CN102186476A - 色氨酸羟化酶抑制剂及其用法 - Google Patents

色氨酸羟化酶抑制剂及其用法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了治疗由5-羟色胺介导的疾病和病症的化合物、组合物和方法。

Description

色氨酸羟化酶抑制剂及其用法
本申请要求2008年10月3日提交的美国临时申请no.61/102,391的优先权，其申请作为参考全文被并入本文。
技术领域
本发明涉及多环化合物，包含它们的组合物，以及它们在治疗、预防和处置疾病和病症中的应用。
背景技术
神经递质5-羟色胺[5-HT]参与情绪控制的多中枢神经小面并参与睡眠、焦虑症、酒精中毒、药物滥用、食物摄入和性行为的调节。在外周组织中，5-羟色胺据报道牵涉调节血管紧张度、肠运动性、初期止血和由细胞介导的免疫应答。Walther，D.J.，等人，Science 299：76(2003)。
酶色氨酸羟化酶(TPH)催化5-羟色胺生物合成的速率限制步骤。已经报道了TPH的两种同工型：TPH1，其在外周表达，主要在胃肠道(GI)中表达；和TPH2，其在5-羟色胺能神经元中表达。出处同上。同工型TPH1由tph1基因编码；TPH2由tph2基因编码。出处同上。
已经报道了tph1基因遗传缺陷的小鼠(“敲除小鼠”)。在一个例子中，所述小鼠据报道在典型5-羟色胺能脑区域中表达正常量的5-羟色胺，但是在外周中主要缺乏5-羟色胺。出处同上。在另一个例子中，敲除小鼠表现出异常心搏动，这归因于外周5-羟色胺缺乏。
Figure BPA00001342860700011
F.，等人，PNAS 100(23)：13525-13530(2003)。
已经公开了抑制TPH的化合物及其用法。例如，参见，美国专利申请11/638,677和11/954,000。因为5-羟色胺参与如此众多的生物化学过程，仍然存在用于治疗由外周5-羟色胺介导的疾病和病症的化合物和方法。
发明内容
本发明部分地涉及下式的化合物：
Figure BPA00001342860700021
其取代基的定义如本文所述。本发明还涵盖下式的化合物：
Figure BPA00001342860700022
其取代基的定义如本文所述。本发明还涵盖下式的化合物：
Figure BPA00001342860700023
其取代基的定义如本文所述。
本发明的具体化合物(即，本文所述的化合物)抑制TPH(例如，TPH1)活性。
本发明还涉及药物组合物，以及涉及用于治疗、预防和处置多种疾病和病症的方法。
发明详述
本发明基于发现了这样的化合物，即该化合物抑制TPH(例如，TPH1)，并且该化合物可用于治疗、处置或预防由外周5-羟色胺介导的疾病和病症。
定义
除非另有说明，术语“烯基”是指具有2-20(例如2-10或2-6)个碳原子并且包括至少一个碳-碳双键的直链、支链和/或环状的烃。代表性的烯基部分包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基和3-癸烯基。
除非另有说明，术语“烃基”是指具有1-20(例如，1-10或1-4)个碳原子的直链、支链和/或环状(“环烃基”)的烃。具有1-4个碳的烃基部分被称为“低级烃基”。烃基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烃基和十二烃基。环烃基部分可以是单环的或多环的，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和金刚烃基。烃基部分的另外的实例具有直链、支链和/或环状的部分(例如，1-乙基-4-甲基-环己基)。术语“烃基”包括饱和烃以及烯基和炔基部分。
除非另有说明，术语“烃氧基”是指-O-烃基基团。烃氧基基团的实例包括但不限于-OCH3、-OCH2CH3、-O(CH2)2CH3、-O(CH2)3CH3、-O(CH2)4CH3、-O(环戊基)和-O(CH2)5CH3。
除非另有说明，术语“烃基芳基”或“烃基-芳基”是指结合于芳基部分的烃基部分。
除非另有说明，术语“烃基杂芳基”或“烃基-杂芳基”是指结合于杂芳基部分的烃基部分。
除非另有说明，术语“烃基杂环”或“烃基-杂环”是指结合于杂环部分的烃基部分。
除非另有说明，术语“炔基”是指具有2-20(例如2-20或2-6)个碳原子并且包括至少一个碳-碳三键的直链、支链或环状的烃。代表性的炔基部分包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基和9-癸炔基。
除非另有说明，术语“芳基”是指由碳原子和氢原子组成的芳香环或芳香族的或部分芳香族的环系统。芳基部分可以包括结合或稠合在一起的多个环。芳基部分的实例包括但不限于蒽基、薁基、联苯基、芴基、茚满、茚基、萘基、菲基、苯基、1，2，3，4-四氢化萘和甲苯基。除非另有说明，术语“芳基烃基”或“芳基-烃基”是指结合于烃基部分的芳基部分。
除非另有说明，否则术语“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯”、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的脲基”和“可生物水解的磷酸酯”分别是指化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、脲基或磷酸酯，它们1)不妨碍化合物的生物活性，但是可赋予该化合物以有利的体内性质，诸如摄取、作用的持续时间或作用的开始；或者2)是生物非活性的但是在体内被转化为生物活性化合物。可生物水解的酯的例子包括低级烃基酯，烃氧基酰基氧基酯，烃基酰基氨基烃基酯和胆碱酯。可生物水解的酰胺的例子包括低级烃基酰胺，α-氨基酸酰胺，烃氧基酰基酰胺和烃基氨基烃基-羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的例子包括低级烃基胺，被取代的乙二胺，氨基酸，羟基烃基胺，杂环和杂芳香胺和聚醚胺。
除非另有说明，术语“由外周5-羟色胺介导的疾病或病症”和“由外周5-羟色胺介导的疾病和病症”是指具有一个或多个症状的疾病和/或病症，其严重性受外周5-羟色胺水平影响。
除非另有说明，术语“卤素”和“卤代”包括氟、氯、溴、和碘。
除非另有说明，术语“杂烃基”是指如下的烃基部分(例如，直链、支链或环状的)，其中所述烃基部分的至少一个碳原子已被替换为杂原子(例如，N、O或S)。
除非另有说明，术语“杂芳基”是指如下的芳基部分，其中所述芳基部分的至少一个碳原子已被替换为杂原子(例如，N、O或S)。实例包括但不限于吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并异噻唑基、苯并异唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并
Figure BPA00001342860700052
唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异噻唑基、异唑基、
Figure BPA00001342860700054
二唑基、
Figure BPA00001342860700055
唑基、2，3-二氮杂萘基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基(pyrimidinyl)、嘧啶基(pyrimidyl)、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基、和三嗪基。
除非另有说明，术语“杂芳基烃基”或“杂芳基-烃基”是指结合于烃基部分的杂芳基部分。
除非另有说明，术语“杂环”是指由碳、氢和至少一个杂原子(例如，N、O或S)组成的芳香族的、部分芳香族的或非芳香族的单环或多环的环或环状系统。杂环可以包括稠合或结合在一起的多个(即，两个或更多个)环。杂环包括杂芳基。特定的杂环是含1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-13元杂环。其它杂环是含1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂环。杂环的实例包括但不限于苯并[1，3]二氧杂环戊基、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂芑基、1，2-二氮杂萘基、呋喃基、乙内酰脲基(hydantoinyl)、吗啉基、氧杂环丁基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基和戊内酰胺基。
除非另有说明，术语“杂环基烃基”或“杂环-烃基”是指结合于烃基部分的杂环部分。
除非另有说明，术语“杂环烃基”是指非芳香族的杂环。
除非另有说明，术语“杂环烃基烃基”或“杂环烃基-烃基”是指结合于烃基部分的杂环烃基部分。
除非另有说明，术语“处置”涵盖了在已经遭受详细说明的疾病或病症的患者中预防所述疾病或病症的复发，和/或延长已遭受所述疾病或病症的患者保持症状缓解的时间。所述术语涵盖了调节所述疾病或病症的阈值、发展和/或持续时间，或者改变患者对所述疾病或病症的应答的方式。
除非另有说明，术语“药学可接受的盐”是指从药学可接受的无毒的酸或碱制备的盐，所述药学可接受的无毒的酸或碱包括无机的酸和碱以及有机的酸和碱。合适的药学可接受的碱加成盐包括但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制得的金属盐，或由赖氨酸、N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制得的有机盐。合适的无毒的酸包括但不限于无机酸和有机酸，例如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡醛酸、谷氨酸、羟基乙酸、氢溴酸、盐酸、羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、丁二酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸、和对甲苯磺酸。具体的无毒的酸包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，具体的盐的实例包括盐酸盐和甲磺酸盐。其它是本领域中公知的。参见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th ed.(Mack Publishing，Easton PA：1990)和Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19th ed.(Mack Publishing，Easton PA：1995)。
除非另有说明，术语“预防”涵盖了在患者开始遭受详细说明的疾病或病症之前所发生的作用，该作用抑制或降低了所述或病症的严重程度。换句话说，该术语涵盖了预防性治疗。
除非另有说明，否则术语“前体药物”包括本文所公开的化合物的药学可接受的酯，碳酸酯，硫代碳酸酯，N-酰基衍生物，N-酰基氧基烃基衍生物，叔胺的季铵衍生物，N-曼尼希碱，席夫碱，氨基酸缀合物，磷酸酯，金属盐和磺酸酯。前体药物的例子包括这样的化合物，该化合物包括可生物水解的部分(例如，可生物水解的酰胺、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酯、可生物水解的磷酸酯或可生物水解的酰脲类似物)。本文所公开的化合物的前体药物可由本领域普通技术人员容易地预见和制备。例如，参见，Design of Prodrugs，Bundgaard，A.Ed.，Elseview，1985；Bundgaard，H.，“Design and Application of Prodrugs，”A Textbook of Drug Design and Development，Krosgaard-Larsen和H.Bundgaard，Ed.，1991，Chapter 5，p.113-191；以及Bundgaard，H.，Advanced Drug Delivery Review，1992，8，1-38。
除非另有说明，化合物的“预防有效量”是这样的量，即该量足以预防疾病或病况，或与所述疾病或病况相关的一种或多种症状，或预防其复发。化合物的预防有效量是指单独的或与其它治疗剂组合的治疗剂的量，其在预防所述疾病时提供了预防性益处。术语“预防有效量”能够涵盖这样的量，即该量改善了总体预防或增强了其它预防剂的预防效能。
除非另有说明，否则术语“保护基”当用来指经历化学反应的分子的一部分时，是指在该化学反应条件下是非反应性的化学部分，并且其可被除去以提供在那些条件下具有反应性的部分。保护基是本领域公知的。例如，参见，Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，Protective groups  in Organic Synthesis(3rd ed.，John Wiley&Sons：1999)；Larock，R.C.，Comprehensive Organic Transformations(2nd ed.，John Wiley&Sons：1999)。一些例子包括苄基，二苯基甲基，三苯甲基，Cbz，Boc，Fmoc，甲氧基羰基，乙氧基羰基和邻苯二甲酰亚胺基。
除非另有说明，否则术语化合物的“立体异构体富集的组合物”是指所述化合物及其立体异构体的混合物，该混合物包含的所述化合物多于其立体异构体。例如，(S)-丁-2-醇的立体异构体富集的组合物包括(S)-丁-2-醇和(R)-丁-2-醇以例如约60/40、70/30、80/20、90/10、95/5和98/2的比例存在的混合物。
除非另有说明，否则术语“立体异构体混合物”包括外消旋混合物以及立体异构体富集的混合物(例如，R/S＝30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35和70/30)。
除非另有说明，术语“立体异构纯”是指包括化合物的一种立体异构体并且基本上不含该化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的相对的立体异构体。具有两个立构中心的化合物的立体异构纯组合物实质上不含该化合物的其它的非对映体。典型的立体异构纯化合物包括大于约80重量％的化合物的一种立体异构体和小于约20重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约90重量％的化合物的一种立体异构体和小于约10重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约95重量％的化合物的一种立体异构体和小于约5重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约97重量％的化合物的一种立体异构体和小于约3重量％的该化合物的其它立体异构体，大于约99重量％的化合物的一种立体异构体和小于约1重量％的该化合物的其它立体异构体。
除非另有说明，术语“被取代的”当用于描述化学结构或部分时，是指该结构或部分的这样的衍生物，即其中其一个或多个氢原子被诸如但不限于以下的化学部分或官能团取代：醇，醛，烃氧基，烃酰基氧基，烃氧基羰基，烯基，烃基(例如，甲基，乙基，丙基，叔丁基)，炔基，烃基羰基氧基(-OC(O)烃基)，酰胺(-C(O)NH-烃基-或-烃基NHC(O)烃基)，脒基(-C(NH)NH-烃基或-C(NR)NH2)，胺(伯、仲和叔胺，诸如烃基氨基，芳基氨基，芳基烃基氨基)，芳酰基，芳基，芳基氧基，偶氮基，氨基甲酰基(-NHC(O)O-烃基-或-OC(O)NH-烃基)，甲氨酰(例如，CONH2，以及CONH-烃基，CONH-芳基和CONH-芳基烃基)，羰基，羧基，羧酸，羧酸酐，羧酸酰氯，氰基，酯，环氧化物，醚(例如，甲氧基，乙氧基)，胍基，卤代，卤代烃基(例如，-CCl3，-CF3，-C(CF3)3)，杂烃基，半缩醛，亚胺(伯和仲亚胺)，异氰酸酯，异硫氰酸酯，酮，腈，硝基，氧代，磷酸二酯，硫化物，磺酰胺基(例如，SO2NH2)，砜，磺酰基(包括烃基磺酰基，芳基磺酰基和芳基烃基磺酰基)，亚砜，硫醇(例如，巯基，硫醚)和脲(-NHCONH-烃基-)。具体的取代基是烃基、烃基-氨基甲酰基、烃氧基、氨基、卤代、羟基、硝基、磺酰基(例如，甲磺酰基，甲苯磺酰基)和硫醇。
除非另有说明，化合物的“治疗有效量”是在治疗或处置疾病或病况时足以提供治疗益处的量，或足以用于延迟或最小化与所述疾病或病况相关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量是指单独的或与其它治疗剂组合的治疗剂的量，其在治疗或处置所述疾病或病况时提供了治疗性益处。术语“治疗有效量”能够涵盖这样的量，即该量改善了总体治疗，降低或避免了疾病或病况的症状或病因，或增强了其它治疗剂的治疗效能。
除非另有说明，术语“TPH抑制剂”是指具有的TPH1_IC50或TPH2_IC50小于约10μM的化合物。具体的TPH抑制剂具有的TPH1_IC50小于约5、1、0.5、0.1、或0.05μM。
除非另有说明，术语“TPH1_IC50”是使用下文实例所述的体外抑制试验测定的化合物对TPH1的IC50。
除非另有说明，术语“TPH2_IC50”是使用下文实例所述的体外抑制试验测定的化合物对TPH2的IC50。
除非另有说明，术语“治疗”涵盖了当患者遭受详细说明的疾病或病症时所发生的作用，该作用降低了所述疾病或病症的严重程度、或者延迟或减缓了所述疾病或病症的进展。
除非另有说明，术语“包括”意思是“包括但不限于”。类似地，术语“诸如”意思是“诸如但不限于”。
除非另有说明，在一系列名词前面紧接着的一个或多个形容词被认为是修饰每个名词。例如，措辞“任选地被取代的烃基、芳基或杂芳基”具有与“任选地被取代的烃基、任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基”相同的含义。
需要指出的是，形成更大化合物的一部分的化学部分在本文中可以用其作为单个分子的名称或通常用于其游离基的名称来描述。例如，术语“吡啶”“吡啶基”在用于描述连接于其它化学部分的基团时具有相同的含义。因此，两个短语“XOH，其中X为吡啶基”和“XOH，其中X为吡啶”具有相同的含义，并且包括化合物吡啶-2-醇、吡啶-3-醇和吡啶-4-醇。
需要指出的是，如果一个结构或一个结构的一部分的立体化学没有用例如粗体或虚线表示，则该结构或该结构部分被解释为包括其所有的立体异构体。此外，图中表示的具有不饱和化合价的任何原子都被假定为连接于足够的氢原子，以满足其化合价。另外，用与一个虚线平行的一个实线表示的化学键包括单键和双键(例如，芳香族的)，前提是如果化合价允许的话。
化合物
这些尤其涵盖式I的化合物：
Figure BPA00001342860700111
及其药学可接受的盐，其中：X是C或N；A是任选被取代的芳基或杂芳基；B是任选被取代的芳基或杂芳基；L1是-(CR2)m-；R1是氢或任选被取代的烃基；每个R2独立地是氢或任选被取代的烃基；以及m是0或1。
具体化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700112
其中：每个R3独立地是任选被取代的烃基、杂烃基、芳基、杂环、烃基芳基、杂烃基-芳基、烃基-杂环或杂烃基-杂环；以及n是0-4。
关于上文和本文别处所示的多种式，具体化合物为使得R1是氢。在具体化合物中，R2是氢。在一些化合物中，至少一个R3是烃氧基。在一些化合物中，m是0；在其它化合物中，m是1。
具体化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700121
一些化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700122
其中：X1是N，NR4，O，CHR5或CR5；X2是N，NR4，O，CHR5或CR5；X3是N，NR4，O，CHR5或CR5；每个R4独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环或杂烃基-杂环；并且每个R5独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环或杂烃基-杂环。
关于上文和本文别处所示的多种式，具体化合物为使得X1是O且X2和X3都是CHR5。在一些化合物中，R5是氢。在一些化合物中，X1是N，X2是NR4，且X3是CHR5。在一些化合物中，R4是任选被取代的烃基或杂烃基，且R5是氢或任选被取代的烃基。
具体化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700123
其中：X1是N或CR4；X2是N或CR4；X3是N或CR4；且每个R4独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环，或杂烃基-杂环。
具体化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700131
其中：A是任选被取代的芳基或杂芳基；B是任选被取代的芳基或杂芳基；C是任选被取代的芳基或杂芳基；L1是-(CR2)m-；L2是-(CR2)m-；R1是氢或任选被取代的烃基；每个R2独立地是氢或任选被取代的烃基；且每个m独立地是0或1。一些化合物由下式表示：
Figure BPA00001342860700132
其中：D是任选被取代的芳基或杂芳基；L3是-(CR2)m-或-O-；且每个m独立地是0或1。
本发明的一个实施方案涵盖式II的化合物：
Figure BPA00001342860700133
及其药学可接受的盐，其中：A是任选被取代的芳基或杂芳基；B是任选被取代的芳基或杂芳基；C是任选被取代的芳基或杂芳基；D是任选被取代的芳基或杂芳基；每个R1独立地是卤代、羟基或低级烃基；L1是键或-(CH2)n-；L2是键或-(CH2)n-；m是0-4；且每个n独立地是0-2。
关于上文和本文别处所示的多种式，具体化合物为使得A是任选被取代的咪唑。在一些化合物中，B是任选被取代的苯基。在一些化合物中，C是任选被取代的苯基。在一些化合物中，D是任选被取代的苯基。
具体化合物由下式表示：
其中：每个R2独立地是卤代、羟基或低级烃基；每个R3独立地是卤代、羟基或低级烃基；p是0-5；且q是0-5。
本发明的具体的化合物是TPH抑制剂。
本发明涵盖了立体异构纯化合物和它们的立体异构富集的组合物。立体异构体可被不对称地合成，或者使用标准技术诸如手性柱、手性拆分试剂或酶促拆分进行拆分。例如，参见，Jacques，J.，等人，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.hours.，等人，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill，NY，1962)；和Wilen，S.hours.，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions，p.268(E.L.Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。
化合物的合成
本发明的化合物可根据本领域已知的方法以及本文所述方法制备。例如，式I的化合物能根据以下路线1所示过程制备。
Figure BPA00001342860700151
路线1
在该过程中，醛化合物1与被胺取代的杂环卤化物2在典型的还原胺化条件下反应，得到化合物3。适合的溶剂包括二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇和原甲酸三甲酯。适合的还原剂包括氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和硼氢化钠，以及适合的酸催化剂包括乙酸和三氟乙酸。化合物3然后与所需的硼酸4在Suzuki偶合条件下反应，得到式I的化合物。常规的加热和微波照射二者能被用于偶合反应。用于该反应的适合的催化剂包括Pd(PPh3)2Cl2，PdCl2，Pd(dppf)2，Pd2(dba)3，Pd(OAc)2和Pd-EnCat，Pd(PPh3)4。适合的碱包括Na2CO3，NaHCO3，K2CO3，KOAc和Cs2CO3，KF，以及适合的溶剂包括DMF，DMSO，乙醇，MeOH，1，4-二氧杂环己烷，THF，CH3CN和水。
式I的化合物还可由以下路线2中所示的过程制备，该过程使用与如上所述的反应条件类似的反应条件：
路线2
式II的化合物一般能使用以下路线3中所示的过程制备：
路线3
在该过程中，被取代的哌啶10与羧酸11在酰胺键形成条件下偶合，以提供式II的化合物。典型的偶合试剂包括N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)，N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)/HOBt，聚合物结合的-DCC/HOBt，溴代三吡咯烷基膦鎓六氟磷酸盐(PyBroP)/亨氏碱，PyBOP/亨氏碱，和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)。
使用本领域已知的方法，本文所述的合成方法可被容易地进行修改以获得各种各样的化合物。例如，能使用本领域已知的手性色谱和其它技术来分离最终产品的立体异构体。例如，参见，Jacques，J.，等人，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.hours.，等人，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill，NY，1962)；和Wilen，S.hours.，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions，p.268(E.L.Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。另外，合成可利用手性起始材料，以获得立体异构富集产品或立体异构纯产品。
使用方法
本发明涵盖抑制TPH的方法，该方法包括使TPH接触本发明的化合物(即，本文公开的化合物)。在具体方法中，TPH是TPH1。在其它的方法中，TPH是TPH2。在具体方法中，抑制是体外抑制。在另一个方法中，抑制是体内抑制。
本发明涵盖治疗、预防和处置由外周5-羟色胺介导的疾病和病症的方法，该方法包括对需要这种治疗、预防或处置的患者给用治疗或预防有效量的本发明的化合物。
具体的疾病和病症与胃肠道(GI)有关。具体的疾病和病症的实例包括焦虑症、胆汁酸腹泻、类癌瘤综合征、乳糜泻、克隆病、抑郁症、糖尿病、与甲状腺髓样癌相关的腹泻和/或腹痛、由肠毒素诱导的分泌型腹泻、功能性腹痛、机能性消化不良、特发性便秘、便秘和/或腹泻的医原性起因、特发性腹泻(例如，特发性分泌型腹泻)、肠易激综合征(IBS)、乳糖不耐受、I型和II型MEN、假性结肠梗阻、胰腺霍乱综合征、胰腺不足、嗜铬细胞瘤、硬皮病、躯体症状化病症、旅行者腹泻、溃疡性结肠炎和卓-艾综合征。其它的包括功能性肛门直肠病症、功能性肿胀和功能性胆囊和总胆管括约肌病症。
其它的是心血管和肺的疾病和病症，诸如急性和慢性高血压，慢性阻塞性肺病(COPD)，肺栓塞(例如，支气管收缩和肺栓塞后的肺性高血压症)，肺性高血压症(例如，与门脉高压相关的肺性高血压症)，和放射性肺炎(包括引起或对肺性高血压症有贡献的那些)。
其它的包括腹型偏头痛，成人呼吸窘迫综合征(ARDS)，类癌瘤危象，CREST综合征(钙质沉着，雷诺特现象，食道机能障碍，指端硬化，毛细血管扩张)，吉伯特综合征，恶心，5-羟色胺综合征和蛛网膜下出血。
药物组合物
本发明涵盖了包含两种或更多种化合物的药物组合物。某些药物组合物是适于经口、经粘膜(例如，经鼻，舌下，阴道，经颊或直肠)，非肠道(例如，皮下，静脉内，快速浓注，肌肉内或动脉内)或透皮给药至患者的单一单位剂量形式。剂量形式的例子包括但不限于：片剂；锭剂；胶囊，诸如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；菱形剂；糖锭；分散剂；栓剂；膏剂；泥敷剂(泥罨剂)；糊剂；粉剂；敷料；霜剂；膏药；溶液剂；贴剂；气雾剂(例如，经鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶剂；适于经口或粘膜给药至患者的液体剂量形式，包括混悬剂(例如，水性或非水性的液体混悬剂，水包油型乳液，或油包水型液体乳液)，溶液剂和酏剂；适于非肠道给药至患者的液体剂型；和无菌固体(例如，晶体或无定形固体)，其可被复溶以提供适于非肠道给药至患者的液体剂量形式。
所述制剂将适合给药方式。例如，口服给药要求使用肠溶衣来保护本发明的化合物免受胃肠道降解的破坏。类似地，制剂可含有促进活性成分递送到达作用部位的成分。例如，化合物可在脂质体配方中被给予以便保护它们免受降解酶的破坏，促进在循环系统中的转运，和实现它们的跨细胞膜到达细胞内位点的递送。
类似地，溶解性差的化合物可在增溶剂、乳化剂和表面活性剂的帮助下被并入液体剂型(和适于复溶的剂型)中，诸如但不限于环糊精(例如，α-环糊精，β-环糊精，
Figure BPA00001342860700181
和EncapsinTM(例如，参见，Davis和Brewster，Nat.Rev.Drug Disc.3：1023-1034(2004))，
Figure BPA00001342860700182
Figure BPA00001342860700183
cremafor，以及非水性溶剂，诸如，但不限于乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，二甲亚砜(DMSO)，生物相容的油类(例如，棉子油，花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢化呋喃甲醇，聚乙二醇，山梨糖醇酐的脂肪酸酯，及其混合物(例如，DMSO：玉米油)。
溶解性差的化合物还可使用本领域已知的其它技术被并入混悬液中。例如，化合物的纳米粒子可被悬浮在液体中以提供纳米混悬液(例如，参见，Rabinow，Nature Rev.Drug Disc.3：785-796(2004))。本文所述化合物的纳米粒子形式可通过下列美国专利公开和专利中所述的方法制备：2004-0164194，2004-0195413，2004-0251332，2005-0042177A1，2005-0031691A1，和美国专利5,145,684，5,510,118，5,518,187，5,534,270，5,543,133，5,662,883，5,665,331，5,718,388，5,718,919，5,834,025，5,862,999，6,431,478，6,742,734，6,745,962，各自以全文并入本文作为参考。在一个实施方案中，纳米粒子形式包括平均粒度小于约2000nm、小于约1000nm、或小于约500nm的粒子。
剂量形式的组成、形状和类型一般地随着使用的不同而异。例如，在疾病的快速治疗中所用的剂量形式与在相同疾病的长期治疗中使用的剂量形式相比，前者可包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，非肠道剂量形式与用于治疗相同疾病的口服剂量形式相比，前者包含更少量的一种或多种活性成分。如何对这些差异进行解释对于本领域技术人员而言是显而易见的，例如，参见，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
口服剂量形式
本发明的适于口服给药的药物组合物可作为离散的剂量形式存在，诸如但不限于片剂(例如，咀嚼片)，锭剂，胶囊和液体(例如，加香糖浆剂)。这种剂量形式含有预定量的活性成分，并且可通过本领域技术人员公知的制药方法来制备。一般地，参见Remington′sPharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
典型的口服剂量形式通过将活性成分与符合常规药物配合技术的至少一种赋形剂密切混合来制备。根据给药所需的制剂形式而异，赋形剂可采取多种形式。
因为片剂和胶囊容易给药，它们代表了最有利的口服剂量单位形式。如果希望，片剂可通过标准的水性或非水性技术进行包衣。这种剂量形式可通过常规的制药方法被制得。通常，通过将活性成分与液体载体、细分散的固体载体或二者均匀地和密切地混合，并且如有必要然后使产品成型为所需的形式来制备药物组合物和剂量形式。崩解剂可被并入到固体剂型中以促进快速崩解。润滑剂可被并入以帮助剂量形式(例如，片剂)的制备。
非肠道剂量形式
非肠道可通过各种途径，包括皮下、静脉内(包括快速浓注)、肌肉内和动脉内途径，被给予到患者。因为非肠道剂型的给药通常绕开患者对污染物的天然防御，因此，非肠道剂型特别是无菌的或者能够在对患者给药前经过灭菌。非肠道剂型的例子包括准备用于注射的溶液，准备被溶解或悬浮在药学可接受的注射用媒介物中的干燥产品，准备用于注射的混悬剂，以及乳液。
可用于提供本发明的非肠道剂型的合适的媒介物是本领域技术人员公知的。实施例包括：注射用水USP；含水媒介物诸如氯化钠注射液，林格注射液，葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化钠注射液，和乳酸化林格注射液；与水可混溶的媒介物诸如乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和无水媒介物诸如玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄基酯。
实施例
合成3-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)苯甲腈
向3-氨基-5-溴吡啶(0.64g，3.7mmol)和3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(0.97g，4.4mmol)在二氯乙烷(20mL)中的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.56g，7.35mmol)和乙酸(0.3mL)。将反应混合物在室温下搅拌4小时。将二氯甲烷(100mL)加入反应混合物，其分别用NaOH和盐水洗涤。分离二氯甲烷层并用MgSO4干燥。除去溶剂，得到1.29g的浅黄色固体，作为粗产物，其无需进一步纯化即可用于下一步。
将上述的粗产物(43.2mg，0.115mmol)、3-氰基苯基硼酸(16.8mg，0.115mmol)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(4mg，0.006mmol)、CH3CN(2mL)和水(1.78mL)在小瓶中混合用于微波辅助反应。将碳酸钠(0.22mL，1M水溶液)加入混合物中，在Personal化学微波反应器中在150℃照射5分钟。将粗反应混合物后处理，并通过制备性HPLC纯化，得到9.5mg的3-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)苯甲腈(收率：21％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.27(s，1H)；8.08(m，1H)；7.99(m，2H)；7.86(m，2H)；7.73(t，1H，J＝9Hz)；6.95(m，3H)；4.79(m，1H)，4.44(s，2H)；3.80(s，3H)；1.80(m，6H)；1.61(m，2H).HPLC：柱＝Shim-pack ODS 4.6x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH；以3ml/min的流速经4分钟从20到90％的B％，在220和254nm的UV检测器；RT＝2.74分钟。ESI-MS：(M+H)+400。
合成N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-3，3’-联吡啶-6-胺
在室温下将乙酸(900mg，15mmol)加入到3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(1.1g，5mmol)、5-碘吡啶-2-胺(1.1g，5mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.4g，6.6mmol)在30mL的二氯乙烷的溶液中。将生成的混合物在60℃加热4小时。将反应混合物用水淬灭。将产物用二氯甲烷提取(3×20ml)。分离有机层并用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸干。粗产物用SiO2柱色谱纯化，得到1.2g的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-5-碘吡啶-2-胺。收率：64％。
向微波小瓶(2mL)中加入N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-5-碘吡啶-2-胺(42mg，0.1mmol)和吡啶-3-基硼酸(12mg，0.1mmol)。然后将乙腈(1mL)、水(0.8mL)、碳酸钠水溶液(0.2ml，1M)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到8mg的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-3，3’联吡啶-6-胺。
1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ(ppm)：9.00(s，1H)，8.73(s，1H)，8.17(m，2H)，8.00(m，1H)，7.78(m，1H)，6.86(m，5H)，4.80(m，1H)，4.54(s，2H)，3.83(s，3H)，1.91(m，6H)，1.60(m，2H).HPLC：柱＝YMC PackODS-AQ 3.0x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2.0ml/min经5分钟从0到100％的B％，RT＝2.232分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝376。
合成N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-3，3’联吡啶-5-胺
Figure BPA00001342860700221
在室温下将乙酸(414mg，6.9mmol)加入到3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(508mg，2.3mmol)、5-溴吡啶-3-胺(400mg，2.3mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.65g，3.1mmol)在30ml的DCE中的溶液中。将生成的混合物升温到60℃并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭。将产物用二氯甲烷提取(3×20ml)。分离有机层并用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸干。粗产物用SiO2柱色谱纯化，得到350mg的5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺。收率：41％。
向微波小瓶(2mL)中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(38mg，0.1mmol)和吡啶-3-基硼酸(13mg，0.1mmol)。然后将乙腈(1mL)、水(0.8mL)、碳酸钠水溶液(0.2mL，1M)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到8mg的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-3，3’联吡啶-5-胺。
1H NMR(300MHz，CD3Cl)δ(ppm)：8.88(s，1H)，8.76(s，1H)，8.38(m，2H)，8.18(s，1H)，8.03(m，1H)，7.65(m，1H)，7.28(s，1H)，6.86(m，2H)，4.77(m，1H)，4.42(s，2H)，3.84(s，3H)，1.91(m，6H)，1.60(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2.0ml/min经5分钟从0-100％的B％，RT＝2.358分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝376。
合成N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-6’-吗啉基-3，3’-联吡啶-5-胺
向微波小瓶(2mL)加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(38mg，0.1mmol)和6-吗啉基吡啶-3-基硼酸(20mg，0.1mmol)。然后将乙腈(1mL)、水(0.8mL)、碳酸钠水溶液(0.2mL，1M)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到6mg的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-6’-吗啉基-3，3’-联吡啶-5-胺。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.43(s，1H)，8.26(s，1H)，8.13(d，J＝7.91Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.84(s，1H)，7.24(d，1H)，6.96(m，3H)，4.82(m，1H)，4.45(s，2H)，3.85(m，4H)，3.68(m，4H)，3.31(s，3H)，1.81(m，6H)，1.63(s，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2.0ml/min经5分钟从0-100％的B％，RT＝2.568分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝461。
合成N-(3，4-二异丙氧基苄基)-5(1H-吡咯-3-基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700241
在室温下将乙酸(360mg，6mmol)加入到3，4-二异丙氧基苯甲醛(444mg，2mmol)、5-溴吡啶-3-胺(346mg，2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.84g，4mmol)在30ml DCE中的溶液中。将生成的混合物升温到60℃并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭。将产物用DCM提取(3×20ml)。分离有机层并用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸干。粗产物用SiO2柱色谱纯化，提供250mg的5-溴-N-(3，4-二异丙氧基苄基)吡啶-3-胺。收率：34％。
向微波小瓶(2mL)中加入5-溴-N-(3，4-二异丙氧基苄基)-吡啶-3-胺(38mg，0.1mmol)和1H-吡咯-3-基硼酸(11mg，0.1mmol)。然后将乙腈(1mL)、水(0.8mL)、碳酸钠水溶液(0.2mL，1M)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到6mg的N-(3，4-二异丙氧基苄基)-5(1H-吡咯-3-基)吡啶-3-胺。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：7.96(s，1H)，7.68(s，1H)，7.13(s，1H)，7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.95(s，1H)，6.78(s，1H)，6.38(s，1H)，4.52(m，2H)，4.31(s，2H)，1.31(t，12H).HPLC：柱＝YMC PackODS-AQ 4.6x 33mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝3.0ml/min经5分钟从0-100％的B％，RT＝2.826分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝366。
合成N-(3，4-二异丙氧基苄基)-5-(呋喃-3-基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700251
向微波小瓶(2mL)中加入5-溴-N-(3，4-二异丙氧基-苄基)吡啶-3-胺(38mg，0.1mmol)和1H-吡咯-3-基硼酸(11mg，0.1mmol)。然后将乙腈(1mL)、水(0.8mL)、碳酸钠水溶液(0.2mL，1M)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到5mg的N-(3，4-二异丙氧基苄基)-5-(呋喃-3-基)吡啶-3-胺。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：7.85(s，1H)，7.79(s，1H)，7.70(s，1H)，7.46(s，1H)，7.02(s，1H)，6.90(s，1H)，6.83(s，2H)，6.63(s，1H)，4.40(m，2H)，4.21(s，2H)，1.16(t，12H).HPLC：柱＝YMC PackODS-AQ 3.0x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2.0ml/min经5分钟从0-100％的B％，RT＝3.02分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝367。
合成N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-6-(呋喃-3-基)吡嗪-2-胺
在室温下将乙酸(600mg，10mmol)加入到3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(440mg，2mmol)、6-氯吡嗪-2-胺(258mg，2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.2g，5.6mmol)在30mL二氯乙烷中的溶液中。将生成的混合物升温到60℃并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭。将产物用DCM提取(3×20ml)。分离有机层并用硫酸钠干燥。将有机溶剂蒸干。粗产物用SiO2柱色谱纯化，提供100mg的6-氯-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡嗪-2-胺。收率：15％。
向微波小瓶(2mL)中加入6-氯-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡嗪-2-胺(40mg，0.1mmol)、呋喃-3-基硼酸(11mg，0.1mmol)、乙腈(1mL)、水(0.8mL)和碳酸钠水溶液(0.2mL，1M)。然后将二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mg，0.007mmol)加入到混合物中。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到1.9mg的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-6-(呋喃-3-基)吡嗪-2-胺。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)：7.96(m，3H)，7.80(d，J＝8.06Hz，1H)，7.74(t，J＝7.91Hz 1H)，7.63(t，J＝8.06Hz，1H)，7.41(d，J＝8.3Hz，2H)，7.21(m，1H)，6.69(s，1H)，3.87(m，1H)，3.34(m，1H)，1.17(t，1H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝3.0ml/min经5分钟从0-100％的B％，RT＝3.635分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝366。
合成N-((9-乙基-9H-咔唑-3-基)甲基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-5-基)吡嗪-2-胺
Figure BPA00001342860700271
向(5-溴-吡嗪-2-基)-(9-乙基-9H-咔唑-3-基甲基)-胺(50mg，0.13mmol)在乙腈/水(3∶1)溶液(2.5mL)中的溶液中加入2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼戊烷-2-基)-苯并噻唑(36mg，0.13mmol)、二氯双-(三苯基膦)钯(II)(5mg，0.007mmol)和碳酸钠(28mg，0.26mmol)。将生成的混合物在微波照射下在150℃加热5分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物，其通过制备性HPLC纯化(10-95％MeOH，含0.1％NH4OAc)，得到所需产物(11mg，19％)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.41(t，J＝7.20Hz，3H)2.86(s，3H)4.45(q，J＝7.33Hz，2H)4.79(s，2H)7.16-7.22(m，J＝8.08，7.07，1.26Hz，1H)7.42-7.47(m，J＝8.08，7.07，1.26Hz，1H)7.50(d，J＝8.34Hz，2H)7.54(dd，J＝8.34，1.52Hz，1H)7.93(dd，J＝8.59，1.77Hz，1H)7.97(t，J＝8.08Hz，1H)8.10(dd，J＝4.55，3.28Hz，2H)8.15(s，1H)8.39(d，J＝1.26Hz，1H)8.57(d，J＝1.26Hz，1H).ESI-MS；m/z(M+H)+＝450.0。
合成N-(3-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)苯基)甲磺酰胺
Figure BPA00001342860700281
向微波小瓶中加入5-溴吡啶-3-胺(1.0g，5.78mmol)、3-(甲基磺酰胺基)苯基硼酸(1.49g，6.94mmol)、CH3CN(10mL)、CsF(1.69g，11.56mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.85g，1.16mmol)并将混合物在180℃加热15分钟。将混合物冷却到室温，浓缩并通过急骤硅胶柱色谱分离，使用含1-5％二氯甲烷的甲醇作为溶剂，得到N-(3-(5-氨基吡啶-3-基)苯基)甲磺酰胺(1.14g，76％收率)。
将3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(0.046g，0.212mmol)、N-(3-(5-氨基吡啶-3-基)苯基)甲磺酰胺(0.056g，0.212mmol)、乙酸(0.025g，0.42mmol)、二氯乙烷(5mL)、NaBH(OAc)3(0.089g，0.42mmol)加入到10mL圆底烧瓶中并在25℃搅拌6小时。反应完成后，将混合物浓缩并通过制备性HPLC分离，得到5mg的N-(3-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)苯基)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)：8.10(m，2H)，7.30(m，5H)，6.80(m，3H)，4.70(m，1H)，4.30(s，2H)，3.76(s，3H)，2.97(s，3H)，1.76(m，5H)，1.52(m，3H)HPLC：柱＝YMC Pack ODS-AQ 4.6x 50mm，5um；溶剂A＝0.1％TFA(三氟乙酸)在10％甲醇-90％水；溶剂B＝含0.1％TFA的90％甲醇-10％水。以流速＝3ml/min经4分钟从0到100％的B％.RT＝2.560分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝468。
合成N-{3-[5-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苄基氨基)-吡啶-3-基]-苄基}-甲磺酰胺
Figure BPA00001342860700291
向在氮气保护下的50mL圆底烧瓶中加入在20ml的二氯乙烷中的5-溴吡啶-3-胺(346mg，2mmol)和3-环戊基氧基-4-甲氧基苯甲醛(440mg，2mmol)。将溶液在室温下搅拌10分钟，然后加入乙酸(240mg，228ul，4mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(424mg，2mmol)。将生成的溶液在室温下搅拌过夜。在反应结束后，将溶液用水淬灭；用1N氢氧化钠中和并用二氯甲烷提取。将有机层用硫酸镁干燥然后真空浓缩。将粗产物用ISCO SiO2色谱纯化，使用己烷/乙酸乙酯，提供320mg的纯化合物。收率：43％。
向5mL微波反应容器中加入5-溴-N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(50mg，0.132mmol)、3-氨基甲基苯基)硼酸盐酸盐(28mg，0.146mmol，1.1当量)、PdCl2(PPh3)2(3mg，4.27μmol，0.032当量)和碳酸钠(42mg，0.398mmol，3当量)在乙腈/水(4mL)中的溶液。将容器密封并将混合物在155℃在微波照射下加热5分钟。然后将混合物用水/二氯甲烷提取，将有机层用硫酸镁干燥并过滤通过硅藻土。然后除去溶剂，得到42mg的粗产物，其无需进一步纯化即可用于下一步。收率：79％。
将[5-(3-氨基甲基)苯基)-N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(20mg，49.7μmol)溶液10ml的二氯甲烷中。加入甲磺酰氯(6.8mg，59.7μmol，1.2当量)和吡啶(10μl，99.4μmol，2当量)。将反应混合物在50℃搅拌过夜。然后将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤。分离有机层并用硫酸镁干燥并真空浓缩。将粗产物用制备性HPLC纯化，得到4.2mg的产物。收率：17％。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.21(s，1H)；7.94(s，1H)；7.84(s，1H)；7.68(s，1H)；7.59(m，1H)；7.54(m，2H)；6.98(m，3H)；4.80(m，1H)；4.22(s，2H)；4.18(s，2H)；3.81(s，3H)；2.93(s，3H)；1.80(m，6H)；1.61(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝3.21分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝482。
合成(3-环戊基氧基)4-甲氧基苄基)-[5-(3-甲基磺酰基)苯基]]吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700301
向5mL微波反应容器中加入(5-溴-N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(50mg，0.13mmol)、3-甲基磺酰基苯基硼酸(27mg，0.13mmol，1当量)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol，0.044当量)、碳酸钠(28mg，0.36mmol，2当量)和乙腈/水1∶1(4mL)。将密封的容器在145℃在微波照射下加热5分钟。然后将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤。分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供8.4mg的产物。收率：13％。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.21(s，1H)，7.94(s，1H)，7.84(s，1H)，7.68(s，1H)，7.59(m，1H)，7.54(m，2H)，6.98(m，3H，)，4.80(m，1H)4.22(s，2H)，3.81(s，3H)，2.93(s，3H)，1.80(m，6H)，1.61(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.751分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝453。
合成N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-(5-呋喃-3-基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700311
向5mL的微波反应器中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(50mg，0.132mmol)、呋喃-3-基硼酸(18mg，0.159mmol，1.2当量)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol，0.044当量)、碳酸钠(28mg，0.265mmol，2当量)和乙腈/水1∶1(4mL)中的溶液。将密封的容器在155℃在微波照射下加热7分钟。然后将反应混合物用二氯甲烷提取，用水洗涤。分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供14.1mg的N-(3环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-(5-呋喃-3-基)吡啶-3-胺。收率：29％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：8.19(s，1H.)；8.11(s，1H)；7.81(s，1H)；7.55(s，1H)；7.35(s，1H)；7.28(s，1H)；6.88(m，2H)；6.61(s，1H)；4.80(m，1H)4.38(s，2H)；3.85(s，3H)；1.88(m，6H)；1.61(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝3.55分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝365。
合成N-(3-环戊基氧基)4-甲氧基苄基)-(1H-吡咯)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700312
向5mL微波反应容器中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(50mg，0.13mmol)、1-(三异丙基甲硅烷基)1H-吡咯-3-基硼酸(49.5mg，0.19mmol，1.5当量)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol，0.044当量)、碳酸钠(28mg，0.26mmol，2当量)和乙腈/水＝1/1(4ml)。将密封的容器在155℃在微波照射下加热7分钟。然后将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用水洗涤。然后分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供8.02mg的所需产物。收率：17％。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.05(s，1H.)；7.65(s，1H)；7.55(s，1H)；7.24(s，1H)；6.98(s，1H)；6.95(m，2H)；6.82(m，1H)；6.45(s，1H)；4.80(m，1H)4.39(s，2H)；3.81(s，3H)；1.80(m，6H)；1.61(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.860分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝364。
合成N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-5-(1-(甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)吡啶-3-胺
向5mL的微波反应容器中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(50mg，0.13mmol)、1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-硼酸(54mg，0.172mmol，1.3当量)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol，0.044当量)、碳酸钠(28mg，0.26mmol，2当量)和乙腈/水＝1/1(4ml)。将密封的容器在155℃在微波照射下加热7分钟。然后将溶液用二氯甲烷稀释，并用水洗涤。然后分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供9.12mg的所需产物。收率：12％
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.18(s，1H.)；8.10(s，1H)；8.05(d，2H)；7.89(d，2H)；7.65(m，2H)；7.40(s，1H)；7.35(m，1H)；7.15(m，2H)；6.95(m，3H)；4.75(m，1H)4.44(s，2H)；3.81(s，3H)；2.36(s，3H)1.75(m，6H)；1.53(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝3.818分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝568。
合成3-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苄基氨基)-5-(3-甲磺酰基-苯基)-吡啶-1-醇
Figure BPA00001342860700331
向5-溴-N-(3-环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(100mg，0.265
mmol)在10ml的氯仿中加入mCPBA(150mg，0.53mmol，2当量)。将溶液在室温下搅拌过夜。反应完成后，将混合物用水淬灭，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用硫酸镁干燥。除去溶剂，得到101mg的产物，其无需进一步纯化即可用于下一步。收率：97％。
向5mL微波反应容器中加入3-溴-5-(3-环戊基氧基-4甲氧基-苄基氨基)-吡啶-1-醇(50mg，0.127mmol)、3-(甲基磺酰基)苯基硼酸(28mg，1.40mmol，1.1当量)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol)、碳酸钠(28mg，0.26mmol)和乙腈/水＝1/1微波小瓶(4mL)。将容器在145℃加热5分钟。然后将溶液用二氯甲烷稀释，用水洗涤。分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供8.12mg的所需产物，收率：13.7％
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.11(s，1H)，8.05(d，1H)，7.99(s，1H)，7.95(d，1H)，7.769(m，2H)，7.62(m，1H)，7.55(m，1H)，6.95(m，2H)，4.79(m，1H)，4.38(s，2H)，3.81(s，3H)，3.19(s，3H)，1.80(m，6H)，1.61(m，2H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.978分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝469。
合成5-(3-甲基磺酰基)苯基-N-萘-2-基甲基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700341
5-溴吡啶-3-胺(346mg，2mmol，1当量)与萘甲醛(312mg，2mmol，1当量)在20mL DCE中混合10分钟，加入乙酸(240μL，4mmol，2当量)和三乙酰氧基硼氢化钠(422mg，2mmol，1当量)并将溶液在室温下搅拌过夜。然后将混合物用水淬灭，用二氯甲烷提取。分离有机层，并用硫酸镁干燥。除去溶剂，得到粗产物，其用ISCO SiO2柱色谱纯化，使用己烷/乙酸乙酯，得到320mg的所需产物。收率：51％。
向5mL的微波反应容器中加入(5-溴-N-(萘-2-基甲基)吡啶-3-胺(50mg，0.16mmol)、3-甲基磺酰基苯基硼酸(32mg，0.16mmol)、PdCl2(PPh3)2(4mg，0.006mmol)、碳酸钠(34mg，0.32mmol)和乙腈/水＝1∶1(4mL)。将小瓶在150℃在微波照射下加热5分钟。然后将溶液用二氯甲烷稀释，用水洗涤。分离有机层，并用硫酸镁干燥，并过滤通过硅藻土。除去溶剂，得到粗产物，其用制备性HPLC纯化，提供8.4mg的产物。收率：11％。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.18(d，1H)；7.95(m，3H)；7.79(m，2H)；7.61(m，4H)；7.45(d，1H)；7.38(m，3H)；4.60(s，2H)；3.10(s，3H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-3x 50mm，5um；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(95/5)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝3.87分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝469。
合成N-(联苯-2-基甲基)-5-(1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-胺
Figure BPA00001342860700351
将联苯-2-甲醛(2.0g，10.98mmol)和5-溴吡嗪-2-胺(1.59g，9.15mmol)溶于乙酸(2.0mL)和DCE(5.0mL)中。加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.91g，13.72mmol)并将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物用CH2Cl2稀释，分别用1.0N NaOH和盐水洗涤。然后分离有机层并用MgSO4干燥并浓缩。将粗物质用SiO2柱色谱纯化，得到1.5g的N-(联苯-2-基甲基)-5-溴吡嗪-2-胺。收率：48％。
将N-(联苯-2-基甲基)-5-溴吡嗪-2-胺(50mg，0.147mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1-H-吡唑(34mg，0.176mmol)、三苯基膦二氯化钯(6mg，0.0088mmol)、碳酸钠(34mg，0.323mol)、乙腈(1.5mL)和H2O(1.5mL)加入到5mL微波小瓶中，然后在微波设备中在150℃搅拌加热5分钟。将混合物冷却，过滤通过针筒式滤器，并浓缩。将粗物质用制备性HPLC纯化(溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；经12分钟从0-100％的B％；Sunfire 30X 50mm；UV：220)，得到1.5mg的标题化合物，N-(联苯-2-基甲基)-5-(1-H-吡唑-4-基)吡嗪-2-胺。收率：3.1％。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.2(s，1H)，8.01(s，2H)，7.86(s，1H)，7.5(m，1H)，7.39(m，7H)，7.28(m，1H)，4，47(s，2H).HPLC：柱＝ShimPack VP ODS-4.6x 50mm，溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝3.5ml/min经2分钟从0-100％的B％，RT＝2.76分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝328。
合成N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700361
将三乙酰氧基硼氢化钠(97mg，0.46mmol)加入到3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲醛(50mg，0.23mmol)和5-溴吡啶-3-胺(39mg，0.23mmol)在2mL的1，2-二氯乙烷(DCE)中的溶液中。加入乙酸(18mg，0.29mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入10mL的DCE。有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥。除去溶剂，得到60mg的粗5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺，其无需进一步纯化即可用于下一步。
在5ml微波小瓶中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(30mg，0.08mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吡唑(15.4mg，0.08mmol)和乙腈(1mL)。向上述溶液中加入碳酸钠水溶液(0.16mL，1M)和水(0.84mL)，然后加入5mol％的二氯双(三苯基膦)-钯(II)(2.8mg，0.004mmol)。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到3.2mg的N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)-5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-3-胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.23(s，1H)，8.16(s，2H)，7.84(s，1H)，7.80(s，1H)，6.99(s，1H)，6.96(s，2H)，4.42(s，2H)，3.81(s，3H)，1.82(m，6H)，1.62(m，2H).HPLC：YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.57分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝365。
合成2-(4-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
Figure BPA00001342860700371
在5mL微波反应小瓶中加入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基)吡啶-3-胺(30mg，0.08mmol)、2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(20mg，0.08mmol)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)、(2.8mg，0.004mmol，5mol％)、乙腈(1mL)、碳酸钠水溶液(0.16mL，1M)和水(0.84mL)。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物后处理并用制备性HPLC纯化，得到6mg的2-(4-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苄基氨基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.23(s，1H)，8.19(s，1H)，8.00(s，1H)，7.79(s，2H)，6.97(s，1H)，6.95(s，2H)，4.94(s，2H)，4.84(m，1H)，4.41(s，2H)，3.80(s，3H)，1.82(m，6H)，1.62(m，2H).HPLC：柱＝YMCPack ODS-AQ 3.0x 50mm；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.39分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝422。
合成5-(呋喃-3-基)-N-(1-(萘-2-基)乙基)吡啶-3-胺
将1-(萘-2-基)乙醇(200mg，1.16mmol)溶于5mL的二氯甲烷中，加入三乙胺(351mg，3.48mmol)，然后加入甲磺酰氯(198mg，1.74mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时，通过过滤除去形成的三乙胺盐。将滤液用水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂，得到270mg的粗1-(萘-2-基)乙基甲磺酸酯，其无需进一步纯化即可用于下一步。
将5-溴吡啶-3-胺(69mg，0.4mmol)加入到氢化钠(33mg，60％，在矿物油中，0.8mmol)在四氢呋喃(4mL)中的悬浮液中，将混合物搅拌30分钟，然后加入1-(萘-2-基)乙基甲磺酸酯(100mg，0.4mmol)在THF(2mL)中的溶液。将生成的混合物在70℃加热2小时。冷却后，加入2滴水并淬灭反应。真空蒸发四氢呋喃。将残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。分离有机层并用硫酸镁干燥。除去溶剂，得到100mg的5-溴-N-(1-(萘-2-基)乙基)吡啶-3-胺，收率：73％。
在微波反应小瓶中加入5-溴-N-(1-(萘-2-基)乙基)吡啶-3-胺(20mg，0.06mmol)、呋喃-3-基硼酸(14mg，0.12mmol)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(5mol％)、乙腈(1mL)、碳酸钠水溶液(0.24mL，1M)和水(0.76mL)。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物蒸干。将残余物溶于2.5mL的甲醇中，并用制备性HPLC纯化，得到1.6mg的5-(呋喃-3-基)-N-(1-(萘-2-基)乙基)吡啶-3-胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)：8.07(s，1H)，7.90(s，2H)，7.88(s，1H)，7.84(s，1H)，7.82(s，1H)，7.76(m，1H)，7.65(m，2H)，7.56(s，1H)，7.47(m，2H)，6.80(s，1H)，1.70(d，J＝8，3H).HPLC：柱＝YMC PackODS-AQ 3.0x 50mm；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝3.08分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝315。
合成5-(呋喃-3-基)-N-(4-甲基苄基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700391
向20mL微波小瓶中加入5-溴吡啶-3-胺(346mg，2mmol)、呋喃-3-基硼酸(440mg，4mmol)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(70mg，0.1mmol)、乙腈(6mL)、碳酸钠(6mL，1M)和水(0.76mL)。将反应容器密封并在150℃在微波照射下加热5分钟。冷却后，将反应混合物用水洗涤并用乙酸乙酯提取；分离有机层并用硫酸镁干燥。除去溶剂得到粗产物，其通过ISCO SiO2柱色谱纯化，得到200mg的5-(呋喃-3-基)吡啶-3-胺，收率62％。
将三乙酰氧基硼氢化钠(66mg，0.31mmol)加入到5-(呋喃-3-基)吡啶-3-胺(25mg，0.156mmol)和4-甲基-苯甲醛(19mg，0.156mmol)在1mL的1，2-二氯乙烷中的溶液中。加入乙酸(9mg，0.156mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入5mL的DCE。将有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，并将残余物用制备性HPLC纯化，得到4.4mg的5-(呋喃-3-基)-N-(4-甲基苄基)吡啶-3-胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 2.26(s，3H)4.38(s，2H)6.83(d，J＝0.98Hz，1H)7.13(d，J＝7.82Hz，2H)7.24(d，J＝7.82Hz，2H)7.62(t，J＝1.37Hz，1H)7.72(d，J＝1.37Hz，1H)7.78(d，J＝1.95Hz，1H)8.06(s，1H)、8.11(s，1H).HPLC：柱＝YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.70分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝265。
合成5-(呋喃-3-基)-N-(4-异丙氧基-3-甲氧基苄基)吡啶-3-胺
Figure BPA00001342860700401
将三乙酰氧基硼氢化钠(66mg，0.31mmol)加入到5-(呋喃-3-基)吡啶-3-胺(25mg，0.156mmol)和4-异丙氧基-3-甲氧基苯甲醛(31mg，0.156mmol)在1mL的1，2-二氯乙烷的溶液中。加入乙酸(9mg，0.156mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入5mL的DCE。将有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去溶剂，并将残余物用制备性HPLC纯化，得到11mg的5-(呋喃-3-基)-N-(4-异丙氧基-3-甲氧基苄基)吡啶-3-胺。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δppm 1.31(d，J＝6Hz，6H)，3.84(s，3H)，4.43(s，2H)，4.53(m，1H)，6.92(d，J＝3Hz，1H)，6.96(s，2H)，7.05(s，1H)，7.7(s，1H)，7.82(s，1H)，7.88(d，J＝3Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.22(s，1H).HPLC：YMC Pack ODS-AQ 3.0x 50mm；溶剂A＝含0.1％TFA(三氟乙酸)的水/MeOH(90/10)；溶剂B＝含0.1％TFA的MeOH/水(90/10)；以流速＝2ml/min经4分钟从0-100％的B％，RT＝2.68分钟。ESI-MS：m/z(M+H)+＝339。
合成1-(4-((1H-咪唑-1-基)甲基)-4-苯基哌啶-1-基)-2，2-二苯基乙酮
Figure BPA00001342860700411
4-(1H-咪唑-1-基)甲基)-4-苯基哌啶(80mg，0.288mmol，1.0当量)、2，2-二苯基乙酸(0.288mmol，61mg，1当量)、聚合物结合的DCC(234mg，装载：1.23mmol/g，3当量)和HOBt(0.144mmol，19.5mg，0.5当量)在THF(10ml)的混合物在50℃搅拌过夜。反应完成后，将聚合物试剂过滤并用THF(5ml)洗涤。将滤液浓缩，得到粗产物，其通过制备性HPLC纯化，得到45mg的1-(4-((1H-咪唑-1-基)甲基)-4-苯基哌啶-1-基)-2，2-二苯基乙酮。收率：36％。
NMR：1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.5(m，1H)，1.8(m，1H)，2.2(d，1H)，2.4(d，1H)，2.9(m，1H)，3.1(m，1H)，4.0(d，1H)，4.3(s，2H)，4.5(d，1H)，5.5(s，1H)，7.0(s，1H)，7.1-7.5-(m，16H)，8.1(s，1H)，分析HPLC：RT 2.93，(99％purity)M+1：436(RT：1.56).ESI-MS：m/z(M+H)+＝436。
体外抑制试验
使用分别具有以下登录号：X52836、AY098914、X05290和U49897的基因制备了人TPH1、TPH2、酪氨酸羟化酶(TH)和苯基丙氨酸羟化酶(PH)。
人TPH1的全长编码序列被克隆到细菌表达载体pET24(Novagen，Madison，WI，USA)中。将携带表达载体的BL21(DE3)细胞的单个集落接种在50ml的L肉汤(LB)-卡拉霉素培养基中并在振摇下在37℃生长过夜。然后将一半培养物(25ml)转移到3L的培养基中，该培养基含有1.5％酵母抽提物、2％Bacto Peptone、0.1mM色氨酸、0.1mM硫酸亚铁铵、和50mM磷酸盐缓冲剂(7.0)，并在37℃使用补充有40％的氧气、保持在7.0的pH和加入葡萄糖的条件下生长到OD600＝6。在10小时内在25℃使用15％D-乳糖诱导TPH1表达。将细胞旋转分级并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次
根据TPH1与蝶呤结合，用亲和色谱法对TPH1进行纯化。将细胞小球再悬浮溶胞缓冲液(100ml/20g)中，该溶胞缓冲液含有50mMTris-Cl，pH 7.6、0.5M NaCl、0.1％土温-20、2mM EDTA、5mM DTT、蛋白酶抑制剂混合物(Roche Applied Science，Indianapolis，IN，USA)和1mM苯基甲烷磺酰氟(PMSF)，将细胞用微流化器进行溶胞。将溶胞产物进行离心并将上清液装载到与蝶呤结合的琼脂糖凝胶4B柱上，该柱用含有50mM Tris、pH 8.0、2M NaCl、0.1％土温-20、0.5mM EDTA和2mM DTT的缓冲液平衡。该柱用50ml的该缓冲液洗涤，用含30mMNaHCO3，pH 10.5，0.5M NaCl，0.1％土温-20，0.5mM EDTA，2mM DTT和10％甘油的缓冲液洗脱TPH1。被洗脱的酶立即用200mM KH2PO4，pH 7.0，0.5M NaCl，20mM DTT，0.5mM EDTA和10％甘油中和，并保存在-80℃。
以同样的方法表达和纯化了人色氨酸羟化酶II型(TPH2)，酪氨酸羟化酶(TH)和苯基丙氨酸羟化酶(PAH)，不同之处在于，在生长期间，对于TH为细胞补充酪氨酸，对于PAH为细胞补充苯基丙氨酸。
在含有50mM 4-吗啉丙磺酸(MOPS)，pH 7.0，60μM色氨酸，100mM硫酸铵，100μM硫酸亚铁铵，0.5mM三(2-羧基乙基)膦(TCEP)，0.3mM 6-甲基四氢蝶呤，0.05mg/ml过氧化氢酶和0.9mM DTT的反应混合物中测量TPH1和TPH2活性。通过加入TPH1达到7.5nM的最终浓度引发反应。根据在360nm(激发波长＝300nm)处的荧光的改变来测定反应初始速度。通过测量在各种化合物浓度下它们的活性来测定TPH1和TPH2抑制，并且使用以下方程式计算所给出的化合物的效力：
v = b + v 0 - b 1 + ( [ C ] [ I c 50 ] ) D
其中v是在所给的化合物浓度C下的初始速度，v0是当C＝0时的v，b是背景信号，D是近似等于1的Hill斜率，并且Ic50是化合物抑制半数最大酶活性的浓度。
通过分别使用L-[3，4-3H]-酪氨酸和L-[4-3H]-苯基丙氨酸测量所产生的3H2O的量来测定人TH和PAH的活性。首先将酶(100nM)与其0.1mM下的底物温育约约10分钟，并加入到包含50mM MOPS，pH 7.2，100mM硫酸铵，0.05％土温-20，1.5mM TCEP，100μM硫酸亚铁铵，0.1mM酪氨酸或苯基丙氨酸，0.2mM 6-甲基四氢蝶呤，0.05mg/ml过氧化氢酶和2mM DTT的反应混合物中。使反应进行10-15分钟，并通过加入2M HCl使反应终止。然后将混合物过滤通过活性炭并通过闪烁计数测定滤液的放射活性。使用该试验测定并且使用与TPH1和TPH2一样的方法计算化合物对TH和PAH的活性。
基于细胞的抑制试验
使用两种类型的细胞系用于筛选：RBL2H3是大鼠肥大细胞瘤细胞系，其含有TPH1并自发产生5-羟基色胺(5HT)；BON是人类癌瘤细胞系，其含有TPH1并产生5-羟基色氨酸(5HTP)。在96孔板形式中进行CBA。在HPLC中使用的流动相含有97％的mM乙酸钠(pH 3.5)和3％的乙腈。使用Waters C18柱(4.6x 50mm)和Waters HPLC(型号2795)。使用多通道荧光计(型号2475)通过设定280nm作为激发波长和360nm作为发射波长来监控流过。
RBL CBA：细胞在完全培养基(含有5％牛血清)中生长3-4小时以使得细胞附加于板孔(7K细胞/孔)。然后将化合物以0.016μM到11.36μM的浓度加入到每个孔中。对照是在不存在任何化合物的完全培养基中的细胞。在37℃温育3天后收获细胞。细胞在不存在化合物下＞95％融合。从板除去培养基并用等量的0.1N NaOH使细胞溶胞。通过与等量的1M TCA混合然后过滤通过玻璃纤维对大部分的细胞溶胞产物进行处理。将滤液装载到反相HPLC上用于分析5HT浓度。还取得小部分的细胞溶胞产物来测定细胞的蛋白质浓度，其反映了在所用浓度下的化合物的细胞毒性。使用BCA法测量蛋白质浓度。
在无化合物处理下细胞中的平均5HT水平在根据上述方程式进行IC50推导中用作最大值。5HT的最小值设为0或得自用最高浓度(如果化合物在该浓度下无细胞毒性)的化合物处理的细胞
BON CBA：细胞在等量的含5％牛血清的DMEM和F12K中生长3-4小时(20K细胞/孔)并加入在0.07μM到50μM浓度范围下的化合物。将细胞在37℃温育过夜。然后取得50μM的培养物上清液用于测量5HTP。将上清液与等量的1M TCA混合，然后过滤通过玻璃纤维。将滤液装载到反相HPLC上用于测量5HTP浓度。通过用Promega Celltiter-Glo Luminescent细胞存活试验处理剩余细胞来测量细胞的存活率。然后以与RBL CBA中的相同方式计算化合物效力。
上面公开的所有文献(例如，专利和专利申请)以全文并入本文作为参考。

Claims (22)

1.下式的TPH抑制剂：
Figure FPA00001342860600011
或其药学可接受的盐，其中：
X是C或N；
A是任选被取代的芳基或杂芳基；
B是任选被取代的芳基或杂芳基；
L1是-(CR2)m-；
R1是氢或任选被取代的烃基；
每个R2独立地是氢或任选被取代的烃基；和
m是0或1。
2.权利要求1的TPH抑制剂，其由下式表示：
Figure FPA00001342860600012
其中：
每个R3独立地是任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环或杂烃基-杂环；和
n是0-4。
3.权利要求2的TPH抑制剂，其中R1是氢。
4.权利要求2的TPH抑制剂，其中R2是氢。
5.权利要求2的TPH抑制剂，其中至少一个R3是烃氧基。
6.权利要求2的TPH抑制剂，其中m是0。
7.权利要求2的TPH抑制剂，其中m是1。
8.权利要求2的TPH抑制剂，其由下式表示：
Figure FPA00001342860600021
9.权利要求8的TPH抑制剂，其由下式表示
Figure FPA00001342860600022
其中：
X1是N，NR4，O，CHR5或CR5
X2是N，NR4，O，CHR5或CR5
X3是N，NR4，O，CHR5或CR5
每个R4独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环或杂烃基-杂环；和
每个R5独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环或杂烃基-杂环。
10.权利要求9的TPH抑制剂，其中X1是O，且X2和X3都是CHR5。
11.权利要求10的TPH抑制剂，其中R5是氢。
12.权利要求9的TPH抑制剂，其中X1是N，X2是NR4，且X3是CHR5。
13.权利要求10或11的TPH抑制剂，其中R4是任选被取代的烃基或杂烃基，且R5是氢或任选被取代的烃基。
14.权利要求8的TPH抑制剂，其由下式表示：
Figure FPA00001342860600031
其中：
X1是N或CR4；
X2是N或CR4；
X3是N或CR4；和
每个R4独立地是氢或任选被取代的烃基，杂烃基，芳基，杂环，烃基芳基，杂烃基-芳基，烃基-杂环，或杂烃基-杂环。
15.下式的TPH抑制剂：
Figure FPA00001342860600032
或其药学可接受的盐，其中：
A是任选被取代的芳基或杂芳基；
B是任选被取代的芳基或杂芳基；
C是任选被取代的芳基或杂芳基；
L1是-(CR2)m-；
L2是-(CR2)m-；
R1是氢或任选被取代的烃基；
每个R2独立地是氢或任选被取代的烃基；和
每个m独立地是0或1。
16.下式的TPH抑制剂
Figure FPA00001342860600041
或其药学可接受的盐，其中：
A是任选被取代的芳基或杂芳基；
B是任选被取代的芳基或杂芳基；
C是任选被取代的芳基或杂芳基；
D是任选被取代的芳基或杂芳基；
L1是-(CR2)m-；
L2是-(CR2)m-；
L3是-(CR2)m-或-O-；
R1是氢或任选被取代的烃基；
每个R2独立地是氢或任选被取代的烃基；和
每个m独立地是0或1。
17.下式的TPH抑制剂：
Figure FPA00001342860600042
或其药学可接受的盐，其中：
A是任选被取代的芳基或杂芳基；
B是任选被取代的芳基或杂芳基；
C是任选被取代的芳基或杂芳基；
D是任选被取代的芳基或杂芳基；
每个R1独立地是卤代、羟基或低级烃基；
L1是键或-(CH2)n-；
L2是键或-(CH2)n-；
m是0-4；和
每个n独立地是0-2。
18.权利要求17的TPH抑制剂，其中A是任选被取代的咪唑。
19.权利要求17的TPH抑制剂，其中B是任选被取代的苯基。
20.权利要求17的TPH抑制剂，其中C是任选被取代的苯基。
21.权利要求17的TPH抑制剂，其中D是任选被取代的苯基。
22.权利要求17的TPH抑制剂，其由下式表示：
Figure FPA00001342860600051
其中：
每个R2独立地是卤代、羟基或低级烃基；
每个R3独立地是卤代、羟基或低级烃基；
p是0-5；以及
q是0-5。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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