：取健康小鼠20只，雌雄各半，禁食24h后，于次日上午9时灌胃给予本发明药物组合物的混悬液0.4ml/10g(本发明实施例1所制得的中药组合物9.6g/kg)，观察小鼠活动、饮食、呼吸等情况，然后连续观察15天，纪录7天内的动物死亡数及毒性反应。
结果：灌胃后，小鼠活动减少，约1小时左右逐渐缓解，7天内20只小鼠无一只死亡及明显中毒反应。
1.4讨论：按最高浓度(按生药计1.28g/ml)及小鼠最大灌胃容量(0.4ml/10g)计算剂量为51.2g/kg，按公斤体重计算，相当于成人每日常用量(2.7g/60kg，相当生药量0.24g/kg)的213倍，20只小鼠7天内无一只死亡及明显中毒反应，根据统计学Wright化法则，已有99.99％以上的把握证明，小鼠口服给药的LD50必大于51.2g/kg，证明本发明组合物以常用剂量口服，符合药品急性毒性要求。本药是口服制剂，不作注射给药，故未作其它途径给药的LD50测定。至于本发明组合物的口服蓄积毒性及长期毒性，在近10年临床应用未发现患者出现明显肝肾功能损害及其他毒副反应，表明该药口服给药临床常用量使用安全。
1.5结论：小鼠一次口服本发明组合物的最大耐受量为51.2g/kg，此为成人每日临床常用量的213倍，结果表明该药口服给药临床常用量使用安全。
临床试验
临床试验1本发明组合物治疗类风湿关节炎的临床有效性和安全性
试验对象共203例。治疗组102例，其中，男21例，女81例；年龄21～65岁，平均43±19岁；病程3～19年，平均(5.1±4.3)；病情：关节功能分级I级31例，II级51例，III级20例。对照组101例，其中，男22例，女79例；年龄19～61岁，平均40±17岁；病程3～17年，平均(4.6±3.7)；病情：关节功能分级I级30例，II级53例，III级18例。
1.症状及判断标准
1.1临床诊断标准：
(1)西医诊断标准：采用1987年美国风湿病学会类风湿性关节炎诊断标准。
(2)中医证候诊断标准：参照国家药品监督管理局(《中药新药临床研究指导原则(试行)》中药新药治疗类风湿性关节炎的临床研究指导原则)制定的湿热痹阻型。
1.2关节功能分级标准：I级：日常活动不受限。II级：有中等强度的关节活动受限，但能满足日常活动需要。III级：关节有明显的活动受限，患者不能从事大多数职业或不能很好地照料自己。IV级：丧失活动能力或卧床或只能坐在轮椅上。
1.3X线分期标准：I期：正常或关节端骨质疏松。II期：关节端骨质疏松，偶有关节软骨下囊样破坏或骨侵蚀改变。III期：明显的关节软骨下囊性破坏，关节间隙狭窄，关节半脱位畸形。IV期：除II、III期改变外，并有纤维性或骨性强直。
1.4症状分级量化标准：参照卫生部《中药新药临床研究指导原则(试行)》。关节疼痛、关节肿胀、关节压痛、功能障碍指数计算方法为：无计0分，轻度计1分，中度计2分，重度计3分。其指数为所有关节计分之和。凡15m步行时间超过120s者，则按120s计算。
1.5排除病例标准：①晚期患者，关节严重畸形，关节功能IV级者；②重叠其他风湿病如系统性红斑狼疮、干燥综合征、严重的膝关节炎等者；③合并有心、脑、肝、肾及造血系统等严重疾病者；④妊娠、哺乳期妇女，精神病患者；⑤长期服用西药(2线)难以停用者；2月内曾服用激素者；⑥未按规定服药，无法判定疗效者。
1.6疗效判定标准
1.6.1疾病疗效判断标准：显效：主要症状、体征整体改善率≥75％，ESR及CRP正常或明显改善或接近正常。进步：主要症状、体征整体改善率≥50％，ESR及CRP有改善。有效：主要症状、体征整体改善率≥30％，ESR及CRP有改善或无改善。无效：主要症状、体征整体改善率＜30％，ESR及CRP有改善或无改善。
附：主要症状、体征是指关节压痛数、关节肿胀数、晨僵时间、双手平均握力(kg或mmHg)、疼痛水平视力对照表值等5项。整体改善率是指以上5项指标的改善百分率。
1.6.2证候疗效判断标准：临床治愈：中医症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95％。显效：中医症状、体征明显改善，证候积分减少≥70％。有效：中医症状、体征均有好转，证候积分减少≥30％。无效：中医症状、体征无明显改善，甚或加重，证候积分减少＜30％。
注：尼莫地平法指数＝(1-治疗后积分/治疗前积分)×100％
2治疗及方法
2.1治疗方法
治疗组：本发明实施例1所制得的中药组合物，口服，每次3粒，每日3次。对照组：正清风痛宁片(湖南正清药业有限公司生产，批准文号：国药准字Z20010174，批号：0501104)，口服，每次2片，每日2次。疗程：3个月1疗程，观察1个疗程。
2.2观察方法
治疗前后及每周对观察病例进行全面体格检查1次，进行关节功能和晨僵时间、握力的测定以及进行中医辩证舌脉等的观察和记录。试验室检查包括血、尿常规，血沉(ESR)，类风湿因子(RF)，C-反应蛋白(CRP)，免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、C3，肝肾功能等，治疗前后各检查1次，均于观察结束后进行疗效评定。
3结果：
3.1总体疗效比较：
治疗后，患者临床症状及体征明显减轻，试验室指标明显改善；其中，治疗组与对照组比较，总有效率显著高于对照组(P＜0.05)详见表13。
表13 两组患者临床疗效比较
| 组别 | 例数 | 显效 | 进步 | 有效 | 无效 | 总有效率 |
| 治疗组 | 102 | 15(14.71) | 37(38.24) | 39(36.27) | 11(10.78) | 89.22* |
| 对照组 | 101 | 9(8.91) | 25(24.75) | 45(44.55) | 22(21.79) | 78.21 |
X2检验：与对照组比较，*P＜0.05。
3.2主要症状、体征比较
治疗后，两组临床症状及体征均有明显改善，疼痛指数、关节肿胀指数、关节障碍指数明显减轻，晨僵时间明显缩短，双手平均握力明显增加，15m步行时间明显缩短；其中，关节疼痛指数、晨僵时间、双手平均握力、15m步行时间等部分指标，治疗组较对照组改善程度更明显，详见表14。
表14 主要症状、体征比较
t检验：与治疗前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
3.3主要试验室指标比较
治疗后，两组异常试验室指标得到改善，ESR、CRP、RF、IgG、补体C3指标明显降低；其中，ESR、补体C3指标，治疗组较对照组改善程度更为明显，详见表15、表16。
表15 试验室指标比较
t检验：与治疗前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
表16 试验室免疫指标比较
t检验：与治疗前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
4安全性观测
4.1不良反应临床表现(症状及体征)
治疗组5例患者服药3周后出现纳差、3例患者服药6周后出现腹胀，未作特殊处理，停药后症状消失；对照组7例患者服药2周后，出现皮肤瘙痒，2例出现皮疹，未作特殊处理，停药后症状消失。两组出现不良反应病例，不纳入观察病例。
4.2血、尿、粪常规检查
治疗组治疗前后血、尿、粪常规检查未出现异常；对照组3例患者服药8周后出现白细胞减少，1例患者服药2周后出现红细胞减少，1例患者服药2周后出现血红蛋白减少，均未作特殊处理，停药后症状消失。
以上结果表明，血常规中HB、RBC、WBC治疗前后组内比较均无显著性差异(P＞0.05)，治疗前两组组间比较均无显著性差异(P＞0.05)，治疗后组间比较也无显著性差异(P＞0.05)。
4.3肝、肾功能检查。
治疗组和对照组均未发现明显肝肾功能损害。
上述安全性检测项目中治疗组均未见与用药相关的治疗前正常而治疗后异常，或治疗前异常而治疗后异常加重者。
4.4脱落病例及随访情况
观察过程中，治疗组有3例患者未能坚持，2例患者未复诊；对照组有1例患者自行停药，1例患者联系中断。随访半年，随访率80％，随访患者中未出现明显毒副反应。
临床试验1的结果显示：本发明药物组合物治疗类风湿关节炎的疗效显著，总有效率达89％，服用安全，长期服用未出现明显毒副反应。
临床试验2本发明组合物治疗类风湿关节炎(RA)的免疫调节作用及机理试验对象：
RA组共36例，诊断符合美国风湿病协会1987年修订标准。其中女性30例，男性6例，年龄18-65岁，平均44.5岁。健康对照组共24名，来自武汉市中医院健康体检者，其中女性18例，男性6例，年龄18-65岁，平均43.4岁。
1试剂IFN-γ、IL-4ELISA试剂盒(美国进口分装96T)(深圳晶美生物工程有限公司)。
2治疗方法
治疗组：本发明实施例1所制得的中药组合物，口服，每次3颗，每日3次。3个月1个疗程，观察1个疗程。
血标本的采集治疗前后各检查RA患者血清IFN-γ和IL-41次，健康对照者检测血清IFN-γ和IL-41次。
3统计方法：采用t检验。
4结果：
4.1血清IFN-γ和IL-4水平检测
RA患者血清IFN-γ水平、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值显著高于健康对照组，提示RA患者体内Th1/Th2水平失衡。详见表17。
表17 血清IFN-γ和IL-4水平
| 组别 | 例数 | IFN-γ(pg/ml) | I L-4(pg/ml) | IFN-γ/IL-4 |
| RA 组 | 36 | 15.86±12.88** | 6.77±3.17** | 2.94±3.40** |
| 健康对照组 | 24 | 6.53±1.48 | 3.58±0.73 | 1.87±0.57 |
t检验：与对照组比较，**P＜0.01。
4.2RA病程中不同时期的IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值的变化
RA病程中不同时期的IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值的变化情况如表18所示。
表18 RA不同时期IFN-γ和IL-4水平的变化
| 病程 | 例数 | IFN-γ(pg/ml) | IL-4(pg/ml) | IFN-γ/IL-4 |
| 早期 | 12 | 25.45±8.01** | 6.72±3.43 | 4.84±3.48** |
| 中期 | 12 | 16.45±9.13** | 6.69±3，51 | 3.40±1.23* |
| 晚期 | 12 | 3.39±3.77 | 6.80±3.10 | 0.47±0.32 |
注：与晚期比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
在RA早期，Th1细胞因子IFN-γ、Th2细胞因子IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值均显著升高，且Th1水平比Th2水平增高更显著，Th1占优势；在RA中晚期，IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值均显著下降，而IL-4水平未发现有显著变化，表现为Th2水平显著优于Th1水平，提示在RA中晚期，以Th2占优势。以上结果提示，RA患者体内Th1/Th2的水平与病程有关。
4.3本发明药物组合物对RA患者血清IFN-γ和IL-4水平的影响
本发明药物组合物治疗前后血清IFN-γ和IL-4水平变化比较结果如表19所示。
表19 治疗前后血清IFN-γ和IL-4水平变化比较
| 时间 | 例数 | IFN-γ(pg/ml) | IL-4(pg/ml) | IFN-γ/IL-4 |
| 治疗前 | 36 | 15.86±12.88 | 6.77±3.17 | 2.94±3.40 |
| 治疗后 | 36 | 10.41±4.01** | 4.83±1.21** | 2.26±0.99* |
t检验：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
经本发明组合物治疗治疗后，RA患者IFN-γ和IL-4水平显著下降。因此，本发明组合物治疗类风湿性关节炎与抑制RA患者血清IFN-γ和IL-4水平及调节Th1/Th2平衡有关。
Claims (3)
1.一种治疗类风湿关节炎的药物，其特征在于它是由下述重量份数的原料药制成的药剂：黄芪10份、青风藤5份、全蝎1份。
2.根据权利要求1所述的治疗类风湿关节炎的药物，其特征在于：它是由所述3味原料药为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂，所述的药剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液或针剂。
3.根据权利要求2所述的治疗类风湿关节炎的药物的方法，其特征在于，所述胶囊剂的制备方法如下：
a. 按照所述重量配比称取原料药备用；
b. 全蝎经干燥后，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，制得药物细粉（I）；
c. 将黄芪和青风藤用水浸0.5~1小时，再用水煎煮两次，每次用8~10倍量的水煎煮1~2小时，合并煎液，静置沉淀12~24小时，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20~1.35的浸膏（II）；
d. 取药物细粉（I）和浸膏（II）与乙醇混匀，制软材，20目筛制粒；
e. 干燥：所制湿粒50℃~70℃烘干，过20目筛整粒，80目筛去细粉；
f. 充填装入胶囊，分装，制得胶囊剂。
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| 张荒生，王进军.痹痛定胶囊治疗类风湿性关节炎临床研究.《中国中医药信息杂志》.2006,第13卷(第8期),第10页、第11页右栏. * |
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