CN102106930B - 具有抗氧化与护肝功能的混合物及其制造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗氧化与护肝功能的混合物及其制造方法,所述混合物包含白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物及荔枝草萃取物。其中,白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物以预定的比例混合而成,该预定的比例可以是15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%。
Description
技术领域
本发明涉及一种混合物,具体地讲,涉及一种具有抗氧化与护肝功能的混合物及其制造方法。
背景技术
现代社会结构已由农业转为以工商业为主体,各产业竞争激烈,人们的精神压力与日俱增,交际应酬场合增加,严重影响人体健康。其中第一个受到威胁的器官就是肝脏,肝病可说是目前台湾的常见病,造成国家、社会与家庭重大的负担。
根据台湾卫生署统计数据显示,公民罹患肝病的比例非常高,慢性肝病和肝硬化在台湾地区十大死因中排名第7位,肝炎更高居男性癌症死因的第1位,女性的第2位(台湾卫生署2005年公布)。因此寻找预防与治疗肝病的药物是刻不容缓的重要任务。
慢性肝炎、肝硬化与肝癌被称为肝病三部曲,肝脏损伤的发生与饮酒、熬夜、外来病毒、化学物质、药物及自体免疫等有关。肝炎将引发肝纤维化现象发生,且肝炎与肝病的发展及愈后有密切的关系,将病变终止于肝炎阶段或逆转至正常是治疗慢性肝炎的主要目的。造成肝炎的机会很多,氧化性损伤是原因之一。已有许多报告指出,自由基的产生会造成肝脏损伤。因此,许多研究使用抗氧化活性物质来预防与治疗肝病,例如甘草及小柴胡汤等,这些抗氧化活性物质已被证实具有抗炎症的功效。
民间常见的中草药包括荔枝草(Salvia plebeia R.Brown)、细本山葡萄(Vitis thunbergii Sieb.et Zucc.)、砂仁(Amomi fructus)、山防风(Echinops grijsii)与白鹤灵芝(Rhinacanthus nasutus L.Kurz)等。目前仅针对单一的中草药进行了研究,例如山防风可以降低肝细胞被四氯化碳(CCl4)损伤时所引发的细胞衰亡与功能障碍的危害。然而,仅将单方的中草药用于体外或体内实验时,其产生的有益效果有限。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明的目的在于提供一种具有抗氧化与护肝功能的混合物及其制造方法,不仅能保证各单方的生理活性,还可以达到不同生理活性的累加的效果。
根据本发明的目的,提供一种具有抗氧化与护肝功能的混合物,所述混合物包含白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物及荔枝草萃取物。其中,白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物以预定的比例混合而成。
其中,所述白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物的预定的比例可以是15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物为粉末状、颗粒状或液体状。
其中,所述混合物可以制成胶囊、片剂、锭剂,或者所述混合物是袋包装或瓶包装。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物还可以包括医药和食品上可接受的赋形剂或添加剂。
其中,所述赋形剂或添加剂可选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂、结合剂以及医药可相容载剂组成的组中。
此外,本发明还提出一种具有抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法,所述方法包括以下步骤:将白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草混合萃取,获得混合萃取液;接着,将混合萃取液干燥处理,以制得粉末状的混合物,其中白鹤灵芝、细本山葡萄与荔枝草以预定的比例混合而成。
其中,所述白鹤灵芝、细本山葡萄与荔枝草的预定的比例可以是15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法还可以包括将白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草分别萃取,以得到白鹤灵芝萃取液、细本山葡萄萃取液及荔枝草萃取液的步骤。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法还可以进一步包括将白鹤灵芝萃取液、细本山葡萄萃取液及荔枝草萃取液分别干燥,进而混合,以得到该混合物的步骤。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法还可以包括加入医药与食品上可接受的赋形剂或添加剂,以将粉末状的混合物制成颗粒状或液体状的步骤。
其中,所述赋形剂或添加剂可选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂、结合剂以及医药可相容载剂组成的组中。
其中,所述颗粒状的混合物可以是胶囊、片剂或锭剂剂型的混合物。
其中,所述液体状的混合物是袋包装或瓶包装。
其中,所述干燥方式可以包括冷冻干燥、真空干燥、烘箱干燥、风干干燥或喷雾干燥。
如上所述,根据本发明的具有抗氧化与护肝功能的混合物及其制造方法,可以具有一个或多个下述优点:
(1)本发明所提供的抗氧化与护肝功能的混合物取自纯天然中草药,易于人体吸收。
(2)服用本发明的混合物,不仅保持各种单方的不同生理活性(例如白鹤灵芝具有抗炎症与抗癌的功能、荔枝草具有护肝的功效,而细本山葡萄可降低小鼠受四氯化碳伤害时的肝细胞坏死、中空、膨大与纤维化现象),还可以达到不同生理活性的累加的效果,所以所述混合物产生的功效远大于仅以单方服用的功效。
(3)通过每日服用本发明的混合物,可以降低肝功能指数并减少肝细胞坏死现象。
(4)通过每日服用本发明的混合物,可以提高肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)与过氧化氢酶(catalase)活性,进而减少脂质过氧化物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)生成。
附图说明
图1是示出本发明的具有抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法的流程图;
图2是示出本发明的混合物对四氯化碳诱发大鼠肝损伤病变的H&E染色图;
图3是示出本发明的混合物对四氯化碳诱发大鼠慢性肝损伤的肝脏中MDA含量的柱状图。
具体实施方式
现在将参照在附图中详细说明本发明的优选实施例。应该理解的是,为了便于解释本发明的技术特征提供了以下各实施例的实验数据,并不意图限制本发明。
实施例1:具有抗氧化与护肝功能的混合物的组成
本发明的具有抗氧化与护肝功能的混合物包含白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物及荔枝草萃取物。其中,白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物以预定的比例混合而成。其中,白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物的预定的比例可以是15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物,可以为粉末状、颗粒状或液体状,并且可以加入医药与食品上可接受的赋形剂或添加剂,例如可选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂、结合剂以及医药可相容载剂组成的组中,进而可以胶囊、片剂、锭剂、袋装制剂、糊剂、干口服补充品、湿口服补充品、干管灌饮食、湿管灌饮食或瓶的形式供消费者服用。其中,医药可相容载剂具有人体可吸收性以及良好的成膜性或杀菌性,因其具有良好的黏性、可压性、流动性或崩解性,所以在医药上可用作药用辅料,此外还可以将其用于食品业上,例如可作为食品的稳定剂或增稠剂。医药可兼容载体的示例如壳聚糖(Chitosan)。此外,还可以将本发明的组合物加入到食品中,进而制作成饮料、汤、膳食补充品、饭替代品及营养棒或营养膏等。此外,还可以将本发明的组合物进一步制作成乳剂或凝胶,作为涂抹于皮肤上的保养品(例如化妆水、乳液、面膜等保养品)。
实施例2:具有抗氧化与护肝功能之混合物之制造方法
图1示出了本发明的具有抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法,所述方法包括以下步骤:(S11)将白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草混合萃取,以得到混合萃取液;(S12)将混合萃取液干燥处理,以制得粉末状的混合物,其中,白鹤灵芝、细本山葡萄与荔枝草以预定的比例混合而成,该预定的比例可以是15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%。
此外,为了得到本发明的混合物,也可将白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草分别萃取,以得到白鹤灵芝萃取液、细本山葡萄萃取液及荔枝草萃取液,然而将这些萃取液分别干燥,然后混合,从而得到该混合物。
其中,本发明的抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法,还可以包括加入赋形剂,以将粉末状的混合物制成颗粒状或液体状的步骤。因为赋形剂或添加剂的组成与实施例1相同,所以不再对其重复描述。颗粒状的混合物可以是胶囊、片剂或锭剂剂型的混合物,液体状的混合物为袋包装或瓶包装。干燥方式可以包括冷冻干燥、真空干燥、烘箱干燥、风干干燥或喷雾干燥。
动物实验设计
将实验动物诱发成肝损伤的方法有很多,例如向实验鼠投喂缺乏胆碱(choline)的饲料或施以四氯化碳(CCl4)等方法,而本发明的实施例是以每次给予按照一定比例混合的CCl4/橄榄油(Olive oil)混合物0.5ml,而使实验动物产生肝脏损伤的。此外,本发明的实施例以雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠为实验动物,并将实验动物随机分为五组,每组10只,分别为对照组、四氯化碳组、水飞蓟组(Silymarin,具有保护肝脏的功能,作为阳性对照组)、第一剂量组与第二剂量组,并且除了对照组外,其它四组均以四氯化碳诱发大鼠肝脏损伤。其中,对照组与四氯化碳组以管喂方式给予生理食盐水作为安慰剂,该安慰剂的剂量为以体重计1ml/100g,而水飞蓟组则管喂水飞蓟,水飞蓟的剂量为以体重计0.2g/kg。第一剂量组与第二剂量组是根据摄入本发明的混合物的剂量所划分的组,其剂量分别为以体重计0.167g/kg与0.5g/kg,并且也是以管喂方式摄入的,上述详细分组如下表1所示:
表1 各组的摄入物及其剂量
组别名称 | 摄入物及其剂量(以体重计) |
对照组 | 生理食盐水1ml/0.1kg |
四氯化碳组 | 生理食盐水1ml/0.1kg |
水飞蓟组 | 水飞蓟0.2g/kg |
第一剂量组 | 本发明的混合物0.167g/kg |
第二剂量组 | 本发明的混合物0.50g/kg |
肝功能指数
利用肝内酶活性变化作为动物体肝细胞毒性的基本指标。其中天门冬胺酸转胺酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)大量存在于肝细胞中。因为当肝细胞受到损伤破裂时,AST与ALT会释放到血液中,所以通过分析血清中AST及ALT的含量,便可以知道细胞是否受到伤害。因此,血清中AST与ALT活性的变化常作为评估生物体内细胞完整性及疾病症状的指标。表2和表3分别为大鼠喂养期间第一及第八周的血清生化值AST和ALT分析结果。第一周结果显示本发明的混合物的第二剂量组具有降低ALT的作用。第八周时,各实验组与四氯化碳组的AST与ALT的分析结果比较显示,本发明的混合物的第一与第二剂量组的AST和ALT低于四氯化碳组。换言之,本发明的混合物具有降低因四氯化碳引起的AST与ALT上升的作用。
表2 第一周时各组的肝功能指数变化
表3 第八周时各组的肝功能指数变化
组织病理学
体重改变是一个直接并容易获得的毒性表征,当毒物(例如四氯化碳)进入体内,会使生物体产生生理变化,造成食欲减退而体重增加程度变缓、体重下降与肝肿胀的情形。以本发明的混合物来管喂四氯化碳诱发慢性肝损伤的大鼠,对实验大鼠的增加体重、起始体重、最终体重及每日增加体重影响的结果进行比较分析发现,第一剂量组与第二剂量组并无差异。表4为大鼠肝脏绝对和相对重量,显示第一剂量组的相对重量低于四氯化碳组的相对重量。当大鼠的肝脏病变时,会出现肝肿大的现象,肝肿大则造成肝脏重量变重,且脂肪肝也可能造成肝脏重量较重。四氯化碳组的大鼠的肝脏相对重量高于对照组,表示四氯碳组的大鼠已出现肝脏病变的情形。而喂食本发明的混合物后,相对于四氯化碳组的大鼠的肝脏相对重量,可发现第一剂量组的大鼠的肝脏相对重量降低(减少),因为喂食本发明的混合物后,肝肿大的情形减缓,进而反应在肝脏重量上。因此,显示本发明的混合物具有降低四氯化碳对肝脏毒性伤害的潜力。
表4 本发明的混合物对四氯化碳诱发慢性肝损伤的大鼠肝脏绝对与相对重量
图2是示出本发明的混合物对四氯化碳诱发大鼠肝损伤病变的H&E染色图。对照组的肝细胞(hepatocytes)具完整性,细胞与肝窦(sinusoid)均从中央静脉成向心状分布,细胞核完整且细胞有明显边界,无肝细胞病变产生,如图2(A)所示。四氯化碳组、水飞蓟组与第一剂量组的肝表面凹凸不平(concave),肝窦由于肝细胞肿胀压迫变小,如图2(B)、图2(C)和图2(D)所示。中央区(central zone)及中央静脉区(midzone zone)呈现中度且弥漫性肝细胞混浊肿胀,具有明显的细胞质空泡化(cytoplasmic vacuolization),脂肪病变及细胞坏死等现象。第二剂量组的肝组织切片中央区(central zone)和中央静脉区呈现轻度弥漫性肝细胞混浊肿胀,具有明显细胞质空泡化,脂肪病变及轻度细胞坏死等现象,如图2(E)所示。
根据H&E染色与Masson染色肝组织切片的分析结果显示,对照组没有明显病理变化,四氯化碳组的组织空泡化与肝细胞坏死平均病理积分为3.0±0和2.1±0.3,且其肝纤维化平均病理积分为3.5±0.7。水飞蓟组与第一剂量组的组织显微病变,主要造成轻微等级至严重等级的肝脏肿胀空泡化、肝细胞坏死及纤维化等病变,这两者与四氯化碳组的平均病理积分相比较均无差异。而第二剂量组的组织显微病变,主要造成轻微等级至严重等级的肝脏肿胀空泡化及轻度至中度肝细胞坏死病变,平均病理分别为3.3±0.8及1.6±0.5,同时出现轻度至严重等级肝纤维化,平均病理积分为3.2±0.9,故其结果低于四氯化碳组,如下表5所示:
表5 本发明的混合物对四氯化碳诱发肝损伤的组织病理评估
抗氧化物与抗氧化酶活性
生物体或细胞模式的抗氧化防御系统中,谷胱甘肽氧化还原循环(GSHredox cycle)是动物细胞特有的抗氧化防御系统,由谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GPX)、谷胱甘肽转移酶(GST)及谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GRd)三种抗氧化酶与谷胱甘肽(glutathione,GSH)构成,扮演着保护细胞组织与维持其正常的功能。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)在动物体内主要作用是将超氧阴离子(O2 -)催化为过氧化氢(H2O2)和氧气(O2),过氧化氢再经过氧化氢酶(catalase)催化为水和氧气,降低超氧阴离子对动物体伤害,因此通过分析抗氧化酶活性能有效地监控活体内的氧化平衡状态。而四氯化碳在体内的代谢产物会抑制体内许多酶活性,消耗体内抗氧化物质含量,造成生物体抗氧化能力明显下降。本实施例结果发现四氯化碳诱导大鼠慢性肝损伤后,同样造成大鼠肝脏抗氧化酶活性显著下降。
过氧化氢酶活性分析显示,对照组(93nmol/分钟/mg蛋白质)高于四氯化碳组(58nmol/分钟/mg蛋白质)的过氧化氢酶活性。显示摄入本实验的混合物的第一剂量与第二剂量提高过氧化氢酶活性,如下表6所示:
表6 本发明的混合物对四氯化碳诱导慢性肝损伤的大鼠肝脏过氧化氢酶活性的影响
组别名称 | 过氧化氢酶活性(nmol/分钟/mg蛋白质)(数值以平均值±标准差表示) |
对照组 | 93±14 |
四氯化碳组 | 58±8 |
水飞蓟组 | 62±6 |
第一剂量组 | 68±19 |
第二剂量组 | 84±11 |
此外,谷胱甘肽过氧化酶活性方面,对照组活性(73nmol/分钟/mg蛋白质)高于四氯化碳组(52nmol/分钟/mg蛋白质)的谷胱甘肽过氧化酶活性。且第二剂量组高于四氯化碳组,如下表7所示:
表7 本发明的混合物对四氯化碳诱导慢性肝损伤的大鼠肝脏谷胱甘肽过氧化酶活性的影响
组别名称 | 麸胱甘肽过氧化酶活性(nmol/分钟/mg蛋白质)(数值以平均值±标准差表示) |
对照组 | 73±4 |
四氯化碳组 | 52±11 |
水飞蓟组 | 58±9 |
第一剂量组 | 57±8 |
第二剂量组 | 65±11 |
综上所述,本发明的混合物具有提高肝脏中过氧化氢酶与谷胱甘肽过氧化酶活性的作用。
氧化伤害评估
自由基攻击细胞膜上的磷脂质(phospholipids),会造成细胞膜上不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,产生过氧化脂质(phosphatidylcholine hydroxide,PCOOH),并转变为二次代谢产物丙二醛(malondialdehyde,MDA),因此MDA常被用来作为评估脂质过氧化的指标。本实施例的摄入本实验的混合物达八周后对四氯化碳诱导大鼠肝脏脂质过氧化的影响的结果显示,第一剂量组和第二剂量组的MDA含量低于四氯化碳组,如图3所示。证实摄入大鼠本实验的混合物能有效抑制四氯化碳所引起的脂质过氧化作用。
综上所述,服用本发明的混合物可以降低血清中AST与ALT,并可减少肝脏损伤,包括肝细胞坏死现象。此外,可以提高肝脏中抗氧化酶(过氧化氢酶与谷胱甘肽过氧化酶)的活性,进而减少脂质过氧化物MDA含量,所以具有抗氧化及护肝的功效。
在上面描述了本发明的示例性实施例,但是应该理解,在不脱离由权利要求书的范围的情况下,可以做出各种形式和细节上的改变。
Claims (13)
1.一种具有抗氧化与护肝功能的混合物,所述混合物的原料药为白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物及荔枝草萃取物;
其中,所述白鹤灵芝萃取物、细本山葡萄萃取物与荔枝草萃取物以预定的比例15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%混合而成。
2.如权利要求1所述的具有抗氧化与护肝功能的混合物,其中,所述混合物为粉末状、颗粒状或液体状。
3.如权利要求2所述的具有抗氧化与护肝功能的混合物,其中,所述混合物可以制成胶囊、片剂、锭剂,或者所述混合物为袋包装或瓶包装。
4.如权利要求1所述的具有抗氧化与护肝功能的混合物,其中,所述混合物还包括医药与食品上可接受的赋形剂或添加剂。
5.如权利要求4所述的具有抗氧化与护肝功能的混合物,其中,所述赋形剂或所述添加剂选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂以及结合剂所组成的群组中。
6.一种具有抗氧化与护肝功能的混合物的制造方法,所述方法包括以下步骤:
将白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草混合萃取,以得到混合萃取液;
将所述混合萃取液干燥处理,以制得粉末状的所述混合物;
其中,所述白鹤灵芝、细本山葡萄与荔枝草以预定的比例15-60wt%∶15-60wt%∶15-60wt%混合而成。
7.如权利要求6所述的方法,其中,所述方法还包括将所述白鹤灵芝、细本山葡萄及荔枝草分别萃取,以得到白鹤灵芝萃取液、细本山葡萄萃取液及荔枝草萃取液的步骤。
8.如权利要求7所述的方法,其中,所述方法还包括将所述白鹤灵芝萃取液、细本山葡萄萃取液及荔枝草萃取液分别干燥,进而混合,以得到所述混合物的步骤。
9.如权利要求6所述的方法,其中,所述方法还包括加入医药与食品上可接受的赋形剂或添加剂,以将粉末状的所述混合物制成颗粒状或液体状混合物的步骤。
10.如权利要求9所述的方法,其中,所述赋形剂或所述添加剂选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂以及结合剂所组成的群组中。
11.如权利要求10所述的方法,其中,所述颗粒状混合物是胶囊、片剂或锭剂剂型。
12.如权利要求11所述的方法,其中,所述液体状混合物是袋包装或瓶包装。
13.如权利要求6所述的方法,其中,所述干燥方式包括冷冻干燥、真空干燥、烘箱干燥、风干干燥或喷雾干燥。
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