CN102151256A - 原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用，该病毒为传染性法氏囊病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒和/或猪传染性胃肠炎病毒。同时，本发明还涉及原儿茶酸的制剂及其制备方法。

Description

原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及原儿茶酸的新用途，具体涉及原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用，本发明还涉及原儿茶酸的制剂及其制备方法。

背景技术

原儿茶酸(Protocatechuic acid，PCA)，如式I所示，化学名称为3，4-二羟基苯甲酸，CAS登记号为99-50-3，分子式为(HO)₂C₆H₃COOH，分子量：154.12。

式I

该产品的性质为白色至褐色结晶性粉末，在空气中变色。密度1.54g/cm³；熔点约200℃(分解)；溶解度：溶于50份水中，溶于乙醇、乙醚。

原儿茶酸是一种已经被广泛研究的酚酸类化合物，具有抗血小板凝集、降低心肌耗氧量、抑菌、镇痛等多方面药理活性，其中抗菌作用方面：体外试验时对绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、产碱杆菌及枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。亦有祛痰、平喘作用。另外，临床用于治疗慢性气管炎。

近年来的研究发现了原儿茶酸抗氧化、抗癌及介导肿瘤细胞凋亡等许多新的药理作用。据报道原儿茶酸具有抗氧化、抑制肿瘤细胞生长和诱导HL60白血病细胞的作用(Biochem Pharmacol，2000，60：307- 315)。另外也有人报道原儿茶酸具有促进HepG2肝癌细胞凋亡的作用(Cell Biol Toxicol，2006，22：293-302)。刘天庆等通过建立的体外神经细胞损伤模型，首次从中药益智仁中筛选并证明了PCA的神经保护作用，剂量和时间依赖地提高了神经干/祖细胞的生存力并且刺激了细胞的增殖。

中国专利101224209A公开了原儿茶酸与拉米夫定合用可以抗乙肝病毒该药物组合能明显提高拉米夫定对乙肝病毒抗原的抑制效果，显著降低拉米夫定单一用药时的毒副作用。刘厚佳等报道原儿茶酸对于HepG2.2215细胞系中的HBV(乙型肝炎病毒)复制有较强的抑制作用，且该抑制教果可能与直接抑制病毒DNA有关(刘厚佳等，第二军医大学学报，2000，22：661-663)。

刘叶明等通过建立帕金森体外细胞模型，证明原儿茶酸可通过提高Bcl-2蛋白表达和线粒体膜电位，促进超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的激活，抑制活性氧的产生和谷胱甘肽的耗竭，拮抗半胱氨酸酶-3的活性，达到抑制鱼藤酮介导的细胞凋亡。王晗等发现原儿茶酸能够促进人脂肪细胞的体外增殖能力，其作用呈现明显的剂量依赖性(王晗，刘天庆等，生物化学和生物物理进展，2008，35：1168-1174)。在抗菌方面，以脱乙酰几丁质为载体，以聚乙烯醇为增强剂，将对烧伤、创伤有显著效果的原儿茶酸和杀菌性能优良的抗菌剂环丙沙星固定在该载体上，制备了原儿茶酸-环丙沙星/脱乙酰几丁质抗菌药膜，制成抗菌膜，治疗烧伤和创伤(邹长军，吴晓珍.烟台大学学报，2004，17：42-44)。原儿茶酸药理作用很广，临床用药妇血康胶囊、壮腰健肾口服液也含有原儿茶酸成分。

随着近年来畜牧业的快速崛起，畜禽疫病的危害也日益突出，禽流感、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、猪瘟、猪无名高热、猪传染性胃肠炎等病毒性疾病严重地影响了畜牧业的健康发展，对人类健康也带来了严重的威胁。其中：禽流感、法氏囊病、肾型传染性支气管炎对家禽危害尤为严重，严重制约了养禽业的健康发展。

1、禽流感病毒H9亚型：属于低致病性禽流感，可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。肉鸡感染后出现表现慢性呼吸道病，发病率迅速增加，按20％速度增加，发病率达80％左右。临床使用抗慢性呼吸道病药物效果不好。发病的中期、后期，肉鸡出现严重的呼吸困难，腹泻增加，死亡增加。不采取有效措施的死亡率达到30％，措施得当死亡率为8％。其后遗症是肉鸡普遍采食量下降，出栏体重降低。近年来家禽H9N2亚型禽流感病毒出现跨种间传播的趋势。禽流感H9N2亚型A/chicken/Jiangsu/07/2002株可以通过肺对肺传代能感染小鼠，并且毒性逐渐增强，4次传代后能使小鼠致死，10次传代后病毒的LD50为10^-2.17(李梨平等，中国感染控制杂志，2008，7；372-375)。邓光存和毕建明的研究报告也证实从河北感染家禽分离株A/Chicken/HB/4/2008(H9N2)连续传代5代以上，可以导致小鼠出现75％的死亡率(Guangcun Deng et al，Archives of Virology，2010，155：187-195；Jianmin Bi，PLoS ONE，2010，5(9)：e13063)。以上结果显示H9N2型禽流感病毒能在实验条件下感染哺乳类，可以通过建立禽流感病毒的BALB/c小鼠模型来进行筛选药物。

2、传染性法氏囊病毒：是由鸡传染性法氏囊病毒(Infection bursal disease virus，IBDV)引起的雏鸡的一种急性高度接触性传染病，临床上以法氏囊肿大、肾脏损害为特征。目前该病是危害养禽业的三大主要疫病之一，呈世界性分布，该病抑制雏鸡的免疫，使病鸡对大肠杆菌、腺病毒、沙门氏菌、鸡球虫等病原更易感，对马立克疫苗、新城疫疫苗等接种的反应能力下降，因此该病对养鸡业造成了巨大的危害。

3、肾型传染性支气管炎病毒：是由传染性支气管肾脏型病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染性的呼吸道疾病。主要见于20-50日龄的仔鸡，突然发病，迅速传播，特征性症状是粪便中白色尿酸盐成分增加，主要病变是肾肿大，肾小管和输尿管内充满白色的尿酸盐，肾呈花斑肾，病死率为5-30％。

4、猪传染性胃肠炎：是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接 触性肠道传染病，临床症状以引起2周龄以下猪仔呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为特征。

目前我国畜禽重要疾病的发生和流行主要靠疫苗的预防，但畜禽疫苗有效性取决于抗原产生的中和抗体水平、病原变异、生物安全程度和免疫密度。病原毒力一旦出现变异，可能出现免疫失败，这将严重影响疫苗的保护效果。我国高密度的养殖状况，大剂量的抗病毒药物滥用，导致病毒(菌)株的变异速度超过了疫苗研制的速度，大规模流行病时常爆发。“无名高热”困扰的不止是广大养殖户，高致病性禽流感时不时引起公众的注意，这些都警示我们在夸大疫苗的效果的同时也要清醒地认识到抗病毒药物和抗细菌药物的研发也不容忽视。

另外，畜禽食品的安全问题已经引起广大消费者的关注，化学抗病毒药如利巴韦林、金刚烷胺、盐酸吗啉双胍等西药已经在家养动物上被禁用，目前除疫苗外对病毒病的治疗尚无有效的解决办法，亟需广大科研人员筛选出抗病毒新药。

到目前为止，还没有见到有关原儿茶酸应用于防治上述畜禽病毒感染性疾病的报道。

发明内容

本发明目的是提供原儿茶酸的新用途。

本发明提供了原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用。

优选地，该病毒为禽流感病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒和/或猪传染性胃肠炎病毒。

进一步优选地，所述禽流感病毒为禽流感H9亚型；所述传染性支气管炎病毒为肾型传染性支气管炎病毒。

更进一步优选地，禽流感H9亚型为H9N2亚型。

本发明所述原儿茶酸可以直接使用，也可以是含原儿茶酸的制剂，该制剂由原儿茶酸与药学上可接受的溶媒或相关载体组成。

所述制剂为粉剂、口服液、注射液、颗粒剂或者片剂。

所述药学上可接受的溶媒或相关载体选自无水乙醇、吐温、丙三醇或糊精中的一种或几种。所述吐温为吐温-20、吐温-80。

所述注射液或口服液是由原儿茶酸与乙醇、吐温按重量体积比1∶3∶4溶解组成；所述颗粒剂是由原儿茶酸与糊精按重量比1∶9组成。

所述原儿茶酸在制备防治家养动物病毒感染性疾病的应用的有效剂量是5-40mg/kg体重，有效剂量的优选范围是10-30mg/kg体重。

所述给药方式是拌料、饮水给药或注射给药。

此外，还可以将原儿茶酸与其它药物联合给药。

本发明所述畜禽是畜禽动物的简称，主要是指肉鸡(含黄鸡、麻鸡)、蛋鸡、鸭(含肉鸭、蛋鸭)或猪等。

大量实验研究表明，原儿茶酸具有抗畜禽病毒病的活性，能有效防治禽流感H9N2亚型病毒、法氏囊病毒LX株、肾型传染性支气管炎病毒株(BJ1)以及猪传染性胃肠炎的感染，从而降低发病鸡群、猪群的死亡率，有效提高畜禽成活率和生产性能。

本发明评价了原儿茶酸抗病毒的功效，按照动物体重20mg/kg原儿茶酸给药，连续口服5天，能有效降低人工感染IBDV LX毒株、禽流感H9N2亚型病毒(Guangcun Deng，et al.Archives of Virology，2010，155：187-195)以及肾型传染性支气管炎病毒(BJ1)株(王晶钰，等.中国兽医杂志，2006，42：19-20)的死亡率。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：原儿茶酸注射液

1、组成(原儿茶酸的含量为100mg/ml)：原儿茶酸10g，无水乙醇30ml，吐温-20 40ml，加注射用水至100ml。

2、制备方法：

1)按处方量分别称取原辅料，备用；

2)将原儿茶酸溶于无水乙醇中，加入无水乙醇30ml溶解，再加吐温-20 40ml，混匀后缓慢用注射用水溶至100ml，灭菌处理，即得原儿茶酸注射液。

实施例2：原儿茶酸注射液

1、组成(原儿茶酸100mg/ml)：原儿茶酸10g、无水乙醇30ml，吐温-20 40ml，丙三醇(或甘油)5ml，加注射用水至100ml。

2、制备方法：

1)按处方量分别称取原辅料，备用；

2)将原儿茶酸溶解于无水乙醇中，溶解后再加吐温溶液和丙三醇，混匀后缓慢用注射用水定溶至100ml，灭菌处理，即得原儿茶酸注射液。

实施例3：原儿茶酸口服液

1、组成(原儿茶酸100mg/ml)：原儿茶酸10g，无水乙醇40ml，吐温-20 30ml，加灭菌水至100ml。

2、制备方法

1)按照处方量分别称取原辅料，备用；

2)将原儿茶酸溶于无水乙醇中，加入吐温-20，混匀后，缓慢用灭菌水定溶至100ml，即得原儿茶酸注射液。

实施例4：原儿茶酸注射液

1、组成(原儿茶酸100mg/ml)：10g原儿茶酸、40ml无水乙醇溶液、30ml吐温-20和5ml丙三醇，加注射用水至100ml。

2、制备方法：

1)按照处方量分别称取原辅料，备用；

2)将原儿茶酸溶于无水乙醇溶液，然后加入吐温-20和丙三醇，混匀后，缓慢用注射用水定溶至100ml，灭菌处理，即得原儿茶酸注射液。

实施例5原儿茶酸颗粒制剂

1、组成(原儿茶酸5％)：每100g颗粒中含原儿茶酸10g、β-环糊精90g；

2、制备方法：

1)按处方量分别称取原辅料，备用；

2)按照等量递加法将原辅料混合均匀，制粒，过筛，整粒，分装，即得。

对上述实施例制备的原儿茶酸制剂进行药效实验，实验方法及结果如下：

实验例1：原儿茶酸对人工感染H9N2流感病毒小鼠的治疗实验

1、实验动物：

18-22克体重清洁级昆明小鼠，购自北京大学实验动物部。

2、实验药物：实施例1制备的注射液；盐酸金刚烷胺，购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。

3、毒株：禽流感A/Chicken/HB/4/2008(H9N2)(Genbank accession #FJ499463-FJ499470)，昆明小鼠的LD ₅₀＝10^-4.25/0.1ml。

4、实验分组：分为原儿茶酸高剂量组、中剂量组和低剂量组，分别给予实施例3制备的原儿茶酸口服液的剂量为100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg体重；盐酸金刚烷胺组为阳性对照组，批号A1260-5G，剂量为15mg/kg体重；攻毒对照组即模型对照组，给予注射用水15mg/kg体重。

5、实验方法：

除空白对照组外，其它各组均攻毒，100LD ₅₀(100倍的LD₅₀)滴鼻0.1ml/只。

攻毒96h后按照分组进行给药(第4天)，50％小鼠出现呼吸困难，出现死亡时，开始连续给药5天，给药结束后观察5天，共计14天。

6、观察指标：记录小鼠的死亡情况、存活数。实验第14天断颈处死全部小鼠，剖检观察肺脏出血、称取肺脏重量，测定肺脏指数。

相对增重率＝相对增重/健康对照体重增重×100；

平均存活时间＝总的存活天数/只数；

肺脏指数＝肺脏重/实验末体重×100；

肺脏出血率＝出血面积之和/肺脏面积×100。

7、实验结果

7.1对小鼠存活率和存活时间的影响：

表1：药物对小鼠成活率和平均存活时间的影响

注：同一列中^a-bP＜0.05，^a-cP＜0.01；^b-cP＜0.05

表1结果可以看出：

存活率：攻毒对照组成活率为40％，说明本模型复制成功。攻毒后的原儿茶酸高剂量组、中剂量组和低剂量组存活率分别为90.0％和80.0％和80.0％，与金刚烷胺对照组比较差异显著(P＜0.05)，与攻毒对照组相比，原儿茶酸三个剂量组呈现差异极显著(P＜0.01)。

在平均存活时间来看，原儿茶酸三个剂量组分别为12.9天、11.5天和10.4天，显著性高于金刚烷胺对照组(P＜0.05)，极显著性高于攻毒对照组(P＜0.01)。

7.2对小鼠体重的影响：

表2药物对小鼠体重的影响

注：同一列中^a-bP＜0.05，^a-cP＜0.01；^b-cP＜0.05

从表2结果可以看出：原儿茶酸三个剂量组呈现量效关系，但高剂量组相对增重率显著性高于盐酸金刚烷胺组对照组(P＜0.05)，中剂量组、低剂量组与盐酸金刚烷胺组相比差异不显著。

7.3药物对小鼠肺脏病变以及病毒清除的影响

7.3.1对小鼠肺脏病变指数的影响

表3：感染后药物肺脏病变指数的影响

注：同一列中^a-b，b-dP＜0.05，^a-c，a-dP＜0.01；^b-c，c-dP＜0.05

从表3结果可以看出：显示原儿茶酸三个剂量组的肺脏出血面积分别为32.0％、45.0％和51.0％，显著性低于盐酸金刚烷胺对照组(71.0％)；结果显示肺脏出血面积减少提示药物控制炎症的效果越显著。同时肺脏指数降低也显示肺脏纤维化病变减轻，也预示药物的效果显著。

肺脏指数(肺脏重量/体重)原儿茶酸三个剂量组分别为0.521、0.58和0.66，高剂量组极显著的低于盐酸金刚烷胺组(0.92)，中剂量组和低剂量组显著低于盐酸金刚烷胺组(P＜0.05)。

7.3.2对小鼠肺脏组织的影响

表4：人工感染后原儿茶酸小鼠肺脏组织禽流感病毒分离

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-cP＜0.01

从表4可以看出，原儿茶酸高剂量组和中剂量组的病毒分离率相比差异不显著，但低剂量组显著性低于盐酸金刚烷胺组(P＜0.05)，高剂量组和低剂量组极显著低于盐酸金刚烷胺组(P＜0.01)，这提示药物对病毒的清除效果显著。

8、结论

从以上实验结果可以看出，禽流感病毒模型造模成功，原儿茶酸剂量依赖性的保护禽流感病毒H9N2的攻击，保护率达到80％，同时能增加体重、显著性降低肺脏的病变指数，减少病毒在肺脏组织中的感染。

实验例2：原儿茶酸对鸡传染性法氏囊病的治疗

1、实验动物：24日龄SPF鸡(specific pathogen free，SPF)。

2、毒株：IBDV-LX株，由北京市农林科学院畜牧兽医研究所提供。

3、实验药物：实施例3制备的原儿茶酸口服液

4、实验分组：分为原儿茶酸高剂量、中剂量、低剂量组，分别给予实施例3制备的口服液50mg/kg体重，25mg/kg体重，12.5mg/kg体重(以原儿茶酸计)；阳性对照组给药为黄芪多糖250mg/kg体重；同时，设置病毒攻毒对照组、健康对照组，每组10只24日龄的SPF鸡，以饮水方式给药；

5、攻毒方法：

取人工感染传染性法氏囊病毒的患病SPF鸡的法氏囊组织，用玻璃研磨器研磨，1个法氏囊病毒加入1mL生理盐水稀释，制成组织匀浆，反复冻融三次，离心取上清，上清液用生理盐水进行1∶10稀释，稀释液中按照4000单位/mL加入庆大霉素，作用30分钟后使用。

除空白对照组外，其它各组均攻毒，每只鸡进行点眼、滴鼻共计0.2mL。

攻毒12小时后连续给药5天，2次/天，饮水口服。

6、实验指标

相对增重率＝相对增重/健康对照体重增重×100；

免疫器官指数：实验结束后采取鸡只的免疫器官(法氏囊)进行称重，并计算免疫器官指数；

整体观察指标：增重率、鸡只的死亡数和保护率。

7、实验结果

7.1对鸡体重的影响(表5)：

表5：体重变化情况

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-cP＜0.01

7.2对鸡法氏囊人工感染的存活率

表6：原儿茶酸治疗法氏囊人工感染后对成活率的影响

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-cP＜0.01

从表5和表6结果可以看出：原儿茶酸高剂量组、中剂量组和低 剂量组的相对增重率均显著性高于黄芪多糖组(P＜0.05)，黄芪多糖对照组显著性高于攻毒对照组(P＜0.05)；

在存活率方面：黄芪多糖组和感染对照组的存活率均为50％，原儿茶酸高、中、低剂量组保护率分别为90％、90％和80％，显著性高于黄芪多糖组(P＜0.05)。

7.3对鸡法氏囊人工感染后的免疫器官的影响(表7)

表7：原儿茶酸治疗法氏囊人工感染后的免疫器官指数

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-cP＜0.01。

由表7可以看出：原儿茶酸高剂量组法氏囊指数均低于黄芪多糖组(P＜0.05)，中剂量组和低剂量组相比差异不显著，但极显著性低于感染对照组(P＜0.01)。

8、结论：

原儿茶酸在50mg/kg体重时可以有效的提高人工感染法氏囊鸡的存活率，改善法氏囊病变指数，达到增强免疫力。

实验例3：原儿茶酸治疗鸡传染性支气管炎病毒实验

1、实验动物：10日龄AA肉鸡(爱拔益加肉鸡)，购自北京肉鸡公司。

2、毒株：鸡肾型传染性支气管病毒BJ1株，西北农林大学王晶钰教授赠送(王晶钰，李鹏，倪斌等.鸡肾型传染性支气管炎病毒18株的分离及鉴定.中国兽医杂志，2006，42：19-20)，10日龄SPF鸡胚的ELD50为10^7.0/0.2ml。10日龄肉鸡LD50＝10³ELD50/0.2ml。

3、实验药物：原儿茶酸(3，4-二羟基苯甲酸)购自湖北武汉远城科技有限公司，批号为20100820，含量为99.5％；黄芪多糖粉，购自北京生泰尔生物科技有限公司，批号20100605；实施例1制备的注射液为实验药物。

4、实验分组：

原儿茶酸高剂量、中剂量、低剂量组分别给予实施例1制备的注射液25mg/kg、12.5mg/kg和6.25mg/kg体重(以原儿茶酸计)；黄芪多糖组为阳性对照组，给予黄芪多糖125mg/kg体重，口服；攻毒感染对照组和健康对照组，每组15只肉鸡，给予注射生理盐水12.5mg/kg。

5、攻毒方法：以肾型传染性支气管炎病毒BJ1株100ELD₅₀(100倍的EL5₅₀)，通过点眼滴鼻的方法进行攻毒，剂量为0.2ml/只，健康对照组除外，隔离饲养。

攻毒感染后5天，出现50％肉鸡打蔫，精神沉郁后，开始饮水给药，每天两次，剂量同上所述，连续给药物5天，停药后观察5天。

6、观察指标：停药5天后计算成活率、增重率和存活时间；未死亡鸡只，进行剖检，观察病理学变化，如肾脏是否出现花斑肾以及尿酸盐的沉积，心脏是否出现心包炎。

相对增重率＝相对增重/健康对照体重增重×100；

7、实验结果：

7.1肾型传染性支气管炎病毒人工感染后对鸡体重影响(表8)：

表8：人工感染病毒后原儿茶酸对体重的影响

注：同一列中^a-b，a-cP＜0.05，^b-cP＜0.01

表8结果显示：原儿茶酸高、中、低剂量组体重增重率分别为83.9％，92.4％和97.7％，黄芪多糖组77.7％，经过统计学分析显示原儿茶酸中剂量组和低剂量组的相对增重率均极显著高于黄芪多糖组(P＜0.01)，高剂量组显著性高于黄芪多糖组(P＜0.05)。

7.2对人工感染病毒后的成活率的影响(表9)：

表9：人工感染病毒后原儿茶酸对成活率的影响

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-cP＜0.01

表9结果显示：原儿茶酸三个剂量组存活率分别为93.3％，86.6％和80.0％，黄芪多糖组成活率为60.0％，攻毒对照组成活率为33.3％，这显示肾型传染性支气管模型成功。同时显示高剂量组的存活率极显著性高于黄芪多糖组(P＜0.01)，而中剂量组和低剂量组的存活率也均显著性高于黄芪多糖对照组(P＜0.05)。这提示药物具有良好的治疗肾型传染性支气管炎病毒感染的效果。

7.3对人工感染病毒后的存活时间和剖检病变率的影响(表10)

表10：人工感染后肉鸡存活时间和剖检病变率

注：同一列中^a-bP＜0.05，^a-c，b-cP＜0.01

表10结果显示：

存活时间：原儿茶酸三个剂量组存活时间分别为13.5天、12.9天、12.4天，黄芪多糖对照组为10.4天，结果显示药物测试组显著性高于黄芪多糖对照组(P＜0.05)，显著延长感染鸡群存活时间(P＜0.05)；

肾脏病变率、心包炎发病率：原儿茶酸三个剂量组均显著性低于黄芪多糖对照组(P＜0.05)。

8、结论：以上表8-10结果显示口服原儿茶酸12.5mg/kg可以有效治疗鸡肾型传染性支气管炎病毒引起的感染，效果优于125mg/kg的黄芪多糖。

实验例4：原儿茶酸口服液、注射液治疗猪传染性胃肠炎实验

1、实验动物：10日龄临床出现严重呕吐、腹泻不止的发病仔猪共计80头，分8个组进行实验。

2、仔猪传染性胃肠炎诊断：

取病死小猪空肠(中段)、扁桃体，制成4～7m的冰冻切片或涂片、压片，用丙酮固定后再用荧光抗体染色试剂盒，然后置于荧光显微镜下观察，阳性病料的胞浆呈现苹果绿色(黄海龙，胡桂学，陶淑霞.动物医学进展，2002，25：43-46)

其中荧光抗体染色试剂盒购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

3、实验药物：原儿茶酸口服液采用实施例3的制备方法，原儿茶酸注射液采用实例4的制备方法；黄芪多糖粉，购自北京生泰尔生物科技有限公司，批号20100605。

4、实验分组：

分别设原儿茶酸口服液高、中、低剂量组(简称：口服液高剂量组、口服液中剂量组、口服液低剂量组)，分别给予实施例3的口服液， 剂量分别为25mg/kg、12.5mg/kg和6.25mg/kg体重(以原儿茶酸计)；黄芪多糖组为阳性对照组，口服黄芪多糖粉125mg/kg体重，连续口服5天，每组10头仔猪；分别设原儿茶酸注射液高、中、低剂量组(简称：注射液高剂量组、注射液中剂量组、注射液低剂量组)分别给予实施例4的注射液，剂量分别为10mg/kg、5mg/kg和2.5mg/kg体重(以原儿茶酸计)。同时设感染对照组(未用药组)，每组10头仔猪，每日给予口服10mg/kg体重的葡萄糖水。

5、观察指标：

停药5天后计算仔猪腹泻指数、成活率和仔猪增重率。

6、实验结果

6.1对仔猪的体重的影响(表11)：

表11：药物对仔猪的增重影响

注：同一列中^a-b，b-cP＜0.05，^a-d，b-dP＜0.01

表11结果显示：原儿茶酸口服液和原儿茶酸注射液的相对体重增重率分别为135.2％，138.2％、114.7％、158.8％、135.2％和126.5％，黄芪多糖组97.1％。经过统计学分析显示原儿茶酸口服液、注射液共6个剂量组的相对增重率均显著性高于黄芪多糖组(P＜0.05)。

6.2对仔猪腹泻指数的影响(表12)：

表12：药物治疗后对仔猪腹泻指数的的影响

注：同一列中^a-bP＜0.05，^b-cP＜0.01

表12结果显示：原儿茶酸口服液和注射液共6个剂量组治疗5天后腹泻10.0％、20.0％、20.0％、0、10.0％和10.0％，黄芪多糖对照组腹泻率为50.0％，无论口服液还是注射液体腹泻发生率均显著性低于黄芪多糖粉组(P＜0.05)。

从成活率比较而言，原儿茶酸口服液和注射液共6个剂量组的成活率分别为100.0％、90％、90.0％、100％、100％和90％，黄芪多糖组的成活率为70％，原儿茶酸的口服液和注射液均显著性高于黄芪多糖组(P＜0.05)，这显示测试药物治疗效果显著高于黄芪多糖对照组。

7、结论：以上表11-12结果显示原儿茶酸口服液、注射液可以有效治疗猪传染性胃肠炎引起的腹泻，降低仔猪死亡率，且注射液保护率高于口服液。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及实验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.原儿茶酸在制备防治畜禽病毒感染性疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该病毒为禽流感病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒和/或猪传染性胃肠炎病毒。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述禽流感病毒为H9亚型病毒；所述传染性支气管炎病毒为肾型传染性支气管炎病毒。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述H9亚型禽流感病毒为禽流感H9N2亚型。

5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述原儿茶酸为含原儿茶酸的制剂，该制剂由原儿茶酸与药学上可接受的溶媒或相关载体组成。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，该制剂为粉剂、口服液、注射液、颗粒剂或者片剂。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的溶媒或相关载体选自乙醇、吐温、丙三醇或糊精中的一种或几种。