JP5890427B2 - 非特異的症状を有する患者の予後及びリスク評価 - Google Patents

非特異的症状を有する患者の予後及びリスク評価 Download PDF

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Description

本発明は、臨床診断の分野にある。特に、本発明は、非特異的症状で救急部に来院した対象の体液由来のサンプル中のマーカーペプチドレベルの測定に関する。
非特異的症状（ＮＳＣ）で救急部（ＥＤ）に来院した患者は、周知であるが、はっきりした特徴のない集団である。罹患者はしばしば、「体調が良くない」、「脱力感がある」、「疲れている」、「眩暈がする」と訴えるか、又は単純に通常の日常活動に対処できないことを訴える（van Bokhovenら、2008. J Clin Epidemiol; 61: 318-22）。一部の患者は、ＥＤになぜ送られたのかを思い出せないかもしれない。ＮＳＣ患者のケア中に、ＥＤの医師は、不十分な在宅ケアから生死にかかわる症状までの広範な鑑別診断に直面する（Gordon 1986. Geriatrics 41 (4): 75-80）。ＮＳＣの患者は、ＥＤの医師にとって最も困難なことの一つである（Chew及びBirnbaumer 1999. Emerg Med Clin North Am 17 (1): 265-78）。その上、臨床像はしばしば、併存症、多剤併用又は精神状態の変化などの要因によりはっきりしない。
Ｖａｎｐｅｅらは、ＥＤに来院する高齢者の最大２０％が、非特異的症状を有することを示した（Vanpeeら、2001. Eur J Emerg Med 8 (4): 301-4）。その上、特異的な症状を有しない高齢者の５０％が、急性の医学的問題を患っている（Rutschmannら、2005. Swiss Med Wkly 135 (9-10): 145-50）。ＥＤの高齢者集団は、特に有害事象（例えば、機能低下、依存症、及び死）に関する高リスク群である（McCuskerら、2001. J Am Geriatr Soc 49 (10): 1272-81）。ＮＳＣを有するこれらの患者のニーズは、より良く定義されなければならず、並びに効率的で安全な決定及び管理戦略の開発が不可欠である（Vanpeeら、2001. Eur J Emerg Med 8 (4): 301-4; Rutschmannら、2005. Swiss Med Wkly 135 (9-10): 145-50; Sanders AB. Emergency Care of the Elder Person. St. Louis: Beverly Cracom Publications ed. 1996）。
救急医療における患者管理はしばしば、急性の胸痛、呼吸困難又は側腹痛などの呈している主訴に基づいた診断及び処置プロトコールに依存している（Lee及びGoldman 2000. N Engl J Med 342 (l6): 1187-95; Guvtaら、2002. Ann Emers Med 40 (2): 180-6: American Thoracic Society 1999. Am J Respir Crit Care Med 159 (l): 321-40: Wansら、2005. JAMA 294 (15): 1944-56: Kartalら、2006. Emers Med J 23 (5): 341-4; European Curriculum for Emergency Medicine. A document of the EuSEM Task Force on Curriculum approved by the Council of the European Society for Emergency Medicine and by the UEMS Multidisciplinary Joint Committee on Emergency Medicine. 2008）。比較可能な管理プロトコールが、ＮＳＣに関して発表されておらず、大概ＮＳＣに関する一貫性のある定義の欠如、並びにこの集団についての鑑別診断及び効率的な精密検査戦略に関する調査不足に起因する（Rosendalら、2005. BMJ 330 (7481): 4-5）。不確実性がしばしば、潜在する重篤な状態を除外するために、潜在的に必要以上の確証試験を有する診断プロセスを伴う（Vanpeeら、2001. Eur J Emerg Med 8 (4): 301-4; Sanders AB. Emergency Care of the Elder Person. St. Louis: Beverly Cracom Publications ed. 1996。これは、待機時間の延長、役に立たないトリアージ及び不適切な紹介をもたらすかもしれない（Sanders 1992. Ann Emerg Med 21 (7): 830-4; Knottnerusら、1986. Ned Tijdschr Geneeskd 130 (9): 402-5）。
Ｎｅｍｅｃらは、非特異的症状の厳格な定義を提供し、参照により本明細書に含まれる（Nemecら、2010. Acad Emerg Med 17 (3): 284-292）。
マーカーペプチド若しくはその断片、又は前駆体若しくはその断片が、非特異的症状で救急部に来院する患者について死及び入院を含む重篤な状態のための独立した予測因子であることを驚くべきことに見出した。
本発明の目的は、非特異的症状を有する患者の予測及びリスク評価のための方法であって、前記対象から取得したサンプル中の少なくとも１２のアミノ酸を有する、マーカーペプチド若しくはその断片、又は前駆体若しくはその断片を測定することを含む方法である。
図１は、ＢＡＮＣ試験及びＢＡＮＣ試験ＩＩＩにおける非特異的症状を有する患者の識別である。 図２は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ値の箱ひげ図（ｂｏｘ‐ａｎｄ‐ｗｈｉｓｋｅｒ ｐｌｏｔ）である（ＢＡＮＣ試験）。 図３は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのコペプチン（Ｃｏｐｅｐｔｉｎ）値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験）。 図４は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＣＴ値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験）。 図５は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＲＸ‐４値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験）。 図６は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６７）（ＢＡＮＣ試験）。 図７は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのコペプチンに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７１）（ＢＡＮＣ試験）。 図８は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＣＴに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７０）（ＢＡＮＣ試験）。 図９は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＲＸ‐４に関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７３）（ＢＡＮＣ試験）。 図１０は、ＮＳＣを有する患者のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰの三分位数によるカプラン‐マイヤー（Ｋａｐｌａｎ‐Ｍｅｉｅｒ）生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図１１は、ＮＳＣを有する患者のためのコペプチンの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図１２は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＣＴの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図１３は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＲＸ‐４の三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図１４は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６１）（ＢＡＮＣ試験）。 図１５は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのコペプチンに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６４）（ＢＡＮＣ試験）。 図１６は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＰＣＴに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６７）（ＢＡＮＣ試験）。 図１７は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＰＲＸ‐４に関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．５９）（ＢＡＮＣ試験）。 図１８は、６月以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．５９）（ＢＡＮＣ試験）。 図１９は、６月以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのコペプチンに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６６）（ＢＡＮＣ試験）。 図２０は、６月以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＣＴに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６２）（ＢＡＮＣ試験）。 図２１は、６月以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＲＸ‐４に関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６８）（ＢＡＮＣ試験）。 図２２は、ＮＳＣを有する患者のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（６月以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図２３は、ＮＳＣを有する患者のためのコペプチンの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（６月以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図２４は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＣＴの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（６月以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図２５は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＲＸ‐４の三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（６月以内での死）である（ＢＡＮＣ試験）。 図２６は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図２７は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのコペプチン値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図２８は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＣＴ値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図２９は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＲＸ‐４値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３０は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ値の箱ひげ図である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３１は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６９７）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３２は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのコペプチンに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７２３）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３３は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＣＴに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６９）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３４は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＰＲＸ‐４に関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７１９）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３５は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における死の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７３２）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３６は、ＮＳＣを有する患者のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３７は、ＮＳＣを有する患者のためのコペプチンの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３８は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＣＴの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図３９は、ＮＳＣを有する患者のためのＰＲＸ‐４の三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４０は、ＮＳＣを有する患者のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭの三分位数によるカプラン‐マイヤー生存曲線（３０日以内での死）である（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４１は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７０６）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４２は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのコペプチンに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７２２）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４３は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＰＣＴに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７３）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４４は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＰＲＸ‐４に関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．６９４）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。 図４５は、３０日以内でのＮＳＣを有する患者における重篤な転帰の予測のためのＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭに関するＲＯＣプロットである（ＡＵＣ＝０．７３２）（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）。
本発明の目的は、非特異的症状を有する患者の予測及びリスク評価のための方法であって、前記対象から取得したサンプル中の少なくとも１２のアミノ酸を有する、マーカーペプチド若しくはその断片、又は前駆体若しくはその断片を測定することを含む方法である。
本発明の主題は、非特異的症状を有する患者のリスク評価又は転帰の予後又は層別化のための方法であって、本方法は以下のステップ：
‐ 前記患者からの体液由来のサンプルを用意し、
‐ 前記サンプル中の、ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＡＶＰ、ｐｒｏＡＤＭ、ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＣＴ、ＰＲＸ‐４、又は少なくとも１２のアミノ酸長を含むそれらの断片の群から選択されるマーカーペプチドのレベルを測定し、
‐ 前記マーカーペプチドレベルを、非特異的症状を有する患者において、重篤な状態及び／又は死のリスクをもたらすリスクと関連付け、又は重篤な状態及び／又は死に至る予後と関連付ける
ことを含む。
１つの実施態様において、非特異的症状は、救急医（ＥＰ）のために証拠に基づいた管理プロトコールが存在する一連の特異的な症状の一部でない症状の実体として定義される。
重篤な状態は、生死にかかわる可能性があること又は健康状態の悪化を防止するための早期介入を必要とすることとして定義されてもよい。
本発明の方法の好ましい実施態様において、リスク評価又は予後又は層別化は、死を含む重篤な状態に至るリスクと関連し、又は患者は、重篤な状態及び／又は死に恐らく至る患者の群と、死を含む重篤な状態に恐らく至らない患者の群のいずれかに層別化される。患者の層別化は、重篤な状態及び／又は死に恐らく至る患者の群と、死を含む重篤な状態に恐らく至らない患者の群のいずれかに患者の状態の重症度により層別化してもよい。
１つの好ましい実施態様において、患者は、以前に診断された原発性疾患を有しない。これは、前記非特異的疾患を発症する前は、患者が健康であると認められることを意味する。
他の好ましい実施態様において、前記非特異的疾患が発症したとき、患者は原発性疾患を有し、場合により既に原発性疾患を診断されている。ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＡＶＰ、ｐｒｏＡＤＭ、ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＣＴ、ＰＲＸ‐４、又は少なくとも１２のアミノ酸長を含むそれらの断片の群から選択されるマーカーペプチドのレベルの測定は、前記レベルを、非特異的症状を有する患者における、重篤な状態及び／又は死をもたらすリスクと関連付け、又は重篤な状態及び／又は死に至る予後と関連付けることにより非特異的症状を有する患者のリスク評価、又は転帰の予後、又は層別化を可能にし、ここでこの重篤な症状及び／又は死は、（ａ）前記（診断された）原発性疾患又は（ｂ）まだ診断されていない若しくは診断未確定でもよい第二のさらなる疾患のいずれかに関連してもよい。これらの非特異的症状は、非特異的だが、前記原発性疾患に関連する早期症状、又は非特異的だが、既にもたらされた第二のさらなる疾患の早期症状として考慮されてもよい。
非特異的症状を有する１人の患者は、いくつかの併存疾患を呈するかもしれない。患者は従って、多疾病罹患を示し、従って、１超の併存疾患を有する。本試験中に含まれる一部の患者は、慢性高血圧、冠動脈疾患、認知症、糖尿病、脳血管疾患、慢性アルコール依存症、うつ病、ＣＯＰＤ、任意の固形腫瘍、慢性心不全、白血病を含む最大１１までの併存疾患を呈し、最後の３月以内で、任意の精神疾患を起こす。
本発明の文脈における「重篤な状態（ｓｅｒｉｏｕｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」は、任意の生死にかかわる可能性がある状態（例えば、心筋梗塞）、又は起こり得る病的状態、身体障害又は死（例えば、重度の低ナトリウム血症）につながる健康状態の悪化を防止するための早期介入を必要とする任意の状態として定義される。言うまでもなく、この定義に従った潜在する重篤な症状の自然経過を待つべきではない。さらに、最初のＥＤ提示の例えば３日、５日、７日、１０日、１４日、２０日、３週間、４週間、３０日、４５日、６０日、９０日、３月、６月、１年後の定義された時間後の任意の死を引き起こす状態は、重篤な状態として判断される。
本明細書中の用語「転帰（ｏｕｔｃｏｍｅ）」は、例えば３日、５日、７日、１０日、１４日、２０日、３週間、４週間、３０日、４５日、６０日、９０日、３月、６月、１年後の定義された時間後の、例えば患者の生存、又は死を含む重篤な状態の発生に関連する。
本方法によれば、非特異的症状を有する患者は、ＥＤへの提示の際から１年以内、より好ましくは６月以内、さらにより好ましくは３月以内、さらにより好ましくは６０日以内、最も好ましくは３０日以内の死を含む重篤な状態に至るリスクに帰属する。
本発明において、用語「予後（ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）」は、どのように対象（例えば、患者）の医学的状態が進行するかの予測を意味する。これは、前記対象に関する回復の見込み又は有害事象の可能性の推定を含んでもよい。
本発明において、用語「リスク評価（ｒｉｓｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）」は、個人に対する特定の有害事象を経験する確率の割当を意味する。これによって、個人は、好ましくは、あるリスクカテゴリーと見なされてもよく、ここでカテゴリーは、例えば、高リスク対低リスク、又はリスクカテゴリー１、２、３などの数値に基づくリスクカテゴリーを含む。
好ましい実施態様において、重篤な状態は、死、入院、又はＩＣＵへの入室を含む群から選択される。
マーカーペプチド及びその前駆体の文脈において本明細書で述べたように、用語「断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」は、より大きなタンパク質又はペプチドから誘導できるより小さなタンパク質又はペプチドを意味し、そしてそれは、従って、より大きなタンパク質又はペプチドの部分的な配列を含む。前記断片は、１つ以上のそのペプチド結合の鹸化により、より大きなタンパク質又はペプチドから誘導できる。マーカーペプチドであるｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＥＴ‐１、ｐｒｏＡＤＭ、ｐｒｏＡＶＰ、ペルオキシレドキシン（ｐｅｒｏｘｉｒｅｄｏｘｉｎ）‐４、及びＰＣＴの「断片」は、好ましくは、少なくとも１２のアミノ酸長の断片に関する。そのような断片は、好ましくは、本明細書で記載したような免疫学的アッセイで検出できる。
ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐ＡＮＰの１５３のアミノ酸の配列を、配列番号１で示す。Ｎ末端のシグナルペプチド（２５アミノ酸）及び２つのＣ末端アミノ酸の切断に際し、ｐｒｏＡＮＰ（配列番号２）が放出される。このプロホルモンは、成熟した２８のアミノ酸ペプチドＡＮＰ（ＡＮＰ（１〜２８）又はα‐ＡＮＰとして知られる）と、アミノ末端断片ＡＮＰ（１〜９８）（ＮＴ‐ｐｒｏＡＮＰ、配列番号３）に切断される。中領域のｐｒｏＡＮＰ（ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ）は、ＮＴ‐ｐｒｏＡＮＰ又はｐｒｏＡＮＰの少なくとも５３〜９０のアミノ酸残基（配列番号４）を含む任意のその断片として定義される。
本発明による方法の好ましい実施態様において、ｐｒｏＡＮＰ前駆体断片、ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰのレベルが測定される。
アドレノメデュリン（Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｉｎ）（ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐アドレノメデュリン）の前駆体ペプチドのアミノ酸配列を、配列番号５で示す。ｐｒｏ‐アドレノメデュリンは、ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐アドレノメデュリンの配列の２２〜１８５のアミノ酸残基に関する。ｐｒｏ‐アドレノメデュリン（ｐｒｏ‐ＡＤＭ）のアミノ酸配列を、配列番号６で示す。ＭＲ‐ｐｒｏ‐アドレノメデュリン（ＭＲ‐ｐｒｏ‐ＡＤＭ）は、ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐ＡＤＭの４５〜９２のアミノ酸残基に関する。ＭＲ‐ｐｒｏ‐ＡＤＭのアミノ酸配列を、配列番号７で示す。
本発明による方法の他の好ましい実施態様において、ｐｒｏＡＤＭ前駆体断片、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭのレベルが測定される。
バソプレッシン（Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）の１６４のアミノ酸前駆体ペプチドの配列（ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐バソプレッシン）を、配列番号８で示す。ｐｒｏ‐バソプレッシンは、ｐｒｅ‐ｐｒｏ‐バソプレッシンのアミノ酸残基２９〜１６４の配列に関する。ｐｒｏ‐バソプレッシンのアミノ酸配列を、配列番号９で示す。ｐｒｏ‐バソプレッシンは、成熟バソプレッシン、ニューロフィシン（Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎ）ＩＩ及びＣ末端ｐｒｏ‐バソプレッシン（ＣＴ‐ｐｒｏＡＶＰ又はコペプチン）に切断される。コペプチンは、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐バソプレッシンのアミノ酸残基１２６〜１６４に関する。コペプチンのアミノ酸配列を、配列番号１０で示す。ニューロフィシンＩＩは、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐バソプレッシンのアミノ酸残基３２〜１２４を含み、そしてその配列を、配列番号１１で示す。
本発明による発明の他の好ましい実施態様において、ｐｒｏＡＶＰ前駆体断片、コペプチンのレベルが測定される。
エンドセリン（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ）‐１の２１２のアミノ酸前駆体ペプチドの配列（ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐エンドセリン‐１）を、配列番号１２で示す。ｐｒｏ‐ＥＴ‐１は、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐ＥＴ‐１の配列のアミノ酸残基１８〜２１２に関する。ｐｒｏ‐ＥＴ‐１のアミノ酸配列を、配列番号１３で示す。ｐｒｏ‐ＥＴ‐１は、成熟ＥＴ‐１、ｂｉｇ‐ＥＴ‐１及びＣ末端ｐｒｏＥＴ‐１（ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１）に切断される。ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１は、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐ＥＴ‐１のアミノ酸残基１６８‐２１２に関する。ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１のアミノ酸配列を、配列番号１４で示す。
本発明による方法の他の好ましい実施態様において、ｐｒｏＥＴ‐１前駆体断片、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１のレベルが測定される。
脳性ナトリウム利尿ペプチド（ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ）（ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐ＢＮＰ）の１３４のアミノ酸前駆体ペプチドの配列を、配列番号１５で示す。ｐｒｏ‐ＢＮＰは、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐ＢＮＰのアミノ酸残基２７〜１３４に関する。ｐｒｏ‐ＢＮＰの配列を、配列番号１６に示す。ｐｒｏ‐ＢＮＰは、Ｎ末端ｐｒｏ‐ＢＮＰ（ＮＴ‐ｐｒｏ‐ＢＮＰ）及び成熟ＢＮＰに切断される。ＮＴ‐ｐｒｏ‐ＢＮＰは、アミノ酸残基２７〜１０２を含み、そしてその配列を配列番号１７に示す。配列番号１８は、ｐｅｒ‐ｐｒｏ‐ＢＮＰペプチドのアミノ酸残基１０３〜１３４を含むＢＮＰ配列を示す。
本発明による方法の好ましい実施態様において、ｐｒｏＢＮＰ前駆体断片、ＮＴ‐ｐｒｏＢＮＰのレベルが測定される。
プロカルシトニン（ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）は、カルシトニン及びカタカルシンの前駆体である。ＰＣＴの１〜１１６のアミノ酸配列を、配列番号１９で示す。
本発明による方法の好ましい実施態様において、アミノ酸１〜１１６、又は２〜１１６、又は３〜１１６からなるＰＣＴのレベルが、測定される。
ＰＲＸ‐４のアミノ酸配列を、配列番号２０で示す。ＰＲＸ‐４の測定は、ＰＲＸ‐４及び／又はＰＲＸ‐４のホモ多量体及び／又は１つ以上のペルオキシレドキシンを有するＰＲＸ‐４のヘテロ多量体及び／又はＰＲＸ‐４の断片の測定を含む。
本発明による方法の他の好ましい実施態様において、ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＡＶＰ、ｐｒｏＡＤＭ、ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＲＸ‐４、又は少なくとも１２のアミノ酸長を含むそれらの断片の群から選択されるマーカーペプチドのレベルが、前記サンプルにおいて測定される。
本発明による方法の他の好ましい実施態様において、ＭＲ‐ｐｒｏ‐ＡＮＰ、コペプチン、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＲＸ‐４、ＮＴ‐ｐｒｏＢＮＰ及びＰＣＴを含む群から選択される少なくとも２つのマーカーペプチドのレベルが、測定される。
本発明による方法のさらに他の好ましい実施態様において、コペプチン及びＰＲＸ‐４のレベルが測定される。
本発明のさらに好ましい実施態様において、ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＲＸ‐４、ＮＴ‐ｐｒｏＢＮＰ及びＰＣＴを含む群から選択される少なくとも１つのマーカーペプチドのレベルが決定され、そして１つ以上の臨床若しくは検査パラメーター又はＣ‐反応性タンパク質（ＣＲＰ）、クレアチニン、アルブミン、尿素、糸球体ろ過率（ＧＦＲ）、白血球数（ＷＢＣ）、トロポニン、ミエロペルオキシダーゼ、ネオプテリン、ＧＤＦ‐１５、ＳＴ２、シスタチン‐Ｃ、チャールソン併存疾患指数（Ｃｈａｒｌｓｏｎ Ｃｏｍｏｒｂｉｄｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＣＣＩ）、カッツ（Ｋａｔｚ）ＡＤＬ、年齢及び性別を含む群から選択される患者の特性と組み合わされる。
本発明による方法のさらに他の好ましい実施態様において、コペプチン及びＰＲＸ‐４のレベルが決定され、そして年齢及び／又は性別と組み合わされる。
本発明による方法のさらに他の好ましい実施態様において、コペプチン及びＰＲＸ‐４のレベルが決定され、そしてチャールソン併存疾患指数と組み合わされる。
本発明による方法のさらに他の好ましい実施態様において、コペプチン及びＰＲＸ‐４のレベルが決定され、そしてカッツＡＤＬと組み合わされる。
本発明による方法の一つの好ましい実施態様によれば、患者の層別化は、病院若しくは集中治療室への入院の決定、専門病院若しくは専門病院部への患者の移転の決定、集中治療室若しくは病院からの早期退院の評価、又は資源の配分（例えば、医師及び／又は看護スタッフ、診断、治療）を含む患者の管理に関する。
チャールソン併存疾患指数（ＣＣＩ）は、心疾患、ＡＩＤＳ、又はガン（全部で２２の疾患）などの併発状態の範囲を有してもよい患者に関する１年の死亡率を予測する（Charlsonら、1987. J Chronic Dis 40 (5): 373-83）。それぞれの疾患は、この疾患と関連のある死のリスクに応じて１、２、３又は６のスコアを与えられる。その後、スコアは合計され、そして死亡率を予測する合計スコアを与えられる。
一般的にカッツインデックス又はカッツＡＤＬとして呼ばれる日常生活動作における独立のカッツインデックスは、日常生活活動を独立して行うための患者の能力の測定として機能状態を評価するための最も適切な手段である。臨床医は、一般的に、日常生活活動を行う際の問題を見つけ、そしてそれに応じてケアを計画するための手段を使用する。本インデックスは、入浴、更衣、トイレ移動、移乗、排尿排便、食事の６つの機能における能力の妥当性をランク付けする。患者は、６つの機能のそれぞれについて独立して、はい／いいえで採点される。６の得点は全機能を持つことを示し、４は、中等度の障害を示し、及び２以下は、重度の機能障害を示す（Karz及びAkpom 1976. Med Care 14 (5 Suppl): 116-8; Karzら、1970. Gerontologist 10: 20-30）。
診断及び予後マーカー（複数）の使用に関して、本明細書で使用されるような用語「相関（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｎｇ）」は、患者におけるマーカー（複数）の存在又は量を、所定の状態に罹患していることが知られた、又はそのリスクがあることが知られたヒトにおけるその存在又は量と比較することを意味する。患者のサンプルにおけるマーカーレベルは、特定の診断に関連することが知られているレベルと比較することができる。サンプルのマーカーレベルは、診断と相関させられてきたと言われており；すなわち、当業者は、患者が特定の種類の診断に罹患しているかを決定し、そしてそれに応じて応答するためにマーカーレベルを使用することができる。あるいは、サンプルのマーカーレベルは、良好な転帰（例えば、疾患のないことなど）に関連することが知られているマーカーレベルと比較することができる。好ましい実施態様において、マーカーパネルのレベルは、全体的な可能性又は特別な転帰と相関する。
本発明の文脈における用語「レベル（ｌｅｖｅｌ）」は、患者のサンプルから取得したマーカーペプチドの濃度（好ましくは、重量／体積；ｗ／ｖとして表される）に関する。
非特異的症状の定義
特定の主訴は、通常、重要な情報を提供し、及び最も可能性のある診断を作成すること又は定義済みの診断プロトコールに従うことを可能にする。特定の症状は、文献中などにおいてよく知られており、そして診断プロトコールは、しばしば適用される（Marx JA, Hockberger R, Walls R. Rosen's Emergency Medicine: Concepts and Clinical. Sixth Edition ed. St Louis: Mosby; 2005; Siegenthaler W. Differential Diagnosis in Internal Medicine: From Symptom to Diagnosis. New York: Thieme Medical Publishers; 2007）。
特定の症状とは対照的に、本発明者等は、特定の症状若しくは兆候のセットの一部でない、又は最初の最も可能性のある診断が確立されていないすべての症状の実体としてＮＳＣを定義した。積極的な定義は、可能性がある非特異的症状のほぼ無限の列挙を必要とするので、特定の症状の除外後の残りとしてＮＳＣを定義する必要がある。そのような長い及び複雑な定義は、それらの症状が定義済みのリストと正確に適合しないので、特定のＮＳＣ患者を除外するであろう。本発明者等は、患者がＮＳＣを示す状態のための本発明者等のＮＳＣ定義の文脈において最も可能性のある診断（ｗｏｒｋｉｎｇ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）という用語を使用するが、診断は、それにもかかわらず、提示の時点での事実及び知見を与えると思われる。
図１では、手続的方法において本定義を要約する。最も好ましい実施態様において、非特異的症状は、図１に従って包含（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）に至る症状として定義される。これは、本発明による患者は、以下の症状：疼痛（胸部、腹部、頭部、脚部、関節、背中）、呼吸困難、咳、衰弱（局在性）、脳卒中様症状、末端のむくみ（脚、腕）、下痢、排尿障害、ＧＣＳ＜１４、精神錯乱、中毒、発作、出血、失神、不安、精神病の症状、自殺念慮、皮膚損傷、アレルギー皮膚反応、発熱、眩暈、動悸、嘔吐を伴う悪心、外傷の一つを示さないことを意味する。さらに、標準化された精密検査又は処置につながる最初の評価（病歴、身体検査、ＥＣＧ読み取り）後の主訴があるかどうかの質問が、いいえで答えられる。さらに生命兆候（体温、脈拍又は心拍数、血圧及び呼吸数）の何も、前記患者において範囲外でない。さらに、最初の評価後、最も可能性のある診断が、特に十分な確実性なしで、確立できない。
非特異的症状：エンドポイントの定義
ＮＳＣを有する提示の根底にある可能性のある疾患の広い範囲に起因して、狭い疾患特異的なエンドポイントの定義は、適してない。ＮＳＣの患者について、ＥＤの医師は、症状の識別の課題、すなわち重篤な転帰又は症状と、重篤でない転帰又は症状を区別することについてむしろ憂慮する。従って、本発明者等は、任意の潜在的に生死にかかわる状態（例えば、心筋梗塞）又は可能性のある病的状態、身体障害若しくは死（例えば、重度の低ナトリウム血症）につながる健康状態の悪化を防ぐために早期介入を必要とする任意の状態として重篤な状態を定義する。言うまでもなく、この定義による潜在する重篤な状態の自然経過を待つべきではない。さらに、最初のＥＤ提示の３０日以内に生じる任意の死を重篤な状態として判断した。
本発明者等の重篤な状態の定義は、従って、包括的なリスト（表１）をカバーし、そしてそれは、推測的に定義され、そしてさらに重篤な状態の知識が蓄積された３つのパイロット試験の間に修正デルファイ法を使用して精密化した。密接な経時的な関連が、ＮＳＣの進行及び転帰検出の間に存在する場合、ＮＳＣ及び可能性のある重篤な状態の関連は、特に起こり得る。
閾値レベルは、例えば、カプラン‐マイヤー分析から得ることができ、ここで、疾患の発生、又は重篤な状態の可能性、及び／又は死は、母集団におけるそれぞれのマーカーの四分位数と相関する。この分析によれば、７５パーセンタイル超のマーカーレベルを有する対象は、本発明による疾患に至る有意に増加したリスクを有する。この結果はさらに、古典的リスク因子による調整を有するコックス回帰分析により支持される。すべての他の対象と比べて最も高い四分位数は、本発明による疾患又は重篤な状態の可能性及び／又は死に至る増加したリスクと非常に有意に関連する。
他の好ましいカットオフ値は、例えば、通常の母集団の９０、９５、又は９９パーセンタイルである。７５パーセンタイルよりも高いパーセンタイルを使用することにより、１つは、識別される偽陽性の対象の数を減少するが、１つは、リスクがまだ増加するにもかかわらず、中等度であると対象を識別して見逃すかもしれない。従って、１つは、また「偽陽性」を識別することを犠牲にして、リスクで対象の大部分を識別することがより適切であると考えられるかどうか、又は中等度のリスクで何人かの対象を見逃すことを犠牲にして、高いリスクで主に対象を識別することがより適切であると考えられるかどうかに応じてカットオフ値を採用してもよい。
個人のマーカーレベル値及び他の予後検査及び臨床パラメーターを使用することによる個人のリスクを計算するための他の数学的可能性は、例えば、ＮＲＩ（ネット再分類指数（Ｎｅｔ Ｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ））又はＩＤＩ（統合判別指数（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ））である。指数は、Ｐｅｎｃｉｎａに従って計算することができる（Pencina MJら、Evaluating the added predictive ability of a new marker: from area under the ROC curve to reclassification and beyond. Stat Med. 2008; 27: 157-172）。
本方法によれば、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたマーカーペプチドレベルが、所定の閾値よりも高い場合、死を含む重篤な状態に至るリスクに帰属する。
好ましくは、マーカーペプチドＰＣＴの所定の閾値は、０．０２ｎｇ／ｍＬ〜０．５ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは、０．０２ｎｇ／ｍＬ〜０．２５ｎｇ／ｍＬの間、さらにより好ましくは、０．０２ｎｇ／ｍＬ〜０．１ｎｇ／ｍＬの間、さらにより好ましくは、０．０２ｎｇ／ｍＬ〜０．０６ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは、０．０２ｎｇ／ｍＬ〜０．０５ｎｇ／ｍＬ（未満）の間である。好ましい実施態様において、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたＰＣＴレベルが、０．１ｎｇ／ｍＬよりも高い場合、好ましくは、０．０５ｎｇ／ｍＬよりも高い場合、より好ましくは、０．０２５ｎｇ／ｍＬよりも高い場合、重篤な状態に至るリスクに帰属する。
好ましくは、マーカーペプチドＰＲＸ‐４の所定の閾値は、３Ｕ／ｍＬ〜１１Ｕ／ｍＬの間、より好ましくは、３Ｕ／ｍＬ〜８Ｕ／ｍＬの間、さらにより好ましくは、３Ｕ／ｍＬ〜６Ｕ／ｍＬの間、さらにより好ましくは、３Ｕ／ｍＬ〜５Ｕ／ｍＬの間、最も好ましくは、３Ｕ／ｍＬ〜５Ｕ／ｍＬ未満の間である。好ましい実施態様において、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたＰＲＸ‐４レベルが、１１Ｕ／ｍＬよりも高い場合、好ましくは、６Ｕ／ｍＬよりも高い場合、より好ましくは、３Ｕ／ｍＬよりも高い場合、重篤な症状に至るリスクに帰属する。
好ましくは、マーカーペプチドＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰの所定の閾値は、８０ｐｍｏｌ／Ｌ〜４３０ｐｍｏｌ／Ｌの間、より好ましくは、８０ｐｍｏｌ／Ｌ〜３３０ｐｍｏｌ／Ｌの間、さらにより好ましくは、８０ｐｍｏｌ／Ｌ〜１８５ｐｍｏｌ／Ｌの間、さらにより好ましくは、８０ｐｍｏｌ／Ｌ〜１４０ｐｍｏｌ／Ｌの間、最も好ましくは、８０ｐｍｏｌ／Ｌ〜１４０ｐｍｏｌ／Ｌ未満の間である。好ましい実施態様において、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰレベルが、４３０ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、好ましくは、１８５ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、より好ましくは、８０ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、重篤な状態に至るリスクに帰属する。
好ましくは、マーカーペプチドコペプチンの所定の閾値は、５ｐｍｏｌ／Ｌ〜８０ｐｍｏｌ／Ｌの間、より好ましくは、５ｐｍｏｌ／Ｌ〜４０ｐｍｏｌ／Ｌの間、さらにより好ましくは、５ｐｍｏｌ／Ｌ〜３０ｐｍｏｌ／Ｌの間、さらに好ましくは、５ｐｍｏｌ／Ｌ〜２０ｐｍｏｌ／Ｌの間、最も好ましくは、５ｐｍｏｌ／Ｌ〜１０ｐｍｏｌ／Ｌの間である。好ましい実施態様において、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたコペプチンレベルが、８０ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、好ましくは、３０ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、より好ましくは、１０ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、さらにより好ましくは、５ｐｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、重篤な状態に至るリスクに帰属する。
好ましくは、マーカーペプチドＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭの所定の閾値は、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ〜３ｎｍｏｌ／Ｌの間、より好ましくは、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ〜２．０ｎｍｏｌ／Ｌの間、さらにより好ましくは、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ〜１．５ｎｍｏｌ／Ｌの間、最も好ましくは、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌ〜１．０ｎｍｏｌ／Ｌの間である。好ましい実施態様において、非特異的症状を有する患者は、前記測定されたＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭレベルが、３ｎｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、好ましくは、２ｎｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、より好ましくは、１．５ｎｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、さらにより好ましくは、１．０ｎｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、さらにより好ましくは、０．７５ｎｍｏｌ／Ｌよりも高い場合、重篤な状態に至るリスクに属する。
本明細書に述べたように、「アッセイ（ａｓｓａｙ）」又は「診断アッセイ（ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｓｓａｙ）」は、診断の分野に適用される任意の種類でよい。そのようなアッセイは、ある親和性を有する１つ以上の捕獲プローブへの、検出されることになる検体の結合に基づいてもよい。捕獲分子と標的分子又は目的の分子との間の相互作用に関して、親和定数は、好ましくは１０8Ｍ-1超である。
本発明の文脈では、「捕獲分子（ｃａｐｔｕｒｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、標的分子又は目的の分子、すなわち、サンプル由来の検体（例えば、本発明の文脈では、心血管ペプチド（複数））に結合するために使用することができる分子である。従って、捕獲分子は、標的分子又は目的の分子に特異的に結合するために、空間的に及び表面特性、例えば、表面電荷、疎水性、親水性、ルイスドナー及び/又はアクセプターの存在又は非存在の点から、十分に形作られていなければならない。その結果、その結合は、例えば、イオン性、ファンデルワールス、ｐｉ‐ｐｉ、シグマ‐ｐｉ、疎水性又は水素結合相互作用、あるいは上記の捕獲分子と標的分子又は目的の分子との間の相互作用の２以上の組合せによって介在され得る。本発明の文脈では、捕獲分子は、例えば、核酸分子、糖分子、ＰＮＡ分子、タンパク質、抗体、ペプチド又は糖タンパク質を含む群から選択されてもよい。好ましくは、捕獲分子は、標的又は目的の分子に十分な親和性を有する抗体の断片を含む、そして組換え抗体又は組換え抗体の断片、並びに前記抗体の化学的及び/又は生化学的に修飾された誘導体あるいはその少なくとも１２のアミノ酸長を有するバリアント鎖由来の断片を含む、抗体である。
好ましい検出方法は、様々な形式での免疫アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、化学発光‐及び蛍光‐免疫アッセイ、酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ルミネックス型ビーズアッセイ、タンパク質マイクロアレイアッセイ、及び迅速試験形式、例えばイムノクロマト法テストストリップを含む。
アッセイは、均一でも不均一なアッセイでもよく、競争的及び非‐競争的なサンドイッチアッセイでよい。特に好ましい実施態様において、アッセイは、サンドイッチアッセイの形態にある非‐競争的免疫アッセイである、そこでは、検出される及び/又は定量されるべき分子が第一抗体及び第二抗体に結合する。第一抗体は、固相、例えばビーズ、ウェル又はその他の容器の表面、チップ又はストリップに結合し、第二抗体は、例えば色素、放射性同位体又は反応性もしくは触媒的に活性な部分で標識された抗体である。従って、検体に結合された標識された抗体の量は、好適な方法によって測定される。「サンドイッチアッセイ」と関連する一般的な組成物及び方法は、十分に確立されており、当業者に知られている（The Immunoassay Handbook, Ed. David Wild, Elsevier LTD, Oxford; 3rd ed. (May 2005), ISBN-13: 978-0080445267; Hultschig Cら、Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb; 10 (1): 4-10. PMID: 16376134）、これらは参考文献として本明細書に援用されている）。
特に好ましい実施態様において、アッセイは、２つの捕獲分子、好ましくは液状反応混合物中に懸濁物としていずれも存在する抗体であって、２つの捕獲分子の検体への結合時に、サンプルを含む溶液中の形成されたサンドイッチ複合体の検出を可能にする測定可能なシグナルが生じるように、第一の標識成分が第一の捕獲分子に結合され、第一の標識成分が蛍光若しくは化学発光‐抑制又は増幅に基づく標識系の一部であり、マーキング系の第二の標識成分が第二の捕獲分子に結合される。
さらにより好ましくは、前記の標識系は、蛍光色素又は化学発光色素、特にシアニン類の色素と組合せて、希土類クリプタート又は希土類キレートを含む。本発明の文脈において、蛍光系アッセイは、色素の使用を含み、例えば、ＦＡＭ（５‐又は６‐カルボキシフルオレセイン）、ＶＩＣ、ＮＥＤ、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ＩＲＤ‐７００/８００、シアニン色素、例えば、ＣＹ３、ＣＹ５、ＣＹ３．５、ＣＹ５．５、Ｃｙ７、キサンテン、６‐カルボキシ‐２’，４’，７’，４，７‐ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、ＴＥＴ、６‐カルボキシ‐４’，５’‐ジクロロ‐２’，７’‐ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’‐テトラメチル‐６‐カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６‐カルボキシ‐Ｘ‐ローダミン（ＲＯＸ）、５‐カルボキシローダミン‐６Ｇ（Ｒ６Ｇ５）、６‐カルボキシローダミン‐６Ｇ（ＲＧ６）、ローダミン、ローダミングリーン、ローダミンレッド、ローダミン１１０、ＢＯＤＩＰＹ色素、例えば、ＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ、オレゴングリーン、クマリン、例えば、ウンベリフェロン、ベンズイミド、例えば、ヘキスト３３２５８; フェナントリジン、例えば、テキサスレッド、ヤキマ・イエロー（Ｙａｋｉｍａ Ｙｅｌｌｏｗ）、アレクサ・フルオロ（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ）、ＰＥＴ、臭化エジチウム、アクリジン色素、カルバゾール色素、フェノキサジン色素、ポルフィリン色素、ポリメチン色素等を含む群から選択されてもよい。
本発明の文脈において、蛍光発光系アッセイは、第５５１‐５６２頁の引用を含み、本明細書に援用されている、Kirk-Othmer, Encyclopedia of chemical technology, 4 th ed., executive editor, J. I. Kroschwitz; editor, M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, 1993, vol.15, p. 518-562における化学発光物質について記載された物理的原理に基づく色素の使用を含む。好ましい化学発光色素は、アクリジニウムエステルである。
本明細書で使用される用語「サンプル」は、患者などの目的の対象の、診断、予後、又は評価の目的のために得られる体液のサンプルを意味する。好ましい試験サンプルは、血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、唾液、痰及び胸水を含む。さらに、当業者は、試験サンプルの中には、分画又は精製手段、例えば全血の血清又は血漿成分への分離、に従って容易に分析されるものがあることを理解するであろう。
従って、本発明の好ましい実施態様において、サンプルは、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、脳脊髄液サンプル、唾液サンプル、及び尿サンプル又は前記サンプルの任意の抽出物を含む群から選択される。好ましくは、サンプルは、血液サンプルであり、最も好ましくは、血清サンプル又は血漿サンプルである。
血漿‐又は血清サンプルは、潜在的にＰＲＸ‐４を含む血液細胞が、血漿又は血清から定量的に分離される方法によって得られることが好ましい。これは、例えば、血液サンプルを、少なくとも２０分間、少なくとも３０００ｇで遠心分離することにより達成できる。
バーゼル非特異的症状試験（ＢＡＮＣ試験）
試験設計
ＢＡＮＣ試験は、遅延型横断診断試験（ｄｅｌａｙｅｄ ｔｙｐｅ ｃｒｏｓｓ‐ｓｅｃｔｉｏｎａｌ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｓｔｕｄｙ）である。３０日〜６月の追跡調査の前向き試験を、最もＮＳＣにつながりそうな潜在する状態を識別し、解明し、及び規定するために実行した（Knottnerus 2002. J Clin Epidemiol 55 (12): 1201-06）。本試験のプロトコールは、現地の倫理委員会により承認された（ＥＫＢＢ７３／０７）。
試験設定及び母集団
本試験を、スイス国バーゼルの大学病院の救急部において行った。本病院は、７００床の一次及び三次医療大学病院であり、そしてＥＤは、年間、典型的なＥＤ症例群を有する４１０００超の患者を受け入れる。２００７年５月〜２００７年１１月までバーゼルの大学病院のＥＤに入院したすべての患者を、ＮＳＣを有するＥＤ自己紹介型及び紹介された患者のソース集団のサンプルを得るために、連続して登録した。
試験プロトコール
２又は３の救急重症度指数（ＥＳＩ）を有するすべての外傷のない成人患者（Gilboyら、2005. Emergency Severity Index, Version 4: Implementation Handbook. Rockville: Agency for Healthcare Research and Quality）を、包含のためにスクリーニングした（図１）。４又は５のＥＳＩを有する患者を、定義を通じて彼らの資源活用が低いので、除外した。さらに、ＥＳＩ４及びＥＳＩ５の患者について、最も可能性のある診断をほとんどの場合に作成することができるので、包括的な精密検査を通常行わない。特定の症状（例えば、胸痛）又はＥＤの医師の使用のための証拠に基づいた管理プロトコールを使用して管理することができる最も可能性のある診断を示唆する臨床所見を有する患者（Laifer及びBingisser 2009. Notfall-Standards, Interdisziplinare Notfallstation, Universitatsspital Basel. 5. Auflage ISBN 978-3-033-02315-4; EuSEM Task Force. European Curriculum for Emergency Medicine. A document of the EuSEM Task Force on Curriculum approved by the Council of the European Society for Emergency Medicine and by the UEMS Multidisciplinary Joint Committee on Emergency Medicine. 2008. Available at: http://www.eusem.Org/downloads/pdfs/Emergency_Medicine_curruculum_final_draft.pdf.）を除外した。そのような除外の場合において、医師に、彼らが適用する対応する管理プロトコール（Laifer及びBingisser 2009. Notfall-Standards, Interdisziplinare Notfallstation, Universitatsspital Basel. 5. Auflage ISBN 978-3-033-02315-4）と一緒に「特定の症状（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｍｐｌａｉｎｔ）」又は「最も可能性のある診断（ｗｏｒｋｉｎｇ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）」を示すことを求めた（図１）。最近の外部検査結果又は入院時の具体的なＥＣＧ変化（例えば、ＳＴＥＭＩ）で提示する任意の患者は、適格者ではない。同様に、ＥＤに入院し、そして次の３０日以内に死亡する可能性の高い公知の末期的な病状（例えば末期ガン）を有する患者は、適格者ではない。仮に患者が、血行動態的に不安定であった場合、又は仮に生命に関するパラメーターが、顕著に通常の範囲外（例えば、収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇ、心拍数＞１２０／分、体温＞３８．４℃又は＜３５．６℃、呼吸数＞３０／分）であった場合、管理プロトコールがこの患者群（ＥＳＩ１）のために存在するので、除外した。さらに、他の病院から紹介されたすべての患者を除外した。
ＥＤ研修医は、正確にＢＡＮＣプロトコールを適用する方法についての講義及びオンサイトトレーニングを有する試験前トレーニングを受けた。包含手順のためのチェックリストを、本発明者等のＥＤにおいて公然と表示した。すべての潜在的に適格な患者をその後、登録のために前向きにスクリーニングした。スクリーニングは、ＥＳＩトリアージ及び認定されたＥＤトリアージ看護師による生命兆候の評価、病歴、発作、身体検査、及びＥＤ研修医による心電図の読み取りから開始した。検査又はイメージングの結果は、スクリーニングの時点では利用できなかった。ＢＡＮＣ包含手順を検査するために、すべての包含される患者を精査し、そしてＢＡＮＣ専門パネル医師によって確認した。
患者のデータ
以下の患者のデータ：人口統計学のベースラインデータ、トリアージデータ、症状、生命兆候、グラスゴー昏睡尺度（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｃｏｍａ Ｓｃａｌｅ）評価、病歴、身体検査及び心電図の読み取りを、ＥＤ入院中に患者のデータとして取得し、そして患者の症例報告書に記録した。カッツインデックス（Katz及びAkpom 1976. Med Care 14 (5 Suppl): 116-8）に従った日常生活の活動についての情報、活動の最近の減少又は低下、前年の間の入院、ボディマスインデックス及び体重減少、アルコール飲料の消費及び認知（Sunderlandら、1989. J Am Geriatr Soc 37 (8): 725-9）を、ベッドサイドの患者の面談により取得した。併存疾患の完全なリスト（Charlsonら、1987. J Chronic Dis 40 (5): 373-83）及び薬物の使用を含むいくつかの付加的な変数を、最初の医師の報告から収集した。患者は広範な精密検査を受け、そしてＥＤ医師の裁量で処置した。
患者の追跡調査及び転帰確認
本発明者等は、患者の一次医療医師から、又は入院が、３０日及び６月の期間よりそれぞれ長く続いた場合、退院報告から３０日及び６月追跡調査のデータを取得した。２人の内科専門医（転帰評価者）が、患者のベースラインデータに左右されないで、すべての転帰データを検査した。目的の主な転帰は、３０日の追跡調査中の重篤な状態の発生であった。さらに、本発明者等は、以下の群に下位分類した。「急性の新たな状態（ａｃｕｔｅ ｎｅｗ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」を、新たに診断された疾患（例えば、肺炎）として定義した。「慢性状態の悪化（ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」を、さらなる薬物治療又は他の治療介入に最終的につながる既存疾患の悪化（例えば、慢性心不全の悪化）として定義した。「慢性状態における急性事象（ａｃｕｔｅ ｅｖｅｎｔ ｉｎ ａ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」を、既存の状態の急性の予期しない出来事又は合併症（例えば、既知のガンを有する患者の肺塞栓症）として定義した。仮に症状が、医原性であると又は周知の薬物治療の副作用により引き起こされると示唆される場合は、処置が、医師又は患者のいずれかにより開始され又は中止されたかどうかにかかわらず、本発明者等は、それらを「医原性（ｉａｔｒｏｇｅｎｉｃ）又は治療により誘発（ｔｈｅｒａｐｙ‐ｉｎｄｕｃｅｄ）」として下位分類した。最終的に、退院及び追跡調査完了後に、仮に身体上の無疾患が、患者のＮＳＣを明らかにした場合、非器質性又は機能性分類を選択した。
正規の期間において、疾病及び関連保健問題の国際分類第１０版（ＩＣＤ‐１０）に従って最終診断を確立するために、転帰評価者は、すべての患者の記録を検査した。これらのガイドラインに従って、「主な状態（ｍａｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」を、処置のためのリソースの最大量を受けるために、患者の最初の提示と最も密接に関連した１つとして選択した。仮に全く診断を行えない場合は、主な症状、又は異常な知見を、ＩＣＤ‐１０の章Ｒに記載されているような記述診断を使用して、「主な状態」として選択した。
２人の転帰評価者の判断が一致しない場合、患者の記録を再検討し、そしてコンセンサスをＢＡＮＣ専門家パネルに依頼した。専門家パネルは、内科の分野において少なくとも１０年の経験を有する２人の有資格の医師からなる。
バーゼルの非特異的症状試験ＩＩＩ（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）
試験設計
ＢＡＮＣ試験は、遅延型横断診断試験である。前向き３０日追跡調査を実施した。本試験プロトコールは、現地の倫理委員会により承認された。
試験設定及び母集団
本試験を、スイス国バーゼルの大学病院の救急部において行った（ＢＡＮＣ試験を参照）。２００９年４月〜２０１０年１２月までバーゼルの大学病院のＥＤに入院したすべての患者を、ＮＳＣを有するＥＤ自己紹介型及び紹介された患者のソース集団のサンプルを得るために、連続して登録した。
試験プロトコール／患者のデータ／患者の追跡調査及び転帰確認
試験プロトコール、転帰確認、取得した患者のデータ及び患者の追跡調査（３０日間）は、ＢＡＮＣ試験についてそれぞれのセクションで記載したのと同じであった。
マーカー測定
ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ
ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰを、Ｂ．Ｒ．Ａ．Ｈ．Ｍ．Ｓ ＫＲＹＰＴＯＲ（Ｂ．Ｒ．Ａ．Ｈ．Ｍ．Ｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｎｎｉｇｓｄｏｒｆ／Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の新規完全自動化サンドイッチ免疫アッセイシステムを使用して検出した。このランダムアクセスアナライザーは、２つのフルオロフォア、ユーロピウムクリプテート及びＸＬ６６５の間の非放射性移動（ｎｏｎ‐ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ‐ｔｒａｎｓｆｅｒ）に基づく、高精度の時間分解増幅クリプテート放射（Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｃｒｙｐｔａｔｅ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ）（ＴＲＡＣＥ）を利用する。本自動化アッセイは、詳細について他の場所（Morgenthalerら、2004. Clin Chem 50: 234-6）で記載され、そして他の試験（Khanら、2008. J Am Coll Cardiol 51: 1857-64; Gegenhuberら、2006. Clin Chem 52: 827-31）において使用されたサンドイッチ化学発光アッセイに基本的に基づく。
ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ検出のために、１４μｌの患者の血清を１４分間インキュベートした。測定範囲は、０〜１００００ｐｍｏｌ／Ｌであり、検出限界は、２．１ｐｍｏｌ／Ｌであり、そして定量限界は、４．５ｐｍｏｌ／Ｌであった。イントラアッセイＣＶは、１．２％であり、そして研究室間のＣＶは、５．４％であった。本アッセイは、参照アッセイ（Morgenthalerら、2004. Clin Chem 50: 234-6）と同じ抗体ペアを使用し、そして２つのアッセイ系の間の相関は、ｒ＝０．９９であった。
ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ
ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭは、ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰを、Ｂ．Ｒ．Ａ．Ｈ．Ｍ．Ｓ ＫＲＹＰＴＯＲ（Ｂ．Ｒ．Ａ．Ｈ．Ｍ．Ｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｎｎｉｇｓｄｏｒｆ／Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の新規完全自動化サンドイッチ免疫アッセイシステムを使用して検出した。このランダムアクセスアナライザーは、２つのフルオロフォア、ユーロピウムクリプテート及びＸＬ６６５の間の非放射性移動に基づく、高精度の時間分解増幅クリプテート放射（ＴＲＡＣＥ）を利用する。本自動化アッセイは、詳細について他の場所（Morgenthalerら、2005. Clin Chem 51: 1823-9）で記載され、そして他の試験（Khanら、2007. J Am Coll Cardiol 49: 1525-32; Gegenhuberら、2007. J. Card Fail 13: 42-9）において使用されたサンドイッチ化学発光アッセイに基本的に基づく。
ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ検出にために、２６μｌの血清を２０分間インキュベートした。測定範囲は、０〜１００ｎｍｏｌ／Ｌであり、検出限界及び定量限界は、それぞれ０．０５及び０．２３ｎｍｏｌ／Ｌであった。イントラアッセイＣＶは、１．９％であり、そして研究室間のＣＶは、９．８％であった。本アッセイは、詳細について他の場所（Morgenthalerら、2005. Clin Chem 51: 1823-9）で記載されたのと同じ抗体ペアを使用し、そして２つのアッセイ系の間の相関は、ｒ＝０．９９である。
ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１
ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１レベルを、０．４ｐｍｏｌ／Ｌの検出下限を有する化学発光サンドイッチ免疫アッセイで測定することができる（Papassotiriouら、2006. Clin Chem 52: 1144-51）。３２６人の健常者（１５０人の男性及び１７６人の女性）について、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１値は、４４．３（１０．６）ｐｍｏｌ／Ｌの平均（ＳＤ）及び１０．５〜７７．４ｐｍｏｌ／Ｌの範囲を有するガウス分布に従った。男性及び女性における平均ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１濃度は、有意に異ならなかったが、年齢に有意に相関した。イントラアッセイの不正確（ＣＶ）は、５％未満であり、そして研究室間のＣＶは、１０％未満であった。
コペプチン
ＣＴ‐ｐｒｏＡＶＴ（コペプチン）レベルを、１．７ｐｍｏｌ／Ｌの検出下限を有する化学発光サンドイッチ免疫アッセイで測定した（Morgenthalerら、2006. Clin Chem 52: 112-9）。３５９人の健常者（１５３人の男性及び２０６人の女性）について、ＣＴ‐ｐｒｏＡＶＴレベルの中央値は、４．２ｐｍｏｌ／Ｌであり、１．０〜１３．８ｐｍｏｌ／Ｌの範囲であった。ＣＴ‐ｐｒｏＡＶＰの中央値の濃度は、男性と女性の間で有意に異なった。ＣＴ‐ｐｒｏＡＶＴレベルと年齢の間に相関はなかった。研究室間のＣＶは、２０％未満であり、そしてイントラアッセイＣＶは、１０％未満、サンプルに関して２．２５ｐｍｏｌ／Ｌ超であった。
ペルオキシレドキシン‐４
ペルオキシレドキシン‐４（ＰＲＸ‐４）を、最近記載されたような新しく開発された化学発光サンドイッチ免疫アッセイを使用して測定した（Schulteら、2010. Clin Chim Acta 411: 1258-1263）。機能アッセイ感度（アッセイ間ＣＶ２０％未満）は、０．５１ａｒｂ．Ｕ／Ｌであった。２７２人の健康な血液ドナー（４４％の男性）について、ＰＲＸ‐４レベルの中央値は、０．７１ａｒｂ．Ｕ／Ｌであり、０．１５〜５．１ａｒｂ．Ｕ／Ｌの範囲であった。男性と女性の間に弱い有意差があり、そしてＰｒｘ‐４レベルと年齢の間には相関がなかった。
プロカルシトニン
ＰＣＴを、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒらに記載されているような０．００７ｎｇ／ｍＬの機能アッセイ感度を有する市販の超高感度試験系を使用して測定した（Morgenthalerら、2002. Clin Chem 48: 788-790）。
データ解析
記述分析を、試験集団のベースライン特性をまとめ、そして重篤な又は非重篤な状態の根底にある疾患症状を記述するために行った。連続変数のために与えられた記述統計は、中央値（範囲）であり、カテゴリー変数のために、本発明者等は、ｎ（パーセント）を報告する。単一のマーカー値の箱ひげ図を、特定の下位集団におけるマーカー値の分布をまとめるために使用した。３０日又は６月以内の死の予測のために、コックス回帰モデルを使用した。死亡率予測のための異なるマーカーの能力を示すために、本発明者等は、カプラン‐マイヤー生存曲線を計算し、そしてマーカーの三分位数によって、患者を層別化した。さらに、時間依存性受信者動作特性（ＲＯＣ）プロットを行った。受信者動作特性は、バイナリ転帰（死、重篤な症状など）のための、そのカットオフを変化させた時の、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）対（１‐特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ））のグラフィカルプロットである。すべての他の転帰のために、ロジスティック回帰モデルの他にＲＯＣ分析及びプロットもまた行った。感度（バイオマーカーによりそのようなものとして正確に識別された実際に陽性の割合）及び特異度（正確に識別された陰性の割合）を、選択したカットオフに関して計算した。
結果
試験集団（ＢＡＮＣ試験）
合計４３８人の患者を、本試験に包含した。これらの患者の２８人（６．４％）及び５３人（１２．１％）が、それぞれ３０日及び６月以内に死亡した。２５６人の患者が、３０日以内に、表１に定義したような重篤な転帰を有した（５８．４％）。１７７人の患者が、３０日以内に入院し（４０．４％）、そしてすべての患者の１８８人が、集中治療室（ＩＣＵ）に１０日以内に入室した（４２．９％）。
試験集団のベースライン特性を、表２に示す。年齢の中央値は、８０歳（範囲２２〜１０１）であり、そして対象の８５．６％が、６４歳よりも高齢であった。試験集団のほぼ２／３（６５％）が、女性であった。試験患者は、５の併存疾患の中央値を有し、そして１日あたり５つの異なる薬物を摂取していた。チャールソン併存疾患指数の中央値は２であり（Charlsonら、1987. J Chronc Dis. 40: 373-383）、そして試験集団の４３．４％が、少なくとも１つの日常生活活動（ＡＤＬ）（Katzら、1970. Gerontologist 10: 20-30）について他人に頼って生活していた。患者の大多数（９７．７％）を、ＥＳＩ３に分類し、従って、ＥＤにおいて１超の外部リソースを必要とした。
３０日以内の死の予測のための単一のマーカー値の箱ひげ図を、図２〜５に示す。ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ及びＰＲＸ‐４の濃度は、それぞれ、生存者よりも非生存者において有意に高かった（４つのすべてのマーカーペプチドに関して、クラスカル‐ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ‐Ｗａｌｌｉｓ）検定で、Ｐ＜０．００１）。
単一のマーカーのための受信者動作特性を、図６〜９（３０日以内の死の予測）、図１４〜１７（３０日以内の死を含む重篤な転帰の予測）、及び図１８〜２１（６月以内の死の予測）に示す。異なるカットオフ値を、３０日及び６月以内の死を予測するために、それぞれのマーカーのための対応する感度及び特異度を決定するため、並びに３０日以内の重篤な転帰を予測するために使用した（表８〜１１）。
マーカーペプチドの予後値を示すために、カプラン‐マイヤー生存曲線をそれぞれの単一のマーカーに関して計算し、それぞれのマーカー濃度に依存して、患者を三分位に分割した。カプラン‐マイヤー生存曲線を、それぞれ、図１０〜１３（３０日以内の死について）、及び図２２〜２５（６月以内の死について）に示す。図１０〜１３において示したように、ＥＤ提示でのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ及びＰＲＸ‐４のそれぞれの濃度が、第一及び第二と比較して第三三分位である場合、３０日以内のより高い死亡率を観察した。同様に、図２２〜２５において示したように、ＥＤ提示でのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ及びＰＲＸ‐４のそれぞれの濃度が、第一及び第二と比較して第三三分位である場合、６月以内のより高い死亡率を観察した。
マーカーペプチドの全体的な予後精度を、単変量及び多変量コックス回帰分析（表３〜７）を使用して評価した。単変量モデルにおいて、それぞれのマーカーペプチドを、ａ）提示後３０日以内の死を予測するために（表３）、ｂ）提示後３０日以内の重篤な状態の発生を予測するために（表４）、ｃ）提示後３０日以内のＩＣＵへの入室（少なくとも１０日のＩＣＵ滞在を有する）を予測するために（表５）、ｄ）提示後少なくとも３０日の入院を予測するために（表６）、及び提示後６月以内の死を予測するために（表７）使用した。
例えば、ＥＤの患者の提示後、３０日以内の死を予測するために、ＰＲＸ‐４（Ｃ統計量（ｉｎｄｅｘ））＝０．７４９）は、コペプチン（Ｃ統計量＝０．７４２）よりも良好な予測を示す（表３）。ＰＲＸ‐４及びコペプチンを含む二変量モデル（Ｃ統計量＝０．７８３）は、単変量ＰＲＸ‐４モデル（ｐ＜０．００１）及びコペプチンモデル（ｐ＜０．００１）よりも有意に良好な予測を可能にする。ＰＲＸ‐４及びコペプチンに加えて年齢及び性別を含むモデルは、２つのマーカーペプチドのみを使用するモデルよりも有意に良好である（４．６５のｘ2を追加）。さらに、２つのマーカーペプチドＰＲＸ‐４及びコペプチンの、カッツＡＤＬ又はチャールソン併存疾患指数（ＣＣＩ）の単変量モデルへの追加は、２つのマーカーペプチド単独又は組み合わせての使用よりも、有意に良好な結果を与え、ＰＲＸ‐４、コペプチン及びＣＣＩの組み合わせモデルに関して０．７８８のＣ統計量、及びＰＲＸ‐４、コペプチン及びカッツＡＤＬの組み合わせモデルに関して０．８０７のＣ統計量であった（表３）。
試験集団（ＢＡＮＣ試験ＩＩＩ）
合計５０４人の患者を、本試験に包含した。年齢の中央値は８２歳であり、そして１９６人の患者（３８．９％）が男性であった。これらの患者の３３人（６．５％）が、３０日以内に死亡した。２７６人の患者が、３０日以内に、表１に規定したような重篤な転帰を有した（５４．８％）。すべての患者の２０３人が、１０日以内に集中治療室（ＩＣＵ）に入室した（４０．３％）。
試験集団のベースライン特性を、表１２に示す。年齢の中央値は８２歳（範囲７５〜８７）であり、対象の８８．９％が、６４歳よりも高齢であった。試験集団のほぼ２／３（６１．１％）が、女性であった。チャールソン併存疾患指標の中央値は、２であり（Charisonら、1987. J Chronic Dis. 40: 373-383）、そして試験集団の５４．５％が、少なくとも１つの日常生活活動（ＡＤＬ）（Katzら、1970. Gerontologist 10: 20-30）を他人に頼っていた。
３０日以内の死の予測のための単一のマーカー値の箱ひげ図を、図２６〜３０に示す。ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ、ＰＲＸ‐４及びＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭの濃度は、生存者よりも非生存者においてそれぞれ有意に高かった（５つのすべてのマーカーペプチドに関して、クラスカル‐ウォリス検定で、ｐ＜０．００１）。
単一のマーカーのための受信者動作特性を、３０日以内の死の予測に関して図３１〜３５において、及び３０日以内の死を含む重篤な転帰の予測に関して図４１〜４５おいて示す。異なるカットオフ値を、３０日以内の死を予測するために、及び３０日以内の重篤な転帰を予測するために、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭに関する対応する感度及び特異度を決定するために使用した（表１３）。ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ及びＰＲＸ‐４に関して、３０日以内の死及び重篤な転帰をそれぞれ予測するための対応する感度及び特異度の決定のためのカットオフ値は、ＢＡＮＣ試験において得た値と同様であった（データ未記載）。
マーカーペプチドの予後値を示すために、カプラン‐マイヤー生存曲線をそれぞれの単一のマーカーに関して計算し、それぞれのマーカー濃度に依存して、患者を三分位に分割した。カプラン‐マイヤー生存曲線を、図３６〜４０（３０日以内の死について）に示す。図３６〜４０において示したように、ＥＤ提示でのＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＰＣＴ、ＰＲＸ‐４及びＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭのそれぞれの濃度が、第一及び第二と比較して第三三分位にある場合、３０日以内のより高い死亡率を観察した。
マーカーペプチドの全体的な予後精度を、単変量及び多変量コックス回帰分析（表１４、１５及び１６）を使用して評価した。単変量モデルにおいて、それぞれのマーカーペプチドを、ａ）提示後３０日以内の死を予測するために（表１４）、ｂ）提示後３０日以内のＩＣＵへの入室（少なくとも１０日のＩＣＵ滞在を有する）を予測するために（表１５）、及びｃ）提示後３０日以内の重篤な状態の発生を予測するために（表１６）使用した。
例えば、ＥＤの患者の提示後、３０日以内の死を予測するために、ＰＲＸ‐４（Ｃ統計量＝０．７１９）は、コペプチン（Ｃ統計量＝０．７２３）と比較して同様の予測を示した（表１４）。ＰＲＸ‐４及びコペプチンを含む２変量モデル（Ｃ統計量＝０．７６）は、単変量ＰＲＸ‐４モデル（ｐ＜０．００１）及びコペプチンモデル（ｐ＜０．００１）よりも有意に良好な予測を可能にする。２つのマーカーペプチドＰＲＸ‐４及びコペプチンの、カッツＡＤＬの単変量モデルへの追加は、２つのマーカーペプチド単独又は組み合わせての使用よりも有意に良好な結果を与え、０．８１９のＣ統計量を有する。
表
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Claims (15)

  1. 非特異的症状を有する患者のリスク評価又は転帰の予後又は層別化のための方法であって、以下のステップ：
    前記患者からの体液由来のサンプルを用意し、
    前記サンプル中の、ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰ、コペプチン、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１、ＰＣＴ、ＰＲＸ‐４、又は少なくとも１２のアミノ酸長を含むそれらの断片の群から選択されるマーカーペプチドのレベルを測定し、そして
    前記マーカーペプチドレベルを、非特異的症状を有する患者における、３０日以内の死、６月以内の死、３０日以内の重篤な状態、３０日以内のＩＣＵへの入室、又は入院と関連付ける
    ことを含む、方法。
  2. 非特異的症状を有する患者のリスク評価又は転帰の予後又は層別化のための方法であって、以下のステップ：
    前記患者からの体液由来のサンプルを用意し、
    前記サンプル中の、ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭ、ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１又は少なくとも１２のアミノ酸長を含むそれらの断片の群から選択されるマーカーペプチドのレベルを測定し、そして
    前記マーカーペプチドレベルを、非特異的症状を有する患者における、３０日以内の死、３０日以内の重篤な状態、又は３０日以内のＩＣＵへの入室と関連付ける
    ことを含む、方法。
  3. 前記重篤な状態が、生死にかかわる可能性があること又は健康状態の悪化を防止するための早期介入を必要とすることとして定義される、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記リスク評価又は前記予後又は前記層別化が、重篤な状態に至る前記リスクと関連し、又は患者が、重篤な状態及び／又は死に恐らく至る患者の群と、重篤な状態及び／又は死に恐らく至らない患者の群のいずれかに層別化される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記リスク評価が、１年以内に重篤な状態に至るリスクと関連する、請求項４に記載の方法。
  6. 前記重篤な状態が、死、入院又はＩＣＵへの入室を含む群から選択される、請求項４又は５に記載の方法。
  7. 前記患者の層別化が、病院若しくは集中治療室への入院の決定、専門病院若しくは専門病院部への患者の移転の決定、集中治療室若しくは病院からの早期退院の評価、若しくは資源の配分を含む患者の管理に関連し、又は前記患者の層別化が、患者の状態の重症度に関連する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記少なくとも２つのマーカーペプチドのレベルが測定される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
  9. Ｃ‐反応性タンパク質、クレアチニン、アルブミン、尿素、糸球体ろ過率、白血球数、トロポニン、ミエロペルオキシダーゼ、ネオプテリン、ＧＤＦ‐１５、ＳＴ２、シスタチン‐Ｃを含む群から選択される少なくともあと１つのマーカーのレベルが測定される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記少なくとも１つのマーカーペプチドのレベルが、年齢、性別、チャールソン併存疾患指数（ＣＣＩ）、カッツＡＤＬを含む群から選択される少なくとも１つのパラメーターと組み合わされる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記ＭＲ‐ｐｒｏＡＮＰの前駆体断片のレベルが測定される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記ＭＲ‐ｐｒｏＡＤＭの前駆体断片のレベルが測定される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記コペプチンの前駆体断片のレベルが測定される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記ＣＴ‐ｐｒｏＥＴ‐１の前駆体断片が測定される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記ＰＣＴの１〜１１６又は２〜１１６又は３〜１１６の断片が測定される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
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