CN102198151B - 猪用黄芪多糖铁原料药及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猪用黄芪多糖铁原料药，其原料药的组分及其重量份数比为：黄芪多糖15-50份；铁盐10-45份，本发明还涉及猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，包括黄芪多糖的提取以及猪用黄芪多糖铁原料药的合成。本发明原料药质量稳定、生产成本较低，能够有效增强机体免疫力，提高仔猪存活率、使其营养成分更加均衡全面，制作工艺简单。
Description
技术领域
本发明属于猪用补铁剂领域，尤其是一种猪用黄芪多糖铁原料药及其制备方法。
背景技术
缺铁性贫血是新生2-4周龄仔猪的一种常见疾病。新生仔猪体内铁的贮量早在3-4日龄即被消耗完，通常需要人工补铁，这是因为新生仔猪生长发育迅速，对铁的需要量急剧增加，在最初数周，新生仔猪体内的铁储存量极少，仅为54mg，而母猪乳中含铁量约为1.3mg/L，每天仅能为每头仔猪提供约1mg铁，因此远远满足不了仔猪对铁的15mg日需量。而且仔猪生长越快，铁贮量消耗的越快，贫血的发病率也就越高。若不及时补铁，会给仔猪带来许多的危害：1.不能形成血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素酶及多种过氧化物酶，从而影响体内营养物质的输送；2.血红蛋白含量低，血液稀薄，携氧供氧能力低，造成机体器官衰竭；3.生长受阻，下痢、水肿、白肌病等发病率升高，被毛粗乱，皮肤及粘膜苍白，食欲不振；4生理防卫机能下降，免疫力低下，易发生蓝耳病、圆环病毒病、伪狂犬病等病毒性疾病，也使得大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、葡萄球菌等条件性致病菌的发病率升高，造成巨大的经济损失，严重地制约了我国养猪业的发展。目前应用于临床的仔猪补铁产品主要为硫酸亚铁和右旋糖酐铁等。硫酸亚铁的吸收率较低，补铁效果较差；右旋糖酐铁对仔猪缺铁性贫血的治疗效果相对较好，为提高猪生产水平起到非常重要的作用，但是右旋糖酐铁的合成是一个非常复杂的过程，是初生态的三价铁氢氧化物与微分子葡聚糖分子的络合反应，该络合反应非常不稳定，受反应体系的pH值和FeCl3溶液浓度的影响较大，产品收率和质量均不够理想，加之，右旋糖酐价格较昂贵，导致生产成本较高，而且右旋糖酐铁往往需要深部肌肉注射，造成严重的应激反应，在一定程度上影响了其临床应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种猪用黄芪多糖铁原料药，该原料药质量稳定、生产成本较低，能够有效增强机体免疫力，提高仔猪存活率、使其营养成分更加均衡全面，制作工艺简单。
本发明的另一个目的在于提供一种猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种猪用黄芪多糖铁原料药，其原料药的组分及其重量份数比为：黄芪多糖15-50份；铁盐10-45份。
而且，所述的铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种。
一种猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)黄芪多糖的提取：取黄芪用重量比1∶1.5～3的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为35％～70％乙醇溶液，然后用微波处理3次，20～60s/次，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5～10加入浓度为35％～70％乙醇溶液，调pH值至3～5后，再用超声仪提取两次，15～40min/次，温度控制为20℃，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置8～15h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)猪用黄芪多糖铁原料药的制备：
按照重量配比称取铁盐，并将铁盐配制成浓度为0.05mol/L～8mol/L的铁盐溶液备用；
按重量配比称取黄芪多糖用蒸馏水溶解，得到溶液A，加入溶液A重量1/5的柠檬酸三钠，继续搅拌溶解，得到溶液B，然后加入溶液B重量1～3倍的浓度为10％～25％的碱液，搅拌均匀，缓慢滴加完0.05mol/L～8mol/L的铁盐溶液后得到混合液C，将混合液C的pH值调至9～13后，在70～80℃热水浴中搅拌1.5～3h，再在40～60℃温度下进行离心处理3～10min，转速为4000r/min；取离心后的上层深红棕色液体，加入乙醇，至溶液红棕色沉淀物质沉淀完全，过滤后，将沉淀物微波处理2～5min后，静置过夜，对静置过夜后的沉淀物进行离心3～5min，转速为4000r/min，真空干燥后，得红褐色粉末，将红褐色粉末溶于水，再用浓度为75％～95％乙醇沉淀，至无Fe3+检出，在50～70℃条件下烘干，即得到猪用黄芪多糖铁原料药成品。
而且，所述的微波处理采用的参数为微波功率340～510W，压力0.10MPa，恒压时间1～5min。
而且，所述的超声仪的频率为20Hz～50Hz。
而且，所述的铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种。
而且，所述的碱液为氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化铵溶液或者碳酸钾溶液的其中一种。
本发明的优点及有益效果是：
1.本猪用黄芪多糖铁原料药采用成本十分低廉的黄芪多糖为原料，生产中稳定性较好，水溶性较高，能以分子形式吸收，毒副作用小于传统的右旋糖酐铁，是符合国际标准的理想补铁剂。
2.本猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法能够提高原料药中铁离子的含量，增强铁离子在原料药中的稳定性，反应过程易控制、产品质量好、收率高，生产成本较低。
3.本发明原料药质量稳定、生产成本较低，能够有效增强机体免疫力，提高仔猪存活率、使其营养成分更加均衡全面，制作工艺简单。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明中的黄芪以及铁盐均可以在市场上购买得到。
实施例1
一种猪用黄芪多糖铁原料药，其原料药的组分及其重量分别为：黄芪多糖15Kg；铁盐10Kg，该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例铁盐采用三氯化铁。
一种猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)黄芪多糖的提取：取黄芪用重量比1∶1.5的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为35％乙醇溶液，然后用微波处理3次，20s/次，微波处理采用的参数为微波功率340W，压力0.10MPa，恒压时间1min，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5加入浓度为35％乙醇溶液，调pH值至3后，再用超声仪提取两次，15min/次，温度控制为20℃，超声仪的频率为20Hz，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置8h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)猪用黄芪多糖铁原料药的制备：
按照重量配比称取铁盐，并将铁盐配制成浓度为0.05mol/L的铁盐溶液备用；该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例采用三氯化铁；
按重量配比称取黄芪多糖用蒸馏水溶解，得到溶液A，加入溶液A重量1/5的柠檬酸三钠，继续搅拌溶解，得到溶液B，然后加入溶液B重量1倍的浓度为10％的碱液，该碱液为氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化铵溶液或者碳酸钾溶液的其中一种，本实施例采用氢氧化钠溶液，搅拌均匀，缓慢滴加完0.05mol/L的铁盐溶液后得到混合液C，将混合液C的pH值调至9后，在70℃热水浴中搅拌1.5h，再在40℃温度下进行离心处理3min，转速为4000r/min；取离心后的上层深红棕色液体，加入乙醇，至溶液红棕色沉淀物质沉淀完全，过滤后，将沉淀物微波处理2min后，静置过夜，微波处理采用的参数为微波功率340W，压力0.10MPa，恒压时间1min，对静置过夜后的沉淀物进行离心3min，转速为4000r/min，真空干燥后，得红褐色粉末，将红褐色粉末溶于水，再用浓度为75％乙醇沉淀，至无Fe3+检出，在50℃条件下烘干，即得到猪用黄芪多糖铁原料药成品。
实施例2
一种猪用黄芪多糖铁原料药，其原料药的组分及其重量分别为：黄芪多糖50Kg；铁盐45Kg，该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例铁盐采用硝酸铁。
一种猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)黄芪多糖的提取：取黄芪用重量比1∶3的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为70％乙醇溶液，然后用微波处理3次，60s/次，微波处理采用的参数为微波功率510W，压力0.10MPa，恒压时间5min，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5加入浓度为70％乙醇溶液，调pH值至5后，再用超声仪提取两次，40min/次，温度控制为20℃，超声仪的频率为20Hz，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置15h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)猪用黄芪多糖铁原料药的制备：
按照重量配比称取铁盐，并将铁盐配制成浓度为8mol/L的铁盐溶液备用；该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例采用硝酸铁；
按重量配比称取黄芪多糖用蒸馏水溶解，得到溶液A，加入溶液A重量1/5的柠檬酸三钠，继续搅拌溶解，得到溶液B，然后加入溶液B重量3倍的浓度为25％的碱液，该碱液为氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化铵溶液或者碳酸钾溶液的其中一种，本实施例采用碳酸钠溶液，搅拌均匀，缓慢滴加完8mol/L的铁盐溶液后得到混合液C，将混合液C的pH值调至13后，在80℃热水浴中搅拌3h，再在60℃温度下进行离心处理10min，转速为4000r/min；取离心后的上层深红棕色液体，加入乙醇，至溶液红棕色沉淀物质沉淀完全，过滤后，将沉淀物微波处理5min后，静置过夜，微波处理采用的参数为微波功率510W，压力0.10MPa，恒压时间5min，对静置过夜后的沉淀物进行离心5min，转速为4000r/min，真空干燥后，得红褐色粉末，将红褐色粉末溶于水，再用浓度为95％乙醇沉淀，至无Fe3+检出，在70℃条件下烘干，即得到猪用黄芪多糖铁原料药成品。
实施例3
一种猪用黄芪多糖铁原料药，其原料药的组分及其重量分别为：黄芪多糖32Kg；铁盐22Kg，该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例铁盐采用柠檬酸铁。
一种猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)黄芪多糖的提取：取黄芪用重量比1∶2的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为50％乙醇溶液，然后用微波处理3次，40s/次，微波处理采用的参数为微波功率420W，压力0.10MPa，恒压时间3min，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5加入浓度为50％乙醇溶液，调pH值至3后，再用超声仪提取两次，25min/次，温度控制为20℃，超声仪的频率为35Hz，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置12h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)猪用黄芪多糖铁原料药的制备：
按照重量配比称取铁盐，并将铁盐配制成浓度为3mol/L的铁盐溶液备用；该铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种，本实施例采用柠檬酸铁；
按重量配比称取黄芪多糖用蒸馏水溶解，得到溶液A，加入溶液A重量1/5的柠檬酸三钠，继续搅拌溶解，得到溶液B，然后加入溶液B重量2倍的浓度为18％的碱液，该碱液为氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化铵溶液或者碳酸钾溶液的其中一种，本实施例采用碳酸钾溶液，搅拌均匀，缓慢滴加完3mol/L的铁盐溶液后得到混合液C，将混合液C的pH值调至11后，在75℃热水浴中搅拌2h，再在50℃温度下进行离心处理7min，转速为4000r/min；取离心后的上层深红棕色液体，加入乙醇，至溶液红棕色沉淀物质沉淀完全，过滤后，将沉淀物微波处理3min后，静置过夜，微波处理采用的参数为微波功率400W，压力0.10MPa，恒压时间3min，对静置过夜后的沉淀物进行离心4min，转速为4000r/min，真空干燥后，得红褐色粉末，将红褐色粉末溶于水，再用浓度为85％乙醇沉淀，至无Fe3+检出，在60℃条件下烘干，即得到猪用黄芪多糖铁原料药成品。
本发明猪用黄芪多糖铁原料药的相对分子质量检测：利用凝胶渗透色谱法(gel permeation chromatography，GPC)检测，用7个标准相对分子质量右旋糖酐作出标准曲线，重均相对分子质量从4,000～430,000，色谱分析流动相为纯水，样品质量浓度1g/L，流速0.16mL/min，检测器温度40℃，凝胶色谱柱温度60℃。根据美国药典要求，黄芪多糖铁的表观分子量要求为34,000Da～60,000Da，重均分子量与数均分子量的比值小于1.7。
本发明猪用黄芪多糖铁原料药中铁元素含量测定采用ICP方法：仪器为美国Perkin～Elmer公司产Optima 3300DV，也可以按照2005年兽药典的检测方法，采用氧化～还原滴定法通过比较，这两种方法检测，铁元素含量为5.0-6.0％铁元素含量基本一致。同样，氯离子检测方法也可按药典标准，检测均得到标准要求。
下面通过具体实验说明使用本发明的优点：
通过把本发明制成注射液进行实验说明，把本发明猪用黄芪多糖铁原料药加入到注射用水中配制成含铁元素350mg/mL的溶液，加入40％的碱液调PH值至11，对碱化后的溶液进行加热，加热温度控制在50～80℃，然后向加热后的溶液中加入3‰活性炭，吸附不溶性颗粒，至无肉眼可见的不溶性颗粒，再搅拌20～60min后过滤，收集滤液并对滤液进行灭菌，得到黄芪多糖铁注射液成品。
1临床应用试验
将出生2～3天后的仔猪，随机每窝仔猪分为三组。一组为本发明试验组，二组为右旋糖酐铁实验组，三组为空白对照组，其中本发明组每头注射黄芪多糖铁注射液1ml，右旋糖酐铁实验组和对照组分别注射等量的右旋糖酐铁注射液和生理盐水。各组均于试验后两周采血测定其血液血红蛋白含量(g/dl)；各组仔猪均于试验当天和21日龄断奶时分别称重，并统计其增重和存活情况。其结果如下表所示：
表1仔猪注射黄芪多糖铁注射液后血液血红蛋白含量表：
从上表可以看出，注射本发明所研制的黄芪多糖铁注射液与右旋糖酐铁组、生理盐水对照组进行比较，血红蛋白分别增加了80.9％和60.8％。
表2 仔猪注射黄芪多糖铁注射液后增重情况表
从表2可知，仔猪注射黄芪多糖铁注射液后日增重均高于右旋糖酐铁组合对照组(生理盐水组)，其中比生理盐水组显著增加了43.6％。
表3 仔猪注射黄芪多糖铁注射液后存活情况表
从表3可知，注射黄芪多糖铁注射液的仔猪比注射生理盐水的仔猪，其存活率增加了5.6％，比右旋糖酐铁注射液组仔猪增加了4.3％。
2动物毒性试验
本发明黄芪多糖铁铁注射液为透明深褐色胶体溶液，用小白鼠肌肉注射黄芪多糖铁注射液，采用改良Karber法测定半数致死量(LD50)，结果为800.58mg/kg，按照急性毒性分级，属于实际无毒级。也证明了猪用黄芪多糖铁原料药为无毒级。
Claims (5)
1.一种猪用黄芪多糖铁原料药，其特征在于：该原料药的组分及其重量份数比为：黄芪多糖15-50份；铁盐10-45份。
(1)该猪用黄芪多糖铁原料药中组分之一黄芪多糖的提取方法为：取黄芪用重量比1∶1.5～3的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为35％～70％乙醇溶液，然后用微波处理3次，20～60s/次，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5～10加入浓度为35％～70％乙醇溶液，调pH值至3～5后，再用超声仪提取两次，15～40min/次，温度控制为20℃，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置8～15h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)该猪用黄芪多糖铁原料药中所述的铁盐为三氯化铁、硝酸铁、柠檬酸铁、醋酸铁、高氯酸铁，柠檬酸铁铵、硝酸铁铵或者甘油磷酸铁的其中一种。
2.一种如权利要求1所述的猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其特征在于：该制备方法的步骤为：
(1)黄芪多糖的提取：取黄芪用重量比1∶1.5～3的蒸馏水对黄芪进行预浸过夜得到预浸液，向预浸液中加入等重量的浓度为35％～70％乙醇溶液，然后用微波处理3次，20～60s/次，得到微波辅助提取液；向微波辅助提取液中按重量比1∶5～10加入浓度为35％～70％乙醇溶液，调pH值至3～5后，再用超声仪提取两次，15～40min/次，温度控制为20℃，得到超声仪提取液；将超声仪提取液过滤后，滤液备用，滤过的残渣用蒸馏水反复洗涤至无色，洗液与滤液合并，浓缩得到浓缩液，浓缩液过滤后采用大孔吸附树脂柱分离，得分离液；并用蒸馏水洗脱树脂柱至洗脱液无色，收集洗脱液，合并分离液和洗脱液进行浓缩，然后加3倍量浓度为75％乙醇溶液进行醇沉，室温静置8～15h后抽滤，真空干燥，得黄芪多糖；
(2)猪用黄芪多糖铁原料药的制备：
按照重量配比称取铁盐，并将铁盐配制成浓度为0.05mol/L～8mol/L的铁盐溶液备用；
按重量配比称取黄芪多糖用蒸馏水溶解，得到溶液A，加入溶液A重量1/5的柠檬酸三钠，继续搅拌溶解，得到溶液B，然后加入溶液B重量1～3倍的浓度为10％～25％的碱液，搅拌均匀，缓慢滴加完0.05mol/L～8mol/L的铁盐溶液后得到混合液C，将混合液C的pH值调至9～13后，在70～80℃热水浴中搅拌1.5～3h，再在40～60℃温度下进行离心处理3～10min，转速为4000r/min；取离心后的上层深红棕色液体，加入乙醇，至溶液红棕色沉淀物质沉淀完全，过滤后，将沉淀物微波处理2～5min后，静置过夜，对静置过夜后的沉淀物进行离心3～5min，转速为4000r/min，真空干燥后，得红褐色粉末，将红褐色粉末溶于水，再用浓度为75％～95％乙醇沉淀，至无Fe3+检出，在50～70℃条件下烘干，即得到猪用黄芪多糖铁原料药成品。
3.根据权利要求2所述的猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其特征在于：所述的微波处理采用的参数为微波功率340～510W，压力0.10MPa，恒压时间1～5min。
4.根据权利要求2所述的猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其特征在于：所述的超声仪的频率为20Hz～50Hz。
5.根据权利要求2所述的猪用黄芪多糖铁原料药的制备方法，其特征在于：所述的碱液为氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液、氢氧化铵溶液或者碳酸钾溶液的其中一种。
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