CN102210843A - 一种治疗恶性肿瘤的中药组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗恶性肿瘤的中药组合物及应用。所述中药组合物是由以下原料药制备得到：贯众，重楼，莪术，山慈菇，人参，黄芪，山药，枸杞，五味子，茯苓，灵芝。本发明的中药组合物其全方扶正固本，起到益气养血、健脾安神、补肾滋阴之功，经临床验证疗效满意。同时，本发明通过研究该中药组合物对体内和体外肿瘤模型的抗肿瘤作用及作用机制，为进一步研发治疗恶性肿瘤的中药新药提供客观依据。

Description

一种治疗恶性肿瘤的中药组合物及应用

技术领域

本发明涉及中药组合物，具体涉及一种治疗恶性肿瘤的中药组合物，还涉及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类健康的大敌，已经成为我国城乡居民死亡的第一杀手，并呈逐年上升趋势。防治肿瘤是当代医学界的重大课题，广泛受到国内外医学界的关注。然而恶性肿瘤的治疗十分困难。西医的外科手术、放疗、化疗目前是治疗恶性肿瘤的三大基本手段。然而外科手术不但给病人带来巨大的生理和心理上的痛苦，而且其远期疗效也不尽人意。放疗和化疗的非特异性杀灭肿瘤细胞的作用导致正常细胞和脏器损害无法避免，以至于有些患者并非死于癌症本身，而是间接的死于放疗和化疗药物所带来的毒副反应。由以上不难看出，恶性肿瘤的三大常规治疗都存在一些弊端，人们期盼有一些新的方法和手段来与癌症作斗争。1994年，加拿大的schipper教授在关于恶性肿瘤概念的新模式中提出，有效的治疗并不需要肿瘤的完全消退，机体的反应性对癌瘤治疗最为重要。这一观点的提出与中医药治疗恶性肿瘤的扶正培本的特点相吻合。中药以其扶正(增强机体免疫力)、祛邪(杀伤肿瘤细胞)而又副作用少越来越受到重视。

发明内容

针对现有问题，本发明所要解决的技术问题是提供一种用于治疗恶性肿瘤的中药组合物。全方扶正驱邪，起到益气养血、健脾安神、补肾滋阴之功，经临床验证疗效满意。本发明运用先进实验技术手段对中药组合物抗肿瘤作用及机制进行深入探讨。为研发出作用机制明确安全有效的抗肿瘤中药新药奠定基础，具有重要的理论意义和广阔的应用前景。

为此，本发明提供一种治疗恶性肿瘤的中药组合物及应用。所述中药组合物是由以下原料药制备得到：贯众，重楼，莪术，山慈菇，人参，黄芪，山药，枸杞，五味子，茯苓，灵芝。

具体的，所述中药组合物是由以下重量份的各原料药制备得到：贯众10-20份，重楼10-30份，莪术10-20份，山慈菇10-20份，人参5-15份，黄芪20-30份，山药10-30份，枸杞10-30份，五味子5-15份，茯苓10-30份，灵芝10-30份。

优选的，所述中药组合物是由以下重量份的各原料药制备得到：贯众15份，重楼20份，莪术15份，山慈菇15份，人参10份，黄芪25份，山药20份，枸杞20份，五味子10份，茯苓20份，灵芝20份。

其中，黄芪甘温入脾经，为补气升阳之要药，具有补气升阳，利水消肿的作用。人参味甘，微寒，入脾、胃、肺三经，具有大补元气，固脱生津，安神的作用，二药共为方中君药。莪术味苦平入肺、脾二经，具有破血消积，敷疮消肿，散癖止痛的功效。重楼味苦微寒，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊的功效，二者为方中之臣药。黄芪、人参、莪术、重楼四者配伍，可是攻补兼施，相得益彰，共同达到益气养阴，解毒散瘀之功效。灵芝滋补强壮、补肾固本，补气益血、养心安神。加山药、茯苓助其健脾渗湿、益气安神、补肾滋阴、益肝养血之功，脾健则气机通畅，气血调和，饮食有味，生化之源不断。枸杞、五味子健脾益胃、和中安神，共为方中佐使药。诸药配伍共奏扶正固本，益气养阴、解毒散瘀之效。

配伍特点：①寒温并用，寒凉生津之功，但过用有伤阳之弊，加以温热之品，可使之清而不过，温而不燥；②甘寒同化，癖邪尚存则纯甘不可，因其正虚而纯苦不能，非合不化邪，非并行不为功，二者合用“甘得苦则不呆滞，苦得甘则不刚燥，合而功成业”；③攻补兼施，扶正参以祛邪，益气养阴配以解毒散瘀，使通中有补，静中有动，刚柔相济，相得益彰。

所述的原料药粉碎后加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种制剂，所述的制剂包括胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。本发明制剂的制备方法属于常规制剂方法，在此无庸赘述。

本发明的中药组合物可用于制备治疗恶性肿瘤的药物。

本发明的中药组合物其全方扶正固本，起到益气养血、健脾安神、补肾滋阴之功，经临床验证疗效满意。同时，本发明通过研究该中药组合物对体内和体外肿瘤模型的抗肿瘤作用及作用机制，为进一步研发治疗恶性肿瘤的中药新药提供客观依据。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

试验例1临床研究

所用的中药组合物按照以下方法制备：

按以下重量称取的各原料药：贯众15g，重楼20g，莪术15g，山慈菇15g，人参10g，黄芪25g，山药20g，枸杞20g，五味子10g，茯苓20g，灵芝20g，原料药用蒸馏水浸泡1h，水煎2次，每次30min，两次煎液混匀，旋转蒸发仪分别浓缩至50mL，4℃保存，制成水煎剂，用于以下研究：

1.资料与方法

1.1入选标准

85例病人均为2004年8月-2008年1月在黑龙江中医药大学附属第一医院住院治疗的肺癌、肝癌、胃癌病人。全部病例患者就诊时绝大多数为西医诊断确切，手术、化疗后复发者。

1.2一般资料设对照组和治疗组。见表1

表1两组临床资料

1.3临床分期

按照国际抗癌联盟(UICC)1987年关于恶性肿瘤的TNM标准进行临床分期。120例恶性肿瘤患者中，多数是中期(占85％)，并有不同情况的转移，如淋巴结肿大，胃、脑、腹腔转移，伴胸、腹水及发烧，出血，疼痛等。

1.4临床诊断标准

根据现代医学检查，凡为阳性者可确诊肿瘤：①胸片、x线、cr、MRI、干板等仪器检查阳性(+)；②纤维支气管镜检查阳性(+)；③活体组织取材经病理组织检查阳性(+)；④分泌物脱落细胞学检查阳性(+)；⑤体腔积液抽水检查阳性(+)；⑥凡远端器官或部位有转移者；⑦临床症状表现与上述有关诊断相结合的明确诊断。

1.5治疗方法

治疗组应用上述中药组合物1剂/日，20天为一疗程，共3个疗程；对照组未用上述中药组合物。两组均同时进行辅助治疗，如祛胸水、腹水、止痛、止血、增进食欲和通便等。

1.6疗效标准

根据病情进行血、尿、便常规化验和特异性指标化验，x线拍片、B超、CT等检查，观察临床症状，如体重、咳嗽、进食、疼痛、出血、体温、呼吸、心率、胸水、腹水、肿瘤大小等。

2.观察结果

表2两组患者临床总疗效比较

经Ridit分析，两组间有显著性差异(P＜0.05)。

试验例2药理学实验

所用的中药组合物按照以下方法制备：

按以下重量称取的各原料药：贯众15g，重楼20g，莪术15g，山慈菇15g，人参10g，黄芪25g，山药20g，枸杞20g，五味子10g，茯苓20g，灵芝20g。原料药用蒸馏水浸泡1h，水煎2次，每次30min，两次煎液混匀，旋转蒸发仪分别浓缩至50mL，4℃保存，制成水煎剂，用于以下研究：

1、体外实验：采用血清药理学方法，通过MTT法、AnnexinV/PI双染法、琼脂糖凝胶电泳法等方法，并以倒置显微镜及Wright-Giemsa法观察上述中药组合物含药血清对肿瘤细胞形态学变化的影响，研究上述中药组合物含药血清在体外对人红白血病细胞系K₅₆₂的抑瘤和/或诱导细胞凋亡作用。

2、体内实验：建立荷瘤小鼠的动物模型，观察上述中药组合物对小鼠抑瘤率免疫器官指数。HE染色、通过光镜进行瘤组织病理形态学观察。免疫组织化学方法检测各组小鼠肿瘤组织碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。

以此探讨本发明中药组合物的抗肿瘤作用及其作用机制，具体通过以下实验进行：

体外实验部分：

1实验材料

中药组合物按上述方法制备，按常规方法浓缩煎液成2g/ml的生药浓度，灭菌后冷藏备用制备水煎液，4℃保存备用。人红白血病K562细胞株，购自中科院上海生物细胞所。脲嘧啶替加氟片，齐鲁制药有限公司，批号0502002；培养液：RPMI1640、IMDM购自Gibco公司；胎牛血清：杭州四季青生物工程公司产品。

2主要仪器设备

CO₂培养箱(TC 2323型)，超净工作台，数显电热恒温干燥箱(202-2A型)，倒置相差显微镜(LH50A型)，酶联免疫检测仪(DG3022A型)，高速台式离心机(TGL-16C型)，离心机(LD42型)，研究用显微镜(BH-2型)等。

3.实验动物清洁级雄性Wistar大鼠，雄性，体重250±50g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

4.实验方法

4.1含药血清制备：

取Wistar大鼠随机分为5组，即中药组合物高、中、低剂量组，空白对照组和脲嘧啶替加氟片对照组，每组4只，中药组合物高、中、低剂量组分别给予12.5、25、50g/kg·d^-1灌胃，对空白对照组给予生理盐水灌胃，阳性对照给予0.039g/kg·d^-1脲嘧啶替加氟片，连续灌胃给药7d，于末次灌胃后2h，颈动脉采血，无菌分离血清，经56℃、30min灭活处理后，用0.22μm微孔过滤除菌，置-20℃冰箱保存备用。

4.2含药血清对K₅₆₂细胞毒作用的影响

4.2.1台盼兰拒染试验

取对数生长期的K₅₆₂细胞，将细胞调整为按1×10⁵/ml，接种于24孔板内，每孔1ml，试验组加入高、中、低剂量组(见4.1)的中药组合物含药血清0.5ml，阳性对照组加入0.5ml的脲嘧啶替加氟片含药血清，阴性对照组用等体积的空白血清，每组设4个平行孔，置37℃5％CO₂培养箱内培养，于用接种后24、48、72、96h分别取每组细胞，加入0.2％台盼兰拒染进行活细胞数计数，试验重复3次，计算平均值按下式计算IR并绘制生长曲线。

IR＝1-(实验组活细胞数-对照组活细胞数)×100％

4.2.2MTT法测定药物的细胞毒实验

取对数生长期的K₅₆₂细胞，接种于96孔板，100μl/孔(1×10⁵/孔)，在37℃5％CO₂培养箱内过夜培养，每孔加入高、中、低剂量组(见4.1)的中药组合物含药血清50μl，阳性对照组加入50μl脲嘧啶替加氟片含药血清，阴性对照组用等体积的空白血清，每组设6个平行孔，分别在含药血清处理细胞24、48、72、96h后，在不同的时间内每孔加入20μlMTT(5mg/ml)，孵育4h后弃培养液，每孔加入100μl DMSO，终止反应，轻轻震荡10min，用酶联仪在570nm波长下测光吸收值，并计算细胞生长抑制率。

4.2.3含药血清对K₅₆₂细胞集落细胞形成能力的影响

取对数生长期的K₅₆₂细胞，以1×10³/ml加入到1.2％甲基纤维素半固体的IMDM培养体系中(含20％胎牛血清)，处理组加入高、中、低剂量组(见4.1)的含药学清各50μl处理细胞，阴性对照组加入等量空白血清，以每孔1.0ml体系接种于35mm平皿内，每个浓度平行接种3孔，37℃5％CO₂培养箱内连续培养，培养第7d终止培养。弃掉营养液，PBS洗2次，10％甲醇固定10min以上，弃掉固定液，晾干，Wright-Giemsa液染色10min，自来水冲洗，晾干，二甲苯透明，置倒置光学显微镜下观察细胞聚集成团为集落。计数每个皿集落数(细胞聚集达40个以上细胞，为一个集落)，求出克隆形成率(％)和克隆抑制率(％)。

4.2.4含药血清对K₅₆₂细胞分裂指数的影响

收集1×10⁵/ml的K₅₆₂细胞接种在35mm平皿中，各组平皿分别加入高、中、低剂量组(见4.1)的含药血清和空白血清，每组每天1个平皿，置入37℃5％CO₂培养箱内培养。连续观察加药后24、48、72、96h各组分裂细胞数。即每天取各组1个平皿，收集细胞用细胞涂片机进行涂片(700rpm，3min)，Wright-Giemsa染色8-10min，充分冲洗，晾干，并于油镜下观察1000个细胞中处于分裂相细胞数，按下列公式计算分裂指数，观察细胞的形态。

细胞生长抑制率＝1-(实验组光吸收值-对照组光吸收值)×100％

4.2.5含药血清对K₅₆₂细胞形态的影响

收集1×10⁵/ml的K₅₆₂细胞接种在35mm平皿中，置入37℃5％CO₂培养箱内培养过夜。各组平皿分别加入高、中、低剂量组(见4.1)的含药血清和空白血清各50μl，分别在含药血清处理细胞72h收集细胞，用细胞涂片机进行涂片(700rpm，3min)，Wright-Giemsa染色，自来水充分冲洗，晾干，并于油镜下观察细胞的形态。

4.2.6流式细胞仪检测法检测含药血清对K₅₆₂细胞凋亡的影响

取对数生长期的K₅₆₂细胞，调整细胞的初浓度，加入高、中、低剂量组(见4.1)的含药血清处理细胞，阴性对照组加入等体积空白血清。置37℃5％CO₂培养箱培养72h，收集细胞，用预冷的1×PBS洗2次，每管用1×binding buffer把细胞调整成1×10⁶浓度，每管取100μl加入5μl的Annexin V-FITC溶液进行染色，轻轻混匀，再加入5μl的PI溶液染色，双染后在室温避光静止15min后每管再加入1×binding buffer 400μl，在1h内上流式细胞仪进行凋亡检测，凋亡后继发坏死细胞既有膜生化改变又有膜通透性改变，Annexin V+，PI+；坏死细胞呈Annexin V-，PI+；正常细胞呈Annexin V-，PI-。每份标本设一个复管，重复1次，计算凋亡细胞百分数。

5数据统计

统计学分析采用SPSS11.0 Windows统计软件处理，各数据主要以

表示，多组间比较用One-Way ANOVA检验。

6实验结果

6.1中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞毒作用的影响

6.1.1中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞生长抑制作用

高、中、低剂量组(见4.1)的含药血清分别作用K₅₆₂细胞24、48、72h，对K₅₆₂细胞的增殖均有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性抑制，在72h抑制作用最强，IR分别为34.91％、28.55％和11.55％，随着作用时间的延长，中药组合物含药血清对肿瘤细胞的抑制作用降低(高剂量组在96h的抑制率降至23.27％)，结果见表3。

表3中药组合物不同浓度含药血清对K₅₆₂细胞生长抑制作用

*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组比较。()内为抑制率

6.1.2中药组合物含药血清在不同时间内对K₅₆₂细胞增殖的影响

高、中、低剂量组(见4.1)的中药组合物含药血清分别作用K₅₆₂细胞24、48、72和96h，对K₅₆₂细胞的增值均有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性抑制，在72h抑制作用最强。随着作用时间的延长，其抑制作用有减弱的趋势。MTT值和细胞生长抑制率，结果见表4。

表4中药组合物含药血清在不同时间内对K₅₆₂细胞增殖的影响

*^P＜0.05，^**P＜0.01与空白对照组比较。()内为抑制率

K₅₆₂细胞克隆形成实验培养7d后，其克隆形成的数目明显降低。随着给药剂量的增加，药物血清对K₅₆₂细胞克隆形成能力的抑制作用增强，在培养体系中中药组合物含药血清高剂量组及脲嘧啶替加氟片血清组的肿瘤克隆形成抑制率分别为55.74％和62.77％，不同浓度的中药组合物含药血清组与空白血清对照组之间克隆形成率比较差异具有显著性意义(P＜0.01)，结果见表5。

表5中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞克隆形成的影响

*P＜0.01，与空白对照组比较。

6.1.3中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞分裂指数的影响

处于对数生长期的人红白血病K₅₆₂细胞具有旺盛的增殖能力，空白血清对照组的细胞接种后，细胞分裂指数逐渐增高。而中药组合物含药血清及脲嘧啶替加氟片血清处理组细胞接种后，肿瘤细胞的分裂指数虽然有所增加，但是增加的量很小，而在96h后中药组合物含药血清组的细胞分裂指数有升高的趋势。这亦说明中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞分裂指数的抑制作用在一定的时间内有剂量依赖性，结果见表6。

表6中药组合物含药血清在不同时间对K₅₆₂细胞分裂指数的影响

*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组比较。

6.2中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞形态的影响

油镜下观察空白对照组的K₅₆₂细胞形态，细胞形状呈圆形，较少有突起，生长速度较快。而在高剂量中药组合物含药血清作用下K₅₆₂细胞有明显的损伤，镜下可见细胞大小不一，肿胀固缩，细胞核发生断裂，有伪足和空泡的出现，部分细胞裂解成碎片。

6.3流式细胞仪检测结果：

含药血清处理的K₅₆₂细胞72h后经荧光素FITC标记磷脂酰结合蛋白V(Annexin V)检测磷脂酰丝氨酸(PS)，结合PI染色双标记法，以区分凋亡、坏死、活细胞三种状态的细胞。流式细胞仪对细胞周期的检测结果显示，中药组合物含药血清具有诱导K₅₆₂细胞凋亡的作用，中药组合物含药血清高剂量组的细胞凋亡率为35.15±1.09，其凋亡率明显高于空白血清组(11.40±1.18)，并呈现出剂量依赖性，凋亡率随着剂量的增大而增加，结果见表7。

表7不同浓度的中药组合物含药血清对K₅₆₂细胞凋亡诱导作用的影响

*P＜0.05，与空白对照组比较。

体内实验部分：

1实验材料

1.1实验动物及瘤株

昆明种小鼠，体量(20±2)g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。瘤株小鼠肝细胞瘤(S180)均由黑龙江省肿瘤研究所提供。

1.2实验药品及试剂

中药组合物按上述方法制备得到，并按常规方法浓缩煎液成2g/ml的生药浓度，灭菌后冷藏备用制备水煎液，4℃保存备用。复方环磷酰胺片，天津金世制药有限公司，批准文号：国药准字H12021006。bFGF兔抗鼠多克隆抗体、MMP-2兔抗鼠多克隆抗体、MMP-9羊抗鼠多克隆抗体、SP-9003检测试剂盒、PV-6001检测试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司，

1.3实验仪器及设备

Q500IW图像分析仪，德国Leica。生物组织包埋机，湖北孝感。BH-2光学显微镜(日本Olympus)，RM-2135转轮式切片机(德国Leica)，YT-6生物组织摊烤片机(湖北)，ZDJ-1生物组织包埋机(天津航空机电公司)，爱华烤片机(天津航空机电公司)DGX-9143B-1电热鼓风干燥箱(上海福玛)，医用图像分析处理系统(华海电子有限公司)。

2.实验方法

2.1动物造模、分组及给药

无菌条件下抽取传代7d、生长良好的S180荷瘤小鼠腹水，无菌生理盐水1∶3稀释(约含瘤细胞2×103/L)，按0.2mL/只接种于常规皮肤消毒后的小鼠右前肢腋部皮下。于接种24h后将小鼠随机分为6组，每组15只。实验组：中药组合物高、中、低剂量组。模型对照组：生理盐水。阳性对照组：复方环磷酰胺。中药组合物+环磷酰胺组实验组。各组剂量为中药组合物高剂量4.4g/kg，中药组合物中剂量2.2g/kg，中药组合物低剂量1.1g/kg，模型对照组给予同等容积生理盐水，阳性对照组剂量为39mg/kg。中药组合物+环磷酰胺组实验组剂量为中药组合物2.2g/kg+复方环磷酰胺组39mg/kg，各组均灌胃给药，连续给药11d。

2.2中药组合物抑瘤实验

停药后次日称重后处死小鼠，取瘤块和胸腺、脾脏并称重，计算抑瘤率和胸腺指数和脾脏指数。

2.3光镜观察小鼠肿瘤组织病理形态变化

剥离瘤组织后固定(4％多聚甲醛固定24h)，后将瘤组织经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，切片厚度5μm，裱于用防脱片剂处理过的干净载玻片上，置60℃恒温箱中，烤片12h，后置4℃冰箱内保存。石蜡切片脱蜡入水，苏木素液浸染10min，水洗伊红液速染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树脂封片。染色结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆呈粉红色，红细胞呈鲜红色。于400倍光学显微镜下观察瘤组织弥散程度，坏死情况，坏死区及周围炎细胞浸润状况，瘤细胞浸润程度。

2.4免疫组化法检测小鼠肿瘤组织相关蛋白含量的变化

停药后次日，按试剂盒说明进行免疫组化检测。免疫组化判断标准是阳性表达部位呈棕红色，阴性细胞核呈蓝色。根据表达强度分为“-、+、++、+++”，未见表达为“-”，阳性表达在400倍显微镜下占组织的30％为“+”，占50％以上为“+++”，表达在两者之间为“++”。其结果运用真彩色病理图像分析系统进行分析。每组随机选取10个视野，利用显微摄像系统在400X下输入计算机，通过灰度调节分析阳性目标总面积与统计场总面积比值，取平均值进行统计分析。

3实验结果

3.1中药组合物对S₁₈₀小鼠体内抑瘤率的影响

表8中药组合物对S₁₈₀小鼠体内抑瘤实验结果

注：与模型比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

实验结果表明，中药组合物高、中、低剂量组和中药组合物中剂量+复方环磷酰胺组同模型对照组相比较，对S₁₈₀实体瘤均有不同程度的抑制作用，抑瘤率分别为35.68％，46.26％，30.84％，56.83％，并与模型对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05，P＜0.01)。

3.2中药组合物对S₁₈₀荷瘤小鼠免疫器官的影响

表9中药组合物对S₁₈₀荷瘤小鼠免疫器官的影响(

n＝15)

注：与模型比较：^△P＜0.05，^▲P＜0.01

实验结果表明，阳性对照组胸腺指数及脾指数明显降低，与模型对照组比均差异有显著性意义(P＜0.01)。中药组合物高剂量组脾指数与模型对照组比均差异有显著性意义(P＜0.05)。中药组合物各剂量组的胸腺指数及中、低剂量组的脾指数与模型对照组比均差异无显著性意义(P＞0.05)。中加环组的胸腺指数和脾指数与阳性对照组比较有所升高，差异无显著性意义(P＞0.05)。阳性对照组小鼠实验后体重下降，与模型对照组比均差异有显著性意义(P＜0.01)。中药组合物各剂量组与中加环组实验前、后体重与模型对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05)。

3.3免疫组化法检测中药组合物对S₁₈₀荷瘤鼠肿瘤组织相关蛋白表达的影响表10中药组合物对S₁₈₀荷瘤鼠bFGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响(

n＝8)

注：与模型比较：^△P＜0.05，^▲P＜0.01；与空白对照组比较：^▲▲P＜0.01

结果显示：(1)模型组bFGF均呈高表达，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；治疗后的各治疗组肿瘤组织bFGF表达水平均较模型组有所降低，其中以中药组合物中剂量、中加环效果明显，与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.01)；中药组合物高剂量也显著降低bFGF的表达水平，与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05)。(2)MMP-2在模型组瘤组织呈高表达，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；各治疗组肿瘤组织MMP-2表达强度均较模型组有所减弱，中加环组MMP-2表达水平显著降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)；高剂量中药组合物也能降低MMP-2的表达，与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05)。(3)各治疗组肿瘤组织MMP-9表达水平均较模型组有所降低，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；其中以中药组合物中、高剂量和中加环效果明显，与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.01)。

3.4中药组合物对MCAO模型大鼠脑组织病理学变化的影响

由光镜下可见，中药组合物模型组中瘤细胞大小不等，可见瘤巨细胞及双核大细胞，核染色质深，瘤细胞呈大小不等巢状分布，并浸润肌肉及神经组织。巢内核分裂相较多，400倍视野下可见6～7个，肿瘤周围及肌间有少量散在的白细胞。中药组合物高剂量组中肿瘤面积及瘤细胞巢明显缩小。巢内见大片出血坏死，有的瘤细胞巢内有脂肪变性，肿瘤边缘见较多淋巴细胞；中药组合物中剂量组中瘤细胞巢面积呈不规则缩小，有大片坏死及灶性脂肪变性，细胞等周围及肌肉内有大量以淋巴细胞、浆细胞为主的炎细胞浸润；中药组合物低剂量组中瘤细胞巢面积缩小，巢内见大片出血坏死及少量脂肪变性，瘤组织周围软组织及肌肉内有较多白细胞及毛细血管；中药组合物阳性对照组中瘤细胞巢大片不规则坏死，边缘有少量散在瘤细胞，巢内有灶性脂肪变性，肌肉内仍有较多瘤细胞浸润，肿瘤边缘见较多以淋巴细胞、浆细胞为主的炎细胞及毛细血管。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种治疗恶性肿瘤的中药组合物，是由以下原料药制备得到：贯众，重楼，莪术，山慈菇，人参，黄芪，山药，枸杞，五味子，茯苓，灵芝。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，是由以下重量份的各原料药制备得到：贯众10-20份，重楼10-30份，莪术10-20份，山慈菇10-20份，人参5-15份，黄芪20-30份，山药10-30份，枸杞10-30份，五味子5-15份，茯苓10-30份，灵芝10-30份。

3.根据权利要求2所述的中药组合物，是由以下重量份的各原料药制备得到：贯众15份，重楼20份，莪术15份，山慈菇15份，人参10份，黄芪25份，山药20份，枸杞20份，五味子10份，茯苓20份，灵芝20份。

4.权利要求1-3任一项所述的中药组合物的制备方法，是将各原料药粉碎后加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种制剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，所述的制剂包括胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

6.权利要求1-3任一项所述的中药组合物，在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。