CN102153613A - 夏枯草酸的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了夏枯草酸的制备方法和应用,特别是以熊果酸为原料对其进行结构修饰制备夏枯草酸的方法及其产品应用。本发明采用科学合理的工艺方法制备1α,2α-二羟基熊果酸(即夏枯草酸),该方法反应条件温和,无需特殊仪器设备,操作简单易行,易于扩大规模、实现工业化生产的目的;而且采用本发明方法制备的夏枯草酸及其盐(钠盐、钾盐或铵盐)对CCl4所致肝细胞损伤有显著的保护作用,对CCl4所致小鼠肝损伤有很好的保护活性,可作为保肝药物应用在急慢性肝炎,酒精、化学物质或药物致肝损相关疾病的药物制备中。
Description
技术领域
本发明涉及夏枯草酸的制备方法和应用,特别是以熊果酸为原料制备夏枯草酸的方法及其产品应用,属于药物化学技术领域。
背景技术
肝细胞损伤是各型肝病共同的病理基础,其中包括病毒、酒精和化学物质三大因素所引起的肝损伤。肝损伤性疾病已成常见病、多发病,发病率越来越高。我国是肝病的高发地区,因此研究保肝药物意义重大。
当前,我国虽然在临床上广泛应用甘草甜素、联苯双酯、当飞利肝宁和黄芪注射液等保肝、抗肝损伤中药有效成分或复方,但经国际认可的该类药物均不是我国自主发明的(刘平,理论联系实际,基础结合临床,促进中西医结合肝脏病学科发展,中西压结合学报,2003,1(2):81-83)。因此,如何从传统中药中挖掘具有自主知识产权的保肝类药物,一直是我们努力的目标。
普遍存在于植物中的熊果酸对乙醇、硫代乙酰胺、氨基半乳糖和CCL4诱导的小鼠肝损伤有保护作用(Liu J.Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid.JEthnopharmacol 1995;49:57-68;Jeong HG.Inhibition of cytochrome P450 2E1expression by oleanolic acid:Hepatoprotective effects against carbontetrachloride-induced hepatic injury.Toxicol Lett 1999;105:215-222;ShuklaB,Visen PKS,PatnaikGK,Tripathi SC,SrimalRC,DayalR,DobhalPC.Hepatoprotective activity in rat of ursolic acid isolated from Eucalyptushybrid.Phytother Res 1992;6(2):74-79.)。本发明人在开展熊果酸和齐墩果酸的结构衍生物及生物活性筛选研究(白育军,杨小生,康文艺等,熊果酸的结构修饰物及其抗肿瘤活性,华西药学杂志,2003,18(2):87~90;陈磊,杨小生,杨娟等,五环三萜衍生物的合成和对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,中国药科大学学报,2010,41(3):222-225)时发现,五环三萜类化合物的A环多氧特别是1,2,3-三羟基取代物具有较强的保肝活性。
因此,本发明对熊果酸类衍生物的合成工艺以及生物活性进行了研究,以筛选出高保肝活性的A环不同三羟基取代构型的衍生物。
发明内容
本发明的目的在于:提供夏枯草酸的制备方法和应用。本发明以熊果酸为原料合成夏枯草酸,并对其进行了CCl4所致肝细胞损伤的保护活性筛选,发现夏枯草酸及其盐对四氯化碳诱导体外肝细胞损伤和体内肝损伤具有很好的保护作用,夏枯草酸对四氯化碳诱导小鼠肝损伤有很好的保护作用,可应用于保肝药物的制备中。
本发明的技术方案:夏枯草酸的制备方法一:取熊果酸U-1,经Jones试剂氧化得化合物U-2,U-2经苄溴(即溴化苄)苄基化得化合物U-3,U-3经SeO2氧化得α,β不饱和酮Se-1,Se-1在过氧化氢的作用下得U-15,硼氢化钠还原U-15得R-10-1中间体,再经高氯酸水解开环得FU-16-1,钯碳催化氢化后得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸;其反应路线如下:
制备方法一的具体过程为:①取1摩尔份的熊果酸,用丙酮溶解,置于冰水浴中搅拌15min,缓慢滴加1.14摩尔份的Jones试剂,在N2保护下搅拌反应5h(TLC检测反应进程),用NaOH水溶液调节pH至中性,减压蒸去溶剂,用乙酸乙酯萃取,所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2;②取1摩尔份的U-2,加入丙酮溶解,再加10摩尔份的K2CO3,室温下搅拌30min,再加1.17摩尔份的溴化苄,在N2保护下反应18h(TLC检测反应进程),减压除去丙酮,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残留物经硅胶柱层析得U-3;③取1摩尔份的U-3和1.5摩尔份的SeO2,加入乙酸酐,在N2保护下回流反应5h(TLC检测反应进程),用2N氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残余物经硅胶柱层析得Se-1;④取1摩尔份Se-1,加入甲醇溶解,再加入10%NaOH水溶液(含NaOH1.5摩尔份),搅拌30min后,加入30%H2O2(10摩尔份),在N2保护下回流反应3h(TLC检测反应进程),用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得U-15;⑤取1摩尔份U-15,加入甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分2~3次加入10摩尔份NaBH4,在N2保护下反应2h(TLC检测反应进程),用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得R-10-1;⑥取1摩尔份R-10-1,加入丙酮溶解,加入1.5摩尔份高氯酸,再加入蒸馏水两滴,在N2保护下反应18h(TLC检测反应进程),用氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得FU-16-1;⑦取FU-16-1溶解于无水甲醇中,加入0.1倍于FU-16-1摩尔量的钯碳作为催化剂,室温下氢化还原,即得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸。
夏枯草酸的制备方法二:取熊果酸U-1,经Jones试剂氧化得化合物U-2,U-2经SeO2氧化得α,β不饱和酮Se,Se在过氧化氢的作用下得U-15-1,硼氢化钠还原U-15-1得R-10-20中间体,再经高氯酸水解开环得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸;其反应路线如下:
制备方法二的具体过程为:①取1摩尔份的熊果酸,用丙酮溶解,置于冰水浴中搅拌15min,缓慢滴加1.14摩尔份的Jones试剂,在N2保护下搅拌反应5h(TLC检测反应进程),用NaOH水溶液调节pH至中性,减压蒸去溶剂,用乙酸乙酯萃取,所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2;②取1摩尔份的U-2和2摩尔份的SeO2,加入乙酸酐,在氮气保护下回流反应5h(TLC检测反应进程),用2N氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得Se;③取1摩尔份的Se,加入甲醇溶解,再加入10%NaOH水溶液(含NaOH1.5摩尔份),搅拌30min后,加入30%H2O2(5摩尔份),在N2保护下回流反应3h(TLC检测反应进程),用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得U-15-1;④取1摩尔份的U-15-1,加入甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分2~3次加入5摩尔份的NaBH4,在N2保护下反应2h(TLC检测反应进程),用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得R-10-20;⑤取1摩尔份的R-10-20,加入丙酮溶解,加入1.5摩尔份的高氯酸,再加入蒸馏水一滴,在N2保护下反应18h(TLC检测反应进程),用氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂后,残余物经硅胶柱层析得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸。
前述方法制得的夏枯草酸在制备保肝药物中的应用:将夏枯草酸或者夏枯草酸溶解在氢氧化钠、氢氧化钾或氨水溶液中制得的夏枯草酸盐与适当辅料制成保肝药物制剂。
前述药物制剂为硬胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、颗粒剂或滴丸剂。
本发明所述夏枯草酸的应用方法,是将夏枯草酸或其盐(钠盐、钾盐或铵盐)作为药物来应用:可以加入惰性辅助剂和/或赋形剂将夏枯草酸或其盐制备成适宜的给药剂型;也可以将夏枯草酸或其盐作为肝损伤保护剂用于肝病的防治药物中。药物可以是片剂、胶囊剂、注射剂或丸剂等。具体应用方法可以采用现有技术中的常规方法,即按照本领域公知的制备方法,采用传统的添加剂、赋形剂制备;可以将一种或几种活性物质与一种或几种添加剂、赋形剂混合形成药用组合物,再将组合物制成药物。由此制得的药物根据需要可以非肠道、口服等途径给药。
经过试验研究发现,本发明所述夏枯草酸及其盐对四氯化碳诱导体外肝细胞损伤和体内肝损伤具有很好的保护作用,夏枯草酸对四氯化碳诱导小鼠肝损伤有很好的保护作用,可以作为保肝药物应用。以下是为验证夏枯草酸及其盐的生物活性效果而进行的生物活性试验。
1、体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用
试验样品:夏枯草酸、夏枯草酸钠盐。
方法:常规体外培养人肝HL-7702细胞接种于96孔板,分别给予不同浓度的两种样品(见表1、表2和表3)继续培养12h后,用三种不同剂量(8μl、6μl、4μl)CCl4造成肝损伤,每一种药物均设两个平行对照孔。应用MTS法在酶联免疫检测仪490nm测定吸光度,观察药物对CCl4所致肝细胞毒性的保护作用。相对正常组计算细胞生存率,用spss软件进行单因变量多因素方差分析。
结果:CCl4模型组对肝细胞造成明显损伤,而应用药物夏枯草酸、夏枯草酸钠盐的肝细胞生存率与模型组细胞生存率具有显著性差异,与正常组细胞生存率没有明显差异(见表1、表2和表3)。
结论:夏枯草酸及其钠盐均能显著提高模型组细胞的生存率,对人肝HL-7702细胞具有明显的保护作用。
试验结果:
表1体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用(8μl CCl4)
*给药组vs模型组,p<0.01;#模型组vs正常组,p<0.01。
表2体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用(6μl CCl4)
*给药组vs模型组,p<0.01;#模型组vs正常组,p<0.01。
表3体外对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用(4μl CCl4)
*给药组vs模型组,p<0.01;#模型组vs正常组,p<0.01。
2、对四氯化碳所致小鼠肝损伤的保护作用
A、试验材料
(1)受试药物
夏枯草酸:实验前用0.5%CMC配制成所需浓度混悬液。
(2)药品及试剂
阳性药:联苯双酯滴丸浙江医药股份有限公司新昌制药厂批号:091206
双环醇北京协和药厂批号:100602
B、试验动物
(1)来源及种属:KM小鼠,雌雄兼用,体重18~22g。由贵阳医学院实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(黔)2002-0001。
(2)饲养条件:KM小鼠,雌雄分笼饲养于洁净动物饲养柜中,小鼠每笼10只。动物室光照充足,通风和空调设备良好,室温18~25℃,相对湿度50~70%。
(3)数据分析与处理
数据以均数标准差表示,采用Excel 2000作统计学处理,计量资料采用Student-t检验。
C、给药途径
根据临床用药途径,试验动物采用灌胃给药。
D、实验方法与结果
(1)试验方法
取KM小鼠36只,雌雄各半,体重18~22g,随机分为6组:模型组(等容积0.5%CMC),正常组、联苯双酯组(3.75mg/kg)、双环醇组(12.5mg/kg)、夏枯草酸低剂量组(50mg/kg)、夏枯草酸高剂量组(170mg/kg),每组6只。阳性药为市售联苯双酯滴丸与双环醇片。给药容积20ml/kg,每天2次,连续给药2天。各组末次给药8h后腹腔注射0.1%CCl4花生油10ml·kg-1。禁食16h后处死小鼠,取血离心做ALT检查。
(2)试验结果(见表4)
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
结果表明,夏枯草酸高、低剂量组均可明显降低CCl4中毒小鼠的ALT,与模型组比较差异显著(P<0.01,P<0.05),其中夏枯草酸低剂量组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01),比阳性药效果还要明显。
结论:夏枯草酸在体内对四氯化碳诱导的肝(细胞)损伤有很好的保护活性。
与现有技术相比,本发明采用科学合理的工艺方法制备1α,2α-二羟基熊果酸(即夏枯草酸),该方法反应条件温和,无需特殊仪器设备,操作简单易行,易于扩大规模、实现工业化生产的目的;而且采用本发明方法制备的夏枯草酸及其盐(钠盐、钾盐或铵盐)具有显著的肝损伤保护作用(体外和体内),可用于保肝药物的制备。
具体实施方式
下面所给出的优选实施例,旨在进一步阐明本发明所述化合物的合成方法及其应用,而并非局限于所列举的实例范畴,也并非限定本发明权利要求中提出的技术方案,即是说通过这些实施例所述的方法可很容易地制得夏枯草酸及其药物制剂。
实施例1:化合物U-2的合成
取1.000g熊果酸(2.19mmol)(即U-1)于250mL圆底烧瓶中,用120mL丙酮溶解,置于冰水浴中搅拌15min,缓慢滴加Jones试剂0.936mL(2.5mmol),在N2保护下搅拌5h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1NaOH水溶液调节pH至中性,减压蒸去溶剂,用乙酸乙酯萃取,所得残余物经硅胶柱层析纯化得946mgU-2(95.0%)。
U-2白色粉末,mp 256~258℃;IR(KBr)υmax1694cm-1,2922cm-1;1H-NMR(CDCl3)δ:5.25(1H,s,H-12),1.08,1.08,1.05,1.02,0.82(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.96~0.95(3H,d,J=4.0Hz,H-29),0.87~0.85(3H,d,J=6.0Hz,H-30);13C-NMR(CDCl3)δ:217.8(C-3),183.8(C-28),138.0(C-13),125.5(C-12),55.2(C-5),52.5(C-18),47.9(C-17),47.3(C-8),46.7(C-9),42.0(C-14),39.4(C-4),39.2(C-1),39.0(C-20),38.7(C-19),36.6(C-22),36.6(C-10),34.1(C-7),32.4(C-21),30.5(C-15),27.9(C-12),26.5(C-23),24.0(C-16),23.5(C-27),23.3(C-11),21.4(C-30),31.1(C-29),19.5(C-6),16.9(C-25),16.9(C-26),15(C-24);MS(EI)m/z:454(M+),248(100),203,133,55,43。
实施例2:化合物U-3的合成
取414mg(0.912mmol)U-2于250mL的圆底烧瓶中,加入25mL的丙酮溶解,再加1.2g(9.12mmol)K2CO3,室温下搅拌30min,再加128μL(1.07mmol)溴化苄,在N2保护下反应18h反应完成(TLC检测反应进程),减压除去丙酮,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残留物经硅胶柱层析得430mg U-3(86.7%)。
U-3白色粉末,mp 96~98℃;IR(KBr)υmax1715cm-1,2940cm-1,1450cm-1,1379cm1;1H-NMR(CDCl3)δ:7.35(s,5H),5.28(1H,s,H-12),4.97-5.12(2H,dd,benzyl),1.08,1.03,1.02,1.00,0.68(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.94~0.92(3H,d,J=9.2Hz,H-29),0.86~0.84(3H,d,J=6.8Hz,H-29);13C-NMR(CDCl3)δ:217.8(C-3),177.1(C-28),138.1(C-13),136.2(s),128.4(s),128.2(s),128.1(s),127.9(s),127.9(s),125.4(C-12),65.9(benzyl),55.2(C-5),52.9(C-18),48.0(C-17),47.3(C-8),46.7(C-9),42.0(C-14),39.4(C-4),39.2(C-1),39.0(C-20),38.7(C-19),36.5(C-22),36.5(C-10),34.1(C-7),32.4(C-21),30.6(C-15),27.8(C-12),26.5(C-23),24.1(C-16),23.4(C-27),23.3(C-11),21.4(C-30),21.1(C-29),19.5(C-6),16.9(C-25),16.9(C-26),15.1(C-24);MS(EI)m/z:544(M+),91(100),248,203,133,55,43。
实施例3:化合物Se-1的合成
取400mg(0.735mmol)U-3、110mg(1.10mmol)SeO2于50mL圆底烧瓶中,加入20mL乙酸酐,在N2保护下回流5h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残余物经硅胶柱层析得191mg Se-1(47.9%)。
Se-1白色粉末,mp 127~130℃;IR(KBr)υmax1724cm-1,2926cm-1,1667cm-1,1456cm-1,1383cm-1;1H-NMR(CDCl 3)δ:7.35(s,5H),7.06~7.04(d,J=10.4,1H,H-1),5.81~5.79(1H,d,J=10.4Hz,H-2),5.29(1H,s,H-12),4.98-5.13(2H,dd,benzyl);2.31~2.28(1H,d,J=11.2,H-18),1.14,1.13,1.09,1.03,0.70(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.94~0.93(3H,d,J=6.8Hz,H-29),0.87~0.85(3H,d,J=6.4Hz,H-30)ppm;13C-NMR(CDCl3)δ:205.4(C-3),177.2(C-28),159.4(C-1),138.6(C-13),136.2(s),128.3(s),128.2(s),128.0(s),127.9(s),127.9(s),124.9(C-2),124.9(C-12),65.9(benzyl),53.3(C-5),53.0(C-18),48.1(C-17),44.5(C-14),42.3(C-4),41.6(C-9),40.2(C-8),39.2(C-10),38.9(C-20),38.7(C-19),36.5(C-22),32.7(C-7),30.6(C-21),29.6(C-15),24.1(C-16),23.3(C-23),23.1(C-11),21.6(C-27),21.0(C-30),18.8(C-6),18.7(C-26),17.5(C-25),16.9(C-24);MS(EI)m/z 452(M+),248(100),203,133。
实施例4:化合物U-15的合成
取200mg(0.442mmo)Se-1于50mL圆底烧瓶中,加入25mL甲醇溶解,加入10%NaOH水溶液265μL(0.663mmol),搅拌30min后,加入500μL30%H2O2(4.42mmol),在N2保护下回流3h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得152mg U-15(74%)。
U-15白色粉末,mp 95~98℃;IR(KBr)υmax1725cm-1,2926cm-1,1694cm-1,1466cm-1,1385cm-1;1H-NMR(CDCl3)δ:7.35(s,5H),5.28(1H,s,H-12),5.13~4.97(2H,dd,benzyl),3.51~3.50(1H,d,J=4.4Hz,H-2),3.38~3.37(1H,d,J=4.4Hz,H-1),2.31~2.28(1H,d,J=11.2Hz,H-18),1.12,1.08,0.99,0.95,0.70(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.94~0.93(d,J=4.0Hz,3H,H-29),0.87~0.86(d,J=6.4Hz,3H,H-30)ppm;13C-NMR(CDCl3)δ:212.8(C-3),177.2(C-28),138.7(C-13),136.2(s),128.3(s),128.1(s),128.0(s),127.9(s),127.9(s),124.8(C-12),65.9(C-1),64.0(C-2),56.8(benzyl),53.0(C-18),48.1(C-17),46.7(C-4),45.9(C-5),42.5(C-14),40.4(C-9),39.6(C-8),39.0(C-19),38.7(C-20),38.3(C-10),36.5(C-22),32.4(C-7),30.6(C-21),27.9(C-15),27.9(C-23),24.1(C-16),23.7(C-11),23.5(C-27),23.3(C-30),21.1(C-29),18.7(C-6),17.6(C-26),17.1(C-25),16.9(C-24);MS(EI)m/z 558(M+),91(100),133,467,543。
实施例5:化合物R-10-1的合成
取200mgU-15(0.358mmol)于50mL圆底烧瓶中,加入25mL甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分3次加入136mg(3.58mmol)NaBH4,在N2保护下反应2h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得50mg R-10-1(22%)。
R-10-1白色粉末,IR(KBr)υmax1715cm-1,2930cm-1,1654cm-1,1455cm-1;1H-NMR(CDCl3)δppm:7.33(s,5H),5.23(1H,s,H-12),5.13~4.98(2H,dd,benzyl),3.51(1H,brs,H-3),3.05~3.07(1H,m,H-2),3.0~2.99(1H,brs,H-1);13C-NMR(CDCl3)δ:177.3(C-28),138.4(C-13),136.2(s),128.2(s),128.1(s),128.0(s),127.7(s),127.9(s),125.0(C-12),75.6(C-3),65.7(benzyl),60.2(C-1),57.5(C-2),52.7(C-18),48.0(C-17),45.3(C-5),41.4(C-14),41.1(C-9),39.5(C-8),39.0(C-19),38.9(C-4),38.8(C-20),36.9(C-10),36.5(C-22),32.5(C-7),30.4(C-21),28.5(C-23),27.7(C-15),24.1(C-16),23.5(C-27),23.3(C-11),21.1(C-30),18.2(C-29),17.0(C-26),16.9(C-25),16.7(C-6),16.4(C-24);MS(EI)m/z 560(M+),91(100),247,433,451,524,542。
实施例6:化合物FU-16-1的合成
取100mg(0.179mmol)R-10-1于50mL圆底烧瓶中,加入25mL丙酮溶解,加入16μL(0.268mmol)高氯酸,再加入蒸馏水两滴,在N2保护下反应18h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得20mg FU-16-1(19.4%)。
FU-16-1白色粉末,IR(KBr)υmax3442cm-1,2920cm-1,1630cm-1,1390cm-1;1H-NMR(CD3OD)δppm:5.22(1H,s,H-12),5.10~4.95(2H,dd,benzyl),3.90(1H,m,H-2),3.60(1H,brs,H-3),3.45(1H,brs,H-1);13C-NMR (CD3OD)δppm:180.3(C-28),139.6(C-13),136.1(s),128.2(s),128.1(s),127.9(s),127.8(s),127.8(s),127.2(C-12),77.6(C-3),76.0(C-1),75.2(C-2),65.9(benzyl),;MS(EI)m/z:578(M+),91(100),248,469,524,542,。
实施例7:夏枯草酸的合成
取100mg(0.173mmol)FU-16-1溶解于20mL无水甲醇中,加入10mg钯碳作为催化剂,室温下氢化还原,即得80mg夏枯草酸(95%)。
夏枯草酸:白色粉晶,mp 220~222℃;IR(KBr)υmax3440cm-1;1H-NMR(CD3OD)δ:5.23(1H,s,H-12),3.91(1H),3.60(1H),3.46(1H);13C-NMR(CD3OD)δ:180.4(C-28),139.6(C-13),127.0(C-12),77.5(C-3),75.2(C-1),75.0(C-2);MS (EI)m/z:488(M+),248(100),203,189,133.
实施例8:化合物Se的合成
取U-2400mg(0.881mmol)、SeO2176mg(1.76mmol)于50mL圆底烧瓶中,加入20mL乙酸酐,在氮气保护下回流5h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得191mg Se(46.7%)。
Se白色粉末,mp 127~130℃;IR(KBr)υmax1698cm-1,2962cm-1;1H-NMR(CDCl3)δ:7.07~7.05(1H,d,J=10.4Hz,H-1),5.82~5.80(1H,d,J=10.4Hz,H-2),5.25(1H,s,H-12),2.31~2.28(1H,d,J=11.2Hz,H-18),1.17,1.16,1.10,1.08,0.85(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.96~0.94(3H,d,J=6.4Hz,H-29),0.87~0.86(3H,d,J=4.4Hz,H-30)ppm;13C-NMR(CDCl3)δ:205.3(C-3),183.8(C-28),159.3(C-1),138.0(C-13),124.9(C-2),124.9(C-12),53.3(C-5),53.0(C-18),48.1(C-17),44.5(C-14),42.3(C-4),41.6(C-9),40.2(C-8),39.2(C-10),38.9(C-20),38.7(C-19),36.5(C-22),32.7(C-7),30.6(C-21),29.6(C-15),24.1(C-16),23.3(C-23),23.1(C-11),21.6(C-27),21.0(C-30),18.8(C-6),18.7(C-26),17.5(C-25),16.9(C-24);MS(EI)m/z 452(M+),248(100),203,133,437。
实施例9:化合物U-15-1的合成
取400mg Se(0.881mmol)于50mL圆底烧瓶中,加入25mL甲醇溶解,加入10%NaOH水溶液53μL(1.321mmol),搅拌30min后,加入498Ml 30%H2O2(4.40mmol),在N2保护下回流3h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得317mg U-15-1(76.6%)。
U-15-1白色粉末,mp 138~140℃;IR(KBr)υmax1692cm-1,2923cm-1,1468cm-1;1H-NMR(CDCl 3)δ:5.30(1H,s,H-12),3.52~3.51(1H,d,J=4.8,H-2),3.39~3.37(1H,d,J=4.8,H-1),1.25,1.20,1.15,0.96,0.84(3H×5,s,23,24,25,26,27),0.95~0.93(3H,d,J=6.4,H-29),0.86~0.85(3H,d,J=6.0,H-30);13C-NMR(CDCl3)δ:212.7(C-3),183.9(C-28),138.5(C-13),124.9(C-12),63.9(C-1),56.9(C-2),52.6(C-18),48.0(C-17),45.9(C-5),44.7(C-14),42.1(C-20),40.4(C-9),38.9(C-19),38.6(C-20),38.4(C-4),36.7(C-10),36.5(C-22),32.3(C-7),30.5(C-21),28.0(C-15),27.9(C-23),23.9(C-16),23.7(C-11),23.4(C-27),21.1(C-30),20.8(C-29),18.7(C-6),17.6(C-26),16.9(C-25),15.0(C-24);MS(EI)m/z 468(M+),202(100),43,248,422,450。
实施例10:化合物R-10-20的合成
取200mg U-15-1(0.427mmol)于50mL圆底烧瓶中,加入25mL甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分3次加入81mg(2.136mmol)NaBH4,在N2保护下反应2h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得60mg R-10-20(30%)。
R-10-20白色粉末,IR(KBr)υmax1691cm-1,2915cm-1,1465cm-1;1H-NMR(CDCl3)δppm:5.31(1H,s,H-12),3.49(1H,brs,H-3),3.07~3.06(1H,m,H-2),3.02~3.01(1H,brs H-1);13C-NMR(CDCl3)δ:183.3(C-28),138.4(C-13),125.0(C-12),75.4(C-3),60.1(C-1),57.4(C-2);MS(EI)m/z:470(M+),248(100),452,203,133.
实施例11:夏枯草酸的合成
取100mg R-10-20(0.213mmol)于50mL圆底烧瓶中,加入25mL丙酮溶解,加入18μL(0.319mmol)高氯酸,加入蒸馏水一滴,在N2保护下反应18h反应完成(TLC检测反应进程),用2mol·L-1氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂后,残余物经硅胶柱层析得30mg夏枯草酸(29%)。
夏枯草酸:白色粉晶,mp 220~222℃;IE(KBr)υmax3440cm-1;1H-NMR(CD3OD)δ:5.23(1H,s,H-12),3.91(1H),3.60(1H),3.46(1H);13C-NMR(CD3OD)δ:180.4(C-28),139.6(C-13),127.0(C-12),77.5(C-3),75.2(C-1),75.0(C-2);MS (EI)m/z:488(M+),248(100),203,189,133.
实施例12:取夏枯草酸或其盐(钠盐、钾盐或铵盐),粉碎后过80目筛,加入适量淀粉、糊精、乳糖按等量倍增法混合均匀,制粒,干燥,整粒,分装于胶囊壳中,得硬胶囊剂;分装于铝膜袋中,得颗粒剂;颗粒压片得片剂。各制剂均为口服,一日两次,每次服药量以原料药计为5-30毫克。
实施例13:取夏枯草酸或其盐(钠盐、钾盐或铵盐),粉碎后过80目筛,加入适量含10%蜂蜡的植物油,混合均匀;以明胶∶甘油∶蒸馏水∶防腐剂=1∶0.4∶0.8∶0.003制备囊材,压制,得软胶囊剂。该制剂口服,一日两次,每次服药量以原料药计为5-30毫克。
实施例14:取夏枯草酸或其盐(钠盐、钾盐或铵盐),粉碎后过80目筛,加入熔融的聚乙二醇中,混匀,在保温条件下于植物油中滴制成滴丸,得滴丸剂。该制剂口服,一日两次,每次服药量以原料药计为5-30毫克。
Claims (6)
2.根据权利要求1所述夏枯草酸的制备方法,其特征在于:具体制备过程为:①取1摩尔份的熊果酸,用丙酮溶解,置于冰水浴中搅拌15min,缓慢滴加1.14摩尔份的Jones试剂,在N2保护下搅拌反应5h,用NaOH水溶液调节pH至中性,减压蒸去溶剂,用乙酸乙酯萃取,所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2;②取1摩尔份的U-2,加入丙酮溶解,再加10摩尔份的K2CO3,室温下搅拌30min,再加1.17摩尔份的溴化苄,在N2保护下反应18h,减压除去丙酮,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残留物经硅胶柱层析得U-3;③取1摩尔份的U-3和1.5摩尔份的SeO2,加入乙酸酐,在N2保护下回流反应5h,用2N氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤、无水MgSO4干燥,减压除去溶剂,残余物经硅胶柱层析得Se-1;④取1摩尔份Se-1,加入甲醇溶解,再加入含1.5摩尔份NaOH的10%NaOH水溶液,搅拌30min后,加入10摩尔份30%H2O2,在N2保护下回流反应3h,用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得U-15;⑤取1摩尔份U-15,加入甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分2~3次加入10摩尔份NaBH4,在N2保护下反应2h,用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得R-10-1;⑥取1摩尔份R-10-1,加入丙酮溶解,加入1.5摩尔份高氯酸,再加入蒸馏水两滴,在N2保护下反应18h,用氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得FU-16-1;⑦取FU-16-1溶解于无水甲醇中,加入0.1倍于FU-16-1摩尔量的钯碳作为催化剂,室温下氢化还原,即得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸。
4.根据权利要求3所述夏枯草酸的制备方法,其特征在于:具体制备过程为:①取1摩尔份的熊果酸,用丙酮溶解,置于冰水浴中搅拌15min,缓慢滴加1.14摩尔份的Jones试剂,在N2保护下搅拌反应5h,用NaOH水溶液调节pH至中性,减压蒸去溶剂,用乙酸乙酯萃取,所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2;②取1摩尔份的U-2和2摩尔份的SeO2,加入乙酸酐,在氮气保护下回流反应5h,用2N氢氧化钠水溶液终止反应,加入适量水后用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得Se;③取1摩尔份的Se,加入甲醇溶解,再加入含1.5摩尔份NaOH的10%NaOH水溶液,搅拌30min后,加入5摩尔份30%H2O2,在N2保护下回流反应3h,用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得U-15-1;④取1摩尔份的U-15-1,加入甲醇溶解,在0~5℃下搅拌15min后,分2~3次加入5摩尔份的NaBH4,在N2保护下反应2h,用盐酸水溶液调节pH至中性,回收甲醇,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂,残余物经硅胶柱层析得R-10-20;⑤取1摩尔份的R-10-20,加入丙酮溶解,加入1.5摩尔份的高氯酸,再加入蒸馏水一滴,在N2保护下反应18h,用氢氧化钠水溶液调节pH至中性,回收丙酮,残余物加水分散,用乙酸乙酯萃取,有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥,减压回收溶剂后,残余物经硅胶柱层析得1α,2α-二羟基熊果酸,即夏枯草酸。
5.如权利要求1-4中任一项所述制备方法制得的夏枯草酸在制备保肝药物中的应用,其特征在于:将夏枯草酸或者夏枯草酸溶解在氢氧化钠、氢氧化钾或氨水溶液中制得的夏枯草酸盐与适当辅料制成保肝药物制剂。
6.根据权利要求5所述夏枯草酸在制备保肝药物中的应用,其特征在于:所述的药物制剂为硬胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、颗粒剂或滴丸剂。
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