CN102068413B - 比阿培南冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体来说涉及一种注射用比阿培南冻干脂质体制剂及其制备方法。该制剂包括比阿培南、中性磷脂、负电荷磷脂、胆固醇、抗氧化剂，使其平均粒径为100nm，分布窄且均匀，且药物包裹率可达90％以上，包裹率高、成本低，适宜进行工业化生产。

Description

比阿培南冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体来说涉及一种注射用比阿培南冻干脂质体制剂，同时本发明还涉及一种比阿培南冻干脂质体制剂的制备方法。

背景技术

比阿培南，化学名称为：(-)6-[[(4R，5S，6S)-2-羧基-6-[(1R)-1-羟乙基]-4-甲基-7-氧代-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-3-基]硫]-6，7-二氢-5H-吡唑[1，2-a][1，2，4]三唑-4-鎓内盐。比阿培南为碳青霉稀类合成抗生素，是新型1β-甲基碳青霉稀类抗生素，本品是在2位硫上有双环三唑的1β-甲基碳青霉稀，具有广泛的抗菌谱，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、需氧菌和厌氧菌均有良好的杀菌作用；抗革兰氏阴性菌，特别是抗绿脓杆菌的活性比亚胺培南强；对需氧性革兰阳性菌的抗菌活性稍低于亚胺培南；抗厌氧菌的活性与亚胺培南相同。对本品敏感的菌株有：葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、肠球菌属(屎肠球菌除外)、莫拉氏菌属、大肠菌、柠檬酸菌属、克雷伯氏菌属、肠杆菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、流感嗜血杆菌、绿脓杆菌、放线菌属、消化链球菌属、拟杆菌属、普氏菌属、梭形杆菌属等。

比阿培南药代动力学性质优良，毒性低，对肾脱氢肽酶(DHP-I)和β-内酰胺酶较其他已上市的碳青酶烯类抗生素稳定，无需与DHP-I抑制剂合用(eg.亚胺培南/西司他丁)；该药可用于治疗并发性腹腔内感染、下呼吸道感染(包括细菌性肺炎)以及并发性尿道感染，除此之外，由于具有良好的外膜渗透性，增强了抗菌活性，同时对肾脏、中枢神经系统的毒性较亚胺培南轻，不诱发癫痫发作，因而还可用于细菌性脑膜炎的治疗；本品抑制绿脓杆菌和厌氧菌的活性比亚胺培南(Imipenem)强2～4倍，抑制耐药绿脓杆菌活性比美罗培南(Meropenem)强4～8倍，对不动杆菌、厌氧菌等比头孢他定有效。可以预见它将成为治疗重症感染的新的一线药物。

目前比阿培南上市销售的剂型为无菌分装制剂，是由无菌原料药直接分装获得的粉针剂，该剂型对原料和环境要求较高，成本较大；而比阿培南在水溶液中稳定性又较差，不适合做成水针制剂。

中国发明专利(CN100548295C)公开了一种氨曲南脂质体冻干制剂，是将氨曲南用含有抗氧剂的中性磷脂、负电荷磷脂和胆固醇形成的脂质体包封得到的冻干制剂。这种脂质体冻干制剂质量稳定，并且由于采用脂质体将氨曲南进行包封，毒副作用相对减少，药效作用也并未降低。但采用该技术方案，其粒径位于50-300nm间，其粒径分布范围大，不均匀。

发明内容

为解决现有技术中存在的不足，本发明提供了一种粒径分布均匀、且稳定性较高的比阿培南冻干脂质体制剂。

为实现上述目的，本发明的比阿培南冻干脂质体制剂，以2500ml注射液计，含有如下组分：

比阿培南  50-150份；中性磷脂   200～800份；负电荷磷脂  100～400份；

胆固醇    150-650份；抗氧化剂  0.5～2份。

此外，还可在上述组分基础上，进一步包括：

糖100～300份；缓冲剂65～155份。

作为上述方式的最优选组分：

比阿培南  100份；中性磷脂  500份；负电荷磷脂   275份；

胆固醇    300份；抗氧化剂  1份；糖250份；缓冲剂128份。

进一步讲，上述的缓冲剂可以选自甘氨酸、精氨酸、琥珀酸、枸橼酸钠、谷氨酸钠、碳酸氢钠、无水碳酸钠和氢氧化钠中的一种或几种；所述的糖可以选自蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖和绵白糖中的一种或几种；所述的中性磷脂可以选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双软脂酸卵磷脂和双肉豆蔻酸卵磷脂中的一种或几种；负电荷磷脂可以选自双肉豆蔻酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油、双肉豆蔻算磷脂酸、双硬脂酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇中的一种或几种；所述的抗氧剂优选为维生素E。

此外，本发明同时提供了一种比阿培南脂质体冻干制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制备空白脂质体：用适量的氯仿或氯仿-甲醇混合溶剂将所述量的中性磷脂、负电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂溶解成溶液，减压旋转蒸发除去溶液中的溶剂，制成均匀干燥的脂质薄膜；加入0.01～0.5mol/L有机酸溶液来水化脂质薄膜，水化温度在30℃～58℃之间，得空白脂质体悬浮液；

(2)均化脂质体：用高压均质机制备脂质体，将上述空白脂质体悬浮液在115MPa压力下通过滤膜，均质2次，所得脂质体的平均粒径为100～110nm，粒径分布窄，在60～230nm之间；

(3)制备含比阿培南的脂质体：将比阿培南溶于注射用水中，加热到30℃～58℃，用0.1～2.0mol/L碱水溶液调节空白脂质体悬浮液至碱性，再将比阿培南溶液和碱性空白脂质体悬浮液混合均匀并在30℃～58℃下保温40分钟；

(4)制备比阿培南脂质体混悬液：按重量比配制浓度为3％～10％的糖水溶液并加入缓冲剂调节PH值至5.5～6.5，缓冲剂的含量为1％～3％，得脂质体分散液，然后用本分散液洗涤含比阿培南的脂质体，利用渗析过滤法使比阿培南脂质体溶液置换为PH值5.5～6.5的脂质体分散液，使比阿培南脂质体分散在与人体生理环境类似的糖水溶液中，得比阿培南脂质体混悬液；

(5)定容、除菌、分装、冻干：加注射用水定容，将比阿培南脂质体悬浮液用微孔滤膜过滤除菌，分装，冷冻干燥得成品。

进一步讲，上述步骤(2)中脂质体的平均粒径控制在100～110nm。

上述的有机酸为柠檬酸、琥珀酸、枸橼酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸中的一种或几种；步骤(3)中所述的碱可以选自磷酸钠、磷酸钾、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠或氢氧化钠中的一种或几种。

本发明的技术方案是根据脂质体的特性，选用一定比例的磷脂混合物制备包裹比阿培南的空白脂质体，加入胆固醇和抗氧剂来增加脂质体比阿培南的稳定性，通过冻干形成的脂质体冻干制剂，可以通过静脉给药，其有效的解决了质量稳定性的问题，并且由于采用脂质体将比阿培南进行包封，同时毒副作用也相对减少，药效作用也并未降低。本发明提供的比阿培南脂质体制剂，进行急性毒性试验、慢性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。

本发明中优选了比阿培南的重量份数为50-150份，脂质体工业化的最大障碍是其体内外不稳定性和包封率低，而脂质体的不稳定性又易导致药物渗漏，从而导致药物包封率更低。比阿培南的含量过于大，不能完全被脂质体包裹，包封率低，粒径大且分布宽，会影响药物的靶向性及稳定性，降低生物利用度，增加毒副作用。而载药量的大小直接影响到药物的临床应用剂量，载药量愈大，愈易满足临床需要。如果比阿培南的含量过小，不能达到临床所需剂量，将导致药效不佳，所以最终优选了比阿培南的重量份数为50-150份这个范围。

本发明中加入了重量百分比为150-650份的胆固醇，目的是提高包封率和稳定性。因为适当比例的胆固醇可以增加脂质双分子膜中脂质分子排列的紧密程度，有助于减轻加热时脂质分子排列的紧密程度和脂质分子弯曲度的增加，从而起到稳定脂膜和减少渗漏作用。更优选的重量百分比是300份，制备的脂质体包封率最高，粒径分布窄且均匀，产品稳定性好。

本发明采用低温水化，需要严格控制温度在58℃以下，以防止比阿培南溶液和碱性空白脂质体悬浮液混合时药物发生聚合，保证产品的质量。这主要是由于比阿培南虽不易在水溶液中聚合，但受热后会产生高分子聚合物，而这种杂质正是β-内酰胺类抗生素发生变态反应的根源所在，因而将水化温度限定为30℃～58℃。

本发明在高压均质制备脂质体时，选择在115Mpa压力下均质2次，主要由于均质压力过低，粒径不能达到要求，压力过高，脂质体发生聚集，均质次数过多，会使脂质体发生渗漏，导致包封率下降。最终优选了在115Mpa压力下均质2次，所得脂质体的平均粒径为100～110nm，粒径分布窄，在60～230nm之间，包封率在90％以上。

本发明中选择最终调节比阿培南脂质体混悬液的pH范围为5.5-6.5，是由于比阿培南的pH值为4.5-5.8，使药物处于一个与自身pH值接近的环境中，更稳定。

粒径图显示，脂质体粒径位于60～200nm之间，大部分脂质体的粒径聚集在90-120nm范围内，平均粒径为100nm，分布窄且均匀，且药物包裹率可达90％以上，包裹率高、成本低，适宜进行工业化生产。

附图说明

下面结合附图及具体实施方式对本发明作更进一步详细说明：

图1为本发明的粒径分布图。

具体实施方式

实施例1

比阿培南                      50g

大豆卵磷脂                    200g

双硬脂酸磷脂酰甘油            120g

胆固醇                        160g

维生素E                       500mg

枸橼酸钠                      3.5g

无水碳酸钠                    3g

蔗糖                          100g

甘氨酸                        60g

注射用水                    2500ml

制备工艺

(1)根据配方将大豆卵磷脂、双硬脂酸磷脂酰甘油、胆固醇和维生素E溶于氯仿中混合均匀，用旋转蒸发仪将溶液中溶剂减压除去，形成脂质薄膜，配制0.5mol/L的枸橼酸溶液，用枸橼酸溶液来水化脂质薄膜，水化温度一般在45℃～55℃之间，得空白脂质体悬浮液。

(2)水化完全后，用高压均粒机制备脂质体，并在高压下通过80-100nm孔径的滤膜，将脂质体的平均粒径控制在100～110nm，脂质体粒径和均匀度可用多角度纳米粒子分析器来检测。

(3)将比阿培南溶于新鲜的注射用水中，加热到45℃～55，用1mol/L的无水碳酸钠水溶液调节空白脂质体悬浮液至7.2，将比阿培南溶液和碱性空白脂质体悬浮液混合均匀并在45℃～55℃下保温40分钟。

(4)按重量比配制9％的蔗糖水溶液并加入1.0％的甘氨酸，得脂质体分散液，然后用本分散液洗涤含比阿培南的脂质体，利用渗析过滤法使比阿培南脂质体溶液置换为PH值5.5～6.5的脂质体分散液。

(5)加注射用水定容，将比阿培南脂质体悬浮液用微孔滤膜过滤除菌，分装，冷冻干燥得成品。

实施例2

比阿培南                        2000g

蛋黄卵磷脂                      10000g

双肉豆蔻酸磷脂酰甘油            5500g

胆固醇                          6000g

维生素E                         20g

琥珀酸                          200g

碳酸氢钠                        160g

蔗糖                            5000g

精氨酸                  2200g

注射用水                50000ml

制备工艺：参照实施例1各步骤进行操作，(1)中用0.25mol/L的琥珀酸溶液来水化脂质薄膜；(2)水化完全后用高压均粒机制备脂质体，并在高压下通过80-100nm孔径的滤膜，将脂质体的平均粒径控制在100～110nm；(3)中用0.25mol/L的碳酸氢钠水溶液调节空白脂质体悬浮液至PH值为7.6；(4)中配制5％的蔗糖水溶液并加入1.0％的精氨酸，作为脂质体分散液。

实施例3

比阿培南                      250g

氢化大豆卵磷脂                1200g

双硬脂酸磷脂酰甘油            630g

胆固醇                        900g

维生素E                       4g

枸橼酸                        28g

无水碳酸钠                    25g

葡萄糖                        600g

甘氨酸                        250g

注射用水                      5000ml

制备工艺：参照实施例1各步骤进行操作，(1)中用0.3mol/L的枸橼酸来水化脂质薄膜；(2)水化完全后用高压均粒机制备脂质体，并在高压下通过80-100nm孔径的滤膜，将脂质体的平均粒径控制在100～110nm；(3)中用0.5mol/L的无水碳酸钠水溶液调节空白脂质体悬浮液至7.4；(4)中配制5％的葡萄糖水溶液并加入2.0％的甘氨酸，作为脂质体分散液。

实施例4

比阿培南                      1000g

双硬脂酸卵磷脂                6000g

双硬脂酸磷脂酰甘油            3200g

胆固醇                        5000g

维生素E                       10g

枸橼酸                        100g

氢氧化钠                      80g

乳糖                          2000g

甘氨酸                        800g

注射用水                      20000ml

制备工艺：参照实施例1各步骤进行操作，(1)中用0.5mol/L的枸橼酸溶液来水化脂质薄膜；(2)水化完全后用高压均粒机制备脂质体，并在高压下通过80-100nm孔径的滤膜，将脂质体的平均粒径控制在100～110nm；(3)中0.25mol/L的氢氧化钠水溶液调节空白脂质体悬浮液至7.5；(4)中配制10％的乳糖水溶液并加入1％的甘氨酸，作为脂质体分散液。

实施例5质量研究考察

对以上四个实施例中制得的样品进行质量检测，并同时进行高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月和温度25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，得到数据结果如下：

加速质量检测结果如下表所示：

长期质量检测结果如下表所示：

由以上数据中，已上市产品为无菌分装制剂，从结果可以看出，本发明制得的样品质量符合标准要求，而且加速6月和长期18月后各项质量指标无明显变化，均符合质量标准，有效地说明了本发明的制备的样品良好的质量稳定性。且由图1所示可知，大部分脂质体的粒径聚集在90-120nm范围内，平均粒径为100nm，分布窄且均匀。

Claims (4)

1.一种比阿培南冻干制剂，其特征在于以2500m l注射液计，含有如下组分：

比阿培南50-150份；中性磷脂200～800份；负电荷磷脂100～400份；

胆固醇150-650份；抗氧化剂0.5～2份；糖100～300份；缓冲剂65～155份；

其中，中性磷脂选自蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂中的一种或几种；负电荷磷脂选自双肉豆蔻酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油中的一种或两种；

上述比阿培南冻干制剂的制备方法包括如下步骤：

(1)制备空白脂质体：用适量的氯仿或氯仿-甲醇混合溶剂将所述量的中性磷脂、负电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂溶解成溶液，减压旋转蒸发除去溶液中的溶剂，制成均匀干燥的脂质薄膜；加入0.01～0.5mol/L有机酸溶液来水化脂质薄膜，水化温度在30℃～58℃之间，得空白脂质体悬浮液；

(2)均化脂质体：用高压均质机制备脂质体，将上述空白脂质体悬浮液在115MPa压力下通过滤膜，均质2次，所得脂质体的平均粒径为100～110nm，粒径分布窄，在60～230nm之间；

(3)制备含比阿培南的脂质体：将比阿培南溶于注射用水中，加热到30℃～58℃，用0.1～2.0mol/L碱水溶液调节空白脂质体悬浮液至碱性，再将比阿培南溶液和碱性空白脂质体悬浮液混合均匀并在30℃～58℃下保温40分钟；

(4)制备比阿培南脂质体混悬液：按重量比配制浓度为3％～10％的糖水溶液并加入缓冲剂调节PH值至5.5～6.5，缓冲剂的含量为1％～3％，得脂质体分散液，然后用本分散液洗涤含比阿培南的脂质体，利用渗析过滤法使比阿培南脂质体溶液置换为PH值5.5～6.5的脂质体分散液，使比阿培南脂质体分散在与人体生理环境类似的糖水溶液中，得比阿培南脂质体混悬液；

(5)定容、除菌、分装、冻干：加注射用水定容，将比阿培南脂质体悬浮液用微孔滤膜过滤除菌，分装，冷冻干燥得成品。

2.根据权利要求1所述的比阿培南冻干制剂，其特征在于包括以下组分：

比阿培南 100份；中性磷脂 500份；负电荷磷脂 275份；

胆固醇 300份；抗氧化剂 1份；糖 250份；缓冲剂 128份。

3.根据权利要求2所述的比阿培南冻干制剂，其特征在于：所述的缓冲剂选自甘氨酸、精氨酸、琥珀酸、枸橼酸钠、谷氨酸钠、碳酸氢钠、无水碳酸钠和氢氧化钠中的一种或几种；所述的糖选自蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖和绵白糖中的一种或几种；所述的抗氧剂为维生素E。

4.根据权利要求1所述的比阿培南冻干制剂，其特征在于：步骤(1)中所述的有机酸为柠檬酸、琥珀酸、枸橼酸、乙酸、草酸、葡萄酸、乳糖酸、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸中的一种或几种；步骤(3)中所述的碱选自磷酸钠、磷酸钾、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠或氢氧化钠中的一种或几种。

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