CN102220297B

CN102220297B - 一种抗逆相关蛋白TaSnRK2.3及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN102220297B
Application number: CN2011101447678A
Authority: CN
Inventors: 毛新国; 景蕊莲; 田山君; 张洪映
Original assignee: Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2011-05-31
Filing date: 2011-05-31
Publication date: 2012-11-07
Anticipated expiration: 2031-05-31
Also published as: CN102220297A

Abstract

本发明公开了一种抗逆相关蛋白TaSnRK2.3及其编码基因与应用。该蛋白，选自如下(a)或(b)：(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO：1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆相关的由(a)衍生的蛋白质。实验证明，将本发明基因导入植物中，提高了植物的抗逆性，如抗旱性和/或抗盐性。因此，本发明基因及其应用对培育抗旱节水、抗盐农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。

Description

一种抗逆相关蛋白TaSnRK2.3及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种抗逆相关蛋白TaSnRK2.3及其编码基因与应用。

背景技术

干旱缺水是全球农业生产面临的严重问题，也是制约我国粮食生产发展的重要因素。主要粮食作物小麦的栽培需要大量的水，我国平均每生产1吨小麦需水量约500-700m³。全世界发展中国家至少有6000万公顷小麦栽培在雨养耕地，但其产量水平只有灌溉条件下的10％-50％。所以，发展抗旱节水小麦品种，以提高作物的水分利用效率，既可增加产量，又可以缓解水资源短缺的矛盾。

改良作物抗旱性对于提高农业生产力具有重大意义，受到世界各国的高度重视，近期我国启动的转基因作物新品种培育重大专项就是最好的实证。研究植物的抗旱机理、克隆抗旱相关基因、通过基因工程改良作物抗旱性是培育抗旱作物新品种的一条有效途径。虽然作物的抗旱性遗传基础复杂，克隆、转化抗旱基因获得抗旱性明显提高的新品种难度较大，但经众多科学家的共同努力，已经取得了一定的进步，涌现了不少成功的例子，如Cheng等(Molecular Breeding，2002，10：71-82)把小麦的LEA蛋白基因导入水稻，转基因植株的抗旱、耐盐性得到了明显提高；WU等(Chinese Science Bulletin，2003，48：2594-2600)将拟南芥的δ-OAT基因转入水稻中过量表达，转基因植株中脯氨酸含量明显增加，抗旱和耐盐性明显增强；Dubouzet等(Plant J，2003，33：751-763)将水稻转录激活蛋白基因OsDRE1A导入拟南芥后，转基因植株表现了强抗旱、抗盐和耐寒特性。Hu等将OsNAC1基因导入到水稻中，转基因后代的抗旱性得到明显增强，而且不影响后代产量(Hu等2006，Proc Natl Acad Sci USA，10：71-82)。

目前，已克隆的抗旱相关基因主要包两大类，第一类为功能基因，这类基因包括低分子可溶性糖、氨基酸和小分子蛋白质等合成相关基因，以及保护细胞免受损害的酶类，如脯氨酸合成相关酶基因，包括吡咯啉-5-羧酸合成酶基因P5CS及PVAB2，吡咯琳-5-羧酸还原酶基因P5CR等；晚期胚胎发生丰富蛋白(LEA)，小麦LEA蛋白基因(Ingram等1996，Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology，47：377-403)。

第二类是调节基因，包括各种参与水分胁迫信号传递的基因，主要包括(1)参与ABA、乙烯等信号分子合成的关键酶类(Bray 1997，Trends in Plant Science，2：48-54)；(2)转录因子(Soderman等1996，Plant J，10：375-381)，如DREB(Wang等2008，Plant Mol Biol 67：589-602；Agarwal等2007，Mol Genet Genomics 277：189-198；Chen等2007，Biochem Biophys Res Commun 353：299-305；Maruyama等2004，Plant J 38： 982-993；Dubouzet等2003，Plant J，33：751-763)，NF-YB 1(Yu等2008，Plant Cell，20：1134-1151)，HD-ATART(Nelson等2007，Proc Natl Acad Sci USA，104：16450-16455)，OsNAC1(Hu等2006，Proc Natl Acad Sci USA，10：71-82)等；(3)蛋白磷酸酶，如蛋白质磷酸酶2A和2C等，它们参与ABA信号的传递(Kwak等2002，Plant Cell，14：2849-2861；Leung等1997，Plant Cell，9：759-771；Merlot等2001，Plant J，25：295-303；Sheen 1998，Proc Natl Acad Sci USA，95：975-980)。(4)蛋白磷酸激酶，植物蛋白激酶家族非常，主要包括分裂素激活蛋白激酶(MAPK)(Knetsch等1996，Plant Cell，8：1061-1067)，钙依赖的蛋白激酶(CDPK)(Li等1996，Plant Cell，8：2359-2368；Sauer等2004，JExp Bot，55，181-188；Sheen 1996，Science，274：1900-1902)和蔗糖非发酵相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting(SNF 1)related protein kinase，SnRK)。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种植物抗逆相关蛋白及其编码基因。

本发明所提供的蛋白，来源于小麦，具体选自如下(a)或(b)：

(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID NO：1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗逆相关的由(a)衍生的蛋白质。

上述蛋白的编码基因为如下1)或2)或3)或4)的基因：

1)其核苷酸序列是SEQ ID NO：2的自5′末端第145-1173位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；

2)其核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列有90％以上同源性且编码所述抗逆相关蛋白的DNA分子。

为了使上述(a)中的蛋白便于纯化，可在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK

c-myc

10

EQKLISEEDL

上述(a)或(b)中的蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的蛋白的编码基因可通过将SEQ ID NO：2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

含有上述任一所述编码基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体为将上述任一所述编码基因插入载体pPZP211-GFP的多克隆位点得到的。

含有上述任一所述编码基因的重组菌也属于本发明的保护范围。

含有上述任一所述编码基因的转基因细胞系也属于本发明的保护范围。

含有上述任一所述编码基因的表达盒也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供培育抗逆植物的方法。

本发明所提供的培育抗逆植物的方法，是将上述任一所述编码基因导入出发植物中，得到抗逆性高于所述出发植物的转基因植物。

上述方法中，所述编码基因是通过上述任一所述重组表达载体导入所述植物中的。

上述任一所述方法中，所述抗逆性是抗干旱和/或耐盐。

上述任一所述方法中，所述出发植物为双子叶植物，具体可为拟南芥。

实验证明，将本发明基因导入植物中，提高了植物的抗逆性，如抗旱性和/或抗盐性。因此，本发明基因及其应用对培育抗旱节水、抗盐农作物新品种具有重要的意义，适合于推广应用。

附图说明

图1为TaSnRK2.3在受水分胁迫、高盐、低温和ABA处理后的表达情况。

图2为TaSnRK2.3在不同小麦组织中的表达情况。

图3为转基因拟南芥的抗旱鉴定结果。

图4为转基因拟南芥的抗盐鉴定结果。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、小麦中抗逆相关蛋白的编码基因TaSnRK2.3的分离

一、抗逆相关蛋白的编码基因TaSnRK2.3的分离

构建小麦的全长cDNA文库，按照文献（毛新国等，2005,用改进的Cap-trapper法构建拟斯卑尔脱山羊草全长cDNA文库。遗传学报,32（8）：811-817）中所述方法进行：

（1）总RNA提取及mRNA纯化，用TRIZOL提取小麦总RNA，用oligo（dT）纤维素分离纯化mRNA。

（2）第一链cDNA的合成：取10μg mRNA与引物Ⅰ混合，变性后加入第一链cDNA合成的试剂，当温度升到40℃时，加入反转录酶，当反应进行到40分钟时加入引物Ⅱ（第一链合成引物如下）。为得到更多全长cDNA，在第一链合成时向反应体系中加入海藻糖和山犁糖醇；为限制poly(A)尾巴的长度，以便于大规模测序，用混合引物替代传统的单一引物oligo(dT)18。反应结束后用CTAB-UREA法除去糖类，沉淀cDNA/RNA。

表2第一链cDNA合成引物

（3）高碘酸钠氧化向上步反应管中加入高碘酸钠溶液，氧化RNA，用甘油终止反应。

（4）生物素标记离心收集高碘酸钠氧化的cDNA/RNA，清洗、晾干重新溶解后，加入新鲜配置的Biotin-hydrzide，23℃温育14～16h，用柠檬酸钠终止反应。

（5）RNase Ⅰ消化经高碘酸钠氧化后，mRNA 5′和3′端末位碱基核糖上相邻的二醇基团被氧化成为二醛基团，它们都可以和生物素结合。后期利用链霉亲和素包被的磁珠分离全长cDNA时，mRNA 3′端的生物素也可以与磁珠结合。为得到5′端完整的cDNA，必须特异地将3′端标记的生物素除去。真核生物mRNA 3′端poly（A）长度一般在100～250bp，在合成第一链cDNA时，将poly(A)的长度限制在16个碱基，因此cDNA/RNA复合体中mRNA 3′端poly（A）将以单链的形式存在，因此可以用RNaseⅠ将其特异除去。

(6)全长cDNA的捕获及单链cDNA释放先用无DNA污染的tRNA封阻磁珠(Dynal bead M-280)，室温下让cDNA/RNA和磁珠结合20min，用NaOH-EDTA洗脱cDNA/RNA。

(7)末端转移酶加尾收集单链cDNA，变性后加入末端转移反应试剂，37℃反应9分钟，终止反应。

(8)第二链cDNA的合成收集单链cDNA，用LA-Taq合成第二链cDNA。待反应结束后，电泳，回收大于1kb的cDNA。

(9)酶Bsa I属于二类限制性内切酶，它的酶切位点正好处于识别位点下游的第一个碱基处，而且酶切没有碱基特异性，但对识别位点的胞嘧啶甲基化敏感。经Bsa I酶切的DNA将产生4个碱基突出的黏性末端。根据这些特性，在引物设计时引入了Bsa I、EcoR I和Xho I位点，其中第一链引物中为Bsa I和Xho I位点，第二链引物中为Bsa I和EcoR I位点。通过采取这些措施，仅用Bsa I对cDNA进行单一酶切，就可以实现cDNA的定向克隆。

(10)连接、包装及插入片段检测：收集分级后的目的cDNA片段，重新溶解于ddH₂O中，检测cDNA浓度，确定cDNA的浓度后，取适量的cDNA与载体Un iZAP II(Stratagene)连接过夜。包装后，侵染宿主菌XL1-Blue，检测滴度。

(11)质粒提取及序列测定产量，然后重复蛋白酶K消化，酚/氯仿萃取等步文库扩增后，取一定量的扩增文库用于噬粒环骤，最后将cDNA置于乙醇中沉淀过夜。环化，检测噬粒滴度，最后取适量环化后的噬粒侵染SOLR宿主细胞。

(12)将噬粒侵染过的宿主细胞涂布平板，37℃培养过夜。随即挑取阳性克隆于96孔培养板，提取质粒、测序，构建小麦全长cDNA数据库。

以水稻SAPK3(AB125309)为源序列，搜索小麦全长cDNA数据库，得到候选克隆，测序得到目标克隆的全长序列，其序列如SEQ ID NO：1所示，序列全长为1352bp。

分析SEQ ID NO：2所示基因的结构，表明，其自5′末端第1-144位核苷酸为5′UTR(144bp)，第145-1173位核苷酸为开放阅读框(1029bp)，第1174-1447位核苷酸为3′UTR(274bp)。

该基因编码的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，由342个氨基酸残基组成。

将本发明的序列表中SEQ ID NO：2所示的基因命名为TaSnRK2.3，由其编码的蛋白(SEQ ID NO：1所示)命名为TaSnRK2.3。

二、植物抗逆相关基因TaSnRK2.3的表达特征

(一)植物抗逆相关基因TaSnRK2.3对不同逆境胁迫的应答情况

以抗旱小麦(旱选10号)为实验材料。

挑选籽粒饱满、大小一致的抗旱小麦种子(旱选10号)，将其置于光照培养箱中，在20℃、12h/d培养，水培至一叶一心，然后进行逆境胁迫处理。水分胁迫：除去培养皿中的水分，加入PEG-6000(渗透势为-0.5MPa)水溶液；高盐胁迫：除去培养皿中的水分，加入250mM NaCl水溶液；低温胁迫：直接将培养皿移至4℃光照培养箱培养；外源ABA处理：采用50μM ABA溶液进行喷雾直至叶片全部湿润。分别在不同胁迫处理的0、1、3、6、12、24、48和72h采集叶片，液氮速冻，-70℃保存备用。对照一直采用无离子水培养。

用TRIZOL提取小麦总RNA，以MMLV反转录试剂盒合成第一链cDNA(Invitrogen)，采用实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR，qRT-PCR)的方法检测基因TaSnRK2.3对各种逆境胁迫的响应情况。用组成型表达的Tubulin基因作为内参，设计了qRT-PCR的引物。

表3、qRT-PCR引物

按照Livak and Schmittgen提出的公式计算：TaSnRK2.3基因在4种处理下的表达量为对照的N倍，N＝2^-ΔΔCT，ΔΔCT＝(CT_{(Target，Time x)}-CT_{(Tubulin，Time x)})-(CT_{(Target，Time0)}-CT_{(Tubulin，Time 0)})。

其中，CT值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。PCR循环在到达CT值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期(对数期)，此时微小误差尚未放大，因此CT值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的CT值是恒定的。

time x代表不同的处理时间点；time 0代表处理的零点；CT_{(Target，Time x)}为经过胁迫处理x时间时，小麦中TaSnRK2.3基因的表达量；CT_{(Tubulin，Time x)}为经过胁迫处理x时间时，小麦中Tubulin基因的表达量；CT_{(Target，Time 0)}为未开始胁迫处理时，小麦中TaSnRK2.3基因的表达量；CT_{(Tubulin，Time 0)}为未开始胁迫处理时，小麦中Tubulin基因的表达量。

实验设3次重复，结果取平均数，结果如图1所示(A为ABA处理，B为低温处理，C为NaCl处理，D为PEG处理，)。相对表达量即为N值。结果表明，TaSnRK2.3参与对 PEG、NaCl、低温和ABA的应答。

(二)植物抗逆相关基因TaSnRK2.3在小麦不同发育时期的表达量

以旱选10号为实验材料。

分别以水培幼苗的根、叶，大田中正常生长小麦拔节期心叶和抽穗期的幼穗为材料，提取总RNA，用MMLV反转录试剂盒合成第一链cDNA，采用qRT-PCR的方法检测TaSnRK2.3基因在不同发育时期不同幼嫩组织中的表达情况，所用的引物序列同前。

实验设3次重复，结果如图2所示(以幼苗期叶中的表达为基准，其它发育时期和其它组织较幼苗叶中的基因的表达水平为相对表达量)。结果表明，TaSnRK2.3在小麦茎中表达量比较高，根次之，而在叶片和幼穗中的表达量比较低。

实施例2、基因的应用

一、转基因拟南芥的构建

普通小麦(Triticum aestivum L.)旱选10号来自国家作物种质资源库。

农杆菌GV3101在文献“Detlef Weigel and Jane Glazebrook，2002.How to Transform Arabidopsis，Chapter 5，in Arabidopsis by Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，USA”中公开过，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。

双元载体pPZP211-GFP在文献“Mao Xinguo等，TaSnRK2.4，an SNF1-type serine/threonine protein kinase of wheat(Triticum aestivum L.)，confers enhanced multistress tolerance in Arabidopsis.Journal of Experimental Botany 2010；61：683-96.”中公开过，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。

双元载体pPZP211-GFP的构建：在载体pPZP211的多克隆位点Sal I和Pst I之间插入GFP的开放阅读框(GFP核苷酸序列：Genbank number为BAG13014的序列)，最终得到双元载体pPZP211-GFP。

提取普通小麦(Triticum aestivum L.)旱选10号的mRNA，以5′-GAGTTGGAGCCGCCCCTTG-3′和5′-CAGACAGACCGTATGAACTGCGAT-3′为引物，用RT-PCR的方法获得小麦中基因TaSnRK2.3的全长cDNA；以基因TaSnRK2.3的全长cDNA序列为模板，以引物F1/R1，采用高保真酶Pfu扩增目标基因。

上游引物F1：5′-CCCAAGCTTATGGAGGAGAGGTACGAGGC-3′(Hind III位点)，下游引物R1：5′-ACGCGTCGACGTAGGTCTCCCCCTCGGCT-3′(Sal I位点)，其中下游引物3′端位于基因终止密码子的上游。

将扩增产物用限制性内切酶Hind III和Sal I进行酶切，回收目标基因片段；用限制性内切酶Hind III和Sal I酶切双元载体pPZP211-GFP，回收目的载体片段；将回收的目标基因片段和目的载体片段进行连接，将连接产物转化大肠杆菌，壮观霉素抗性筛选培养，挑取阳性单克隆，进行扩大培养，提取质粒，测序，结果表明在pPZP211-GFP的Hind III和Sal I位点间(沿着从Hind III到Sal I的方向)插入的基因序列如SEQ ID NO：2中第145-1173位核苷酸所示(即基因TaSnRK2.3的开放阅读框)，将阳性重组载体记作pPZP211-TaSnRK2.3/GFP。SEQ ID NO：2中第145-1173位核苷酸编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

将pPZP211-TaSnRK2.3/GFP导入农杆菌GV3101中，得到阳性重组农杆菌。

利用农杆菌介导的方法将基因TaSnRK2.3转到拟南芥中。具体如下：

取-70℃保存的携带pPZP211-TaSnRK2.3/GFP农杆菌菌液20μL，加入5mL添加壮观霉素和利福平的YEB培养基中(yeast extract 10g/L，Tryptone 10g/L，NaCl 5g/L，壮观霉素100mg/L，利福平25mg/L，其它为水)，28℃恒温振摇过夜。

将此5mL菌液倒入250mL添加壮观霉素和利福平的YEB培养基中，28℃恒温振摇过夜，当农杆菌的浓度应达到OD₆₀₀＝1.8时，4000rpm离心15分钟，收集菌体。

加入新鲜配制的5％(质量百分含量)蔗糖水溶液。将农杆菌重悬于蔗糖溶液中，并加入表面活性剂Silwet，使其终浓度达到0.02％(每升加200μL)，得到农杆菌悬浮液。

将开花期的拟南芥花盆蒙上纱布，用橡皮筋扎紧，以免花盆倒扣时培养基质下漏。将花盆倒扣于装有250mL菌悬液的培养皿上，将拟南芥倒置，使花蕾朝下并浸入农杆菌悬浮液中，保持3-5Sec。

转化后的植株平放，盖好保鲜膜。在温度为22℃、光强为120mmol m^-2s^-1、12h光照/12h黑暗的条件下生长12-24h，然后再置于温度为22℃、光强为120mmol m^-2s^-1、12h光照/12h黑暗的条件下培养，直到开花结荚收集种子，记作T0代种子。

筛选：将种子种在加有卡那霉素的MS培养基(MS+50mg/L卡那霉素)上，在温度为22℃、光强为120mmol m^-2s^-1、12h光照/12h黑暗的条件下培养，一周后将绿色的转基因幼苗移栽到土壤中培养。

转基因纯系的获得和鉴定：在荧光显微镜下观测转基因拟南芥幼根中TaSnRK2.3-GFP融合蛋白的表达情况。根据荧光的强弱挑选融合蛋白表达量较高的转基因株系，收集其种子，记作T1代种子。将T1代种子种在加有卡那霉素的MS培养基(MS+50mg/L卡那霉素)平板上，在温度为22℃、光强为120mmol m^-2s^-1、12h光照/12h黑暗的条件下培养7天，统计绿苗和黄苗的比例，将绿苗∶黄苗＝3∶1的转基因株系移栽到土中加代，单株收种子，记作T2代种子。将单株收获的T2代种子种在加有卡那霉素的MS培养基(MS+50mg/L卡那霉素)平板上，选取无黄苗出现的单株(即转基因纯系)进行繁种和抗逆性鉴定。

以未转入任何载体的野生型拟南芥为野生型对照。

按照与获得纯合转基因拟南芥相同的方法得到纯合转空载体pPZP211-GFP的拟南芥，记作空载体对照。

二、抗逆性检测

(一)抗旱性鉴定(旱胁迫)

称等量的栽培土(蛭石和腐殖土的比例为1∶1)于方形塑料钵中。浇水至饱和后，将7日龄的拟南芥幼苗(包括纯合转基因株系、野生型对照、转空载体对照)移栽到塑料盘中，于22℃、12h光照/d、光强为120mmol m^-2s^-1，相对湿度70％条件下控水培养；控水的方法就是不浇水。每个转基因株系10株。控水培养30天后复水，复水后第3天照相并统计存活率。复水培养的方法是：将塑料盘直接放在水中，待土壤吸水完全饱和后取出，在如下条件进行培养：22℃、12h光照/d、光强为120mmol m^-2s^-1，相对湿度70％。

试验设3次重复，每次重复6株幼苗。

结果：控水30天时，野生型拟南芥和转空载体的拟南芥严重萎蔫。

表型结果如图3所示，转入基因TaSnRK2.3的拟南芥的抗旱性明显好于野生型对照和空载体对照(图3中，WT代表野生型，L1～L6为6个转TaSnRK2.3基因株系，CK为转pPZP211-GFP载体的对照)。

表4.抗旱性实验的存活率统计

WT

CK

L1

L2

L3

L4

L5

L6

存活株数

1.0±0.7

1±0.7

2±0.7

4±1.0

2±0.7

4±0.7

存活率(％)

16.7

33.3

66.7

33.3

66.7

(二)抗盐性鉴定

称等量的栽培土(蛭石和腐殖土的比例为1∶1)于方形塑料盘中，将7日龄的拟南芥幼苗(包括纯合转基因株系、野生型对照、转空载体对照)移栽到塑料盘中；于22℃、12h光照/d、光强为120mmol m^-2s^-1、相对湿度70％条件下培养。3周后，进行盐处理(将种苗的塑料盘直接放在300mM的NaCl水溶液中，待土壤完全饱和后取出)，盐处理后在如下条件进行培养：22℃、12h光照/d、光强为120mmol m^-2s^-1，相对湿度70％。盐处理第5天后，观察转基因植株的表型并照相，盐处理后第12天统计转基因植株的存活率。试验设3次重复，每次重复6株幼苗。

照片结果如图4示，转入基因TaSnRK2.3的拟南芥的抗盐性明显好于野生型对照和转空载体对照(图4中，WT代表野生型，L1～L6为6个转TaSnRK2.3基因株系，CK为转pPZP211-GFP载体的对照)。

表5.抗盐性实验的存活率统计

WT

CK

L1

L2

L3

L4

L5

L6

存活株数

0

5±0.7

4±1.0

3±0.7

4±1.0

4±0.7

存活率(％)

0

83.5

66.8

50

66.8

Claims

1.一种蛋白，是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下1）或2）的基因：

1）其核苷酸序列是SEQ ID NO：2的自5＇末端第145-1173位脱氧核糖核苷酸所示的DNA分子；

2）其核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体。

5.含有权利要求2或3所述编码基因的重组菌。

6.含有权利要求2或3所述编码基因的转基因细胞系。

7.含有权利要求2或3所述编码基因的表达盒。

8.一种培育抗逆植物的方法，是将权利要求2或3所述的编码基因导入出发植物中，得到抗逆性高于所述出发植物的目的转基因植物；

所述抗逆性为抗干旱和/或耐盐；

所述出发植物为拟南芥。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述编码基因是通过权利要求4所述的重组表达载体导入所述出发植物中的。