CN102140425B - 一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法。本发明涉及一种微生物培养。本发明的目的是提供一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法。这种培养方法简单易操作,所培养出的黄孢原毛平革菌厚垣孢子产量大。本发明的技术方案是,一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法,包括培养基,培养基中含有Mn2+,此Mn2+浓度为5-25mmoL/L。本发明用于黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养。
Description
技术领域:
本发明涉及一种微生物培养,特别是一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法。
背景技术:
生物菌剂广泛应用于工业、农业、环境污染治理等领域。在农业领域里,生物菌剂可作为生防治剂或生物肥料,有效地增加土壤肥力,改良作物生长环境,抑制虫害,缓解土壤板结,增进农作物营养吸收,最终达到增产增收的目的。然而目前,生物菌剂普遍存在的一个问题是货架期短,在保存和运输过程中,菌剂中有效微生物大量死亡或活性降低,导致产品的效力减少或功能下降。最近的研究表明P.chrysosporium作为生物农药不但可以防病虫害,而且可以降解作物连作后土壤里的大量化感物质,如一些酚酸类物质,从而解除连作作物的自毒,因此,可用于作物连作障碍的消除。如徐淑霞等发现黄孢原毛平革菌对黄瓜连作土壤中的羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸等酚酸类物质毒性物质有明显的降解作用(徐淑霞,张世敏,尤晓颜,贾新成,吴坤.黄孢原毛平革菌对黄瓜连作土壤酚酸物质的降解[J].应用生态学报,2008,19(11):2480-2484)。此外,土壤经黄孢原毛平革菌修复后,黄瓜根部病害明显减轻,枯萎病及根结线虫病相对病情指数降低。因此,黄孢原毛平革菌可作为生防治剂用于病虫害的防治,特别是作物连作障碍的消除。目前,国内外对于连作障碍消除的特效的产品很少,因此,本产品的开发有着广阔的市场前景。
鉴于P.chrysosporium在生物质资源化、环境工程、农业领域的广泛的应用前景,对其进行商品化开发的市场前景非常广阔,但是,其菌丝或分生孢子不易保存,即使用真空冷冻干燥的方法,随着水分的减少,菌丝或分生孢子活性也丧失得较快。因此,要想大大延长产品的货架期,使其商品化成为可能,有必要对其厚垣孢子进行开发。然而,目前,国内外尚没有有关P.chrysosporium厚垣孢子的高产技术及方法的报道。
发明内容:
本发明的目的是提供一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法。这种培养方法简单易操作,所培养出的黄孢原毛平革菌厚垣孢子产量大。本发明的技术方案是,一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法,包括培养基,其特征在于:培养基中含有Mn2+,此Mn2+浓度为5-25mmoL/L。本发明与现有技术比较具有产量高的显著优点。
具体实施方式:
本发明的培养方法有以下步骤:
1,菌种活化:将黄孢原毛平革菌在PDA斜面培养基上活化培养,培养温度为33℃,2-3天。PDA培养基配方为土豆煮汁1000ml,葡萄糖20g,琼脂20g。
2,将活化的菌种制备成菌丝悬液,接种到灭过菌的装有100ml液体培养基的三角瓶中,摇床培养,33℃,120rpm,4-5天。以三角瓶中生物量不再增多作为培养结束的指标。
上述液体培养基的配方为:葡萄糖10.0g,酒石酸铵1.5g,磷酸二氢钾2.0g,MgSO4·7H2O 0.8g,CaCl2 0.1g,苯甲醇1ml,吐温801ml,微量元素溶液70ml,配方为:0.5g/l Glycine,1.0g/l NaCl,0.1g/l FeSO4·7H2O,0.1g/l CoSO4,0.1g/l ZnSO4·7H2O,10mg/l CuSO4·5H2O,10mg/lAlK(SO4)2·12H2O,10mg/l H2BO3,10mg/l Na2MoO2·2H2O。此外,通过投加MnSO4或MnCl2,调节培养基中Mn2+浓度为5-25mmol/l。不同Mn2+浓度对厚垣孢子产量的影响见表1。
3,将培养好的大量菌丝球经纱布过滤后,置于-20℃低温冰箱冷冻,30分钟后,将冷冻的菌丝球研磨至粉状,菌丝球中的厚垣孢子即可分离为单个的孢子,而后烘干,即可得到含大量黄孢原毛平革菌的厚垣孢子粉状物。
表1不同Mn2+浓度对厚垣孢子产量的影响
Claims (1)
1.一种黄孢原毛平革菌厚垣孢子的培养方法,其特征在于有以下步骤:
(1)菌种活化:将黄孢原毛平革菌在PDA斜面培养基上活化培养,培养温度为33℃,2-3天,PDA培养基配方为土豆煮汁1000ml,葡萄糖20g,琼脂20g;
(2)将活化的菌种制备成菌丝悬液,接种到灭过菌的装有100ml液体培养基的三角瓶中,摇床培养,33℃,120rpm,4-5天,以三角瓶中生物量不再增多作为培养结束的指标;
上述液体培养基的配方为:葡萄糖10.0g,酒石酸铵1.5g,磷酸二氢钾2.0g,MgSO4·7H2O0.8g,CaCl20.1g,苯甲醇1ml,吐温801ml,微量元素溶液70ml,配方为:0.5g/l Glycine,1.0g/l NaCl,0.1g/l FeSO4·7H2O,0.1g/l CoSO4,0.1g/l ZnSO4·7H2O,10mg/l CuSO4·5H2O,10mg/lAlK(SO4)2·12H2O,10mg/l H2BO3,10mg/l Na2MoO2·2H2O ;此外,通过投加MnSO4或MnCl2,调节培养基中Mn2+浓度为5-25mmol/l;
(3)将培养好的大量菌丝球经纱布过滤后,置于-20℃低温冰箱冷冻,30分钟后,将冷冻的菌丝球研磨至粉状,使菌丝球中的厚垣孢子分离为单个的孢子,而后烘干,即可得到含大量黄孢原毛平革菌厚垣孢子的粉状物。
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打结棉线载体对白腐真菌生长与合成MnP的促进作用;周成等;《清华大学学报( 自然科学版)》;20090630;第49卷(第6期);第1.1节、第2.3-2.4节 * |
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