CN102105794B - 移植物衰竭和死亡的标志物 - Google Patents
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Abstract
本发明的主题是用于器官移植后移植物衰竭和/或死亡的生物标志物。发现了降钙素原是用于对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导的有用标志物。
Description
发明领域
本发明的主题是器官移植后移植物衰竭和/或死亡的生物标志物。发现了降钙素原(PCT)是对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导的有用标志物。
发明背景
肾脏移植后的慢性移植物失功(CTD)的特征是肾功能减退和蛋白尿。
肾脏移植后移植物的一年存活率已经稳步从1970年代的约40%增加到目前的90%以上(Merville P.Combating chronic renal allograftdysfunction:optimal immunosuppressive regimens.(与慢性肾脏同种异体移植物失功抗争:最佳免疫抑制方案),Drugs 2005;65(5):615-631;http://www.unos.org 2008,Ref Type:Generic)。但是,移植物的长期存活率没能与这种增加平行。所有尸体肾同种异体移植物中大约一半在移植后10-12年内丧失(Hariharan S,Johnson C,Bresnahan B,Taranto S,Mclntosh M,Stablein D.Improved Graft Survival after RenalTransplantation in the United States,1988to 1996.(1988年到1996年美国肾脏移植后移植物存活率的改善),N Engl J Med 2000;342(9):605-612)。一个主要原因是与慢性移植物失功(CTD)相关的后期同种异体移植物衰竭(Kreis HA,Ponticelli C.Causes of late renalallograft loss:chronic allograft dysfunction,death,and other factors.(后期肾同种异体移植物丧失的原因:慢性同种异体移植物失功、死亡和其他因素)Transplantation 2001;71(11Suppl):SS5-SS9)。目前,没有好的生物标志物能够预测CTD的发展(Marsden PA.Predicting outcomesafter renal transplantation-new tools and old tools.(预测肾脏移植后的结果——新工具和旧工具),N Engl J Med 2003;349(2):182-184)。
在肾脏移植界中存在一种新兴的观念,即CTD的发病机理包括炎症(Kreis HA,Ponticelli C.Causes of late renal allograft loss:chronicallograft dysfunction,death,and other factors.(后期同种异体移植物丧失的原因,慢性同种异体移植物失功、死亡和其他因素)Transplantation2001;71(11Suppl):SS5-SS9;Vazquez MA,Jeyarajah DR,Kielar ML,LuCY.Long-term outcomes of renal transplantation:a result of the originalendowment of the donor kidney and the inflammatory response to bothalloantigens and injury.(肾脏移植的长期后果:供体肾脏的原始素质和对同种异体抗原与损伤二者的炎性反应的结果),Curr Opin NephrolHypertens 2000;9(6):643-648)。已经提出降钙素原(PCT)作为细菌感染和败血症的生物标志物(Assicot M,Gendrel D,Carsin H,RaymondJ,Guilbaud J,Bohuon C.High serum procalcitonin concentrations inpatients with sepsis and infection.(患有败血症和感染的患者中的高血清降钙素原浓度),Lancet 1993;341(8844):515-518;Becker KL,Nylen ES,White JC,Muller B,Snider RH,Jr.Clinical review 167:Procalcitonin andthe calcitonin gene family of peptides in inflammation,infection,andsepsis:a journey from calcitonin back to its precursors.(临床综述167:炎症、感染和败血症中的降钙素原和降钙素基因家族的肽:从降钙素回到其前体的旅程),J Clin Endocrinol Metab 2004;89(4):1512-1525)。最近,已经发现由感染组织中活化的巨噬细胞而不是外周血单核细胞所刺激的实质细胞,是败血症期间非常高的循环PCT浓度的原因(Linscheid P,Seboek D,Schaer DJ,Zulewski H,Keller U,Muller B.Expression and secretion of procalcitonin and calcitonin gene-relatedpeptide by adherent monocytes and by macrophage-activated adipocytes.(降钙素原和降钙素基因相关肽被黏附性单核细胞和被巨噬细胞激活的脂肪细胞表达和分泌),Crit Care Med 2004;32(8):1715-1721)。动物和人类研究目前已经显示,在败血症中,实质细胞(包括肾、肝、肺、肌肉和脂肪细胞)是循环PCT的主要来源(Linscheid P,Seboek D,Schaer DJ,Zulewski H,Keller U,Muller B.Expression and secretion ofprocalcitonin and calcitonin gene-related peptide by adherent monocytesand by macrophage-activated adipocytes.(降钙素原和降钙素基因相关肽被黏附性单核细胞和被巨噬细胞激活的脂肪细胞表达和分泌),CritCare Med 2004;32(8):1715-1721;Linscheid P,Seboek D,Nylen ES等,In vitro and in vivo calcitonin I gene expression in parenchymal cells:anovel product of human adipose tissue.(在实质细胞中降钙素I基因的体外和体内表达:人类脂肪组织的新产物),Endocrinology 2003;144(12):5578-5584;Muller B,White JC,Nylen ES,Snider RH,Becker KL,Habener JF.Ubiquitous expression of the caldtonin-i gene in multipletissues in response to sepsis.(降钙素-i基因在多种组织中对败血症做出响应的遍在表达),J Clin Endocrinol Metab 2001;86(1):396-404)。
令人吃惊地发现,PCT是用于后期移植物衰竭和/或死亡的独立的预测物。因此,它是用于预测移植物丧失(GL)和/或死亡的有希望的新的生物标志物。
发明描述
本发明的主题是对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导的方法,所述方法包括在从所述对象获得的样品中测定降钙素原或其至少12个氨基酸的片段。
在优选实施方案中,本发明涉及对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导的方法,所述方法包括在从所述对象获得的样品中测定降钙素原或其至少12个氨基酸的片段,其中与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的降钙素原水平超过截止值,所述截止值低于0.1ng/mL、优选低于0.08ng/mL、更优选低于0.05ng/mL、最优选低于0.025ng/mL。
因此,本发明的方法使用了灵敏的分析法来检测低浓度的降钙素原,使得能够使用低的指示性阈值水平。
在本发明的情形中,术语“风险分层”是指为个体经历某些不利事件的可能性进行赋值。由此,优选可以将个体计入某个风险类别中,其中类别包含例如高风险对低风险,或基于数值的风险类别,例如风险类别1、2、3等。
当在本文中在PCT的情形中提到时,术语“片段”是指可以从PCT产生的较小的肽,因此其包含PCT的部分序列。所述片段可以从PCT通过其一个或多个肽键的皂化产生。
在本发明的优选实施方案中,对象已接受肾脏移植。因此,本发明的主题是对已接受肾移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导的方法,所述方法包括在从所述对象获得的样品中测定降钙素原或其至少12个氨基酸的片段。
在另一个优选实施方案中,对象未患选自下列的病症:感染或升级形式的感染例如败血症、重症败血症或败血症性休克。这意味着对象不处于需要抗微生物治疗的病症中。
在本发明的优选实施方案中,对象的降钙素原水平不再受到由器官移植引起的手术创伤的影响。已知经历大手术的对象会有几天具有升高的PCT水平。因此,在优选实施方案中,在手术后至少半天后、优选至少一天后、更优选至少两天后、更加优选至少三天后、更加优选至少四天后、更加优选至少五天后、更加优选至少六天后、更加优选至少一周后,从已接受器官移植的对象获取样品。因此,根据本发明的方法,优选在移植后不早于一周、优选在移植后一个月或以后从对象获取样品。在特别的实施方案中,可以在移植后一年或以后获取样品。
根据本发明,所述样品选自血浆样品、血清样品、血液样品或其级份、淋巴液样品、尿液样品或任何上面提到的样品的提取物。
本发明的方法是用于预测长期移植物衰竭的方法,其中长期意味着超过一年、优选长达5年的时间。本发明的方法也是用于预测短期移植物衰竭的方法,其中短期意味着一周到最多一年的时间。,
本发明还包含了用于预测中期或长期移植物衰竭的方法,其中长期意味着超过一年、优选长达5年的时间,中期意味着移植后两个月到一年之间,例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月的时间。
在本发明的方法的优选实施方案中,降钙素原的水平优选可以通过可选自下列可选方案的方法,与移植物衰竭和/或死亡的预测或风险分层相关联:
●与预定样品集中降钙素原水平的中位数相关联,
●与预定样品集中降钙素原水平的分位数(例如三分位数)相关联,以及
●与数学模型例如Cox回归相关联。
本技术领域的专业人员将会理解,这不是方法的穷举。本技术领域的专业人员可能知道其他的方法。
根据本发明,与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的降钙素原水平高于正常群体的中位数水平。以前,已经确定了正常群体的中位数水平是0.0127ng/mL(Morgenthaler NG,Struck J,Fischer-Schulz C,Seidel-Mueller E,Beier W,Bergmann A.Detection of procalcitonin(PCT)in healthy controls and patients with local infection by a sensitive ILMA.(通过灵敏的ILMA在健康对照和局部感染患者中检测降钙素原(PCT)),Clin Lab.2002;48(5-6):263-70.)。
优选,与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的降钙素原水平高于正常群体的中位数(0.0127ng/mL)但是低于0.1ng/mL、优选低于0.08ng/mL、更优选低于0.05ng/mL、最优选低于0.025ng/mL。这意味着患者样品中降钙素原水平超出时将指示患者移植物衰竭和/或死亡的风险增加的优选截止值低于0.1ng/mL、优选低于0.08ng/mL、更优选低于0.05ng/mL、最优选低于0.025ng/mL,但是高于正常群体的中位数(0.0127ng/mL)。高于0.1ng/mL或0.25ng/mL的降钙素原浓度被用作截止值来诊断需要抗生素治疗的细菌感染(Christ-Crain M,Jaccard-Stolz D,Bingisser R,Gencay MM,Huber PR,Tamm M,Müller B.Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use and outcome inlower respiratory tract infections:cluster-randomised,single-blindedintervention trial.(降钙素原指导的治疗对下呼吸道感染中抗生素使用和结果的影响:群体随机的单盲干预试验),Lancet 2004Feb 21;363(9409):600-7)。通过优化灵敏度和特异性的ROC分析所确定的用于预测移植物衰竭的风险增加的适合截止值是0.029ng/mL,而对于死亡是0.028ng/mL(表4)。本技术领域的专业人员了解准确的截止值取决于几个因素。因此,本技术领域的专业人员知道如何为降钙素原准确定义单一的分界浓度,高于该浓度与这种风险增加相关,因为截止值取决于测试的校准和用于描述这种相关性的数学模型类型;即,如果将靶群体按照降钙素原浓度分成两个同样大小的亚组,这样得到的中位数水平可能代表了有用的截止值;或者,同样的群体可以被分成三个同样大小的亚组,将最高与中间三分位分开的降钙素原浓度可能代表有用的截止值,但是该值与代表群体的中位数水平的截止值不同。其他数学模型可以用其他有用的降钙素原分界浓度来完成。
在本发明的方法的优选实施方案中,附加地测定和使用了与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的一种或多种其他标志物或临床参数的水平。
在优选实施方案中,所述一种或多种临床参数选自:年龄,性别,既往病史特别是糖尿病,体重指数,遗传易感性/家族史,种族背景,影响所述倾向性的习惯例如吸烟、饮酒、饮食。
在优选实施方案中,所述一种或多种其他标志物选自:肾功能的标志物,炎症标志物以及与心血管和渗透调节相关的标志物。
在优选实施方案中,所述肾功能的标志物选自肌酸酐清除率、蛋白尿和脂类标志物。脂类标志物可以是HDL和/或甘油三酯。
在优选实施方案中,所述炎症标志物是C反应蛋白。
在优选实施方案中,所述与心血管和渗透调节相关的标志物选自proBNP或包括片段BNP和片段NT-proBNP的proBNP至少12个氨基酸的片段,proANP或包括片段NT-proANP和片段MR-proANP的proANP至少12个氨基酸的片段,肾上腺髓质素原或包括片段肾上腺髓质素、片段PAMP和片段MR-proADM的肾上腺髓质素原至少12个氨基酸的片段,内皮素原或包括片段内皮素-1、片段大内皮素-1、片段CT-proET-1和片段NT-proET-1的内皮素原至少12个氨基酸的片段,血管加压素原或包括片段血管加压素、片段和肽素和片段神经垂体素运载蛋白2的血管加压素原至少8个氨基酸的片段。
本发明的主题是方法的一种实施方案,所述方法包含下列步骤:
●在肾脏移植后从对象获取样品,
●在从所述对象获得的样品中测定降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平,以及
●将降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平与预后相关联。
在本发明的方法的优选实施方案中,降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平使用诊断分析法测定。
在优选实施方案中,测定稳态的循环PCT浓度。
在本发明的情况中使用的诊断分析法可以是在诊断学领域中应用的任何类型,包括但不限于基于酶反应、发光特别是荧光或放射性化学物质的分析方法。优选的检测方法包含快速测试格式包括免疫层析、、放射免疫分析、化学发光和荧光免疫分析、免疫印迹分析、酶联免疫分析(ELISA)、基于Luminex的珠子阵列和蛋白微阵列分析。分析的类型可以进一步是基于微量滴定板、基于芯片、基于珠子的,其中生物标志物蛋白可以附着于表面或在溶液中。分析法可以是均相或非均相分析、三明治分析、竞争性和非竞争性分析。(《免疫分析手册》(The Immunoassay Handbook),David Wild主编,Elsevier LTD,Oxford;第三版(2005年5月),ISBN-13:978-0080445267;Hultschig C等,Curr Opin Chem Biol.2006Feb;10(1):4-10.PMID:16376134)。
在本发明的情况中,在诊断分析法中使用的捕获分子可以选自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白、抗体、肽或糖蛋白。优选,捕获分子是抗体,包括其与靶具有足够特异性的片段,并包括重组抗体,以及所述抗体的化学和/或生物化学修饰的衍生物或其源自于变体链的长度为至少12个氨基酸的片段。
根据特别优选的实施方案,用于降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的诊断分析是超灵敏的,并具有低于0.1ng/mL、优选低于0.08ng/mL、更优选低于0.05ng/mL、最优选低于0.025ng/mL的功能分析灵敏度(被定义为以20%的最大分析间变异系数(CV)所能测定的最小浓度)。
本发明的另一个主题是测量降钙素原或其至少12个氨基酸的片段在对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导中的用途。
本发明的另一个主题是分析灵敏度(被定义为以20%的最大分析间CV所能测定的最小浓度)低于0.1ng/mL、更优选低于0.05ng/mL、最优选低于0.025ng/mL的免疫分析在对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层、以及对这样的对象进行监测和治疗指导中的用途。
本文中使用的术语例如“标志物”、“预后标志物”或“生物标志物”或“生物学标志物”可以互换使用,并涉及可测量和可定量的生物学参数(例如特定酶的浓度、特定激素的浓度、群体中特定基因表型的分布、生物学物质的存在),所述参数可以充当与健康和生理相关的评估例如疾病风险、精神病疾患、环境暴露及其影响、疾病诊断、代谢过程、物质滥用、妊娠、细胞系发育、流行病学研究等的指标。此外,生物标志物被定义为作为正常生物学过程、病理过程或对治疗性干预的药理学响应的指示物被客观测量和评估的特征。生物标志物可以在生物样品上测量(作为血液、尿液或组织测试),它可以是从人体获得的记录(血压、ECG或动态心电图),或者它可以是成像测试(超声心动图或CT扫描)(Vasan等,2006,Circulation 113:2335-2362)。
生物标志物可以指示各种各样的健康或疾病特征,包括暴露于环境因子的水平或类型、遗传易感性、对暴露的遗传响应、亚临床或临床疾病的生物标志物或对疗法响应的指示物。因此,考虑生物标志物的一种简单化的方式是作为疾病特质(风险因子或风险生物标志物)、疾病状态(临床前或临床)或疾病速率(发展)的指示物。因此,生物标志物可以分类成先行生物标志物(鉴定发生疾病的风险)、筛选生物标志物(筛选亚临床疾病)、诊断生物标志物(识别外显的疾病)、分级生物标志物(对疾病严重性进行分类)或预后生物标志物(预测将来的疾病过程,包括复发和对疗法的响应以及监测疗法的功效)。生物标志物也可以用作替代终点。替代终点是在临床试验中可以用作结果来代替真实目标结果的测量以评估疗法的安全性和有效性的终点。其背后的原理是替代终点的变化密切追随目标结果的改变。替代终点的优点在于与需要大型临床试验进行评估的终点例如发病率和死亡率相比,它们可以在较短的时限内并使用较少的费用来收集。替代终点的其他价值包括下述事实,即它们与更远期的临床事件相比,更接近于目标暴露/干预并可以更容易地进行因果关联。替代终点的重要缺点在于如果目标临床结果受到众多因素(除了替代终点之外)的影响,残余混杂可能降低替代终点的有效性。已经提出,如果替代终点能够解释暴露或干预对目标结果的影响的至少50%,其有效性较高。例如,生物标志物可以是蛋白、肽或核酸分子。
优选的分子标志物是肾功能的标志物,例如肌酸酐清除率、蛋白尿和脂类标志物例如总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯,炎症标志物例如C反应蛋白,或与心血管和渗透调节相关的标志物例如ANP、BNP、肾上腺髓质素、内皮素-1、血管加压素,包括它们相应的前体及其片段。在这里,肌酸酐清除率、也称为肌酸酐清除速率(CCr),是单位时间内肌酸酐被清除的血浆的体积。蛋白尿意味着在尿液中存在过量(即超过2mg/ml白蛋白和/或肌酸酐)的血清蛋白。
在本发明的情形中,术语“正常群体”是指全部群体的健康部分。就此而言,健康个体是没有处于本文提到的标志物之一的水平被改变或以其它方式受影响的病症下的个体。
在本发明的情形中,术语“移植物衰竭”是指被移植的组织的排斥、衰竭或以其它方式失功,其中被移植的组织是例如手术移植的组织。
在本发明的情形中,例如“降钙素原水平不再受到由器官移植造成的手术创伤的影响”的表述是指一种状态,其中在移植治疗的正常过程中,在移植患者中,典型在器官移植后作为手术过程中内脏的部分缺血/再灌注后内毒素从内脏转移的结果而通常直接升高的降钙素原水平,不再由于这种原因而变化。
在本发明的情形中,术语“预测”意味着将结果的可能性与分析物测量中获得的结果相关联。其实例是测量样品中的某种标志物例如降钙素原,其测量到的水平与器官移植后移植物衰竭的可能性相关联。
在本发明的意义中,除非另有指明,否则“对象”被理解为是所有人和动物,不论他们是否表现出病理变化。在本发明的意义中,待诊断对象的样品可以是从组织、器官、生物体等收集的任何样品。在优选实施方案中,本发明的对象是人类。
在本发明的情形中,术语“监测”是指反复测定对象的医学状态。因此,例如可以测定、登记和/或记录某些形式的治疗对于对象医学状态的影响。
在本发明的情形中,术语“治疗指导”是指使用对象中某些标志物或生物标志物水平的测定结果、或通过上面提到监测所述对象而获得的结果,来确定对所述对象的最佳治疗过程。通过这种方式,可以维持治疗方式,或可以根据对象的医学状态的进展是理想的、或至少可接受的还是不能接受的,对治疗方式进行改变或修改。
在本发明的情形中,例如“样品的级份”或“样品的提取物”这样的表述优选是指通过各种方法获得的级份,所述方法选自过滤、无菌过滤、沉降、沉淀、离心或通过纯化柱或膜或类似装置进行纯化,以便选择性移除某些蛋白、碳水化合物、脂类或其他组分。这也可以包含例如根据凝血级联使样品的某些组分凝结,并通过上面提到的方法之一除去凝结的组分。
在本发明的情形中,术语“需要抗微生物治疗的病症”优选是指这样的病症,即在技术和医学先进的社会中、例如在所谓的第一和第二世界国家中的从医人员通常认为在所述病症中进行抗微生物治疗是适合的。这并不意味着这样的治疗对于具有微生物感染的对象的存活是绝对必需的,但抗微生物治疗将至少改善所述对象的医学状况。在这种情况下,由对抗微生物治疗有抗性或以其它方式不受其影响的物种或菌株引起的、但如果可用的话将需要这种治疗的微生物侵染,包含在上面提到的病症中。专业技术人员、在这种情况下是从医人员,将能够很好地决定那些情况属于上面的说明。
PCT或其片段的水平可以通过本技术领域任何公认的方法获得。该水平可以通过免疫分析或其他用于测定标志物水平的常规技术来测定。公认的方法包括将患者的体液样品送往商业化实验室进行测量,但是也可以在护理现场进行测量。
患者样品中PCT的水平、即浓度,可以例如表征结果的预后或评估患者的风险。例如,PCT浓度高于某个阈值,可以指示患者的特定结果、风险或预后。
通过本发明的方法或使用本发明的分析获得的PCT水平,可采用本技术领域的专业人员公知的许多方式进行分析。例如,可以将获得的每个分析结果与“正常”值或指示特定预后、风险或结果的值进行比较。特定的诊断/预后可以取决于每个分析结果与这种可以被称为诊断或预后“阈值”的值的比较。
诊断和/或预后测试的灵敏度和特异性不仅取决于测试的分析“质量”,它们也取决于构成异常结果的事件的定义。在实践中,受试者工作特征曲线(ROC曲线)典型地通过将变量值相对于其在“正常”(即表观健康的)和“患病”群体中的相对频率进行作图来计算。对于任何特定的标记物来说,患病和未患病对象的标记物水平分布可能交叠。在这样的情况下,测试不能以100%的准确性绝对区分正常与患病,交叠面积指示了测试不能区分正常与患病的区域。阈值的选择使得高于它(或低于它,取决于标志物随着疾病如何变化)测试被认为是异常的,而低于它测试被认为是正常的。ROC曲线下的面积是检测到的测量值将能够正确鉴定病症的可能性的度量。即使在测试结果不必然给出精确数字的情况下,也可以使用ROC曲线。只要人们能够对结果分等,他就能产生ROC曲线。例如,“患病”样品上的测试结果可以按照程度进行分等(例如1=低,2=正常,3=高)。这种等级可以与“正常”群体中的结果相关联,并产生ROC曲线。这些方法在本技术领域中是公知的。参见例如Hanley等,1982.Radiology 143:29-36。优选,阈值的选择能够提供ROC曲线面积大于约0.5、更优选大于约0.7、更加优选大于约0.8、更加优选大于约0.85、最优选大于约0.9。在这种情形中,术语“约”是指给定测量值的+/-5%。
ROC曲线的水平轴表示(1-特异性),其随着假阳性率增加。曲线的垂直轴表示灵敏度,其随着真阳性率增加。因此,对于所选的特定截止值来说,可以确定(1-特异性)的值,并可以获得相应的灵敏度。ROC曲线下面积是所测量的标志物水平将允许正确鉴定疾病或病症的可能性的度量。因此,ROC曲线下面积可用于确定测试的有效性。
在其他实施方案中,阳性似然比、阴性似然比、比值比或风险比用作预测风险或诊断疾病的测试能力的度量。在阳性似然比的情况下,值为1表示在“患病”和“对照”组二者的对象中阳性结果可能性相等;值大于1表示在患病组中阳性结果可能性更大;值小于1表示在对照组组中阳性结果可能性更大。在阴性似然比的情况下,值为1表示在“患病”和“对照”组二者的对象中阴性结果可能性相等;值大于1表示在测试组中阴性结果可能性更大;值小于1表示在对照组中阴性结果可能性更大。
在比值比的情况下,值为1表示在“患病”和“对照”组二者的对象中阳性结果可能性相等;值大于1表示在患病组中阳性结果可能性更大;值小于1表示在对照组中阳性结果可能性更大。
在风险比的情况下,值为1表示在“患病”和“对照”组二者中终点(例如死亡)的相对风险相等;值大于1表示在患病组中风险更高;值小于1表示在对照组组中风险更高。
专业技术人员将会理解,将诊断或预后指示物与诊断或与将来临床结果的预后风险相关联,是一种统计学分析。例如,标志物水平大于X可以传递患者与水平低于或等于X的患者相比更可能遭受不利后果的信号,正如通过统计学显著性水平所确定的。此外,标志物浓度从基线水平的改变可以反映患者的预后,并且标志物水平变化的程度可能与结果的严重性相关。统计学显著性通常通过比较两个或多个群体并确定置信区间和/或p值来确定。参见例如Dowdy和Wearden,《用于研究的统计学》(Statistics for Research),John Wiley & Sons,New York,1983。本发明的优选置信区间是90%、95%、97.5%、98%、99%、99.5%、99.9%和99.99%,而优选的p值是0.1、0.05、0.025、0.02、0.01、0.005、0.001和0.0001。
在其他实施方案中,可以进行多次PCT测定,并使用标志物的时间变化确定诊断或预后。例如,对象样品中的PCT水平可以在初始时间测定,并在第二个时间从第二个对象样品再次测定。在这样的实施方案中,从初始时间到第二个时间的水平增加可以指示特定的诊断或特定的预后。同样地,从初始时间到第二个时间的水平降低可以指示特定的诊断或特定的预后。
当在本文中使用时,术语“样品”是指出于对目标对象例如患者进行诊断、预后或评估的目的获得的体液样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰液和胸膜积液。此外,本技术领域的专业人员将会认识到,某些测试样品在分级或纯化程序、例如将全血分离成血清或血浆组分后,可以更容易分析。
因此,在本发明的优选实施方案中,样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品,或上面提到的任何样品的提取物。优选样品是血液样品,最优选是血清样品或血浆样品。
当在本文中指称PCT或其片段的水平的用途时,术语“相关的”或“相关联”是指将患者中PCT或其片段的存在或量,与其在已知患有给定病症或已知具有给定病症风险的人、或已知没有给定病症的人中的存在或量进行比较。正如上面讨论的,可以将患者样品中标志物的水平与已知与特定预后相关的水平进行比较。样品的标志物水平据说与特定结果的预后、风险和/或可能性相关;也就是说,专业技术人员可以使用标志物水平确定患者的特定结果的预后、风险或可能性,并做出相应反应。或者,样品的标志物水平可以与已知与良好结果相关的标志物水平进行比较。
可以对每个特定患者组确定用于将对象分层成不同组(类别)的适合的阈值水平。这可以例如通过将患者的参比群体按照他们的PCT水平分组成一定分位数例如三分位数、四分位数、五分位数或甚至按照适合的百分位数来进行。对于高于和低于一定百分位数的每个分位数或组,可以计算风险比,以比较已接受某种药物和没有接受的患者之间不利结果、即“不利影响”——例如对于存活率来说的风险。在这样的情况下,高于1的风险比(HR)表示已接受治疗的患者与没有接受治疗的患者相比,发生不利结果的风险较高。
本文中PCT水平的测定(或测量或检测)可以使用下面解释的检测方法和/或诊断分析来进行。
本文中提到的“分析法”或“诊断分析法”可以是在诊断学领域中使用的任何类型。这样的分析法可以基于待测定的分析物与具有一定亲和性的一种或多种捕获探针的结合。对于捕获分子(在本文中也称为“结合物”)与靶分子或目标分子之间的相互作用来说,亲和常数优选大于108M-1。
在本发明的情形中,“捕获分子”是可用于结合来自样品的靶分子或目标分子、即分析物(即在本发明的情况下是PCT或其至少12个氨基酸长度的片段)的分子。因此,捕获分子必须在空间上和表面特征例如表面电荷、疏水性、亲水性、存在或不存在路易斯供体和/或受体方面进行充分适合,以特异性结合靶分子或目标分子。因此,结合可以例如由捕获分子与靶分子或目标分子之间的离子、范德华、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或者两种或多种上面提到的相互作用的组合来介导。在本发明的情况下,捕获分子可以选自例如核酸分子、碳水化合物分子、RNA分子、蛋白质、抗体、肽或糖蛋白。优选,捕获分子是抗体,包括其与靶或目标分子具有足够亲和性的片段,并包括重组抗体或重组抗体片段,以及所述抗体的化学和/或生物化学修饰的衍生物或其源自于变体链的长度为至少12个氨基酸、优选长度为至少20个氨基酸的片段。
优选的检测方法包括各种不同格式的免疫分析,例如放射免疫分析(RIA)、化学发光和荧光免疫分析、酶联免疫分析(ELISA)、基于Luminex的珠子阵列、蛋白微阵列分析,以及快速试验格式例如免疫层析条试验。
分析法可以是均相或非均相分析、竞争性和非竞争性夹心分析。在特别优选的实施方案中,分析采用夹心分析的形式,这是一种非竞争性免疫分析,其中待检测和/或定量的分子与第一抗体并与第二抗体结合。第一抗体可以与固相例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或条带结合,第二抗体是用例如染料、放射性同位素或者反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过适合的方法测量与分析物结合的标记抗体的量。涉及“夹心分析”的通用组合物和程序是已确立的,并为专业技术人员所知(《免疫分析手册》(The Immunoassay Handbook),David Wild主编,Elsevier LTD,Oxford;第三版(2005年5月),ISBN-13:978-0080445267;Hultschig C等,Curr Opin Chem Biol.2006Feb;10(1):4-10.PMID:16376134),在此引为参考。
在特别优选的实施方案中,分析法包含两种捕获分子,优选均作为分散体存在于液体反应混合物中的抗体,其中第一标记组分与第一捕获分子结合,其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发光-淬灭或扩增的标记系统的一部分,所述标记系统的第二标记组分与第二捕获分子结合,使得当这两种捕获分子都与分析物结合后产生可测量的信号,允许检测包含样品的溶液中形成的夹心复合物。
更加优选,所述标记系统包含稀土穴合物或稀土螯合物与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型的染料的组合。
在本发明的情况下,基于荧光的分析法包含染料的使用,染料可以例如选自FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、荧光素异硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、占吨(Xanthen)、6-羧基-2’,4’,7’,4,7-六氯荧光素(HEX)、TET、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素(JOE)、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5-羧基罗丹明-6G(R6G5)、6-羧基罗丹明-6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素类例如7-羟基香豆素、苯亚甲胺例如Hoechst 33258;菲啶类例如德克萨斯红、雅吉瓦黄、Alexa Fluor、PET、溴乙锭、吖啶染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、卟啉染料、甲川染料等。
在本发明的情况下,根据针对化学发光材料描述的物理原理,基于化学发光的分析法包括使用染料,所述描述在Kirk-Othmer的《化学技术百科全书》(Encyclopedia of chemical technology)第四版,J.I.Kroschwitz执行主编,M.Howe-Grant主编,John Wiley & Sons,1993,vol.15,p.518-562中,在此引为参考,包括在551-562页上的引述。优选的化学发光染料是吖啶酯。
附图说明
图1:Log PCT对(a)Log CRP、(b)肌酸酐清除率和(c)Log蛋白尿的散点图。PCT与CRP的关联性被二次模型(Log(PCT)=-1.65+0.12*log(CRP)+0.07*(Log(CRP))2,P<0.0001)最好地描述。PCT与肌酸酐清除率的关联性由倒数模型(Log(PCT)=-1.80+(11.7/肌酸酐清除率),P<0.0001)最好地描述。PCT与蛋白尿的关联性由线性模型(Log(PCT)=-1.66+0.57*Log(蛋白尿),P<0.0001)最好地描述。
图2:PCT水平:(a)没有移植物衰竭的RTR对移植物衰竭的RTR(P<0.0001)和(b)活的RTR对死亡的RTR(P<0.0001)。CRP水平:(c)没有移植物衰竭的RTR对移植物衰竭的RTR(P=0.2)和(d)活的RTR对死亡的RTR(P=0.0001)。差异使用Mann-Whitney检验进行检验。
图3:PCT和CRP对于(a)移植物衰竭和(b)死亡的ROC曲线。AUC和最佳截止值以及相应的灵敏度和特异性显示在表4中。
图4:在(a和b)所有RTR和(c和d)只有非蛋白尿RTR中,以PCT的性别分层的三分位作出的(a和c)移植物存活率和(b和d)接受者存活率的Kaplan Meier曲线。
实施例
材料和方法
研究设计和对象
在本前瞻性群组研究中,所有在2001年8月到2003年7月之间到门诊部就诊并且移植物发挥功能至少1年的肾脏移植接受者,在他们下一次到门诊部就诊时就适合参与。如果接受者生病或具有感染征兆,他们在以后到门诊部就诊时再被要求参与。在合格的847人中,总共606位肾脏移植接受者签署了书面知情同意书(72%同意率)。没有签署知情同意书的组与签署了知情同意书的组在年龄、性别、体重指数、血清肌酸酐、肌酸酐清除率和蛋白尿方面相当。两位RTR在PCT浓度方面被认为极端离群(图1),因此被排除在分析之外。该研究的其他细节以前已经发表(van Ree RM,De Vries AP,Oterdoom LH等,Abdominalobesity and smoking are important determinants of C-reactive protein inrenal transplant recipients.(腹部肥胖和吸烟是肾脏移植接受者中C反应蛋白的重要决定因素),Nephrol Dial Transplant 2005;20(11):2524-2531)。学术审查委员会批准了该研究方案(METc 01/039)符合赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)(《赫尔辛基宣言》修订版(Declaration of Helsinki revisited),IRB 2000;22:10-11)。
结果事件
所有参加的对象至少一年到门诊部就诊一次。使用死亡作为作为第二终点。关于死亡和移植物衰竭的信息由肾脏移植中心并通过与全科医生和相关肾病学家的密切接触进行记录。移植物衰竭被定义为回到透析或重新移植。所有RTR的移植物衰竭和死亡记录到2007年8月。不存在失访
肾脏移植物特征
相关移植物的特征从格罗宁根肾脏移植物数据库(GroningenRenal Transplant Database)获得。该数据库保有从1968年以来在我们中心进行的所有肾脏移植的信息,包括透析史。标准的免疫抑制治疗和当前药物治疗以前已经描述(van Ree RM,De Vries AP,Oterdoom LH等,Abdominal obesity and smoking are important determinants ofC-reactive protein in renal transplant recipients.(腹部肥胖和吸烟是肾脏移植接受者中C反应蛋白的重要决定因素),Nephrol Dial Transplant2005;20(11):2524-2531)。体重指数、腰围、身体表面积(BSA)和血压按照以前的描述测量(van Ree RM,De Vries AP,Oterdoom LH等,Abdominal obesity and smoking are important determinants of C-reactiveprotein in renal transplant recipients.(腹部肥胖和吸烟是肾脏移植接受者中C反应蛋白的重要决定因素),Nephrol Dial Transplant 2005;20(11):2524-2531)。吸烟状态和心血管病史使用自我报告调查表记录。如果以前有心肌梗塞(MI)、短暂性缺血发作(TIA)或脑血管意外(CVA),心血管病史被认为是阳性的。
实验室测量
在8-12小时过夜禁食时间后抽取血液。使用免疫发光分析(BRAHMS PCT灵敏性LIA;BRAHMS Aktiengesellschaft,Hennigsdorf,德国)进行PCT分析(Morgenthaler NG,Struck J,Fischer-Schulz C,Bergmann A.Sensitive immunoluminometric assay for the detection ofprocalcitonin.(用于检测降钙素原的灵敏的免疫发光分析),Clin Chem.2002May;48(5):788-90)。高灵敏度的C反应蛋白(CRP)水平使用内部的酶联免疫吸附分析测定;检测下限是0.002mg/l。血清肌酸酐水平使用Jaffe方法的修改版本进行测定(MEGA AU 510,Merck Diagnostica,Darmstadt,德国)。血清总胆固醇、HDL胆固醇、甘油三酯和尿液蛋白排泄量按照以前的描述12进行评估。蛋白尿被定义为尿液蛋白排泄量>0.5g/24hr。
统计学分析
分析使用SPSS第14.0版(SPSS Inc.,Chicago,IL)和Sigma Plot第10版(Systat software Inc.,德国)进行。参量性参数(parametricparameters)以平均值±标准偏差(SD)给出,而非参量性参数以中位数[四分位数间距]给出。风险比(HR)的报告带有[95%置信区间(CI)]。双侧P-值小于P<0.05表明统计学显著性。
首先,为了研究哪些接受者或移植肾相关特征与PCT浓度相关,使用线性回归分析,以log PCT浓度作为依赖性变量,对这些因子进行了分析。为了确定PCT是否与CRP、肌酸酐清除率或蛋白尿相关,我们设计了散点图。使用了曲线估算回归统计学来确定散点图中的最佳拟合。随后,使用反向线性回归(backward linear regression)分析确定了PCT的独立决定因素和关联因素。将它针对基线肌酸酐清除率和蛋白尿以及移植与入选日之间的时间进行调整,以便针对接受者在入选时以不同的同种异体移植物功能开始这一事实、以及接受者在不同的时间点入选我们的研究这一事实进行调整。随后加入在线性回归分析中具有P-值<0.05的其他特征。所保留的变量被认为是PCT水平的独立决定因素和关联因素。
确定移植物衰竭或死亡的灵敏度和特异性通过对PCT、CRP、蛋白尿和肌酸酐清除率设计受试者工作特征(ROC)曲线来计算。最适截止值从曲线外推。计算了曲线下面积(AUC)以比较PCT、CRP、蛋白尿和肌酸酐清除率对移植物衰竭的预测性能,以及PCT与CRP对死亡的预测性能。AUC之间的统计学差异通过DeLong等的方法进行了非参数性比较(DeLong ER,DeLong DM,Clarke-Pearson DL.Comparing theareas under two or more correlated receiver operating characteristic curves:a nonparametric approach.(两条或多条相关的受试者工作特征曲线下面积的比较:非参数性方法),Biometrics 1988;44(3):837-845)。
最后,进行了时间对事件的分析。首先,使用Kaplan-Meier分析调查了PCT水平作为移植物衰竭和死亡的潜在预测物。对于这些分析,使用了性别分层的PCT三分位,因为在PCT的三分位之间男性和女性的百分率分配不均等(第一个三分位:41%女性和24%男性;第二个三分位:31%女性和37%男性;第三个三分位:28%女性和39%男性)。其次,进行了单变量和多变量Cox回归分析。PCT浓度作为2log变换的变量输入回归分析。这意味着,例如,移植物衰竭的风险比(HR)为1.5,表明随着PCT浓度的每次加倍,移植物衰竭的HR增加1.5倍。将它针对肌酸酐清除率、蛋白尿以及移植和入选日之间的时间(表5,模型2)、针对接受者的年龄和性别(表5,模型3)、并最后针对PCT的依赖性关联因素和决定因素(表5,模型4)进行了调整。进行了二次分析,其中(1)进一步排除CRP水平高于10mg/L的RTR,以及(2)仅仅在非蛋白尿RTR中。
结果
分析了总共575位RTR(54%男性,年龄51.7±12.0岁,84%为尸体移植物。移植与基线测量之间的时间中位数是6.1[2.9-11.7]年。PCT浓度中位数是0.023[0.017-0.036]ng/mL。接受者和移植物的基线特征以及使用log PCT浓度作为独立变量的单变量线性回归分析的标准化回归系数显示在表1和2中。随着PCT水平的增加,RTR更通常为男性、具有较大的腰围,并且更通常为吸烟者、具有较高的收缩和舒张血压、使用更多数量的抗高血压药物、具有较低的HDL和较高的甘油三酯浓度,并具有较高的CRP浓度。此外,较高的PCT水平与较高的供体年龄、较高的血清肌酸酐浓度、较低的肌酸酐清除率、较高的蛋白尿、较高的急性排斥和急性排斥治疗频率以及较高的泼尼松龙剂量相关。
图1显示了PCT与(a)CRP、(b)肌酸酐清除率和(c)蛋白尿的关联性。曲线估算回归分析显示PCT与CRP的关联性使用二次模型拟合最好,PCT与肌酸酐清除率的关联性使用倒数模型拟合最好,PCT与蛋白尿的关联性使用线性模型拟合最好(参见图1脚注的模型方程,所有P<0.0001)。为了确定PCT的独立决定因素和关联因素,我们使用logPCT浓度作为依赖性变量以及在单变量分析中与PCT水平显著相关的所有特征,进行了反向线性回归分析(参见表1和2)。PCT的独立决定因素和关联因素是CRP浓度、肌酸酐清除率、接受者性别、蛋白尿、HDL和甘油三酯浓度以及供体年龄(表3)。
直至移植物衰竭的随访中位数是5.2[4.5-5.7]年,直至死亡的随访中位数是5.3[4.7-5.7]年。在随访中,41位(7%)RTR经历移植物衰竭,91位(16%)RTR死亡。入选时的PCT中位数,在发生移植物衰竭的RTR中与没有发生移植物衰竭的RTR中相比明显更高(0.046[0.035-0.078]ng/mL对0.023[0.017-0.034]ng/mL,P<0.0001,图2a)。在随访过程中死亡的RTR与没有死亡的RTR相比,在入选时具有明显更高的PCT水平(0.032[0.021-0.055]ng/mL对0.022[0.017-0.034]ng/mL,P<0.0001,图2b)。相形之下,发生移植物衰竭的RTR与没有经历移植物衰竭的RTR相比,在入选时的CRP水平没有明显更高(2.43[1.18-8.04]mg/L对2.06[0.81-4.87]mg/L,P=0.2,图2c)。但是,死亡的RTR与没有死亡的相比,CRP水平明显更高(3.49[1.38-8.91]mg/L对1.89[0.74-4.38]mg/L,P=0.0001,图2d)。
通过产生ROC曲线,对血清PCT水平与肌酸酐清除率、蛋白尿和CRP对移植物衰竭、以及与CRP对死亡的预测性能进行了比较(分别为图3a和3b)。AUC和最适截止值以及相应的灵敏度和特异性,显示在表4中。PCT预测移植物衰竭的ROC分析显示出平均(SE)AUC为0.84(0.03)。这与CRP的AUC(0.56(0.04),与PCT相比P<0.0001)相比明显更高,但是与肌酸酐清除率(0.86(0.03),与PCT相比P=NS)和蛋白尿(0.80(0.04),与PCT相比P=NS)的AUC相当。检测移植物衰竭的最适截止值,对于PCT来说为0.029ng/mL,对于肌酸酐清除率来说为51.5mL/min,对于蛋白尿来说为0.4g/24h。对于CRP来说,检测移植物衰竭的最适截止值不能确定,因为模型在预测移植物衰竭中不比随机机会好很多。预测死亡的ROC分析显示出对于PCT来说AUC为0.66(0.03),对于CRP来说为0.63(0.03)(彼此相比P=NS)。检测死亡的最适截止值对于PCT来说为0.028ng/mL,对于CRP来说为2.1mg/L。
最后,进行了时间对事件的分析。在PCT的最低三分位中,1位(1%)RTR在随访过程中经历了移植物衰竭,而对于中间和最高三分位来说,这些数字分别是5位(3%)和35位(19%)(时序检验:P<0.0001,图4a)。在PCT的升序三分位中,死亡的数量分别是15位(8%)、32位(17%)和44位(23%)(时序检验:P=0.0001,图4b)。表5显示了对RTR后期移植物衰竭和死亡的单变量和多变量Cox回归分析。在调整了肌酸酐清除率、蛋白尿和抑制与入选日之间的时间后,PCT是后期移植物衰竭的显著预测物(HR=1.7,P<0.005,表5,模型2)。进一步调整接受者年龄和性别(HR=1.6,P=0.01,表5,模型3)并调整了PCT的独立关联因素和决定因素(表5,模型4)后,也同样如此。在调整了肌酸酐清除率、蛋白尿和抑制与入选日之间的时间后,PCT与死亡之间的显著关联性消失了(HR=1.3,P=0.06,表5,模型2)。但是在调整了接受者年龄和性别后显著性恢复(HR=1.4,P=0.01,表5,模型3),并且在调整PCT的独立关联因素和决定因素后保持(HR=1.4,P<0.05,表5,模型4)。在排除CRP水平高于mg/L的RTR后,或者当分析只在无蛋白尿RTR中进行时,结果没有实质上的差异(对于根据分层的PCT三分位只对无蛋白尿RTR进行的Kaplan-Meier分析,参见图4c和d)。
表1
接受者相关特征以及接受者相关特征与log PCT浓度的单变量线性回归分析
(1)TIA:暂时性缺血性发作,(2)CVA:脑血管意外,(3)使用高剂量皮质类固醇治疗的急性排斥。NS:不显著
表2
与移植肾相关的特征以及与移植肾相关的特征和log PCT浓度的单变量线性回归分析
NS:不显著
表3
PCT的独立决定因素和关联因素
表4
ROC曲线的AUC和最适截止值
a:与PCT相比P<0.0001
b:与PCT相比不显著
c:与CRP相比P<0.0001
SE:标准误差,NA:不适用。
表5
RIR中后期移植物衰竭和死亡的单变量和多变量Cox回归分析
在所有分析中,PCT作为2log变换的变量输入回归分析中,并且偏斜的数据通过对数变换归一化。
模型1:粗模型
模型2:模型1+对肌酸酐清除率、蛋白尿和移植与入选日之间时间的调整。
模型3:模型2+接受者年龄和性别。
模型4:模型3+PCT的独立关联因素和决定因素。
Claims (17)
1.降钙素原或其至少12个氨基酸的片段在制备试剂中的应用,所述试剂用于对已接受肾脏移植物的对象的长期移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层以及对这样的对象进行监测和治疗指导,其中:
测定从所述对象获取的样品中的降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平;
与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的降钙素原水平高于截止值,所述截止值低于0.1ng/mL但高于正常群体的中位数水平;
所述对象未患选自下列的病症:需要抗微生物治疗的感染,或感染的升级形式;
所述对象的降钙素原水平不再受到由器官移植引起的手术创伤的影响;以及
所述长期是指超过一年的时间。
2.权利要求1的应用,其中所述样品选自血液样品或其级份、淋巴液样品、尿液样品或任何上述样品的提取物。
3.权利要求1的应用,其中所述感染的升级形式包括败血症或败血症性休克。
4.权利要求2的应用,其中所述血液样品包括血浆样品和血清样品。
5.权利要求1的应用,其中降钙素原水平能通过选自下列可选方案的方法,与移植物衰竭和/或死亡的预测或风险分层相关联:
·与预定样品集中降钙素原水平的中位数相关联,
·与预定样品集中降钙素原水平的分位数相关联,以及
·与数学模型相关联。
6.权利要求1的应用,其中另外测定与移植物衰竭和/或死亡的风险增加相关的一种或多种其他标志物或临床参数的水平,并用于对已接受器官移植的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层和对这样的对象进行监测和治疗指导。
7.权利要求6的应用,其中所述一种或多种临床参数选自:年龄,性别,既往病史,体重指数,遗传易感性/家族史,种族背景,吸烟,饮酒或饮食。
8.权利要求7的应用,其中既往病史包括糖尿病史。
9.权利要求6或7的应用,其中所述一种或多种其他标志物选自:肾功能的标志物,炎症标志物以及与心血管和渗透调节相关的标志物。
10.权利要求9的应用,其中所述肾功能的标志物选自肌酸酐清除率、蛋白尿和脂类标志物。
11.权利要求9的应用,其中所述炎症标志物是C反应蛋白。
12.权利要求9的应用,其中所述与心血管和渗透调节相关的标志物选自proBNP或proBNP至少12个氨基酸的片段,proANP或proANP至少12个氨基酸的片段,肾上腺髓质素原或肾上腺髓质素原至少12个氨基酸的片段,内皮素原或内皮素原至少12个氨基酸的片段,血管加压素原或血管加压素原至少8个氨基酸的片段,其中:
proBNP至少12个氨基酸的片段包括片段BNP和片段NT-proBNP,proANP至少12个氨基酸的片段包括片段NT-proANP和片段MR-proANP,肾上腺髓质素原至少12个氨基酸的片段包括肾上腺髓质素、片段PAMP和片段MR-proADM,内皮素原至少12个氨基酸的片段包括片段内皮素-1、片段大内皮素-1、片段CT-proET-1和片段NT-proET-1,以及血管加压素原至少8个氨基酸的片段包括片段血管加压素、片段和肽素和片段神经垂体素运载蛋白2。
13.权利要求1的应用,所述应用包含下列步骤:
·在肾脏移植后从对象获取样品,
·在从所述对象获取的样品中测定降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平,以及
·将降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平与预后相关联。
14.权利要求13的应用,其中降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的水平使用诊断分析法测定。
15.权利要求14的应用,其中降钙素原或其至少12个氨基酸的片段的诊断分析法是超灵敏的,并具有低于0.1ng/mL的功能分析灵敏度,所述分析灵敏度被定义为以20%的最大分析间CV所能测定的最小浓度。
16.权利要求13到15任一项的应用,其中在移植后不早于一周从对象获取样品。
17.权利要求1的应用,其中所述试剂通过分析灵敏度低于0.1ng/mL的免疫分析用于对已接受肾脏移植物的对象的移植物衰竭和/或死亡进行预测或风险分层以及对这样的对象进行监测和治疗指导,所述分析灵敏度被定义为以20%的最大分析间CV所能测定的最小浓度。
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