CN102140141A - 鲍鱼多糖的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鲍鱼多糖的制备工艺，它包括以下步骤：①将洗净的鲍鱼肉或脏器打浆得到鲍鱼预处理液，常温下采用高压脉冲电场处理；②采用壳聚糖对PEF处理后的鲍鱼料液进行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖纯度；③采用电渗析技术对预处理液进行处理，有效脱去重金属；④采用乙醇沉淀制备鲍鱼多糖。本发明大幅度提高了多糖得率，在保证所得多糖的生物活性的同时，解决了传统酶法提取工艺多糖得率低的难题。
Description
技术领域
本发明涉及一种贝类的多糖提取领域。
背景技术
多糖是一类重要的生物活性物质，参与了细胞的各种生命现象的调节，可作为免疫促进剂，能控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老。对肿瘤细胞起抑制作用，同时对正常细胞无毒害作用。目前，关于鲍鱼多糖提取的研究尚鲜见报道。国内大连工业大学的朱蓓薇采用酶法成功地从鲍鱼中提取了多糖，并通过动物实验表明鲍鱼多糖具有抗炎、抗氧化、抗疲劳等功效。酶法提取虽然可以使后续的浓缩和脱蛋白工艺更简易、省时，但主要还是用于多糖的提取，且提取条件不易控制、得率偏低。
海产类提取物时常含有一定量的重金属，考虑到食品安全的需要，通常采用离子交换树脂的方法脱除重金属，进行纯化。但与此同时，树脂活化和再生时强酸强碱的使用会造成环境污染。采用电渗析技术去除重金属，仅需使用少量电能，无需强酸强碱，进而杜绝了环境污染，并且节约人力物力。
发明内容
本发明提供了一种鲍鱼多糖的制备工艺。对鲍鱼多糖的制备旨在提高鲍鱼附加值。
本发明的技术方案是：它包括以下步骤：
A）将新鲜鲍鱼肉或脏器洗净后，加入鲍鱼肉或脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍鱼肉或脏器预处理液，进行B步骤；
B）低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液，进行C步骤；
C）将经过高压脉冲电场处理的处理液通过离心或过滤进行固液分离，去除沉淀物，得清液，进行E步骤；
D）将离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通过每膜对的电压为0.6-1.0V，取淡相，进行E步骤；
E）将经过C步骤所得清液或经过D步骤所得淡相浓缩至可溶性固形物含量3%-10%，加入浓缩液体积2.5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。
与现有技术相比，本发明的突出优点是：
本发明利用了高压脉冲电场（PEF）提取技术，能够最大限度地去除蛋白质等非多糖成分，原料的利用率达到最大值；在保证高得率的同时操作均在低温或常温下进行，并有效缩短了鲍鱼多糖的提取时间，从而能充分保持多糖的生物活性，并提高生产效率，减少废物对环境的污染。利用电渗析技术去除重金属，简单、高效、减少环境污染，提高产品质量。
具体实施方式
本发明的鲍鱼多糖的制备工艺主要分为原料处理、提取、纯化和醇沉四个步骤。具体步骤如下：
A）原料处理：在0-30℃的常温或低温下，将新鲜鲍鱼取肉或内脏冲洗干净，去除结缔组织，按照料液重量比1:1-1:5加入蒸馏水，打浆、过20-40目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。
B）提取（可采用以下四种方法中的任意一种方法）：
①在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1.5μs-17μs的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500μs，得PEF处理液。C）步骤：10000-20000g离心，去沉淀，取上清液。
②在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1.5μs-17μs的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500μs。将PEF处理液10000-20000g离心，去沉淀，取上清液。将 HAc溶液环境下配制的浓度为2%-5%的壳聚糖胶体溶液与上清液按照体积比1:10-1:20加入，30-50℃水浴，搅拌10-30min，絮凝蛋白质，充分吸附蛋白质，进行粗蛋白的分离。C）步骤：离心或过滤，取清液。
③在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1.5μs-17μs的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500μs。将PEF处理液10000-20000g离心，去沉淀，取上清液。向上清液中加入中性蛋白酶进行酶解，pH 6-8,加酶量为6.0*104-2.4*105u/kg，37-42℃，搅拌酶解，反应3-4h，100℃迅速灭酶5min；冷却至室温。C）步骤：离心或过滤，取清液。
D）纯化：将经过C步骤离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通过每膜对的电压为0.6-1.0V，取淡相；
E）醇沉：将经过上述C步骤或D步骤所得上清液或淡相浓缩至可溶性固形物含量3%-10%，加入浓缩液体积2.5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。
本发明的技术方案按如下所述实现：
实施例1：
在10℃下，取10kg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:1加蒸馏水、打浆、过40目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15kV/cm,频率3170Hz，脉宽1.5μs，处理时间1500μs，得PEF处理液，在分离因数为15160G的条件下离心，去沉淀，取上清液。将所得上清液浓缩至可溶性固形物含量至6%，按料液体积的2.5倍加入纯度95%以上酒精，经12h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50℃冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末210g。
实施例2：
在20℃下，取10kg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:2加蒸馏水、打浆、过40目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度20kV/cm,频率1000Hz，脉宽2.0μs，处理时间1200μs，得PEF处理液。在分离因数为15160G的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。采用40个膜对的膜堆，通过电压24V,对上清液进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的2.6倍加入纯度85%以上酒精，经11h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50℃冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末194g。样品经检测，重金属含量为7.0ppm，对比实施例1降低三分之二。
实施例3：
在30℃下，取10kg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:4加蒸馏水、打浆、过20目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度25kV/cm,频率1500Hz，脉宽5.0μs，处理时间800μs，得PEF处理液。在分离因数为15160G的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。将质量分数为3%的壳聚糖胶体溶液（体积分数3%的 HAc溶液环境下配制）与PEF处理液体积比1:10加入，并30℃水浴，搅拌、溶解30min，充分吸附絮凝蛋白质。在分离因数为15160G的条件下离心，去沉淀，分离粗蛋白。采用40个膜对的膜堆，通过电压28V,进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的3倍加入纯度75%以上酒精，经10h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50℃冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末175g。样品经检测，重金属含量为5.0ppm，对比实例一降低四分之三。
实施例4：
在1℃下，取10kg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:4加蒸馏水、打浆、过40目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度30kV/cm,频率500Hz，脉宽8.0μs，处理时间500μs，得PEF处理液。在分离因数为15160G的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。向上述处理液中加入中性蛋白酶进行酶解，pH 7,加酶量为6.0*104u/kg，40℃水浴，搅拌酶解，反应3h后，100℃迅速灭酶5min（灭酶工艺为现有技术，可采用温度95-100℃、时间2-10 min内的任意值）。冷却至室温，在分离因数为15160G的条件下离心，取上清液，得鲍鱼多糖酶解液。采用40个膜对的膜堆，通过电压36V,进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的3.5倍加入纯度95%以上酒精，经9h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50℃冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末155g。样品经检测，重金属含量为5.0ppm，对比实例一降低四分之三。
实施例5:
在10℃下，取10kg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:5加蒸馏水、打浆、过40目筛、搅匀，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度35kV/cm,频率200Hz，脉宽17.0μs，处理时间300μs，得PEF处理液。在分离因数为15160G的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。向上述处理液中加入中性蛋白酶进行酶解，pH 7,加酶量为1.2*105u/kg，40℃水浴，搅拌酶解，反应3h后，100℃迅速灭酶5min。冷却至室温，板框过滤，取滤液，得鲍鱼多糖酶解液。采用40个膜对的膜堆，通过电压40V,进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的4.0倍加入纯度95%以上酒精，经8h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经喷雾干燥得鲍鱼多糖粉末148g。样品经检测，重金属含量为5.0ppm，对比实例一降低四分之三。
其它条件与实施例1相同。其分离得到是鲍鱼多糖的量列表如下：
上述五个实施例分离得到的鲍鱼多糖的量列表如下：
| 原料/kg | 鲍鱼多糖/g | 重金属含量/ppm | |
| 实施例1 | 10 | 210 | 18 |
| 实施例2 | 10 | 194 | 7 |
| 实施例3 | 10 | 175 | 5 |
| 实施例4 | 10 | 155 | 5 |
| 实施例5 | 10 | 148 | 5 |
Claims (5)
1.一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：它包括以下步骤：
A）将新鲜鲍鱼肉或脏器洗净后，加入鲍鱼肉或脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍鱼肉或脏器预处理液，进行B步骤；
B）低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液，进行C步骤；
C）将上述步骤的处理液离心或过滤分离，去除沉淀物，得上清液，进行E步骤；
D）将经过C步骤离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通过每膜对的膜堆电压为0.6-1.0V，取淡相，进行E步骤；
E）将经过C步骤所得清液或经过D步骤所得淡相浓缩至可溶性固形物含量3%-10%，加入浓缩液体积2.5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。
2.根据权利要求1所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述的高压脉冲电场处理的方法是：在0-30℃的温度下，将鲍鱼肉或脏器预处理液通过电场强度15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1.5μs-17μs的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500μs。
3.根据权利要求1或2所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：它还包括B1步骤，所述的B1步骤位于B步骤之后、C步骤之前，所述的B1步骤为：向B步骤所得的上清液中加入壳聚糖胶体溶液，将 HAc溶液环境下配制的浓度为2%-5%的壳聚糖胶体溶液与PEF处理液按照体积比1:10-1:20加入，30-50℃水浴，搅拌10-30min，充分吸附絮凝蛋白质；离心或过滤，分离粗蛋白，取清液。
4.根据权利要求1或2所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：它还包括B2步骤，所述的B2步骤位于B步骤之后、C步骤之前，所述的B2步骤为：向B步骤所得的上清液中加入中性蛋白酶进行酶解，在pH 6-8、加酶量为6.0*104-2.4*105u/kg、37-42℃的条件下搅拌酶解，反应3-4h，95℃-100℃迅速灭酶5min；冷却至室温，离心或过滤，取清液，然后再进行C步骤。
5.根据权利1所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：将E步骤所得的鲍鱼多糖经过干燥得鲍鱼多糖粉末。
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Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 350000 FUZHOU, FUJIAN PROVINCE TO: 350002 FUZHOU, FUJIAN PROVINCE |
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Effective date of registration: 20121203 Address after: 350002 School of food science, Fujian Agriculture And Forestry University, Jinshan, Fujian, Fuzhou Patentee after: Chen Jinquan Address before: 350000 College of food science, Fujian Agriculture And Forestry University, Cangshan District, Fujian, Fuzhou Patentee before: Chen Jinquan Patentee before: Zhangzhou Ousheng Food Co., Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180426 Address after: 363500 town four village, Zhaoan County, Zhangzhou City, Fujian Province Patentee after: Zhaoan Hailian Food Co. Ltd. Address before: 350002 Jinshan College of food science, Fujian Agriculture And Forestry University, Fuzhou, Fujian Patentee before: Chen Jinquan |