CN108164578B - 一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的应用 - Google Patents

一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的应用，属于生物医药技术领域。首先将万丈深经粉碎后得到粗粉，将粗粉加入到甲醇中浸提，将浸提液减压浓缩后得到的甲醇浸膏；将得到的甲醇浸膏采用水进行分散后，加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏；将得到的乙酸乙酯浸膏采用AB‑8树脂进行纯化，洗脱液经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。本发明的制备方法操作简单、成本低廉，易于工业化生产。本发明制备的万丈深总三萜提取物纯度高，具有显著的治疗急性炎症的效果，可以应用于治疗炎症相关的疾病。

Description

一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的 应用
技术领域
本发明涉及一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
炎症反应是具有血管系统的活体组织在致炎因子及局部损伤等刺激下所引发的最普遍的免疫性防御反应。过度剧烈和不受控制的炎症则会导致细胞和组织的损伤，进而造成机体产生各种疾病。在临床药物使用中，无论甾体类或者非甾体类抗炎药均有诸多不良反应。近年来的研究发现，多种天然药物活性成分显示出不同程度的抗炎效果，如大多萜类化合物具有良好的抗炎活性。以天然来源的植物提取物为代表的新药物的开发，可作为治疗炎症的潜在的替代品。
万丈深(Crepis phoenix Dunn)为菊科还阳参属植物，传统以根入药，具有润肺止咳、清热解毒的功效，其主要成分为三萜类化合物。据报道，含有万丈深的药物组合可用于治疗狼疮性肾炎（发明专利CN201610048309.7）、急性乳腺炎（发明专利CN201610407103.9）、肺炎（发明专利CN201510558732.7）等，但是对于单味万丈深的抗炎作用尚未报道。本发明从万丈深的根部提取分离出三萜总皂苷，并将其应用于治疗炎症相关的疾病。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题及不足，本发明提供一种万丈深总三萜提取物的制备方法及其在抗炎药物中的应用。本发明的制备方法操作简单、成本低廉，易于工业化生产。本发明通过以下技术方案实现。
一种万丈深总三萜提取物的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：首先将万丈深经粉碎后得到粗粉，将粗粉按照料液比为1：5～15kg/L加入到甲醇中浸提，将浸提液减压浓缩后得到的甲醇浸膏；
步骤2、乙酸乙酯提取：将步骤1得到的甲醇浸膏采用水进行分散后，根据相比为1：1～1.5加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏；
步骤3、总三萜的分离纯化：将步骤2得到的乙酸乙酯浸膏采用AB-8树脂进行纯化，溶剂系统为乙醇/水，然后依次用30%乙醇、95%乙醇洗脱，得到95%乙醇洗脱液，经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。万丈深总三萜提取物中总三萜的含量>80wt%。
所述步骤3得到的万丈深总三萜提取物采用硅胶柱色谱分离，然后洗脱，洗脱液浓缩后得到降香萜烯乙酸酯，降香萜烯乙酸酯其结构式如下：
Figure 882118DEST_PATH_IMAGE001
。
一种万丈深总三萜提取物在制备治疗炎症的药物中应用。
上述炎症主要包括肺炎、肝炎、肾炎、关节炎、盆腔炎、宫颈炎、乳腺炎等。治疗炎症的药物为抗炎活性的药物组合物，该药物组合物可含有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。所述的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，包括填充剂如淀粉、糊精、微晶纤维素、无机盐类等；粘合剂如淀粉浆、羟丙基纤维素、甲基纤维素等；崩解剂如干淀粉、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮等；湿润剂如蒸馏水、乙醇等。
本发明制备得到的万丈深总三萜提取物可以以单位剂量形式给药，给药途径可为肠内给药和肠外给药，包括口服、肌肉注射、皮下注射等。
本发明提供的药物剂型可以为固体制剂或液体制剂，主要包括片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、气雾剂等。
本发明的有益效果是：
（1）本发明的制备方法操作简单、成本低廉，易于工业化生产；
（2）本发明制备的万丈深总三萜提取物纯度高，具有显著的治疗急性炎症的效果，可以应用于治疗炎症相关的疾病。
附图说明
图1是本发明制备方法工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式，对本发明作进一步说明。
实施例1
如图1所示，该万丈深总三萜提取物的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：首先将万丈深(1kg)经粉碎后得到粗粉，将粗粉按照料液比为1：5kg/L加入到甲醇中浸提3次，将合并的浸提液减压浓缩后得到的244.3g甲醇浸膏；
步骤2、乙酸乙酯提取：将步骤1得到的甲醇浸膏采用1L水进行分散后，根据相比为1：1.5加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得27.6g乙酸乙酯浸膏；
步骤3、总三萜的分离纯化：将步骤2得到的乙酸乙酯浸膏采用AB-8树脂进行纯化，具体的纯化过程为:将乙酸乙酯浸膏溶解于30％乙醇溶液，上样于1L体积AB-8树脂柱，溶剂系统为乙醇/水，然后依次用5L30%乙醇、10L95%乙醇洗脱，得到95%乙醇洗脱液，经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。万丈深总三萜提取物中总三萜的含量采用香草醛-冰醋酸体系紫外可见分光光度法测得提取物中总三萜的含量为85wt%。
上述步骤3得到的万丈深总三萜提取物采用硅胶柱色谱分离，然后洗脱（依次用体积比为石油醚：乙酸乙酯（95：5、90：10、85:15、80：20、50：50），洗脱液（石油醚：乙酸乙酯=95：5）浓缩后得到降香萜烯乙酸酯，降香萜烯乙酸酯其结构式如下：
Figure 989751DEST_PATH_IMAGE001
。本实施例提取到的降香萜烯乙酸酯的理化特征及化学结构的定性鉴定如下：降香萜醇乙酸酯 (bauerenyl acetate)：白色无定形粉末。分子式C32H52O2。1H-NMR (CDCl3，500 MHz)。δ：5.40(1H，d，J=2.6 Hz，H-7)，4.51(1H，dd，J=4.5 Hz，10.9 Hz，H3-3)，2.05(3H，s，COCH3)，1.05(3H，d，J=7.3 Hz，H3-29)，1.04，0.99，0.94，0.92(各3H，s，H3-23，H3-24，H3-26，H3-27)，0.90(3H，d，J=5.9 Hz，H3-30)，0.86，0.76，(各3H，s，H3-25，H3-28)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)。δ：145.4(C-8)，116.3(C-7)，81.2(C-3)，54.9(C-9)，50.6(C-5)，48.2(C-18)，41.3(C-14)，38.0(C-20)，37.8(C-22)， 37.7(C-1)，37.7(C-4)， 36.5(C-19)，35.3(C-10)，35.1(C-16)，32.4(C-13)，32.0(C-17)，31.5(C-12)，29.2(C-11)，28.9(C-21)，27.5(C-24)，25.6(C-28)，24.2(C-6)，24.0(C-2)，23.7(C-29)，22.7(C-26)，22.6(C-27)，21.4(C-30)，16.8(C-15)，15.7(C-23)，13.0(C-25)，171.0(COCH 3 )，21.4(COCH3 )。
该万丈深总三萜提取物能够在制备治疗炎症的药物中应用。研究万丈深总三萜提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响。
实验方法：
取60只昆明种小鼠（体重18~22 g，雌雄各半）适应性喂养2天，随机分成5组，模型组、地塞米松组（10mg·kg-1）及万丈深总三萜提取物低（50mg·kg-1）、中（100mg·kg-1）、高剂量组（200mg·kg-1），每组12只。各组小鼠每天灌胃给药1次，给予模型组相同体积的蒸馏水，连续7d。末次给药后将1%（30 μL，W/V）角叉菜胶分别注射于各组小鼠左足趾皮下组织，阴性对照组给予注射30μL0.9%生理盐水于小鼠左足皮下组织。用游标卡尺测量小鼠左足趾的厚度，每次测量3个重复。
小鼠足肿率按以下公式计算：
足肿胀率（%）=（Tt -T0）/ T0×100%，Tt ：表示小鼠在t时的左足趾厚度（mm），T0表示小鼠在注射角叉菜胶前的左足趾厚度（mm）。
实验结果：
由表1可知，模型组小鼠的左足趾在注射角叉菜胶1h后开始出现发红、肿胀等急性炎症反应。与模型组比较，在6 h时，阳性地塞米松组及万丈深总三萜提取物中、高剂量组均能显著降低小鼠的足肿胀度，其足肿胀率分别为21.74%、26.67%、23.47%（p<0.01）。
表 1 万丈深总三萜提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响(
Figure 916119DEST_PATH_IMAGE002
)
Figure 996070DEST_PATH_IMAGE003
（注：各给药组与模型组相比，* p <0.05，** p<0.01）
实施例2
如图1所示，该万丈深总三萜提取物的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：首先将万丈深(1kg)经粉碎后得到粗粉，将粗粉按照料液比为1：15加入到甲醇中浸提3次，将合并的浸提液减压浓缩后得到的258.6g甲醇浸膏；
步骤2、乙酸乙酯提取：将步骤1得到的甲醇浸膏采用1L水进行分散后，根据相比为1：1加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得25.3 g乙酸乙酯浸膏；
步骤3、总三萜的分离纯化：将步骤2得到的乙酸乙酯浸膏采用AB-8树脂进行纯化，具体的纯化过程为: 将乙酸乙酯浸膏溶解于30％乙醇溶液，上样于1L体积 AB-8树脂柱，溶剂系统为乙醇/水，溶剂系统为乙醇/水，然后依次用5L30%乙醇、10L95%乙醇洗脱，得到95%乙醇洗脱液，经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。万丈深总三萜提取物中总三萜的含量采用香草醛-冰醋酸体系紫外可见分光光度法测得提取物中总三萜的含量为84wt%。
实施例3
如图1所示，该万丈深总三萜提取物的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：首先将万丈深(1kg)经粉碎后得到粗粉，将粗粉按照料液比为1:10加入到甲醇中浸提3次，将合并的浸提液减压浓缩后得到的244.5g甲醇浸膏；
步骤2、乙酸乙酯提取：将步骤1得到的甲醇浸膏采用1L水进行分散后，根据相比为1：1.2加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得26.8g乙酸乙酯浸膏；
步骤3、总三萜的分离纯化：将步骤2得到的乙酸乙酯浸膏采用AB-8树脂进行纯化，具体的纯化过程为：将乙酸乙酯浸膏溶解于30％乙醇溶液，上样于1L体积 AB-8树脂柱，溶剂系统为乙醇/水，溶剂系统为乙醇/水，然后依次用5L30%乙醇、10L95%乙醇洗脱，得到95%乙醇洗脱液，经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。万丈深总三萜提取物中总三萜的含量采用香草醛-冰醋酸体系紫外可见分光光度法测得提取物中总三萜的含量为85wt%。
以上结合附图对本发明的具体实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (3)

1.一种万丈深总三萜提取物的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：首先将万丈深经粉碎后得到粗粉，将粗粉按照料液比为1：5～15kg/L加入到甲醇中浸提，将浸提液减压浓缩后得到甲醇浸膏；
步骤2、乙酸乙酯提取：将步骤1得到的甲醇浸膏采用水进行分散后，根据相比为1：1～1.5加入乙酸乙酯进行萃取，将萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏；
步骤3、总三萜的分离纯化：将步骤2得到的乙酸乙酯浸膏采用AB-8树脂进行纯化，溶剂系统为乙醇/水，然后依次用30%乙醇、95%乙醇洗脱，得到95%乙醇洗脱液，经减压浓缩、干燥后得到万丈深总三萜提取物。
2.根据权利要求1所述的万丈深总三萜提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤3得到的万丈深总三萜提取物采用硅胶柱色谱分离，然后洗脱，洗脱液浓缩后得到降香萜烯乙酸酯。
3.一种根据权利要求1或2所述的万丈深总三萜提取物在制备治疗炎症的药物中应用。
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