CN102093366A

CN102093366A - 双环氨基吡唑类化合物及其在抗柯萨奇病毒中的应用

Info

Publication number: CN102093366A
Application number: CN 201110052003
Authority: CN
Inventors: 王玉成; 王菊仙; 陶佩珍; 董彪; 章天; 刘洪涛; 许乐幸
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Priority date: 2011-03-04
Filing date: 2011-03-04
Publication date: 2011-06-15
Anticipated expiration: 2031-03-04
Also published as: CN102093366B

Abstract

本发明提供了一种具有优良抗柯萨奇病毒活性的双环氨基吡唑类衍生物，以及含有该化合物的药物组合物，实验研究表明，所述衍生物具有较强的抗柯萨奇病毒活性，有望开发成为临床有效的抗病毒药物。

Description

双环氨基吡唑类化合物及其在抗柯萨奇病毒中的应用

技术领域：

本发明涉及氨基吡唑类化合物的合成及其在抗柯萨奇病毒中的应用。

背景技术：

柯萨奇病毒(coxackievirus)属小核糖核酸病毒科肠病毒属，柯萨奇病毒的感染，可引起广泛的疾病，由轻度的呼吸道感染到比较严重的心肌炎、心包炎及神经系统疾病。大量研究表明柯萨奇病毒B3(CoxB3)是病毒性心肌炎的主要致病因素。从天然药物中寻找CoxB3药物已成为国际上新动向，尤其在国内开展了很多研究，发现多种单味中药或复方有体内和/或体外抗CoxB3作用，单味中药如贯众、板蓝根、大青叶、大黄、柴胡、虎杖、黄芩、苦参和苦瓜等等。复方有芪红胶囊、心肌康颗粒、芪芍五味子复方、心肌泰胶囊、益心康复方、芪苓1号、养心颗粒、茱萸颗粒和生黄合剂等等。有的在临床应用，取得不同疗效。但是目前除了美国FDA正在对Pleconaril(VP63843，Picovir)进行临床考察，除此之外对抗柯萨奇病毒的化学药物的研发还均处于研究阶段。我们发现氨基吡唑类化合物对柯萨奇病毒具有较高的活性，尤其是双环氨基吡唑类化合物对柯萨奇病毒B3(CoxB3)和柯萨奇病毒B4(CoxB4)都表现出优异的药理活性。由于双环氨基吡唑类化合物对柯萨奇病毒有显著抑制作用，故而该类杂环化合物具有潜在的研发价值。

本发明所述的双环氨基吡唑类化合物及其在抗柯萨奇病毒方面的用途，迄今尚未见有国内外的相关报道。

发明内容：

本发明的目的是，提供具有抗柯萨奇病毒活性的双环氨基吡唑类衍生物。

本发明的另一目的是，提供含有双环氨基吡唑类衍生物的抗柯萨奇病毒药物组合物。

本发明的又一目的是，提供双环氨基吡唑类衍生物在抗柯萨奇病毒中的应用。

本发明所说双环氨基吡唑类衍生物的结构如式(I)所示：

式中：

R₁独立选自：C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基、芳基、杂芳基、-COR₄，-COOR₄、-CONHR₄、-CONR₄R₅、-NH-C(＝NH)NHR₄、-C(＝NH)NHR₄、-SO₂R₄、-SO₂NHR₄、-SO₂NR₄R₅；

R₂、R₃独立代表氢原子或任选自R₄、-COR₄，-COOR₄、-CONHR₄、-CONR₄R₅、-NH-C(＝NH)NHR₄、-C(＝NH)NHR₄、-SO₂R₄、-SO₂NHR₄、-SO₂NR₄R₅；

m代表1、2；

C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基任选被1-3个独立选自下列的取代基取代：C₁-C₄烷基、硝基、卤素、氰基、NR₄R₅、NR₄COR₅、NR₄CO₂R₅、COR₄、OR₄、CONR₄R₅、CO₂R₄；

R₄和R₅独立选自氢原子或C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、C₄-C₆链烯基、C₄-C₆链炔基、芳基、杂芳基；

芳基为苯基或萘基，每个任选被1-5个独立选自下列的取代基取代：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、卤素、C₁-C₄卤代烷基、氰基、硝基、-NR₆R₇、-CONR₆R₇、-NR₆COR₈、-OR₉、-COOR₉、-SR₉、-SO₂R₉、-SO₂NR₆R₇、-NR₆SO₂R₉；

杂芳基为吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、吡喃基、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、恶唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、异恶唑基、吡唑基、2，3-二氢苯并噻吩基或2，3-二氢苯并呋喃基，每个任选被1～5个独立选自下列的取代基取代：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、卤素、C₁-C₄卤代烷基、氰基、硝基、-NR₆R₇、-CONR₆R₇、-NR₉COR₈、-OR₉、-COOR₉、-SR₉、-SO₂R₉、-SO₂NR₆R₇、-NR₆SO₂R₉；

R₆、R₇、R₈、R₉各自独立代表氢原子或者C₁-C₆烷基或苯基。

通式(I)的化合物以几何学和光学异构体存在，并且所有异构体为分离的、纯的或部分纯化的立体异构体或其外消旋混合物。

通式(I)的化合物可选择性地以药学上可接受的酸加成盐，金属盐或者选择性烷基化铵盐存在，包括无机和有机的酸加成盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐、草酸盐或者类似的药学上可接受的无机或者有机酸加成盐，也可按常规转化方法制备它们的碱金属盐、碱土金属盐、银盐、钡盐等。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或食用载体，可包含明胶胶囊中或压缩成片剂。其它适用于口服给药的形式为胶囊、丸剂、悬浮液或糖浆。

片剂、丸剂、胶囊或类似的组合物可包含下述成分(除活性物质外)：粘合剂如微晶纤维素、黄芪胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖。崩解剂如藻酸、原凝胶(Primogel)、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁；滑动剂如胶态二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精或矫味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙香味物质。当选择的组合物为胶囊时，其还可以包含液体载体如脂肪油。其它组合物可包含其它的各种改善物理形式材料，如包衣剂(对片剂和丸剂)糖或虫胶。用于制备组合物的物质应是药学上纯的，并在所采用的剂量下是无毒的。

为制备用于肠胃外给药的药物组合物，可将活性成分掺入溶液或悬浮液中，其还包括以下的组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苄基醇；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，用于调节溶液张力的试剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可包含于安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料小药瓶中。

本发明具体包括以下化合物，以及它们的异构体、立体异构体或立体异构体的混合物以及药学上可接受的盐或前体药物：

1)N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

2)N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

3)N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-甲基-苯甲酰胺

4)N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲基-苯甲酰胺

5)N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-甲氧基-苯甲酰胺

6)N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲氧基-苯甲酰胺

7)N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-硝基-苯甲酰胺

8)N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲氧基-苯甲酰胺

9)N-{5-乙酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

10)N-{5-环丙甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

11)N-{5-乙酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

12)N-{5-环丙甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

13)N-{5-(2-氯苯甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-2-氯-苯甲酰胺

14)N-{5-(2-氯苯甲酰基)-2-(2-氯苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-2-氯-苯甲酰胺

15)N-{5-(2-丙烯甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-丙烯基甲酰胺

16)N-{5-(2-丙烯甲酰基)-2-(2-丙烯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-丙烯基甲酰胺

17)N-{5-环丙甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-环丙甲酰胺

18)N-{5-环丙甲酰基-2-(环丙甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-环丙甲酰胺

19)N-{5-(3-噻吩甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-噻吩甲酰胺

20)N-{5-(3-噻吩甲酰基)-2-(3-噻吩甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-噻吩甲酰胺

21)N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

22)N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

23)N-{5-亚胡椒基乙酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑-3-基}-亚胡椒基乙酰胺

24)N-{5-亚胡椒基乙酰基-2-(2-亚胡椒基乙酰氧)-乙基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑-3-基}-亚胡椒基乙酰胺

25)N-{5-(3-甲基苯甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-甲基-苯甲酰胺

26)N-{5-(3-甲基苯甲酰基)-2-(3-甲基苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲基-苯甲酰胺

27)N-{5-(2-氟苯甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-2-氟苯甲酰胺

28)N-{5-(2-氟苯甲酰基)-2-(2-氟苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-2-氟苯甲酰胺

29)N-{5-(2-硝基-苯甲酰基)-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-2-硝基-苯甲酰胺

30)N-{5-(2-硝基-苯甲酰基)-2-(2-硝基-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-2-硝基-苯甲酰胺

31)N-{5-乙酰基-2-(乙酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-乙酰胺

本发明提供了以双环氨基吡唑类衍生物为有效成份与药学上可接收的载体组成的药物组合物。

本发明还提供了双环氨基吡唑类衍生物及其组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用。

具体实施方式：

以下实施例仅为帮助本领域技术人员更好地理解本发明，但不用来限制本发明的范围。

<实施例1> 中间体N-叔丁氧羰基-3-氰基-4-吡咯烷酮

甘氨酸乙酯盐酸盐(139.5g，1.0mol)，NaOH(40.0g，1.0mol)甲醇(600mL)室温下搅拌0.5h，向反应体系中滴加丙烯腈(58.3g，1.10mol)40min滴加完毕。反应混合物加热至65℃继续搅拌3h，反应完全所得产物无需纯化即可进行下步反应。室温下向上述反应混合物中加入(Boc)₂O(218.0g，1.0mol)，加料毕，55-60℃反应1h后抽滤。滤液减压浓缩至干，加入乙酸乙酯(400mL)。有机相分别用水和饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得无色油状物。氢化钠(19.0g，0.5mol)悬浮于干燥的甲苯溶液中(150mL)中加热回流，向其中滴加Boc保护化合物(81.0g，0.3mol)的甲苯溶液，TLC示踪反应，1.5h反应毕，冷却至室温，缓慢滴加400mL水。水层用10％的醋酸调节pH 7。抽滤，滤饼水洗干燥得白色固体(44.4g，66％)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ_ppm 1.47(9H，s)，3.64-4.06(4H，m)，4.34-4.38(1H，m).ESI-MS：m/z 209(M-1)^-.

<实施例2> 中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯

N-叔丁氧羰基-3-氰基-4-吡咯烷酮(8.0g，85.7mmol)悬浮于250mL无水乙醇，室温下搅拌片刻，不溶清，激烈搅拌下加入2-羟乙基肼53.74g(0.685mol)，加毕，反应液逐渐溶清，室温下搅拌24h后，TLC跟踪反应完毕，反应液呈淡黄色清夜，减压浓缩至干，加入300mL乙酸乙酯，水洗干燥，滤液减压浓缩的粉红色固体(15.8g，69％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.42(9H，s)，2.96-3.01(2H，m)，3.61-3.66(2H，m)，4.12-4.31(4H，m)，5.03(2H，br.)。

MS(ESI，m/z)：268(M⁺+1)

<实施例3> 中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑盐酸盐

2-(2-羟基)-乙基3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯(21.45g，80.0mmol)溶解于无水二氯甲烷(300mL)中，室温磁力搅拌下通入无水HCl气，有大量粉白色固体析出，抽滤，滤饼用少许无水乙醇洗涤，减压干燥得15.74g类白色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.96-3.01(2H，m)，3.65-3.68(2H，m)，4.01-4.15(4H，m)，5.13(2H，br.)。

MS(ESI，m/z)：169(M⁺+1)

<实施例4> N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

苯甲酰氯(10.3mL，88mmol)于50mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)中，于0-5℃下缓慢滴加至实施例3中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑盐酸盐(8.9g，44mmol)与DIEA(47.4mL)的500mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)溶液中，保持0-5℃反应2h，升至室温，搅拌过夜。所得混合物旋干，残余物用乙酸乙酯(500mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×2)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压浓缩，产物经FLASH柱纯化得白色粉末固体9.6g，收率59％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：3.82-3.86(2H，m)，3.95-4.00(2H，m)，4.50-4.53(2H，m)，4.57-4.61(2H，m)，7.52-7.57(5H，m)，7.96-8.04(5H，m)，10.37(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：377(M+1)

<实施例5> N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

苯甲酰氯(20.6mL，176mmol)于50mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)中，于0-5℃下缓慢滴加至实施例3中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑盐酸盐(8.9g，44mmol)与DIEA(47.4mL)的500mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)溶液中，保持0-5℃反应2h，加热回流反应，TLC示踪反应，6h反应毕，减压蒸除反应溶剂，残余物用乙酸乙酯(600mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×3)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压浓缩至干得固体21.2g，收率71％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：4.22-4.25(2H，m)，4.37-4.40(2H，m)，4.51-4.56(2H，m)，4.59-4.63(2H，m)，7.43-7.47(5H，m)，7.49-7.51(5H，m)，7.92-7.94(5H，m)，10.48(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：481(M+1)

<实施例6> N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-甲基-苯甲酰胺

3-甲基-苯甲酰氯(7.0g，45mmol)于50mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)中，于0-5℃下缓慢滴加至实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯(11.7g，44mmol)与DIEA(47.4mL)的500mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)溶液中，保持0-5℃反应2h，升至室温，TLC示踪反应，原料消失，减压蒸除反应溶剂，残余物用二氯甲烷(600mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×3)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压蒸除300mL溶剂，冷却至室温，电磁搅拌下，通入无水HCl气，有大量粉白色固体析出，抽滤，滤饼用少许无水乙醇洗涤，减压干燥得白色固体。苯甲酰氯(5.3mL，45mmol)于50mL四氢呋喃于0-5℃下缓慢滴加至所得固体与DIEA(40mL)的500mL四氢呋喃溶液中，保持0-5℃反应2h，加热至17℃，TLC示踪反应，原料消失，减压蒸除反应溶剂，残余物用乙酸乙酯(600mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×3)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压蒸除溶剂，产物经FLASH柱纯化得白色固体9.6g，收率43％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.86(3H，s)，3.80-4.82(2H，m)，3.97-4.01(2H，m)，4.39-4.43(2H，m)，4.51-4.57(2H，m)，7.46-7.50(2H，m)，7.69-7.73(4H，m)，7.89-7.92(2H，m)，10.07(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：391(M+1)

<实施例7> N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲基-苯甲酰胺

3-甲基-苯甲酰氯(7.0g，45mmol)于50mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)中，于0-5℃下缓慢滴加至实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯(11.7g，44mmol)与DIEA(47.4mL)的500mL四氢呋喃(经氢化钙回流并重蒸得到)溶液中，保持0-5℃反应2h，升至室温，TLC示踪反应，原料消失，减压蒸除反应溶剂，残余物用二氯甲烷(600mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×3)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压蒸除300mL溶剂，冷却至室温，电磁搅拌下，通入无水HCl气，有大量粉白色固体析出，抽滤，滤饼用少许无水乙醇洗涤，减压干燥得白色固体。苯甲酰氯(11.8mL，100mmol)于50mL四氢呋喃于0-5℃下缓慢滴加至所得固体与DIEA(60mL)的500mL四氢呋喃溶液中，保持0-5℃反应2h，加热回流反应，TLC示踪反应，反应毕，减压蒸除反应溶剂，残余物用乙酸乙酯(600mL)溶解，饱和NaHCO₃水洗(300mL×3)，水洗干燥，滤出干燥剂，减压蒸除溶剂，产物经FLASH柱纯化得白色固体17.3g，收率80％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.75(3H，s)，4.09-4.12(2H，m)，4.27-4.31(2H，m)，4.37-4.42(2H，m)，4.50-4.54(2H，m)，7.50-7.54(4H，m)，7.69-7.72(5H，m)，7.90-7.94(5H，m)，9.98(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：495(M+1)

<实施例8> N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-甲氧基-苯甲酰胺

按照实施例6所述的方法，用3-甲氧基-苯甲酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率39％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：3.78(3H，s)，3.69-3.72(2H，m)，3.88-3.92(2H，m)，4.21-4.27(2H，m)，4.35-4.41(2H，m)，7.45-7.53(4H，m)，7.89-7.93(5H，m)，10.23(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：407(M+1)

<实施例9> N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲氧基-苯甲酰胺

按照实施例7所述的方法，用3-甲氧基-苯甲酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率73％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：3.86(3H，s)，4.13-4.17(2H，m)，4.30-4.36(2H，m)，4.41-4.47(2H，m)，4.55-4.60(2H，m)，7.57-7.63(4H，m)，7.79-7.82(5H，m)，7.91-7.95(5H，m)，10.12(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：511(M+1)

<实施例10> N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-3-硝基-苯甲酰胺

按照实施例6所述的方法，用3-硝基-苯甲酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率56％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：3.88-3.94(2H，m)，4.07-4.12(2H，m)，4.36-4.40(2H，m)，4.52-4.56(2H，m)，7.54-7.60(5H，m)，7.98-8.02(4H，m)，10.45(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：422(M+1)

<实施例11> N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑}-3-甲氧基-苯甲酰胺

按照实施例7所述的方法，用3-硝基-苯甲酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率84％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：4.03-4.08(2H，m)，4.34-4.39(2H，m)，4.46-4.51(2H，m)，4.61-4.63(2H，m)，7.48-7.52(5H，m)，7.69-7.71(5H，m)，7.89-7.94(4H，m)，10.35(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：526(M+1)

<实施例12> N-{5-乙酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

按照实施例6所述的方法，用乙酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率31％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.36(3H，s)，3.93-3.98(2H，m)，4.11-4.17(2H，m)，4.25-4.34(2H，m)，4.50-4.57(2H，m)，7.58-7.62(2H，m)，7.89-7.91(3H，m)，10.17(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：315(M+1)

<实施例13> N-{5-环丙甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-4，6-二氢吡咯[3，4-c]吡唑-3-基}-苯甲酰胺

按照实施例6所述的方法，用环丙基甲酰氯、苯甲酰氯与实施例2中间体2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，6-二氢-1H-吡咯[3，4-c]吡唑-5-羧酸叔丁基酯反应制备标题化合物，白色固体，收率40％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.08-1.18(4H，m)，3.87-3.91(2H，m)，3.93-3.96(1H，m)，4.08-4.13(2H，m)，4.23-4.36(2H，m)，4.43-4.51(2H，m)，7.62-7.67(2H，m)，7.99-8.04(3H，m)，10.23(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：341(M+1)

<实施例14> N-{5-苯甲酰基-2-(2-羟基)-乙基-3-基}-苯甲酰胺

按照实施例4所述的方法，用自制的2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑盐酸盐与苯甲酰氯反应制备标题化合物，白色固体，收率61％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.82-2.85(2H，m)，3.45-3.49(2H，m)，3.81-3.85(2H，m)，4.35-4.38(2H，m)，4.50-4.54(2H，m)，7.64-7.67(5H，m)，7.98-8.01(5H，m)，10.31(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：391(M+1).

<实施例15> N-{5-苯甲酰基-2-(2-苯甲酰氧)-乙基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑}-苯甲酰胺

按照实施例5所述的方法，用自制的2-(2-羟基)-乙基-3-氨基-4，5，6，7-四氢吡啶[3，4-c]吡唑盐酸盐与苯甲酰氯反应制备标题化合物，白色固体，收率83％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.80-2.83(2H，m)，3.42-3.46(2H，m)，3.87-3.91(2H，m)，4.36-4.38(2H，m)，4.51-4.55(2H，m)，7.63-7.69(5H，m)，7.85-7.88(5H，m)，7.97-8.01(5H，m)，10.27(1H，s)。

MS(ESI，m/z)：495(M+1)

<实施例16> 本发明化合物体外抗病毒活性的评价

对本发明的化合物的抗病毒活性是通过以VERO(绿猴肾细胞)为病毒宿主，测定样品抑制柯萨奇B3和柯萨奇B4引起VERO细胞病变程度。

在长满细胞的培养瓶内加0.25％胰酶0.1ml，0.02％EDTA 5ml，37℃消化20～25分钟，废弃消化液，加培养液吹打，1:3传代，3天长满，配制成每毫升20～30万个细胞，接种96孔细胞培养板，每孔0.1ml，37℃，5％CO₂培养24小时，细胞长成单层后进行实验。VERO细胞种于96孔培养板，24小时后分别感染柯萨奇B3(COXB3感染量为100个TCID₅₀)和柯萨奇B4(COXB4感染量为200个TCID₅₀)，吸附2小时，弃病毒液，加入药物起始浓度为200μM，作3倍系列稀释，6个稀释度，每浓度2孔，37℃，5％CO₂培养。同时设细胞对照孔和病毒对照孔，阳性对照药为利巴韦林。逐日观察细胞病变程度(CPE)，用寇氏法分别计算样品对HSV-1的半数抑制浓度(IC₅₀)。

表1列出了本申请的式(I)化合物中的若干代表化合物对柯萨奇B3(COXB3)、B4(COXB4)的体外活性。

表1化合物(I)的体外抗病毒活性

IC₅₀：对病毒半数抑制浓度；SI：选择指数

实验结果表明，表1中所有测试化合物均对柯萨奇病毒有显著抑制作用，多数化合物在细胞水平上IC₅₀优于阳性对照药，尤其实施例5化合物明显优于阳性对照。

Claims

1.氨基吡唑类衍生物及其异构体、立体异构体或立体异构体的混合物以及药学上可接受的盐或前体物，其结构如通式(I)所示：

式中：

R₁独立选自：H、C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基、芳基、杂芳基、-COR₄、-COOR₄、-CONHR₄、-CONR₄R₅、-NH-C(＝NH)NHR₄、-C(＝NH)NHR₄；

R₂独立选自：H、C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基、芳基、杂芳基、-COR₄，-COOR₄、-CONHR₄、-CONR₄R₅、-NH-C(＝NH)NHR₄、-C(＝NH)NHR₄、-SO₂R₄、-SO₂NHR₄、-SO₂NR₄R₅；C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基任选被1-3个独立选自下列的取代基取代：C₁-C₄烷基、硝基、卤素、氰基、NR₄R₅、NR₄COR₅、NR₄CO₂R₅、COR₄、OR₄、CONR₄R₅、CO₂R₄；

R₃独立选自：H、C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀链炔基、C₃-C₈环烷基、C₄-C₁₂环烷基烷基、芳基、杂芳基、-COR₄；

杂芳基为吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、吡喃基、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、恶唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、异噁唑基、吡唑基、2，3-二氢苯并噻吩基或2，3-二氢苯并呋喃基，每个任选被1～5个独立选自下列的取代基取代：C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、卤素、C₁-C₄卤代烷基、氰基、硝基、-NR₆R₇、-CONR₆R₇、-NR₆COR₈、-OR₉、-COOR₉、-SR₉、-SO₂R₉、-SO₂NR₆R₇、-NR₆SO₂R₉；

2.如权利要求1所述的化合物及其异构体、立体异构体或立体异构体的混合物以及药学上可接受的盐或前体物，其特征是，通式(I)的化合物以几何学和光学异构体存在，并且所有异构体为分离的、纯的或部分纯化的立体异构体或其外消旋混合物。

3.如权利要求1或2所述的化合物及其异构体、立体异构体或立体异构体的混合物以及药学上可接受的盐或前体物，其特征在于，通式(I)的化合物可选择性地以药学上可接受的酸加成盐，金属盐或者选择性烷基化铵盐存在，包括无机和有机酸加成盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐、草酸盐或者类似的药学上可接受的无机或者有机酸加成盐，或者按常规转化方法得到金属盐、碱土金属盐、银盐和钡盐。

4.权利要求1、2或3所述化合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用。

5.如权利要求1所述双环氨基吡唑类衍生物为有效成份与药学上可接收的载体组成的药物组合物。

6.权利要求5所述组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用。