发明内容
申请人在细辛脑制剂研究中通过大量试验欣喜的发现,通过将氨基酸中的非酸性氨基酸加入到磷脂-胆汁酸盐构成的胶束中能够进一步改善其增溶效果,并且明显改善载药量和稳定性,制备成细辛脑的药物组合物溶液用于解决细辛脑的水溶性相比于现有的技术方案具有优异的效果。与现有技术相比,不需要采用吐温、HS15等药物辅料,避免了这类辅料的副作用和毒性,提高了安全性;在粒径上本发明的药物组合物溶液接近于真溶液,溶液粒径小于50nm,平均粒径在20±5nm,低于现有技术公开的胶束溶液;本发明药物组合物制备方法简单,不需要使用复杂的离心等设备,也没有产生药物损失,原料药利用度高,具有较高的载药量,适合于工业生产;通过常规的制剂方法,本发明药物组合物可以制备为冻干粉针、注射液、浓溶液等药物制剂,其所制备的药物制剂临床使用时溶解于适量的生理盐水、葡萄糖溶液等即可,方便临床使用。
基于上述发现,本发明公开了一种细辛脑的药物组合物,包含细辛脑、磷脂、胆汁酸盐、氨基酸,其中所述氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或一种以上的混合物;进一步的,本发明公开了所述的细辛脑药物组合物的制备方法和制剂用途。
在本发明药物组合物中,细辛脑、磷脂、胆汁酸盐、氨基酸质量比是1∶1-100∶1-150∶1-200;优选的,细辛脑、磷脂、胆汁酸盐、氨基酸质量比是1∶2-30∶2-50∶1-80。
本发明的细辛脑药物组合物溶液中,细辛脑的浓度为0.1~100mg/ml,磷脂的浓度为0.1~500mg/ml,胆汁酸盐浓度为0.5~600mg/ml,氨基酸的浓度为1~500mg/ml。
本发明所用的氨基酸,包括但不限于甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或一种以上的混合物,优选的是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸中的一种或一种以上的混合物。
本发明所用的磷脂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕榈磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰乙醇胺、二硬脂磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰甘油脂、二棕榈磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二亚油酰磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰乙醇胺、二亚油酸甘油脂磷脂酰甘油的一种或一种以上的混合物,优选大豆磷脂、蛋黄磷脂、大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇中的一种或一种以上的混合物,最优选大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺。
本发明所用的胆汁酸盐是胆汁酸成盐后的产物,包括但不限于钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、锌盐、硒盐、铁盐等,优选为钠盐、钾盐或二者的混合物。其中胆汁酸选自游离胆汁酸、结合胆汁酸或二者的混合物,游离胆酸包括胆酸、石胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸等,优选为胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸;结合胆汁酸为上述游离胆汁酸中的羧基与甘氨酸(H2NCH2COOH)或牛磺酸(H2NCH2CH2SO3H)或其他含有氨基的化合物中的氨基形成酰胺键后的产物,优选为甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸。
在深入研究本发明药物组合物性质的基础上,申请人还发现通过向其中加入水溶性的多元醇还可以进一步改善本发明药物组合物中细辛脑的溶解性。本发明所用的多元醇是一类水溶性多元醇,尤其是小分子的水溶性多元醇,包括但不限于丙二醇、丙三醇、乙二醇、聚乙二醇,优选丙二醇。所述的聚乙二醇可以是目前药学上可用的任何水溶性的聚乙二醇,包括但不限于PEG200、PEG400、PEG600、PEG800等,优选PEG400。所用水溶性多元醇用量为细辛脑的0.1-1000。,以质量计。
在上述基础上,结合制剂的需要,本发明药物组合物中还可以加入常见的药用辅料如等张调节剂、稳定剂、抗氧剂、冷冻干燥赋型剂等,这类辅料是本领域技术人员根据制剂常识和不同的制剂需要能够得知的。
所述的等张调节剂包括但不限于0.9%氯化钠溶液、5%葡萄糖溶液,优选采用0.9%氯化钠溶液。
所述的稳定剂包括但不限于亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、叔丁基对羟基茴香醚、二丁基苯酚、没食子酸丙酯、生育酚、甲硫氨酸、盐酸半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、N-乙酰-DL-甲硫氨酸、抗坏血酸棕榈酸酯、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠中的一种或一种以上的混合物,优选亚硫酸钠、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或一种以上的混合物,最优选亚硫酸钠。
所述的抗氧剂包括但不限于亚硫酸钠、无水亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、叔丁基对羟基茴香醚,优选亚硫酸钠、无水亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠中的一种或一种以上的混合物,最优选亚硫酸钠。
所述的冷冻干燥赋型剂包括但不限于甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠、水解明胶、右旋糖酐、蔗糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或一种以上的混合物,优选为甘露醇、葡萄糖或者二者的混合物,最优选甘露醇。
本发明药物组合物可以通过常规的制剂方法制备为细辛脑注射剂,这些注射剂类型可以是但不限于注射液、冻干粉针。根据临床应用的需要,本发明药物组合物溶液尤其可以制备成细辛脑注射液。
将本发明药物组合物经过简单的过滤除菌等工艺即可将其制备为细辛脑注射液,所制备的注射液方便临床应用。
对于本领域技术人员而言,将药物组合物溶液制备为冻干粉针是一种常见的制剂工艺。通过向其中加入冷冻干燥赋形剂,如蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇等中的一种或几种的混合物在合适的冻干条件下可以将本发明药物组合物溶液制备为冻干粉针。
为了大量储存和应用的需要,本发明还公开了一种商业包装,是基于本发明药物组合物获得的。所述的商业包装由两个独立的部分组成,一个独立单元承载药物有效成分的浓缩溶液,另一个独立单元包含与其相应的溶剂。具体到本发明的商业包装,包括两个独立单元,第一单元含有细辛脑、磷脂和胆汁酸盐;第二单元为含有氨基酸的水相溶剂,其中的氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或一种以上的混合物。
进一步的,本发明提供了细辛脑药物组合物的制备方法,包括将细辛脑、磷脂、胆汁酸盐加入到有机溶剂溶解,除掉有机溶剂的步骤,进一步包括在组合物中加入含有氨基酸的水相分散成胶束溶液的步骤。
在本发明的一个实施例中,提供了一种细辛脑注射液的制备方法,包括下述步骤:
①将细辛脑、磷脂、胆汁酸盐溶解于有机溶剂中搅拌,形成澄清溶液,除掉有机溶剂,作为有机相;
②将氨基酸和其他常用辅料溶解于水中,得到水相,所述的水相也可以是不含有其他辅料的氨基酸溶液;
③分别将上述两步骤所得有机相和水相混合均匀,按照注射液的常规制备方法制成细辛脑注射液。
在本发明的另一个实施例中,提供了一种上述细辛脑冻干粉针的制备方法,包括下述步骤:
①将细辛脑、磷脂、胆汁酸盐溶解于有机溶剂中搅拌,形成澄清溶液,除掉有机溶剂,作为有机相;
②将含有冻干赋形剂和氨基酸的辅料溶解于水中,得到水相;
③将上述步骤的有机相和水相混合均匀,按照常规冻干制剂的制备方法制成冻干粉针。
在本发明的另一个实施例中,提供了一种上述细辛脑商业包装的制备方法,包括下述步骤:
①将细辛脑、磷脂、胆汁酸盐溶解于有机溶剂中搅拌,形成澄清溶液,除掉有机溶剂,加入水溶性多元醇作为有机相;
②将氨基酸和其他常用辅料溶解于水中,得到水相,所述的水相也可以是不含有其他辅料的氨基酸溶液;
③将上述有机相和水相分别按照常规注射液的制备方法制成有机相注射用浓溶液和水相注射液,并包装组成商业包装。
尽管申请人在前述内容中指出多元醇的用量以细辛脑质量的0.1-1000倍为佳,但是在此种商业包装的制备方法中,多元醇的功能是作为溶剂而非前述的助溶剂,因此此时所用多元醇的量是不受到上述限制的。
在本发明的另一个实施例中,提供了另一种上述细辛脑商业包装的制备方法,包括下述步骤:
①将细辛脑、磷脂、胆汁酸盐溶解于有机溶剂中搅拌,形成澄清溶液,作为有机相;
②将氨基酸和其他常用辅料溶解于水中,得到水相,所述的水相也可以是不含有其他辅料的氨基酸溶液;
③将上述有机相和水相分别按照常规注射液的制备方法制成有机相注射用浓溶液和水相注射液,并包装组成商业包装。
在上述制备方法中,所述的有机溶剂泛指可以溶解细辛脑、磷脂、胆汁酸盐的有机溶剂,包括但不限于乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮中的一种或一种以上的混合物。细辛脑、磷脂、胆汁酸盐可以以任意顺序加入到有机溶剂中,在本步骤中也可以加入辅料。
在上述制备方法中,水相中加入辅料的顺序不受到限制。
根据已有的研究,细辛脑可以广泛适用于治疗呼吸道感染、气管炎和支气管炎、哮喘、急慢性胆囊炎、胆石症、癫痫发作等疾病,因此显然的,本申请提供了本发明的细辛脑药物组合物在制备治疗上述疾病的细辛脑药物中的用途。
申请人的实验证实,相对于现有技术提供的增溶方案,例如磷脂-胆汁酸混合胶束、蛋白-磷脂胶束系统、HS15-磷脂胶束系统等常见的胶束类型,本发明通过采用将氨基酸加入到磷脂、胆汁酸盐中形成的胶束具有显著的协同作用,对细辛脑的增溶作用更为显著,稳定性也明显增强,并且所得注射液可以达到更好的载药量和药物浓度(现有技术最高仅可以提供7%左右的载药量、5mg/ml的浓度,而本发明的技术方案最高可以提供10%的载药量,10mg/ml的浓度)。
具体实施方式:
下面将通过实施例来说明实现本发明的技术方案,这些实施方式并不对本发明构成进一步限定。本领域技术人员根据现有知识对本发明进行等同替换或相应改进,属于本发明的范围。在下列实施例中,申请人提供了将本发明药物组合物制备成注射制剂(注射液、冻干粉针、商业包装)的方法,仅作为本发明药物组合物应用的一个实例,并不限制本发明仅用于此用途。
同时,申请人在下述实施例中使用的是中试生产级别的原料用量,本领域技术人员根据本发明的精神可以对量进行更改以适用于实验室小试,这属于本发明的范围。同时对于本领域技术人员而言,大生产使用的设备等是显而易见的。
实施例1
(1)将细辛脑、大豆磷脂、鹅去氧胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相。将所得有机相加入已经溶解了丝氨酸的水溶液至1L,即为本发明药物组合物溶液。将所得药物组合物溶液加入0.3%注射用活性碳搅拌三十分钟,脱碳过滤后,0.22um微孔滤膜进行精滤,分装至西林瓶或安剖瓶,共计1000瓶。即得本发明细辛脑注射液,浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
(2)将细辛脑、大豆磷脂、鹅去氧胆酸钠溶解于2L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解。减压回收乙酸乙酯,得到有机相。将所得有机相加入已经溶解了丝氨酸和甘露醇的水溶液至2L,加入0.3%注射用活性碳搅拌三十分钟,脱碳过滤后,0.22um微孔滤膜进行精滤后,分装,采用下述的冻干工艺:
预冻:制品温度下降至-45℃,保温3小时后即可以进行升华干燥;
升华干燥:升华干燥温度控制在-12℃以下;
再干燥:再干燥阶段最高温度控制在35℃,干燥失重应符合规定;
干燥结束后,箱内压胶塞,出箱锁铝盖,成品检验合格后包装即得,共计1000支。
(3)将细辛脑、大豆磷脂、鹅去氧胆酸钠溶解于1L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌至充分溶解。减压回收乙酸乙酯,然后加入丙二醇混合均匀,得到有机相。将丝氨酸溶解于水中,得到水相;有机相和水相分别分装至西林瓶或安剖瓶中,即得本发明细辛脑商业组合包装,共计1000盒。
实施例2
(1)将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨胆酸钠溶解于5L乙醇中,加热至50℃搅拌,至充分溶解。减压回收乙醇,得到有机相,加溶解了半胱胺酸的水至2L,充分搅拌混匀,即为本发明药物组合物溶液。将所得药物组合物加入0.3%注射用活性碳搅拌三十分钟,脱碳过滤后,0.22um微孔滤膜进行精滤,分装至西林瓶或安剖瓶,即得本发明细辛脑注射液,所得注射液浓度为5mg/ml,粒径为23nm共计1000支。
(2)将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨胆酸钠溶解于5L乙醇中,加热至50℃搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相,加溶解了半胱氨酸和乳糖的水至5L,充分搅拌混匀,加入0.3%注射用活性碳搅拌三十分钟,脱碳过滤后,0.22um微孔滤膜进行精滤后,分装,采用下述的冻干工艺:
预冻:制品温度下降至-45℃,保温3小时后即可以进行升华干燥;
升华干燥:升华干燥温度控制在-12℃以下;
再干燥:再干燥阶段最高温度控制在35℃,干燥失重应符合规定;
干燥结束后,箱内压胶塞,出箱锁铝盖,成品检验合格后包装即得,共计1000支。
(3)将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨胆酸钠溶解于1L乙醇中,加热至50℃搅拌,至充分溶解,得到有机相,将半胱氨酸溶解于水中,作为水相。两相分别分装至西林瓶或安剖瓶,即得本发明细辛脑商业包装,共计1000盒。
实施例3
将细辛脑、氢化蛋黄磷脂、熊去氧胆酸钾溶解于5L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将甘氨酸溶解于水中,作为水相(制备冻干粉针时,水相中加入葡萄糖)。
按照实施例1的制备方法,分别制备成注射液、冻干粉针、商业包装。所得注射液浓度为6.67mg/ml,粒径为24nm均为1000支包装。
实施例4
将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨去氧胆酸钠溶解于5L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入PEG400)。将丙氨酸、苏氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中同时溶解有乳糖)。
按照实施例1的制备方法,分别制备得到注射液、冻干粉针、商业包装,均为1000支,注射液浓度3.3mg/ml,粒径为24nm。
实施例5
将细辛脑、去氧胆酸钠、大豆磷脂、聚乙二醇400溶解于10L乙酸乙酯中,搅拌至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相。将甘氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入山梨醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,均为1000支,注射液浓度为1.6mg/ml,粒径为16nm。
实施例6
将细辛脑、二棕榈磷脂酰乙醇胺、牛磺去氧胆酸钾、丙二醇酸溶解于7L乙酸乙酯中,加热至40℃搅拌至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相。将异亮氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入葡萄糖)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为1.6mg/ml,粒径为17nm。
实施例7
将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨去氧胆酸钾溶解于5L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙三醇)。将丙氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入甘露醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为5mg/ml,粒径为23nm。
实施例8
将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨去氧胆酸钾、丙二醇溶解于5L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相。将亮氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入甘露醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为2mg/ml,粒径为17nm。
实施例9
将细辛脑、大豆磷脂、甘氨胆酸钾溶解于8L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇充分混匀)。将色氨酸、苯丙氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入甘露醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为4mg/ml,粒径为23nm。
实施例10
将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨去氧胆酸钾、丙二醇溶解于5L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相。将精氨酸、赖氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入甘露醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为2mg/ml,粒径为17nm。
实施例11
将细辛脑、大豆磷脂、甘氨胆酸钠溶解于10L乙醇中,搅拌至充分溶解,减压回收乙醇,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇充分混匀)。将缬氨酸、甲硫氨酸、组氨酸加入注射用水中至全量作为水相(如果是制备冻干粉针,水相中还加入甘露醇)。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为4mg/ml,粒径为23nm。
实施例12
将细辛脑、大豆鞘磷脂、甘氨胆酸钠溶解于5L乙醇中,加热至50℃搅拌,至充分溶解,加入丙二醇充分混匀。减压回收乙醇,得到有机相,将半胱氨酸加入到注射用水中至全量作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为5mg/ml,粒径为17nm.
实施例13
将细辛脑、蛋黄磷脂、去氧胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将甘氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例14
将细辛脑、磷脂酰胆碱、牛黄胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将丙氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例15
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将缬氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例16
将细辛脑、二棕榈磷脂酰乙醇胺、甘氨鹅去氧胆酸钾溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将亮氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例17
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将异亮氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例18
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将色氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例19
将细辛脑、二棕榈磷脂酰乙醇胺、甘氨鹅去氧胆酸钾溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将苏氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例20
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将天冬氨酸、半胱氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例21
将细辛脑、磷脂酰胆碱、牛黄胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将精氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例22
将细辛脑、二棕榈磷脂酰乙醇胺、甘氨鹅去氧胆酸钾溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将谷氨酰胺加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例23
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将苯丙氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例24
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将甲硫氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例25
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将酪氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例26
将细辛脑、磷脂酰胆碱、牛黄胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将赖氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例27
将细辛脑、磷脂酰甘油、石胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将天冬氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例28
将细辛脑、磷脂酰胆碱、牛黄去氧胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将组氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
实施例29
将细辛脑、磷脂酰甘油、去氧胆酸钠溶解于3L乙酸乙酯中,加热至60℃搅拌,至充分溶解,减压回收乙酸乙酯,得到有机相(制备浓溶液时,有机相中还加入丙二醇)。将半胱氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例1的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为10mg/ml,载药量为10%,粒径为24nm。
实施例30
将细辛脑、蛋黄磷脂、甘氨胆酸钠溶解于5L乙醇中,加热至50℃搅拌,至充分溶解。减压回收乙醇,得到有机相,将甘氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例2的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为5mg/ml,载药量为9.1%,粒径为24nm。
实施例31
将细辛脑、磷脂酰甘油、猪去氧胆酸钠溶解于5L乙酸乙酯中,加热至50℃搅拌,至充分溶解。减压回收乙醇,得到有机相,将甘氨酸加入到注射用水中稀释至全量,作为水相。
按照实施例2的方法分别制备注射液、冻干粉针、商业包装,所得注射液浓度为5mg/ml,载药量为10%,粒径为23nm。
对比实施例1
根据中国专利申请200610092307.7实施例5的内容,申请人制备了下列乳剂。
细辛脑 |
按照40mg/ml投料 |
花生油 |
15%(ml/ml) |
卵磷脂 |
2.0%(g/ml) |
泊洛沙姆 |
4.0%(g/ml) |
PEG400 |
3.0%(g/ml) |
油酸 |
0.6%(g/ml) |
A维生素E |
0.05%(g/ml) |
注射用水 |
85%(ml/ml) |
取油酸和注射水,加热至40-60摄氏度,加入精制的卵磷脂和泊洛沙姆,置组织捣碎机中,高速搅拌形成均匀水相,保温;另取细辛脑和a维生素E,加入到花生油中,加热到40-60摄氏度,形成油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入油相中,置于组织捣碎机中高速搅拌形成均匀初乳,并将其迅速转移至高压匀质机中匀质,收集全部乳液,用氢氧化钠溶液调节PH到7.0。
对比实施例2
根据中国专利申请2009100599248实施例3的内容,申请人制备了下列胶束溶液。
称取50mg的蛋黄卵磷脂,置于50ml圆底烧瓶中,加入8ml猪胆酸钠的氯仿-甲醇等体积比的溶液(10mg/ml)溶解,得到储液1。将10mg的a-细辛脑溶解于1ml氯仿溶液中,得到储液2,将1和2混合并超声分散均匀。旋蒸除去有机溶剂,水浴温度为45度,旋至没有有机溶剂的味道形成一层透明薄膜,再用2.5ml的PH7.4的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液进行分散,得到含有药物混合胶束的分散体溶液,以13000rpm/min离心5min,取上清液得到a-细辛脑混合胶束注射液,再用0.22um微孔滤膜过滤。取滤液得到a-细辛脑混合胶束注射液,浓度为3.67mg/ml,载药量7.0%,经测定其粒径为31nm。
上述技术方案仅适用于实验室小试,在工业生产时将会面临无法应用的难题。例如将其生产规模放大至百公斤级以上,如何对百公斤级以上的溶液进行超声波分散在制剂工业化生产中很难实现,同时对百公斤级以上的溶液进行旋蒸并分散成透明薄膜,在制剂工业生产中也非常难以实现,另外针对上百公斤级以上的溶液进行高达13000rpm/min离心,在药物合成领域固液分离时有用到,但在制剂大生产中该类设备不常见,且在制剂大生产工艺中使用该设备非常不方便。
对比实施例3
根据中国专利申请200810187488实施例62的技术方案,申请人制备了下述细辛脑注射液:
细辛脑 |
0.1g |
多烯磷脂酰胆碱 |
10g |
叔丁醇 |
20ml |
人体血清白蛋白 |
1g |
蔗糖 |
20g |
取处方量的细辛脑、多烯磷脂酰胆碱、叔丁醇,搅拌溶解,加入50%蔗糖溶液40ml充分混匀后,加入20%人体血清白蛋白溶液5ml混匀后用20000psi高压匀质处理一个循环补加注射用水至100ml,0.22um滤膜过滤除菌,然后测定其粒径。经测试其粒径为188nm,浓度为1mg/ml,载药量为1%。
对比实施例4
根据中国专利申请200710012875.3实施例1的技术方案,申请人制备了下述实施例:
称取1g的细辛脑,30g的HS15、7g EPC、0.5g的Cita至于烧杯中,加入浓度为95%的乙醇150ml,在氮气保护下溶解上述物质混匀得到澄清溶液,补加乙醇至200ml,混匀既得。按照临床使用方法,采用5%或10%葡萄糖注射液100ml稀释后,即可自发形成澄清透明的混合胶束溶液.经测定其粒径为34nm,浓度3.3mg/ml,载药量为2.7%。
实施例1~31制备的的注射溶液澄清度判断方法
依据《中国药典2005年版(二部)》附录IX B方法,将将实施例1-31制备的的注射液或将实施例1-31制备的冻干粉针用5ml注射用水振摇溶解后与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中,在浊度标准液制备5分钟后,在暗室内垂直同置于伞棚灯下,照度为1000Lx,从水平方向观察比较,制备的溶液澄清不深于1号浊度标准液。
试验一:室温稳定性观察
取实施例2制备的注射液在室温下贮藏六个月,检测其理化性质等变化,记录为下列表格
表1 室温留样观察结果
时间(月) |
0 |
1 |
2 |
3 |
6 |
外观 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
含量 |
100 |
99.95 |
99.91 |
99.86 |
99.80 |
PH |
9.03 |
9.03 |
9.04 |
9.04 |
9.06 |
由上述数据可见,本发明注射液各项检测指标在室温贮藏过程中几乎没有变化,质量稳定。
在长期放置过程中,本发明注射液溶液澄清,目视观察无乳光。依据《中国药典2005年版(二部)》附录IX B方法,将制备的溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中,在浊度标准液制备5分钟后,在暗室内垂直同置于伞棚灯下,照度为1000Lx,从水平方向观察、比较,制备的溶液澄清,不深于1号浊度标准液。
试验二:粒径检测和澄清度观测
取实施例2、12的注射液和对比实施例1的乳剂、对比实施例2-4的注射液进行了粒径检测,所得结果如下表2。
分别取实施例2、12的注射液和对比实施例1的乳剂、对比实施例2-4的注射液在室温下放置半年,观察其澄清度,结果如下表3.
粒径1为本发明实施例2注射液的粒径检测结果,粒径2为本发明实施12注射液的粒径检测结果,粒径3为对比实施例1乳剂的粒径检测结果,粒径4为对比实施例2的注射液粒径检测结果,粒径5为对比实施例3注射液的粒径检测结果,粒径6为对比实施例4注射液粒径检测结果。
表2 粒径检测结果
样品号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
粒径1(nm) |
22 |
24 |
23 |
24 |
22 |
粒径2(nm) |
17 |
16 |
17 |
17 |
16 |
粒径3(nm) |
132.5 |
135.0 |
142.9 |
150.1 |
173.0 |
粒径4(nm) |
29 |
30 |
29 |
30 |
32 |
粒径5(nm) |
191 |
191 |
188 |
187 |
188 |
粒径6(nm) |
34 |
35 |
35 |
34 |
33 |
表3 澄清度观测结果
时间(月) |
0 |
1 |
2 |
3 |
6 |
实施例2 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
实施例12 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
对比1 |
白色乳液 |
白色乳液 |
析出 |
析出 |
沉淀 |
对比2 |
澄清 |
澄清 |
澄清 |
基本澄清 |
有析出 |
对比3 |
白色乳液 |
白色乳液 |
白色乳液 |
浑浊 |
浑浊 |
对比4 |
澄清 |
澄清 |
基本澄清 |
浑浊 |
浑浊 |
由上述结果可以看出,本发明药物组合物溶液粒径和对比实施例2的溶液粒径均明显低于现有技术中的其他技术方案,在不加入多元醇的情况下本发明技术方案优于单纯的磷脂、胆酸盐系统,加入多元醇以后,本发明方案的技术效果更优。对比实施例3的技术方案由于使用了大分子血清蛋白等物质,导致其所得溶液是一种乳液,粒径较大,高于100nm,长期稳定性明显降低。对比实施例4所得的注射液含有乙醇,不利于临床注射应用,并且其粒径明显大于本发明的技术方案,稳定性也显著低于本发明技术方案。
从以上结果可以看出,本发明的细辛脑注射液,通过氨基酸与磷脂、胆酸盐发挥显著的协同作用,从而具有显著优于现有技术方案的技术效果。
试验三:不同注射液的溶解度和载药量比较
由本发明实施例1-31可以看出,本发明中加入的氨基酸发挥了显著的协同作用,明显提高了溶液的载药量,根据实际制剂需要本发明可以提供最高10%的载药量和10mg/ml的细辛脑浓度。对比实施例1-4提供的制剂最高仅能达到7.0%的载药量。
与对比文件1相比,对比文件1公开的技术方案是一种乳剂,稳定性和水溶性均显著低于本发明公开的技术方案。与之相比,本发明药物组合物溶液溶解度明显优于其技术方案可以提供的溶解性能,具有更好的稳定性,并且具有更高的载药量。
与对比文件2-4相比,本发明药物组合物溶液中通过加入氨基酸从而形成了增溶作用更好的磷脂-氨基酸-胆汁酸盐胶束系统,可以使细辛脑在胶束系统中溶解的更加分散均匀,并且更加稳定,从而有效提高了溶解性能,使所得药物组合物溶液具有更高的细辛脑浓度。
与现有技术相比,本发明胶束溶液可以提供更好的载药量。本发明药物组合物溶液载药量可以达到10%,明显优于现有技术能提供的细辛脑制剂,说明将本发明所述的氨基酸加入到磷脂、胆汁酸盐中具有显著的协同作用。
上述结果也证实,本发明药物组合物注射液制备过程中没有产生细辛脑损失,而对比文件2的制备方法由于需要进行高速离心,难以避免部分细辛脑成分被离心出去从而导致细辛脑药物浓度和载药量的降低。
本发明的注射制剂制备方法采用常规工艺,简单方便,适合工业上进行大规模工业生产。而对比实施例2需要使用超声波分散、高速离心等技术方法,这些方法在实验室中可以制备小样应用,但在大工业生产中没有实用价值,无法对生产进行有效控制和量化。