CN102164607B - 麝香葡萄果渣提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本文公开了生产麝香葡萄果渣提取物的方法。所述方法可以包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10(重量/重量)、例如0.3到3(重量/重量)的范围内，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2％的多酚含量。本文还公开了一种用作抗氧化剂、例如用作抗衰老补充剂的麝香葡萄果渣提取物。组合物可以包括具有至少2％的多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和其他活性成分。

Description

麝香葡萄果渣提取物的制备方法

与相关申请的交叉参考

本申请要求2008年7月31日提交的美国临时申请No.61/085,371的权益和优先权，所述临时申请在此以其全文引为参考。

技术领域

本公开涉及例如用于抗衰老补充剂中的麝香葡萄果渣提取物以及制备麝香葡萄果渣提取物的方法。

背景技术

活性氧(ROS)是有氧代谢的必然副产物，因此在人类和其他生物体中持续不断地产生。人类还暴露于来自外部/环境来源例如污染、阳光和饮食的ROS。尽管ROS具有不同的化学形式，但它们都对细胞成分和大分子的结构和功能产生有害作用。ROS产生/暴露的强度被称为氧化应激。

氧化应激与慢性炎性疾病例如糖尿病、癌症、动脉粥样硬化和其他心血管疾病以及变性疾病例如阿茨海默氏病和帕金森氏病的发病机理相关。此外，多条证据支持氧化应激是造成正常衰老的核心机制这一观点。因此，对于开发抑制氧化应激的治疗方法存在着需求。

发明概述

据认为，将氧化应激降到最低对于健康和长寿来说是关键的。流行病学数据显示，富含抗氧化剂营养物的饮食提供极大益处。除了经典的抗氧化剂维生素(维生素C和E)之外，膳食植物含有许多在食用后表现出既快速又长期地降低氧化应激的多酚。已经建立了几种用于测量不同食物的抗氧化能力的体外分析法，并且在多酚含量与抗氧化能力之间存在强烈关联。

尽管植物、包括葡萄提供了有前景的抗氧化剂来源，但植物化学物质在人类群体中的广泛使用还存在着显著的障碍。例如，食物中的活性剂的生物利用度对于用作抗氧化剂来说通常不是最佳的。活性剂也可能集中在植物的某些部分中，而这些部分在用于食用的食品的典型制备中比率偏低或被丢弃。相关食物的不同种类也可能具有生物化学差异，使它们对于治疗性应用来说不太合适。

本发明人通过氧自由基吸收能力(ORAC)分析法进行测量，确定了麝香葡萄果渣提取物和虎杖提取物单独和组合(在混合物或膳食补充剂中)的抗氧化能力。样品的亲水性抗氧化能力和亲脂性抗氧化能力都被测量。这些研究证实了混合物或膳食补充剂中的麝香葡萄果渣提取物和虎杖根提取物在产生亲脂性抗氧化能力中的强烈协同效应。在亲脂性条件下表现出的选择性协同是出乎意料的。这些发现证实了含有至少作为基本上纯的白藜芦醇源的虎杖提取物、和麝香葡萄果渣提取物两者的混合物和膳食补充剂，与任一种单独的所述提取物相比具有增加的抗氧化能力。

本文公开了具有增加的抗氧化活性的组合物。在某些公开的实施方案中，组合物包括具有至少2％的多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的最低纯度为至少5％的白藜芦醇，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，从而提供具有抗氧化活性的组合物。在具体实例中，组合物包括具有至少2％的多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的最低纯度为至少5％的白藜芦醇，其中麝香葡萄果渣提取物与白藜芦醇的比率在0.2/1到50/1(重量/重量)、例如5/1到50/1(重量/重量)或20/1到50/1(重量/重量)的范围内，从而提供具有抗氧化活性的组合物。在某些实例中，组合物具有每mg多酚至少24μmol Trolox当量(μmolTE/mg多酚)的总ORAC。

在某些实例中，麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物具有约4％的总多酚含量，并且组合物具有约18比1(重量/重量)的麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇比率。在实例中，组合物具有约0.75比1(重量/重量)的麝香葡萄多酚与白藜芦醇比率。在某些实例中，麝香葡萄果渣提取物在液体中可以包含20％到50％固形物。例如，麝香葡萄果渣提取物在液体中包含约40％固形物。在某些实例中，白藜芦醇包含至少98％的从虎杖(Polygonum cuspidatum)根提取的反式白藜芦醇。

在某些实例中，所公开的组合物还可以包括接骨木提取物、紫色胡萝卜提取物、赋形剂(例如甘油、山梨糖醇、胶体二氧化硅或天然调味添加剂)或其组合。在具体实例中，组合物包括组合物总量的23％到32％的麝香葡萄果渣提取物、总量的1.2％到3.0％的白藜芦醇、总量的0.12％到0.20％的紫色胡萝卜提取物、总量的0.4％到0.6％的接骨木提取物、总量的50％到61％的山梨糖醇、总量的8％到12％的99.7％甘油组合物和总量的1％到2％的胶体二氧化硅。

在更具体的实例中，组合物包括总量的约28.9％的麝香葡萄果渣提取物(包含约4.1％多酚)、总量的约1.65％的白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约54.8％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特(Concord)葡萄提取物、约0.16％的解百纳(Cabernet)葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉。

在另一个具体实例中，组合物包括总量的约23.77％的麝香葡萄果渣提取物(包含约5％多酚)、总量的约1.65％的白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约60％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特葡萄提取物、约0.16％的解百纳葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉。

任何所公开的组合物可采用液体或固体的形式提供在非饮料食品、饮料或膳食补充剂中。此外，任何所公开的组合物可以用作抗氧化剂，例如抗衰老补充剂、包括皮肤改善剂。例如，公开了阻止或抑制细胞衰老的方法，所述方法包括向需要的对象施用本公开的组合物，其施用的剂量足以在摄入组合物的对象中阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程，例如阻止或抑制自由基的形成或活性。

本文还提供了生产所公开的抗氧化组合物的方法。这些方法可以包括将具有至少2％的多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄之外的来源的、反式白藜芦醇最低纯度为至少5％的白藜芦醇组合，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，由此产生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇的混合物。在某些实例中，方法可以包括将具有至少2％的多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的、反式白藜芦醇最低纯度为至少5％的白藜芦醇组合，其中麝香葡萄果渣提取物与白藜芦醇的比率在0.2/1到50/1(重量/重量)、例如5/1到50/1(重量/重量)或20/1到50/1(重量/重量)的范围内，包括18比1(重量/重量)，由此提供具有抗氧化活性的组合物。

所公开的方法还可以包括制备麝香葡萄果渣提取物，然后将麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇组合。在一个具体实例中，制备麝香葡萄果渣提取物包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合。在其他实例中，制备麝香葡萄果渣提取物包括从青铜色麝香葡萄果渣与紫色麝香葡萄果渣的混合物制备提取物。

在具体实例中，方法包括通过将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物相组合来制备麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10(重量/重量)、例如0.3到3(重量/重量)的范围内。在更具体的实例中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.25比1(重量/重量)。

从下面的详细描述中，本公开的上述和其他特点将变得更加明显。

详细描述

I.缩写和术语

(a)缩写

FRAP：血浆三价铁降低能力

mg：毫克

ml：毫升

ORAC：氧自由基吸收能力

ROS：活性氧

TE：Trolox当量

TEAC：Trolox当量抗氧化能力

wt：重量

(b)术语

提供了下面的术语和方法的解释以更好地描述本公开并指导本技术领域的普通专业人员实践本公开。当在本文和随附的权利要求书中使用时，除非上下文另有明确指明，否则不带具体数量指示的名词形式包括其复数指示物。除非上下文另有明确指明，否则术语“或”是指所陈述的可选要素的单一要素或两个或多个要素的组合。本文中使用的“包含”意指“包括”。因此，“包含A或B”意指“包括A、B或A和B”，不排除有其他要素。

除非另有解释，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域中的普通专业人员所通常理解的相同的意义。尽管与本文所述的相似或等价的方法和材料可用于本公开的实践或试验，但是下面描述了适合的方法和材料。此外应该理解，不论是否陈述了单词“约”或“大约”等，任何数量值都是近似值。除非另有指明，否则所有百分率和比率都以重量计算。

施用：通过任何有效途径向对象提供或给予药剂，例如包含麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇的组合物。示例性的施用途径包括但不限于口服、注射(例如皮下、肌肉内、真皮内、腹膜内、静脉内和肿瘤内)、舌下、透皮、鼻内、局部和吸入途径。

抗氧化活性：包括清除和中和氧化性自由基的活性。抗氧化活性可以使用本文公开的方法以及本技术领域已知的方法来测量，包括氧自由基吸收能力(ORAC)分析法、血浆三价铁降低能力(FRAP)分析法和Trolox当量抗氧化能力(TEAC)分析法。例如，如果组合物具有至少24μmol Trolox当量/mg多酚(μmolTE/mg多酚)的总ORAC，则其具有抗氧化活性并可用作抗氧化剂。

接骨木(西洋接骨木(Sambucus nigra))：一种见于欧洲和北美洲的属于五福花科(Adoxaceae)的植物，具有几个地区性品种或亚种。花为平的伞状花序。浆果为黑色到蓝绿色，并含有花青苷和其他多酚物质，其中花青苷和其他多酚物质的量和类型随品种而变。

“接骨木提取物”可以是按照本技术领域的专业人员已知的任何提取方法提取接骨木所获得的物质，只要它具有所需活性(例如颜色稳定活性、抗氧化活性或其组合)即可。例如，接骨木提取物可以包括通过压榨接骨木果实而获得的果汁，或通过本技术领域的专业人员所通常了解的任选提取方法提取接骨木的整果或果实的果皮或种子的适合部分而获得的提取物等。此外，接骨木果实压碎产物或干燥的接骨木果实浓缩物，可以用作“接骨木提取物”。

赋形剂：用作组合物活性成分的载体的无活性物质。赋形剂可以包括用于为具有非常强活性成分的制剂增加体积、允许方便和精确配剂量、使活性成分稳定和使递送系统在光学和/或器官感觉上(organoleptically)可接受的物质。药用赋形剂的实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。在具体实例中，所公开的抗衰老补充剂包括下列赋形剂：甘油、山梨糖醇、胶体二氧化硅和天然调味添加剂。

抑制(包括阻止)细胞衰老：在摄入组合物的对象中抑制(例如阻止)与细胞衰老相关的一个或多个过程，例如抑制自由基的形成或活性。阻止细胞衰老是指改善细胞衰老的征兆或症状的干预。阻止包括预防以延迟与细胞衰老相关的一个或多个过程的发生。细胞衰老的阻止或抑制不需要完全没有细胞衰老。在具体实例中，所公开的组合物使与细胞衰老相关的过程降低或延迟至少10％、至少20％、至少50％或甚至至少90％。这样的降低可以使用本文公开的方法以及本技术领域已知的方法测量。

麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitus rotundifolia))：原产于美国东南部的葡萄，见于从特拉华河(Delamare)到墨西哥湾并向西到密苏里、堪萨斯、俄克拉荷马和德克萨斯的野外。麝香葡萄非常适应美国东南部的温暖潮湿条件。结出的果实是3-40颗葡萄的松散小簇，与欧洲和美洲葡萄的大的、紧密成束的特征显著不同。果实圆形，1到1-1/2英寸，具有厚的、坚韧的果皮，并含有最多5粒坚硬的椭圆形种子。果实的颜色范围从发绿的青铜色到青铜色、桃红色、紫色和几乎黑色。

麝香葡萄有许多不同品种可用，包括雌性(仅有雌蕊的)品种例如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme和Sweet Jenny，以及自花授粉的的品种例如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。

例如，本技术领域的专业人员所鉴定的青铜色麝香葡萄品种包括Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、Sterling和Summit栽培品种。紫色到黑色品种包括Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-1、Hunt、NC-1、Noble、Regale、Tarheel和Jumbo。

完整的麝香葡萄的植物化学成分与欧洲葡萄(Vitis vinifera)不同。麝香葡萄具有较高的总酚类物质含量，特征为鞣花、没食子和类黄酮糖苷的浓度高。鞣花酸在麝香葡萄中的存在是独有的，其被发现是游离鞣花酸、鞣花酸糖苷、甲氧基化衍生物和鞣花单宁的形式。另一个独有特点是在麝香葡萄中观察到的花青苷化学。这些化合物以非酰化形式作为花翠素、花青素、矮牵牛素、甲基花青素和二甲花翠素的3，5-二葡萄糖苷(与3-葡萄糖苷相反)存在，与葡萄中存在的其他花青苷的天然颜色影响一起，赋予果汁和果渣深紫色。紫色果渣提取物含有花青苷，而青铜色果渣提取物不含。

红色和紫色花青苷是具有抗氧化性质的多酚类化合物。黄酮醇是完整麝香葡萄中存在的第二丰富的类黄酮。麝香葡萄果皮级份中报道的主要酚类物质(以降序)是鞣花酸、杨梅黄酮、槲皮黄酮和莰非醇，而种子中报道的是表儿茶素、儿茶素和没食子酸(Patrana-Bonilla等，J.Agric.Food Chem.51：5497-5503，2003)。

可药用介质：可用于本公开的可药用介质(载体)是常规的。E.W.Martin主编的《Remington药物学》(Remington’s PharmaceuticalSciences)，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版(1995)中描述了适用于一种或多种组合物、例如一种或多种麝香葡萄组合物与其他药剂的药物递送的组合物和制剂。

一般来说，介质的性质取决于所使用的具体给药方式。例如，肠胃外制剂通常包含可注射流体，其包括可药用和生理可接受的流体例如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水、甘油等作为介质。对于固体组合物(例如粉剂、丸剂、片剂或胶囊形式)来说，常规的无毒固体介质可以包括例如药用级甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性介质之外，待施用的药物组合物可以包含少量无毒辅助物质，例如润湿或乳化剂、防腐剂、pH缓冲剂等，例如乙酸钠或失水山梨糖醇单月桂酸酯。

纯化的：术语纯化的不需要绝对纯度；相反，它打算用作相对术语。因此，例如，纯化的物质是其中物质比该物质在其天然环境中例如在果实(例如葡萄)中更加富集的物质。在一个实施方案中，制备物被纯化，使得物质占制备物总含量的至少约5％(例如但不限于至少10％、20％、30％、40％、50％、70％、80％、90％、95％、98％或99％)。在实例中，所公开的具有抗氧化活性的组合物包括反式白藜芦醇，其最低纯度为总白藜芦醇制备物的至少50％、70％、80％、90％、95％、98％或99％(以重量计)。

果渣：在果汁提取后剩余的果皮、种子和果肉。在一个实例中，果渣提取物是青铜色麝香葡萄果渣提取物、紫色麝香葡萄果渣提取物或其组合。许多不同品种的麝香葡萄果渣可用作原料，它们包括雌性(仅有雌蕊的)品种例如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme和Sweet Jenny，以及自花授粉品种例如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、FrySeedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。

麝香葡萄果渣含有具有抗氧化性质的酚类化合物，包括没食子酸和鞣花酸。

紫色胡萝卜(Daucus carota)：含有花青苷色素的胡萝卜栽培品种。“紫色胡萝卜提取物”可以是按照本技术领域的专业人员已知的任何提取方法提取紫色胡萝卜所获得的物质，只要它具有所需活性(例如颜色稳定活性、抗氧化活性或其组合)即可。在一个实例中，紫色胡萝卜提取物具有稳定麝香葡萄颜色色素的性质，并因此能够随后用作颜色稳定添加剂。

白藜芦醇：一种植物抗毒素，属于芪类化合物，是芪的衍生物，并且在植物中在芪合酶的帮助下产生。白藜芦醇作为两种结构异构体存在：顺式和反式白藜芦醇。当加热或暴露于紫外辐射时，反式白藜芦醇可以经历异构化变成顺式形式。

白藜芦醇以各种各样的量存在于葡萄、覆盆子、桑椹、李、花生、越桔物种包括蓝莓、欧洲越桔和蔓越桔的浆果、某些松树例如欧洲赤松和东部白松以及大虎杖和虎杖的根和茎中。在葡萄中，白藜芦醇主要发现于果皮和种子中。在葡萄果皮中发现的白藜芦醇的量，随着葡萄的栽培品种、其地理起源和在真菌感染中的暴露而变。

在本文中使用的术语白藜芦醇可以包括从植物例如葡萄提取的天然反式白藜芦醇或合成的反式白藜芦醇。当在本文中使用时，术语白藜芦醇可以包括反式白藜芦醇的改性制剂，例如微囊化或可水分散的形式。

对象：活的多细胞有脊椎生物体，其类别包括人类和兽医对象两者。

治疗有效量：可单独或与其他药剂(例如其他抗氧化剂)一起诱导所需的响应(例如阻止或抑制细胞衰老)的组合物的量。本文公开的制备物可以治疗有效量施用。

在一个实例中，所需的响应是施用组合物的对象中抑制或减少与一个或多个细胞衰老过程相关的自由基的产生或活性。对于组合物的有效性来说，自由基的产生或活性不需被完全消除。例如，与不存在组合物情况下的自由基产生或活性相比，组合物可以将产生或活性降低期望的量，例如降低至少10％、至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少98％。

所公开的麝香葡萄果渣提取物组合物的治疗有效量，可以例如在治疗过程期间每日以单剂或几剂给药。但是，治疗有效量可以取决于受治对象、受治病症的严重性和类型以及给药方式。例如，如果口服给药，这种药剂的治疗有效量可以在每日约1到约500毫克反式白藜芦醇、麝香葡萄多酚或其组合的范围内变化。

单位剂量：含有经计算能够单独或共同产生所需效应例如治疗效应的预定量活性物质的物理上独立的单位。单个单位剂量或多个单位剂量可用于提供所需的效应或活性，例如抗氧化活性。在一个实例中，单位剂量包括阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程的所需药剂量。

II.几个实施方案的描述

已经对植物药剂作为可用于减少氧化应激的营养剂的潜在来源进行了广泛研究。红葡萄是成为深入研究对象的众多食物之一。红葡萄的抗氧化效应被大体上归因于多酚类化合物例如白藜芦醇和原花青素，后者在葡萄中以显著量存在。

本发明人进行了一系列研究以开发足以提高鞣花酸的最大溶解度的麝香葡萄果渣提取物。现在已经发现，未浓缩的65％比35％的青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物(体积/体积)比率提高了鞣花酸在两种果渣提取物之间的最大溶解度。

确定鞣花酸(其是麝香葡萄独有的)在麝香葡萄果渣提取物中的最大溶解度，允许制备鞣花酸溶解度增加的提取物(并因此获得了果渣的多酚分布图)，其进一步允许制备具有改进的抗氧化活性的提取物。因此，本文公开了具有改进的鞣花酸溶解度的麝香葡萄果渣提取物以及使用这些提取物的方法。例如，所公开的麝香葡萄提取物可以单独或与其他化合物组合，在非饮料食品、饮料、膳食补充剂或局部用软膏中给药。还提供了生产麝香葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3(重量/重量)的范围内。

此外，通过ORAC分析法测量，本发明人测定了所公开的麝香葡萄果渣提取物和归一化到98％反式白藜芦醇的虎杖提取物分别或组合(在混合物或膳食补充剂中)的抗氧化能力。测量了样品的亲水性抗氧化能力和亲脂性抗氧化能力两者。这些研究证实了在混合物或膳食补充剂中，麝香葡萄果渣提取物和归一化到98％反式白藜芦醇的虎杖根提取物在产生亲脂性抗氧化能力中的强烈协同效应。在亲脂性条件下表现出的选择性协同是出乎意料的。此外，尽管在组合物中使用的麝香葡萄提取物可以是可能随物种、提取工艺等而变的天然提取物，但只要维持所公开的麝香葡萄多酚与白藜芦醇的比率，即可保留协同的亲脂性抗氧化活性。

这些发现证实了含有归一化到98％反式白藜芦醇的虎杖提取物、和麝香葡萄果渣提取物两者的混合物和膳食补充剂，与任一种单独的提取物相比具有增加的亲脂性抗氧化能力。重要的是，在亲脂性环境中发生的氧化性过程据认为引起和/或启动了多种疾病状态的病理发生，例如动脉粥样硬化中的低密度脂蛋白(LDL)氧化和II型糖尿病中肥胖诱导的胰岛素抗性。此外，膳食脂类在胃肠道内的氧化导致细胞毒性和基因毒性脂质过氧化产物例如丙二醛(MDA)的吸收。因此，所公开的具有高亲脂性抗氧化能力的组合物可以提供有益作用，抵消上面提到的脂类氧化的有害结果。

该发现能够提供具有改进的抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物组合物以及生产这些组合物的方法。例如，本文中公开的具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物，可以在非饮料食品、饮料、液体或固体膳食补充剂或局部用软膏中给药。所公开的组合物的生产方法可以包括将具有至少2％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄之外的来源、最低纯度为至少5％的反式白藜芦醇相组合，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，由此产生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇混合物。所公开组合物的生产方法还可以包括将具有至少2％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄之外的来源、最低纯度为至少5％的反式白藜芦醇相组合，其中麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇的比率在0.2/1到50/1(重量/重量)例如5/1到50/1(重量/重量)、包括20/1到50/1(重量/重量)的范围内，例如18比1(重量/重量)，由此产生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇混合物。

已发现亲脂性抗氧化剂能够有效阻止各种类型的皮肤伤害，例如但不限于抑制脂质过氧化作用和由脂质过氧化产生的产物，例如交联剂。已知氧化应激是构成正常衰老基础的核心机制。在本文中显示，所公开的组合物具有改进的亲脂性抗氧化活性。基于这些观察，公开了抑制细胞衰老、例如阻止或抑制自由基的产生或活性的方法。方法包括使用所公开的具有改进的抗氧化能力的组合物(例如膳食补充剂)作为抗衰老补充剂。例如，能够提供在摄入混合物或膳食补充剂组合物的对象中阻止或降低与细胞衰老相关的一个或多个过程、例如减少或抑制自由基的生产或活性的方法。

A.麝香葡萄果渣提取物

本文公开了源自于青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣的麝香葡萄果渣提取物。在某些实施方案中，麝香葡萄果渣提取物中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3(重量/重量)的范围内。例如，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.75比约1(重量/重量)、2.5比约1(重量/重量)、约2.25比约1(重量/重量)、约2比约1(重量/重量)、约1.5比约1(重量/重量)或约1比约1(重量/重量)。本文中使用的术语“约”被定义为±0.5。在具体实例中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.25比约1(重量/重量)。

在某些实施方案中，所公开的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣提取物具有至少2％的多酚含量。例如，多酚含量为至少3％、至少3.5％、至少4％、至少4.5％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％或至少14％。在具体实例中，麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物具有约4％的多酚含量。

在某些实施方案中，所公开的麝香葡萄果渣提取物在液体中包含20％到50％固形物，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少37％、至少40％、至少42％、至少44％、至少46％或至少48％。在具体实例中，提取物在液体中包含约40％固形物。

B.麝香葡萄果渣提取物的制备方法

还公开了制备麝香葡萄果渣提取物的方法，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.3到3(重量/重量)范围内。在一个公开的实施方案中，通过将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合来制备麝香葡萄果渣提取物。在一个具体实施例中，通过将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合来制备麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10(重量/重量)、包括从0.3到3(重量/重量)的范围内，例如约2.75比约1(重量/重量)、2.5比约1(重量/重量)、约2.25比约1(重量/重量)、约2比约1(重量/重量)、约1.5比约1(重量/重量)或约1比约1(重量/重量)。在更具体的实例中，通过将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合来制备麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率约为2.25比1(重量/重量)。

在某些实例中，制备麝香葡萄果渣提取物的方法可以包括分别制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物。例如，使用水、优选为加热的水分别提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物还可以包括对青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物进行发酵，以除去提取到的糖类。在一个实例中，发酵在提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣之后、但是在青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合之前进行，以生产所公开的麝香葡萄果渣提取物。在其他实例中，发酵在将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物以所需的提取后比率(例如约2.25比1的青铜色与紫色比率)组合后进行。

发酵可以通过本技术领域的专业人员已知的任何方法、包括本文描述的方法来进行。例如，发酵可以包括向果渣加入酵母和酵母营养物，并使提取物发酵直到残留的糖内含物被转化成乙醇。典型情况下，人们在每1000加仑1X(未浓缩的)提取物中使用2磅酵母。在这样的实例中，发酵典型在3天后完成。在其他实例中，酵母的量和/或菌株以及发酵的持续时间和温度可以随本技术领域的专业人员所知的具体方法而变。在某些实例中，可以使用酶在果渣提取物中澄清和/或沉降残渣，或改进提取收率。例如，这些酶可以包括果胶酶或来自黑曲霉(Aspergillus niger)的酶的混合物，并可以从供应源例如ScottLaboratories商购。这些酶可以在发酵前或发酵期间添加到果渣提取物中。

在某些实施方案中，制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物包括对青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物进行过滤。例如，可以在发酵之前和/或之后过滤青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物。过滤可以按照本技术领域的专业人员已知的通用方法、包括本文中公开的过滤方法来进行。在具体实例中，提取物通过具有适合筛眼大小的筛网过滤，例如USP筛网(典型为120目)或类似的滤布(例如可以从Millipore Corporation商购的滤器)。

在其他实施方案中，制备麝香葡萄果渣提取物可以包括将青铜色麝香葡萄果渣与紫色麝香葡萄果渣以所需比率组合，并同时提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。例如，使用水、优选为加热的水同时提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣，以产生所公开的麝香葡萄果渣提取物。在某些实施方案中，该方法还可以包括对麝香葡萄果渣提取物进行发酵以除去提取到的糖类。正如前面所述，可以使用本技术领域的专业人员已知的任何发酵方法，包括本文中描述的方法。例如，发酵可以包括向果渣加入酵母和酵母营养物，并使提取物发酵直到残余的糖内含物被转化成乙醇。在一个实例中，发酵包括在每1000加仑1X提取物中加入2磅酵母，并允许提取物在室温下保持约3天或直到残余的糖内含物被转化成乙醇。该公开方法还可以包括对麝香葡萄果渣提取物进行过滤。例如，可以在发酵之前和/或之后对麝香葡萄果渣提取物进行过滤。过滤可以按照本技术领域的专业人员已知的通用技术、包括本文公开的过滤方法来进行。

在某些实施方案中，制备麝香葡萄果渣提取物的方法还包括浓缩青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，以便每种提取物在液体中包含20％到50％的固形物，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少37％、至少40％、至少42％、至少44％、至少46％或至少48％。在具体实例中，将提取物浓缩以便每种提取物在液体中包含约40％固形物。可以使用公知的用于浓缩样品的方法、包括本文公开的用于浓缩样品的方法来浓缩青铜色和紫色提取物。

在具体实例中，为了制备含有40％固形物的麝香葡萄果渣提取物，将麝香葡萄果渣提取物干燥成粉末形式，并在水中复溶成40％固形物水平。可选地，并且在商业上更加可接受的方法，是通过在真空下蒸发除去提取溶剂来进行浓缩。这可以通过批式或连续工艺来实现。批式工艺包括将提取物置于容器中，抽到20-29”汞柱的真空，同时加热容器夹套来提供能量以增加溶剂的蒸汽压。将溶剂蒸汽冷凝到容器外部，冷凝的速率控制冷凝物的温度。同样的原理适用于连续蒸发工艺，但优点是缩短了冷凝物暴露于高温的时间长度。两种工艺都适用于本文描述的麝香葡萄果渣提取物的浓缩。

在具体实施方案中，制备麝香葡萄果渣提取物的方法包括分别提取青铜色和紫色果渣，然后过滤每种提取物，然后将青铜色和紫色果渣提取物以所需比率组合。在某些实例中，该方法还可以包括对合并的麝香葡萄果渣提取物进行发酵，以除去提取到的糖类。正如前面所述，可以使用本技术领域的专业人员已知的任何发酵方法，包括本文描述的方法。在一个实例中，方法包括一个以上的过滤步骤，例如在发酵之前和之后对提取物进行过滤。在某些实例中，方法还可以包括如本文所述浓缩提取物。例如，方法可以包括通过在真空下蒸发以除去提取溶剂来浓缩提取物。

C.具有抗氧化活性的组合物

本文公开了具有改进的抗氧化活性的组合物。在某些所公开的实施方案中，组合物包括具有至少2％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的最低纯度为至少5％的反式白藜芦醇，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，从而提供具有抗氧化活性的组合物。

在某些实例中，组合物包括具有至少3％、至少3.5％、至少4％、至少4.5％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％或至少14％的总多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源的最低纯度为至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少98％的反式白藜芦醇。在具体实例中，组合物包含具有约4％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源的最低纯度为至少98％的反式白藜芦醇。

在具体实施方案中，组合物包括在液体中具有20％到50％固形物、例如至少23％、至少25％、至少30％、至少35％、至少37％、至少40％、至少42％、至少44％、至少46％或至少48％固形物的麝香葡萄果渣提取物。在具体实例中，提取物在液体中包含约40％固形物。

在某些实施方案中，白藜芦醇包含至少5％反式白藜芦醇，例如至少10％反式白藜芦醇、至少20％反式白藜芦醇、至少30％反式白藜芦醇、至少40％反式白藜芦醇、至少50％反式白藜芦醇、至少55％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少98％反式白藜芦醇。在具体实施方案中，白藜芦醇包含至少50％反式白藜芦醇，例如至少55％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少98％从虎杖(Polygonum cuspidatum)根提取的反式白藜芦醇。考虑到了在本公开的组合物中可以使用其他反式白藜芦醇来源，包括合成的反式白藜芦醇。

在某些实施方案中，所公开的抗氧化组合物具有至少0.1比1(重量/重量)的麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇比率，例如0.25比1、0.5比1、0.6比1、0.65比1、0.7比1、0.75比1、0.8比1、0.9比1或1比1(重量/重量)。在其他实施方案中，麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率可以高达10比1(重量/重量)，例如2比1、3比1、4比1、5比1、7.5比1或9比1(重量/重量)。在具体实例中，所公开的抗氧化组合物具有0.75比1(重量/重量)的麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇比率。

在某些实施方案中，所公开的抗氧化组合物具有0.2/1到50/1(重量/重量)范围内的麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇比率，例如0.5比1、1比1、5比1、10比1、15比1、20比1、22比1、25比1、30比1、35比1、40比1或45比1(重量/重量)。

在某些实施方案中，所公开的具有抗氧化活性的组合物具有每mg多酚至少21μmol Trolox当量(μmolTE/mg多酚)的总ORAC，例如至少22μmolTE/mg多酚、至少24μmolTE/mg多酚、至少26μmol TE/mg多酚、至少28μmolTE/mg多酚或至少30μmolTE/mg多酚。在一个实例中，所公开的组合物具有24μmolTE/mg多酚的总ORAC。

在某些实例中，所公开的组合物还可以包含接骨木提取物、紫色胡萝卜提取物、赋形剂(例如甘油、山梨糖醇、胶体二氧化硅或天然调味添加剂)或其组合。例如，可以包含接骨木提取物和紫色胡萝卜提取物，为组合物提供颜色或附加的抗氧化活性。

在具体实例中，组合物包含占组合物总量的23％到32％(例如23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％或32％)的麝香葡萄果渣提取物(含有约4％到5％多酚含量)、总量的1.2％到3.0％(例如1.3％、1.5％、1.7％、1.9％、2.1％、2.3％、2.5％、2.7％或2.9％)的反式白藜芦醇、总量的0.12％到0.20％(例如0.12％、0.14％、0.16％、0.18％或0.20％)的紫色胡萝卜提取物、总量的0.4％到0.6％(例如0.4％、0.45％、0.5％、0.55％或0.6％)的接骨木提取物、总量的50％到61％(例如51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或60％)的山梨糖醇、总量的8％到12％(例如8％、9％、10％、11％或12％)的99.7％甘油组合物，以及总量的1％到2％(例如1.2％、1.5％、1.7％或2％)的胶体二氧化硅。在其他具体实例中，组合物包含总组合物的8％到60％的麝香葡萄果渣提取物(含有以液体重量计2％到14％的麝香葡萄多酚)和总组合物的1.2％到3.0％的反式白藜芦醇。

在更具体的实例中，组合物包含总量的28％到30％的麝香葡萄果渣提取物、总量的1％到2％的白藜芦醇、总量的0.1％到0.2％的紫色胡萝卜提取物、总量的0.4％到0.5％的接骨木提取物、总量的53％到56％的山梨糖醇、总量的9％到11％的99.7％甘油组合物、总量的1.5％到2％的胶体二氧化硅、约1％到2％的康科特葡萄提取物、约0.1％到0.2％的解百纳葡萄提取物和0.4％到0.5％的红葡萄粉。

在更加具体的实例中，组合物包含总量的约28.9％的麝香葡萄果渣提取物(含有4.1％的多酚含量)、总量的约1.65％的反式白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约54.8％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特葡萄提取物、约0.16％的解百纳葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉。

在另一个具体实例中，组合物包含总量的23％到25％的麝香葡萄果渣提取物、总量的1％到2％的白藜芦醇、总量的0.1％到0.2％的紫色胡萝卜提取物、总量的0.4％到0.5％的接骨木提取物、总量的58％到61％的山梨糖醇、总量的9％到11％的99.7％甘油组合物、总量的1.5％到2％的胶体二氧化硅、约1％到2％的康科特葡萄提取物、0.1％到0.2％的解百纳葡萄提取物和0.4％到0.5％的红葡萄粉。

在另一个更加具体的实例中，组合物包含总量的约23.77％的麝香葡萄果渣液体提取物(含有5％的多酚含量)、总量的约1.65％的反式白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约60.05％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特葡萄提取物、约0.16％的解百纳葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉。

任何所公开的组合物可以提供在非饮料食品、饮料或液体或固体膳食补充剂中。在某些实例中，所公开的组合物被提供成饮料。本文的组合物(特别是食品、饮料和膳食补充剂组合物)可以用一种或多种营养物质、特别是一种或多种维生素和/或矿物质强化。维生素和矿物质的美国推荐每日摄入量(U.S.Recommended Daily Intake)(USRDI)在国家科学院-国家研究理事会下食品和营养委员会(Foodand Nutrition Board，National Academy of Sciences-National ResearchCouncil)的《推荐每日膳食允许量》(Recommended Daily DietaryAllowance)中规定和说明。除非在本文中另有规定，否则当产品中存在给定矿物质时，产品包含这种矿物质的USRDI的至少约1％，例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约75％、至少约100％、至少约150％。除非在本文中另有规定，否则当产品中存在给定维生素时，产品包含这种维生素的USRDI的至少约1％，例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约50％、至少约75％、至少约100％、至少约150％。所添加的维生素和矿物质的量可以取决于加工方法和制剂中其他成分的浓度。

这些维生素和矿物质的非限制性的实例包括铁、锌、铜、钙、磷、烟酸、硫胺素、叶酸、泛酸、碘、维生素A、维生素C、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、维生素D、维生素E和维生素K。商购来源的维生素和矿物质也可以包含在本发明的组合物中。

例如，可以使用这些矿物质适合于包含在可食用产品中的任何可溶性盐，例如柠檬酸镁、葡萄糖酸镁、硫酸镁、氯化锌、硫酸锌、碘化钾、硫酸铜、葡萄糖酸铜和柠檬酸铜。钙的来源可以包括例如氨基酸螯合钙、碳酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硫酸钙、氯化钙、磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、柠檬酸钙、苹果酸钙、calcium titrate、葡萄糖酸钙、calcium realate、calcium tantrate和乳酸钙，特别是柠檬酸-苹果酸钙。当在本文中使用时，“维生素A”包括但不限于视黄醇、β-胡萝卜素、视黄醇棕榈酸酯和视黄醇乙酸酯。维生素A可以采用油、珠丸(beadlet)或囊封的形式。也可以使用囊封的抗坏血酸和抗坏血酸的可食用盐。碘的来源包括含碘盐类，例如碘化钠、碘化钾、碘酸钾、碘酸钠或其混合物。这些盐类可以被囊封。铁的可接受形式在本技术领域中是公知的。掺入到组合物中的铁化合物的量将随最终产品中所需的增补水平和所针对的消费者而变化很大。本公开的铁强化组合物典型地包含铁的USRDI的约5％到约100％，例如约15％、约25％、约40％、约50％、约70％、约80％或约90％。

亚铁典型地比三价铁更好被身体利用。可用于本公开的可摄取组合物的高度生物可利用的亚铁盐是硫酸亚铁、延胡索酸亚铁、琥珀酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、乳酸亚铁、酒石酸亚铁、柠檬酸亚铁、亚铁氨基酸螯合物以及这些亚铁盐的混合物。尽管亚铁典型生物利用度更高，但某些三价铁盐也能提供高度生物可利用的铁源。可用于本公开的食品或饮料组合物中的高度生物可利用的三价铁盐是蔗糖铁、柠檬酸铁铵、柠檬酸铁、硫酸铁以及这些三价铁盐的混合物。高度生物可利用亚铁和三价铁盐的组合或混合物可用于这些可食用混合物和即食饮料中。除了这些高度生物可利用的亚铁和三价铁盐之外，生物可利用的铁的其他来源可以包含在本公开的食品和饮料组合物中。特别适合于强化产品的铁的其他来源包括某些铁-糖-羧酸复合物。

可用于本公开的组合物的锌化合物可以采用任何常用形式，例如硫酸锌、氯化锌、乙酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸锌、柠檬酸锌、天冬氨酸锌、吡啶甲酸锌、氨基酸螯合锌和氧化锌。

在某些实例中，食品和饮料组合物还可以包含一种或多种膳食纤维。“膳食纤维”是指对哺乳动物酶类的消化有抗性的复杂碳水化合物，例如见于植物细胞壁和海藻中的碳水化合物，以及通过微生物发酵生产的碳水化合物。这些复杂碳水化合物的实例是麸皮、纤维素、半纤维素、果胶、树胶和粘胶、海藻提取物、和生物合成的树胶。纤维素质纤维的来源包括蔬菜、水果、种子、谷类和人造纤维(例如由细菌合成)。也可以使用可商购纤维例如纯化的植物纤维素或纤维素粉。天然存在的纤维包括来自完整柑橘果皮、柑橘内皮、甜菜、柑橘果肉和果囊固形物、苹果、杏和西瓜皮的纤维。

可以通过已知和常规的方法例如使用食品级酸缓冲剂将饮料酸度调整到并维持在必要范围内。典型地，上面提到的范围内的饮料酸度是抑制微生物的最高酸度与所需饮料口味的最适酸度之间的平衡。在某些实例中，饮料组合物具有约2到约8的pH，例如约2到约4.5或约2.7到约4.2。

可以使用有机以及无机的可食用酸来调整饮料组合物的pH。酸可以其未解离的形式或，可选地，作为其相应的盐存在，例如磷酸氢钾或钠、磷酸二氢钾或钠盐。在某些实例中，酸包括柠檬酸、苹果酸、延胡索酸、己二酸、磷酸、葡萄糖酸、酒石酸、抗坏血酸、乙酸、磷酸、丙酮酸或其混合物。酸化剂也可以用作抗氧化剂以稳定饮料组分。常用的抗氧化剂的实例包括但不限于抗坏血酸、EDTA(乙二胺四乙酸)及其盐。

D.具有抗氧化活性的麝香葡萄组合物的制备方法

还公开了具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物组合物的制备方法。本发明的组合物可以按照普通专业人员熟知的方法来制造。一般来说，可以通过将所有组分单独或适当地组合在一起，在水中溶解、分散或以其它方式混合，适合的情况下用机械搅拌器搅拌直到所有成分已经溶解或充分分散，来制备组合物。在适合时，可以将所有分离的溶液组合。当需要储存稳定的组合物时，最终的混合物可以任选地在适合的工艺条件下进行巴斯德消毒或无菌装填。

这些方法可以包括将含有至少2％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄之外的来源的最低纯度为至少5％(例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％)的白藜芦醇组合，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，由此产生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇的混合物。所公开的方法还可以包括制备麝香葡萄果渣提取物，然后将麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇组合。

在一个具体实例中，制备麝香葡萄果渣提取物包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合。在其他实例中，制备麝香葡萄果渣提取物包括同时提取青铜色麝香葡萄果渣与紫色麝香葡萄果渣的混合物。在某些实例中，包含在本公开的组合物中的麝香葡萄果渣提取物按照本文公开的方法制备。但是，考虑到了麝香葡萄果渣提取物可以按照本技术领域的已知方法制备，包括通过压碎、压榨、提取、过滤(几次)、并通过真空蒸发然后冷冻来浓缩提取物。在一个实例中，在提取工艺中只使用水，不向提取物自身添加其他成分例如溶剂、载体或防腐剂。工艺在保存多酚类化合物同时减少存在的其他分子例如大部分糖类的条件下进行。在其他实例中，提取工艺利用了乙醇或乙醇与水的混合物。在具体实例中，提取工艺还可以包括使用酶类来澄清或促进提取。例如，来自黑曲霉(Aspergillus niger)或果胶酶的酶的混合物可用于这些目的。商业化的实例包括来自ScottLaboratories的Scottzyme KS和Scottzyme PEC5L。

在其他实例中，通过利用总酚浓度为至少2％的麝香葡萄果渣提取物来制备所公开的组合物。例如，可以使用总酚浓度为至少2％的可商购麝香葡萄提取物来制备所公开的具有抗氧化活性的组合物。

在具体实例中，具有抗氧化活性的组合物的制备方法还可以包括将麝香葡萄果渣提取物和白藜芦醇与接骨木提取物、紫色胡萝卜提取物、赋形剂(例如甘油、山梨糖醇、胶体二氧化硅或天然调味添加剂)或其组合进行组合。在具体实例中，方法包括将总组合物的23％到32％的麝香葡萄果渣提取物(含有约4％到约5％多酚含量)与总量的1.2％到3.0％的反式白藜芦醇、总量的0.12％到0.20％的紫色胡萝卜提取物、总量的0.4％到0.6％的接骨木提取物、总量的50％到61％的山梨糖醇、总量的8％到12％的99.7％甘油组合物和总量的1％到2％的胶体二氧化硅进行组合。

在更具体的实例中，组合物包括将总量的约28.9％的麝香葡萄果渣提取物(含有4.1％多酚含量)与总量的约1.65％的白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约54.8％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特葡萄提取物、约0.16％的解百纳葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉相组合。

在另一个更具体的实例中，组合物包括将总量的约23.77％的麝香葡萄果渣液体提取物(含有5％多酚含量)与总量的约1.65％的反式白藜芦醇、总量的约0.16％的紫色胡萝卜提取物、总量的约0.48％的接骨木提取物、总量的约60.05％的山梨糖醇、总量的约10％的99.7％甘油组合物、总量的约2％的胶体二氧化硅、约1.27％的康科特葡萄提取物、约0.16％的解百纳葡萄提取物和约0.48％的红葡萄粉相组合。

在即饮组合物的制备中，可以任选地首先形成饮料浓缩物。制备浓缩形式的饮料组合物的一种方法，是以比在饮料组合物的制备中所需的水体积更少的水开始。另一种方法是将最终制备的饮料组合物部分脱水，以仅除去一部分水和存在的任何其他挥发性液体。脱水可以按照公知的程序例如真空蒸发来实现。浓缩物可以采取相对浓的液体的形式。稠浆液典型地通过向饮料浓缩物中添加适合的成分例如电解质或乳液来形成。然后将稠浆液与水混合以形成成品饮料或成品饮料浓缩物。

所公开的组合物的基本上干燥的混合物可以通过将适当量和比率的所有所需的干燥成分混合在一起来制备。可选地，可以将最后制备的饮料组合物脱水以给出饮料组合物的基本上干燥的混合物。基本上干燥的混合物作为例如粉末、颗粒或片剂以后可以溶解在适量的含碳酸或不含碳酸的水中，以制成最终的可饮用饮料，或与水一起服用。

作为食品的形式，所公开的组合物可以配制成任何任选形式，例如颗粒状态、晶粒状态、糊剂状态、凝胶状态、固体状态或液体状态。在这些形式中，可以包含各种其他物质，例如粘合剂、崩解剂、增稠剂、分散剂、重吸收促进剂、调味剂、缓冲剂、表面活性剂、溶解助剂、防腐剂、乳化剂、等渗剂、稳定剂或pH控制剂。在具体实例中，当所公开的组合物被用作保护健康(包括但不限于改善肤质)的食品、功能食品等时，它优选包含本发明的组合物和提取物(例如麝香葡萄果渣提取物、白藜芦醇、紫色胡萝卜提取物和接骨木提取物)的活性成分，其量使得本公开的预定效应表现出足以提供抗氧化活性。

E.用于抑制(例如阻止)细胞衰老的方法和试剂盒

本文中显示了具有改进的亲脂性抗氧化活性的所公开组合物。已知氧化应激是造成正常衰老的核心机制。也已知道，亲脂性抗氧化剂能够抑制各种类型的皮肤伤害。基于这些观察，公开了抑制细胞衰老、例如抑制或降低自由基的产生和活性的方法。在一个实例中，方法包括向需要的对象施用具有抗氧化活性的所公开组合物，其剂量足以抑制或降低与细胞衰老相关的一个或多个过程。例如，抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程包括在摄入组合物的对象中降低或抑制自由基的形成或活性。

在某些所公开的实施方案中，方法包括施用可摄取的的组合物，例如本文描述的组合物，组合物包含源自于青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物。在某些实施方案中，麝香葡萄果渣提取物中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率在0.1到10(重量/重量)、例如0.3到3(重量/重量)的范围内。例如，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.75比约1(重量/重量)、2.5比约1(重量/重量)、约2.25比约1(重量/重量)、约2比约1(重量/重量)、约1.5比约1(重量/重量)或约1比约1(重量/重量)。本文中使用的术语“约”被定义为±0.5。在具体实例中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.25比约1(重量/重量)。

在某些实施方案中，口服的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣提取物具有至少2％的多酚含量。例如，多酚含量为至少3％、至少3.5％、至少4％、至少4.5％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％或至少14％。在具体实例中，麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物具有约4％的多酚含量。

在某些实施方案中，方法包括施用可摄取的组合物，组合物包含麝香葡萄果渣提取物以及其他附加成分，包括但不限于白藜芦醇。在某些实例中，方法包括施用具有约0.75比1(重量/重量)的麝香葡萄多酚与白藜芦醇比率的口服组合物。在其他实例中，方法包括施用至少包含麝香葡萄果渣提取物总组合物的8％到60％的麝香葡萄果渣提取物(包含以液体重量计2％到14％，例如4％、6％、8％、10％或12％的麝香葡萄多酚)和总量的1.2％到3.0％的反式白藜芦醇的组合物。

在其他实施方案中，方法包括施用口服组合物，组合物包含具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的最低纯度为至少5％的白藜芦醇，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1到10/1(重量/重量)的范围内，由此提供具有足以抑制或降低与细胞衰老相关的一个或多个过程(包括但不限于改善肤质)的抗氧化活性的组合物。在具体实例中，方法包括施用组合物，组合物包含具有至少2％多酚含量的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物和来自麝香葡萄之外的来源(例如虎杖根提取物)的最低纯度为至少5％的白藜芦醇，其中麝香葡萄果渣提取物与白藜芦醇的比率在0.2/1到50/1(重量/重量)、例如5/1到50/1(重量/重量)或20/1到50/1(重量/重量)的范围内，由此提供具有抗氧化活性的组合物。在某些实例中，组合物具有每mg多酚至少24μmol Trolox当量(μmolTE/mg多酚)的总ORAC。

在其他实施方案中，施用含有单独或与其他活性成分包括但不限于白藜芦醇组合的麝香葡萄果渣提取物的溶液或局部用软膏，通过抑制或降低皮肤细胞中的自由基形成或活性，提供了改善肤质的方法。在一个实例中，溶液或局部用软膏包含所公开的麝香葡萄果渣提取物但不含白藜芦醇。在另一个实例中，溶液或局部用软膏包括所公开的麝香葡萄果渣提取物和白藜芦醇两者，例如麝香葡萄果渣提取物所包含的麝香葡萄多酚浓度使得麝香葡萄多酚与白藜芦醇的比率为约0.75比1(重量/重量)。方法可以由临床医生或其他健康护理提供者执行。方法还被设计用于家庭使用。方法可以减少与衰老相关的皮肤外观的变化、可见地减少人类皮肤皱纹并改进皮肤的肌理质量。还提供了用于改善肤质的组合物和试剂盒，组合物和试剂盒可以包含所公开的具有抗氧化活性的组合物(包括口服和局部用)或麝香葡萄提取物与一种或多种其他的抗衰老组合物，例如一种或多种其他抗氧化剂。

任何皮肤表面(例如皮肤的表皮)都可以使用本文提供的方法处理。可以处理的皮肤表面包括但不限于眼眶、嘴唇、面颊、鼻唇沟、前额、颈部、上唇纹(rhytides)、胃部、颈部、背部、胸部、手部、腿部、足部或其任何组合。在实例中，可以使用本文提供的方法处理任何面部表面的皮肤。方法可以应用于任何面部区域和/或任何身体表面区域，其他可直接施用的区域是胸部和颈部。在同一次处理期间可以处理一个以上皮肤表面。在具体实例中，将液体或霜剂形式的本公开的组合物或提取物基本上均匀地施加在皮肤表面上，在皮肤上形成一层组合物或提取物。

所公开的组合物或提取物可以包含其他惯常用于化妆品的物质，例如香料；抗微生物剂；抗细菌剂；加脂剂；络合和螯合剂；珠光剂；植物提取物；维生素例如视黄醇或维生素C；活性剂；防腐剂；杀菌剂；表面活性剂；染料、色素、颜料或任何具有着色效应的物质；乳化剂；增稠剂；软化、加湿和/或保湿物质；或化妆或皮肤制剂的其他常见组成成分，例如醇类、多元醇、聚合物、泡沫稳定剂、电解质、有机溶剂或有机硅衍生物。组合物还可以包含功能性添加剂，例如角质软化剂、氧化剂、防晒剂和皮肤光滑剂。组合物还可以包含据认为在皮肤及其下方的皮下组织的中胚层疗法注射治疗中有益的组分，包括抗氧化剂例如二甲基氨基乙醇、α-硫辛酸和抗坏血酸。组合物中也可以包含可增强组合物或提取物的功效的药剂，例如亲脂性和疏脂性渗透增强剂(例如柠檬酸三乙酯、丙二醇、脂肪酸酯等)。可以增强皮肤的血管灌注的药剂例如氨茶碱或己酮可可碱，也可以包含在组合物中。组合物中还可以包含可增加皮肤的充盈和张力以及允许下方的皮下组织结构缩紧或收缩的药剂，例如磷脂酰胆碱和硫酸脱氧胆酸。可以提供激素益处的生理物质，例如引起皮肤的雌激素或雄激素刺激的物质，包括雌三醇和睾酮，也可以包含在组合物中。

所公开的麝香葡萄组合物可以包含一种或多种防腐剂。这些防腐剂包括例如Opthiphen^TM(来自International Specialty Products公司)、Geogard

Ultra(来自Lonza公司)、列入《欧盟化妆品指令》(EuropeanUnion Cosmetic Directive)的防腐剂等，例如甲醛供体(例如DMDM乙内酰脲，其可以在商品名GLYDAN

下从Lonza公司购买)、丁基氨基甲酸碘代丙酯(例如在商品名GLYCACIL-STM下可以从LONZATM公司购买和/或在DEKABEN LMBTM下从Jan Dekker公司购买的)、对羟苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸的烷基酯，例如对羟苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和/或丁酯)、苯氧乙醇、乙醇、苯甲酸和水杨酸。防腐系统还可以包含防腐助剂，例如辛氧基甘油或大豆油(glycinesoya)。其他防腐剂或防腐助剂包括二溴氰基丁烷(2-溴-2-溴甲基戊二腈)、3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯、2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇、咪唑烷基脲、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-氯乙酰胺、苯扎氯铵和苯甲醇。

组合物还可以包含一种或多种调理剂，例如水溶性调理剂。其他调理剂包括例如根据《化妆品成分国际命名法》(InternationalNomenclature for Cosmetic Ingredients(INCI))被称为聚季胺盐的化合物，特别是聚季胺盐-1到聚季胺盐-56。

组合物可以从软管、广口瓶、瓶、泵、罐、喷雾罐或喷雾瓶，或从一些其他已知容器分配。

在本文中还公开了在家中或由临床医生使用的用于改善肤质的麝香葡萄果渣提取物组合物和试剂盒。在一个实例中，该试剂盒适合于由临床医生或美容师使用。在这样的实例中，试剂盒还可以包含涂敷器，用于辅助组合物的施加。一般来说，试剂盒还包含使用说明书。这些说明书可以是书面的，或采用用于电子装置例如计算机、CD播放器、mp3播放器或DVD播放器等的数字格式(例如录像带、DVD或CD)。在另一个实例中，试剂盒适合于在家中使用。该试剂盒可以包括涂敷器例如海绵或布，用于施加组合物。可选地，可以使用一个或多个手指施加组合物。一般来说，试剂盒还包括使用说明书。这些说明书可以是书面的，或采用用于电子装置例如计算机、CD播放器、mp3播放器或DVD播放器的数字格式(例如录像带、DVD或CD)。

在某些实例中，试剂盒包含一种本公开的组合物或提取物以及一种或多种其他的抗衰老化合物例如另一种抗氧化剂(例如维生素C、维生素E、硒和/或β-胡萝卜素)，其在两个分开的容器中或作为单一组合物在单一容器中。在一个实例中，组合物或提取物被施加到靶皮肤区域上。在一个具体的非限制性实例中，麝香葡萄果渣提取物抗衰老试剂盒可以由个人在家中如下使用。首先，通过使用涂敷器例如海绵或布、或通过使用一个或多个手指将酌量的组合物或提取物施加到皮肤表面，以在皮肤表面上提供组合物或提取物的均匀的层。允许组合物或提取物经过一定时间长度以被动吸收到皮肤表面中，或组合物/提取物被皮肤表面的吸收可以通过用指尖将组合物轻柔摩擦到皮肤表面中来促进。一般来说，在施用麝香葡萄果渣组合物/提取物后，可以继续进行正常的皮肤护理程序，例如上妆和施用其他保湿剂。

该过程可以按照描述每天两次、每天一次、每两天一次、每周两次、每周一次、每两周一次或每月一次，或使用一些其他的时间间隔例如每3到5天一次来进行。改善肤质包括逆转、减慢与天然或固有的衰老相关的皮肤变化的进程或阻止所述皮肤变化。在本文中使用，阻止及其变化形式是指皮肤变化的发生的任何程度的延迟。例如，改善肤质包括逆转、减慢与自由基形成和活性相关的皮肤变化的进程或阻止所述皮肤变化。在一个实例中，改善肤质包括逆转、减慢与暴露于日光或其他形式的光化辐射(例如UV辐射和晒黑机)相关的日光损伤或光致衰老皮肤变化的进程或阻止所述皮肤变化。作为另一个实例，改善肤质还可以包括逆转、减缓由外界因素包括但不限于辐射、空气污染、风、寒冷、潮湿、热、化学物质、烟、吸烟及其组合引起的皮肤变化的进程或阻止所述皮肤变化。改善肤质还可以包括逆转、阻止或减少可由某些皮肤病症(例如痤疮)、感染(例如利什曼病)或损伤(例如擦伤、刺伤、划伤或手术伤口)引起的瘢痕形成。皮肤的改善还可以包括至少下列之一：使面部纹路显得不太显著，使面部纹路和/或皱纹感觉充起，改善眼眶下纹路和/或眼眶周围纹路的外观，改善鱼尾纹的外观，减少和/或消除皱纹的出现、特别是面颊、前额(例如眼睛之间的竖皱纹、眼睛上方的横皱纹)上和/或嘴周围的面部皱纹、以及特别是深皱纹、褶皱或皱痕的出现，改善皮肤柔软性，减少和/或消除细纹和/或深纹、褶皱和皱痕，以及使皮肤光滑。用于测量肤质改善的方法在本技术领域中是已知的。参见例如美国专利No.6,866,856和6,682,763。

可以通过实践本文公开的方法和使用本文公开的试剂盒治疗的皮肤变化包括例如皱纹(包括但不限于人类面部皱纹)、褶皱、深纹、褶皱和细纹，皮肤纹路加深，皮肤变薄，阻止或减少瘢痕形成、皮肤发黄、色斑形成、色素沉着过度、色素沉着和/或非色素沉着老年斑的出现、革质化、失去弹性、失去回弹能力、失去胶原纤维、弹性纤维的异常变化、真皮小血管的退化、皮肤表面上日晒增加的可见血管的形成，及其组合。

改善肤质包括减少、减轻和/或最小化一种或多种上面讨论的皮肤变化。改善肤质可以导致皮肤具有更年轻的外观。改善肤质可以导致皮肤具有更光滑、含水(不太干燥)或较少起屑的外观。例如，在某些实施方案中，改善肤质可以包括减少粗糙度、干燥度或起屑。改善肤质包括消除和改善纹路和皱纹、改善充盈和张力，具有观察到的所需提升和拉紧效应。

可以改善皮肤的肌理特性，包括柔软度、柔顺性和光滑度，导致光泽、纯净度和亮度的增加。皮肤的其他并且重要的、可以客观和主观测量的特性包括但不限于皮肤松弛度或相反的皮肤紧致度，以及皮肤中肌理性细纹和较粗纹路的存在和程度。

这些特性与判断表观的外部情况(例如皮肤衰老)的特性相同。通过本文公开的处理方法和试剂盒改善这些特性，在表观的目测判断的基础上产生了益处。通过本文公开的方法改变肤质，减少了皮肤衰老的出现。

所需好处可以不仅包括对皮肤的生理好处，而且包括治疗和药理好处，例如可能的恶性肿瘤预防和治疗，不论是通过化学预防还是改进的光动力疗法。好处还可以包括通过包含抑制皮脂腺活性的组合物来进行痤疮治疗和抑制。

F.药物组合物

所公开的麝香葡萄果渣提取物和组合物至少可用于抑制(例如阻止)一个或多个氧化过程，例如与细胞事件例如细胞衰老相关的自由基形成。因此，本文还描述了包含至少一种所公开的麝香葡萄果渣提取物单独或与白藜芦醇组合的药物组合物。

药物组合物的配制在本技术领域中是公知的。例如，E.W.Martin的《Remington药物学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，MackPublishing Co.，Easton，PA，第19版，1995，描述了适合用于至少一种所公开的麝香葡萄果渣提取物单独或与白藜芦醇组合的药物递送的示例性制剂(及其组分)。在某些实例中，组合物还包括其他药剂例如紫色胡萝卜根提取物或接骨木提取物。可以配制包含至少一种这些化合物的药物组合物，用于人类或兽医医学。所公开的药物组合物的具体制剂可以取决于例如给药方式(例如口服、局部或肠胃外)和/或待治疗的病症(例如自由基的生产或活性)。在某些实施方案中，制剂包括可药用载体以及至少一种活性成分，例如麝香葡萄果渣提取物。

可用于本公开的方法和组合物的可药用载体是本技术领域中常规的。药用载体的性质取决于所使用的具体给药方式。例如，肠胃外制剂通常包含可注射流体作为介质，所述流体包括药物和生理可接受的流体例如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水、甘油等。对于固体组合物例如粉剂、丸剂、片剂或胶囊形式来说，可以包含常规的无毒固体载体，例如药用级甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性载体之外，待给药的药物组合物可以任选地包含少量无毒性辅助物质或赋形剂，例如润湿或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等；例如乙酸钠或失水山梨糖醇单硬脂酸酯。其他非限制性的赋形剂包括非离子性增溶剂例如克列莫佛(cremophor)，或蛋白质例如人血清白蛋白。

所公开的药物组合物可以配制成可药用盐。可药用盐是化合物的游离碱形式的无毒性盐，其具有游离碱的所需药理活性。这些盐可以源自于无机或有机酸。适合的无机酸的非限制性实例是盐酸、硝酸、氢溴酸、硫酸、氢碘酸和磷酸。适合的有机酸的非限制性实例是乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲基苯磺酸、甲基磺酸、水杨酸、甲酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、天冬氨酸(asparagic acid)、天冬氨酸(aspartic acid)、苯磺酸、甲基苯磺酸、萘磺酸等。其他适合的可药用盐的名单可见于《Remington药物学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，第19版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995。可药用盐也可用于调整组合物的渗透压。

所公开的药物组合物的剂型由所选的施用方式决定。例如，可以使用口服剂型。口服制剂可以是液体例如糖浆、溶液或悬液，或固体例如粉剂、丸剂、片剂或胶囊。制备这些剂型的方法在本文中公开，或对于本技术领域的专业人员来说是显而易见的。

包含本公开化合物的药物组合物的某些实施方案，可以配制成适合于单次施用精确剂量的单位剂型。施用的活性成分的量取决于受治对象、疾病严重性和给药方式，并且是本技术领域的专业人员公知的。在这些界限内，待施用的制剂所包含的本文公开的提取物或化合物的量，是能够在受治对象中有效获得所需效应的量。在具体实例中，对于口服施用来说，组合物被提供成液体形式，其含有约75mg麝香葡萄果渣提取物多酚和100mg反式白藜芦醇。在其他实例中，对于口服施用来说，组合物被提供成片剂形式，其含有约1.0到约500mg活性成分，特别是约10.0mg、约50mg、100mg、约150mg、约175mg、约200mg、约210mg、约225mg、约250mg、约300mg、约400mg或约500mg活性成分，用于根据症状调整给予受治对象的剂量。在一个示例性口服剂量方案中，每天至少一次施用含有约1mg到约500mg(例如约150mg到约225mg)活性成分的片剂。在其他实例中，每周至少一次、例如每周至少两次、三次、至少四次、至少五次或至少六次或每天施用含有约1mg到约500mg(例如约150mg到约225mg)活性成分的片剂。

G.所公开的提取物和组合物的施用

任何所公开的组合物和提取物的给药方法都是常规的。例如，所公开的方法(例如包含具有抗氧化活性、用于阻止或降低与衰老相关的一个或多个过程的组合物的方法)可以通过注射、肿瘤内、口服、局部、透皮、肠胃外或通过吸入或喷雾来施用。在具体实例中，组合物以非饮料的食品、饮料或膳食补充剂的形式口服施用于哺乳动物对象、例如人类。在另一个实例中，组合物局部施用于哺乳动物对象例如人类的皮肤表面。

所施用的药剂的治疗有效量可以根据所需效应和待治疗的对象而变。在一个实例中，方法包括向对象(例如人类对象)每日施用至少1mg组合物。例如，人类可以每日施用至少1g或至少10g组合物，例如每日1g到5g、每日5g到10g，例如每日7g。在一个实例中，对象被施用至少5g包含麝香葡萄果渣提取物和白藜芦醇的组合物。在其他实例中，对象被口服施用至少6.3g这样的组合物。剂量可以在分剂量(例如每天2、3或4个分剂量)或以每日单一剂量施用。

在具体实例中，以多剂每日给药时间表向对象施用治疗性组合物(例如所公开的含有白藜芦醇和麝香葡萄提取物的抗衰老补充剂)，例如至少连续两天、连续10天等，例如数周、数月或数年的时间。在一个实例中，向对象施用治疗性组合物(例如所公开的含有白藜芦醇和麝香葡萄提取物的抗衰老补充剂)，其包括在至少30天、例如至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少12个月、至少24个月或至少36个月的时间内每日施用。

治疗性组合物，例如所公开的包含反式白藜芦醇和麝香葡萄果渣提取物或单独的麝香葡萄果渣提取物的抗衰老补充剂，还可以包含一种或多种生物活性或无活性化合物(或两者)，例如分别为其他抗氧化剂和常规的无毒性可药用载体。在具体实例中，治疗性组合物还包含一种或多种无生物活性的化合物。这样的无生物活性化合物的实例包括但不限于：载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂和载体。可用于这些制剂的可药用载体是常规的(参见E.W.Martin的《Remington药物学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版(1995))。一般来说，载体的性质取决于将要使用的具体给药方式。例如，肠胃外制剂可以包括可注射流体作为介质，所述流体包括药物和生理可接受的流体例如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水、甘油等。对于固体组合物(例如粉剂、丸剂、片剂或胶囊形式)来说，常规的无毒性固体载体可以包括例如药用级甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物中性载体之外，待施用的药物组合物可以包括少量无毒性辅助物质，例如润湿或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或失水山梨糖醇单硬脂酸酯。

尽管本公开对使用任何所公开的组合物和提取物以阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程提供了详细描述，但应该考虑到，所公开的组合物和提取物不仅可用作抗氧化剂来阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程，而且可用于治疗任何与氧化应激相关的疾病。例如，考虑到了本发明的提取物和组合物可用于减轻、阻止或治疗与慢性炎性疾病例如糖尿病、癌症、动脉粥样硬化和其他心血管疾病的发病机理以及与变性疾病例如阿茨海默氏病和帕金森氏病相关的氧化应激。

通过下面非限制性的实施例，对本公开的主题进行了进一步说明。

实施例

实施例1

测定麝香葡萄果渣提取物中鞣花酸的溶解度

本实施例说明了青铜色与紫色果渣提取物的各种比率对鞣花酸溶解度的影响。

将分别发酵的青铜色和紫色果渣提取物加热，然后以表1中提供的比率混合成总体积100ml。

表1.1X浓度下青铜色/紫色果渣提取物的各种比率

青铜色(ml)	紫色(ml)
		75	25
65	35
		50	50
25	75

因为青铜色和紫色果渣提取物分别没有进行浓缩，因此得到的提取物混合物是1X浓度的。1X浓度典型含有约2％固形物的溶液(100克溶液等于2克干提取物)。将每种比率约20毫升转移到相应的玻璃试管中，并用箔片封口。将样品在85℃下加热30分钟，然后从热源上取下并使其回到室温。然后将样品通过0.45μm PTFE滤膜w/GMP过滤，并通过HPLC/MS进行分析以测定它们的鞣花酸含量。也通过同样的方法对青铜色和紫色麝香葡萄果渣提取物分别进行分析，以确定青铜色和紫色果渣提取物二者中鞣花酸的基线值，并测定紫色果渣提取物中花青苷的含量。然后通过带有254nm处UV-VIS检测的反相HPLC串联离子阱质量检测器，使用在[M-H]^-＝301amu处的提取离子色谱图(EIC)，确定样品中鞣花酸的总面积。

为了制备含有40％固形物的各种比率的青铜色/紫色果渣提取物，将1X的青铜色和紫色麝香葡萄果渣提取物分别干燥成粉末形式并在水中复溶，以产生含有40％固形物的液体。然后将这两种分开的溶液按照重量(wt)而不是体积混合成各种比率。所评估的各种比率提供在表2A和2B中。

表2A.1X浓度下各种青铜色/紫色提取物比率中鞣花酸溶解度的测定

表2B.约20X浓度或40％固形物水平下各种青铜色/紫色提取物比率中鞣花酸溶解度的测定

将每种比率约10毫升转移到相应的玻璃试管中，并用箔片封口。将样品在85℃下加热30分钟，然后从热源上取下并使其回到室温。然后将样品通过0.45μm PTFE滤膜w/GMP过滤，并通过HPLC/MS进行分析以测定它们的鞣花酸含量。也通过同样的过程对青铜色和紫色麝香葡萄果渣提取物分别进行分析，以确定青铜色和紫色麝香葡萄果渣提取物二者中鞣花酸的基线值，并测定紫色麝香葡萄果渣提取物中花青苷的含量。使用经验证的测试方法C205，串联离子阱质量检测器，使用[M-H]^-＝301amu处的提取离子色谱图(EIC)，确定样品中鞣花酸的总面积。

这些研究发现，在1X浓度水平下，65％比35％的青铜色与紫色果渣提取物比率(体积/体积)足以促进鞣花酸在两种果渣提取物混合物中的最大溶解度。此外，在40％固形物水平下，鞣花酸的溶解度随着混合物中紫色麝香葡萄果渣提取物含量的增加而持续增加。这些发现表明在40％固形物水平下，在固体形式中存在较大量的鞣花酸，因此需要较高含量的紫色果渣提取物以完全溶解混合物中存在的所有鞣花酸。这些研究也可以表明，紫色麝香葡萄果渣提取物中包含的花青苷影响青铜色麝香葡萄果渣提取物中包含的鞣花酸的溶解度。

实施例2

抗衰老膳食补充剂及其制备

本实施例提供了可以被食用以阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程的膳食补充剂。

所公开的抗衰老膳食补充剂按照表3a或表3b中提供的配方制备。

表3A.抗衰老膳食补充剂

表3B.抗衰老膳食补充剂

膳食补充剂包括关于剂量的说明书。说明书指出，每日可以在用餐前服用5毫升补充剂(约1茶匙)，并用作抗衰老补充剂，例如用于抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程。

实施例3

麝香葡萄果渣提取物和虎杖根提取物混合物和抗衰老补充剂的抗氧化能力

本实施例证实了含有虎杖提取物和麝香葡萄果渣提取物的混合物和补充剂的改进的抗氧化能力，通过氧自由基吸收能力(ORAC)分析法测量。

使用ORAC分析法评估了单独或在混合物或补充剂中组合的两种植物提取物的抗氧化能力。这种分析法已被用于测量多种多样的食品和饮料的抗氧化能力，并且是USDA ORAC数据库中包含的数据的基础。通过该测试能够测量亲水性抗氧化能力和亲脂性抗氧化能力两者。

分析了下列样品：(1)归一化到最低98％反式白藜芦醇(实际含量为100％反式白藜芦醇)的干燥/粉末状虎杖根提取物；(2)含有14.4％总多酚含量的干燥/粉末状麝香葡萄果渣提取物(2∶1比率的青铜色比紫色果渣)；(3)上述干燥/粉末状虎杖和干燥/粉末状麝香葡萄果渣提取物以1∶5.36(wt∶wt)比率的混合物(总多酚含量为混合物的27.5％，麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率为0.75比1)；以及(4)实施例2表3a中提供的抗衰老补充剂。测量了亲水性、亲脂性和总ORAC值(总ORAC值是亲水性和亲脂性值的总和)，并且结果表示成每毫克多酚的μmolTrolox当量(μmolTE/mg多酚)。结果显示在表4中。

表4.样品1-4以μmolTE/mg多酚表示的亲水性、亲脂性和总ORAC值。

正如表4中所显示的，测量到的混合物的亲水性ORAC值与根据两种提取物的累加效应预测的值相近。但是，测量到的混合物的亲脂性ORAC值比预测累加值高5倍，导致总ORAC值增加20％。对于组合物观察到了类似的协同性，接近基于相加性的预测ORAC分值的3倍。表5显示的结果用每克物质(相对于表4中显示为每mg多酚)的ORAC值表示。如表5中所显示，当值用每克物质的ORAC表示时，麝香葡萄果渣提取物和虎杖根提取物混合物和抗衰老补充剂在产生亲脂性抗氧化能力方面的协同效应得以维持：

表5.样品1-4以每克物质的ORAC值表示的亲水性、亲脂性和总OR AC值。

这些研究证实了麝香葡萄果渣提取物和虎杖根提取物混合物和抗衰老补充剂在产生亲脂性抗氧化能力方面的强协同效应。在亲脂性条件下显示出的选择性协同是出乎意料的。因此，本发现证实了含有虎杖提取物和麝香葡萄果渣提取物的混合物在与任一种单独的提取物相比时的增加的抗氧化能力，正如通过ORAC分析法所测量的。

实施例4

抗氧化胶囊制剂和制备

本实施例提供了抗氧化胶囊制剂及其制备，其可用于抑制一个或多个氧化性过程，包括阻止或抑制自由基形成。

将含有40％固形物含量和由没食子酸当量(GAE)度量的多酚含量以固形物计为10％的2∶1比率的青铜色与紫色果渣水性提取物，按照下述进行处理：向10Kg上面提到的果渣浓缩物中加入1.33Kg麦芽糖糊精MD100。将混合物混合以溶解麦芽糖糊精。随后，将该液体浓缩物冷冻干燥以产生干物质。干燥的麝香葡萄/麦芽糖糊精物质的化学值如下：(1)总多酚(作为％GAE)，NLT 7.0％(以干重计)；没食子酸(HPLC)，NLT 0.3％(以干重计)，以及游离鞣花酸(HPLC)，NLT0.15％(以干重计)。干燥的麝香葡萄/麦芽糖糊精的特征提供在表6中。

表6.干燥的麝香葡萄/麦芽糖糊精物质的特征

外观：	红紫色粉末
		滋味：	葡萄提取物的特征
气味：	葡萄提取物的特征

通过称量出每种原料的批次量制备胶囊。将原料通过Comil研磨机，将麦芽糖糊精最后送过研磨机。将研磨过的材料混合至均匀，然后在包囊机上填充到两片“0”号胶囊中。所制造的剂型的实例提供在表7中，麝香葡萄/白藜芦醇胶囊的分析结果提供在表8中。

表7.制造的剂型-3个胶囊/剂

原料	声明/剂量	超额	RM测定	mg/剂	mg/胶囊
						麝香葡萄/MD100	75mg	10％	75mg/g	1100	366.67
反式白藜芦醇	100mg	10％	98％	112.245	37.415
						微晶体纤维素				195	65.0
Cabosil				25.0	8.333
						硬脂酸镁				14.0	4.667
麦芽糖糊精				203.755	67.918
									合计	1650	550

表8.麝香葡萄/白藜芦醇胶囊分析结果

测试参数	规格(每个胶囊)	测定/结果
			外观：	两片“0”号深紫色胶囊	符合
气味：	葡萄提取物的特征	符合
			胶囊尺寸：	0.864”-0.876”	符合
总重(10个胶囊)：	6.36-6.75g	6.48gm
			填充重量	0.539-0.578g	0.556gm
崩解时间：	不超过45min	28min
			多酚(作为GAE)	最低58.3mg	61.34
反式白藜芦醇	最低33.3mg	36.8

实施例5

在人类对象中减少氧化应激

本实施例通过在安慰剂对照临床试验中进行评估，证实了实施例4中描述的抗氧化剂胶囊的体内功效。

胶囊含有麝香葡萄果渣提取物与虎杖提取物的混合物，每3颗胶囊的剂量提供75mg麝香葡萄多酚和100mg反式白藜芦醇(表7和8)。已知进餐快速增加氧化应激并产生炎性响应。例如已经显示，在健康的正常体重人类中，食用900kcal快餐在循环的单核细胞(MNC)和多形核白细胞(PMN)中引起活性氧(ROS)产生的显著增加(Aljada等，Am.J.Clin.Nutr.79：682-690，2004)。这些变化伴有MNC中p47phox蛋白的表达升高，所述蛋白是产生ROS的介导物——NADPH氧化酶的亚基。

为了在该餐后氧化应激模型中测试抗氧化剂胶囊的效果，在分别的两天中，向一组10位健康受试者(年龄37±4岁，BMI 22.6±0.5kg/m2)提供910kcal快餐食品，并在进餐前10分钟服用单剂(3颗胶囊)抗氧化剂制剂或安慰剂(3颗胶囊)。在基线时和进餐后1、3和5小时时收集血样。在每次处理后葡萄糖、胰岛素和脂类的循环浓度相似，表明所公开的抗氧化剂胶囊不改变膳食的消化/吸收。但是，在进餐后1小时，所公开的抗氧化剂胶囊处理极大减少了MNC(15％相对于安慰剂的62％)和PMN(8％相对于安慰剂的64％)二者中ROS产生的增加。此外，摄入膳食加安慰剂导致在MNC中p47phox蛋白水平的显著增加，超过基线值148％(P＜0.05)，而摄入膳食加抗氧化剂胶囊完全阻止了MNC中p47phox水平的任何显著变化(使用双向RMANOVA时P＜0.05)。此外，在摄入膳食加抗氧化剂胶囊后3小时，与安慰剂处理组相比，抗氧化应激转录因子Nrf-2的DNA结合活性显著增加，超过基线150％(使用RMANOVA和双向RMANOVA时P＜0.05)，在所述安慰剂治疗组中该保护性转录因子的DNA结合活性实际上降低。Nrf-2与编码内源抗氧化酶(例如谷胱甘肽-S-转移酶)的多个基因的抗氧化响应元件(ARE)的启动子序列结合，因此在摄入所公开的抗氧化剂制剂后Nrf-2的DNA结合活性的增加，表明了多种细胞防御机制上调的潜力。

最后，在摄入膳食和安慰剂后，血浆内毒素水平显著上升，在3小时时超过基线60％(P＜0.05)，而当膳食与所公开的抗氧化剂胶囊一起食用时内毒素浓度显著降低，在1小时时低于基线28％(使用RMANOVA和双向RMANOVA时P＜0.05)。内毒素是强有力的炎性信号，其促成增加氧化应激的各种细胞因子的活化。

这些结果证实了麝香葡萄果渣提取物和虎杖的混合物(麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇比率为0.75比1)的新的体内抗氧化效应，因此扩展了该混合物的协同抗氧化能力的体外发现(实施例3)。

基于这些发现，能够提供抑制氧化应激的方法。例如，向对象施用本公开的组合物，以抑制氧化应激，例如与进餐相关的氧化应激。在一个实例中，所公开的组合物在进食之前或之后30分钟、例如进食之前或之后10分钟施用。在具体实例中，组合物在进食之前约10分钟施用。

由于本公开的原理可以应用于许多可能的实施方案，因此应该认识到，所描述的实施例仅仅是所公开主题的实例，而不应该被当作对本公开范围的限制。相反，本公开的范围由所附的权利要求书定义。因此，我们要求这些权利要求的范围和精神内的所有内容作为我们发明的权利。

Claims (38)

1.生产麝香葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括：

将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量计为2.25比1，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2％的多酚含量。

2.生产麝香葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括：

将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量计在0.3到3的范围内，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2％的多酚含量。

3.麝香葡萄果渣提取物组合物，所述组合物包含青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量计在0.3到3的范围内，并且麝香葡萄果渣提取物具有至少2％的多酚含量。

4.权利要求2的方法，其中麝香葡萄果渣提取物具有4％的总多酚含量。

5.权利要求3的组合物，其中麝香葡萄果渣提取物具有4％的总多酚含量。

6.权利要求2或4的方法，其中将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合包括将青铜色麝香葡萄果渣与紫色麝香葡萄果渣按重量/重量计以2.25比1组合，并从青铜色果渣和紫色果渣同时生产提取物。

7.权利要求2或4的方法，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量计为2.25比1。

8.权利要求3或5的组合物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率按重量/重量计为2.25比1。

9.权利要求2或4的方法，所述方法还包括制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，然后将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

10.权利要求9的方法，其中制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物包括用水分别提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣以产生青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，然后将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

11.权利要求10的方法，其中制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物还包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物分别过滤，然后将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

12.权利要求11的方法，其中制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物还包括在将青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣分别过滤之后、但在将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合之前，对青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物进行发酵以除去提取出的糖类，产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

13.权利要求12的方法，其中制备青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物还包括在对青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物进行发酵之后、但在将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合之前，将青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物过滤，以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

14.权利要求13的方法，所述方法还包括浓缩青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，使得每种提取物在液体中包含20％到50％固形物，然后将青铜色果渣提取物与紫色果渣提取物组合。

15.权利要求14的方法，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物各自在液体中包含40％固形物。

16.权利要求10的方法，所述方法还包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物组合后对麝香葡萄果渣提取物进行过滤，以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

17.权利要求16的方法，所述方法还包括在将麝香葡萄果渣提取物过滤后对麝香葡萄果渣提取物进行发酵。

18.权利要求17的方法，所述方法还包括在将麝香葡萄果渣提取物发酵后对麝香葡萄果渣提取物进行过滤。

19.权利要求18的方法，所述方法还包括在将麝香葡萄果渣提取物过滤后对麝香葡萄果渣提取物进行浓缩，使得麝香葡萄果渣提取物在液体中包含20％到50％固形物。

20.权利要求19的方法，其中麝香葡萄果渣提取物在液体中包含40％固形物。

21.权利要求6的方法，所述方法还包括在将青铜色麝香葡萄果渣与紫色麝香葡萄果渣组合后，用水同时提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣。

22.权利要求21的方法，所述方法还包括在同时提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣之后，对麝香葡萄果渣提取物进行过滤。

23.权利要求22的方法，所述方法还包括在将麝香葡萄果渣提取物过滤后对麝香葡萄果渣提取物进行发酵，以除去提取出的糖类。

24.权利要求23的方法，所述方法还包括在将麝香葡萄果渣提取物发酵后对麝香葡萄果渣提取物进行过滤，以产生具有至少2％多酚含量的麝香葡萄果渣提取物。

25.权利要求24的方法，所述方法还包括将麝香葡萄果渣提取物浓缩，使得提取物在液体中含有20％到50％固形物。

26.权利要求25的方法，其中麝香葡萄果渣提取物在液体中包含40％固形物。

27.权利要求2或4的方法，所述方法还包括向麝香葡萄果渣提取物添加赋形剂或其他成分。

28.权利要求27的方法，其中赋形剂包含甘油、山梨糖醇、胶体二氧化硅、天然调味添加剂或其组合。

29.权利要求3或5的组合物，其中组合物还包含赋形剂或其他成分。

30.权利要求2或4的方法，其中组合物提供在非饮料食品、饮料或膳食补充剂或美容组合物中。

31.权利要求3或5的组合物，其中组合物提供在非饮料食品、饮料或膳食补充剂或美容组合物中。

32.权利要求3或5的组合物，其用作抗氧化剂。

33.权利要求3或5的组合物，其用作抗衰老补充剂。

34.一定剂量的权利要求3、5、8、29和31-33任一项的组合物在制备用于阻止或抑制细胞衰老的药物中的应用，其中所述剂量足以阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程。

35.权利要求34的应用，其中阻止或抑制与细胞衰老相关的一个或多个过程包括在摄入组合物的对象中阻止或抑制自由基的形成或活性。

36.一定剂量的权利要求3、5、8、29和31-33任一项的组合物在制备用于抑制氧化应激的药物中的应用，其中所述剂量足以降低或抑制氧化应激。

37.权利要求36的应用，其中组合物在用餐之前或之后10到30分钟施用。

38.权利要求37的应用，其中组合物在用餐前10分钟施用。