CN102146057B

CN102146057B - C19-二萜生物碱及其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物及用途

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Publication number: CN102146057B
Application number: CN2011100400513A
Authority: CN
Inventors: 王锋鹏; 晁若冰; 简锡贤; 刘秀秀
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Good Doctor Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Priority date: 2011-02-18
Filing date: 2011-02-18
Publication date: 2012-11-07
Anticipated expiration: 2031-02-18
Also published as: CN102146057A

Abstract

本项目涉及具有作为强心和抗心衰活性的式I的C₁₉-二萜生物碱及其药物上可接受的盐，其制备方法，含有它们的药物以及使用它们作为强心和抗心衰药物的用途。

式I中R¹是氢，羟基或甲氧基；R²是氢或甲基；R³，R⁴和R⁵是氢或羟基。

Description

C19-二萜生物碱及其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物及用途

技术领域：

本发明涉及具有药用价值的C₁₉-二萜生物碱N-去乙基乌头宁碱、北乌宁碱、N-去乙基次乌宁碱和异德尔宁碱及其同系物。它们分自附子中或以乌头碱为原料，半合成制备。

本发明还涉及两种C₁₉-二萜生物碱中乌宁碱和次乌宁碱。它们以分自植物乌头中的乌头碱为原料，由半合成制备而成。

同时，公开了上述化合物的制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物。本发明属于天然药物有效成分提取与制备技术领域。

背景技术：

中药附子为毛茛科植物乌头(Aconitum carmichaeli Debx.)的子根的加工品。具有回阳救逆，补火助阳，逐风寒湿邪，温经止痛功能。用于亡阳虚脱，肢冷脉微，阳萎，宫寒，心腹冷痛，虚寒吐泻，阴寒水肿，阳虚外感，寒湿痹痛(中国药典，2000年版一部，第150页)。在我国附子资源丰富，分布较广，作为著名中药广泛用于临床。

研究发现附子中的强心成分有消旋去甲乌乌碱(dl-demethylcoclaurine)(T.Kosuge et al，Chem.Pharm.Bull，1976，24：176-178)、氯化甲基多巴胺(coryneine chloride)(C.Lammp，PlataMedica，1979，35：150-)、猪毛菜定碱(salsoline)(陈迪华等，药学学报，1982，17：792-794)、尿嘧啶(uracil)(韩公羽等，天然产物研究与开发，1997，9(3)：30-34)和附子苷(fuzinoside)(徐东銘等，中草药，2004，35：964-966；中国发明专利，2006年，CN100386338C)。但是，尚无报告从附子中分出的二萜生物碱化合物具有强心作用。近年来，我们采用强心活性追踪的方法，研究发现，从附子中分出具有显著的强心和抗心衰作用的化合物C₁₉-二萜生物碱N-去乙基乌头宁碱、北乌宁、N-去乙基次乌宁碱、异德尔宁碱、中乌宁碱和次乌宁碱。但是，由于附子中这些生物碱含量较低，我们又研究了以新疆产乌头中含量较高的乌头碱为原料，半合成制备N-去乙基次乌宁碱、中乌宁碱和次乌宁碱的方法。

发明内容：

本发明提供了一种具有药用价值C₁₉-二萜生物碱N-去乙基乌头宁碱、北乌宁、N-去乙基次乌宁碱和异德尔宁碱及其同系物。

本发明还提供了从附子和乌头中提取上述物质的方法。

本发明也提供了以乌头碱为原料，制备N-去乙基乌头宁碱、中乌宁碱和次乌宁碱的方法，适于工业化生产。

本发明进一步提供了以上述化合物为活性成分的药物组合物，用于制备强心和抗心衰的药物。

本发明所述的化合物具有下述结构通式(I)：

其中R¹是氢，羟基或甲氧基；R²是氢或甲基；R³，R⁴和R⁵是氢或羟基。

本发明所述的具有强心和抗心衰作用的C₁₉-二萜生物碱化合物包括中乌宁碱和次乌宁碱。

本发明提供如下技术方法：

(1)从附子或乌头中提取分离N-去乙基乌头宁碱(XII)和异德尔宁碱(XIII)。

(2)以北乌亭为原料，经水解制备北乌宁(XIV)。

(3)以乌头碱为原料，经全乙酰化、N-去乙基化、N-甲基化和水解，制备中乌宁碱(II)。

(4)以乌头碱为原料，经氯代、消除、氢化，全乙酰化，N-去乙基化，N-甲基化和水解，制备次乌宁碱(III)。

(5)以乌头碱为原料，经氯代、消除、氢化，全乙酰化，N-去乙基化和水解，制备N-去乙基次乌宁碱(XV)。

本发明从附子或乌头中提取分离N-去乙基乌头宁碱和异德尔宁碱的方法，包括以下步骤：

(1)将附子或乌头粉碎后加水煎煮得提取液；

(2)提取液醇沉、过滤、滤液减压浓缩，得固体提取物；

(3)提取物用水溶解、碱化后，正丁醇萃取，回收溶剂，得正丁醇提取物；

(4)正丁醇提取物，经硅胶柱层析分离，不同比例氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得所需化合物。

本发明所用方法，简单易行，适于扩大规模，易于实现工业化生产目的。

本发明制备中乌宁碱的方法，包括以下步骤：

1)对甲苯磺酸催化下，乌头碱与乙酰氯或醋酐室温反应6-12小时，常法处理后得固体物，95％乙醇结晶，得化合物3，13，15-三乙酰乌头碱(V)；

2)3，13，15-三乙酰乌头碱与3当量的N-溴代丁二酰亚胺和20-40倍冰醋酸混合，室温反应2-6小时，减压浓缩，得白色固体物。经硅胶柱层析(石油醚∶丙酮＝2∶1)，得N-去乙基-3，13，15-三乙酰乌头碱(VI)；

3)N-去乙基3，13，15-三乙酰乌头碱与当量的碘甲烷混合，四氢呋喃为溶剂，室温反应2-4小时，减压抽干，得白色固体物。经硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯(3∶1)，得3，13，15-三乙酰中乌碱(VII)；

4)3，13，15-三乙酰中乌碱与5％氢氧化钠水解，室温过夜，减压抽干，得白色固体物。经硅胶柱层析(氨水饱和的氯仿-甲醇，95∶1)，得化合物中乌宁碱(II)。

本发明制备次乌宁碱的方法，包括以下步骤：

(1)以四氢呋喃为溶剂，将乌头碱与当量的SOCl₂混合，室温过夜反应1-3小时，减压抽干，得白色固体物。再加入乙酸乙酯-95％乙醇-冰醋酸(3∶3∶1，w/w)混合液后，钯碳催化下，常压氢化1-3天。减压抽干，得白色固体物。经95％乙醇结晶，得去氧乌头碱(VIII)；

(2)对甲苯磺酸催化下，去氧乌头碱与1.5当量的乙酰氯或醋酐混合，搅拌，室温反应过夜，减压抽干，得白色固体物。再用95％乙醇结晶，得化合物13，15-二乙酰去氧乌头碱)(IX)；

(3)13，15-二乙酰去氧乌头碱与3当量N-溴代丁二酰亚胺和20-40倍冰醋酸混合，室温反应2-6小时，减压浓缩，得白色固体物。经硅胶柱层析(石油醚-丙酮，2∶1)，得化合物N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱(X)；

(4)N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱与等当量碘甲烷混合，四氢呋喃为溶剂，室温反应2-4小时，减压抽干，得白色固体物。经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯，3∶1)，得化合物13，15-二乙酰次乌碱(XI)；

(5)13，15-二乙酰次乌碱加入5％氢氧化钠溶液，室温过夜，常法处理得白色固体物。硅胶柱层析(氨水饱和的氯仿-甲醇，95∶1)，得化合物次乌宁碱(III)。

本发明制备N-去乙基次乌宁碱的方法，包括以下步骤：

(1)以乌头碱为原料，按照上述制备次乌宁碱方法中①-③步骤制备N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱(X)；

(2)N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱加5％NaOH甲醇溶液，室温过夜，常法处理得白色固体物。硅胶柱层析(氨水饱和氯仿-甲醇，95∶1)洗脱，得所需化合物N-去乙基次乌宁碱(XV)。

上述中乌宁碱、次乌宁碱和N-去乙基次乌宁碱经光谱分析，分别具有如下理化特性：

中乌宁碱：白色无定形粉末，比旋度为

分子式为C₂₄H₃₉NO₉；易溶于水，不溶于丙醇，氯仿。通过充分的包括二维核磁等光谱分析，确定其结构式为(II)。中乌宁碱的光谱数据如下：

IR(KBr)cm^-1：3424，2932，2892，2821，1639，1453，1106；

¹H NMR(CDCl₃)δ：3.07(1H，dd，J＝8.4，6.0Hz，H-1)，3.75(1H，m，H-3)，4.15(1H，d，J＝6.8Hz，H-6)，3.93(1H，d，J＝5.2Hz，H-14β)，4.49(1H，t，J＝5.6Hz，H-15)，3.19(1H，d，J＝6.0Hz，H-16)，2.91(1H，s，H-17)，3.65，3.74(各1H，ABq，J＝9.6Hz，H₂-18)，2.48，2.79(各1H，ABq，J＝11.2Hz，H₂-19)，2.34(3H，s，NCH₃)，3.26(3H，s，OCH₃-1)，3.34(3H，s，OCH₃-6)，3.64(3H，s，OCH₃-16)，3.32(3H，s，OCH₃-18)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：82.6(C-1)，33.8(C-2)，71.5(C-3)，43.4(C-4)，46.5(C-5)，83.2(C-6)，46.4(C-7)，78.8(C-8)，48.8(C-9)，41.6(C-10)，50.1(C-11)，36.9(C-12)，76.3(C-13)，78.7(C-14)，81.5(C-15)，90.7(C-16)，62.5(C-17)，76.8(C-18)，49.8(C-19)，42.5(NCH₃)，56.3(OCH₃-1)，57.9(OCH₃-6)，61.3(OCH₃-16)，59.1(OCH₃-18)；

ESI-MS m/z(％)：486[M+H](100)；

HR-MS：准分子量测定值为486.2699，计算值为：486.2624。

次乌宁碱：白色无定形粉末，比旋度为

分子式为C₂₄H₃₉NO₈；易溶于水，不溶于丙酮，氯仿。通过充分的包括二维核磁等光谱方法，确定其结构式为(III)。

次乌宁碱的光谱数据如下：

IR(KBr)cm^-1：3442，2925，2820，1635，1456，1111；

¹H NMR(CDCl₃)δ：3.12(1H，t，J＝7.2Hz，H-1)，4.12(1H，d，J＝7.2Hz，H-6)，3.82(1H，d，J＝4.8Hz，H-14β)，4.42(1H，d，J＝6.0Hz，H-15)，3.05(1H，d，J＝6.0Hz，H-16)，2.93(1H，s，H-17)，3.65(1H，ABq，J＝8.4Hz，H-18)，2.76(1H，ABq，J＝10.8Hz，H-19)，2.35(3H，s，NCH₃)，3.25(3H，s，OCH₃-1)，3.33(3H，s，OCH₃-6)，3.59(3H，s，OCH₃-16)，3.28(3H，s，OCH₃-18)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：84.3(C-1)，25.1(C-2)，32.5(C-3)，38.8(C-4)，46.9(C-5)，83.1(C-6)，46.7(C-7)，78.0(C-8)，48.9(C-9)，41.9(C-10)，50.0(C-11)，37.3(C-12)，76.4(C-13)，78.5(C-14)，81.1(C-15)，91.7(C-16)，62.9(C-17)，80.2(C-18)，56.7(C-19)，41.6(NCH₃)，54.8(OCH₃-1)，56.7(OCH₃-6)，60.1(OCH₃-16)，58.1(OCH₃-18)；

ESI-MS m/z(％)：470[M+H]⁺(100)；

HR-MS m/z：准分子量测定值为470.2749，计算值为：470.2675。

N-去乙基次乌宁碱：白色无定形粉末，比旋度为

(c＝0.52，甲醇)；分子式为C₂₃H₃₇NO₈；易溶于水，不溶于氯仿，乙醚。通过光谱方法确定其结构式为(XV)。N-去乙基次乌宁碱的光谱数据如下：

IR(KBr)cm^-1：3396，2936，2825，1451，1098；

¹H NMR(CDCl₃)δ：4.60(1H，d，J＝6.4Hz)，4.15(1H，d，J＝6.4Hz)，3.87(1H，d，J＝4.4Hz)，3.70(3H，s)，3.35(3H，s)，3.31(3H，s)，3.20(3H，s)，3.12(1H，d，J＝8.0Hz)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：91.0(d)，83.5(d)，82.4(d)，81.1(d)，79.9(t)，78.5(s)，78.4(d)，76.2(s)，61.9(d)，59.1(q)，58.1(q)，56.3(q)，55.3(q)，51.5(d)，50.2(s)，49.0(t)，47.7(d)，42.8(d)，41.1(d)，38.7(s)，36.8(t)，28.5(t)，23.0(t)；

ESI-MS m/z(％)：456[M+H]⁺(100)。

经过离体蛙心、离体大鼠心脏体外强心活性筛选以及正常大鼠心脏和心衰大鼠心脏强心活性试验，上述化合物具有强心和抗心衰作用。

下述的药理试验证实了本发明化合物的强心和抗心衰药理活性。

实验例1：中乌宁碱和次乌宁碱对大鼠离体心脏缺血性再灌注损伤的保护作用

一、材料与方法

实验动物：SD大鼠，雄性，中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号，SCXK(军)2007-0004。

受试品：中乌宁碱，分子量485，易溶于水；次乌宁碱，分子量469，易溶于水，使用前均用KH液配制为相应浓度。

阳性对照药：去乙酰毛花苷注射液，批号090409，由上海旭东海普药业有限公司生产，使用前用KH液配制为相应浓度。

实验用液：KH液(2000ml蒸馏水中依次加入NaCl：13.7918g；KCl：0.7008g；CaCl₂：0.56605g；无水MgSO₄：0.2841g；KH₂PO₄：0.3212g；NaHCO₃：4.1803g；Glucose：4.3994g。加样同时磁力搅拌，备用)。

实验仪器：

1.Langendorff离体心脏灌流装置，美国BIOPAC公司。

2.DC100A多道生理记录仪，美国BIOPAC公司。

实验步骤：

1.大鼠麻醉，迅速开胸，左手用镊子轻轻提起心脏，右手剪断上下腔静脉、肺动脉、主动脉及心脏周围的组织，摘出心脏(于接近心脏主动脉根部，要保留约0.5-1.0cm的长度，备心脏插管用)，立即移至贮有4℃KH液的培养皿中，轻轻挤压心脏使心室内的剩余血液排除，清洗心脏残留血液。

2.迅速把心脏主动脉升支接于灌流的套管上，并以线结扎固定。立即以含氧KH液进行灌流。灌注压70mm汞柱，灌流温度(38±0.5)℃，流速(11.5±0.5)ml/min。

3.在左心房侧壁剪一小口，将小乳胶水囊通过房室口插入左心室。乳胶水囊和相连的导管内充满超纯水，导管的另一端通过三通管接压力换能器，彻底清除内部的大小气泡。左室内压稳定30min后再进行试验。

4.用量筒记录每一分钟心脏的冠脉流量；压力换能器信号通过桥式放大器输入多导记录系统。通过计算机Acq373软件，完成信号实时采集和处理。

5.分组及受试药物：模型组：以含氧KH液灌流10min后，停灌20min，再恢复含氧KH液灌流60min；阳性对照组和受试药物组：其中阳性药剂量为10^-12mol/L，受试物中乌宁碱和次乌宁碱剂量均为10^-9mol/L，在刚刚恢复灌流时立即通过受试药物孔给相应量的药，其余操作同模型组，受试药物体积均为1ml。

6.各组记录停灌前以及再灌后从第10min开始，每隔10分钟的冠脉流量(CBF)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(dp/dtmax)和心率，n＝3。

7.数据以平均值±标准差表示，数据分析采取T-test检验。

二、结果如表1-4所示。

表1.中乌宁碱和次乌宁碱对CBF(冠脉流量)的影响(ml/min，n＝3)

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2.中乌宁碱和次乌宁碱对dpdtmax(左室内压最大上升速率)的影响(mmHg/s，n＝3)

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表3.中乌宁碱和次乌宁碱对LVEDP(左室舒张末压)的影响(mmHg，n＝3)

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表4.中乌宁碱和次乌宁碱对心率的影响(次/min，n＝3)

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

本实验采用大鼠离体心脏缺血/再灌模型，观察受试品中乌宁碱和次乌宁碱对冠脉流量、左室内压最大上升速率、左室舒张末压和心率四项指标的影响。

冠脉流量指标可反映心肌冠脉的血流量。由本实验结果可见，模型组、阳性药对照组、中乌宁碱及和乌宁碱组给药后，均呈现先增大后减小的趋势，但统计结果显示各给药组与模型组相比均未见显著性差异。

左室内压最大上升速率指标反映舒张期心肌的收缩功能。与模型相比，阳性药对照组在给药后10min和20min时间点明显增大，统计学比较有显著性差异；受试物中乌宁碱组在给药后10min到40min各时间点均有显著性差异，次乌宁碱组与模型组相比未见显著性差异。

左室舒张末压指标则间接反映心室的舒张顺应性。与模型组相比，阳性药对照组在30min到60min各时间点均明显降低，有显著性差异；中乌宁碱在20min到60min五个时间点中左室舒张末压指标与模型组相比均有显著性差异，而次乌宁碱组此指标在上述时间点则未见显著性差异。

在心率方面，与模型组相比，阳性药对照组在给药后各时间点均明显减慢，统计学分析有显著性差异；中乌宁碱组在10min和20min时间点有显著性差异，次乌宁碱组在10min时间点有显著性差异。

上述实验结果提示受试品中乌宁碱在10^-9mol/L剂量下对大鼠缺血/再灌注离体心脏有直接增加心肌收缩力，改善心肌舒张功能作用。

实验例2：中乌宁碱对心衰大鼠心脏的强心作用

1材料与方法

1.1药品与试剂

中乌宁碱：分子量485，易溶于水。

1.2动物与试验仪器

试验动物：SD大鼠，体重200-250g，雌雄兼用，由四川大学华西医学实验动物中心提供。

试验仪器：BL-420F生物信号采集与处理系统：成都泰盟科技有限责任公司生产并提供。

1.3试验方法

将SD大鼠随机分为5组，每组4只，分别为正常对照组，模型组(生理盐水10ml/kg)、中乌宁碱大(0.05mg/kg)、中(0.0375mgml/kg)、小(0.025ml/kg)剂量组。正常对照组只进行左心室插管记录左室内压，不进行开胸结扎左冠状动脉，手术完成后给予生理盐水10ml/kg。

各组大鼠腹腔注射10％水合氯醛0.03ml/kg麻醉。固定于鼠板，将心电图电极插入四肢皮下，以标准Ⅱ导联监测动物心电图；手术分离气管、双侧颈总动脉；行气管插管，连接呼吸机以保持呼吸通畅；行左侧颈总动脉插管，通过压力转换器与BL-420F生物信号采集与处理系统连接，记录血压曲线；紧贴胸骨左缘剪断第三或第四肋，纵向钝性分离上下方肋间肌，暴露纵隔及左侧胸腔，可见心脏；钝性分开心包，于肺动脉圆锥和左心耳交界处下方2mm、左冠状动脉左前降支开口处附近，将穿有缝合线(6/0)的缝合针自左心室侧穿入，由肺动脉圆锥侧穿出，备结扎用；行右侧颈总动脉插管至左心室记录左室内压，结扎固定插管；结扎冠状动脉左前降支，按上述分离部位结扎冠脉。以ST段抬高是否大于0.1mv，并结合血流动力学指标的改变以判断心衰模型是否造模成功；结扎冠脉，稳定后腹腔给药。于结扎前、结扎后、给药后5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min的心率(HR)、收缩压(SP)、舒张压(DP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)。

造模后所有数据均以平均值±标准差

表示，与造模前作差处理后采用SPSS13.0统计软件进行均数比较t检验，检验水准α＝0.05。

2试验结果

2.1中乌宁碱对心衰大鼠心率(HR)的影响结果见表5。

表5中乌宁碱对心衰大鼠心率(HR)的影响(x±s，n＝4)

与正常组比较，#：P＜0.05，##：P＜0.01；与模型组比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01；

与大剂量组比，▲：P＜0.05，▲▲：P＜0.01；与中剂量组比：△：P＜0.05，△△：P＜0.01。

表5结果显示，中乌宁碱各剂量组间比，中剂量组稳定HR不使之明显下降趋势较其它剂量组显著，尤其在20min时回升HR作用较大剂量组明显(P＜0.05)，其余各组各时间段HR比较无明显差异。说明中乌宁碱具有稳定心衰大鼠心率的作用。

2.2中乌宁碱对心衰大鼠收缩压(SBP)的影响结果见表6。

表6中乌宁碱对心衰大鼠收缩压(SBP)的影响(x±s，n＝4)

表6结果显示，中乌宁碱各剂量组间比，各剂量各时间段SBP无明显差异。说明中乌宁碱对心衰大鼠具有显著回升收缩压的作用。

2.3中乌宁碱对心衰大鼠舒张压(DBP)的影响结果见表7。

表7中乌宁碱对心衰大鼠舒张压(DBP)的影响(x±s，n＝4)

表7结果显示，中乌宁碱各剂量组间比，中剂量在50min时对抗DBP降低的幅度强于小剂量组(P＜0.05)，其余各组各时间段DBP比较无明显差异。说明中乌宁碱具有显著对抗心衰大鼠舒张压下降的作用。

2.4中乌宁碱对心衰大鼠左心室收缩压(LVSP)的影响结果见表8。

表8中乌宁碱对心衰大鼠左心室收缩压(LVSP)的影响(x±s，n＝4)

表8显示，中乌宁碱各剂量组间比，各剂量各时间段LVSP无明显差异。说明中乌宁碱具有显著提高心衰大鼠左室收缩功能的作用。

2.5中乌宁碱对心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)的影响结果见表9。

表9中乌宁碱对心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)的影响(x±s，n＝4)

表9显示，中乌宁碱各剂量组间比，中剂量在20、60min，小剂量在30-40min时对抗LVEDP升高较大剂量更为明显(P＜0.05～0.01)，其余各时间段各剂量组间LVEDP无明显差异。说明中乌宁碱具有降低心衰大鼠左室舒张末压的作用。

2.6中乌宁碱对心衰大鼠左心室等容期压力最大上升速率(+dp/dtmax)的影响结果见表10。

表10中乌宁碱对心衰大鼠左心室等容期压力最大上升速率(+dp/dtmax)的影响(x±s，n＝8)

表10显示，中乌宁碱各剂量间比，中剂量在50-60min时+dp/dtmax明显高于大剂量组(P＜0.05)，在60min时+dp/dtmax明显高于小剂量组(P＜0.05)。说明中乌宁碱具有显著提高心衰大鼠左室最大收缩速率的作用。

2.7中乌宁碱对心衰大鼠左心室等容期压力最大下降速率(-dp/dtmax)的影响结果见表11。

表11中乌宁碱对心衰大鼠左心室等容期压力最大下降速率(-dp/dtmax)的影响(x±s，n＝4)

与正常组比较#：P＜0.05，##：P＜0.01；与模型组比较，^*：P＜0.05，^**：P＜0.01；

表11显示，中乌宁碱各剂量间比，中剂量组在20、50-60min时升高-dp/dtmax的作用明显高于大剂量组(P＜0.05)。

3.结论综合上述结果，中乌宁碱能够提高心衰大鼠的心功能。说明化合物中乌宁碱具有显著的强心和抗心衰作用。

本发明提出含有本发明通式(I)所示化合物或其药用盐的药物。

本发明还提出含有本发明化合物中乌宁碱和次乌宁碱或它们药用盐的药物。

将所述化合物转化为适宜的药用剂型，在必要时使用惰性助剂和赋形剂制成药物。

本发明同时提出了应用化合物中乌宁碱和次乌宁碱或它们药用盐作为强心和抗心衰药物用于临床治疗中。

本发明的药物组合可以是油膏、凝胶、糊剂、喷雾剂、洗剂、悬浮剂，活性成分在水和非水稀释剂中的溶剂或乳剂、糖浆、颗粒或粉剂。

应用本发明化合物中乌宁碱和次乌宁碱或它们药用盐的药物，可以采用的剂型是惯用的盖伦给药剂型，例如：药膏、片剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、乳剂、输入液和注射液。这些制剂按众所周知的方法，使用传统的添加剂和赋形剂制得。由此制得药物根据需要可以按局部，非肠道、口服、注射等途径给药。

用于药物组合物的稀释剂(如颗粒)，适用于形成片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和注射剂的包括：

(a)填充剂，如玉米淀粉、糖和硅酸；

(b)粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；

(c)湿润剂，如甘油；

(d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；

(e)吸收促进剂，如季铵化合物；

(f)表面活性剂，如十六烷醇；

(g)吸附载体，如高岭土和皂粘土；

(h)润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和固体聚乙二醇；

(i)pH调节剂，如盐酸、碳酸氢钠、氢氧化钠；

(j)等渗剂，如枸椽酸、枸椽酸钠、乳酸和乳酸钠；

(k)助溶剂，如尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、吐温-80；

(l)抗氧化剂，如焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠和维生素C。

由本发明药用组合物形成的药片、糖衣丸、胶囊药丸，能持有通常的包衣、包膜和保护性基质，它可含有避光剂。它们可以配成这样的组成，使它们在一定时期内将活性成分仅在或优选在体内特殊部分释放。包衣、包膜和保护性基质可用如多聚物质或蜡之类制成。

活性成分亦可用一种或多种上述稀释剂一起制成微胶囊包形式。

上述药物组合物或药物的生产可用在该技术中的任何已知方法进行，例如将一种或几种活性成分与一种或几种稀释剂混合形成药用组合物，再将组合物制成药物。

按照本发明通式(I)所示化合物以及中乌宁碱和次乌宁碱作为临床药品中的剂量，最好是在以0.0001至5毫克/公斤体重的范围内，优选在0.01-5毫克/公斤体重范围内。

通过本发明所作的药理实验发现，通式(I)所示化合物以及中乌宁碱和次乌宁碱或它们药用盐具有强心和抗心衰作用。此作用可作为临床上强心和抗心衰药物使用。

具体实施方式：

实施例1：N-去乙基乌头宁碱(XII)的制备

称取附子22kg，用3倍量热水提取3次，提取液75％乙醇沉淀后，上清液减压浓缩，得提取物175g。用水溶解，氨水调pH 10，乙醚脱脂。水层用正丁醇萃取，萃取液抽干，得正丁醇提取物10g。硅胶(青岛海洋化工厂，下同)柱层析，氯仿-甲醇(95∶5-85∶15)洗脱得部位D(3.2g)，硅胶柱层析，氯仿-甲醇(15∶1)洗脱，得所需化合物60mg。

白色无定形粉末。C₂₅H₄₁NO₉。

ESIMS m/z(％)：472[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：4.51(1H，d，J＝4.0Hz)，4.31(1H，d，J＝5.2Hz)，4.17(1H，d，J＝2.4Hz)，3.60(3H，s)，3.43(3H，s)，3.39(3H，s)，3.34(3H，s)，3.26(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：91.6(d)，81.7(d)，80.2(d)，79.9(d)，77.9(s)，78.2(d)，76.8(t)，76.0(s)，69.1(d)，66.9(d)，60.4(q)，59.0(q)，57.2(q)，54.1(q)，51.5(t)，50.3(s)，43.2(s)，42.3(d)，40.5(d)，40.5(d)，40.4(d)，36.4(t)，29.0(t)。

实施例2：异德尔宁碱(XIII)的制备

实施例1中硅胶柱层析所得B部位(2.1g)，硅胶柱层析，氯仿-甲醇(8∶2→7∶3)洗脱，得所需化合物25mg。

白色无定形粉末。C₂₄H₃₉NO₇。

ESI-MS m/z(％)：454[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：4.38(1H，d，J＝6.8Hz)，4.21(1H，d，J＝7.0Hz)，4.07(1H，d，J＝4.4Hz)，3.73(1H，d，J＝3.2Hz)，3.54(1H，d，J＝8.4Hz)，3.41(3H，s)，3.34(3H，s)，3.29(6H，s)，2.40(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：92.2(d)，84.5(t)，80.6(d)，79.4(d)，79.2(s)，76.3(d)，72.9(d)，63.6(d)，59.1(q)，58.9(t)，58.1(q)，57.5(q)，57.2(q)，50.6(s)，49.8(d)，49.3(d)，48.4(d)，45.3(d)，44.4(d)，41.6(q)，39.3(s)，31.7(t)，30.7(t)，29.8(t)。

实施例3：北乌宁(XIV)的制备

称取北乌亭(beiwutine)1.0g，加5％NaOH甲醇溶液20毫升，室温过夜，减压抽干，得白色固体物0.7g。硅胶柱层析，氨水饱和的氯仿-甲醇(7∶3)洗脱，得所需化合物。

收率：92％。白色无定形粉末。C₂₄H₃₉N0₁₀。

ESI-MS m/z(％)：502[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：4.45(1H，d，J＝6.0Hz)，4.26(1H，d，J＝5.2Hz)，3.16(1H，d，J＝6.4Hz)，3.82(1H，d，J＝8.4Hz)，3.57(3H，s)，3.35(3H，s)，3.29(3H，s)，3.27(3H，s)，2.37(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：92.6(d)，84.4(d)，83.2(d)，79.4(s)，78.5(d)，78.4(d)，78.1(s)，77.7(s)，75.8(t)，70.6(d)，61.5(q)，59.4(d)，59.1(q)，58.4(q)，56.8(s)，55.9(q)，51.1(t)，49.0(q)，49.0(t)，47.8(d)，44.4(s)，42.8(d)，42.4(d)，34.7(t)，34.7(t)。

实施例4：乌头碱(IV)的提取分离

称取新疆产乌头(Aconitum carchaeli Debx.)根茎粉末10kg，盛入渗滤筒中，以10～20倍0.3％HCl水液渗滤，渗滤液浓氨水碱化后，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压抽干，得褐色固体物。

硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚-二乙胺，60∶40∶2，w/w)分离，得粗品乌头碱。再经95％乙醇结晶，得所需化合物。

收率：0.7％。无色针状结晶。C₃₄H₄₇NO₁₁。

ESI-MS m/z(％)：646[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.03(1H，d，J＝7.2Hz)，7.58(1H，t，J＝7.2Hz)，7.46(1H，t，J＝7.2Hz)，4.87(1H，d，J＝5.2Hz)，4.47(1H，dd，J＝5.2，2.8Hz)，4.39(1H，d，J＝2.8Hz)，4.03(1H，d，J＝6.4Hz)，3.96(3H，s)，3.75(3H，s)，3.62(1H，d，J＝9.2Hz)，3.50(1H，d，J＝8.8Hz)，3.34(1H，d，J＝5.2Hz)，3.30(3H，s)，3.26(3H，s)，3.16(3H，s)，1.39(3H，s)，1.10(3H，d，J＝7.2Hz)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：172.4(s)，166.0(s)，133.3(d)，129.6(s)，129.5(d)，128.6(d)，91.9(s)，89.9(d)，83.3(d)，82.3(d)，82.3(d)，78.8(d)，78.8(d)，76.6(t)，74.0(s)，71.3(d)，61.1(q)，61.0(d)，59.1(q)，57.9(q)，55.9(q)，49.9(s)，48.9(t)，46.9(d)，46.7(d)，44.6(d)，44.1(d)，43.0(s)，40.8(d)，35.7(t)，33.5(t)，21.4(q)，13.3(q)。

实施例5：中乌宁碱的制备

(1)3，13，15-三乙酰乌头碱(V)的制备

称取18.0摩尔乌头碱，加入三口瓶中，另加入对甲苯磺酸6g和乙酸酐72毫升，搅拌，室温反应72小时后，按常规方法处理，得白色固体物。经硅胶柱层析(或丙酮-乙醚结晶)，得所需化合物。

收率：95％。无色针状结晶。C₄₀H₅₃NO₁₄。

ESI-MS m/z(％)：772[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.16(1H，d，J＝7.2Hz)，7.56(1H，t，J＝7.2Hz)，7.48(1H，t，J＝7.2Hz)，6.09(1H，d，J＝5.6Hz)，5.13(1H，d，J＝5.2Hz)，4.91(1H，dd，J＝8.4，5.2Hz)，4.11(1H，m)，4.05(1H，d，J＝5.6Hz)，3.75(1H，d，J＝8.8Hz)，3.68(1H，d，J＝5.2Hz)，3.64(1H，d，J＝5.2Hz)，3.40(3H，s)，3.24(3H，s)，3.19(6H，s)，3.11(1H，dd，J＝10.0，7.2Hz)，2.14(3H，s)，2.07(3H，s)，2.06(3H，s)，2.01(3H，s)，1.23(3H，s)，1.16(3H，t，J＝7.2Hz)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.3(s)，170.3(s)，169.7(s)，168.8(s)，166.2(s)，133.3(d)，129.9(d)，129.5(s)，128.7(d)，88.7(d)，83.6(d)，81.5(d)，81.0(d)，78.8(d)，76.7(d)，71.3(t)，61.4(q)，60.4(d)，58.7(q)，58.6(q)，56.1(q)，49.8(s)，48.9(t)，47.0(t)，45.5(d)，45.1(d)，43.9(d)，42.1(s)，41.2(d)，35.9(t)，31.9(t)，21.2(q)，21.2(q)，21.1(q)，21.1(q)，13.6(q)。

(2)N-去乙基-3，13，15-三乙酰乌头碱(VI)的制备

称取17.0摩尔3，13，15-三乙酰乌头碱，加入三口瓶中，另加入冰醋酸420毫升和N-溴代丁二酰亚胺54.5摩尔，搅拌，室温反应4小时后，按常规方法处理反应得白色固体物。经硅胶柱层析(石油醚-丙酮，2∶1)，得所需化合物。

收率：75％。白色无定形粉末。C₃₈H₄₉NO₁₄。

ESI-MS m/z(％)：744[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：7.48-8.18(5H，m，Ar-H)，6.10(1H，d，J＝6.0Hz，H-15)，5.16(1H，d，J＝5.2Hz，H-14β)，5.04(1H，dd，J＝10.0，5.6Hz，H-3)，4.07(1H，d，J＝6.8Hz，H-6)，3.86(1H，d，J＝5.6Hz，H-16)，3.75，2.97(各1H，ABq，J＝8.8Hz，H₂-18)，3.21，3.23，3.30，3.40(各3H，s，OAc×4)，2.06，2.07，2.18(各3H，s，OAc×3)，1.25(3H，s，OAc-8)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.5(s)，170.4(s)，169.9(s)，168.7(s)，166.1(s)，133.4(d)，129.9(d)，129.3(s)，128.7(d)，88.3(d)，88.3(s)，83.7(d)，80.8(s)，80.6(d)，78.7(d)，76.7(d)，72.9(t)，71.8(d)，61.4(d)，58.8(q)，58.5(q)，55.8(q)，55.7(q)，51.4(d)，49.9(s)，44.6(d)，42.9(d)，42.7(s)，41.3(d)，41.1(t)，34.6(t)，31.7(t)，21.3(q)，21.3(q)，21.1(q)，21.1(q)。

(3)3，13，15-三乙酰中乌碱(VII)的制备

称取N-去乙基-3，13，15-三乙酰乌头碱13摩尔，盛入三口瓶中，另加入氢化钠13摩尔和四氢呋喃300毫升，氩气流下搅拌10分钟，再加入碘甲烷15毫摩尔，搅拌，室温反应3小时，抽干溶剂，按常规方法处理得白色固体物。经硅胶柱层析(氯仿-甲醇＝95∶1)，得所需化合物。

收率：90％。无色棱晶。C₃₉H₅₁NO₁₄。

ESI-MS m/z(％)：758[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：7.49-8.17(5H，m)，6.07(1H，d，J＝5.6Hz)，5.14(1H，d，J＝5.2Hz)，4.91(1H，dd，J＝12.8，6.0Hz)，4.05(1H，d，J＝6.8Hz)，3.85(1H，d，J＝5.2Hz)，3.40，3.27，3.27，3.19(各3H，s)，3.76，2.95(各1H，ABq，J＝8.8Hz)，2.66(1H，ABq，J＝11.2Hz)，2.45(3H，s)，2.16，2.07，2.06(各3H，s)，1.24(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.3(s)，170.1(s)，169.5(s)，168.7(s)，166.2(s)，133.3(d)，130.0(d)，129.6(s)，128.6(d)，88.8(d)，88.6(s)，83.5(d)，81.6(d)，81.1(s)，78.9(d)，76.7(d)，71.3(d)，71.2(t)，62.0(d)，61.2(q)，58.7(q)，58.6(q)，56.3(q)，49.9(s)，49.6(t)，45.0(d)，44.3(d)，43.9(d)，42.6(q)，42.4(s)，41.3(d)，35.7(t)，31.9(t)，21.2(q)，21.1(q)，21.1(q)，21.1(q)。

(4)中乌宁碱(II)的制备

称取3，13，15-三乙酰中乌碱10.0摩尔，盛入三口瓶中，另加入5％氢氧化钠甲醇液250毫升，60℃搅拌30分钟，抽干溶剂，按常规方法处理，得白色固体物。经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，95∶5)，得所需化合物。

收率：95％。白色无定形粉末。C₂₄H₃₉NO₉。

光谱(IR、¹HNMR、¹³CNMR、ESI-MS)数据见前述。

实施例6：次乌宁碱的制备

(1)去氧乌头碱(VIII)的制备

称取乌头碱2.0摩尔，盛入三口瓶中，另加入四氢呋喃100毫升和氯化亚砜7毫升，搅拌，室温反应2小时后，按常规方法处理，得黄褐色固体物。将其盛入三口瓶中，加乙酸乙酯和95％乙醇各80毫升，另加入冰醋酸2毫升，钯碳1克，搅拌下通入氢气(约0.1kg/cm²)，反应72小时后，按常规方法得白色固体物。经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，95∶5)，得所需化合物。

收率：90％。无色针状结晶。C₃₄H₄₇NO₁₀。

ESI-MS m/z(％)：630[M+H](100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.02(1H，d，J＝7.2Hz)，7.57(1H，t，J＝7.2Hz)，7.45(1H，t，J＝7.2Hz)，4.87(1H，d，J＝4.8Hz)，4.45(1H，dd，J＝5.2，2.8Hz)，4.37(1H，d，J＝2.8Hz)，3.97(1H，d，J＝6.0Hz)，3.89(1H，s)，3.73(3H，s)，3.63(1H，d，J＝8.4Hz)，3.28(3H，s)，3.26(3H，s)，3.15(3H，s)，3.10(1H，d，J＝8.4Hz)，1.36(3H，s)，1.06(3H，t，J＝7.2Hz)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：172.4(s)，166.1(s)，133.2(d)，129.7(d)，129.6(s)，128.5(d)，92.0(s)，90.0(d)，84.9(d)，83.1(d)，80.2(t)，78.9(d)，78.8(d)，74.0(s)，61.4(d)，61.0(q)，58.6(q)，57.9(q)，56.3(q)，53.0(t)，49.8(s)，49.2(t)，49.0(d)，45.0(d)，44.5(d)，40.9(d)，39.0(s)，36.6(t)，35.2(t)，26.3(t)，21.4(q)，13.4(q)。

(2)13，15-二乙酰去氧乌头碱(IX)的制备

称取去氧乌头碱3.0摩尔盛入三口瓶中，另加入对甲苯磺酸2克和乙酸酐20毫升，搅拌，45℃反应48小时后，按常规方法处理，得白色固体物。经丙酮-乙醚结晶，得所需化合物。

收率：90％。白色无定形粉末。C₃₈H₅₁NO₁₂。

ESI-MS m/z(％)：714[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.16(1H，d，J＝7.2Hz)，7.56(1H，t，J＝7.2Hz)，7.48(1H，t，J＝7.2Hz)，6.07(1H，d，J＝5.6Hz)，5.14(1H，d，J＝5.2Hz)，3.94(1H，d，J＝6.4Hz)，3.84(1H，d，J＝5.6Hz)，3.40(3H，s)，3.25(3H，s)，3.22(3H，s)，3.15(3H，s)，2.13(3H，s)，2.04(3H，s)，1.25(3H，s)，1.13(3H，t，J＝7.2Hz)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.3(s)，169.8(s)，168.8(s)，166.3(s)，133.3(d)，129.9(d)，129.5(s)，128.7(d)，88.9(s)，88.7(d)，84.7(d)，83.4(d)，81.1(s)，80.0(t)，78.9(d)，76.9(d)，61.4(q)，61.2(d)，59.6(q)，58.4(q)，53.0(q)，50.1(s)，49.1(t)，49.1(t)，48.7(d)，45.1(d)，43.9(d)，41.7(d)，38.8(s)，36.2(t)，35.2(t)，26.3(t)，21.3(q)，21.2(q)，21.1(q)，13.6(q)。

(3)N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱(X)的制备

称取13，15-二乙酰去氧乌头碱5.0摩尔，盛入三口瓶中，另加入冰醋酸90毫升和N-溴代丁二酰亚胺15摩尔，室温搅拌反应3小时后，按常规方法处理，得白色固体物。经硅胶柱层析(氨水饱和氯仿-甲醇，8∶2)，得所需化合物。

收率：75％。白色无定形粉末。C₃₂H₄₃NO₁₀。

ESI-MS m/z(％)：602[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.17(1H，d，J＝7.2Hz)，7.57(1H，t，J＝7.2Hz)，7.49(1H，t，J＝7.2Hz)，6.16(1H，d，J＝6.5Hz)，5.17(1H，d，J＝4.8Hz)，3.93(1H，dd，J＝9.6，6.4Hz)，3.41(3H，s)，3.29(3H，s)，3.27(3H，s)，3.18(3H，s)，2.21(3H，s)，2.08(3H，s)，1.26(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.6(s)，170.5(s)，168.7(s)，166.1(s)，133.4(d)，130.0(d)，129.3(s)，128.7(d)，88.7(s)，87.9(d)，83.7(d)，82.5(d)，80.7(s)，79.8(t)，78.6(d)，77.0(d)，61.5(d)，59.1(q)，58.4(q)，56.8(q)，55.5(q)，50.1(s)，49.2(d)，49.0(t)，43.4(d)，42.7(d)，41.1(d)，39.0(s)，35.4(t)，29.7(t)，29.6(t)，24.0(t)。

(4)13，15-二乙酰次乌碱(XI)的制备

称取N-去甲基-13，15-二乙酰去氧乌头碱3.8摩尔，盛入三口瓶中，另加入氢化钠3.8摩尔，四氢呋喃80毫升和碘甲烷4摩尔，搅拌，室温反应3小时后，按常规方法处理，得白色固体物。经硅胶柱层析(氯仿-甲醇，95∶5)，得所需化合物。

收率：80％。白色无定形粉末。C₃₃H₄₉NO₁₂。

ESI-MS m/z(％)：698[M+H]⁺(100)；

¹H NMR(CDCl₃)δ：8.17(1H，d，J＝7.2Hz)，7.52(1H，t，J＝7.2Hz)，7.48(1H，t，J＝7.2Hz)，6.07(1H，d，J＝5.6Hz)，5.13(1H，d，J＝5.2Hz)，3.40(3H，s)，3.27(6H，s)，3.15(3H，s)，2.42(3H，s)，2.13(3H，s)，2.03(3H，s)，1.22(3H，s)；

¹³C NMR(CDCl₃)δ：170.3(s)，169.7(s)，168.8(s)，166.2(s)，133.3(d)，129.9(d)，129.5(s)，128.6(d)，88.7(s)，88.7(d)，84.6(d)，83.3(d)，81.1(s)，79.8(t)，78.9(d)，76.8(d)，62.3(d)，61.3(q)，58.9(q)，58.3(q)，56.3(q)，55.7(t)，50.1(s)，47.6(q)，44.0(d)，43.8(d)，42.8(d)，41.1(d)，39.0(s)，35.9(t)，34.8(t)，26.4(t)，21.3(q)，21.2(q)，21.1(q)。

(5)次乌宁碱(III)的制备

称取13，15-二乙酰次乌碱5.0摩尔，盛入三口瓶中，另加入5％氢氧化钠甲醇液40毫升，60℃搅拌反应30分钟后，按常规方法处理，得白色固体物。经硅胶柱层析氨水饱和氯仿-甲醇95∶5分离，得所需化合物。

收率：92％。白色无定形粉末。C₂₄H₃₉NO₈。

光谱(ESI-MS、¹H NMR、¹³C NMR HR-MS)数据见前。

实施例7：N-去乙基次乌宁碱(XV)的制备

称取实施例5中N-去甲基-13，15-二乙酰次乌碱0.5克，盛入三口瓶中，加入5％NaOH甲醇液15毫升，室温，搅拌过夜，抽干，得白色固体物。硅胶柱层析(氯仿-甲醇，7∶3)，得所需化合物。

收率：92％。白色无定形粉末。C₂₃H₃₇NO₈。

光谱(¹H NMR、¹³C NMR、ESI-MS、HR-MS)数据见前。

下面阐明的有代表性的药物剂型，适用于通式(I)所示的化合物以及中乌宁碱和次乌宁碱或其药用盐(以下记为“化合物X”)在治疗时服用。

Claims

1.C₁₉-二萜生物碱中乌宁碱(II)和次乌宁碱(III)或它们的药用盐在制备强心剂和抗心衰剂中的用途，

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2.用于制备强心剂和抗心衰剂的中乌宁碱的制备方法，包括以下步骤：

1)对甲苯磺酸催化下，乌头碱(aconitine)(IV)与乙酰氯或醋酐室温反应6-12小时，常法处理后，得固体物，95％乙醇结晶，得化合物3，13，15-三乙酰乌头碱(3，13，15-triacetylaconitine)(V)；

2)3，13，15-三乙酰乌头碱与3当量的N-溴代丁二酰亚胺和20-40倍冰醋酸混合，室温反应2-6小时，减压浓缩得白色固体物，硅胶层析分离，以石油醚、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲醇或它们的混合溶剂为洗脱液，得N-去乙基-3，13，15-三乙酰乌头碱(N-deethyl-3，13，15-triacetylaconitine)(VI)；

3)N-去乙基-3，13，15-三乙酰乌头碱与当量的碘甲烷混合，THF为溶剂，室温反应2-4小时，减压抽干，得白色固体物，硅胶层析分离，以石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇或它们的混合溶剂为洗脱液，得3，13，15-三乙酰中乌碱(3，13，15-triacetylmesaconitine)(VII)；

4)3，13，15-三乙酰中乌碱用5％氢氧化钠水解，室温过夜，减压抽干，得白色固体物，硅胶层析分离，以石油醚、氯仿、二氯甲烷、甲醇或它们的混合溶液为洗脱剂，得化合物中乌宁碱(II)，

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3.用于制备强心剂和抗心衰剂的次乌宁碱的制备方法，包括以下步骤：

1)以四氢呋喃为溶剂，将乌头碱与当量的二氯亚砜混合，室温过夜反应1-3小时，减压抽干，得白色固体物，再加入乙酸乙酯-95％乙醇-冰醋酸混合液后，钯碳催化下，常压氢化1-3天，减压抽干，得白色固体物，经95％乙醇结晶，得去氧乌头碱(deoxyaconitine)(VIII)；

2)对甲苯磺酸催化下，去氧乌头碱与1～2当量的乙酰氯或醋酐混合，搅拌，室温反应过夜，减压抽干，得白色固体物，再用95％乙醇结晶，得化合物13，15-二乙酰去氧乌头碱)(13，15-diacetyldeoxyaconitine)(IX)；

3)13，15-二乙酰去氧乌头碱与2-4当量N-溴代丁二酰亚胺和20-40倍冰醋酸混合，室温反应2-6小时，减压浓缩，得白色固体物，硅胶层析分离，以石油醚、丙酮、氯仿、甲醇或它们的混合溶剂为洗脱剂，得化合物N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱(N-deethyl-13，15-diacetyl-deoxyaconitine)(X)；

4)N-去乙基-13，15-二乙酰去氧乌头碱与等当量碘甲烷混合，四氢呋喃为溶剂，室温反应2-4小时，减压抽干，得白色固体物，硅胶层析分离，以石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇或它们的混合溶剂为洗脱液，得化合物13，15-二乙酰次乌碱(13，15-diacetylhypaconitine)(XI)；

5)13，15-二乙酰次乌碱(13，15-diacetylhypaconitine)加入5％氢氧化钠溶液，室温过夜，常法处理，得白色固体物，硅胶层析分离，以氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、甲醇或它们的混合溶剂为洗脱液，得化合物次乌宁碱(III)，

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