CN102125059B - 短短小芽孢杆菌tw泡腾颗粒剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂，由短短小芽孢杆菌TW菌株单菌落斑PDA液体培养液与大豆粉、玉米粉、淀粉、蔗糖、酵母粉、碳酸钙和MnSO4加水混合，溶氧100％，pH 7.0-7.2，30℃下发酵所得细菌发酵液与蔗糖、聚乙烯醇、一水柠檬酸、酒石酸钾和碳酸氢钠按比例混合，过筛造粒，经60℃汽流烘干而成，成品活菌总浓度约为1×109～1×1010cfu/g。本剂能有效悬浮于水面，后迅速嘣解，释放活体生防菌，使生防菌附着于水稻植株茎杆与水面接触面，有效切断或空间占领水稻立枯丝核病菌对水稻茎杆的初侵，对水稻纹枯病的防治效果均达80％以上，本泡腾颗粒剂施用方便，成本低，可在常温保存2-3年。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于防治水稻纹枯病的短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒制剂及制备方法。
背景技术
由植物病原真菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的水稻纹枯病(Rice sheathblight)是当前为害我国水稻的主要病害。该病常年可造成5％～45％的产量损失，高发年份减产70％，甚至绝收。目前，水稻纹枯病的防治以农用抗生素井冈霉素为主，但是井冈霉素从70年代广泛使用至今，抗药性增强，用药量也逐步增大，一旦纹枯病爆发很难用井冈霉素在短期内控制纹枯病的危害。特别是目前农民施药方式多采用低水量细喷雾的方法，受药部位主要是水稻的叶面和颈部，而水稻发病多在植株茎杆部位，因而不能达到发病部位，以致对病害的控制效果不理想。近年来，开发出一些生防细菌和真菌制剂用于防治稻病，但现有的真菌制剂难以保存，有效期太短；而且药效难以到达水稻植株茎杆部位，防治效果不够理想。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于防治水稻纹枯病的短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂及其制备方法，能使活体生防菌有效到达水稻发病部位。
短短小芽孢杆菌TW，其拉丁文属名为：Brevibacillus brevis，保藏号为CCTCC NO：M207014(见ZL200710021509.4)。
本发明所述短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂由以下方法制得：
(1)生防活体菌液的获得
挑取在LB固体培养基上培养好的短短小芽孢杆菌TW菌株单菌落斑，于5mlPDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)液体培养液中，30℃振荡培养16h，得一级种子培养液；
将所得一级种子培养液加入400ml PDA液体培养液中，30℃振荡培养16h，得二级种子培养液；
在发酵罐中，将所得二级种子培养液接种于以下发酵培养液中：
大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸钙20g和MnSO41.0g，补水至20L，搅拌混合；
设置发酵条件为溶氧100％，pH 7.0-7.2，30℃下发酵48h，得细菌发酵液；
(2)泡腾制剂的制备
将细菌发酵液与蔗糖按1∶2(ml/g)比例混合均匀，得混合物A；将混合物A与聚乙烯醇、一水柠檬酸、酒石酸钾和碳酸氢钠，按重量比60∶5∶5∶10∶20混合，得混合物B；
将混合物B在球形造粒机KP-350上过筛造粒(筛目大小视产品用途而选择)，经60℃汽流烘1.5-2h，控制水份重量含量为3-5％，得短短小芽孢杆菌TW菌株的泡腾颗粒剂，无菌包装。
本短短小芽孢杆菌TW菌株泡腾颗粒剂能有效悬浮于水面，后迅速嘣解，释放活体生防菌，使生防菌附着于水稻植株茎杆与水面接触面，进而有效切断或空间占领水稻立枯丝核病菌对水稻茎杆的初侵，大大提高了生防微生物的防治效果。
本泡腾颗粒剂在水中的悬浮率为100％，嘣解率为95％，水稻纹枯病的防治效果均达80％以上，显著高于同类活体菌剂，与抗生素农药井冈霉素的防治效果相当，而成本是抗生素制剂的1/4，且泡腾颗粒菌剂施用方便，成本低。本泡腾颗粒剂可在常温下保存2-3年，大大高于当前粉剂或水剂产品的6个月的货架期；
具体实施方式
实施例1短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂的制备
(1)生防活体菌液的获得
用无菌芽签挑取事先在LB固体培养基上划线培养好的短短小芽孢杆菌TW菌株单菌落斑，接种于装有5ml PDA液体培养液的容积为20ml的三角瓶中，于30℃、200rpm条件下振荡培养16h，过夜，将上步所得培养液5ml全部接种于装有400ml PDA培养液的容积为1000ml的三角瓶中，200rpm、30℃条件下振荡培养16h。在容积为30L的发酵罐(型号为镇江东方GUS-30)中，将所得的400ml培养液接种于20L发酵培养液中，发酵培养液中固容物含量为：大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸钙20g、MnSO41.0g，其余为水。设置发酵条件为：溶氧100％，pH 7.0-7.2，搅拌速度为350rpm，发酵温度30℃，发酵时间48h；得细菌发酵液。
(2)泡腾制剂的制备
将发酵好的发酵液按如下方法加工成泡腾颗粒菌剂：先将细菌发酵液与蔗糖按1∶2(ml/g)(V/W)比例混合均匀，得混合物A；再把混合物A、聚乙烯醇、一水柠檬酸、酒石酸钾和碳酸氢钠，按60∶5∶5∶10∶20(W/W)混合，得混合物B；将混合物B在球形造粒机KP-350上过筛造粒(筛目大小视产品用途而选择)，再经60℃汽流烘1.5-2h，水份含量控制在3-5％之间，无菌包装，成品活菌总浓度约为1×109～1×1010cfu/g。
实施例2短短小芽孢杆菌TW泡腾制剂对水稻纹枯病的田间防治试验
本试验地点：江苏省滨海县。
试验地条件：水稻品种为武运粳3号，移栽方式为小苗机插，按常规田间管理。
试验处理方法：于水稻分蘖末期，分为三组(每组小区面积为40m2)：
试验组：每亩用短短小芽孢杆菌TW泡腾制剂500g，与细土20kg混合均匀撒施。
对照药剂组：每亩用5％井冈霉素水剂500ml喷雾防治，亩用水量50kg。
空白对照组：用清水喷雾。
试验设4次重复。30天后进行病害调查，每小区五点取样，共取样25穴。病害严重度分级标准为：
0级：不发病；
1级：基部叶片、叶鞘发病；
2级：倒第三叶以下各叶叶鞘或叶片发病；
3级：倒第二叶以下各叶叶鞘或叶片发病；
4级：剑叶叶鞘或叶片发病。
水稻分蘖结束，计数各定点小区病害调查穴的基本苗数(方法为：水稻分蘖结束，即农事操作的烤田结束后计数)
病情指数＝{∑(各级植株数×级值)/(调查总株数×4)}×100；
防治效果％＝(对照病情指数增长值)-(各处理防治后病情指数值-各处理基数病情指数值)/对照病情指数增长值。
田间试验结果见表1。
表1短短小芽孢杆菌TW泡腾制剂对水稻纹枯病的田间防治试验结果
表1表明亩用短短小芽孢杆菌TW泡腾制剂500g的防治效果，与5％井冈霉素水剂亩用500ml的防治防效相当(无显著差异)。
Claims (3)
1.一种短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂，其特征是由以下方法制得：
(1)生防活体菌液的获得
挑取在LB固体培养基上培养好的短短小芽孢杆菌TW菌株单菌落斑，于5mL的PDA液体培养液中，30℃振荡培养16h，得一级种子培养液；
将所得一级种子培养液加入400mL的PDA液体培养液中，30℃振荡培养16h，得二级种子培养液；
将所得二级种子培养液接种于以下发酵培养液中：
大豆粉100g、玉米粉100g、淀粉100g、蔗糖25g、酵母粉25g、碳酸钙20g和MnSO41.0g，补水至20L，搅拌混合；
设置发酵条件为溶氧100％，pH 7.0-7.2，30℃下发酵48h，得细菌发酵液；
(2)泡腾制剂的制备
将细菌发酵液与蔗糖按mL/g为1∶2比例混合均匀，得混合物A；将混合物A与聚乙烯醇、一水柠檬酸、酒石酸钾和碳酸氢钠，按重量比60∶5∶5∶10∶20混合，得混合物B；
将混合物B在球形造粒机上过筛造粒，经60℃气流烘1.5-2h，得短短小芽孢杆菌TW菌株的泡腾颗粒剂。
2.根据权利要求1所述的短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂，其特征是控制 水分重量含量为3-5％。
3.根据权利要求1所述的短短小芽孢杆菌TW泡腾颗粒剂作为水稻纹枯病防治药物的应用。
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| CN 201010572008 CN102125059B (zh) | 2010-12-03 | 2010-12-03 | 短短小芽孢杆菌tw泡腾颗粒剂及制备方法 |
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| CN 201010572008 CN102125059B (zh) | 2010-12-03 | 2010-12-03 | 短短小芽孢杆菌tw泡腾颗粒剂及制备方法 |
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| CN 201010572008 Active CN102125059B (zh) | 2010-12-03 | 2010-12-03 | 短短小芽孢杆菌tw泡腾颗粒剂及制备方法 |
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