CN102166219B - 一种鼻腔给药制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属化学制药领域，是以一种反义寡核苷酸药物流感泰得(其序列为:5’-CCTTGTTTCTACT-3’)为主成份的鼻腔给药制剂，用于H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的预防和治疗。一种鼻腔给药制剂，其有效成分为流感泰得，还含有适量的防腐剂、缓冲液和可药用辅料，该制剂的pH值为7～8。所述的防腐剂是不影响药物的理化性质、且在抑菌浓度下对人体无害、无刺激性和特殊的臭味的试剂，常用的防腐剂有尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、羟苯乙酯、山梨酸钾、苯甲酸、苯扎溴铵、醋酸氯己定、邻苯基苯酚、桉油、桂皮油或薄荷油等。流感泰得鼻腔给药制剂没有刺激性和极低的毒性，是一种具有起效作用快、肺靶定向的治疗流感药物。

Description

一种鼻腔给药制剂及其应用

技术领域

本发明属化学制药领域，是以一种反义寡核苷酸药物流感泰得(其序列为：5’-CCTTGTTTCTACT-3’)为主成份的鼻腔给药制剂，用于H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的预防和治疗。

背景技术

流感是严重危害人类生命与健康的一种急性、病毒性呼吸道传染病，每年冬春季节均有大规模爆发与流行，每次流行都会造成全世界300～500万的严重流感病例。流感病毒具有传播速度快、变异快、危害大的特点，疫苗预防难度大，现有的抗流感药物品种少，特别容易产生耐药，据WHO报道，对于抗流感的主力药物奥司他韦(商品名“达菲”)，在多国已出现耐药的突变株，而季节性流感病毒已对其完全耐药。临床上可选用针对流感病毒M2蛋白的抗A型流感药物金刚烷胺及其类似药物金刚乙胺，因存在神经毒性、易产生耐药毒株和对B型流感病毒无效等缺陷，限制了其在临床上的广泛应用。新的流感大流行随时都可能爆发，在这种情况下，研究开发具有预防和治疗作用的抗流感药物就显得尤为重要和紧迫。

“流感泰得(Flutide，FT)”是人工合成的硫代脱氧寡核苷酸，以流感病毒基因组RNA3’末端复制相关的保守序列为靶点，抑制相关基因的复制、转录及病毒装配等过程，从而干扰致病蛋白的产生，达到治疗疾病的目的。与传统的小分子药物比较，流感泰得具有以下作用特点：1)广谱——作用的靶基因在各亚型流感病毒中均非常保守，因此具有广谱抗流感作用；2)特异性高——根据核酸杂交原理，只结合流感病毒基因；3)作用机理新、效率高——靶向病毒基因组而非蛋白质，既可以阻断复制，也可以阻断翻译；4)不会产生耐药——由于是与病毒RNA结合后激活体内的RNA酶，将结合的病毒RNA切割，因此不会产生耐药的问题。流感泰得的序列已获得国内专利授权(ZL97120355.5)。

一般情况下，要实现肺部靶向输送药物并不容易，但已有一些吸入性局部治疗作用的药物上市，包括β-受体阻滞剂(肾上腺素、沙丁胺醇、沙美特罗等)；抗胆碱能药物(异丙托溴铵、塞托溴铵等)；皮质激素(地塞米松、曲安奈德、氟尼缩松等)；抗炎药物(色甘酸钠、奈多罗米钠)等，已经取得一些成功。还有一些尚在研发中的药物，如蛋白多肽类药物，包括DNA酶类、红细胞生素、抗胰蛋白酶；抗感染药物(如妥布霉素)；止痛药物(如吗啡，芬太尼)；疫苗；激素等。因此，流感泰得制剂剂型设计成鼻用给药制剂，具有一定的科学性和前瞻性。同时，为寡核苷酸类药物提供了一种非注射给药途径，因为寡该类药物口服效果低，只限于注射给药，其它途径的给药方式还未有研究成果，这为寡核苷酸的应用开辟了一条新的途径。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷提供一种鼻腔给药制剂，该鼻腔给药制剂是以一种反义寡核苷酸药物——流感泰得(序列为5’-CCTTGTTTCTACT-3’)为有效成分的鼻腔给药制剂。

本发明还涉及该鼻腔给药制剂在制备预防和治疗H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的药剂中的应用。

本发明的上述技术问题是通过以下技术方案得以实施的：

一种鼻腔给药制剂，其有效成分为流感泰得，还含有适量的防腐剂、缓冲液和可药用辅料，该制剂的pH值为7～8。所述的防腐剂是不影响药物的理化性质、且在抑菌浓度下对人体无害、无刺激性和特殊的臭味的试剂，常用的防腐剂有尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、羟苯乙酯、山梨酸钾、苯甲酸、苯扎溴铵、醋酸氯己定、邻苯基苯酚、桉油、桂皮油或薄荷油等。

流感泰得因为分子量大、脂溶性差，难以被鼻黏膜吸收，因此发明人通过选择一些有效的药学辅料，增加药物的转运速度、改变药物的亲水亲脂性和减少鼻腔中酶的抑制。本发明的鼻腔给药制剂不仅稳定性好、给药剂量准确、容易使用、便于携带和患者依从性好等特点，而且能提高药物的生物利用度，速效，以及具有药物本身肺部靶向性的特点。

本发明的流感泰得鼻腔给药制剂，其有效成分为流感泰得，辅以药剂学上有效的辅料，用适宜的方法制成鼻用喷雾剂、粉雾剂、滴鼻剂、软膏剂或凝胶剂。通过比较鼻腔给药与静脉给药两种途径下肺组织中流感泰得的含量，发现经过鼻腔给药后，肺组织中药物含量远远高于静脉给药，本发明具有副作用小、用药量小，使用安全，速效以及患者依从性好的特点，可以预防和治疗H1N1、H3N2、H5N1流感作用。

鼻腔给药制剂应与鼻黏液等渗，不改变鼻黏液的正常粘度，不影响纤毛运动和分泌液的组成，根据正常人鼻腔液pH值和药物本身的性质，故将鼻腔给药制剂的pH值定为7～8，优选为7～7.5。本发明的缓冲溶液为常用试剂，如枸橼酸缓冲盐、生理盐水、醋酸缓冲盐、磷酸缓冲盐或维生素C溶液等，用来调节pH值使主药稳定存在于制剂中，同时该适宜的pH值可避免鼻腔的刺激。

作为优选，所述的流感泰得含量为0.5～3％，即每100ml制剂溶解流感泰得0.5～3g。更为优选的是，所述的流感泰得含量为1～2％。

作为优选，所述的可药用辅料选自渗透促进剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和乳化剂，所述的渗透促进剂为胆酸钠、甘氨胆酸钠、油酸、月桂酸钠、β环糊精、二甲基β环糊精卵磷脂、豆磷脂、杆菌肽或水盐酸纳；所述的乳化剂为十二烷基硫酸钠、氢氧化铝、氢氧化镁、二氧化硅、皂土、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、卡波姆940、琼脂、西黄蓍胶、阿拉伯胶、黄原胶、果胶、明胶、杏树胶或卵黄；所述的增溶剂是甘油或丙二醇；所述的增稠剂是甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚丙基乙基纤维素；所述的稳定剂是甘油、糖浆、甲基纤维素、羟乙基纤维素或羟丙基甲基纤维素。

作为优选，制剂中还可加入天然或合成的高分子化合物，能形成药物的固体分散性，从而有利于药物吸收，延长药物作用时间，这些高分子化合物通过鼻腔给药方式把药物运送入鼻腔顶部，均匀分散在粘膜表面。如β环糊精及其烷基取代物、二甲基β环糊精、羟丙基β环糊精、纤维素类如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇类或聚维酮类等。

作为优选，该制剂由以下组分组成：FT0.5-3g，尼泊金复合酯0.03-0.25g，丙二醇0.80-5.5g，pH7.4的PBS缓冲液加至100ml。作为优选，该制剂由以下组分组成：FT0.5-3g，尼泊金乙0.05-0.3g，丙二醇0.5-4.0g，羟丙基β环糊精0.60-4.0g，pH7.4的PBS缓冲液加至100ml。作为优选，该制剂由以下组分组成：FT 0.5-3g，尼泊金甲酯0.05-0.5g，甘油1.0-8.0g，生理盐水加至100ml。作为优选，该制剂由以下组分组成：FT 0.5-3g，尼泊金乙酯0.05-0.3g，丙二醇1.0-8.0g，生理盐水加至100ml。以上四种为本发明制剂的最佳配方，具体见表2。

本发明的鼻腔给药制剂可以按照常规的药物制备工艺，制备成滴鼻剂、鼻喷雾剂、软膏剂、凝胶剂或粉雾剂等剂型。

发明人在防腐剂：尼泊金甲酯，尼泊金乙酯、尼泊金丙酯，苯扎溴氨、羟苯乙酯、山梨酸钾；增溶剂：丙二醇，甘油；渗透促进剂：β环糊精、羟丙基β环糊精；乳化剂：十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、卡波姆940、琼脂、羊毛脂、硬脂酸、硬脂酸甘油酯、液状石蜡、交联型聚丙烯酸钠、PEG-4000；增稠剂：甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙基乙基纤维素；稳定剂：甘油、糖浆、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等这些市售产品中挑选，以考察FT与辅料的相互作用：将主药加入预选辅料，混合后，在常温25℃/高温40℃中放置5天、10天，观察：(1)制剂状态的初形成过程，(2)成型后的外观，(3)放置后的制剂性状的变化，初筛出稳定的处方。通过影响因素试验测试不同的制剂，以确证它们的稳定性，并检测不同时间下制剂中FT含量的变化，具体实验结果见表1。

表1稳定性试验结果

处方编号	温度(℃)	时间/天	性状	FT含量下降百分率％
					1	25	5	无色澄清液体	0
1	25	10	无色澄清液体	1.75
					1	40	5	无色澄清液体	0
1	40	10	无色澄清液体	1.73
					2	25	5	无色澄清液体	0
2	25	10	无色澄清液体	0
					2	40	5	无色澄清液体	0
2	40	10	无色澄清液体	1.0
					3	40	5	无色澄清液体	0
3	40	10	无色澄清液体	0.64
					4	40	5	无色澄清液体	0
4	40	10	无色澄清液体	1.73

5	40	10	类白色膏体	1.02
					6	40	10	类白色膏体	0.98
7	40	10	透明类白色凝胶	0.87
					8	40	10	透明类白色凝胶	0.45
9	40	10	白色或类白色粉末	1.8

结论：经过制剂在常温/高温条件下放置5天和10天，性状基本无变化，含量的变化小于5％，无特殊显著性。

筛选出的最佳处方用量范围如表2所示。

表2最佳处方用量范围(固体/g，液体/ml)

续表2

发明人又测试了最佳处方下本品对兔眼的刺激性，以及对离体蟾蜍上腭纤毛的毒性影响，分别见实施例10和实施例11。实验证明，流感泰得鼻腔给药制剂没有刺激性和极低的毒性。

为了更好的理解本发明的实质，下面用以流感泰得为主要成分的鼻腔给药制剂的药效学试验及结果来说明其在制备H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的药剂中的应用。

(一)流感泰得在小鼠模型中抗流感病毒(H1N1、H3N2)活性研究。

材料：

受试品：流感泰得(其序列为：5’-CCTTGTTTCTACT-3’)，自制，纯度达95％以上。用生理盐水溶解到5ug/ul，过滤除菌，分装，-20℃保存备用。

对照品：盐酸金刚烷胺，东北制药厂，批号：951201。用生理盐水溶解到5μl/μl，过滤除菌，分装，-20℃保存。

流感病毒：A/京防/86-1(H1N1)和A/沪防/93-9H3N2，中国预防医学科学院病毒学研究所国家流感中心。

动物：SP Bal b/c小鼠，雌性，6周龄(16g左右)二级实验动物，由军事医学科学院实验动物中心提供。

方法：

1.流感病毒适应小鼠过程：

取鸡胚培养流感病毒50μl(2⁹HAU)，滴鼻途径接种Bal b/c小鼠，饲养2～3天后，无菌条件下取肺脏，以每克加10ml的比例加入PBS(pH7.2)，制成肺组织匀浆，-20℃/37℃冻融3次，1000g离心5min，取上清50μl，重复上所述过程。

2.小鼠适应流感病毒感染性鉴定：

取在小鼠连续传代的流感病毒50μl(2⁹HAU)，通过滴鼻途径接种小鼠，在感染病毒后不同时间测定小鼠体重、肺脏湿重和肺组织中病毒滴度。

3.给药与分组：

将6周龄雌性Bal b/c小鼠随机分组，每组10只，标记小鼠并称重。以2⁸HAU(50μl)的剂量接种小鼠适应流感病毒A/京防P86-1(H1N1)，5h后通过滴鼻途径接种不同剂量(6.5×10^-4μmol/g，32.5×10^-4μmol/g)受试品，然后每天给药一次。共给药3次，同时，以相同剂量的已知抗流感病毒药物盐酸金刚烷胺接种小鼠作为抗病毒活性阳性对照。连续观察7d后测定抗病毒活性.

4.受试品在小鼠模型中抗流感病毒活性测定指标：

抗病毒活性评价指标为：①小鼠活动状态；②小鼠体重变化；③小鼠肺脏湿重变化；④小鼠存活率(见表3)。

表3滴鼻给药时FT和盐酸金刚烷胺在小鼠模型中的抗病毒作用

注：1)P＜0.1；2)P＜0.05；3)P＜0.02；4)P＜0.01；与病毒感染组比较。

小鼠感染后的第2～6天内，从肺脏能检测到很高的病毒滴度，体重明显下降，肺脏湿重明显增加。滴鼻给药，病毒感染对照组小鼠存活率为20％(2/10)，正常对照组小鼠存活率为100％(8/8)(P＜0.01)。接种不同剂量流感泰得(6.5×10^-4μmol/g，32.5×10^-4μmol/g)受试品后，小鼠存活率分别上升了30％和50％((P＜0.05))；接种等剂量金刚烷胺组小鼠存活率分别提高了20和30％。说明受试品能提高病毒感染小鼠存活率。

本发明所述的流感泰得鼻腔给药制剂对小鼠的急性毒性作用：流感泰得分别以26×10^-4μmol/g、52×10^-4μmol/g的剂量通过滴鼻方式接种小鼠，考察了受试品对小鼠的局部急性毒性作用。试验发现，在所测定的剂量范围内受试品对小鼠生长状态、小鼠体重和肺脏湿重等均无显著影响(表4)，即受试品在所测定浓度内对小鼠未表现明显的急性整体毒性和局部毒性作用。

表4FT和盐酸金刚烷胺对小鼠的急性毒性作用

(二)体外MDCK细胞水平流感泰得抗H5N1型高致病性禽流感病毒活性的研究

1、流感泰得体外细胞毒性测定

以10000～12000个细胞/孔将细胞接种至96孔细胞培养板中，细胞生长液为含8％小牛血清的DMEM，37℃培养过夜，次日90％长满，用含2％FBS的DMEM稀释流感泰得至7.5、15、31.25、62.5、125.250、500μmol/L，稀释病毒唑至15、30、60、120、240、480、960、1920μmol/L，弃去细胞培养液分别加入流感泰得和病毒唑不同浓度的稀释液，每个浓度加三个孔。

2、流感泰得抑制病毒致细胞CPE作用

以10000～12000个细胞/孔把MDCK细胞接种到96孔细胞培养板，次日90％长满，用含2％FBS的DMEM稀释流感泰得至0.5、1、2、4、8μmol/L，稀释病毒唑至5、10、20、40、80μmol/L，以100ul/孔的量加入各孔，37℃作用60min，再以PBS(PH7.5)冲洗三次，加入100TCID50的病毒液50ul。用PBS(PH7.5)冲洗三次，加入维持液稀释的含相同浓度的流感泰得，同时设立病毒感染阳性对照和MDCK细胞阴性对照。37℃培养2天。

结果：

1、流感泰得体外细胞毒性

流感泰得在250μmol/L未见细胞毒性作用，TC50和TC0(最大无细胞浓度)分别为500和250μmol/L，CPE测定在250μmol/L时OD490才出现降低。对照病毒唑的TC50和TC0分别为363.74和30μmol/L，在120μmol时OD490就出现显著降低。说明流感泰得不具有明显的细胞毒性，且其细胞毒性低于病毒唑。

2、流感泰得抑制病毒细胞CPE作用

流感泰得在2μmol/L时就表现出一定的抑制病毒的作用。流感泰得和病毒唑均可抑制A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)在MDCK细胞引起的CPE，且存在迹象效应的依赖关系，流感泰得的IC50为4.44μmol/L，TI为112.61，病毒唑的IC50为9.658μmol/L，TI为37.66。流感泰得和病毒唑均可抑制病毒，但是流感泰得的TI优于病毒唑。

综上所述，本发明的鼻腔给药制剂与现有技术相比具有以下特点：

1、本发明的鼻腔给药制剂属于一种化学药品鼻用给药制剂，主药FT以各种方式加入到适宜的溶媒中，并加入合适及适量的药剂学上有效的辅料，经灭菌，分装即得流感泰得鼻腔给药制剂。

2、本发明所得成品为无色或类白色的液体或软膏剂或凝胶剂或粉雾剂，含量均一性(容器之间和批次之间)和微生物限度等项目均符合药典要求，刺激性和安全性合乎标准。优选的处方在25℃和40℃环境下5天和10天稳定性好。

3、本发明的鼻腔给药制剂是一种起效作用快、肺靶定向的治疗流感药物，每次给药含流感泰得10-20mg，每天最佳剂量为60-180mg，本品吸收好，药效明显。患者便于使用和携带，贮存期长，安全有效、顺应性好。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例；这些实施例可以对本发明作进一步的补充和说明；但本发明并不限于这些实施例。

以下实施例中所使用的技术，除非特别说明，均为本领域的技术人员已知的常规技术；所使用的仪器设备、试剂等，除非是本说明书特别说明，均为本领域的研究和技术人员可以通过公共途径获得的。以下实施例所用原料FT(质量含量为90％～110％)，批号：090611，来源：军事医学科学院放射与辐射医学研究所。

实施例1(滴鼻剂/鼻喷剂)

FT 2.0g、尼泊金复合酯(分别称取尼泊金乙酯和尼泊金丙酯适量，二者按1∶1比例混匀，即为尼泊金复合酯，下同)0.15g、丙二醇3.5g、PBS(pH7.4)缓冲液(即为磷酸盐缓冲液(pH7.4)：取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。下同)加至100ml。

制法：称取2.0g FT用1.7mlPBS(PH7.4)缓冲液溶解后注入配制罐中，加入丙二醇3.5g，搅拌、静置、滤过，然后在滤液中用缓冲液PBS(pH7.4)缓冲液加至终体积100ml，最后加入尼泊金复合酯，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例2(滴鼻剂/鼻喷剂)

FT 2.0g、尼泊金乙酯0.2g、丙二醇2.0g、羟丙基β环糊精2.50g、PBS(pH7.4)缓冲液加至100ml。

称取FT 2.0g和羟丙基β环糊精2.5g，分别用1.7ml和4.17mlPBS(pH7.4)缓冲液溶解后注入配制罐中，加入丙二醇2.0g，搅拌、静置、滤过，然后在滤液中用PBS(PH7.4)缓冲液加至终体积100ml，最后加入尼泊金乙酯，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例3(滴鼻剂/鼻喷剂)

FT 2.0g、尼泊金甲酯0.25g、甘油4.2g、生理盐水加至100ml。

称取FT 2.0g用1.85ml生理盐水溶解后注入配制罐中，然后加入甘油4.2g，搅拌、静置、滤过，滤液用生理盐水加至终体积100ml，最后加入尼泊金甲酯，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例4(滴鼻剂/鼻喷剂)

FT 2.0g、尼泊金乙酯0.2g、丙二醇4.1g、生理盐水加至100ml。

称取FT 2.0g用1.85ml生理盐水溶解后；注入配制罐中，然后加入丙二醇4.1g，搅拌、静置、滤过，滤液用生理盐水加至终体积100ml，最后加入尼泊金乙酯，搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例5(软膏剂)

FT 1.6g、硬脂酸甘油酯7.0g、硬脂酸10.0g、白凡士林12.0g、液状石蜡10.0g、甘油12.0g、十二烷基硫酸钠1.0g、羟苯乙酯0.1g、生理盐水48ml。

制法：取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林及液状石蜡加热融化为油相，另将甘油及48ml生理盐水加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠、羟苯乙酯溶解为水相，然后将水相缓缓倒入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳剂型基质，最后将FT加入制得的乳剂型基质中，搅拌均匀即得。

实施例6(软膏剂)

FT 1.0g、尼泊金甲酯0.2g、白凡士林8.0g、液状石蜡1.0g、羊毛脂1.0g、生理盐水5ml。

制法：取白凡士林、液状石蜡、羊毛脂加热融化后用绢布保温滤过，于150℃温度下干热灭菌1～2h，备用。另取FT、尼泊金甲酯置于研钵中加5ml生理盐水溶解后，加入适量的基质研磨吸收后，再分次递加基质，研匀，无菌分装，即得。

实施例7(凝胶剂)

FT 1.0g、交联型聚丙烯酸钠  1.0g、PEG-4000 8.0g、羊毛脂1.0g、甘油10.0g、苯扎溴铵  1.0ml、生理盐水加至100ml。

制法：称取PEG-4000、甘油置烧杯中微热至完全溶解，加入FT混匀，交联型聚丙烯酸钠加入80ml蒸馏水(60℃)于研钵中研匀后，将交联型聚丙烯酸钠与PEG-4000、甘油、FT、苯扎溴铵混匀，然后加生理盐水加至100ml即得。

实施例8(凝胶剂)

FT 1.0g、尼泊金复合酯0.1g、卡波姆940 25g、丙二醇5g、聚乙二醇2g、PBS(pH7.4)缓冲液加至100ml。

制法：分别称取25g卡波姆940、聚乙二醇2g、丙二醇5g，混合后加入适量注射用水，搅拌，形成凝胶基质；取1.0gFT用0.9ml水溶解，加入到上述凝胶基质中，加入尼泊金复合酯0.1g，然后用PBS(pH7.4)缓冲液加至100ml，灭菌，分装，即得。

实施例9(粉雾剂)

FT 1.0g、尼泊金复合酯0.2g、羧甲基纤维素钠5g、F12(二氯二氟甲烷)适量、Vc 1.0g、蒸馏水100ml。

制法：将FT、尼泊金复合酯、羧甲基纤维素钠、Vc，混合均匀，分装于容器，装阀门轧紧，压入抛射剂F12，即得。

实施例10鼻腔喷雾剂眼刺激性实验

取成成年的白色家兔6只，试验前24小时检查试验用家兔双眼，有异常者不使用。选择实施例1制备的鼻腔喷雾剂进行测试，将家兔一侧下眼睑分开后滴入，给药24小时内不洗眼。以未给药眼为对照，给药后于1，24，48，72小时分别检查眼睛(角膜，结膜和虹膜)，结果见表5。72小时未见刺激反应。

表5实验结果

取成年的白色家兔6只，试验前24小时检查试验用家兔双眼，有异常者不使用。选择实施例3制备的鼻腔喷雾剂进行测试，将家兔一侧下眼睑分开，在眼前约10厘米处迅速喷雾10秒，给药24小时内不洗眼。以未给药眼为对照，给药后于1，24，48，72小时分别检查眼睛(角膜，结膜和虹膜)，结果见表6。72小时未见刺激反应。

表6实验结果

实施例11

分别用生理盐水、1％的去氧胆酸和FT鼻喷雾剂(实施例2制得)对离体蟾蜍上腭进行接触，测定LTCM(纤毛持续运动时间)和观察轮廓界面的纤毛形状，以确定受试品的安全性，实验结果见表7。

表7FT鼻喷雾剂对离体蟾蜍上腭纤毛的影响

受试品和蟾蜍上腭接触后，再经生理盐水清洗，蟾蜍上腭的纤毛可恢复摆动，恢复摆动的LTCM为320±113min，证明这种影响是可逆，而阳性对照和蟾蜍上腭接触后，再经生理盐水清洗，蟾蜍上腭的纤毛的轮廓依然清晰，LTCM为0min。因此证明，受试品的毒性特别低。

Claims (6)

1.一种鼻腔给药制剂，其特征在于该制剂由以下组分组成：FLUTIDE  0.5-3g，尼泊金复合酯 0.03-0.25g，丙二醇 0.80-5.5 g，pH7.4的PBS缓冲液加至 100ml；所述的FLUTIDE是序列为5’-CCTTGTTTCTACT-3’的脱氧寡核苷酸。

2.根据权利要求1所述的鼻腔给药制剂，其特征在于：所述制剂的剂型为滴鼻剂或鼻喷雾剂。

3.根据权利要求书1所述的鼻腔给药制剂在制备预防和治疗H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的药剂中的应用。

4.一种鼻腔给药制剂，其特征在于该制剂由以下组分组成：FLUTIDE  0.5-3g，尼泊金乙酯 0.05-0.3g，丙二醇 0.5-4.0 g，羟丙基β环糊精 0.60-4.0g， pH7.4的PBS缓冲液加至 100ml；所述的FLUTIDE是序列为5’-CCTTGTTTCTACT-3’的脱氧寡核苷酸。

5.根据权利要求4所述的鼻腔给药制剂，其特征在于：所述制剂的剂型为滴鼻剂或鼻喷雾剂。

6.根据权利要求书4所述的鼻腔给药制剂在制备预防和治疗H1N1、H3N2和H5N1流感病毒感染的药剂中的应用。