CN102093446B - 多柔比星脂质衍生物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种多柔比星脂质衍生物，它的结构如下：R选自单硬脂酰甘油酯基、磷脂酰乙醇胺基、1,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺基、1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺基、1,2-二月桂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二芥酰磷脂酰乙醇胺基、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺基。它具有较好的表面活性和乳化性能，可以在水中自发形成乳化结构，形成类似胶束或微乳分散液，即形成药质体，可以注射或口服，这种共价键连接的脂质化合物可以被体内酯酶水解而释放出原型药物，发挥药效，同时具有一定的被动靶向，可改变多柔比星原有组织分布，降低毒性，提高疗效。
Description
技术领域：
本发明涉及多柔比星脂质衍生物前药及其制备方法，属于药品领域。
背景技术：
多柔比星也称为阿霉素，英文名称为doxorubicin，是蒽环类广谱抗肿瘤抗生素，疗效较好，临床上主要用于急慢性白血病、恶性淋巴瘤的治疗。还用于肝癌、胃癌、小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌等的联合化疗。但多柔比星的毒性较大，除产生恶心、呕吐、骨髓抑制等副作用外，还可引起与药物有关的心脏毒性，此毒性是限制其临床应用的主要因素。多年来，人们一直在寻找降低多柔比星毒性的有效方法，如调整给药方案:研制心脏毒性较低的多柔比星衍生物；本世纪70 年代末开始研究用脂质体作为蒽环类抗癌药的有效载体，将抗癌药物以脂质体包裹制成抗癌药物靶向新剂型，静脉给药后，主要分布于网状内皮系统(RES) ，减少了多柔比星在心肌的分布，降低了多柔比星的毒性，含有多柔比星的脂质体的相关专利已经发表，如中国专利200410097044.7，中国专利200910074450.4，目前多柔比星的脂质体产品已经上市，临床显示减少了毒性，提高了疗效。虽然采用类似脂质体制剂方案可以改善药物毒性，但由于制剂的不稳定性和泄露药物等原因，限制了应用，如果开发出与多柔比星结构相连接的带有表面活性脂质链衍生物，在水中可自发形成脂质包裹的微粒，如脂质体囊泡或胶束等药质体，将有可能改变这一状况，已有前人在这一领域尝试并取得成功。
发明内容：
本发明的目的是提供一种多柔比星脂质衍生物及其制备方法，将多柔比星通过共价键与具有表面活性的脂质化合物连接，如一些具有两亲性的甘油酯、磷脂类，形成多柔比星脂质前药衍生物，这种脂质前药具有较好的表面活性和乳化性能，可以在水中自发形成乳化结构，形成类似胶束或微乳分散液，即形成药质体，可以注射或口服，这种共价键连接的脂质化合物可以被体内酯酶水解而释放出原型药物，发挥药效，同时具有一定的被动靶向，可改变多柔比星原有组织分布，降低毒性，提高疗效。
本发明多柔比星脂质衍生物结构如下：
R选自单硬脂酰甘油酯基、磷脂酰乙醇胺基、1,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺基、1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺基、1,2-二月桂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二芥酰磷脂酰乙醇胺基、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺基。
更进一步R选自单硬脂酰甘油酯基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯。
R选自磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇胺。
R选自1,2-二月桂酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1,2-二芥酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺。
R选自1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺。
上述多柔比星脂质衍生物均具有亲脂亲水两亲性化学性质特点，在水中具有表面活性，可以在水相中自发形成胶束或单层、多层脂质囊泡，即形成药质体。化合物所接的脂质链均为生理化合物，可在体内酯酶作用下分解，释放原型药物。
多柔比星脂质衍生物的制备方法
将盐酸多柔比星溶于相应的溶剂中，缓慢加入一定量的三乙胺或吡啶，随后加入相应量的琥珀酰单硬脂酰甘油酯或琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺类化合物，催化量的缩合剂，室温避光搅拌反应24h，氮气保护，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到纯品。
多柔比星脂质衍生物合成路线按照以下方式进行：
本发明的优点效果如下：
制备形成的多柔比星脂质衍生物，它可以在水中自发形成脂质分散液或胶束或形成囊泡，也可以采用注入法、高压乳均法等方法，直接制备成脂质分散液，形成类似胶束或囊泡脂质纳米水分散液，这一般称之为药质体，它可以制备成注射液，是一种自组装药物传递系统。该脂质衍生物前药可以在体内被降解释放原型药物，将有利于提高多柔比星靶向性，改变药物在体内组织分布，有利于减少传统靶组织药物浓度，如心脏等，减少副作用的发生，它比多柔比星脂质体具有更多的优点，不存在泄露等缺点。
附图说明
图1是实施例1多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯质谱图。
图2是实施例1多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯红外光谱。
图3是实施例2多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺红外光谱。
具体实施方式
下面结合附图和实施例详细描述本发明：
实施例1、多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯的合成：
将290mg盐酸多柔比星溶于5ml的二氯甲烷中，缓慢加入183μl三乙胺，随后加入229 mg琥珀酰单硬脂酰甘油酯、222mg N,N-二环己基碳二亚胺和132mg 4-二甲基氨基吡啶，室温避光搅拌反应24h，氮气保护，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为85-87℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μL。质谱，如图 1所示，测得m/z=1022.0([M+ K+])，红外光谱，如图 2所示，结果显示3421为氨基（-NH）和羟基（-OH）的伸缩振动重叠而成，2923为琥珀酰单硬脂酰甘油酯上的甲基（-CH3）与亚甲基(-CH2-)伸缩振动峰，1734为阿霉素母环上的酮羰基（C=O）伸缩振动峰，1636为酰胺（C=O）的伸缩振动峰，1576为仲酰胺的变形振动峰，所得的数据显示产物与目标化合物吻合。
实施例2、多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺的合成
将290mg盐酸多柔比星溶于5ml的N,N-二甲基甲酰胺中，缓慢加入120μl吡啶，随后加入229 mg琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺、103mg N,N-二环己基碳二亚胺和57.5mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光搅拌反应24h、氮气保护，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为83-84℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。红外光谱，如图 3所示，结果显示3434为羟基（-OH）伸缩振动峰， 3302为氨基（-NH）伸缩振动峰，2926为琥珀酰磷脂酰乙醇胺上的甲基（-CH3）与亚甲基(-CH2-)伸缩振动峰，1640为酰胺（C=O）的伸缩振动峰，1570为仲酰胺的变形振动峰，所得的数据显示产物与目标化合物吻合。
实施例3、多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺的合成
在5ml的四氢呋喃中加入琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和300mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌反应2h，将盐酸多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将多柔比星溶液加到四氢呋喃溶液中，氮气保护，搅拌48h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为78-79℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例4、多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺的合成
在5ml的N,N-二甲基甲酰胺中加入300 mg琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和300mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌反应2h，将盐酸多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将多柔比星溶液加到N,N-二甲基甲酰胺溶液中，氮气保护，搅拌48h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点92-94℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例5、多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺的合成
在5ml的二氯甲烷中加入280 mg琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和130mg4-二甲基氨基吡啶，室温搅拌反应2h，将盐酸多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将多柔比星溶液加到二氯甲烷溶液中，氮气保护，搅拌24h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为86-87℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例6、多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺的合成
将290mg盐酸多柔比星溶于5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，缓慢加入120μl吡啶，随后加入400 mg琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺、103mg N,N-二环己基碳二亚胺和57.5mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光搅拌反应24h、氮气保护，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为96-97℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例7、多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺的合成
在5ml的二氯甲烷中加入520 mg琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和130mg4-二甲基氨基吡啶，室温搅拌反应2h，将多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将盐酸多柔比星溶液加到二氯甲烷溶液中，氮气保护，搅拌48h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为76-77℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例8、多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺的合成
在5ml的四氢呋喃中加入430 mg琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和300mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌反应2h，将盐酸多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将多柔比星溶液加到四氢呋喃溶液中，氮气保护，搅拌48h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为73-75℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。产物结构得到红外确认。
实施例9、多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺的合成：
在5ml的四氢呋喃中加入390 mg琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺、87mg N,N-二环己基碳二亚胺和300mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌反应2h，然后将多柔比星加入3ml的甲醇中，缓慢滴加三乙胺，剧烈搅拌2min，然后将盐酸多柔比星溶液加到四氢呋喃溶液中，氮气保护，搅拌48h，TLC检测反应进度。反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到红色纯品，熔点为79-80℃。高效液相色谱显示单峰，保留时间不同于多柔比星。高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μL。产物结构得到红外确认。
实施例10、多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为85.7 nm，ξ电位（25 ℃）为-29.9±0.3 mV。
实施例11、多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为93.5 nm，ξ电位（25 ℃）为-30.9±0.4 mV。
实施例12、多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为95.3 nm，ξ电位（25 ℃）为-29.6±0.2 mV。
实施例13、多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为99.1nm，ξ电位（25 ℃）为-29.5±0.3 mV。
实施例14、多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为80.4nm，ξ电位（25 ℃）为-28.5±0.2 mV。
实施例15、多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为90.7nm，ξ电位（25 ℃）为-30.6±0.2 mV。
实施例16、多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为98.5nm，ξ电位（25 ℃）为-29.3±0.2 mV。
实施例17、多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为98.5nm，ξ电位（25 ℃）为-28.6±0.3 mV。
实施例18、多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体的制备
多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体脂质分散液的制备：将10mg多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺置于100 ml圆底烧瓶中，向其中加入10 ml二氯甲烷使其充分溶解。减压蒸发除去溶剂，使多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺在瓶壁上形成均匀的单层膜。加5 ml蒸馏水，将瓶壁上的膜溶下，转移至烧杯中，600 r/min搅拌10 min即得。经激光粒径仪测定，药质体的平均粒径为98.5nm，ξ电位（25 ℃）为-29.7±0.2 mV。
实施例19、多柔比星琥珀酰胺单甘脂药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺单甘脂药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有55.83 ± 3.47 %的多柔比星琥珀酰胺单甘脂水解为多柔比星。
实施例20、多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有58.13 ± 4.22 %的多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例21、多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有56.92± 4.01 %的多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例22、多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有60.11 ± 1.92 %的多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例23、多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有56.01± 2.83 %的多柔比星琥珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例24、多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有58.90± 3.42 %的多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例25、多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有60.12±1.01%的多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例26、多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，180 min后有52.92± 2.33 %的多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例27、多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体大鼠肝脏匀浆中的降解
取大鼠新鲜肝脏加入生理盐水制备成80%肝匀浆液，加入多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺药质体1ml，置于37℃水浴中孵育。分别于0，1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，加入置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml）。，并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 μl甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μL。结果表明，180 min后有55.19± 2.34 %的多柔比星琥珀酰胺1-棕榈酰-2-油酰单磷脂酰乙醇酰胺水解为多柔比星。
实施例28、多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯药质体大鼠血浆降解试验
取空白大鼠血浆2 ml，向其中加入多柔比星琥珀酰单甘脂药质体1ml，于37℃水浴中孵育，分别于0, 1, 5, 10, 30, 60, 90, 120, 150, 180min取样200 μl，置于10 ml具塞试管中。向试管中加入柔红霉素内标溶液（1mg/ml），并加入2ml萃取剂（氯仿：甲醇=3:1），涡旋振荡10 min，3000 r·min-1转速下离心10 min；取下层有机层溶液至另一干净玻璃试管中，在40 ℃恒温水浴下氮气吹干，再向所得富集物中加入100 ml甲醇复溶，涡旋3 min，10000 r·min-1转速下离心10min；取上清液进样分析，高效液相色谱条件为，检测波长：480nm；色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，200×4.6mm），柱温：30℃；流动相：甲醇/0.01M NH4H2PO4/冰醋酸/三乙胺（60/40/0.7/0.3，v/v/v/v，磷酸调节pH至3.50）；流速：1.0ml·min-1；进样量：20 μl。结果表明，在180 min内多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯在血浆中几乎不降解。
实施例29、多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯药质体与注射盐酸多柔比星注射液体内多柔比星浓度比较
SD大鼠（雄性，250 g— 300 g）分为两组，第一组尾静脉注射盐酸多柔比星注射液8 mg/kg，第二组尾静脉注射相当于盐酸多柔比星注射液8 mg/kg的多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯药质体，与设定时间取血及组织，实验结果如下所述。血浆中药代动力学结果为：第二组的血浆半衰期为第一组的3.88倍；第二组的AUC为第一组的116倍；
给药后两小时不同组织中的多柔比星浓度 (μg/ml)。
Claims (10)
1.一种多柔比星脂质衍生物，其特征在于它的结构如下：
R选自单硬脂酰甘油酯基、磷脂酰乙醇胺基、1,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺基、1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺基、1,2-二月桂酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺基、1,2-二芥酰磷脂酰乙醇胺基、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺基。
2.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自单硬脂酰甘油酯基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺单硬脂酰甘油酯。
3.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺。
4.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二硬脂酰单磷脂酰乙醇酰胺。
5.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-十六烷基单磷脂酰乙醇酰胺。
6.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥
珀酰胺1,2-十四酰基单磷脂酰乙醇胺。
7.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-二月桂酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二月桂酰单磷脂酰乙醇酰胺。
8.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二油酰单磷脂酰乙醇酰胺。
9.根据权利要求1所述的多柔比星脂质衍生物，其特征在于：
R选自1,2-二芥酰磷脂酰乙醇胺基，所述的多柔比星衍生物是：多柔比星琥珀酰胺1,2-二芥酰单磷脂酰乙醇酰胺。
10.一种多柔比星脂质衍生物的制备方法，其特征在于：
将盐酸多柔比星溶于相应的溶剂中，缓慢加入一定量的三乙胺或吡啶，随后加入相应量的琥珀酰单硬脂酰甘油酯或琥珀酰胺单磷脂酰乙醇酰胺类化合物，催化量的缩合剂，室温避光搅拌反应24h，氮气保护，TLC检测反应进度，反应结束后蒸干溶剂，硅胶色谱柱层析纯化，得到纯品。
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