CN102120994A - 一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属生物工程技术应用领域，具体涉及一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。该海藻酸钠/PEG400小珠为白色，直径1-2mm。是腈水解酶产生菌经过液体培养得到菌液，离心分离后所得菌体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与PEG400的共混物，混匀后用注射器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的。本发明为细胞固定化研究提供了一种新思路，具有一定的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。属生物工程技术应用领域。
背景技术
腈类化合物是一类主要的污染物，腈基水解细胞将氰基变成羧基不但能减少环境污染，而且得到的羧酸类物质还是一类十分有用的化合物。因此选择合适的材料得到活性高、稳定性好、能多次重复使用的固定化细胞前景是十分诱人的。固定化细胞与游离细胞比较起来，其活性较低，这是由于随着固定细胞所用材料的不同，存在着或大或小的传质阻力，克服这些传质阻力是提高固定化细胞活性的关键点。因此要采用各种方法来提高所用材料的通透性，如增加材料的孔径以及提高孔隙率等。目前未见过有这方面的专利。
发明内容
本发明的目的是提供一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法。
本发明的技术方案为：腈水解酶产生菌经过液体培养得到菌液，离心分离所得菌体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与PEG400的共混物，混匀后用注射器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的小珠过滤后洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液，晾干后制得。
上述过程中，腈水解酶产生菌液体培养的培养基为磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.1g，氯化铵0.5g，硫酸亚铁0.015g，氯化锰0.01g，氯化钴0.01g，氯化钠0.5g，己内酰胺1.5g，酵母膏5g，蛋白胨5g，甘油5g，加水至500mL，pH7.0，培养条件为，500mL三角瓶装培养基150mL于30℃，200r/min，振荡培养2d。离心分离所得菌体干重0.02g，Tris-Hcl缓冲液pH7.0，海藻酸钠与PEG400的质量分数分别为2.5％和5％，灭菌方法为高压蒸汽灭菌，CaCl2溶液浓度为0.1M，固化温度4℃，固化时间2h，形成的小珠用纱布过滤，用Tris-Hcl缓冲液洗涤。
具体实施方式
下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。
实例一
1.腈水解酶产生菌菌液的制备
液体培养基：磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.1g，氯化铵0.5g，硫酸亚铁0.015g，氯化锰0.01g，氯化钴0.01g，氯化钠0.5g，己内酰胺1.5g，酵母膏5g，蛋白胨5g，甘油5g，加水至500mL，pH7.0；
培养方法：从斜面菌种中用接种环挑取细菌，接种于摇瓶种子培养基中，500mL三角瓶装培养基150mL于30℃，200r/min，振荡培养2d；
2.细胞固定化
将制备的菌液离心分离得到菌体，用蒸馏水洗涤后再离心，取干重0.02g菌体悬浮于pH7.0的Tris-Hcl缓冲液，并加入经高压蒸汽灭菌的质量分数分别为2.5％和5％海藻酸钠与PEG400的共混物，混匀后用注射器平稳注入浓度为0.1MCaCl2溶液中，4℃固化2h，得到的小珠经纱布过滤后用Tris-Hcl缓冲液洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液，晾干后制得。海藻酸钠/PEG400小珠白色，直径1-2mm。
Claims (6)
1.一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于腈水解酶产生菌经过液体培养得到菌液，离心分离所得菌体，悬浮于Tris-Hcl缓冲液，并加入经灭菌的海藻酸钠与PEG400的共混物，混匀后用注射器平稳注入CaCl2溶液中，固化，得到的小珠过滤后洗去表面的未固定的细胞和CaCl2溶液，晾干后制得；海藻酸钠/PEG400小珠白色，直径1-2mm。
2.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的腈水解酶产生菌液体培养的培养基为磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.1g，氯化铵0.5g，硫酸亚铁0.015g，氯化锰0.01g，氯化钴0.01g，氯化钠0.5g，己内酰胺1.5g，酵母膏5g，蛋白胨5g，甘油5g，加水至500mL，pH7.0，培养条件为，500mL三角瓶装培养基150mL于30℃，200r/min，振荡培养2d。
3.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的Tris-Hcl缓冲液pH7.0。
4.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的海藻酸钠与PEG400的质量分数分别为2.5％和5％。
5.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的CaCl2溶液浓度为0.1M。
6.如权利要求1所述的一种腈水解酶产生菌的细胞固定化方法，其特征在于所述的固化温度4℃，固化时间2h。
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| CN103525802A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-01-22 | 东华大学 | 一种肺炎克雷伯菌的固定化小球的制备方法 |
| CN106430626A (zh) * | 2016-11-11 | 2017-02-22 | 上海海洋大学 | 一种促进水产养殖生物絮凝过程建立的方法 |
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2010
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| CN103525802B (zh) * | 2013-10-24 | 2016-07-06 | 东华大学 | 一种肺炎克雷伯菌的固定化小球的制备方法 |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110713 |