CN110384795A - 一种预防和控制流感病毒的喷雾及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种预防和控制流感病毒的喷雾及其制备方法,属于流感病毒治疗药物领域,包括以下质量浓度的各组分:JB蛋白0.25%~1.5%、醋酸氯己定0.1%~0.5%、甘油1~5%、余量为水,制备方法是先将醋酸氯己定溶解到纯水中,然后加入甘油,使其充分溶解,然后加入用0.25μm的膜过滤过的JB蛋白,继续搅拌,得到均匀体系,再用纯水将余量补足,搅拌均匀,即得成品,本产品主要是用于对流感病毒具有明显的抑制作用,其中治疗效果能达到98%,且该喷雾生产工艺简单,成本低,副作用小,适合大规模推广使用。
Description
技术领域
本发明属于流感病毒治疗药物领域,尤其一种预防和控制流感病毒的喷雾及其制备方法。
背景技术
流感就是我们常说的流行性感冒,可以导致患者的呼吸系统发生急性的感染,这种疾病是因为流感病毒导致的,属于一种传染性疾病,而且传染性非常强,传播速度非常快。
流感病毒属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae),是一种高突变率、高致病性的RNA病毒。流感病毒包括人甲、乙型流感和禽流感病毒及其亚型。人感染的流感病毒,主要通过空气飞沫等,以人传人的方式传播。人类感染流感病毒以后,可以出现发热、咽痛、喉咙痛、咳嗽、咳痰、全身肌肉酸痛、乏力、眼胀、疲倦等症状,还可以出现呕吐、腹泻等消化道症状。
流感是人类严重的呼吸道传染病,我们需要早期诊断,早期治疗,最好在发病36小时内,尽早给予抗流感病毒药物进行治疗,以免加重病情。流感病毒的高突变特征,决定了开发有效的广谱性抗流感药物的重要性。目前市场上抗流感病毒药物多样,但各有弊端。因此,如何获得高效的且广谱性抗流感病毒的新型制剂产品在国际上已形成重大需求。
发明内容
为了解决现有抗流感病毒药物不具有广谱性的问题,本发明旨在提供一种预防和控制流感病毒的喷雾及其制备方法,该喷雾能有效预防和干预病毒的复制,又不影响正常的细胞代谢,其治疗效果能达到98%。而且该喷雾的生产工艺简单,成本低,副作用小,适合大规模推广使用。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:一种预防和控制流感病毒的喷雾,包括以下质量浓度的各组分:
一种预防和控制流感病毒的喷雾,其特征在于,包括以下质量浓度的各组分:
一种预防和控制流感病毒的喷雾的制备方法:先将醋酸氯己定溶解到纯水中,然后加入甘油,使其充分溶解,然后加入用0.25μm的膜过滤过的JB蛋白,继续搅拌,得到均匀体系,再用纯水将余量补足,搅拌均匀,即得成品。
醋酸氯己定,浓度0.10%-0.5%对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白假丝酵母菌和黑曲霉均具有明显的杀菌作用。
甘油:具有非常好的吸湿性,所以加入甘油的话,可以让产品湿润,柔软,对产品具有非常好的保湿作用。而且甘油喷入呼吸道会形成一层甘油薄膜,隔绝空气的侵入,可以很好的保湿,空气的水分还会被吸收,功效非常好。
JB功能性蛋白(酸酐化牛β-乳球蛋白):具有正确的空间构象,并在生物学合成过程中经正确的化学修饰,在此基础上,具备特定生物学活性的蛋白质。功能蛋白靶点与机理明确,副作用低,模仿天然生物学过程,充分符合仿生医学理念,抗流感病毒-JB蛋白是通过改变乳球蛋白表面的电荷原理,实现阻断病毒传染,又准又快减轻病毒带来的疼痛感和不适感。
本发明针对流感病毒的发病机理来筛选配比,主要机理如下:通过醋酸氯己定杀死表皮细菌,JB蛋白改变乳球蛋白表面的电荷原理,实现阻断病毒传染,同时利用甘油保湿作用使呼吸道保持湿润状态,从而提高呼吸道免疫力,降低流感复发率。
季节性流感每年发生,接种疫苗仍是预防流感最好的办法。但为应对高变异的流感病毒每年需要重新接种,且疫苗有效性的检验需要三至六个月;疫苗对流感抗原具有选择特异性,对季节性流感的预测往往不准,保护作用受限;且疫苗对于儿童和老人等免疫功能低下人群的保护效果不佳。此外,目前可用的流感疫苗仅能抵抗部分甲型和乙型流感病毒毒株,对于H5N1和H7N9等高致病性禽流感病毒的疫苗尚未批准,这使得流感疫苗的应用有很大的局限性。研究新型的、高效广谱的流感疫苗来抵抗高变异的流感病毒,一直是领域难点。
流感病毒感染后治疗主要依赖的已批准产品有离子通道阻滞剂、神经氨酸酶抑制剂和RNA酶抑制剂等。离子通道阻滞剂烷胺类抑制剂,如上市抑制剂金刚烷胺(amantadine)和金刚乙胺(rimantadine);神经氨酸酶抑制剂,如扎那米韦(zanamivir)、奥司他韦(oseltamivir)、拉那米韦(laninamivir)和帕拉米韦(peramivir);RNA聚合酶抑制剂Xofluza,它们的作用机理及其缺陷对比如下表:
综上所述,与传统流感病毒产品相比,我们产品在动物体内,已验证了其对多种流感病毒感染的保护作用,具有预防和干预的效果;作用机制为物理机制,依靠电荷相互作用。并且酸酐化蛋白与流感病毒蛋白为可逆性结合,不产生新的物质;鼻腔使用时,酸酐化蛋白不进入体内血液循环;动物实验显示具有很高的安全性。能起到抑制病毒复制、阻断病毒入侵、提高呼吸道免疫力的作用。并且生物相容性良好,可均匀分布,无刺激性,安全无副作用,适用于多种流感病毒的治疗。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更为明显易懂,下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。
实施例一
一种预防和控制流感病毒的喷雾,成分包括质量浓度分别为JB蛋白0.25%,醋酸氯己定0.1%,甘油1%,余量为水。
以制备一升喷雾为例,JB蛋白浓度为0.25%,即每一千克喷雾中含有2.5gJB蛋白,醋酸氯己定浓度为0.1%,即每千克喷雾中含有1g醋酸氯己定,甘油浓度为1%,即每千克喷雾中含有10g甘油。
具体制备方法是先将醋酸氯己定溶解到50~100g纯水中,搅拌溶解后加入甘油,用高速分散机使其充分溶解,然后将用0.22μm的膜过滤过的JB蛋白加入上述体系中,继续搅拌使其均匀,用纯水将其补足一千克,搅拌均匀,即得成品。
实施例二
一种预防和控制流感病毒的喷雾,成分包括质量浓度分别为JB蛋白0.5%,醋酸氯己定0.2%,甘油2%,余量为水。
以制备一升喷雾为例,JB蛋白浓度为0.25%,即每一千克喷雾中含有5gJB蛋白,醋酸氯己定浓度为0.3%,即每千克喷雾中含有3g醋酸氯己定,甘油浓度为2%,即每千克喷雾中含有20g甘油。
具体制备方法是先将醋酸氯己定溶解到50~100g纯水中,搅拌溶解后加入甘油,用高速分散机使其充分溶解,然后将用0.22μm的膜过滤过的JB蛋白加入上述体系中,继续搅拌使其均匀,用纯水将其补足一千克,搅拌均匀,即得成品。
实施例三
一种预防和控制流感病毒的喷雾,成分包括质量浓度分别为JB蛋白0.75%,醋酸氯己定0.25%,甘油3%,水。
以制备一升喷雾为例,JB蛋白浓度为0.75%,即每一千克喷雾中含有7.5gJB蛋白,醋酸氯己定浓度为0.5%,即每千克喷雾中含有5g醋酸氯己定,甘油浓度为3%,即每千克喷雾中含有30g甘油。具体制备方法是先将醋酸氯己定溶解到50~100g纯水中,搅拌溶解后加入甘油,用高速分散机使其充分溶解,然后将用0.22μm的膜过滤过的JB蛋白加入上述体系中,继续搅拌使其均匀,用纯水将其补足一千克,搅拌均匀,即得成品。
实施例四
一种预防和控制流感病毒的喷雾,成分包括质量浓度分别为JB蛋白1%,醋酸氯己定0.3%,甘油4%,余量为水。
以制备一升喷雾为例,JB蛋白浓度为1%,即每一千克喷雾中含有10gJB蛋白,醋酸氯己定浓度为0.7%,即每千克喷雾中含有7g醋酸氯己定,甘油浓度为4%,即每千克喷雾中含有40g甘油。
具体制备方法是先将醋酸氯己定溶解到50~100g纯水中,搅拌溶解后加入甘油,用高速分散机使其充分溶解,然后将用0.22μm的膜过滤过的JB蛋白加入上述体系中,继续搅拌使其均匀,用纯水将其补足一千克,搅拌均匀,即得成品。
实施例五
一种预防和控制流感病毒的喷雾,成分包括质量浓度分别为JB蛋白1.5%,醋酸氯己定0.5%,甘油5%,水。
以制备一升喷雾为例,JB蛋白浓度为1.5%,即每一千克喷雾中含有15gJB蛋白,醋酸氯己定浓度为1%,即每千克喷雾中含有10g醋酸氯己定,甘油浓度为5%,即每千克喷雾中含有50g甘油。具体制备方法是先将醋酸氯己定溶解到50~100g纯水中,搅拌溶解后加入甘油,用高速分散机使其充分溶解,然后将用0.22μm的膜过滤过的JB蛋白加入上述体系中,继续搅拌使其均匀,用纯水将其补足一千克,搅拌均匀,即得成品。
上述5种实验方案经过抑菌试验及抗流感病毒实验后,配方:JB蛋白浓度为1.5%,醋酸氯己定0.25%,甘油3%,余量为水,抗病毒效果达到90%以上,大肠杆菌抑菌效率为100%,金黄色葡萄球菌抑菌效率90%以上,白色念珠菌抑菌效率80%以上。
为了进一步证明本发明所述的抗流感病毒作用,同时为了配方的安全性,发明人还分别进行了以下试验及分析:
一、检验项目:多次完整皮肤刺激试验
1.样品配制方法:原液
2.试验方法:新西兰兔3只雌性,体重为1.7-3.0kg,试验前24h,将3只家兔背部脊柱两侧毛去掉,不可损伤表皮,去毛范围约3cm×3cm。试验时取受试物0.5mL/只兔,直接涂抹在每兔一侧去毛皮肤上,涂抹面,敷贴面积约为2.5cm×2.5cm,覆盖以纱布并用无刺激绷带固定,另一侧皮肤不处理作空白对照。涂抹4h后用水除去残留受试物,于清除受试物后24h观察结果,进行刺激反应评分。每天涂抹一次,连续涂抹14d。
3.观察指标:每日观察涂抹部位皮肤有无红斑和水肿形成,根据反应程度进行评分,计算14d每只动物积分均值和每天每只动物积分均值。按皮肤刺激强度分级标准判断刺激强度。
4.结果
结果评价:在观察期内受试动物皮肤未出现红斑和水肿(结果见表1)。
表1:多次完整皮肤刺激试验记录表
5.结论:多次完整皮肤刺激试验表明:抗流感病毒喷雾0.5mL/只,连续涂抹14天,每天每只动物积分均值为0,根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)皮肤刺激强度分级标准,属无刺激性。
二、检验项目:急性眼刺激试验
1.样品配制方法:原液。
2.检验方法:新西兰兔3只雌性,体重为1.7-3.0kg。吸取受试物0.1mL,滴入每只家兔一侧眼结膜囊中,将上下眼睑闭合4s至30s后用生理盐水冲洗。另一侧眼睛以生理盐水作为正常对照。于滴眼后1h、24h、48h、72h、7d以及14d和第21d对动物眼睛进行检查。如果72h内未出现刺激反应,或第7天或14天眼刺激反应完全恢复,即可终止试验。必要时,用2%荧光素钠溶液或者放大镜检查角膜及虹膜变化。
3.观察指标:记录每个观察时间点兔角膜、虹膜、结膜刺激反应评分,并计算每只动物在三个观察时间(24h、48h、72h)角膜损伤、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四个方面的“平均评分”(即每只动物的24h、48h和72h评分之和除以观察数3)。再根据平均评分和恢复时间按眼刺激反应分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。
4.结果(结果见表2)。
结果评价:在观察期内,3只兔均未出现异常症状,且3只兔的平均分均为0,根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.3.4眼刺激反应分级标准,实验喷雾对家兔急性眼刺激属无刺激性。
5.结论
急性眼刺激试验表明,抗流感病毒喷雾对兔急性眼刺激的平均分均为0,根据《消毒技术规范》(卫生部2002年版)2.3.4中眼刺激反应分级标准判定,属无刺激性。
表2急性眼刺激试验记录表
三、试验项目:灭活流感病毒H3N2试验
1.实验材料
1.1受试验样品:抗流感病毒喷雾
1.2细胞:MDCK细胞由本实验室传代保存。
1.3病毒:流感病毒H3N2由本实验室制备保存。
1.4实验试剂:DMEM培养基、胎牛血清及其他实验试剂由本实验室提供。
2.实验原理及方法
实验原理:实验采用测定流感病毒蛋白表达水平来检测病毒的复制水平。流感病毒的结构蛋白的表达水平与病毒的复制成正比;实验采用高灵敏度的试剂检测流感病毒蛋白的表达,通过荧光强度的变化反应病毒复制水平并判断有无病毒复制从而测定灭活后病毒的滴度TCID 50,从而反映待测样品的灭活病毒作用。
3.实验步骤:
(1)MDCK细胞接种于96孔细胞培养板中,细胞贴壁后备用;
(2)取0.9mL抗流感病毒喷雾与0.1mL H3N2病毒原液混匀,放37℃孵育1小时作为待测样品,待测样品10倍梯度稀释,7个稀释度,每个稀释度6个复孔,每孔100μL感染MDCK细胞测残余病毒滴度TCID 50;同时用0.9mLPBS与0.1mL H3N2病毒原液混匀放37℃培养箱孵育1小时,作为阳性对照;
(3)感染病毒的细胞于二氧化碳培养箱中继续培养48小时,取上清检测病毒蛋白表达水平,并计算残余病毒滴度TCID 50。(操作依据:《消毒技术规范》2002版)
4.试验结果
表3.抗流感病毒喷雾对流感病毒H3N2的灭活作用记录表
注:“+”表示有病毒复制,“-”表示没有病毒复制,采用Karber法计算TCID 50。
“灰色框”为样品抗病毒作用引起。
4.总结
本次实验在细胞水平上检测了抗流感病毒喷雾在37℃培养箱孵育1小时情况下对流感病毒H3N2的灭活作用。试验结果显示病毒对照组在37℃培养箱孵育1小时的残余病毒滴度为105.5TCID 50/mL,抗流感病毒喷雾组在37℃培养箱孵育1小时的残余病毒滴度为104TCID 50/mL。相对于病毒组,抗流感病毒喷雾组在37℃培养箱孵育1小时条件下对流感病毒H3N2滴度的降低为1.5log,灭活率为96.84%,说明受试验样品抗流感病毒喷雾在37℃培养箱孵育1小时的条件下对流感病毒H3N2具有灭活作用。
以上实施方式仅用于说明本发明,而并非对本发明的限制,有关技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明的原理和范围的情况下,还可以做出各种变化和变型,因此所有等同的技术方案也属于本发明的范畴,本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (3)
1.一种预防和控制流感病毒的喷雾,其特征在于,包括以下质量浓度的各组分:
2.根据权利要求1所述的一种预防和控制流感病毒的喷雾,其特征在于,包括以下质量浓度的各组分:
3.用于制备权利要求1-2中任一所述的一种预防和控制流感病毒的喷雾的制备方法,其特征在于:
先将醋酸氯己定溶解到纯水中,然后加入甘油,使其充分溶解,然后加入用0.25μm的膜过滤过的JB蛋白,继续搅拌,得到均匀体系,再用纯水将余量补足,搅拌均匀,即得成品。
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