CN102053068A - 一种血清铁含量的检测方法及其专用标准品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种血清铁含量的检测方法及其专用标准品。本发明提供的方法，包括如下步骤：1)A、将所需质量的标准品溶液与所需质量的蛋白沉淀试剂混匀，放置；离心，收集上清液，记作上清液I；B、将所需质量的上清液I与所需质量的色原试剂混匀，离心，取上清液，记作上清液II；C、在562nm波长下检测上清液II的吸光度值；D、得到标准曲线；2)按照步骤1)中A-C的方法进行检测，得到待测样品中铁的含量。本发明的实验证明，用本发明的标准品和方法检测血清铁的含量，具有检测限低，线性高，精密度、准确度均能满足临床需要，费用相对较低。

Description

一种血清铁含量的检测方法及其专用标准品

技术领域

本发明涉及一种血清铁含量的检测方法及其专用标准品。

背景技术

铁是人体正常生理过程中不可缺少的物质，几乎任何组织都含有铁。缺铁性贫血是铁缺乏最严重的疾病，血清铁的检测在临床诊断过程起着重要的作用。早在1966年，国际血液学标准化委员会(International Committee of Standardization inHaematology ICSH)开始推进血清铁检测的标准化进程，1970年8月在慕尼黑ICSH第8次会议上达成一致，随后发表了血清铁的推荐方法，推荐一种使用Bathophenanthroline sulfonate为色原的参考方法，三氯乙酸为蛋白沉淀剂，铁的标准浓度为2mg/L，分光光度计上在535nm波长比色。1978年ICSH对其进行了改进，蛋白沉淀的盐酸浓度由1971年提出的2mol/L降低为lmol/L，避免沉淀上清发生浑浊的情况发生。大量的实验发现，相对于色原Bathophenanthroline sulfonate来说，亚铁嗪(Ferrozine)灵敏度高25％，Ferene灵敏度高50％。1990年ICSH推荐使用亚铁嗪或Ferene做为色原，亚铁嗪使用562nm波长下比色，Ferene使用593nm波长比色。

美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards instituet，CLSI))在1990年提出了使用亚铁嗪为色原的分光光度法做为推荐标准方法，1998年确认将其做为标准方法。CLSI的标准方法与ICSH参考方法相同点是使用了相同的色原亚铁嗪，两个机构的方法均设置了蛋白沉淀的步骤。CLSI参考方法试剂组成与ICSH参考方法比较，增加了两个主要成分。其一是硫脲，作用是去除铜的干扰，其二是抗坏血酸，用于去除血红蛋白的干扰。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种血清铁含量的检测方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1)A、通过称量质量的方法得到所需质量的标准品溶液和所需质量的蛋白沉淀试剂，将所需质量的标准品溶液与所需质量的蛋白沉淀试剂混匀，放置；离心，收集上清液，记作上清液I；

B、通过称量质量的方法得到所需质量的上清液I和所需质量的色原试剂，将所需质量的上清液I与所需质量的色原试剂混匀，离心，取上清液，记作上清液II；

C、在562nm波长下检测上清液II的吸光度值；

D、以标准品溶液的浓度值为横坐标，以对应的吸光度值为纵坐标，建立一元线性回归曲线，即得到标准曲线；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的待测样品，用所需质量的待测样品替换步骤1)中的标准品溶液，按照步骤1)中A-C的方法进行检测，得到待测样品对应的吸光度值；根据所述标准曲线，得到待测样品中铁的含量。

所述标准品溶液的按照如下方法制备：

1)通过称量质量的方法得到所需质量的铁和所需质量的水，将所需质量的铁用浓盐酸溶解后，加入所需质量的水，得到高浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述高浓度铁标准贮备液中浓度为1.0000mg/g；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，将所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液混合，得到中浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述中浓度铁标准贮备液中的浓度为50.0000μg/g；

3)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，用所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液稀释所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液，得到标准品溶液；所述铁离子在所述标准溶液中的浓度为以下6种：0.2500ug/g、0.5000ug/g、1.0000ug/g、1.5000ug/g、2.0000ug/g和3.000ug/g。

所述步骤1)的步骤A中，标准品溶液的量为2.00±0.01g，所述蛋白沉淀试剂的量为2.08±0.01g；

所述步骤1)的步骤B中，上清液I的量为2.04±0.01g，所述色原试剂的量为1.14±0.01g；

所述步骤2)中，所述待测样品的量为2.02±0.01g；

所述步骤1)的步骤A中，所述放置的时间为15min，

所述离心力为1500g，所述离心的时间为15min；

所述步骤1)的步骤B中，所述离心力为1500g，

所述离心的时间为10min。

所述蛋白沉淀试剂按照如下方法制备：将抗坏血酸、浓度为500g/l的三氯乙酸水溶液、浓度为6mol/l的盐酸水溶液和水混合，所述抗坏血酸、所述三氯乙酸和所述浓度为6mol/l的盐酸水溶液的配比为5g∶500g∶33ml；

所述色原试剂按照如下方法制备：将亚铁嗪、浓度为4mol/l的三水醋酸钠水溶液和硫脲混合，所述亚铁嗪、所述三水醋酸钠和所述硫脲的配比为525mg∶544.4g∶15g。

所述标准品中，铁为铁标准物质SRM937。

所述待测样本为无HIV疾病、无梅毒疾病、无肝炎疾病、无溶血、无黄疸且非乳糜的离体血清。

本发明的另一个目的是提供一种标准品。

本发明提供的标准品，按照如下方法制备：

1)通过称量质量的方法得到所需质量的铁和所需质量的水，将所需质量的铁用浓盐酸溶解后，加入所需质量的，得到高浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述高浓度铁标准贮备液中浓度为1.0000mg/g；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，将所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液混合，得到中浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述中浓度铁标准贮备液中的浓度为50.0000μg/g；

3)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，用所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液稀释所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液，得到标准品溶液；所述铁离子在所述标准溶液中的浓度为以下6种：0.2500ug/g、0.5000ug/g、1.0000ug/g、1.5000ug/g、2.0000ug/g和3.000ug/g。

所述标准品在检测血清铁含量中的应用。

上述浓盐酸为质量百分含量为36％-38％的浓盐酸。

本发明的实验证明，用本发明的标准品和方法检测血清铁的含量，用血清铁亚铁嗪分光光度比色法SRM3126a，平均偏倚为0.39％，混合血清加入SRM3126a的平均回收率为101.09％，均在可接受范围内，由此证明目前所复现的血清铁亚铁嗪分光光度比色准确可靠。

在精密度实验中，本研究选取了3个不同浓度水平的混合血清，进行批内、批间检测，总CV均小于1％，达到国际上对血清铁亚铁嗪参考方法的要求。

线性评价实验，据报道线性达3.0mg/L。本实验结果达到12μg/g(即为12mg/L)，0.1mol/L盐酸的密度为1g/L。

比色杯空白吸光度相差不超过0.001。显色物质亚铁嗪的稳定性高，反应10分钟内无变化。加样采用精密分析天平称量，避免体积加样的误差。本发明的方法检测限低，线性高，精密度、准确度均能满足临床需要，费用相对较低。

附图说明

图1为血清铁亚铁嗪参考方法的标准曲线

图2为血清铁亚铁嗪参考方法线性范围

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、

一、仪器、设施：

1.紫外-可见分光光度计UV2450：日本岛津公司生产。北京市计量局每年校对检测一次，每天使用前自检。

2.去离子水净化装置：北京双峰纯水设备有限公司，用于去离子水的制备。

3.精密天平：赛多利斯Sartorius精密分析天平，型号BSA224S-CW，精度0.1mg。用于标准物质、血清样品的称量；参考方法试剂原料称量；容量瓶的内校。北京市计量局每年校对检测一次，每月一次内校。

4.Eppendorf Reference移液器：200μL，1000μL，5000μL，北京市计量局每年校对检测一次。

5.过滤器：美国PALL公司生产，25mm直径。

6.过滤膜：Super-450，美国PALL公司生产，25mm直径，0.45μm。

7.旋涡混匀器：江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司，型号XW-80A。

8.离心机：常州国华生产，型号2500型。

二、试剂：

1.三氯乙酸：分析纯，铁含量≤0.0005％，国药集团化学试剂有限公司生产。

2.三水合醋酸钠，分析纯，铁含量≤0.0002％，国药集团化学试剂有限公司生产。

3.抗坏血酸，美国Sigma公司生产。

4.亚铁嗪，美国Sigma公司生产。

5.硫脲，ACS，铁含量5mg/kg(0.0005％)美国Sigma公司生产。

6.浓盐酸，分析纯，铁含量≤0.00005％，北京化工厂生产。

7.铁粒纯品：美国标准化委员会(National Institute of Standards&TechnologyNIST)SRM937，纯度99.9％，购自NIST。

8.铁标准溶液：美国NIST SRM3126a，标准值10.001mg/g±0.023mg/g，购自美国标准化委员会NIST。

9.超纯去离子水：电阻率≥18MΩ。

10.血清样品：来自北京朝阳医院检验科。(1)血清样品的收集：完全遵照ISO指南34及WHO关于制备标准物质血清原料的收集指南，收集体检后剩余的血清。所有标本除外HIV阳性，梅毒阳性，肝炎阳性的标本，血清应澄清透明，除外溶血，黄疸，乳糜等异常标本。每批标本收集大于50ml。(2)血清样本的过滤，将收集好的样本每批充分混匀，使用Super-450过滤膜过滤。(2)血清样品的保存，过滤好的样本立即放入-80℃冰箱保存。使用前从-80℃冰箱取出，室温下自然融化，当天使用，仅冻融一次。

三、玻璃器皿：

使用的玻璃器皿，容量瓶，量筒，烧杯，均符合国家A级标准。所有与试剂、水、稀释液或样本接触的玻璃容器做如下清洗：(1)使用常规清洗程序，首先使用含去污剂的水浸泡30min，然后自来水冲洗，去离子水冲洗10遍。(2)在2mol/L盐酸中浸泡过夜。(3)去离子水冲洗5-6分钟。(4)无尘环境中倒置自然干燥。

四、标准贮备液和稀释液的配制方法

1.空白贮备液及稀释液：0.1mol/L的盐酸。取干燥洁净100ml量筒，将0.9ml浓盐酸加入100ml容量瓶中，然后加入去离子水，至100ml刻度，颠倒10次混匀。相同方法做7次制备7瓶0.1mol/L盐酸各100ml。用于做空白校准液或标准稀释液。

2.高浓度铁标准贮备液：配制理论含量设计为1mg/g的高浓度铁标准液。

取一只干燥洁净小烧杯，用BSA224S-CW精密分析天平称量，首先清零，称量SRM937纯铁粒，实际称量值为100.0mg，加入2.5ml浓盐酸溶解铁粒，注意封口，溶解过程需缓慢摇动，直至完全溶解。取一干燥洁净100ml容量瓶，在BSA224S-CW精密分析天平上清零，然后将溶解好的液体小心转入容量瓶中，去离子水冲洗小烧杯10遍分别转入容量瓶中，加去离子水至100g左右，实际称量100.0019g，颠倒混匀10次，实际浓度为1.0000mg/g。

3.中浓度铁标准贮备液：配制理论含量设计为50μg/g的中浓度铁标准液。

使用高浓度铁标准贮备液，0.1mol/L盐酸稀释制备高浓度铁贮备液。取一干燥洁净100ml容量瓶，在BSA224S-CW精密分析天平上清零，加入铁高浓度标准液，实际称量值为5.0006g，然后加入配制好的0.1mol/L盐酸，实际称量值显示为100.0305g，颠倒混匀10次，实际浓度为49.9908μg/g。

4.铁标准工作液：配制理论含量设计为0.25，0.5，1，1.5，2，3μg/g的铁标准工作液。

使用中浓度铁标准贮备液，0.1mol/L盐酸稀释制备中浓度铁贮备液。取一干燥洁净100ml容量瓶，在BSA224S-CW精密分析天平上清零，加入中浓度铁标准液，记录实际加入值，然后加入配制好的0.1mol/L盐酸，记录实际称量值，颠倒混匀10次，计算实际铁标准工作液浓度，具体称量值见表1，得到浓度为0.2540、0.4999、1.0035、1.5000、2.0027、3.0000ug/g的铁标准工作液。

表1血清铁亚铁嗪参考方法铁标准工作液配制表

五、反应原理：

在酸性条件下，血清铁从与其结合的转铁蛋白上游离出来，同时沉淀蛋白。上清中的三价铁被还原为亚铁离子(二价铁)，亚铁离子与亚铁嗪反应形成紫色复合物。在560nm处测其吸光度变化，吸光度变化与标本中的铁离子浓度成正比。

六、所用试剂的配制方法

1.三氯乙酸，配制浓度为500g/L。取一干燥洁净烧杯，称取50g三氯乙酸，加入去离子水搅拌溶解，小心转入100ml容量瓶中，去离子水冲洗小烧杯10遍分别转入容量瓶中，加去离子水至刻度100ml，充分颠倒混匀。密封，2-8℃保存稳定6个月。

2.三水醋酸钠，配制浓度为4mol/L(544.4g/L)。取一干燥洁净效烧杯，称取27.22g三氯乙酸，加入去离子水加热搅拌溶解，小心转入50ml容量瓶中，去离子水冲洗小烧杯10遍分别转入容量瓶中，加去离子水至刻度50ml，充分颠倒混匀。密封，室温保存稳定一个月。

3.6mol/L盐酸，使用Eppendorf Reference移液器吸取5ml浓盐酸，加入干燥洁净的10ml容量瓶中，用去离子水稀释至10ml。

4.蛋白沉淀试剂的配制，取一干燥洁净烧杯，称取0.5g抗坏血酸，使用20ml配置好的500g/L的三氯乙酸水溶液溶解，充分溶解后，加入3.3ml，6mol/L盐酸，将其转入100ml干燥洁净的容量瓶中，去离子水冲洗小烧杯10遍分别转入容量瓶中，加去离子水至刻度100ml，充分颠倒混匀。密封，2-8℃保存稳定一周。

5.色原试剂的配制，取一干燥洁净烧杯，称取26.25mg亚铁嗪，使用少量(约15ml)配置好的4mol/L的三水醋酸钠溶液溶解，充分溶解后，用称量纸称量0.75g硫脲，小心转入上述烧杯中，充分搅拌溶解，将其转入50ml干燥洁净的容量瓶中，4mol/L的三水醋酸钠溶液冲洗烧杯5遍分别转入容量瓶中，加至刻度50ml，充分颠倒混匀。密封，2-8℃保存稳定一周。

七、检测方法

1、标准曲线的获得

1)、分别将10ml离心管放到BSA224S-CW精密分析天平清零，分别取2ml浓度为0.2540、0.4999、1.0035、1.5000、2.0027、3.0000ug/g的铁标准工作液加入离心管中，记录称量数据1.9996，1.9987，1.9952，1.9956，2.0015，2.0025g。然后再清零，分别取2ml蛋白沉淀试剂加入离心管中，记录称量数据2.0869，2.0918，2.0925，2.0887，2.0888，2.0980g，然后分别与标准液充分混匀。静置反应15min，然后离心机4000转(约1500g)离心15min去除蛋白沉淀，分别得到上清液I。以0.1mol/L盐酸做零值样本。

2)、分别取10ml离心管放到BSA224S-CW精密分析天平清零，分别小心准确移取上述步骤1得到的2ml上清液I转入新的10ml离心管中，记录称量数据2.0422，2.0403，2.0530，2.0358，2.0331，2.0343g。清零，在装有上清液I的离心管中加入1ml色原试剂，记录称量数据1.1499，1.1523，1.1419，1.1477，1.1466，1.1416g，充分混匀。离心机离心，4000转(约1500g)离心10min去除杂质，分别得到上清液II。

3)、分别取上述步骤2得到的上清液II，加入比色杯中。在分光光度计上562nm处读取吸光度值，并以0.1mol/L盐酸做为零值样本(空白工作液)。

按照上述方法，测定最终反应在562nm波长的吸光度(A)值，以A值为纵坐标，对应的标准品溶液中铁浓度为横坐标，得到标准曲线，见图1所示。所述标准曲线为一元线性回归曲线，其自变量为所述铁标准工作液中铁的浓度值，因变量为所述铁标准工作液中铁的吸光度值。

2、样品的检测

1)、将10ml离心管放到BSA224S-CW精密分析天平清零，取2.0285g(即为2ml)血清样品加入离心管中。然后再称取2.0864g(即为2ml)蛋白沉淀试剂加入离心管中，，然后与血清样品充分混匀。静置反应15min，然后离心机4000转(约1500g)离心15min去除蛋白沉淀，得到上清液I。

2)、取10ml离心管放到BSA224S-CW精密分析天平清零，小心准确移取上述步骤1得到的2.0438g(即为2ml)上清液转入新的10ml离心管中。清零，在装有上清液的离心管中加入1.1418g(即为1ml)色原试剂，充分混匀。离心机离心，4000转(约1500g)离心10min去除杂质，得到上清液。

3)、取上述步骤2得到的上清液，加入比色杯中。在分光光度计上562nm处读取吸光度值。

使用最小二乘法得到步骤1得到的标准曲线的斜率和截距，通过标准曲线计算样本中血清铁浓度。

在标准曲线的获得步骤的吸光值读取后，将比色杯彻底清洗后，充分干燥，检测杯空白的吸光值。漂移应小于±0.001，如果发生漂移，需要重新调零。实验重复三次，结果取平均值。

结果为：漂移小于±0.001；

同样在样品检测时，漂移也小于±0.001。

实施例2、方法的鉴定

1、线性评价：根据CLSI线性判定指南EP6-A文件，将由实施例1步骤四得到的中浓度铁标准贮备液(SRM937)，使用0.1mol/L盐酸做为稀释液，得到7个不同浓度水平的样本，具体按照表2配制，1号样本选用0.1mol/L盐酸，7号样本的铁离子浓度达到12.10μg/g(即为12mg/L)。配制方法与实施例1中步骤四中所述一致。

采用实施例1中的步骤七的方法，根据标准曲线确定7个不同浓度水平的样本的铁离子浓度，检测结果也见表2。实验重复三次，结果取平均值。

以理论稀释值为横坐标(X)，实际测定值(7个样本的铁离子浓度)为(Y)做图，见图2，可观察到该方法在铁离子浓度为12.10μg/g内的线性良好。

表2线性范围评价的样本稀释比例及测定结果

2、不准确度

首先将NIST铁标准液SRM3126a(标准值10.001mg/g±0.023mg/g)使用称重法用0.1mol/L盐酸进行50倍稀释，然后将稀释后的SRM3126a溶液分别进行50倍和40倍稀释，作为分析样本，采用实施例1的步骤七的方法，根据标准曲线确定分析样本中铁浓度，其结果见表3，可以看出，与靶值的平均偏倚分别为0.04％(-0.66％～0.74％)，0.74％(0.96％～0.53％)。实验重复三次，结果取平均值。

表3血清铁亚铁嗪参考方法测定SRM3126a不同稀释浓度

3、回收率

NIST铁标准液SRM3126a使用称重法0.1mol/L盐酸进行200倍稀释，实际浓度为50.0372μg/g。将0.05ml 0.1mol/L的稀盐酸溶液加入4.95ml混合血清中做为基础样本01；将0.15ml 0.1mol/L的稀盐酸溶液加入4.85ml混合血清中做为基础样本02；将0.05ml 200倍稀释的NIST3126a溶液加入基础样本01中，做为分析样本1，将0.15ml 200倍稀释的NIST3126a溶液加入基础样本02中，做为分析样本2，采用实施例1的步骤七的方法，测定铁的浓度，每个浓度重复测定两遍，计算得到平均回收率为101.33％(99.26％～102.97％)，101.94％(101.23％～102.65％)见表4。

表4血清铁亚铁嗪参考方法的回收率

4、不精密度评价

选取3个不同铁浓度的混合血清样本(预实验首先测得浓度分别为0.9004μg/g、1.0567μg/g、2.0927μg/g)进行批内和批间不精密度测定，每个样本分为3瓶，每瓶即为一批，每批测定10次，计算批内、批间与总CV。采用实施例1的步骤七的方法，根据标准曲线确定各样本中血清铁浓度，结果见表5。实验重复三次，结果取平均值。

表5血清铁亚铁嗪参考方法精密度(μg/g)

5、检测低限(LLD，Low Limit of Dection)

以0.1mol/l盐酸做为空白对照，选取3个系列低值铁浓度样本1、2、3，采用实施例1的步骤七的方法，根据标准曲线确定各样本中血清铁浓度，每个样本重复测定10遍，得到空白吸光度(A0)，各样本吸光度(A)值，见表6。检测低限LLD＝

+3SD＝0.0234，通过与低值吸光度的比较，得到LLD吸光度对应的浓度C＝0.0234/0.0263*0.0418＝0.0372μg/g。

表6血清铁亚铁嗪参考方法的检测低限

6、干扰物评价：将0.2ml 0.1mol/L盐酸加入1.8ml混合血清为基础样本，分别将0.2ml高于正常样本浓度的离子(NaCL、KCL、CaCL₂.2H₂O、MnCL₂、CaCL₂.2H₂O、MnCL₂、CuSO₄.5H₂O、ZnCL₂、MgCL₂.6H₂O)，胆红素(Bilibulin)(购自Frontier-Scientific，货号：B850)，内脂(3内脂＝1甘油三酯，Lipid)(购自Sigma，货号：68890-65-3)，血红蛋白(Hb)(北京欣经科生物技术有限公司，货号：9008-02-0)加入1.8ml混合血清中做为干扰样本，检测基础样本和加入干扰物后的干扰样本中铁的浓度，除血红蛋白外，加入的干扰离子及胆红素，甘油三酯引起检测结果偏差均低于±5％，加入干扰物的浓度及干扰产生的偏差见表7。

表7血清铁亚铁嗪参考方法抗干扰性能

注：*浓度为g/L

7、亚铁嗪稳定性的影响

检测亚铁嗪在不同离心时间下的稳定性，具体方法如下：

采用实施例1的检测方法，不同的是加入1ml亚铁嗪后的混合液分别离心10分钟，加入比色杯中，立即读数(反应10分钟)，10分钟时读数(反应20分钟)，20分钟时读数(反应30分钟)，以此类推。

结果为：与反应10分钟相比，反应20分钟内无变化，30分钟内变化0.02％，50分钟内变化2％，60分钟内变化2％。

Claims (9)

1.一种血清铁含量的检测方法，包括如下步骤：

1)A、通过称量质量的方法得到所需质量的标准品溶液和所需质量的蛋白沉淀试剂，将所需质量的标准品溶液与所需质量的蛋白沉淀试剂混匀，放置；离心，收集上清液，记作上清液I；

B、通过称量质量的方法得到所需质量的上清液I和所需质量的色原试剂，将所需质量的上清液I与所需质量的色原试剂混匀，离心，取上清液，记作上清液II；

C、在562nm波长下检测上清液II的吸光度值；

D、以标准品溶液的浓度值为横坐标，以对应的吸光度值为纵坐标，建立一元线性回归曲线，即得到标准曲线；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的待测样品，用所需质量的待测样品替换步骤1)中的标准品溶液，按照步骤1)中A-C的方法进行检测，得到待测样品对应的吸光度值；根据所述标准曲线，得到待测样品中铁的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述标准品溶液的按照如下方法制备：

1)通过称量质量的方法得到所需质量的铁和所需质量的水，将所需质量的铁用浓盐酸溶解后，加入所需质量的水，得到高浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述高浓度铁标准贮备液中浓度为1.0000mg/g；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，将所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液混合，得到中浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述中浓度铁标准贮备液中的浓度为50.0000μg/g；

3)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，用所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液稀释所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液，得到标准品溶液；所述铁离子在所述标准溶液中的浓度为以下6种：0.2500ug/g、0.5000ug/g、1.0000ug/g、1.5000ug/g、2.0000ug/g和3.000ug/g。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述步骤1)的步骤A中，标准品溶液的量为2.00±0.01g，所述蛋白沉淀试剂的量为2.08±0.01g；

所述步骤1)的步骤B中，上清液I的量为2.04±0.01g，所述色原试剂的量为1.14±0.01g；

所述步骤2)中，所述待测样品的量为2.02±0.01g。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1)的步骤A中，所述放置的时间为15min，所述离心力为1500g，所述离心的时间为15min；

所述步骤1)的步骤B中，所述离心力为1500g，所述离心的时间为10min。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述蛋白沉淀试剂按照如下方法制备：将抗坏血酸、浓度为500g/l的三氯乙酸水溶液、浓度为6mol/l的盐酸水溶液和水混合，所述抗坏血酸、所述三氯乙酸和所述浓度为6mol/l的盐酸水溶液的配比为5g∶500g∶33ml；

所述色原试剂按照如下方法制备：将亚铁嗪、浓度为4mol/l的三水醋酸钠水溶液和硫脲混合，所述亚铁嗪、所述三水醋酸钠和所述硫脲的配比为525mg∶544.4g∶15g。

6.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述标准品中，所述铁为铁标准物质SRM937。

7.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述待测样本为无HIV疾病、无梅毒疾病、无肝炎疾病、无溶血、无黄疸且非乳糜的离体血清。

8.一种标准品，按照如下方法制备：

1)通过称量质量的方法得到所需质量的铁和所需质量的水，将所需质量的铁用浓盐酸溶解后，加入所需质量的水，得到高浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述高浓度铁标准贮备液中浓度为1.0000mg/g；

2)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，将所需质量的步骤1)得到的高浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液混合，得到中浓度铁标准贮备液，所述铁离子在所述中浓度铁标准贮备液中的浓度为50.0000μg/g；

3)通过称量质量的方法得到所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液和所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液，用所需质量的浓度为0.1mol/L的盐酸水溶液稀释所需质量的步骤2)得到的中浓度铁标准贮备液，得到标准品溶液；所述铁离子在所述标准溶液中的浓度为以下6种：0.2500ug/g、0.5000ug/g、1.0000ug/g、1.5000ug/g、2.0000ug/g和3.000ug/g。

9.权利要求8所述标准品在检测血清铁含量中的应用。

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