CN102108384A - 预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒 - Google Patents

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冯哲民
邹祖烨
贺宪民
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Abstract

本发明公开了一种预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒，包括检测ACE基因上rs4646994号I/D多态性基因型的电泳检测引物对、检测MTHFR基因上rs1801133号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水。

Description

预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒
技术领域
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种预防妊娠高血压的检测试剂盒。
背景技术
围产期保健对降低孕产妇死亡、围产儿死亡以及病残儿的发生、保障母婴安全健康具有重要意义。在围产期期间，孕妇容易发生妊娠高血压综合征。妊娠高血压综合征(简称妊高征)，是孕产妇特有的一种全身性疾病，在我国的发病率为10.32％，多发生在妊娠20周以后至产后2周，临床上主要表现为水肿、高血压、蛋白尿三大症候群，重度患者伴有头痛、眼花、甚至抽搐、昏迷。本病严重威胁母胎健康，是引起孕产妇和围产儿死亡的主要原因。
众多研究发现，该疾病具有较高的遗传倾向。妊娠高血压综合征的遗传易感基因主要为血管紧张素转换酶基因(ACE)和5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)。
血管紧张素转换酶(ACE)基因与围产期妊高征密切相关。ACE基因编码血管紧张素转化酶，在人体内具有多种功能。ACE基因多态性是冠心病、心肌病、高血压等多种围产期疾病发病的独立危险因素。Bedir A在土耳其人群中的研究发现ACE的I/D基因型影响着ACE的活性，其中DD基因型的活性较高而II基因型的活性较低。而在高血压中ACE的血清水平明显比非高血压个体的水平为高，因此认为ACE的DD基因型与高血压相关，并可能是严重高血压的重要标记和高血压的独立危险因子。2006年，陈柏坤等人对92例妊娠高血压综合征患者及85名正常妊娠者的ACE基因多态性进行研究。结果显示，妊娠高血压综合征组ACE基因3种基因型频率分别为DD型44.6％、ID型33.7％、II型21.7％；对照组ACE基因3种基因型频率分别为DD型18.8％、ID型40.0％、II型41.2％。两组的DD基因型及D等位基因频率比较差异有显著性(P＜0.05)。结果显示ACE基因的缺失多态性(DD)可能为妊高征发病的重要遗传因素之一。
5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因与妊娠期高血压综合征密切相关。MTHFR为亚甲基四氢叶酸还原酶蛋白编码基因，主要作用是在叶酸代谢通路中将5，10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸盐。MTHFR基因的缺陷可以导致机体多个必需生化途径的紊乱，包括细胞周期调控、DNA合成和甲基化修饰等，并进而引发各类心脑血管疾病、癌症和神经管缺陷等多种疾病。2006年，王素敏等人对同型半胱氨酸代谢酶-甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性在妊高征发病中的作用地位进行研究。结果显示，病例组MTHFR C677T C/T基因型频率显著高于正常对照组，T等位基因频率显著高于对照组(P＜0.05)。MTHFR C677T基因突变是妊高征发生的遗传风险因素，可作为妊高征预后的检测指标。
发明内容
本发明提供一种预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒。
该试剂盒包括：检测ACE基因上rs4646994号I/D多态性基因型的电泳检测引物对、检测MTHFR基因上rs1801133号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MaCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水。
本试剂盒中所述的特异性引物和荧光探针对于本领域的普通技术人员来说是能够轻易完成设计的，特异性引物和荧光探针对可用常规的DNA合成技术进行合成。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。
实施例  检测试剂盒的使用
步骤1：DNA模板的抽取
用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。
步骤2：荧光定量PCR反应
使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总体积10μl，包含浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液、0.1μl 25mM dNTP混合液、0.6μl 25mMMgCl2溶液、0.025μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有义引物和反义引物各0.225μl、10μM的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各0.25μl，去离子水5.325μl。
在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。
步骤4：基因型分析
根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。
熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因型。

Claims (1)

1.一种预防妊娠高血压综合征的检测试剂盒，包括电泳检测引物对、特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水，其特征在于：电泳检测引物对是针对ACE基因上rs4646994号I/D多态性基因型设计的，特异性引物对及特异性荧光探针对是针对MTHFR基因上rs1801133号SNP多态性基因型设计的。
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