CN102226197B - 基因OsERL在降低植物气孔密度方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了基因OsERL在降低植物气孔密度方面的应用，属于分子生物学技术领域。本发明通过PCR方法，扩增出水稻品种日本晴的OsERL基因的全长编码区，正向连接在植物表达载体pCAMBIA1390-ubi上；再进行遗传转化至烟草中，提高OsERL基因的表达，得到OsERL基因表达增强的转基因烟草植株。本发明通过试验证明：OsERL在转基因烟草中过量表达能够促进表皮细胞的扩大，从而导致气孔密度下降、蒸腾速率和失水速率降低，干旱胁迫耐性增强。

Description

基因OsERL在降低植物气孔密度方面的应用

技术领域

本发明涉及基因OsERL通过降低植物气孔密度，从而导致干旱胁迫耐性增强方面的应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

干旱已是世界性的问题，世界干旱、半干旱地区已占陆地面积的1/3以上，干旱对植物的影响在诸多自然逆境因素中占首位。旱灾造成的粮食损失要占全部自然灾害粮食损失的一半以上。国务院第二次全国农业普查领导小组办公室、国土资源部和国家统计局2008年2月29日发布第二次全国农业普查主要数据公报(第六号)显示，截至2006年10月31日，全国耕地面积一半以上是旱地。在自然条件下，干旱胁迫不仅严重影响了作物生长发育和产量，而且限制了植物的分布。我国大部分地区耕地是干旱和半干旱地区，因此水资源的缺乏和水稻需水量大的矛盾严重影响水稻种植面积的推广。因此培育高抗农作物新品种成了一个高度紧迫的重大问题。随着分子生物学技术的发展，基因工程已成为当今种质资源创新和改良的强有力的武器。

目前用于抗旱基因工程的基因主要包括以下几类。第一，参与渗透保护物质(如脯氨酸、甘露醇、甜菜碱、海藻糖等)合成的基因。这样能够使植物在水分胁迫下能合成更多的渗透调节物质如，以提高植物的渗透调节能力，从而增强植物的抗旱性。如在水稻中过量表达脯氨酸生物合成途径上的关键酶基因(P5CS，delta1-pyrroline-5-carboxylate synthase)提高了转基因植株的抗旱性(Zhu等，1998，Plant Sci，199：41-48)；第二，编码晚期胚胎富含蛋白(LEA)的基因。如在水稻中组成型地过量表达大麦的HVA1基因，导致转基因植株耐旱性增强(Xu等，1996，Plant Physiol，110：249-257)；第三，调控基因。这类基因包括与ABA生物代谢相关的基因(如NCED和ABAOX)及ABA信号传导途径相关的基因(如编码bZIP类、Myb类、zinc-finger类转录因子的基因)。最近多个bZIP类转录因子被证明影响干旱胁迫耐性，如OsbZIP23，OsbZIP72和TRAB1等(Xiang等，2008，Plant Physiol，148：1938-1952；Lu等，Planta，2009，229：605-615；Hobo等，1999，Proc Natl Acad Sci USA，96：15348-15353)。第四，调控气孔密度(单位叶面积上气孔数目)的基因。目前这类基因在抗旱基因工程中的应用还没有报道。

高等开花植物叶片的表皮上有大量的气孔，它们由两个保卫细胞围成一孔形成。气孔作为植物与外界环境进行气体交换(主要是二氧化碳和水蒸汽)的重要通道，在调节植物光合作用、蒸腾作用以及水分利用中扮演着至关重要的角色(Chaerle et al.，Trend in Biotechnology2005，23：308-315)。我们知道植物通过蒸腾散失的水分中90％以上是通过气孔散失的。而气孔密度是影响植物蒸腾量大小的重要因素之一。因此通过植物基因工程合理降低气孔密度、从而减少单位叶面积水分蒸腾量，是提高植物水分利用率和耐旱性的重要手段。气孔密度的大小由两个因素决定：一是在气孔发育过程中分化为气孔的表皮细胞数目；二是由于表皮细胞体积的变化而导致单位叶面积上气孔数目(气孔密度)的变化。控制气孔发育相关基因的缺失不仅影响气孔密度，而且往往导致气孔的畸形分布，这样的植株往往不健壮的(相关研究参考最新综述，Peterson et al.，Plant Cell，2010，22：296-306)。拟南芥中有一类富含亮氨酸的受体激酶ERECTA家族(在拟南芥中包括ER，ERL1，ERL2三个基因)，其中ER基因能够影响表皮细胞增大从而调控气孔密度(Masle et al.，Nature 2005，436：866-870)。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，从水稻日本晴中分离克隆到一个编码类受体蛋白激酶的OsERL基因(该基因编码的氨基酸序列与拟南芥的ERECTA蛋白质同源性为71％，故命名为ERECTA-like，简称为OsERL)，该基因在烟草过量表达后，发现转基因阳性植株单位面积上的气孔数目明显低于非转基因植株，叶片失水速率和蒸腾速率降低、水分利用率提高，干旱胁迫耐性提高。因此，在植物中过量表达OsERL基因对于提高作物干旱胁迫耐性具有重要意义，这为作物高抗旱性育种提供新的思路。

本发明申请人在一个气孔密度降低的水稻突变体中，利用基因表达图谱鉴定到一个序列号为AK060260的、编码类受体蛋白激酶的OsERL基因的信使RNA序列。水稻OsERL基因信使RNA序列为1688个碱基，编码392个氨基酸。本发明是通过PCR方法，扩增出水稻品种日本晴的OsERL基因的全长编码区，包含1179个碱基，正向连接在植物表达载体pCAMBIA1390-ubi上；再进行遗传转化至烟草中，提高OsERL基因的表达，得到OsERL基因表达增强的转基因烟草植株。在转基因的T3代植株中发现，阳性烟草植株的干旱胁迫耐性明显高于非转基因植株。

本发明用于构建过量表达OsERL基因的植物表达载体、增强OsERL基因表达的DNA序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明利用水稻品种日本晴的OsERL基因的cDNA片段作为应用基因，将该基因正向转入烟草中，提高OsERL基因的表达水平，转基因烟草植株表现出表皮细胞扩大、气孔密度降低、水分利用率提高和较强的干旱胁迫耐性。

本发明的优点在于：

(1)本发明提供了一种通过降低气孔密度而提高水分利用率和干旱胁迫耐性的水稻基因OsERL的应用。申请人在烟草中过量表达OsERL基因表达后，发现转基因阳性植株的气孔密度降低、水分利用率和干旱胁迫耐性明显提高。

(2)本发明首次分离克隆了水稻OsERL基因，并首次在烟草中过量表达了OsERL基因。为培育高抗旱烟草品种提供了新的思路，也为其它作物利用异源基因技术提高抗旱性提供了理论支持。

(3)本发明中应用的基因可以为水稻等禾谷类作物以及其它作物抗旱性研究提供支持。

附图说明

图1为本发明的OsERL基因表达载体的构建示意图。将克隆在pMD18-T载体上的OsERL基因利用BamHI和SpeI酶切，替换pCAMBIA1390-ubi植物表达载体上BamHI和SpeI之间的DNA片段，这样OsERL基因正向插入玉米泛素基因启动子(Pubi)后，即pCAMBIA1390-ubi-ERL植物表达载体。

图2为检测T3代转基因烟草阳性植株中OsERL基因转录本水平结果图。其中OsERL-OE表示转OsERL基因的植株，15#、16#、23#、24#和25#代表不同阳性转基因株系；ACTIN是烟草的一个肌动蛋白基因，作为烟草的内参基因；SR代表野生型烟草植株。

图3为转OsERL基因烟草植株和野生植株的干旱胁迫耐性比较图。其中15#和16#是2个不同的转OsERL基因的阳性株系；SR代表野生型烟草植株。

图4为转OsERL基因烟草植株和野生型植株的离体叶片失水速率比较图。其中15#、16#和24#是3个不同的转OsERL基因的阳性株系；SR代表野生型烟草植株。

图5为转OsERL基因烟草植株和野生型植株的光合速率、蒸腾速率和水分利用率比较图。A图表示光合速率，B图表示蒸腾速率，C图表示水分利用率。其中15#、16#和24#是3个不同的转OsERL基因的阳性株系；SR代表野生型烟草植株。*表示转基因植株与野生型相比t-test差异显著(P＜0.05)。

图6为转OsERL基因烟草植株和野生型植株的下表皮细胞和气孔密度比较图。A图微分干涉显微镜观察烟草植株第六叶的气孔和表皮细胞形态，拍摄于400倍。B图表示气孔密度。分别选取野生型和各个转基因植株各5棵，每棵植株观察10个视野，图中数据为平均值±标准误差，**表示转基因植株与野生型相比t-test差异极显著(P＜0.01)。其中15#、16#和24#是3个不同的转OsERL基因的阳性株系；SR代表野生型烟草植株。

具体实施方式

以下实施例定义了本发明，并描述了本发明在分离克隆用于构建OsERL基因植物表达载体的DNA片段，以及验证功能的方法。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其使用不同的用途和条件。

实施例1：分离克隆用于构建OsERL基因植物表达载体的DNA片段

采用TRIZOL试剂(Invitrogen)从水稻品种日本晴(公开报道的一个品种)的叶片中提取总RNA。具体步骤如下：将20毫克叶片放至液氮预冷的研钵中，加入液氮快速磨成粉末，将粉末装入1.5ml离心管中，迅速加入1ml Trizol(Invitrogen)颠倒混匀，室温静置5分钟。在4℃，12000rpm离心10分钟，取上清液移至新的1.5ml离心管中。加入200μl氯仿，用手剧烈摇动15秒钟，室温静置2-3分钟。4℃，12000rpm离心15分钟。取无色水相至一新的1.5ml离心管中，加入250μl异丙醇，250μl高盐溶液，颠倒混匀，室温静置10分钟。4℃，12000rpm离心10分钟，吸除上清液。加入1ml冰冷的75％乙醇，上下倒置几次，然后4℃，7500rpm离心5分钟，弃上清，在室温干燥至沉淀变透明。加入适量的DEPC水(一般为60μl)溶解沉淀，利用紫外分光光度计测定RNA的浓度。

利用反转录酶SuperScript II(Invitrogen)将其反转录成cDNA，具体步骤如下：依次加入1μl 500μg/ml oligo(dT)12-18、2μg总RNA、1μl 10mM dNTP混合物和DEPC水至12μl，在65℃水浴中5分钟，迅速冰浴5分钟，稍微离心收集样品于管底。然后依次加入4μl 5×第一链缓冲液、2μl 0.1M DTT和1μl RNaseOUT(40U/μl)，42℃，2分钟。然后加入1μlSuperScript II，轻微混合均匀，42℃反应50分钟，然后70℃水浴15分钟使酶失活，这样就合成了第一链cDNA，以第一链cDNA为模板扩增目的基因。用带有酶切位点的上游引物OsERLF(5’-CGG GAT CCA TGA TCC TAG CTG CTG CTT G-3’，SEQ ID NO：3)，序列特异引物外加BamHI位点和两个保护碱基)和下游引物OsERLR(5’-AAC TAGTCTACT CTGTGT TCT GTG ATA TCA C-3’，SEQ ID NO：4)，序列特异引物外加SpeI位点和一个保护碱基)。利用PrimerSTARHS DNA polymerasewith GC buffer(TaKaRa)进行扩增目的片段，PCR反应条件是94℃预变性1分钟；98℃10秒，68℃4分钟，30个循环。利用TArget CloneTM-Plus试剂盒(TOYOBO)在PCR产物末端加A。然后连接到pMD 18-T载体(TaKaRa)。筛选阳性克隆并测序，获得所需DNA片段(序列如SEQ ID NO：1所示)，将该克隆命名为pMD18-OsERL cDNA。

实施例2：OsERL基因植物表达载体的构建和遗传转化

为了能更好地分析OsERL的功能，申请人通过过量表达技术使OsERL基因在烟草中表达水平提高。根据转基因植株的表型和生理特征研究该基因的功能。

OsERL基因植物表达载体的构建方法如下：首先将实施例1中得到的阳性克隆pMD18-OsERL cDNA用BamHI和SpeI双酶切，回收插入片段；同样，用同样的方法酶切pCAMBIA1390-ubi的植物表达载体，回收载体片段。用回收的插入片段和载体片段做连接反应，转化大肠杆菌XL1-Blue。通过酶切筛选阳性克隆，获得植物表达载体，命名为pCAMBIA1390-ubi-ERL(见图1)。pCAMBIA1390-ubi是在国际常用的植物遗传转化载体(见图1)。将pCAMBIA1390-ubi转化至EHA105宿主菌。

通过农杆菌介导的烟草叶盘转化体系(参见本发明后面的实施例)将其导入到烟草品种SR中，经过预培养、侵染、共培养、筛选具有潮霉素抗性的愈伤、分化、生根、移苗得到转基因植株。转化共获得30株独立的转基因烟草植株。

具体步骤：

(1)烟草叶盘预培养：用剪刀将无菌SR品种烟草叶片剪成1.0×1.0cm的叶盘，放在T1培养基(成分见后)上28℃光照预培养1d。

(2)农杆菌培养：挑取农杆菌(含有植物表达载体pCAMBIA1390-ubi-ERL)单克隆菌落，在含有Km的LB液体培养基(成分见后)中于28℃培养30h。之后，将菌液按1％的接种量接种至50ml LB液体培养基中(含Km)，培养6-8h至对数生长中期；取25ml菌液(根据菌液浓度选择所取体积)4000rpm，4℃，离心10min，再将菌体用30ml 1/2MS液体培养基(成分见后)悬浮。

(3)农杆菌侵染：将步骤(1)经过预培养的烟草叶盘浸泡在步骤(2)中的农杆菌菌悬液中5min，之后转至无菌滤纸上吸干菌液。

(4)共培养：在T1培养基上加滤纸一张，将浸泡过农杆菌的叶盘转至滤纸上，28℃黑暗共培养2d。

(5)选择培养：把经过共培养的叶盘转至T2培养基(成分见后)上，28℃光照培养24h。

(6)分化培养：将叶盘转至T3培养基(成分见后)上，28℃光照培养15-20d后，在叶缘处可见愈伤组织和芽分化。叶盘继续在T3中培养，每隔20d在继代T3培养基(成分见后)继代一次。1.5-2.0个月后，待小芽长至3-5cm，转入生根培养基T4。

(7)壮苗、移栽在T4培养基(成分见后)中培养0.5-1.0个月开始生根，继续培养40d，可形成发达的根系，移至土壤中栽培。

试剂配方：

(1)试剂和溶液缩写：本发明中作用到的植物激素的缩写表示如下：Cb(Cabenicillin，羧苄青霉素)；NAA(Napthalene acetic acid，萘乙酸)；6-BA(6-Benzylaminopurine，6-苄氨基嘌呤)；Km(Kanamycin，卡那霉素)；DMSO(Dimethyl sulfoxide，二甲基亚砜)。

(2)用于烟草遗传转化的培养基配方：

1)T1培养基：MS大量，MS微量，30g/L蔗糖，1ml/LMS维生素，MS-铁盐，琼脂粉，pH 5.8。

2)T2培养基：MS大量，MS微量，30g/L蔗糖，1ml/L MS维生素，MS-铁盐，2mg/L 6-BA(细胞分裂素)，0.1mg/LNAA(萘乙酸)，500mg/L羧苄青霉素，琼脂粉，pH 5.8。

3)T3培养基：MS大量，MS微量，30g/L蔗糖，1ml/L MS维生素，MS-铁盐，2mg/L 6-BA(细胞分裂素)，0.1mg/LNAA(萘乙酸)，500mg/L羧苄青霉素，30mg/L潮霉素B，琼脂粉，pH 5.8。

4)继代用T3培养基：MS大量，MS微量，30g/L蔗糖，1ml/L MS维生素，MS-铁盐，2mg/L 6-BA(细胞分裂素)，0.1mg/LNAA(萘乙酸)，400mg/L羧苄青霉素，30mg/L潮霉素B，琼脂粉，pH 5.8。

5)T4培养基：MS大量，MS微量，30g/L蔗糖，1ml/L MS维生素，MS-铁盐，2mg/L 6-BA(细胞分裂素)，0.1mg/LNAA(萘乙酸)，200mg/L羧苄青霉素，30mg/L潮霉素B，琼脂粉，pH 5.8。

6)1/2MS液体培养基：1/2MS大量，1/2MS微量，MS维生素，MS-铁盐，30g/L蔗糖.

7)LB液体培养基：胰蛋白胨(Tryptone)10g/L，酵母提取物(Yeast extract)5g/L，氯化5g/L，pH 7.0。

(3)主要溶液配方：

1)MS大量(10×)

2)MS微量(1000×)：

3)MS维生素(1000×)

4)MS-铁盐(200×)

FeSO₄·7H₂O      5.56g

Na₂EDTA·2H₂O    7.46g

5)6-BA储存液(0.2mg/ml)

称取6-BA 10mg，溶于1ml 1N KOH，加蒸馏水定溶至50ml，于4℃保存。在烟草转化过程中所使用的终浓度为2mg/L。

6)NAA储存液(0.2mg/ml)

称取NAA 10mg，溶于0.5ml 1N KOH，加蒸馏水定溶至50ml，于4℃保存。在烟草转化过程中所使用的终浓度为0.1mg/L。

7)Km(100mg/ml)

称取Km 1000mg，加入蒸馏水定溶至10ml，用0.22μm的滤膜过滤，于-20℃保存。

实施例3：检测转基因烟草植株和野生型烟草中OsERL基因的转录本水平

以烟草野生型SR品种和5个独立的T3代转基因烟草植株为材料，提取5叶期烟草叶片的RNA，利用RT-PCR检测烟草叶片中OsERL基因的转录本水平。具体方法如下：采用TRIZOL试剂(Invitrogen)从上述材料收集0.05g烟草叶片提取总RNA，利用反转录酶SuperScript II(Invitrogen)将其反转录成cDNA，具体步骤如实施例1的描述。用OsERL基因的特异性上游引物OsERLRTF(5’-CGC AGA CAA CAC GGT CAT GG-3’，SEQ ID NO：5)，和下游引物OsERLRTR(5’-AAG AGC TCC GCA TCT GAC GC-3’，SEQ ID NO：6)。同时用烟草ACTIN基因的特异上游引物ACTINF(5’-TCC GGC GAC GGT GTC TCACA-3’，SEQID NO：7)和特异下游引物ACTIN R(5’-CGC GGA CAA TTT CCC GTT CAG C-3’，SEQ IDNO：8)进行PCR扩增，作为内参基因。PCR反应条件是94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，62℃退火30分钟，72℃延伸1min，24个循环。然后用1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。结果表明，野生型植株中无OsERL基因转录本，而5个转基因株系15#、16#、23#、24#和25#中OsERL基因的转录本明显被检测到，从而证明OsERL基因已整合到烟草基因组中并且在烟草中大量表达(图2)。

实施例4：转OsERL基因烟草植株具有强的干旱胁迫耐性

本实施例分析了土壤中生长的T3代转OsERL基因烟草株系和野生型SR品种烟草植株的干旱胁迫耐性。具体步骤如下：将转基因植株和野生型植株用70％乙醇表面消毒0.5分钟；5％(活性氯含量)NaClO溶液表面消毒20分钟；无菌水冲洗4-5次；播种于含有1/2MS培养基的玻璃培养瓶。在光照培养箱(28℃14小时光照，23℃10小时黑暗)培养至生成较发达的根系，分别将野生型植株和转基因植株平行移栽至温室土壤中(5个重复)，培养至六叶期时开始干旱处理(即停止浇水)。结果表明，野生型、转基因株系15#和转基因株系16#在干旱处理前生长良好，叶片舒展，呈绿色(图3，干旱处理前)；当停止浇水18天时(图3，干旱处理后)，野生型植株叶片明显出现萎蔫，颜色较黄，而转基因株系15#和16#的叶片仍较舒展，可以维持一定膨压，颜色较绿。同样地，我们观测了其他转基因株系的生长情况，结果发现它们表现与转基因株系15#和16#相似。这个结果表明，转OsERL基因的烟草植株的耐旱性较野生型高。

实施例5：转OsERL基因烟草植株失水速率降低

本实施例测定了8叶期野生型SR品种烟草植株和T3代转OsERL基因烟草植株的离体叶片的失水速率。将转基因植株和野生型植株种子表面消毒；播种于含有1/2MS培养基的玻璃培养瓶。在光照培养箱(28℃14小时光照，23℃10小时黑暗)培养至生成较发达的根系，挑选生长一致的幼苗转移至土中，在温室中培养(自然条件)至8叶期。分别取野生型和3个转基因株系植株(15#、16#和24#)的第3、4片完全展开叶，2个叶片为一组，放置于25℃人工气候箱中(光强4000LUX，相对湿度为60％)，间隔20min用分析天平称取各组叶片的重量，3次重复实验。最后计算失水速率(＝叶片起始鲜重-失水不同时间的叶片重量)/起始叶片鲜重×％)。结果显示，结果表明，野生型的失水速率均显著高于转基因株系(15#、16#和24#)(图4)。说明OsERL基因在烟草中的大量表达降低了叶片的失水速率，

实施例6：转OsERL基因烟草植株具有较低的蒸腾速率和较高的水分利用率

本实施例测定了8叶期野生型SR品种烟草植株和T3代转OsERL基因烟草植株的蒸腾速率和光合速率，并计算了水分利用率。具体步骤如下：转基因植株和野生型植株种子经过表面消毒，播种于含有1/2MS培养基的玻璃培养瓶。在光照培养箱(28℃14小时光照，23℃10小时黑暗)培养至生成较发达的根系。随后转移到温室土壤中生长至8叶期。采用美国便携式光合仪(LI-COR LI-6400)于晴朗无风的天气，上午9:30-11:00在强制光源(1500nmolm-2s-1)下测定水稻野生型和转OsERL基因植株的第6片完全展开叶的光合速率(μmolCO₂m-2s-1)和蒸腾速率(mmol H₂O.m-2s-1)。野生型和转基因植株分别测定至少5个植株，相同的实验重复3次。结果表明，野生型和转基因株系的光合速率没有显著差异(图5A)，但转基因株系的蒸腾速率要低于野生型，其中15#和24#株系与野生型有显著性差异(P＜0.05)(图5B)；因此转基因株系的水分利用率高于野生型，并且15#和24#株系与对照植株差异显著(图5C)，推测这是由于转基因株系的蒸腾速率减少所引起的。这些结果表明，OsERL基因在烟草中的表达降低了水分蒸腾速率，提高了水分利用率。

实施例7：转OsERL基因烟草植株的表皮细胞较大、气孔密度降低

本实施例分析了温室中生长的T3代转基因烟草植株和野生型SR品种烟草植株发育完全的叶片单位叶面积上气孔数目(气孔密度)、表皮细胞大小和气孔指数。具体步骤如下：将转基因植株和野生型植株的种子经表面消毒后，播种于含有1/2MS培养基的玻璃培养瓶。在光照培养箱(28℃14小时光照，23℃10小时黑暗)培养至生成较发达的根系，挑选生长一致的幼苗转移至土中，在温室中培养(自然条件)至8叶期。早上10点选取烟草野生型和转基因烟草植株上的完整成熟的第六片完全展开叶的中段位置，其中选取3个转基因株系，每个株系分别选择5个植株进行重复。将要观察的叶片置于乙醇∶乙酸溶液(体积比为9∶1)中固定24h以上，用蒸馏冲洗2-3次，再置于水合氯醛溶液(甘油∶水合氯醛∶蒸馏水＝1∶8∶1)中浸泡，然后移到载玻片上，覆以盖玻片。采用Nikon TE 2000-E光学显微镜，在10×20倍下观察，并使用软件NIS-Elements F 3.0拍照，每张片子观察10个视野。结果表明，各转基因株系叶片的表皮细胞明显大于野生型(图6A)，而转基因株系的气孔密度显著小于野生型植株(图6B)。这些结果表明OsERL在转基因烟草中过量表达能够促进表皮细胞的扩大，从而导致气孔密度下降、蒸腾速率和失水速率降低，干旱胁迫耐性增强。

Claims (4)

1.基因OsERL在提高烟草干旱胁迫耐性方面的应用，所述基因OsERL的序列如SEQ ID NO：1所述。

2.如权利要求1所述的基因OsERL在提高烟草干旱胁迫耐性方面的应用，其特征是，所述应用是通过促进烟草表皮细胞的扩大，降低烟草气孔密度，从而导致烟草蒸腾速率和失水速率降低来实现的。

3.基因OsERL在提高烟草干旱胁迫耐性方面的应用方法，其特征是，通过PCR方法，扩增出水稻品种日本晴的OsERL基因的全长编码区，正向连接在植物表达载体pCAMBIA1390-ubi上；再进行遗传转化至烟草中，提高OsERL基因的表达，得到OsERL基因表达增强的转基因烟草植株，所述基因OsERL的序列如SEQ ID NO：1所述。

4.如权利要求3所述的基因OsERL在提高烟草干旱胁迫耐性方面的应用方法，其特征是，PCR扩增的上游引物OsERLF如SEQ ID NO：3所述，下游引物OsERLR如SEQ ID NO：4所述。

Images