CN102050846A - 一种胺基糖及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胺基糖及其制备方法和用途。所述胺基糖结构如式A，如式I和式II所示的化合物的HPLC含量分别小于0.1％。
Description
技术领域
本发明涉及一种化合物的纯化。尤其涉及一种胺基糖及其制备方法和用途。
背景技术
本发明的胺基糖属于α-葡糖苷酶抑制剂，其通过竞争性抑制α-糖苷酶的作用来减少糖类的降解，延缓糖类的吸收，从而有效地降低糖尿病人餐后的血糖浓度，达到控制血糖的目的。本发明的胺基糖化学名为(+)-1L-[1(OH)，2，4，5/3]-5-[2-羟基-1-(羟甲基)乙基]氨基-1-碳-(羟甲基)-1，2，3，4-环己呋喃，其化学结构式如式A所示：
该胺基糖由日本武田药品工业株式会社研制，于1994年在日本上市。它对小肠上皮绒毛膜刷状缘上的双糖水解酶的抑制作用非常强，而对α-淀粉酶几乎无抑制作用，这一点有别于同类型的阿卡波糖。动物实验发现：该胺基糖对猪小肠麦芽糖酶和蔗糖酶的抑制作用分别为阿卡波糖的20倍和30倍，对大鼠小肠麦芽糖酶和蔗糖酶的抑制作用分别为阿卡波糖的270倍和190倍，而对猪和大鼠的α-胰淀粉酶的抑制作用约为阿卡波糖的1/3000，对β-葡萄糖苷酶无抑制作用。由于该胺基糖在肠道内具有选择性的抑制作用，因而用小剂量即能使血糖曲线的峰值降低且较平坦，导致餐后高血糖的改善，同时胃肠道的副作用也相应减轻。另外，与磺脲类降糖药不同，该胺基糖不刺激胰岛素的分泌，因此餐后无高胰岛素血症的出现，不易出现低血糖现象。该胺基糖既能单独应用，也可与磺脲类、双胍类或胰岛素联合应用。联合用药能使服药与降糖作用更加同步，减少其它降糖药物的用量，降低出现低血糖的危险，减少肥胖等副作用。
根据文献【1】报道，如式A所示的胺基糖的制备有全合成和半合成两种方法，其中，半合成方法又有两条路线：1、由井冈霉素产生菌发酵，分离其产物井冈霉素，经生物转化得到井岗霉烯胺(Valienamine)，再通过化学合成方法获得胺基糖；2、由井冈霉素产生菌发酵，直接从其发酵代谢产物中分离关键中间体维列胺(Valiolamine)，再通过化学合成方法获得如式A所示的胺基糖。
根据文献【2-6】，采用半合成方法制备胺基糖，第一步通过发酵将井冈霉素转化成井岗霉烯胺；第二步将井岗霉烯胺经化学反应合成胺基糖粗品。得到的胺基糖粗品中会有许多杂质，其中有如式I和II所示的胺基糖的两个类似物：
活性成分的纯度是安全用药的重要因素，特别是如式A所示的胺基糖在治疗糖尿病、肥胖病等疾病中，属于长期用药。如果药物中存在一定的杂质，那么杂质的积累将会在治疗中产生一定的毒副作用，因此有必要制备高纯度的胺基糖。
式I和II所示的两个类似物I、II与胺基糖的结构非常类似，分离的难度相当大。
因此，本领域迫切需要提供一种有效分离纯化去除如式I和II所示的胺基糖的两个类似物的方法及由此得到的胺基糖及其应用。
发明内容
本发明旨在提供一种胺基糖。
本发明的另一个目的是提供一种胺基糖的制备方法。
本发明的再一个目的是提供一种胺基糖的用途。
在本发明的第一方面，提供了一种胺基糖，所述胺基糖结构如式A，如式I和式II所示的化合物的HPLC含量分别小于0.1％；
在另-优选例中，所述胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如上所述的本发明提供的胺基糖。
在另一优选例中，所述高纯度胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-40％的有机溶剂水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如上所述的本发明提供的胺基糖。
在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的胺基糖的制备方法，所述的方法包括步骤：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如上所述的本发明提供的胺基糖。
在另一优选例中，所述的方法包括步骤：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-40％的有机溶剂水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如上所述的本发明提供的胺基糖。
在另一优选例中，所述胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品和有机溶剂混合得到的溶液a上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到收集液b；
(e)将收集液b浓缩后和无水乙醇混合，结晶，经过滤、干燥得到胺基糖固体；和
(g)将胺基糖固体溶于水，加无水乙醇结晶，得到胺基糖。
在另一优选例中，所述高纯度胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品和有机溶剂混合得到的溶液a上样至离子交换树脂；
(b)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-40％的有机溶剂水溶液洗脱，得到洗脱流出液；
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到收集液b；
(e)将收集液b浓缩后和无水乙醇混合，结晶，经过滤、干燥得到胺基糖固体；和
(g)将胺基糖固体溶于水，加无水乙醇结晶，得到胺基糖。
在另一优选例中，步骤(b)中分段收集得到洗涤流出液；步骤(c)中分段收集得到洗脱流出液。
在另一优选例中，步骤(d)中将含有胺基糖的洗涤流出液和洗脱流出液合并。
在另一优选例中，所述的有机溶剂为与水互溶的有机溶剂，如C1-3醇类、丙酮、腈类、四氢呋喃、N、N-二甲基甲酰胺或其组合；更佳地，选自乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
在另一优选例中，所述的离子交换树脂为阳离子交换树脂。
在另一优选例中，在步骤(a)之前还包括步骤：
(a1)用氨水洗涤所述阳离子交换树脂至pH8-9；和
(a2)用有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤所述阳离子交换树脂；
所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
在另一优选例中，所述的氨水浓度为2mol/L。
在另一优选例中，所述的离子交换树脂为阴离子交换树脂。
在另一优选例中，在步骤(a)之前还包括步骤：
(1a)用氢氧化钠水溶液洗涤所述阴离子交换树脂至pH6-8；和
(2a)用有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤所述阴离子交换树脂；
所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
在另一优选例中，所述的氢氧化钠水溶液浓度为1mol/L。
在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的胺基糖的用途，用于制备治疗糖尿病的药物。
在本发明的第四方面，提供了一种药物组合物，所述的组合物中含有如上所述的本发明提供的胺基糖和药学上可接受的载体。
据此，本发明提供了一种有效分离纯化去除如式I和II所示的胺基糖的两个类似物的方法及由此得到的胺基糖及其应用。
附图说明
图1显示了本发明实施例1所用的经合成、脱盐后的胺基糖粗品(纯度87.63％)HPLC图谱；其中
胺基糖保留时间约为10.0min，类似物I(即式I化合物)保留时间约为21.5min，类似物II(即式II化合物)保留时间约为18.2min。
图2显示了本发明通过实施例1离子交换柱层析制得的一段收集液中胺基糖HPLC图谱。
图3显示了本发明通过实施例1结晶后制得的胺基糖HPLC图谱。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现利用离子交换树脂，以有机溶剂与水的混合溶液进行洗涤、以有机溶剂与水的混合溶液进行洗脱，可以将胺基糖粗品中的杂质(如式I和II所示的化合物)的HPLC含量降至0.1％以下。
如本文所用，“胺基糖粗品”是通过半合成法得到的产品。可以采用本领域常规的半合成方法得到，例如但不限于，第一步通过发酵将井冈霉素转化成井岗霉烯胺；第二步将井岗霉烯胺经化学反应合成胺基糖。文献【2-6】中公开了半合成法，其HPLC图谱可见图1。
本发明中使用的胺基糖粗品还指化学合成胺基糖后，经脱盐、浓缩制备得到的胺基糖浓缩液。
如本文所用，“胺基糖”是指化学名为(+)-1L-[1(OH)，2，4，5/3]-5-[2-羟基-1-(羟甲基)乙基]氨基-1-碳-(羟甲基)-1，2，3，4-环己呋喃，化学结构式如式A所示的化合物。
如本文所用，“纯度”、“含量”都是指HPLC纯度或HPLC含量。
词组“离子交换材料”指带负电(即阳离子交换树脂)或带正电(即阴离子交换树脂)的固相。可以通过在固相上吸附一个或多个带电配体(如通过共价连接)来提供电荷。另外，或此外，电荷可以是固相的固有性质(如以硅为例，它具有全盘负电荷)。
“阳离子交换树脂”指一种带负电的固相，因其具有自由阳离子，能交换固相上或固相中流过的水溶液中的阳离子。附着在固相上形成阳离子交换树脂的带负电的配体可以是例如羧酸盐或磺酸盐。商业上可购得的阳离子交换树脂包含：强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂；优选弱酸性阳离子交换树脂。
本文所用的术语“阴离子交换树脂”指带正电(如具有附着于其上的一个或多个带正电的配体，例如季铵基团)的固相。商业上可购得的阴离子交换树脂包含：强碱性阴离子交换树脂、弱碱性阴离子交换树脂；优选强碱性阴离子交换树脂。
从含有杂质的胺基糖粗品中“纯化”胺基糖，指通过从胺基糖粗品中(完全或部分的)至少除去如式I和/或式II所示的杂质来提高胺基糖粗品中胺基糖的纯度。“纯化步骤”可以是得到“均一”化合物(在本文中“均一”指含感兴趣胺基糖的重量相对于纯化步骤最终产品的总重量至少约99％，优选重量至少约99.5％的组合物)的总纯化过程中的一部分。
“洗涤”离子交换材料，指使合适的缓冲液在离子交换材料中或上通过。
将分子从离子交换材料上“洗脱”下来，指通过改变离子交换材料周围的缓冲液离子强度从离子交换材料上除下该分子，该离子强度能使缓冲液与分子竞争离子交换材料上的带电位点。
一种胺基糖
本发明提供的胺基糖，其中如式I和II所示化合物的HPLC含量分别小于0.1％。
制备方法
本发明提供了一种制备胺基糖的方法，方法包括以下步骤：
第一步，以离子交换树脂为固定相，用有机溶剂和水的混合溶液进行洗涤，得到洗涤流出液；
第二步，以离子交换树脂为固定相，用有机溶剂和水的混合溶液进行洗脱，得到洗脱流出液；
第三步，分段收集含有胺基糖的洗涤、洗脱流出液，得到胺基糖。
较佳地，本发明得到的胺基糖可以在乙醇中结晶，以除去其它杂质，进一步提高胺基糖的纯度。方法中洗涤、洗脱用的有机溶剂为与水互溶的有机溶剂，如C1-3醇类、丙酮、腈类、四氢呋喃、N、N-二甲基甲酰胺或其组合。更佳地，选自乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
洗涤时，以有机溶剂和水的混合溶液的总体积计，有机溶剂的体积百分含量为10％-70％。
洗脱时，以有机溶剂和水的混合溶液的总体积计，有机溶剂的体积百分含量为10％-40％。
在本发明的一个实施例中，提供的高纯度胺基糖的制备方法包括步骤：
(a)将胺基糖粗品和有机溶剂混合得到的溶液a上样至阳离子交换树脂；
(b)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤，分段收集得到洗涤流出液；
(c)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-40％的有机溶剂水溶液洗脱，分段收集得到洗脱流出液；
(d)将含有胺基糖的洗涤流出液和洗脱流出液合并，得到收集液，即为胺基糖；
(e)将胺基糖和无水乙醇混合，结晶，经过滤、干燥得到胺基糖固体；和
(g)将胺基糖固体溶于水，加无水乙醇结晶，得到高纯度胺基糖。
本发明的另一个实施例中，提供的高纯度胺基糖的制备方法包括步骤：
(1)将胺基糖粗品和有机溶剂混合得到的溶液1上样至阴离子交换树脂；
(2)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-70％的有机溶剂水溶液洗涤，分段收集得到洗涤流出液；
(3)用以溶液总体积计，有机溶剂体积百分比为10-40％的有机溶剂水溶液洗脱，分段收集得到洗脱流出液；
(4)将含有胺基糖的洗涤流出液和洗脱流出液合并，得到收集液，即为胺基糖；
(5)将胺基糖和无水乙醇混合，结晶，经过滤、干燥得到胺基糖固体；和
(6)将胺基糖固体溶于水，加无水乙醇结晶，得到高纯度胺基糖。
药物组合物
本发明同时也涉及包含有本发明提供的胺基糖的药物组合物或药物制剂，它们可以被制成例如适于口服或注射的各种形式，以用于治疗糖尿病。优选的药用制剂剂型可以是片剂、胶囊、微粒剂以及混悬剂。
本发明所涉及的药物制剂配方中，除了本发明提供的胺基糖以外还包括药学上可接受的载体、赋型剂和/或稀释剂。代表性的例子包括(但并不限于)：
一种或多种填充剂，如微晶纤维素、乳糖、蔗糖、淀粉、改性淀粉、甘露糖、葡聚糖、碳酸钙、磷酸盐、硫酸盐；
一种或多种粘结剂，如乳糖、淀粉、改性淀粉、葡聚糖、微晶纤维素、蔗糖、聚醚多元醇、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸铝镁；
一种或多种崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基淀粉、淀粉、微晶纤维素等。
此外，如果有需要，药物组合物的配方中还可以包括表面活性剂和色素。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：
一般来说，离子交换树脂上样、洗涤、洗脱均是水相体系，本发明则是使用有机溶剂与水的混合物；本发明创造性地采用有机溶剂与水的混合溶液在离子交换树脂上进行化合物的分离纯化，而且取得非常好的纯化效果。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本文中HPLC纯度或含量是指按照面积归一化法计算的峰面积百分比。
在本发明的实施例中，胺基糖的纯度HPLC检测方法如下：
HPLC：带荧光检测器的液相色谱(日立)
分析柱：NH2P-504E(4.6×250mm)
检测器：激发波长为350nm，发射波长为430nm。
柱温：25℃。
反应浴温度：约100℃。
冷却浴温度：约25℃。
流动相(A)流量：0.8ml/min。
荧光试剂(B)流量：0.8ml/min。
运行时间：30min。
进样量：20μl。
最低检测限：1μg/ml。
胺基糖保留时间约为10.0min，类似物I(即式I化合物)保留时间约为21.5min，类似物II(即式II化合物)保留时间约为18.2min。
流动相(A)：用量筒分别量取630ml HPLC级乙睛和370ml 0.02mol/L的磷酸钠缓冲液(pH＝6.5)，混匀后用0.22μm的偏氟膜过滤，超声波脱气2分钟以上后待用。
荧光试剂(B)：称取6.25g牛磺酸和2.56g高碘酸钠，用水溶解并稀释至1000ml，混匀后待用。
实施例1
取胺基糖粗品20ml(含胺基糖5g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％，见图1，加入13.5ml无水乙醇，搅拌均匀。
取一根500ml玻璃层析柱(直径55mm，长300mm)，将400ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用500ml纯化水洗涤，然后用500ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用500ml 40％乙醇洗涤，流量均为400ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量200ml/h。上样完毕，用1000ml 40％乙醇洗涤，流量400ml/h。洗涤完毕，用2000ml 20％的乙醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测。其中一段收集液经HPLC检测纯度为98.43％，杂质类似物I、II的含量为0％，见图2。合并含有胺基糖的组分，体积1500ml，胺基糖折纯量4.49g。
将合并的收集液用旋转蒸发仪在60℃下浓缩成糖浆状，加入29ml无水乙醇进行结晶，过滤、干燥得到胺基糖固体。将胺基糖固体用2.2ml纯化水在60℃下溶解，滴加27ml无水乙醇，冷却至室温结晶，过滤、干燥得到胺基糖固体4.04g。经检测HPLC纯度为100％，杂质类似物I、II的含量为0％，见图3。
实施例2
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入9.4ml无水乙醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml D15阳离子交换树脂(上海华震科技有限公司制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 70％乙醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 70％乙醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用300ml 10％的乙醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积344ml，胺基糖折纯量0.86g。
实施例3
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入1ml无水乙醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml UBK-530阳离子交换树脂(日本三菱化学制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 20％乙醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用200ml 20％乙醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 10％的乙醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积380ml，胺基糖折纯量0.88g。
实施例4
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.7ml甲醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 40％甲醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％甲醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 20％的甲醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积276ml，胺基糖折纯量0.85g。
实施例5
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.7ml异丙醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 40％异丙醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％异丙醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 20％的异丙醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积320ml，胺基糖折纯量0.83g。
实施例6
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.7ml乙腈，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 40％乙腈洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％乙腈洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用410ml 20％的乙腈洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积340ml，胺基糖折纯量0.88g。
实施例7
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入9.4ml乙腈，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Dowex1×2树脂(美国陶氏化学制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml1mol/L氢氧化钠溶液洗涤，用纯化水洗涤至pH6-8，最后用100ml 70％乙腈洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用200ml 70％乙腈洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 40％的乙腈洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积440ml，胺基糖折纯量0.84g。
实施例8
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.6ml乙腈，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml 201×4树脂(上海华震科技有限公司制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 1mol/L氢氧化钠溶液洗涤，用纯化水洗涤至pH6-8，最后用100ml 40％乙腈洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用200ml 40％乙腈洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用360ml 10％的乙腈洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积320ml，胺基糖折纯量0.82g。
实施例9
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入0.44ml乙腈，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml LEWATIT Cl 100×200树脂(天津佳宝科技有限公司)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 1mol/L氢氧化钠溶液洗涤，用纯化水洗涤至pH6-8，最后用100ml10％乙腈洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用200ml 15％乙腈洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用260ml 10％的乙腈洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积260ml，胺基糖折纯量0.80g。
实施例10
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入6ml乙醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Dowex1×2树脂(美国陶氏化学制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml1mol/L氢氧化钠溶液洗涤，用纯化水洗涤至pH6-8，最后用100ml 60％乙醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用180ml 60％乙醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 20％的乙醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积360ml，胺基糖折纯量0.84g。
实施例11
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.6ml甲醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Dowex1×2树脂(美国陶氏化学制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml1mol/L氢氧化钠溶液洗涤，用纯化水洗涤至pH6-8，最后用100ml 40％甲醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％甲醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用320ml 10％的甲醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积340ml，胺基糖折纯量0.86g。
实施例12
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入4ml丙酮，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 50％丙酮洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 50％丙酮洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用320ml 20％的丙酮洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积290ml，胺基糖折纯量0.88g。
实施例13
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.7ml四氢呋喃，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 40％四氢呋喃洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％四氢呋喃洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用360ml 20％的四氢呋喃洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积300ml，胺基糖折纯量0.85g。
实施例14
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入6ml N、N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml D15阳离子交换树脂(上海华震科技有限公司制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 60％N、N-二甲基甲酰胺洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 60％N、N-二甲基甲酰胺洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用360ml 10％的N、N-二甲基甲酰胺洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积280ml，胺基糖折纯量0.8g。
实施例15
取胺基糖粗品4ml(含胺基糖1g，HPLC纯度87.63％，杂质类似物I、II的HPLC含量分别为1.79％、3.26％)，加入2.7ml乙醇，搅拌均匀。
取一根100ml玻璃层析柱(直径30mm，长220mm)，将80ml Amberlite CG-50阳离子交换树脂(美国罗门哈斯制造)装入层析柱中，用100ml纯化水洗涤，然后用100ml 2mol/L氨水洗涤，用纯化水洗涤至pH8-9，最后用100ml 40％乙醇洗涤，流量均为80ml/h。
将配制好的胺基糖溶液依靠重力输入层析柱中，流量40ml/h。上样完毕，用160ml 40％乙醇洗涤，流量80ml/h。洗涤完毕，用400ml 20％的甲醇洗脱。分段收集洗涤、洗脱流出液，用荧光HPLC(日本日立)检测，杂质类似物I、II的HPLC含量为0％。合并含有胺基糖的组分，体积290ml，胺基糖折纯量0.86g。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
文献：
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[4]Fukase，Hiroshi；Horii，Satoshi，Synthesis of a Branched-Chain Inosose Derivative，a Versatile Synthon of N-Substituted Valiolamine Derivatives from D-Glucosidase.J.Org.Chem.，1992，57(13)：3651-8
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Claims (11)
1.一种胺基糖，所述胺基糖结构如式A，其特征在于，如式I和式II所示的化合物的HPLC含量分别小于0.1％；
2.如权利要求1所述的胺基糖，其特征在于，所述胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如权利要求1所述的胺基糖。
3.一种如权利要求1-2任一所述的胺基糖的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
(a)将胺基糖粗品上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；和
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到如权利要求1所述的胺基糖。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述胺基糖通过以下步骤制备得到：
(a)将胺基糖粗品和有机溶剂混合得到的溶液a上样至离子交换树脂；
(b)用有机溶剂的水溶液洗涤，得到洗涤流出液；
(c)用有机溶剂的水溶液洗脱，得到洗脱流出液；
(d)合并洗涤流出液和洗脱流出液，得到收集液b；
(e)将收集液b浓缩后和无水乙醇混合，结晶，经过滤、干燥得到胺基糖固体；和
(g)将胺基糖固体溶于水，加无水乙醇结晶，得到胺基糖。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中分段收集得到洗涤流出液；步骤(c)中分段收集得到洗脱流出液。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(d)中将含有胺基糖的洗涤流出液和洗脱流出液合并。
7.如权利要求3-6任一所述的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂为与水互溶的有机溶剂，如C1-3醇类、丙酮、腈类、四氢呋喃、N、N-二甲基甲酰胺或其组合；更佳地，选自乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
8.如权利要求3-6任一所述的制备方法，其特征在于，所述的离子交换树脂为阳离子交换树脂。
9.如权利要求3-6任一所述的制备方法，其特征在于，所述的离子交换树脂为阴离子交换树脂。
10.一种如权利要求1或2任一所述的胺基糖的用途，其特征在于，用于制备治疗糖尿病的药物。
11.一种药物组合物，其特征在于，它含有如权利要求1-2任一所述的胺基糖和药学上可接受的载体。
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