CN102203619B

CN102203619B - 慢性肾病中的预测方法

Info

Publication number: CN102203619B
Application number: CN200980143661.7A
Authority: CN
Inventors: 塞缪尔·N·布赖特; 大卫·A·布朗
Original assignee: St Vincents Hospital Sydney Ltd
Current assignee: St Vincents Hospital Sydney Ltd
Priority date: 2008-10-31
Filing date: 2009-10-29
Publication date: 2015-12-16
Anticipated expiration: 2029-10-29
Also published as: EP2350669B1; ES2434996T9; JP5444363B2; ES2434996T3; US10705096B2; EP2350669A1; CN102203619A; WO2010048670A1; US20140205684A1; US20120107420A1; JP2012507012A; EP2350669A4; EP2350669B9; HK1154652A1; CA2740632A1; US20170023587A1

Abstract

本发明涉及病人存活性的预测方法，特别是患有慢性肾病（CKD）的病人以及选择进行肾脏移植的终末期肾病患者的存活性的预测方法。所述方法包括检测来自病人的测试体样本中的巨噬细胞抑制因子-1（MIC-1）的上升量。本发明还公开了一种防止或减少CKD病人的死亡风险的方法，该方法包括除去或钝化存在于病人的血液、血浆或血清中的MIC-1。

Description

慢性肾病中的预测方法

技术领域

本发明涉及一种预测病人存活性的方法。特别地，本发明涉及患有慢性肾病的病人的存活性的预测方法。

通过参考纳入

在以下的说明中，本发明引用以下申请：

-国际专利申请PCT/AU01/00456(WO01/81928);

-国际专利申请PCT/AU2005/000525(WO2005/099746)；和

-国际专利申请PCT/AU2008/001498(WO2009/046495)。

上述专利申请的全部内容在此通过引用纳入本说明书中。

背景技术

巨噬细胞抑制因子-1（MIC-1）是一种转化生长因子-β（TGF-β）超家族蛋白。MIC-1最初被克隆为巨噬细胞抑制因子-1，随后被识别为胎盘转化生长因子-β（PTGF-β）、胎盘骨形态发生蛋白（PLAB）、非甾体抗炎药激活基因1（NAG-I）、前列腺衍生因子（PDF）和生长发育因子-15（GDF-15）(Bootcovctal,1997;Hromasβtal,1997;Lawtonβtal,1997;Yokoyama-Kobayashietal,1997;Paralkaretal,1998)。类似于其它的TGF-β相关细胞因子，MIC-1被合成为无活性前体蛋白，进行二硫键连接的同源二聚过程（disulphide-linkedhomodimerisation）。随着N末端前肽的蛋白裂解，成熟的MIC-1被分泌为约24.5kDa的二聚体蛋白（Bauskinetal.,2000）。MIC-1的氨基酸序列在以下文献中有公开：WO99/06445,WO00/70051,WO01/81928,WO2005/113585,Bottneretal.(1999b);Bootcovetal.,1997;Baeketal,2001;Hromasetal.(1997),Paralkaretal,1998;Morrishetal,1996;andYokoyama-Kobayashietal,(1997)。图1展示了普通或“野生型”成熟MIC-1多肽的氨基酸序列。

MIC-1表达在若干组织中（Mooreetal.,2000;Bottneretal,1999a;Fairlieetal,1999;Bauskinetal,2006）。例如，人体组织的Northern杂交表明：在肾脏、胰脏和前列腺中存在少量的MIC-1mRNA，而在胎盘中存在大量的MIC-1mRNA（Mooreetal.,2000;Fairlieetal,1999）。此外，在正常、看起来健康的人体中，血清MIC-1水平显示出随年龄的增长而上升。MIC-1超表达与癌症、特别是前列腺癌相关联（Welshetal,2003），而MIC-1的高血清浓度则与（肿瘤）转移性疾病的存在相关联（Welshetal,2003;Brownetal,2006）。血清MIC-1在慢性炎症性疾病中也有上升，并预示着与传统危险因素无关的动脉粥样硬化事件。血清MIC-1水平在慢性肾病中也有上升（CKD;Johenetal,2007）。

CKD（也称为“chronicrenaldisease”，慢性肾脏疾病）的特征是：在数月或数年内，肾功能分五个阶段逐步丧失。CKD的最初特点是肾功能轻度减弱，有一些明显的症状，这些症状最终进展到最后阶段，这称为慢性肾功能衰竭（chronickidneyfailure，CKF）、慢性肾脏功能衰竭（chronicrenalfailure，CRf）或终末期肾病，其以重病为特点，且通常需要某些形式的“肾脏替代疗法”（例如透析或肾移植）。在美国有超过15,500,000成年人患有中度的肾功能严重受损，并有超过480,000人正在接受终末期肾病的积极治疗，且每年新增100,000以上开始治疗的新病人。在2005年接受治疗的病人中，有超过80,000病人死亡。

CKD病人往往容易患加速动脉粥样硬化（一种影响动脉血管的慢性炎症性疾病），且比普通人群更有可能患上心血管疾病。无论是对于终末期肾病患者还是普通人群，上升的炎症标志物水平，如C-反应蛋白（CRP）水平，都被认为是急性心血管事件的危险因素（Appleetal.,2004）。终末期肾病与厌食、体重减轻和恶病质相关联。对于常常同时存在营养不良和炎症病情的肾功能衰竭患者而言，人们认为这两种病情之间是有关联的。

有些终末期肾病患者可以通过透析无限期地生存，但是，很多病人如果不进行肾移植就可能死亡。体重减轻、身体质量指数（BMI）降低和血清炎症标志物上升被认为是死亡率预测因子。但是，营养不良和炎症对疾病结果的贡献和它们之间的关联是不明确的。目前还没有任何可靠的前瞻性方法来确定哪些病人如果不进行肾移植就会死亡，因此难以确定对于哪些病人可以采取肾移植来拯救其生命。

本申请的申请人研究了MIC-1与CKD中营养状况改变之间的关系，发现MIC-1水平可以临床应用于预测CKD中的死亡率。本申请人还认识到MIC-1水平能够有利地提供一种用于选择采取肾移植的终末期肾病患者的手段。

发明内容

第一个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测慢性肾病（CKD）测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-1的上升量，其中，所述MIC-1的上升量与所述对象的死亡可能性的上升相关联。

第二个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测CKD测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括以下步骤：

（i）检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-1的量；以及

（ii）将步骤（i）中测得的MIC-1的量与MIC-1参考量进行比较，所述MIC-1参考量是与所述对象的死亡可能性上升相关联的升高的MIC-1的量；

这使得，当步骤（i）中测得的MIC-1的量大于或约等于所述参考量时，所述对象的死亡可能性上升；而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于所述参考量时，所述对象的死亡可能性下降。

第三个方面，本发明提供了一种选择进行肾移植的终末期肾病测试对象的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中升高的MIC-1量，其中，所述升高的MIC-1量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性的上升相关联。

所述第三个方面的方法优选包括以下步骤：

（i）检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-1的量；以及

（ii）将步骤（i）中测得的MIC-1的量与MIC-1参考量进行比较，所述MIC-1参考量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性上升相关联；

这使得，当步骤（i）中测得的MIC-1的量大于或约等于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性上升；而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性下降。

第四个方面，本发明提供一种评估正接受透析的终末期肾病测试对象对透析的耐受性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中升高的MIC-1量，其中，所述升高的MIC-1量与（所述对象）对透析的耐受性差相关联。

所述第四个方面的方法优选包括以下步骤：

（i）检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-1的量；以及

（ii）将步骤（i）中测得的MIC-1量与在透析开始前或透析开始后的较早时间点测得的、来自测试对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较，或者将步骤（i）中测得的MIC-1量与来自具有对透析的长期耐受性的终末期肾病对照对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

这使得，当步骤（i）中测得的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于或约等于所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围时，所述对象可能能够忍受透析；或者

（iii）将步骤（i）中测得的MIC-1的量与MIC-1参考量进行比较，所述MIC-1参考量与对透析的长期耐受性相关联，

这使得，当步骤（i）中测得的MIC-1的量与所述MIC-1参考量相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于或约等于所述MIC-1参考量时，所述对象可能能够忍受透析。

第五个方面，本发明提供一种防止CKD对象、特别是患有终末期肾病的CKD对象死亡、或降低其死亡风险的方法，包括处理所述对象的血液、血浆或血清，以除去或钝化所述血液、血浆或血清中存在的MIC-1。

附图说明

图1中（A）为普通或“野生型”人成熟MIC-1多肽的氨基酸序列；（B）为D6成熟人MIC-1变体的氨基酸序列；

图2是接受透析1.2~13年的瑞典队列（n=98）中病人的Kaplan-Meier图，该图显示，血清MIC-1水平高于中间值7.4ng/ml（即7400pg/ml；图中，圆圈代表MIC-1水平低于7400pg/ml，方框代表MIC-1水平高于7400pg/ml）的病人与血清MIC-1水平低于这一水平的病人相比，前者的死亡率高得多（p=0.0105）；以及

图3（A）是进行了不超过三年透析的美国队列（n=140）中的病人在检查时的Kaplan-Meier图，根据它们的中间值6.3ng/ml（即6300pg/ml；圆圈代表MIC-1水平低于6300pg/ml，方框代表MIC-1水平高于6300pg/ml）进行区分，大大区分了病人的死亡率（p=0.0124）；图3（B）中相同组病人根据血清MIC-1水平的最高的10%——14.2ng/ml（即14200pg/ml；圆圈代表MIC-1水平低于14200pg/ml，方框代表MIC-1水平高于14200pg/ml）来进行区分，图中显示，血清MIC-1水平最高的10%（>14200pg/ml）的病人的死亡风险大大上升（p=0.0038）；图3（C）显示，不考虑透析时间的话，血清MIC-1水平最高的10%的病人（>14.2ng/ml，即14200pg/ml）的死亡率为50%（p=0.0040）。

具体实施方式

本申请人还发现，MIC-1是慢性肾病（CKD）中的死亡率预测因子。

因此，第一个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测慢性肾病（CKD）测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-1的上升量，其中，所述MIC-1的上升量与所述对象的死亡可能性的上升相关联。

在这里，术语“MIC-1”囊括了单体，多肽的同源二聚体和/或异源二聚体，以及变体，及其亚基和片段（例如MIC-1的降解产物或代谢产物）。该术语所囊括的MIC-1变体包括含有多肽的成熟人MIC-1蛋白，其中由于氨基酸取代、删除和/或增加，所述多肽的氨基酸序列与图1A所示的序列相比有1~3个氨基酸不同，且该多肽优选为显示出与含有图1A所示的氨基酸序列的多肽基本相当的生物活性（可用“Hromasetal,1997”所述分析方法进行测定和/或用“Kempfetal,2007”所述方法进行测试）；一个特别的例子是专利文献WO01/81928（该申请的全文在此予以援引）中述及的D6成熟人MIC-1变体，该变体包括图1B所示的氨基酸序列。由上述术语“MIC-1”所囊括的MIC-1子单元和片段包括含有图1A或图1B所示氨基酸序列的多肽的子单元和片段，且这些子单元和片段显示出与那些多肽基本相当的免疫活性和/或生物活性。

优选地，在所述本发明第一方面的方法中检测的所述MIC-1为成熟人MIC-1蛋白、D6成熟人MIC-1变体蛋白和/或它们的异源二聚体。

在这里，术语“慢性肾病”及其缩略语“CKD”是指具有以下特征的情形：在数月或数年内，肾功能逐步且永久性地丧失。患有CKD的对象经常具有其它病情，比如心血管病（包括动脉硬化和缺血性心脏病）、高血压、营养不良、炎性疾病和糖尿病或者以上各项的结合。CKD被确认为经过表1所述的五个进展阶段。这些阶段可以部分地以测定“肾小球滤过率”（glomerularfiltrationrate，GFR）为特征，所述GFR可描述为通过肾脏的过滤流体的流速。

表1慢性肾病的几个阶段

在一些实施例中，所述CKD测试对象患有第1阶段的CKD，优选第2阶段的CKD，更优选第3阶段的CKD，进一步优选第4阶段的CKD，最优选第5阶段的CKD。

在很多情形下，所述对象最后都会接受肾替代疗法。术语“肾替代疗法”（renalreplacementtherapy）在这里是指一些能够至少部分地对降低的肾功能进行补偿的干预类型，例如，透析（包括血液透析、腹膜透析或血液过滤），肾脏移植，等等。但是，应当理解，所述肾替代疗法的类型不限于以上所举的例子，还有其他一些疗法也是肾替代疗法。此外，肾替代疗法的时间和强度可根据对象的不同而不同，这取决于病情和与对象个体相关联的其它医疗因素，以及各种机构（如透析装置）的标准操作程序。例如，有些对象在发展到终末期肾病之前都会暂时接受透析。在其它例子中，透析的强度根据对象的不同而不同（例如，有些对象每星期接受两次透析，而有些对象每天都要透析）。在大多数CKD对象中，为了获得生存必须无限期地接受肾替代疗法。

在这里，术语“无限期肾替代疗法”是指为了维持对象生存而需采取肾替代疗法的情形。此时，所述对象常被认为患有终末期肾病。

在这里，术语“终末期肾病”是指以表1所示为特征的情形，其中，所述对象永久性地丧失了大量肾功能，例如，具有低于15ml/min/1.73m²的肾小球滤过率，或者所述对象正在接受无限期肾替代疗法（例如透析，如血液透析或腹膜透析）。

在这里，术语“死亡可能性”是指CKD对象与健康对象或其它CKD对象（即：具有正常量或减少量的MIC-1的CKD对象）的正常生存预期相比，过早死亡的可能性。在本发明的方法的有些实施例中，MIC-1量的上升预示着所述对象从测试体样本提取之日起十年内的死亡可能性上升。在其它实施例中，MIC-1量的上升预示着所述对象从测试体样本提取之日起3年内的死亡可能性上升。此外，在另一些实施例中，MIC-1量的上升预示着所述对象从测试体样本提取之日起1年内的死亡可能性上升。

术语“全死因死亡率”在这里是指由于任何医学原因所引起的所述对象的死亡；即，导致死亡的原因可以是意外事故或灾难之外的任何原因。

因此，所述对象可能死于，例如，肾衰竭，心血管病（包括动脉硬化和缺血性心脏病），高血压，营养不良，炎性疾病，糖尿病，或其并发症或者它们的组合。优选地，死亡是由选自以下各项的原因所引起的：肾衰竭、心血管病和炎性疾病。

预测患有CKD的对象的死亡可能性是有好处的，这可使人们进行拯救生命的干预。例如，预测死亡率便于人们对要用肾移植来拯救其生命的对象进行选择或制定优先顺序。附加或替代性地，这可能表明，特定对象会从治疗方法的改变中获益，以延长她/他的生命。例如，对象可获益于另外的肾替代疗法（如更频繁的透析）；或者其它疗法的改变，例如，试图复制肾脏内分泌功能的疗法的改变（例如促红细胞生成素和维生素D3的替代，以及钙、磷结合剂等的施药），或者试图控制其它相关疾病（如高血压、心血管疾病、糖尿病、炎症性疾病，等等）的疗法的改变。

术语“测试体样本”是指体液样本、分离细胞（即：取自人体且与其它人体部位至少部分分离的细胞）样本、组织样本或器官样本。体液样本可以通过已知技术获得，组织和器官样本可以通过例如活体解剖的方法从任何组织或器官处获得。分离细胞可以从体液中获得；组织或器官通过分离技术如离心或细胞分选技术获得。优选地，细胞、组织或器官样本从那些表达或产生MIC-1的细胞、组织或器官处获得。

因此在本发明第一方面的方法中使用的所述测试体样本优选地选自：全血、血浆、血清、白细胞层、尿液、脑脊髓液、精液、滑液、组织活检和/或器官活检。更优选地，所述测试体样本选自：全血、血浆、血清和尿液。最优选地，所述测试体样本为血清。

所述测试体样本可以在CKD病程中各时间点从所述对象处取得。例如，可以在所述对象开始肾替代疗法（如透析）之前从该对象处取得样本，或者在无限期肾替代疗法开始之前取得样本，然后在对象接受肾替代疗法或无限期肾替代疗法时、在一个或多个时间点处得取得样本。

术语“量”或“量值”（amount）是指MIC-1的绝对量、MIC-1的相对量或浓度以及与其有关的任何值或参数，或者由此衍生的值或参数，例如，包括以下各项的值或参数：通过直接测量（比如质谱或核磁共振光谱中的强度值）或非直接测量（比如响应取自特定结合配体的MIC-1或信号强度、用生物读数系统测得的响应水平）从MIC-1获得的所有特定物理或化学性质的信号强度值。应当理解，与上述量或参数相关联的值也可通过本领域技术人员已知的标准数学运算方法来获得。

所述MIC-1的量根据本发明的目的可能视为“上升量的MIC-1”或“MIC-1上升量”，根据多项因素中的任何因素而变化，所述多项因素例如：使用的特定体样本类型、对象的性别（注意：男性对象表现出高于女性对象的平均血清MIC-1水平）、对象的年龄、对象的体重指数（BMI）、对象的吸烟状况（注意：以前吸过烟的人往往表现出比从未吸过烟的人高的血清MIC-1水平，而现在吸烟的人又往往表现出更高的血清MIC-1水平）、非甾体抗炎药（NSAID）的任何使用（注意：使用NSAID可与血清MIC-1水平的上升相关联，特别是对于男性对象）、女性对象的腰臀比（注意：女性的腰臀比上升与血清MIC-1水平的上升相关联）、对象所患CKD的具体阶段、所述测试体样本的采集时间、可能发生死亡的预测时间段、病人是否已在接受肾替代疗法、以及用来检测MIC-1的上升量的方法。本领域技术人员会理解，在对象体内检测到的MIC-1上升量越大，则死亡的可能性越大。但是，本领域技术人员也会理解，接受无限期肾替代疗法的对象的血清MIC-1水平会低于没有接受肾替代疗法的CKD患病对象的血清MIC-1水平，因为，例如，透析会降低全血、血浆和血清样本中的MIC-1水平。

针对本发明的目的，MIC-1上升量可由高于特殊预定量的量来代表，例如，高于约6000pg/ml的血清MIC-1水平（或者，当样本为全血或血浆样本时，与高于约6000pg/ml的血清MIC-1水平相对应的水平）；例如，由于血清包括全血的约50-55%，则约3000pg/ml的全血MIC-1水平大致相当于约6000pg/ml的血清MIC-1水平，或者，优选地，血清MIC-1水平高于约7000pg/ml（或者，当样本为全血或血浆样本时，与高于约7000pg/ml的血清MIC-1水平相对应的水平），更优选地，血清MIC-1水平高于约10000pg/ml（或者，当样本为全血或血浆样本时，与高于约10000pg/ml的血清MIC-1水平相对应的水平），最优选地，血清MIC-1水平高于约14000pg/ml（或者，当样本为全血或血浆样本时，与高于约14000pg/ml的血清MIC-1水平相对应的水平）。在有些实施例中，所述MIC-1水平是（或对应于）约6300pg/ml以上的血清水平，优选约7400pg/ml以上，更优选约14200pg/ml以上。在上文中，词语“约”是指可在所述量的±25%范围内变化，优选±10%，更优选±5%，最优选所述量的±2%。

针对本发明的目的，MIC-1上升量可以用能够通过系列测定方法来测定的对象的MIC-1量的上升来代表。因此，测试体样本中MIC-1的量可以在不同时间点对同一对象进行测定。例如，可以按特定的时间间隔来测定测试体样本中MIC-1的量。所述时间间隔可以根据所述对象的需要、逐案予以确定，该时间间隔可以是例如：3个月、1年、5年货10年，但是应当理解的是，所述时间间隔可以根据所述对象的任何有关健康和医学因素而进行调整。因此，对象的测试体样本中MIC-1的上升量可以通过以下方法测定：将给定时间点时测试体样本中MIC-1的量与同一测试体样本在较早时间点的MIC-1量进行比较。这样，MIC-1上升量可通过测定随着时间推移、任何给定对象的测试体样本中存在的MIC-1的量的上升来检测。

因此，测试体样本中的MIC-1上升量可以用一系列测试方法予以检测：

（i）测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；和

（ii）将测得的MIC-1的量与较早时间点时从相同对象处取得的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

其中，步骤（i）中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比升高了。优选地，所述对象在所述较早时间点时没有患上CKD或者患有较低阶段的CKD。

替代性或附加性地，测试体样本中MIC-1的上升量可通过与正常对象进行比较而检测出来，例如，通过：

（i）测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；且

（ii）将测得的所述MIC-1的量与取自正常对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

其中，步骤（i）中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比升高了。

在这里，术语“正常对象”是指从比较体样本提取之日起10年内不会由于意外事故或灾难之外的原因而死亡的对象。优选地，所述正常对象是年龄相匹配的，其中，正常对象的年龄与被提取有关测试体样本的所述对象的年龄相差不超过10岁。更优选地，所述正常对象的年龄与被提取有关测试体样本的所述对象的年龄相差不超过5岁。

替代性地，测试体样本中MIC-1的上升量可通过与终末期肾病对象比较而检测出来，例如，通过：

（i）测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；以及

（ii）将测得的所述MIC-1的量与取自至少一个已被诊断为患有终末期肾病的其他对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

这使得，当步骤（i）中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比升高了时，测试对象与至少一个其它对象相比，死亡可能性上升了。本领域技术人员也会理解，当步骤（i）中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比降低了时，测试对象与至少一个其它对象相比，死亡可能性降低了。优选地，所述至少一个其它对象与被提取有关测试体样本的所述对象的年龄相匹配、相差不超过10岁。更优选地，所述至少一个其它对象的年龄与被提取有关测试体样本的所述对象的年龄相差不超过5岁。优选地，在本例中，步骤（ii）的比较是将测得的所述MIC-1的量与一组被诊断为患有终末期肾病的对象的平均血清MIC-1水平进行比较。

本领域技术人员将会明白，也可将测试体样本中MIC-1的量与一数据集进行比较，所述数据集包括与上述对象或包括上述对象的人群中的任何人的MIC-1水平有关的信息。

针对本发明的目的，MIC-1的上升量也可通过与MIC-1参考量比较而检测出来，已知所述MIC-1参考量与CKD对象（例如终末期肾病对象）死亡可能性的上升相关联，其中，所述参考量比取自正常对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围要高。

因此，在第二个方面中，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测CKD测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括以下步骤：（i）测定取自所述对象的测试体样本中MIC-1的量；以及（ii）将步骤（i）中测得的MIC-1的量与MIC-1参考量进行比较，所述MIC-1参考量为与所述对象的死亡可能性上升相关联的MIC-1的上升量；

所述第二方面的方法可进一步包括以下步骤：

（iii）基于步骤（ii）的比较建立预测，从而使得，当步骤（i）中测得的MIC-1的量大于或约等于所述参考量时，所述对象具有上升的死亡可能性，而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于所述参考量时，所述对象具有下降的死亡可能性。

优选地，在本发明第二个方面的方法中检测的MIC-1是成熟人MIC-1蛋白、D6成熟人MIC-1变体蛋白和/或其异源二聚体。MIC-1的上升量如本发明第一方面中所述。所述测试体样本也如所述第一方面所述，但优选地，所述测试体样本选自全血、血浆、血清和尿液。

所述第二方面的方法使得MIC-1参考量能够用作预后指标，其中，可以简单地将测试体样本中MIC-1的量与所述参考量进行比较。但是，这种方法的灵敏性和特异性不仅取决于所述方法的分析“质量”，还取决于“什么构成异常结果”的定义。也就是说，通常对于任何特定指标而言，对于患病和未患病的对象，指标水平的分布重叠，这使得基于该指标的诊断/预后测试不能完全准确地绝对区分正常对象和患病对象。因此，在有些实施例中，所述方法还包括，通过例如绘制MIC-1量值与“正常”人群和“患病”人群中该值的相对频率的关系图来计算受试者工作特征（ROC）曲线。用这种方式计算得出的ROC曲线下方的面积可用作可能性测量值，测试体样本中MIC-1的测定量将使人们能够准确地预测死亡可能性。此外，ROC曲线也可用在这种场合：不管是什么原因，MIC-1的测定量被认为是不准确的，因为只要可以对结果进行分级，ROC曲线就仍可计算；例如，来自CKD对象的体样本的测定MIC-1量可以根据程度分级（即1=低，2=正常，而3=高）——接着将这种分级与正常对象人群中的结果相关联，并根据本领域技术人员熟知的方法（例如，HanleyandMcNeil,1982）创建ROC曲线。

在所述第二方面的方法的一实施例中，本发明提供一种用于预测终末期肾病对象的死亡可能性的方法。当其用于患有终末期肾病的对象时，用该方法获得的预测可以预知那些如果不进行肾移植就不可能生存的对象。

因此，在第三方面中，本发明提供一种选择用于肾移植的终末期肾病测试对象的方法，该方法包括对取自所述对象的测试体样本中MIC-1的上升量进行检测，其中，MIC-1的上升量与不进行肾移植时所述对象死亡率的上升相关联。

在一个实施例中，所述第三方面的方法包括以下步骤：

（i）测定取自所述对象的测试体样本中MIC-1的量；和

在所述第三方面的方法的另一实施例中，测试体样本中的MIC-1上升量可以用一系列测试方法予以检测：

（i）测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；和

在所述第三方面的方法的又一实施例中，测试体样本中MIC-1的上升量可通过与正常对象进行比较而检测出来：

（i）测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；且

第三方面的方法还包括以下步骤：（iii）基于步骤（ii）的比较来选择用于肾移植的终末期肾病对象，从而，当步骤（i）中测得的MIC-1的量大于或约等于参考量时，选择所述对象用于肾移植，而当步骤（i）中测得的MIC-1的量小于参考量时，不选择所述对象用于肾移植。

优选地，在第三方面的方法中检测的MIC-1为成熟人MIC-1蛋白、D6成熟人MIC-1变体蛋白和/或其异源二聚体。MIC-1的上升量可如第一方面中所述，因此，可将其与参考量（如上所述）进行比较，以选择用于肾移植的终末期肾病测试对象，其中，所述参考量已知与不进行肾移植时的死亡风险上升相关联（即：当测得的测试体样本中MIC的量大于或约等于参考量时，选择所述对象做肾移植，而当测得的测试体样本中MIC的量小于参考量时，不选择所述对象做肾移植）。所述测试体样本如第一方面中所述，但是优选地，所述测试体样本选自：全血、血浆、血清和尿液。

本发明还实现了这一点：MIC-1水平往往低于那些能够忍受长期透析的CKD对象的MIC-1水平。

在第四方面，本发明提供一种评估正接受透析的终末期肾病测试对象对透析的耐受性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-1的上升量，其中，所述MIC-1的上升量与（所述对象）对透析的耐受性差相关联。

所述第四个方面的方法优选包括以下步骤：

（i）检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-1的量；以及

优选地，在第四方面的方法中测得的MIC-1为成熟人MIC-1蛋白、D6成熟人MIC-1变体蛋白和/或其异源二聚体。所述测试体样本如第一方面中所述，但是优选地，所述测试体样本选自：全血、血浆、血清和尿液。

根据第四方面的方法，测试体样本中MIC-1的量可用于评估正接受透析的终末期肾病测试对象对透析的耐受性，其中，如果测得（测试体对象的）MIC-1的量，相对于例如一个或多个具有长期透析耐受史、优选为年龄匹配的终末期肾病对象而言，上升了的话，则说明所述对象对透析的耐受性差；如果测得（测试体对象的）MIC-1的量，相对于例如一个或多个具有长期透析耐受史、优选为年龄匹配的终末期肾病对象而言，基本相等或减少了的话，则说明所述对象对透析的耐受性可以接受或耐受性好；而如果MIC-1的量与透析开始前后的较早时间点测得的MIC-1量相比基本没变（即稳定）或减少了的话，则说明该对象对透析的耐受性可以接受或良好。

本发明的方法可以在体内或体外进行。但是，优选地，所述方法在体内进行。

对于在体内进行的方法，测试体样本中存在的MIC-1的量可以用任何合适的方法容易地测定，所述合适的方法包括，例如：利用抗-MIC-1抗体或其片段进行免疫测定如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)或免疫组织化学测定(例如用组织活检的分段抽样样本)。抗MIC-1抗体及其片段可以用本领域技术人员熟知的任何方法来制得。但是，可以用本领域技术人员熟知的其它方法来检测和量化所述MIC-1水平，例如，这些方法包括检测MIC-1与MIC-1受体的结合（如文献WO2009/21293所述），或者检测MIC-1与任何可以与MIC-1结合的其它配体的结合（如文献WO2005/99746中所述的胎球蛋白）。特别适合用来测定测试体样本内存在的MIC-1量的方法是利用各种夹心混合、竞争（competition）或其它测试形式中的标记分子的免疫测定方法。这类免疫测定会产生表明MIC-1是否存在的信号。此外，这类免疫测定所产生的信号的强度可与样本中存在的MIC-1的量直接或间接相关（例如，成反比）。其它特别适合用于测定测试体样本中存在的MIC-1的量的方法包括：测定MIC-1的具体物理或化学性质，如精确分子量或核磁共振（NMR）谱。因此，这些方法可以用连接至免疫测定仪、生物芯片、分析设备如质谱仪、核磁共振仪或色谱仪的生物传感器、光学设备来进行。其它特别适合用于测定测试体样本中存在的MIC-1量的方法包括微板ELISA基方法、全自动或机器人免疫测定法（例如，可以采用Elecsys?分析仪，美国印第安纳州印第安纳波利斯市的RocheDiagnosticsCorporation公司生产）、酶钴结合分析法（CBA）（例如可以用Roche-Hitachi分析仪进行）。还有一些特别适合用于测定测试体样本中存在的MIC-1量的方法，包括：涉及沉淀法（如免疫沉淀反应）、化学光电法（即电致化学发光）、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、离解-增强-镧系元素荧光免疫分析法(DELFIA)、闪烁亲近测定法(SPA)、湿度法、悬液法和乳胶增强免疫比浊法。另一些本领域技术人员悉知的方法如凝胶电泳法、免疫印迹法和质谱法可以单独使用，也可以与上述其它合适方法结合使用。

同样地，对测试体样本中MIC-1量的测定可包括以下步骤：（i）使MIC-1与特定配体接触，（ii）选择性地除去未结合的配体，和（iii）测定已结合的配体的量。所述已结合的配体（可通过共价或非共价结合方式结合）会产生强烈信号。如上文所述，所述配体选自抗MIC-1抗体或其片段，但也可以是任何其它可与MIC-1结合的配体，例如：任何与MIC-1结合的化合物（包括缩氨酸、多肽、核酸、适体如核酸或缩氨酸适体、糖蛋白如胎球蛋白、以及小分子）。但优选地，所述配体选自抗MIC-1抗体或其片段（包括多克隆和单克隆抗体及其片段，如能够与MIC-1结合的Fv、Fab和F(ab)₂片段，以及重组抗体如单链抗体（如scFV抗体）和MIC-1受体（如文献WO2009/21293所述）或其片段），包括至少一个与MIC-1结合的结合域。这类配体的制备方法是本领域技术人员熟知的。

优选地，所述配体特定地与MIC-1结合。在此，术语“特定地与……结合”及类似表达是指所述配体基本上不与其它缩氨酸、多肽或测试体样本内存在的物质结合（即交叉反应）。优选地，特定地结合的MIC-1比任何其它有关缩氨酸、多肽或物质高至少3倍、更优选至少10倍、最优选至少50倍。非特定性结合也是可以容许的，如果其仍能够明确地区分和测量的话，例如，根据其在免疫印迹上的尺寸、或者通过样本内MIC-1的相对较高的富集度进行区分和测量，或者如果其可控，以作为消极对照样本或正常对象对照样本。

所述配体可以共价或非共价连接至标记允许方向和配体的测量物。可以采用本领域技术人员熟知的任何直接或间接方法来进行合适的标记。不过，简单地说，直接标记包括将标记物直接结合（共价或非共价）至所述配体，而间接标记包括将第二配体结合（共价或非共价）至所述配体（即第一配体），其中，所述第二配体特定地与所述第一配体相结合，且可与合适的标记物结合、或者成为与第二配体结合的第三配体的标靶（受体）。第二、第三或更高阶配体的使用可用于增强所述信号。合适的第二和更高阶配体可包括抗体、第二抗体、以及已知的链球菌抗生物素蛋白-生物素系统（美国加利福尼亚州Vector实验室）。所述配体也可以带有本领域技术人员熟知的一个或多个标签，这些标签是更高阶配体的标靶。合适的标签包括生物素、地高辛配基、His-Tag标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、绿色荧光蛋白(GFP)、myc基因标签、A型流感病毒血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等等。其中所述配体为蛋白、缩氨酸或多肽，所述标签优选位于氮端和/或碳端。合适的标志物包括能够用合适的检测方法检测到的所有标志物，例如：金粒、乳珠、吖啶酯、发光氨、钌、酶活性标记物、放射性标记物、磁性标记物（例如磁珠，包括顺磁性和超顺磁性标记物）、以及荧光标记物。合适的酶活性标记物包括，例如：山葵过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-牛乳糖、荧光素酶及其衍生物。用于使酶活性标记物能够被检测到的合适底物包括对二氨基联苯（DAB）、3,3'-5,5'-四甲基对二氨基联苯、4-硝基氯化四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT-BCIP)，这些可以从RocheDiagnosticsCorporation公司、CDP-Star?(美国康涅狄格州费厄菲尔德市AmershamBiosciencesInc公司生产)和ECF?(AmershamBiosciencesInc)处购得。合适的放射性标志物包括³⁵S、¹²⁵I、³²P、³³P等。放射性标志物可以用本领域技术人员已知的任何方法检测出来，包括，例如：光敏膜或磷光体成像仪。合适的荧光标志物包括荧光蛋白（例如GFP及其衍生物，Cy3,Cy5,德克萨斯红,荧光素,以及Alexa染料(例如Alexa568))。预期也可使用量子点作为荧光标志物。

在一些实施例中，测试体样本中MIC-1的量可以按如下步骤测定：（i）使含有上述用于MIC-1的配体的固体支撑物与含有MIC-1的测试体样本接触，然后（ii）测定与所述支撑物结合的MIC-1的量。优选地，在这种实施例中，所述配体选自：核酸、缩氨酸、多肽、抗体和aptamer，以及优选地，所述配体以不可动的方式设置在所述固体支撑物上。所述固体支撑物可以由本领域技术人员已知的任何典型材料制成，包括但不限于：市售柱状材料、聚苯乙烯颗粒、橡胶颗粒、磁性颗粒、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅片及表面、硝化纤维条、膜、片、Duracyte、合适反应托盘如96孔板和其它板的孔和壁、塑料管，等等。这种实施例中使用的配体也可与合适的载体结合，例如：玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯（PVC）、聚苯乙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、右旋糖酐、尼龙、多糖、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁。载体的性质可以是可溶的或不溶的。用于将配体固定至所述固体支撑物的合适方法是本领域技术人员已知的，且包括，例如：离子法、憎水法、共价相互作用，等等。预期也可采用“悬浮阵列”(NolanandSklae,2002)，其中，载体如微珠或微球存在于悬浮液中，所述阵列由不同的微珠或微球组成，这些微珠或微球可能被标记了，并载有不同的配体。制备这种阵列的方法，例如基于固相化学和光依赖保护组的方法，是本领域技术人员已知的（参见，例如美国专利号5,744,305）。

在本发明的一些实施例中，测试对象需要肾替代疗法。应当理解，肾替代疗法可以是暂时的，也可以是无限期的，如上文所述。

本申请人发现，MIC-1水平可用作独立的死亡率预测因子。在此，术语“死亡率预测因子”是指对象体内可被测量或考虑、以确定死亡可能性的医学因子。术语“独立的死亡率预测因子”是指所述因子（即MIC水平）能够在不考虑任何其它因素（同步或非同步测量的）的前提下预测死亡可能性。因此，在第一和第二方面的方法的有些实施例中，MIC-1的上升量被用作独立的死亡率预测因子。但是，根据本发明的这些方法可以替代性地与其它死亡率预测因子结合使用。例如，所述方法可以与BMI、白细胞介素-6（IL-6）水平、C-反应性蛋白（CRP）水平和/或短端粒长度（DeMeyeretal,2008）结合起来作为死亡率预测因子。因此，当MIC-1处于或超过预定水平时，在测定MIC-1的同时也测定BMI和/或CRP，可以预测CKD对象的死亡可能性。

本申请人还意识到，突发性CKD对象体内的血清MIC-1水平独立于主观全面营养评估法(SGA)评分值。此外，MIC-1在体重调节中的作用（Johenetal,2007），以及MIC-1在发炎性过程中的突出作用（Brownetal,2002b;Brownetal,2007）表明其它因素与血清MIC-1浓度相关联。本申请人已经认识到，CKD对象的MIC-1水平与BMI的脂肪成分（FBMI）、以及纤维蛋白原水平和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平无关，这表明血清MIC-1是一个重要的、且以前并不知道的连接物，连接在发炎、氧化应激和肾衰竭中的营养不良之间，这些都被认为是终末期肾病中死亡率的决定因素。

因此，本发明的方法可以与选自以下各项的至少一种其它预测因子结合起来使用：体重减轻，BMI降低，FBMI降低，SGA降低，糖尿病史，心血管疾病史，以及血清炎症标记物水平（例如C-反应性蛋白（CRP）水平和纤维蛋白原水平）上升和氧化标记物水平（如8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG））上升；其中，所述死亡率的至少一个其它预测因子处于或超过预定的切断点。对于上述每个用来预测死亡率的死亡率预测因子而言，合适的切断点是本领域技术人员已知的。

在本发明的方法的一些实施例中，可以用风险分析法来预测死亡可能性。例如，可以用参数比例风险模型、半参数比例风险模型、衰退模型或Poisson衰退模型来预测死亡可能性。这些模型是本领域技术人员熟知的，包括Cox比例风险模型、Weibull比例风险模型和Cox衰退模型。

在第五方面，本发明提供了一种防止（即延迟）CKD对象、特别是患有终末期肾病的CKD对象死亡或降低其死亡风险的方法，包括（在体内或体外）对所述对象的血液（例如全血）、血浆或血清进行处理，以除去或钝化所述血液、血浆或血清中存在的MIC-1。

合适的体内血液处理可包括施加有效量的MIC-1抑制剂，如文献WO2005/099746所述；该文献的全部内容在此予以引用。

合适的体外血液处理方法可包括以下步骤：

（i）提供用于结合MIC-1的合适底物；

（ii）对从对象处取得的血液、血浆或血清进行处理，即：将所述血液、血浆或血清在体外与所述底物接触，从而使得所述血液、血浆或血清中存在的MIC-1与所述底物相结合；

（iii）将处理过的血液、血浆或血清与所述底物分离；然后

（iv）将处理过的血液、血浆或血清返回给所述对象。

这样一种处理过程如文献WO2009/046495所述；该文献的全部内容在此予以引用。

在本发明的一个实施例中，所述测试对象患有终末期肾病。优选地，所述测试对象需要肾替代疗法。在一些实施例中，测试对象曾接受过1个月至30年的肾替代治疗。优选地，测试对象曾接受过约1个月至约10年、更优选约1个月至约5年的肾替代治疗。最优选地，测试对象曾接受过约3年的肾替代治疗。

下面用非限制性实施例结合附图来对本发明作详细描述。

实施例

实施例1病人队列

材料和方法

在研究进入阶段，测定来自瑞典的偶然血液透析病人队列（n=98）（即：已经到了需要透析的阶段但还没有进行透析治疗的病人）和来自美国的已进行血液透析的病人（n=381）的血清MIC-1及C-反应性蛋白（CRP）-4水平及BMI。血清CRP-4（美国伊利诺斯州迪尔费尔德市DadeBehring,Inc.公司提供）的测定如文献Brownetal.(2002a)所述；血清MIC-1的测定如下文所述。收集到的人口统计学信息包括年龄、性别、心血管病史（CVD）、糖尿病史（DM）、身高和体重。且评估了瑞典病人的营养状况、身体成分和炎症的附加标记物。

瑞典队列

瑞典病人是参加了位于Huddinge的Karolinska大学医院在1997-2004年的透析计划的、患有终末期肾病的易发透析病人。他们都是正在进行的前瞻性研究的参与者，他们中的一部分前人已有描述（Axelssonetal,2006）。研究排除了以下病人：年龄在18岁以下或70岁以上，具有急性感染的临床迹象，在评估时患有急性血管炎或肝病，或者不愿意参与研究。在前一夜快速抽取静脉血液样本并在70℃贮藏，以用于生物化学分析。通过肌酐和尿素清除进行评估，用常规方法从24小时尿样（即：在一整天内收集的尿样）计算肾小球滤过率。用常规方法来进行其它生物化学分析，包括测量血清8-羟基去氧鸟苷（8-OHdG；作为氧化应激测量值）、血清肌酐和白蛋白。通过主观全面营养评估法(SGA)(Qureshietal,1998)、用包括以下六种不同项目的调查表来评估营养状况：由病人进行的三项主观评估，涉及病人的体重减轻历史，厌食的影响范围，呕吐的影响范围；以及由评估者进行的三项客观评估，其基于肌肉萎缩症（MA）、水肿和皮下脂肪减少的发生。通过经过特别训练的护士检查颞的肌肉、锁骨的突出、肩部的轮廓（圆弧形代表营养良好，方形代表营养不良）、肩胛骨的可见度、肋骨的可见度、拇指和食指之间的骨间肌肉质量、以及四头肌质量来评估MA的等级。MA迹象的评分如下：1，没有MA迹象；2，轻微的MA迹象；3，中等MA迹象；4，严重的MA迹象。这一评估或者在采集血样时完成，或者在血样采集后1周内完成。体重指数（BMI）被计算为质量（kg）/高度的平方（m²）。通过双能量X射线吸光测定法（DXA）、用DPX-L设备（美国威斯康辛州麦迪逊市的LunarCorporation生产）来估计BMI的瘦肉成分（leancomponentofBMI，即LBMI），如前文所述（Kyleetal.,2003）。BMI的脂肪成分（fatcomponentofBMI，即FBMI）用前人文献(Kyleetal.,2003)中描述的方法来计算。用Harpenden握力计（美国密西西比州杰克逊市的Yamar提供）来评估主动和从动臂中的握力强度（HGS）。重复测量三次握力强度，记录最高值。为了肾移植，检查病人暴露情况（n=48）。移植后，病人被分级为从进入研究到移植时为活的，这一段时间为暴露时间。

美国队列

从1998年4月到1999年3月，在美国明尼苏达州州明尼阿波利斯-圣保罗市所有门诊透析单位找了381位患有终末期肾病的血液透析病人，这些病人在至少30天内、每三星期一次、间歇性地接受血液透析。从每位病人处获取预透析血样（即：在三星期一次的规律性透析开始之前的样本）。接受研究的病人前人已报道（Appleetal,2002）的原始终末期肾病病人数据库的子群，这些病人留有足够体积的血清样本（70℃冰冻），以备另外的生物标志物分析。检查用于肾移植的病人暴露（n=18），血液透析的停止（n=1）和病人转往其它肾病研究单位（n=16）的情况。

统计分析

除了用p<0.05表示重要性（significance）之外，其余结果均表示为平均±标准差。对于连续的和分类的变数，分别用不成对的t检验法和卡方检验法分析法来对队列进行比较。由于许多值不是正常分布的，通过Spearman等级测试法来计算标志物之间的相关性。对具有不同MIC-1水平的病人之间的累积生存率差异进行比较。暴露时间的计算是从抽血日期开始一直计算到死亡日期，首先检查关注的时间间隔的长度。在瑞典队列和美国队列中，肾移植导致病人被被归类为经过检查的且暴露被计入移植时间。此外，转院到其它透析机构的美国病人（n=16）被归类为经过检查的且暴露时间计入移植时间。用Cox比例风险模型估计出未调节和调节过的死亡的相对风险（RR）以及95%的置信区间。在第一适配模型后，用前面分析中识别为独立风险因子的变量来估计调节过的RR。用Kaplan-Meier法计算生存曲线，并用数秩统计法在风险层化组之间进行比较。用StatView5.0软件（美国北卡罗来纳州卡里市的SASInc.公司提供）进行分析。

MIC-1血清水平的测定

MIC-1血清水平的测定如Brown等人（2002）用MIC-1夹心ELISA所进行的测定所述。简单地说，利用用于捕获抗原的小鼠单克隆抗体(MAb)26G6H6(参见文献Brownetal,2002a;Mooreetal,2000)，以及用于检测的绵羊多克隆抗体(PAb)233B3-P(参见文献Brownetal,2002a)，建立夹心ELISA。确定两种抗体的最佳浓度，以备下步研究。在96孔MaxisorpELISA板上涂上MAb26G6H6，该MAb26G6H6以1:5的比例在4℃的涂敷缓冲液（0.1mol/L碳酸蒸馏水溶液，pH值为9.4-9.8）稀释了24小时（最终浓度为约20ng/mL）。接着用每孔300μL、1%(wt/vol)的牛血清白蛋白（BSA）在37℃磷酸缓冲液（PBS）中稀释2小时后的混合物将ELISA板洗涤三遍。接着向所述板中加入重组细胞人MIC-1（rhMIC-1）标准、组织培养上清液、或病人血清（100μL/孔），并在37℃培育1小时。将所述板清洗三次，然后加入100μL/孔的绵羊PAb233B3-P，并在37℃培育1小时，其中，所述绵羊PAb233B3-P按1:5000的比例稀释在在抗体稀释液（含有1%(wt/vol)BSA和0.05%(vol/vol)Tween-20的PBS）中。然后将ELISA板清洗三遍，按100μL/孔的添加量加入生物素驴抗绵羊IgG，并在37℃培育1小时，其中，所述生物素驴抗绵羊IgG按1:5000的比例稀释在Abdil中。将所述板清洗四次，然后按100μL/孔的添加量加入过氧化物酶底物（1mg/mL，邻苯二胺盐酸盐,Sigma公司产品），该底物位于含有0.014%H₂O₂,pH值为5.0的、0.05mol/L的磷酸-柠檬酸缓冲液（Sigma公司产品）中。让颜色改变过程在5-15分钟内发生，并通过添加100μL/孔的浓度为4N的硫酸来停止该变色过程。在微板阅读器中的490nm处测量吸光率。通过与rhMIC-1标准曲线进行比较来测定样本中人MIC-1的浓度。用具有微板阅读器的标准曲线适配软件（PasteurDiagnostics公司产品）来构建标准曲线。在将该标准与高度纯化的重组细胞MIC-1主要标准进行比较的基础上，确定所述标准曲线中rhMIC-1的浓度。通过全部氨基酸成分的8个估算值的平均值来确定主要标准蛋白浓度。所有样本都在至少两个场合分析三次。结果呈现为平均+/-SD。

结论

表2概括了两队列病人的临床特性和人口统计学信息。两队列的BMI关键测量值、血清MIC-1和CRP水平没有大的差异（分别地，p=0.5117,0.9672和0.0902；不成对t检验法）。患有CKD的AH病人的血清MIC-1水平超过了200-1150pg/ml的正常范围（Brownetal,2003）。

表2人口统计学和临床测量值

数据表示为绝对数（百分比）或平均值（±SD）。

在98名瑞典病人中，平均年龄为53岁，且58人（59%）为男性。平均的病人随访时间为5.5年（范围：1.2年至13.2年），在319随访病年内总共有36名病人死亡。有心血管病史和/或心肌萎缩的临床症状的病人为29名（30%），且28人（30%）患有糖尿病，这一数字大大低于美国队列（p=0.0023，卡方检验法）。

在381名美国病人中，平均年龄为61岁，明显比瑞典队列中病人的年龄要大（p＜0.0001，不成对t检验法），58%为男性。有糖尿病和冠心病（CAD）史分别占全部病人的46%和30%。平均透析年数为2.0年（范围：0.1-22年）。平均随访时间为1.6年（范围：41天至3年），在615随访病年内总共有108人死亡。

实施例2瑞典队列的血清MIC-1与主观全面营养评估(SGA)分值的相关性

关于美国队列的数据前人已经公开，这些数据表明：血清MIC-1水平与BMI负相关（Johenetal,2007）。为了进一步研究与血清MIC-1水平上升有关的营养变化，本申请人分析了获得的瑞典病人的营养信息数据。

结果和讨论

将SGA评分分为正常（SGA=1，n=69）和不正常（SGA>1,n=27）两组，另有2位病人没有此数据。SGA评分与S-肌酐（p=0.0050）、BMI（p=0.0051）、握力（p=0.0016）和血清MIC-1水平（p=0.0065）高度相关。血清MIC-1水平高于中值（7430pg/ml）的病人更有可能具有不正常的SGA分数（p=0.0001，卡方检验法）。高于中值的血清MIC-1水平与多因素逻辑回归模型独立相关（表3）。进一步调整该模型中与MIC-1有关的因素，特别是调整年龄（Brownetal.,2006,p=0.7024）和CRP-5（Brownetal.2002b,p=0.1840）。据观察，MIC-1与SGA的独立相关性没有明显衰减。

表3瑞典队列SGA分值的多元逻辑回归

血清MIC-1水平与SGA分值之间的独立关系、MIC-1在体重调节中的作用（Johenetal.,2007）以及MIC-1在炎症过程中的突出参与（Brownetal.,2002b;Brownetal.,2007）表明：调查与血清MIC-1浓度有关的其它因素是有价值的。

实施例3瑞典队列的血清MCI-1水平与炎症和氧化损伤的营养和标志物的相关性

考查血清MIC-1水平与炎症的循环标志物（CRP，纤维蛋白原）和氧化的循环标志物（8OHdG）、肌肉萎缩、BMI以及年龄之间的关系。

结果与讨论

如表4所示，将瑞典队列病人的血清MIC-1水平与炎症循环标志物（CRP，纤维蛋白原）水平、氧化作用循环标志物（8OHdG）水平和年龄进行比较，这些因素可能是终末期肾病中的死亡率指示因子。用斯皮尔曼秩相关测试（Spearmanrankcorrelationtesting）进行的初始单因素分析表明：血清MIC-1水平与年龄（ρ=0.252,p=0.0135）、CRP（ρ=0.283,p=0.0056）、纤维蛋白原（ρ=0.346,p=0.0018）、8-OHdG(ρ=0.308,p=0.0033)、和血清蛋白素（ρ=-0.211,p=0.0388）相关。血清MIC-1水平与肌肉萎缩没有作为连续变量的显著相关性；但是，观察到高于中值的血清水平（与肌肉萎缩）之间的强烈趋势（p=0.0514）。类似地，血清MIC-1水平与BMI没有作为连续变量的显著相关性；但是，观察到高于中值的血清水平与BMI之间的强烈趋势（p=0.0612）。另外，血清MIC-1水平高于中值的病人更可能具有25kg/m²以下的BMI（p=0.0251）。当进行向后逐步多元回归分析时，BMI的脂肪成分（即FBMI）仍然保持了与MIC-1血清水平的独立相关性（p=0.0004），纤维蛋白原(p=0.0007)和血清8-OHdG(p=0.0485)水平也是一样。该分析最初包括所有检测的变量（表4），并逐步排除与血清MIC-1没有显著相关性的因素。

这些结果表明，MIC-1与FBMI以及纤维蛋白原和8-OHdG独立相关，这表明血清MIC-1是肾衰竭中的炎症、氧化应激和营养减少（这些都被认为是终末期肾病中死亡率的决定因素）之间的重要的、以前没有认识到的连接环节。

表4瑞典队列中与血清MIC-1水平相关的因素

实施例4血清MIC-1对瑞典队列中血液透析病人死亡率的预测

本申请人试图确定血清MIC-1水平对血液透析病人死亡率的预测性。

结果与讨论

将98名瑞典病人相对于血清MIC-1中值水平（7430pg/ml）归为两类：高于所述中值水平的和低于所述中值水平的。Kaplan-Meier分析表明，高于所述中值的MIC-1血清水平与死亡率的显著上升相关（p=0.0105，图2）。在超过13年的观察期中，血清MIC-1水平高于所述中值的病人的存活率为53%，而与此相比，血清MIC-1水平低于所述中值的病人的存活率为73%。

当将血清MIC-1水平与年龄、性别、BMI、CRP水平、以及CVD/DM和GFR病史一起进行多元分析时，血清MIC-1水平是其中最强的死亡率独立预测因子（p=0.01840，多元Cox比例风险模型），而CRP水平及BMI不与死亡率独立相关（表5）。因此，血清MIC-1水平是最强的血清标志物死亡预测因子。

CKD病人常常具有与明显炎症有关的蛋白能量浪费，这可通过循环炎症标志物和氧化应激标志物的上升来确定。氧化损伤被认为是使CKD进展中出现慢性炎症状态的原因。在该队列中，血清MIC-1还与BMI以及营养测量值SGA相关，与BMI和CRP无关。只有BMI、FBMI、纤维蛋白原和8-OHDG、氧化应激的体内测量值的其中之一与血清MIC-1水平独立相关，这表明：MIC-1是CKD中氧化应激、炎症、BMI降低和死亡率之间重要的、以前不为人知的连接环节。这些结果表明：血清MIC-1水平与炎症和氧化应激的循环标志物显著相关。

因此，这些结果表明：血清MIC-1水平可用作终末期肾病中全死因死亡率的预测标志物。有了这些结果后，对第二独立队列进行分析，以对血清MCI-1测量值作为终末期肾衰竭的死亡率预测因子进行验证。

表5对偶然血液透析和长期血液透析病人的全死因死亡率的多元Cox比例风险分析

*DV（dialysisvintage）=透析年份

实施例5血清MIC-1水平对第一个三年透析中死亡率的预测

本申请人研究了MIC-1是否能够预测长期透析病人的死亡率。

结果与讨论

与偶然透析的瑞典队列相反，美国队列在血清MIC-1测定之前已经进行了30天至22年的透析。研究发现，血清MIC-1水平与透析年份（DV）（ρ=0.182,p=0.0004）和BMI（ρ=-0.224,p<0.0001）显著相关。不过，在多元回归分析中，当加入了DV时，只有BMI才与MIC-1独立相关（p=0.0019）。血清MIC-1水平预测了长期血液透析病人的死亡率（p=0.0047，表5）。此外，当针对年龄、性别、DV和CVD/DM病史对血清MIC-1水平进行调整之后，血清MIC-1在研究完成时仍然是死亡率的独立预测因子（p=0.0420，表5）。针对CRP和BMI作进一步的调整会明显减弱MIC-1的预测功能。与对瑞典病人的观察结果相反，长期透析的美国病人的MIC-1水平中值不能独立地预测死亡率（数据未示出）。但是，该长期透析队列中的病人在透析开始后被取样，这可能改变了血清MIC-1浓度。因此，在透析的不同时间检测血清MIC-1水平与死亡风险之间的关系。

在偶然透析的瑞典肾衰竭病人中，在透析后的第一个三年中，病人的血清MIC-1水平（有根据年龄、性别、GFR和CVD/DM病史作调整）与死亡风险之间的相关性很高（对于整个队列，RR=1.16,95%CI=1.03-1.38;对于DV>l年的病人,RR=1.16,95%CI=1.03-1.38;对于DV>2年的病人,RR=1.08,95%CI=0.94-1.23;对于DV>3年的病人,RR=0.98,95%CI=0.82-1.17;图2）。类似地，在381名长期透析的美国病人中，血清MIC-1水平在针对年龄、性别、DV以及CVD/DM病史作出调整后，也可预测接受过3年或3年以下透析的病人的死亡率（对于整个队列，RR=1.04,95%CI=1.00-1.07;对于DV>l年的病人,RR=1.04,95%CI=1.01-1.08;对于DV>2年的病人,RR=1.04,95%CI=1.01-1.08;对于DV>3年的病人,RR=1.03,95%CI=0.98-1.10）。考虑到MIC-1在采样后第一个三年内对偶然透析病人（瑞典队列）和长期透析病人（美国队列）的预测能力，因此接下来检测血清MIC-1水平预测长期透析的美国队列中接受过3年或3年以下透析的病人的死亡率的作用。

实施例6血清MIC-1是美国队列内终末期肾病中早期死亡率的预测因子

检验血清MIC-1水平对接受过3年或3年以下透析的病人的死亡率的预测能力。

结果与讨论

在149名来自美国队列的、研究结束时接受过3年或以下透析的长期透析病人中，46人死亡，且发现他们的血清MIC-1水平是多元分析中死亡率的独立预测因子（p=0.0320，表6）。用Kaplan-Meier分析法，血清MIC-1水平大于所述中值（即6300pg/ml）的病人在第一个三年中的死亡风险上升（p=0.0124，图3A）。当将偶然透析病人与具有3年或以下透析史的长期透析病人进行比较时发现，接受透析的病人的血清MIC-1中值显著降低（即：对于瑞典队列中的偶然透析病人，该中值为7430pg/ml；而与此相比，对于美国队列中的长期透析病人，该中值为6330pg/ml，p=0.0136），这表明：透析会降低血清MIC-1水平。虽然不希望受到理论约束，但由此推测，血清MIC-1水平处于顶端10%的病人具有更高的死亡风险，且不能通过透析显著地降低该风险，对这顶端10%的病人进行重新分析并分层。研究发现，接受过3年以下透析、且血清MIC-1水平处于顶端10%（>14200pg/ml）的病人的死亡风险显著上升（p=0.0083，图3B），且具有根据年龄、CRP、BMI、DM和IHD病史调整的2.4的相对死亡风险（95%CI1.1-5.2）。当对全部长期透析病人进行考查时发现，处于顶端10%（对于整个队列，>14200pg/ml）的病人的死亡率为50%（p=0.0048，图3C），且大于142000pg/ml的血清MIC-1水平仍是死亡率的独立预测因子（当根据年龄、CRP、BMI、DM和IHD病史及研究进入阶段的透析时长进行调整后，n=381,RR1.9,95%CI1.1-3.2）。

因此，血清MIC-1水平是死亡率的额外预测因子，其表现出与CRP相等或更高的预测能力，并独立于传统标志物。血清MIC-1水平在两个队列中透析的第一个三年内都保持了预测能力。受试的瑞典病人在进行肾替代疗法之前进行取样，其糖尿病人较少，且较为年轻，而受试的长期透析美国队列在透析后进行取样。这些病人情况的差异可能较大地影响了血清MIC-1水平对美国队列中死亡率的预测能力，对透析与血清MIC-1水平降低之间的关联性的发现表明了这一点。但MIC-1可以有效地作为经历过3年或以下透析史的长期透析病人的死亡率的独立标志物。因此，在过程导致死亡的前提下，透析导致的MIC-1水平的降低不会显著地影响MIC-1的功效。另外，不管透析时间如何，血清MIC-1水平处于顶端10%的病人的死亡率均大大上升。

表6对研究结束时接受过3年或3年以下透析的病人的全死因死亡率的多元Cox比例风险分析

因此，血清MIC-1水平作为偶然和长期透析病人的全死因死亡率的准标志物的预测价值已经得到证明。另外，MIC-1可以是CKD中炎症、氧化应激和恶病质的中介物。CKD的发生率在不断上升，肾移植需求持续超过了可用的器官，这导致等待移植的透析病人显著发病率和死亡率。显然，将那些不能忍受长期透析的病人区分出来的能力为合理化地分配器官提供了途径。

虽然前面已经详细描述了本发明的方法的优选实施方式，但应当理解，本发明不限于所公开的具体实施方式，而能够在不脱离本发明范围的前提下做出许多调整、改变和替代。

在本说明书中，词语“包括”或其变种如“包含”、“具有”等，应被理解为暗示包含所述及的元素、整体或步骤，或元素、整体或步骤的群集，但不排除任何其它元素、整体或步骤，或元素、整体或步骤的群集。

在此援引本说明书中提及的所有出版物。本说明书中包括的任何关于文件、行为、材料、设备、论文等的讨论专为本发明的特定上下文背景而提供，不代表申请人承认这些内容的任何部分或全部构成了在本申请优先权日之前已存在于澳大利亚或其它地方的、与本发明有关的现有技术基础或本领域公知常识。

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Claims

1.抗-MIC-1抗体或其MIC-1结合片段在制备用于从全死因死亡率中预测慢性肾病测试对象的死亡可能性的预后剂中的应用，其中，所述预后剂用于通过免疫测定法检测来自所述对象的测试体样本中MIC-1的上升量，其中，所述MIC-1的上升量与所述对象的死亡可能性的上升正相关。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过以下步骤、利用一系列的测量来检测所述测试体样本中MIC-1的上升量：

(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；以及

(ii)将所述MIC-1的量与在较早时间点取自相同对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

其中，步骤(i)中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比上升了。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，测试体样本中MIC-1的上升量通过与正常对象进行比较而检测出来：

(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；且

(ii)将所述MIC-1的量与取自正常对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

其中，步骤(i)中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比升高了。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，测试体样本中MIC-1的上升量通过与终末期肾病对象进行比较而检测出来：

(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-1的量；以及

(ii)将所述MIC-1的量与取自已被诊断为患有终末期肾病的至少一个其他对象的比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围进行比较；

这使得，当步骤(i)中存在的MIC-1的量与所述比较体样本中存在的MIC-1的量或量值范围相比升高了时，测试对象与所述至少一个其它对象相比，死亡可能性上升了。

5.抗-MIC-1抗体或其MIC-1结合片段在制备用于从全死因死亡率中预测慢性肾病测试对象的死亡可能性的预后剂中的应用，该预后剂用于通过免疫测定法检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-1的量，所述量能够与MIC-1参考量进行比较，所述MIC-1参考量是与所述对象的死亡可能性上升正相关的MIC-1的上升量；

这使得，当测得的MIC-1的量大于或约等于所述参考量时，所述对象的死亡可能性上升；而当测得的MIC-1的量小于所述参考量时，所述对象的死亡可能性下降。