CN106727598A - 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用 - Google Patents

阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106727598A
CN106727598A CN201611051401.5A CN201611051401A CN106727598A CN 106727598 A CN106727598 A CN 106727598A CN 201611051401 A CN201611051401 A CN 201611051401A CN 106727598 A CN106727598 A CN 106727598A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
acid
olean
application
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611051401.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106727598B (zh
Inventor
谭建文
罗应
周忠玉
任慧
徐巧林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Botanical Garden of CAS
Original Assignee
South China Botanical Garden of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Botanical Garden of CAS filed Critical South China Botanical Garden of CAS
Priority to CN201611051401.5A priority Critical patent/CN106727598B/zh
Publication of CN106727598A publication Critical patent/CN106727598A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106727598B publication Critical patent/CN106727598B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供了阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用。本发明的六种具强效抑制α‑糖苷酶活性的化合物为安全性高并在环境中能快速自然降解无残留的天然化合物，它们可自阔叶丰花草等植物材料中分离获得，植物材料来源丰富，制备过程易于操作。所述的六种化合物的单体均较稳定、易存放，它们的α‑糖苷酶抑制活性显著强于临床用药阿卡波糖，极可能进一步发展为有效、安全的预防和治疗Ⅱ型糖尿病的α‑糖苷酶抑制剂类药物，具有较好前景。

Description

阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂 药物中的应用
本申请是专利申请号：201410718340.8，申请日：2014年12月1日，发明名称：阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用的分案申请。
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，具体涉及六种三萜类化合物即mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaric acid(4)、arjunic acid(5)、3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(6)或其可药用的盐在制备糖苷酶抑制剂或药物中的应用，以及它们的制备方法。
发明背景
糖尿病为临床上常见的内分泌代谢失调性疾病，其与心血管疾病和癌症等逐年高发具有重要的相关性，是人类健康重要的杀手。目前，在全球范围内糖尿病的发病率正在提高，在我国更是有超过1亿人的患病率，并呈现逐年增加的趋势。糖尿病正给我国人民健康和国民经济造成越来越重大的损失。
糖尿病西医分为Ⅰ型糖尿病(或称胰岛素依赖性，DM1)和Ⅱ型糖尿病(或称非胰岛素依赖性，DM2)，其中Ⅱ型糖尿病发病与患病率均远高于Ⅰ型糖尿病，因而危害更大。竞争性α-糖苷酶抑制剂具有推迟糖类物质消化吸收、控制饭后血糖急剧升高、进而使血糖浓度在一天内变化波动幅度减小等功能，是可开发用于治疗Ⅱ型糖尿病的潜在药物。目前已开发上市正临床试用作治疗Ⅱ型糖尿病的重要α-糖苷酶抑制剂包括一线用药acarbose(阿卡波糖)、voglibose、miglitol和emigliate等。
六种三萜化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaric acid(4)、arjunicacid(5)、3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(6)分别曾自其他植物中分离获得(具体见文献：Magina et al.,Quim Nova,2012,35:1184-1188；Huu et al.,J Chem,2007,45:363-367；Kuo et al.,Chem Pharm Bull,1988,36:3619-3622；Ponouet al.,ChemBiodivers,2011,8:1301-1309；Lavaud et al.,Phytochemistry,2001,57:469-478；Khanet al.,J Nat Prod,1993,56:2163-2165)，它们的化学结构式如下式(Ⅰ)所示，到目前还未见这些化合物具有糖苷酶抑制剂活性的报道，以及未见其自阔叶丰花草(Spermacocelatifolia)植物中分离获得的报道。
发明内容
本发明的第一个目的是提供化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhedera genin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaric acid(4)、arjunic acid(5)、3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oicacid(6)或它们的可药用盐，在制备α-糖苷酶抑制剂药物中的应用。
经体外药理实验证实，本发明提供的化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaric acid(4)、arjunic acid(5)或3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oicacid(6)均具有强效抑制α-葡萄糖苷酶的活性，它们抑制α-葡萄糖苷酶的活性均显著强于糖尿病一线用药阿卡波糖，因此可发展制备用于预防和治疗α-糖苷酶引起或有关的生理改变或疾病的潜在药物候选分子。其中，与α-糖苷酶引起或有关的生理改变或疾病包括但不限于Ⅱ型糖尿病。
本发明所述的六种化合物的可药用的盐，其在人消化道中于胃酸等生理条件下可转化为以上式(Ⅰ)所示的对应三萜化合物分子，其实质性抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分与以上所示的六种三萜化合物分子相同，因而属于本发明的严格保护范围。
本发明的以上所述的六种三萜化合物分子或其可药用的盐可与药学上常用辅料或载体结合，制备得到具有以上所述六种化合物分子之任意一种或多种抑制α-糖苷酶活性的可用于预防和治疗Ⅱ型糖尿病的药物或药物组合物。该药物或药物组合物可采用可湿性粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸等剂型，还可采用制药界公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
以本发明所述的以上六种三萜化合物分子中的一种或多种为有效成分的包括阔叶丰花草等植物的提取物在制备α-糖苷酶抑制剂药物中的应用，因其是以本发明所述的六种化合物分子中的一种或多种为实质性有效成分，因而属于本发明的严格保护范围范畴。
本发明的第二个目的是提供化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaricacid(4)、arjunic acid(5)、3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(6)的制备方法，其特征在于，所述的化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaricacid(4)、arjunic acid(5)、3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(6)是从阔叶丰花草(Spermacoce latifolia Aubl.K.Schum.)植株中分离得到的。
优选，具体步骤为：
将干燥的阔叶丰花草全株粉碎后用乙醇或乙醇水溶液提取，提取液经浓缩后得到浸膏，浸膏加水混悬，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，浓缩后分别得到石油醚萃取部分和乙酸乙酯萃取部分；石油醚萃取部分经正相硅胶柱层析，以石油醚/丙酮从体积比100：0-0-100梯度洗脱，收集石油醚-丙酮体积比10：1洗脱的馏分E6，馏分E6经MCI柱除去色素，用甲醇洗脱得到甲醇洗脱部分E6-1，E6-1依次通过反相中压柱层析，甲醇/水体积比从30:70-100:0梯度洗脱、Sephadex LH-20凝胶柱，以甲醇洗脱，和正相硅胶层析，以氯仿/甲醇体积比100:1洗脱，得到化合物1；
乙酸乙酯萃取部分经正相硅胶柱层析，以氯仿/甲醇从体积比100:1-0:100梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比25:1洗脱的馏分F5，F5经反相中压柱层析，甲醇/水从体积比30:70-100:0,梯度洗脱，收集甲醇/水体积比80:20洗脱的馏分F5-4和甲醇/水体积比90:10洗脱的馏分F5-5；馏分F5-4经Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇洗脱，再经正相硅胶层析柱分离纯化，以氯仿/甲醇体积比50:1洗脱，得到化合物3，4，5和6；馏分F5-5经Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇洗脱，得到化合物2。
本发明的第三个目的是提供阔叶丰花草在制备化合物mesembryanthemoidigenicacid(1)、29-hydroxyhederagenin(2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)、scutellaric acid(4)、arjunic acid(5)或3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oicacid(6)中的应用。
本发明的六种具强效抑制α-糖苷酶活性的化合物为安全性高并在环境中能快速自然降解无残留的天然化合物，它们可自阔叶丰花草等植物材料中分离获得，植物材料来源丰富，制备过程易于操作。所述的六种化合物的单体均较稳定、易存放，它们的α-糖苷酶抑制活性显著强于或相当于临床用药阿卡波糖，极可能进一步发展为有效、安全的预防和治疗Ⅱ型糖尿病的α-糖苷酶抑制剂类药物，具有较好前景。
附图说明：
图1是化合物mesembryanthemoidigenic acid(1)的13C NMR图谱。
图2是化合物29-hydroxyhederagenin(2)的13C NMR图谱。
图3是化合物3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(3)的13C NMR图谱。
图4是化合物scutellaric acid(4)的13C NMR图谱。
图5是化合物arjunic acid(5)的1H NMR图谱。
图6是化合物3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(6)的13C NMR图谱。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1：阔叶丰花草植物中六种三萜化合物的制备
1.1植物来源与鉴定
阔叶丰花草(Spermacoce latifolia Aubl.K.Schum.)植物全株于2012年09月采自广东省广州市华南植物园，经中国科学院华南植物园邢福武研究员鉴定。
1.2提取与分离
干燥的阔叶丰花草全株(5.0Kg)粉碎后于室温用体积分数95％的乙醇水溶液提取，提取液合并后减压浓缩得无醇浸膏。浸膏加水混悬，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取各4次；减压浓缩后得到石油醚萃取部分(330g)和乙酸乙酯萃取部分(202g)。所获石油醚萃取部分(330g)经正相硅胶柱层析(200-300目，1000×105mm i.d.)，以石油醚-丙酮(100:0-0:100,v/v,each 3.0L)梯度洗脱，经TLC薄层层析检测合并主点相同的流分，共得到9个组分(E1-E9)。E6(5.0g)【石油醚-丙酮(10:1,v/v)洗脱的馏分】经MCI柱【200×40mm i.d.】除去色素，用甲醇洗脱得到甲醇洗脱部分E6-1。E6-1(3.0g)依次通过反相中压柱层析分离纯化，甲醇/水(30:70-100:0,v/v,each 1.0L)为流动相梯度洗脱、Sephadex LH-20凝胶柱(1550×13.4mm i.d.)以甲醇洗脱和正相硅胶层析柱(200-300目，400×30mm i.d)分离纯化，以氯仿-甲醇(100:1，v/v)恒定梯度洗脱，得到化合物1(3.4mg)。乙酸乙酯萃取部分(202g)经正相硅胶柱层析(200-300目，1000×105mm i.d.)，以氯仿-甲醇(100:1-0:100,v/v,each3.0L)梯度洗脱，经TLC薄层层析检测合并主点相同的流分，得到F1-F9共9个组分。F5(3.3g)【氯仿-甲醇(25:1,v/v)洗脱的馏分】继续经反相中压柱层析分离纯化，甲醇/水(30:70-100:0,v/v,each 1.0L)为流动相梯度洗脱，TLC薄层检测合并主点相同的流分，得到6个亚组分(F5-1-F5-6)。F5-4(2.5g)【甲醇/水(80:20,v/v)洗脱的馏分】经Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇洗脱，再经正相硅胶层析柱(200-300目，400×30mm i.d.)分离纯化，以氯仿-甲醇(50:1，v/v)恒定梯度洗脱，得到化合物3(5.6mg)，4(3.6mg)，5(5.0mg)和6(4.0mg)。F5-5(1.0g)【甲醇/水(90:10,v/v)洗脱的馏分】经Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇洗脱，得到化合物2(4.2mg)。
1.3化合物的结构鉴定
所获化合物1为白色粉末，ESI-MS m/z 495[M+Na]+,471[M-H]–对应该化合物的分子式C30H48O4；其13C NMR图谱如图1所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.25(1H,t,J＝3.5Hz,H-12),3.19(2H,s,H-29),3.15(1H,dd,J＝11.4,4.7Hz,H-3),2.88(1H,dd,J＝13.0,4.7Hz,H-18),1.17(3H,s),0.97(3H,s),0.94(3H,s),0.93(3H,s),0.82(3H,s),0.78(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ38.5(CH2,C-1),27.6(CH2,C-2),79.7(CH,C-3),38.9(C,C-4),56.7(CH,C-5),18.3(CH2,C-6),32.9(CH2,C-7),39.8(C,C-8),46.5(CH,C-9),36.8(C,C-10),23.2(CH2,C-11),123.7(CH,C-12),145.2(C,C-13),42.7(C,C-14),28.7(CH2,C-15),24.0(CH2,C-16),47.6(C,C-17),40.6(CH,C-18),40.3(CH2,C-19),35.5(C,C-20),29.6(CH2,C-21),38.0(CH2,C-22),28.3(CH3,C-23),16.3(CH3,C-24),15.9(CH3,C-25),17.7(CH3,C-26),25.4(CH3,C-27),181.9(C,C-28),74.4(CH2,C-29),19.5(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物1的化学结构为mesembryanthemoidigenic acid，其结构式如式(Ⅰ)中的1所示。
所获化合物2为白色粉末，ESI-MS m/z 511[M+Na]+,487[M-H]–，对应该化合物分子式C30H48O5；其13C NMR图谱如图2所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.26(1H,t,J＝3.5Hz,H-12),3.60(1H,dd,J＝11.9,4.2Hz,H-3),3.53,3.33,(each 1H,d,J＝11.0Hz,H-23),3.19(2H,s,H-29),2.88(1H,dd,J＝13.9,4.3Hz,H-18),1.19(3H,s),0.98(3H,s),0.93(3H,s),0.82(3H,s),0.70(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ38.2(CH2,C-1),26.1(CH2,C-2),75.3(CH,C-3),40.6(C,C-4),49.5(CH,C-5),18.7(CH2,C-6),32.6(CH2,C-7),39.7(C,C-8),47.4(CH,C-9),36.7(C,C-10),22.8(CH2,C-11),122.8(CH,C-12),144.5(C,C-13),41.4(C,C-14),27.7(CH2,C-15),23.2(CH2,C-16),47.7(C,C-17),40.7(CH,C-18),40.7(CH2,C-19),35.6(C,C-20),28.8(CH2,C-21),32.1(CH2,C-22),68.3(CH2,C-23),11.6(CH3,C-24),15.3(CH3,C-25),16.8(CH3,C-26),25.4(CH3,C-27),182.7(C,C-28),73.4(CH2,C-29),18.8(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物2的化学结构为29-hydroxyhederagenin，其结构式如式(Ⅰ)中的2所示。
所获化合物3为白色粉末，ESI-MS m/z 495[M+Na]+,471[M-H]–，对应该化合物分子式C30H48O4；其13C NMR图谱如图3所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.30(1H,t,J＝3.6Hz,H-12),4.51(1H,br s,H-6),3.10(1H,dd,J＝11.6,4.1Hz,H-3),2.89(1H,dd,J＝13.7,4.2Hz,H-18),1.32(3H,s),1.18(3H,s),1.15(3H,s),1.11(3H,s),1.06(3H,s),0.96(3H,s),0.93(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ42.0(CH2,C-1),28.1(CH2,C-2),80.1(CH,C-3),40.1(C,C-4),57.1(CH,C-5),68.7(CH,C-6),41.6(CH2,C-7),40.7(C,C-8),49.4(CH,C-9),37.7(C,C-10),24.5(CH2,C-11),123.9(CH,C-12),144.5(C,C-13),43.4(C,C-14),28.7(CH2,C-15),24.0(CH2,C-16),47.7(C,C-17),40.6(CH,C-18),47.3(CH2,C-19),30.5(C,C-20),33.6(CH2,C-21),32.0(CH2,C-22),28.3(CH3,C-23),17.6(CH3,C-24),17.3(CH3,C-25),18.8(CH3,C-26),26.4(CH3,C-27),181.9(C,C-28),23.9(CH3,C-29),31.8(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物3的化学结构为3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid，其结构式如式(Ⅰ)中的3所示。
所获化合物4为白色粉末，ESI-MS m/z 495[M+Na]+,471[M-H]–，对应该化合物分子式C30H48O4；其13C NMR图谱如图4所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.26(1H,t,J＝3.6Hz,H-12),3.63(1H,m,H-3),3.70,3.44,(each 1H,d,J＝11.0Hz,H-23),2.87(1H,dd,J＝13.8,4.2Hz,H-18),1.15(3H,s),1.10(3H,s),1.06(3H,s),0.93(3H,s),0.87(3H,s),0.72(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ33.2(CH2,C-1),26.1(CH2,C-2),73.9(CH,C-3),40.6(C,C-4),43.5(CH,C-5),18.7(CH2,C-6),33.6(CH2,C-7),39.7(C,C-8),49.4(CH,C-9),37.7(C,C-10),23.5(CH2,C-11),122.8(CH,C-12),144.5(C,C-13),42.4(C,C-14),28.7(CH2,C-15),24.0(CH2,C-16),47.7(C,C-17),42.1(CH,C-18),46.3(CH2,C-19),31.5(C,C-20),34.2(CH2,C-21),33.1(CH2,C-22),68.3(CH2,C-23),18.6(CH3,C-24),15.3(CH3,C-25),17.8(CH3,C-26),26.4(CH3,C-27),181.7(C,C-28),23.9(CH3,C-29),33.8(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物4的化学结构为scutellaric acid，其结构式如式(Ⅰ)中的4所示。
所获化合物5为白色粉末，ESI-MS m/z 511[M+Na]+,487[M-H]–，对应该化合物分子式C30H48O5；其1H NMR图谱如图5所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.31(1H,t,J＝3.6Hz,H-12),3.62(1H,m,H-2),3.24(1H,d,J＝3.7Hz,H-19),3.05(1H,d,J＝3.7Hz,H-18),2.90(1H,d,J＝9.6Hz,H-3),1.31(3H,s),1.03(3H,s),1.00(3H,s),0.96(3H,s),0.93(3H,s),0.84(3H,s),0.76(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ48.2(CH2,C-1),69.6(CH,C-2),84.9(CH,C-3),40.6(C,C-4),57.0(CH,C-5),19.7(CH2,C-6),34.0(CH2,C-7),40.9(C,C-8),49.4(CH,C-9),39.7(C,C-10),25.1(CH2,C-11),124.8(CH,C-12),144.9(C,C-13),42.7(C,C-14),29.7(CH2,C-15),28.6(CH2,C-16),46.7(C,C-17),45.1(CH,C-18),82.3(CH,C-19),36.2(C,C-20),29.5(CH2,C-21),34.1(CH2,C-22),29.3(CH3,C-23),17.5(CH3,C-24),17.1(CH3,C-25),17.8(CH3,C-26),25.4(CH3,C-27),181.7(C,C-28),25.2(CH3,C-29),28.8(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物5的化学结构为arjunic acid，其结构式如式(Ⅰ)中的5所示。
所获化合物6为白色粉末，ESI-MS m/z 511[M+Na]+,487[M-H]–，对应该化合物分子式C30H48O5；其13C NMR图谱如图6所示，1H-NMR(500MHz,CD3OD):δ5.29(1H,t,J＝3.6Hz,H-12),4.39(1H,br s,H-6),3.56(1H,m,H-3),3.60,3.47,(each 1H,d,J＝11.0Hz,H-23),2.87(1H,dd,J＝13.7,3.9Hz,H-18),1.33(3H,s),1.14(3H,s),1.10(3H,s),1.06(3H,s),0.96(3H,s),0.91(3H,s)；13C-NMR(125MHz,CD3OD):δ41.2(CH2,C-1),28.1(CH2,C-2),73.5(CH,C-3),44.0(C,C-4),49.5(CH,C-5),68.6(CH,C-6),41.0(CH2,C-7),39.3(C,C-8),48.7(CH,C-9),36.9(C,C-10),23.7(CH2,C-11),122.8(CH,C-12),144.5(C,C-13),42.4(C,C-14),28.7(CH2,C-15),24.0(CH2,C-16),46.7(C,C-17),42.1(CH,C-18),46.3(CH2,C-19),31.0(C,C-20),34.2(CH2,C-21),33.1(CH2,C-22),66.7(CH2,C-23),14.6(CH3,C-24),17.5(CH3,C-25),18.8(CH3,C-26),26.4(CH3,C-27),181.9(C,C-28),23.7(CH3,C-29),33.2(CH3,C-30)。根据以上波谱数据综合分析，解析出该化合物6的化学结构为3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid，其结构式如式(Ⅰ)中的6所示。
实施例2：所述六种三萜化合物的α-糖苷酶抑制活性检测
2.1仪器与试剂
实验仪器：酶标仪Genois microplate reader(Tecan GENios,Swizerland)。
试剂样品：α-葡萄糖苷酶购自Sigma Chemical Co.(Sigma-Aldrich,St.Louis,USA)；阿卡波糖(Acarbose)购自Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.(Japan)；4-硝基酚-α-D-葡萄糖吡喃苷(PNPG)购自Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.(Japan)；六种三萜化合物mesembryanth emoidigenic acid(化合物1)、29-hydroxyhederagenin(化合物2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-en e-28-oic acid(化合物3)、scutellaric acid(化合物4)、arjunic acid(化合物5)、3β,6β,23-tr ihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(化合物6)由以上实验例1的方法制备，也可以按照文献Ma gina et al.,Quim Nova,2012,35:1184-1188；Huu et al.,J Chem,2007,45:363-367；Ku o et al.,Chem Pharm Bull,1988,36:3619-3622；Ponouet al.,Chem Biodivers,2011,8:13 01-1309；Lavaud et al.,Phytochemistry,2001,57:469-478；Khan et al.,J Nat Prod,1993,56:2163-2165中的方法制备得到。
2.2测试方法：
a)配制药物溶液：将待测化合物和阿卡波糖分别由二甲基亚砜(DMSO)配制10mg/ml的溶液，并配制67mmol/L的磷酸缓冲液(超纯水配制)，PNPG底物溶液(5mM，磷酸缓冲液配制)和0.2M的NaCO3溶液(磷酸缓冲液配制)。
b)采用比色法，通过96孔板就待测化合物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度进行测定。首先将20μl的α-葡萄糖苷酶(0.8U)加入样品孔，然后将样品溶液用磷酸缓冲液按比例稀释，每孔加入样品溶液120μl，使测试样品(包含待测化合物和阿卡波糖)的最终浓度为：500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，15.625μg/mL，最后再加入反应底物4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷20μl(5mM)。37℃水浴反应15min后，每个样品孔中加入80μl的Na2CO3(0.2M)终止反应，在405nm波长处比色测定。相同体积的磷酸缓冲液代替酶溶液。化合物抑制率由样品OD值对于空白和对照OD值计算，计算公式如下：抑制率(％)＝(ODcontrol–ODneg)-(ODtest–ODtest control)/(ODcontrol–ODneg)×100％。其中所测试六种化合物分别对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
2.3实验数据参见表1：
表1.六种三萜化合物的a-葡萄糖苷酶抑制活性
2.4实验结论：
a-葡萄糖苷酶是a-糖苷酶抑制剂类Ⅱ型糖尿病治疗药物筛选的指标性测试酶。本实验结果表明，本发明提供的化合物mesembryanthemoidigenic acid(化合物1)、29-hydroxyhederagenin(化合物2)、3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid(化合物3)、scutellaric acid(化合物4)、arjunic acid(化合物5)和3β,6β,23-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(化合物6)均具有显著强于糖尿病一线用药阿卡波糖抑制α-葡萄糖苷酶的活性，因此可发展制备用于预防和治疗α-糖苷酶引起或有关的生理改变或疾病的潜在药物候选分子，具有较强的应用开发潜质，可望能进一步发展成为新的预防和治疗Ⅱ型糖尿病的用药，应用潜质广泛。

Claims (3)

1.化合物3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid或其可药用盐，在制备α-糖苷酶抑制剂或药物中的应用，所述化合物3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid结构如式3所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述α-糖苷酶抑制剂或药物，其剂型为可湿性粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、控释或缓释剂型或纳米制剂。
3.一种α-糖苷酶抑制剂或药物，其特征在于，包含有效量的化合物3β,6β-dihydroxy-olean-12-ene-28-oic acid或其可药用盐，和药学上可以接受的载体或辅料。
CN201611051401.5A 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用 Active CN106727598B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611051401.5A CN106727598B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410718340.8A CN104490894B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN201611051401.5A CN106727598B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410718340.8A Division CN104490894B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106727598A true CN106727598A (zh) 2017-05-31
CN106727598B CN106727598B (zh) 2019-08-30

Family

ID=52932409

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410718340.8A Expired - Fee Related CN104490894B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN201611051401.5A Active CN106727598B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN201611051360.XA Pending CN106619652A (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410718340.8A Expired - Fee Related CN104490894B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611051360.XA Pending CN106619652A (zh) 2014-12-01 2014-12-01 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (3) CN104490894B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105949191A (zh) * 2016-07-18 2016-09-21 唐翔 一种丰花草碱的提取工艺
CN106265681B (zh) * 2016-07-20 2019-08-09 中国科学院华南植物园 一种三萜化合物在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN108314616B (zh) * 2017-01-17 2020-10-27 浙江工业大学 三萜类化合物及其制备与应用
CN110563794B (zh) * 2019-09-27 2021-09-14 桂林电子科技大学 桃金娘三萜内酯a及其提取方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101991578A (zh) * 2009-08-24 2011-03-30 赵全成 积雪草酸与羟基积雪草酸在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用
CN103622972A (zh) * 2013-12-04 2014-03-12 中国科学院华南植物园 化合物3α-Akebonolic acid的制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101991578A (zh) * 2009-08-24 2011-03-30 赵全成 积雪草酸与羟基积雪草酸在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用
CN103622972A (zh) * 2013-12-04 2014-03-12 中国科学院华南植物园 化合物3α-Akebonolic acid的制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANGELA I. CALDERÓN 等: "Triterpenes from Warszewiczia coccinea (Rubiaceae) as Inhibitors of Acetylcholinesterase", 《NATURAL PRODUCT COMMUNICATIONS》 *
陈磊 等: "五环三萜衍生物的合成和对α-葡萄糖苷酶的抑制活性", 《中国药科大学学报》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106619652A (zh) 2017-05-10
CN106727598B (zh) 2019-08-30
CN104490894B (zh) 2019-06-28
CN104490894A (zh) 2015-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Matsuda et al. Structures of withanosides I, II, III, IV, V, VI, and VII, new withanolide glycosides, from the roots of Indian Withania somnifera DUNAL. and inhibitory activity for tachyphylaxis to clonidine in isolated guinea-pig ileum
Yue et al. Cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia L. and their inhibitory activity against α-glucosidase, α-amylase and protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B)
Wang et al. Two new nortriterpenoid saponins from Salicornia bigelovii Torr. and their cytotoxic activity
Challinor et al. Steroidal saponins from the roots of Smilax sp.: structure and bioactivity
Chang et al. In vivo and in vitro studies to identify the hypoglycaemic constituents of Momordica charantia wild variant WB24
Zhang et al. Cucurbitane-type glycosides from the fruits of Momordica charantia and their hypoglycaemic and cytotoxic activities
JP2007523058A (ja) キサントセラスソルビフォリア抽出物を含む組成物、該抽出物から単離された化合物、それを調製する方法、およびその使用方法
Srinuanchai et al. Inhibitory effects of Gymnema inodorum (Lour.) Decne leaf extracts and its triterpene saponin on carbohydrate digestion and intestinal glucose absorption
CN104490894B (zh) 阔叶丰花草三萜化合物的制备方法及其在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
Abdjul et al. Oleanane triterpenes with protein tyrosine phosphatase 1B inhibitory activity from aerial parts of Lantana camara collected in Indonesia and Japan
Deng et al. Structure determination, bitterness evaluation and hepatic gluconeogenesis inhibitory activity of triterpenoids from the Momordica charantia fruit
Sun et al. A new cerebroside from Cordyceps militaris with anti-PTP1B activity
Tohtahon et al. Extraction optimization, structural characterization and bioactivity evaluation of triterpenoids from hawthorn (Crataegus cuneata) fruits
Su et al. Highly oxygenated lanostane triterpenoids from Ganoderma applanatum as a class of agents for inhibiting lipid accumulation in adipocytes
Hu et al. Structurally diverse triterpenoids with cytotoxicity from Euphorbia hypericifolia
Tajuddeen et al. Phytochemical and antiplasmodial investigation of Gardenia thunbergia L. f. leaves
CN103622972A (zh) 化合物3α-Akebonolic acid的制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
Wang et al. Bioassay-guided isolation and identification of anticancer and antioxidant compounds from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino
CN103610682B (zh) 3α-羟基-30-齐墩果-12,20(29)-二烯-28-酸的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN106265681B (zh) 一种三萜化合物在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
Xiao et al. Acyl atractyligenin and carboxyatractyligenin glycosides from Antennaria rosea subsp. confinis
CN103638031B (zh) 化合物quinatic acid的制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用
CN108341849A (zh) 玉蕊醇类三萜化合物及其制备方法和在制药中的用途
Liu et al. Tautomeric phytosterols from Vernonia amygdalina Delile and their anti-cervical cancer activity
CN104083348B (zh) 四种贝壳杉烷二萜化合物在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant