CN102188564A - 具有抗癌活性的独角莲超临界提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物及其提取方法,其提取方法具有如下特征,以干燥的独角莲块茎粉末为原料采用超临界流体萃取技术,通过调节CO2流量,萃取斧和分离斧的温度和压力等参数来提取其中的活性成分。提取物经气质分析表明其中含40.22%的β-谷甾醇和18.45%的菜油甾醇。MTT试验结果表明采用该方法得到的独角莲提取物对结肠癌HCT-116、卵巢癌HO-8910、胃癌SGC-7901、肝癌BEL-7402和肝癌SMMC-7721等癌细胞株具有明显的抑瘤活性。该提取方法具有提取选择性高、提取效率高、提取速度快、提取物无污染、操作简便、环境友好等优点。本发明中所公开的提取方法不仅可用于提取独角莲中的抗癌活性成分,也可以作为提取甾醇类物质的有效手段。
Description
所属技术领域
本发明涉及一种具有抗癌活性的独角莲块茎超临界流体提取物及其制备方法,该提取方法可用于独角莲块茎中抗癌活性成分的提取以及甾醇类物质的提取,取物的主要成分是β-谷甾醇和菜油甾醇,尤其是提取物对癌细胞具有高度的抑制活性,能够用于潜在抗癌药物开发,属于医药领域。
背景技术
二十世纪六十年代兴起的超临界流体萃取技术现已被广泛应用于食品、药品、香料、石油、化工等领域,与传统的中药有效成分的提取方法(水蒸气蒸馏法、减压蒸馏法、溶剂萃取法等)相比,超临界流体萃取具有分离选择性好、提取效率高、产品纯度好且没有有机溶剂残留、完整保留产品生物活性、工艺流程简单、操作温度低、能耗低、环境友好等优点,适合热不稳定、易氧化的挥发性成分和脂溶性、分子量小的物质的提取分离。在超临界流体中加入适宜的夹带剂或改良剂,可增加压力,改善流体的溶解性质,可对极性较大、分子量较大的非挥发性成分进行提取分离。这些夹带剂或改良剂可以是甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、水等。
独角莲是天南星科犁头尖属植物,中医将其干燥块茎(禹白附)入药,具有逐风寒、祛风痰、定惊慉、通经络、镇痉止痛、解毒散结等功效,主要用于治疗脑血管疾病(脑溢血、脑梗塞、三叉神经痛)、结核病、小儿麻痹后遗症、慢性支气管炎、白癜风、面神经麻痹、肢体麻木、舞蹈症、中风痰壅、口眼歪斜、语言涩謇、半身不遂、惊风癫痫、破伤风、偏头痛、喉痹咽痛、风湿痹痛、瘰疬痰核、阴疽肿毒、恶疮、毒蛇咬伤、跌打损伤等症。目前,多项研究结果表明独角莲具有抑制肿瘤活性,(独角莲超临界萃取物的GC-MS分析及体外抑瘤活性[J].植物研究)但是如何从中高效快速提取抗癌活性成分一直没有定论,有报道称独角莲挥发性成分中含β-谷甾醇和菜油甾醇等抗癌活性物质,(独角莲块茎挥发油化学成分的研究[J].吉林农业大学学报,1996,18(2):29-31.)。本发明采用超临界流体技术从独角莲中提取出大量的抗癌活性物质,解决了常规提取方法的选择性低、提取速度慢、提取效率低、提取物易污染等难题,并且采用本发明的独角莲提取物含大量β谷甾醇和菜油甾醇,具有抗癌活性强的特点。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效,快速,低耗能的独角莲活性成分的提取方法和用途,该提取物中高含量的β-谷甾醇和菜油甾醇,可用于抑制肿瘤生长和发展为临床治疗癌症的药物。
该独角莲超临界提取物,其特征在于,可用如下方法制备:
1新鲜的独角莲块茎经去皮、洗净、切片、阴凉处自然风干(水分小于0.5%),粉碎后过40目筛备用。称取独角莲块茎干粉180g装于1000mL锥形瓶中,加入120mL 80%乙醇溶液预浸三小时。
2将浸好的独角莲块茎粉装入萃取斧,启动萃取、分离温控仪表并设置温度及其他参数(包括CO2平均流量15kg·h-1)。启动制冷装置,使之保持在3-5℃范围内,等温度达到设定值时打入100mL 80%乙醇溶液,之后适当调节各阀门使萃取釜内压力达到要求,待萃取釜内的温度、压力都达到设定值(萃取压力/温度30MPa/45℃,分离压力/温度5MPa/50℃)时,打开阀门使流体进入分离釜中,同时开始记时,每隔50min打一次夹带剂(约100mL 80%乙醇溶液),打入第四次夹带剂后再萃取90min基本上萃取完全。总萃取时间4h。
3萃取后从分离釜获得的萃取液经旋转蒸发仪浓缩后得到绿色油状物。
4用乙醚充分溶解提取物过滤后减压浓缩得到墨绿色油状物即为本发明具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,置于-20℃冰箱中贮存。
本发明独角莲超临界提取物可加入用于制备不同剂型的常规辅料,制备成不同剂型,这些剂型可以是注射剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软膏剂、栓剂、纳米及靶向制剂。
采用本发明的提取物中含高质量比的β-谷甾醇和菜油甾醇,相比常规的提取方法,本发明具有提取物抑瘤活性好、提取选择性高、提取效率高、提取速度快、提取物无污染、操作简便、环境友好等优点。
具体实施方式
实施例1具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物的制备
将180g独角莲块茎干燥粉末置于80%乙醇浸渍3h后,加入到萃取斧中,启动萃取、分离温控仪表并设置温度及其他参数(包括CO2平均流量15kg·h-1)。启动制冷装置,使之保持在3-5℃范围内,等温度达到设定值时打入100mL 80%乙醇溶液,之后适当调节各阀门使萃取釜内压力达到要求,待萃取釜内的温度、压力都达到设定值范围(萃取压力/温度30MPa/45℃,分离压力/温度5MPa/50℃)时,打开阀门使流体进入分离釜中,同时开始记时,每隔50min打一次夹带剂(约100mL 80%乙醇溶液),打入第四次夹带剂后再萃取90min基本上萃取完全。总萃取时间4h,提取物减压浓缩后,得到墨绿色油状物。
实施例2独角莲超临界提取物的气象色谱与质谱联用分析
色谱条件:DB-17MS毛细管柱(30m×0.25mm,膜厚0.25μm),载气为氦气,汽化室温度270℃,柱流量1mL·min-1,不分流进样,进样量1μl。程序升温:柱温40℃保持4min,以10℃·min-1速率升温至165℃,保持15min,再以5℃·min-1速率升温至200℃,保持2min,最后以10℃·min-1速率升温至250℃,保持10min。气相色谱与质谱联用分析结果见表1。
表1本发明提取物的气象色谱与质谱联用分析结果
本发明提取物经气象色谱与质谱联用分析,β-谷甾醇和菜油甾醇为主要成分,其含量分别为40.22%和18.45%还含有棕榈酸、9,12-十八碳二烯酸等,其含量分别为9.52%和8.15%。其中β-谷甾醇和菜油甾醇的含量均高于常规提取方法的14.3%和0%。
实施例3独角莲超临界提取物对癌细胞的抑制活性
称取适量不同方法的独角莲萃取物分别用DMSO溶解配制成母液,然后用2%维持液稀释至浓度分别为10mg·mL-1、2mg·mL-1、0.4mg·mL-1、0.08mg·mL-1、0.016mg·mL-1、0.0032mg·mL-1、0.0006mg·mL-1、0.0001mg·mL-1。取对数生长期的结肠癌HCT-116、卵巢癌HO-8910、胃癌SGC-7901、肝癌BEL-7402和肝癌SMMC-7721五种人源癌细胞,传代后隔天观察,待细胞生长至整个培养瓶的80%之后,用胰酶消化,以每孔100μL细胞悬液接种于96孔板。在37℃,5%CO2,RPMI1640培养基中培养24h后用盐水冲洗96孔板,每孔100μL,均匀摇晃后吸出。再按照药物浓度由高到低的顺序依次加入,每孔100μL,对每个细胞株,每个浓度均为5个复孔。继续培养72小时后,每孔加20μL MTT溶液(5mg·mL-1),再培养4h后弃去上清液,每孔加入100μL DMSO,在微量振荡器上振荡10min后,利用酶标仪测每孔溶液的吸光度值(OD值),检测波长为492nm,校正波长为630nm。MTT结果见表2。
表2本发明提取物抑制肿瘤细胞生长的MTT结果
癌细胞株 | HCT-116 | HO-8910 | SGC-7901 | BEL-7402 | SMMC-7721 |
IC50μg.mL-1 | 33704 | 345.93 | 37355 | 218.28 | 130.09 |
实验结果表明独角莲超临界流体提取物对以上所述的癌细胞株具有明显的抑制活性。其半数抑制率分别为337.04μg.mL-1、345.93μg.mL-1、373.55μg.mL-1、218.28μg.mL-1、130.09μg.mL-1。
Claims (9)
1.具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物及其制备方法,其特征在于,以独角莲为原料,用超临界流体萃取技术提取,超临界参数为:CO2为萃取溶剂,CO2流量为10-20L\h;萃取斧压力范围30-45MP,温度40-50℃;分离斧压力5-15MP;温度40-50℃,每50min打入100ml80%乙醇作为夹带剂,总提取时间4h,由分离斧中得到墨绿色油状提取物。提取物经GC-MS分析,β谷甾醇和菜油甾醇为主要成分,提取物对肿瘤细胞具有良好的抑制作用。
2.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物的制备方法,其特征在于,该提取方法可用于独角莲抗癌活性成分的提取。
3.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物的制备方法,其特征在于,该提取法可用于甾醇类物质的提取。
4.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体提取物的制备方法,其特征在于,夹带剂可以是乙酸乙酯、乙醇、丙酮、甲醇。
5.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,其特征在于,提取物对肿瘤细胞有明显的抑制作用。
6.根据权利要求5所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,其特征在于,肿瘤细胞包括结肠癌HCT-116、卵巢癌HO-8910、胃癌SGC-7901、肝癌BEL-7402和肝癌SMMC-7721等。
7.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,其特征在于,提取物可以与药剂学中各种辅料混合制备成各种剂型。
8.根据权利要求7所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,其特征在于,剂型可以是注射剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软膏剂、栓剂、纳米及靶向制剂。
9.根据权利要求1所述的具有抗癌活性的独角莲超临界流体萃取物,其特征在于,提取物主要成分是β-谷甾醇和菜油甾醇。
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