CN1020457C

CN1020457C - 制备新的1-甲基-4，5-二氢乳清酸的衍生物的方法和其药用合剂的方法

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Publication number: CN1020457C
Application number: CN 85105655
Authority: CN
Inventors: 菅野纮; 石田柳; 山村道夫
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1984-07-10
Filing date: 1985-07-25
Publication date: 1993-05-05
Anticipated expiration: 2000-07-25
Also published as: CN85105655A

Abstract

本文对1-甲基-4，5-二氢乳清基一组氨酰基一腩氨酰胺、其药用酸加成盐、制造此两化合物的方法和含此两化合物的药用合剂，进行了说明。此腩氨酰胺和其药用酸加成盐可用于治疗中枢神经系统混乱症。

Description

本发明涉及：一种新的1-甲基-4，5-二氢乳清酸的衍生物;制造此衍生物和其药用合剂的方法。更具体地说，本发明涉及1-甲基-4，5-二氢乳清基-组氨酰基-脯氨酰胺，或其药用酸加成盐。

1-甲基-4，5-二氢乳清基-组氨酰基-脯氨酰胺的化学式为：

（Ⅰ）

众所周知，TRH（即：促甲状腺激素释放激素;L-焦谷氨酰基-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺）是医治因脑机能障碍而引起意识混乱的药品，但同时具有释放TSH（促甲状腺激素）的活性。通常认为，这种活性对其医疗意识混乱症的效果，具有不良影响。与此有关，美国专利4，100，152和4，045，556曾指出，（2，3，4，5-四氢-2-氧-L-S-呋喃羰基）-L-组氨酰基-脯氨酰胺和乳清基-L-脯氨酰胺能有效地医治上述意识混乱症，且比TRH的副作用小。

由于多方调查研究的结果，我们现在已经发现，本发明的化合物（Ⅰ）是医治或预防中枢神经系统混乱症（例如，意识混乱症）的有效药物。换句话说，本发明化合物（Ⅰ）的真正特点是，具有较强的活化中枢神经系统的作用（例如，对戊巴比妥麻醉的对抗效应，提高自发运动活性的作用，对利血平诱发的体温过低的对抗效应，对L-多巴活动的增强作用），且比TRH和上述衍生物的副作用（即TSH释放活性）小。

根据本发明，化合物（Ⅰ）或其药用酸加成盐的制造步骤如下：

（A）将1-甲基-4，5-二氢乳清酸化合物或其反应衍生物，与组氨酰基-脯氨酰胺化合物或其盐缩合。

1-甲基-4，5-二氢乳清酸化合物的化学式为：

（Ⅱ）

式中，X¹为亚氨基或被护亚氨基。

组氨酰基-脯氨酰胺的化学式为：

（Ⅲ）

式中，X²为亚氨基或被护亚氨基。

（B）将1-甲基-4，5-二氢乳清基一组氨酸化合物、其盐或其反应衍生物，与脯氨酰胺或其盐缩合。

1-甲基-4，5-二氢乳清基一组氨酸化合物的化学式为：

（Ⅳ）

式中的X¹和X²与上步骤同。

脯氨酰胺的化学式为：

（Ⅴ）

（C）将1-甲基-4，5-二氢乳清基一组氨酰基-脯氨酰胺化合物、其盐或其化学衍生物，转变成与其相应的酰胺。

1-甲基-4，5-二氢乳清基-组氨酰基-脯氨酰胺的化学式为：

（Ⅵ）

式中的X¹和X²与上步骤同。

（D）当步骤（A）、（B）或（C）所得产物的X¹和（或）X² 是被护亚氨基或基团时，则需进一步从其中脱除保护基或基团。

（E）假若有需要，可以将此产物进一步转化成其药用酸加成盐。

所用的原料化合物（Ⅱ）～（Ⅵ），可以是单体的形式，也可以是盐的形式。例如，化合物（Ⅲ）～（Ⅵ）的盐包括，象氯氢化物、溴氢化物、硫酸盐或硝酸盐一类的无机酸加成盐，和象甲苯磺酸盐、甲磺酸盐或三氟乙酸盐一类的有机酸加成盐，等等。

适合作例子的化合物（Ⅱ）、（Ⅳ）或（Ⅵ）的反应衍生物，包括相应的酸性卤化物（例如，氯化物和溴化物）、混合酐（例如与碳酸烷基酯的混合酐）、活性酯（例如，具有五氯苯酚、对-硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、N-羟基丁二酰胺、N-羟基酞酰亚胺、1-羟基苯并三唑或1-羟基-2-吡咯烷酮）、酰基叠氮和象带有咪唑或三唑一类的其他反应衍生物。象烷基酯（例如，甲酯或乙酯）和芳烷基酯（例如苄酯）一类的酯，可以用作化合物（Ⅵ）的反应衍生物。

另一方面，在肽合成中经常用于保护亚氨基或基团的各种保护基团，可以用作保护基或基团（X¹和（或）X²）。这种保护基团X¹和X²，包括象甲酰、乙酰和丙酰一类的低级链烷酰，象苯酰一类的取代或未取代苯酰，象甲氟羰基、乙氧羰基和叔丁氧羰基一类的低级烷氟羰基，象2，2，2-三氯代乙氧羰基一类的一、二或三卤代低级烷氧羰基，象苄氧羰基和对甲氧苄氧羰基一类的取代或未取代苄氧羰基，象苄基、对-甲氧苄基、和3，4-二甲氧苄基一类的取代或未取代的苯基低级烷基，象二苯甲基和三苯甲基一类的二或三苯基一类的低级烷基，象甲苯磺酰一类的取代和未取代苯磺酰，和象邻-硝基苯亚磺酰一类的取代或取代苯亚磺酰。

〔反应步骤（A）和（B）〕

用一般的肽合成法可以实现化合物（Ⅱ）或其反应衍生物与化合物（Ⅲ）或其盐的缩合，和化合物（Ⅳ）、其盐或其他反应衍生物与化合物（Ⅴ）或其盐的缩合。例如，在溶剂内有或无酸性接受体存在的情况下，都可进行化合物（Ⅱ）的反应衍生物与化合物（Ⅲ）或其盐的缩合反应，和化合物（Ⅳ）的反应衍生物和化合物（Ⅴ）或其盐的缩合反应。适合作例子的酸接受体，包括碱金属的氢氧化物（例如，氢氧化钾和氢氧化钠）、碱金属的碳酸盐（例如碳酸钠和碳酸钾）、碱金属的碳酸氢盐（碳酸氢钠和碳酸氢钾）、三烷基胺（例如，三甲胺和三乙胺）、N，N-二烷基苯胺（例如，二甲基苯胺和N，N-二乙基苯胺）、吡啶和N-烷基吗啡碱）等等。二噁烷、乙腈、二氯乙烷、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、吡啶、丙酮和水，都适合作溶剂。反应最好是在温度-50～50℃下进行，大多数是在温度-15～5℃下进行。

另一方面，化合物（Ⅱ）和化合物（Ⅲ）或其盐的缩合反应，和化合物（Ⅳ）或其盐与化合物（Ⅴ）或其盐的缩合反应，都可以在放有脱水剂的溶剂中进行。合适作例子的脱水剂，包括二环己基碳二亚胺、N-环己基-N′-吗啡代碳化二亚胺、N-乙基-N′-（3-二甲氨基丙基）碳化二亚胺、磷酰氯、三氯化磷、亚硫酰氯和三苯膦，等等。由二甲基甲酰胺分别与磷酰氯、碳酰氯和亚硫酰氯制成的各种ViLsmeier试剂，也都可以用作上述的脱水剂。反应最好是在温度-50～50℃下进行，大多数是在温度-20～0℃下进行。二噁烷、四氢呋喃、乙腈、氯仿、二氯甲烷、甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、吡啶、丙酮和水，都是合适的溶剂。

〔反应步骤（C）〕

通过一般方法，即氨处理法或释放氨的物质处理法，可以将化合物（Ⅵ）、其盐或其反应衍生物转变成与之相应的酰胺。例如，在加有脱水剂的溶剂中，用氨或释氨的物质处理化合物（Ⅵ）或其盐的方法，实现其酰胺化。在反应溶液中能产生或释放氨的任何物质，都可用作本发明的释氨物质。例如，可用的释氨物质包括氯化铵和碳酸铵等等。本步骤所用的脱水剂，与上述风应步骤（A）和（B）所用的脱水剂相同。反应最好是在温度-20～20℃下进行，大多数是在温度-5～5℃下进行。二甲基甲酰胺、二甲基五碸和四氢呋喃，都是合适的溶剂。

例如，在有或无酸接受体的溶剂中，用氨或释氨物质处理化合物（Ⅵ）反应衍生物的方法，同样可以实现酰胺化。本步骤用的酸性接受体与上述步骤（A）和（B）中用的酸接受体相同。反应最好是在温度-20～20℃下进行。甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺和二甲基亚碸作为溶剂是合适的。

〔反应步骤（D）〕

当步骤（A）、（B）或（C）所获得的产物X¹和（或）X²是保护基或基团时，通过常用的方法，可以容易地将该保护基或基团脱除。例如，通过水解法、碱处理法、酸处理法、还原法、氧化法或由上述方法组成的联合法，都可以脱除保护基或基团。更具体地说，例如，当保护基是苯酰时，对化合物进行碱处理，就可以脱除上述保护基。适合作例子的碱，包括氨、一或二低级烧基胺（例如，此低级烷基是甲基、乙基、丙基或丁基）和醇钠（例如，甲醇钠和乙醇钠）。在有或无溶剂（例如，甲醇和乙醇）存在的情况下，此反应都可进行。反应最好是在温度-5～0℃下进行。当保护基是苯酰、乙酰、叙丁基羰基、二苯甲基、三苯甲基或对-硝基苯氧硫基时，通过酸对化合物的处理，可以脱除上述保护基。适合作例子的酸，包括甲酸、三氟醋酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、氯化氢或溴化氢。在有或无溶剂（例如，水、甲醇、乙醇、乙酸或二噁烷）存在的情况下，反应都可进行。反应最好是在温度-30～70℃下进行。当保护基是苄氧羰基、苄基或对-甲氧苄基时，通过催化氢化，可以脱除上述保护基。反应最好是在温度0～100℃下进行。适合作例子的催化氢化催化剂，包括钯-BaCO₃、钯-活性炭和钯-炭黑。甲醇、乙醇、四氢呋喃和水作反应溶剂是合适的。当保护基是甲氧羰基或乙氧羰基时，通过对化合物进行水解或酸处理，可以脱除上述保护基。用一般的方法，例如通过象氢氧化钾一类的碱对化合物进行处理，或通过象氢氯酸或氢溴酸一类的酸对化合物进行处理，可以实现化合物的水解。水解反应最好是在温度0～70℃下进行。当保拥基是甲苯磺酸时，通过对化合物的电解、碱处理或1-羟基苯并三唑处理，可以脱除上述保护基。

〔反应步骤（E）〕

假若需要，可以按一般的方法，用等摩尔的酸量（由化学计算得出）将上述诸反应步骤所得的产物，转化成其酸加成盐。

在上述诸反应步骤中，所用的原料化合物（Ⅱ）～（Ⅵ）可以是旋光异构体的形式，或者是其混合物的形式。由于在本发明的上述反应过程中不会发生外消旋作用，因此通过应用化合物（Ⅱ）～（Ⅵ）相应的旋光异构体，容易得到具有旋光异构体形式的化合物（Ⅰ）。

例如，在原料化合物中，制造化合物（Ⅱ）的方法是：在有酸接受体（例如三乙胺）存在和温度-50～50℃下，将4，5-二氢乳清酸（J·Am·Chem·Soc·75，6086（1953））与苄基卤反应;在有酸接受体（例如，氢化钠）存在和温度-50℃～100℃下，让所产的4，5-二氢乳酸苄酯与甲基化剂（例如，甲基碘）反应;假若需要，可在所产的1-甲基-4，5-二氢乳清酸苄酯的3-位置上引入一个保护基，然后将所得产物进行催化氢化，以脱除苄基。

按照一般的肽合成法，通过化合物（Ⅱ）与组氨酸或N^im-被护组氨酸的缩合，可以制得化合物（Ⅳ）。按照一般的肽合成法，通过化合物（Ⅱ）与组氨酰基-脯氨酸或化合物（Ⅳ）的缩合，也可以制得化合物（Ⅳ）。

当本发明的化合物（Ⅰ）由于含在其中的三个不对称的碳原子，可能有八个旋光异构体的形式时，这八个旋光异构体或其混合物，全都包括在本发明的范围内。但是，在这些异构体中，最适合作药用的，是（1-甲基-L-4，5-二氢乳清基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺。

单体形式的化合物（Ⅰ）或其酸加成盐，都可以作药用。例如，化合物（Ⅰ）的药用加成盐有：象氢氯化物、溴氢化物、硫酸盐或硝酸盐一类的无机酸加成盐;和象乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、草酸盐或苯磺酸盐一类的有机酸加成盐。化合物（Ⅰ）或其药用加成盐的服用方法是，口服或不经过肠胃给药。更具体地说，可以以由自身制成药剂的形式，或者以与赋形剂混成药品的形式，应用化合物（Ⅰ）或其盐。所用的赋形剂必需适合口服或不经肠胃给药。例如，适用的赋形剂有：淀粉、乳糖、葡萄糖、磷酸钾、谷物淀粉、阿拉伯树胶、硬脂酸或其他已知的药用赋形剂。例如，其药用制品可以是象片状、粉状、胶囊或粒状之类的固体形式，也可以是象溶剂或悬浮液之类的液体形式。当不经过肠胃给药时，还可以将其药用制品制成注射液的形式。

正如上文所述，本发明的化合物（1）对中枢神经系统具有较强的活化作用（例如：对戊巴比妥麻醉的对抗效应;提高自发运动活性的作用;对利血平诱发的体温过低的对抗作用;对L-多巴活动的增强作用），与TRH和其衍生物相比，正如美国专利4，100，152和4，045，556所指出的，副作用（例如，释放TSH活性）小。化合物（Ⅰ）的重要特点是，虽然THR本身在口服时的医疗效果不十分明显，但是对于化合物（Ⅰ），即使口服，也具有明显的治疗效果。由此可见，本发明的化合物（Ⅰ）在作苏醒剂、自发活性兴奋剂或多巴胺增强剂方面，比上述TRH或其衍生物，更为有效。例如，化合物（1）也可用于医治或预防象意识混乱症、短注意期间症、语言混乱症、意志消沉症、Lennox综合症、老年痴呆症、睡眠中毒症、孤独癖、精神分裂症、抑郁症和帕金森氏神经机能障碍症之类的、包括人类在内的温血动物中枢神经系统混乱症。

应用化合物（Ⅰ）或其盐治病时的剂量，取决于给药方法、患者年龄、体重、身体状况和所医治的病类。一般用药量为每日每公斤体重0.5微克～5毫克。口服情况的用药量，大多为每日每公斤体重10微克～1毫克。不经肠胃给药情况（例如，静脉注射、肌肉注射和皮下注射）的用药量，大多为每日每公斤体重1～100微克。

说明书和权利要求书中，“1-甲基-4，5-二氢乳清酸”和“1-甲基-4，5-二氢乳清基”两词，分别指1-甲基-1，2，3，4，5，6-六氢-2，6-二氧-4-嘧啶羧酸，和1-甲基-1，2，3，4，5，6-六氢-2，6-二氧-4-嘧啶羰基。

下面列举的实验和例子，可以表示本发明实践过的和目前最好的具体体现。实验1～4中所用的试验化合物如下：

试验化合物：

本发明的化合物：

（1-甲基-L-4，5-二氢乳清基）-L-组氨酰基-脯氨酰胺

№1：

（2，3，4，5-四氢-2-氧-L-5-呋喃羰基-L-组氨酰基-脯氨酰胺（美国专利4，100，152）;

№2：

乳清基-L-脯氨酰胺（美国专利4，045，556）

实验1

用口服给药测定试验化合物的药理学活性。

（方法）

（1）对利血平诱发的体温过低的对抗效应：

雄性STD/ddY小鼠利血平，皮下给药（3毫克/公斤）后约17-20小时体温为30℃或低于30℃，它们用于本实验。溶于蒸馏水中的试验化合物对该小鼠口服给药。试验化合物给药后30、60、120、180和300分钟，测定直肠温度。用药的一组小鼠体温上升与接受蒸馏水而不是试验化合物溶液的对照组小鼠的体温比较。

（2）提高自发运动活性的作用

雄性STD/ddY小鼠单独放在Ambulometer（即一种测量自发运动活性的仪器，由OHARA IKA公司制造）中30分钟，以便适应该仪器。此后，溶于蒸馏水中的试验化合物对小鼠口服给药。试验化合物给药后立即测量自发运动活性3小时。用蒸馏水代替试验化合物溶液给对照组小鼠给药。

（3）对戊巴比妥麻醉的对抗效应

溶于蒸馏水中的试验化合物对雄性STD/ddY小鼠口服给药。试验化合物给药15分钟后，戊巴比妥钠以剂量55毫克/公斤给小鼠腹膜内给药。测量麻醉延续时间，即从翻正反射消失到恢复的时间。蒸馏水代替试验化合物溶液给对照组小鼠给药。

实验结果列入下面表1和表2。

表1

对促甲状腺激素释放激素酒石酸盐的效能比^a）

本发明的化合物 №1 №2

对利血平诱发的体

91.3 3.4 13.0

温过低的对抗效应

注：a）促甲状腺激素释放激素酒石酸盐的治疗效果取作1。每一试验化合物对促甲状腺激素释放激素酒石酸盐的效能比用平行线测定法计算。

表2

最小有效剂量（毫克/公斤）^B）

本发明化合物促甲状腺激素释放激素酒石酸盐

对戊巴比妥麻醉的

1 ＞100

对抗效应

提高自发运动活性

10 ＞100

的作用

注：B）所谓最小有效剂量指的是与对照组小鼠比较，对于产生戊巴比妥麻醉延续时间下降和统计上自发运动活性大大提高所必须的最小剂量。

实验2

用肠胃外给药测定试验化合物的药理学活性。

（方法）

（1）对利血平诱发的体温过低的对抗效应和提高自发运动活性的作用

除溶于生理盐水溶液中的试验化合物对小鼠腹膜内给药，以及在测定提高自发运动活性的作用中，试验化合物给药后立即测量上述自发运动活性60分钟外，实验以实验1中描述的相同方式进行。

（2）对戊巴比妥麻醉的对抗效应：

戊巴比妥钠以剂量55毫克/公斤对雄性STD/ddY小鼠腹膜内给药。戊巴比妥给药10分钟后，溶于生理盐水溶液中的试验化合物给已丧失翻正反射的小鼠静脉给药。测定麻醉延续时间，即试验化合物给药终止时间一直到翻正反射恢复这段时间。生理盐水溶液代替试验化合物溶液给对照组小鼠给药。

（3）对多巴胺作用的潜在效应：

利血平以剂量3毫克/公斤对雄性STD/ddY小鼠皮上给药。大约16-20小时后，L-多巴以剂量200毫克/公斤给该小鼠腹膜内给药。L-多巴给药30分钟后，溶于生理盐水溶液中的试验化合物对小鼠腹膜内给药（当促甲状腺激素释放激素用作试验化合物时，在L-多巴给药45分钟后给药）。用ANIMEX（即一种测量自发运动活性的仪器，由FERAD公司制造）在L-多巴给药1小时后开始测定自发运动活性15分钟。生理盐水溶液代替试验化合物溶液给对照组小鼠给药。

（结果）

实验结果列入下面表3。

对促甲状腺激素释放激素的效能比^C）

本发明的化合物 №1 №2

对利血平诱发的体温过低

31.4 5.7 7.4

的对抗效应

提高自发运动活性的作用 27.4 3.5 3.8

对戊巴比妥麻醉的对抗效应 2.7 1.3 1.9

对多巴胺作用的潜在效应 18.5 2.5 2.6

注：C）促甲状腺激素释放激素的治疗效果取作1。每一试验化合物对促甲状腺激素释放激素的效能比用平行线测定法计算。

实验3

（方法）

释放促甲状腺激素的活性（副作用）：

溶于含0.1%牛血清蛋白的生理盐水溶液的试验化合物给雄性JCL∶SD大鼠静脉给药。给药15分钟后，在麻醉情况下从腹主动脉取血。用双抗体放射免疫测定法测定血清促甲状腺激素的含量。（Midgley et al.，Endocrinology.，79，10（1966））。含牛血清蛋白的生理盐水溶液代替试验化合物溶液给对照组大鼠给药。（结果）

实验结果列入下面表4

表4

对促甲状腺激素释放激素的效能比^C）

本发明的化合物 №1 №2

释放促甲状腺激素的活性 1/30 1/12-1/13^d）1/20-1/40^d）

注：C）促甲状腺激素释放激素对释放促甲状腺激素活性的影响取作1。每一试验化合物对促甲状腺激素释放激素的效能比用平行线测定法计算。

d）已发表的数据（参见Brain Research Reviews.，4，389（1982））

实验4

（方法）

急性毒性：

试验化合物给雄性STD/ddY小鼠静脉给药。从试验化合物给药24小时后小鼠的死亡率测定急性毒性（半数致死量）。

（结果）

实验结果列入下面表5。

表5

本发明的化合物 №1 №2 促甲状腺激

素释放激素

半数致死量（毫克/公斤

1589 558 1200^d）1450^d）

静脉注射）

注：d）已发表数据（参见Brain Research Reviews.，4，

389，（1982））

例1

1.03克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸和760毫克N-羟基琥珀酰亚胺溶于20毫升二甲基甲酰胺中，并在0℃下加入1.4克二环己基碳化二亚胺。混合物在相同温度下搅拌1.5小时。在不断冷却的条件下，把2.8克二氢溴化L-组氨酰基-L-脯氨酰胺和2毫升三乙胺加到混合物中。在0-15℃下搅拌混合物2天。过滤出不溶性物质，滤液在减压下浓缩除去二甲基甲酰胺。残留物溶于稀盐酸中;过滤出不溶性物质。滤液用氯仿洗涤;用碳酸氢钠碱化;然后通过苯乙烯-二乙烯苯共聚物树脂（由Mitsubishi化学工业有限公司制造，牌号为MIC GEL CHP-20P，以后简称为CHP-20P树脂）填充柱。用300毫升水洗涤柱子后，再用水洗脱目的产物。对泡利反应为阳性的馏分被收集和冷冻干燥。这样得到的产物用水结晶，并从水中重结晶。晶体在60℃减压下干燥3天。得到一克（1-甲基-L-4，5-二氢乳酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺二分之一水合物。

熔点 158-160℃（分解）

〔α〕²⁵ _D-16.4°（C＝1，H₂O）

例2

（1）1.56克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸和1.15克N-羟基琥珀酰亚胺溶于30毫升二甲基甲酰胺中，在0℃下加入2.06克二环己基碳化二亚胺。混合物在室温下搅拌2小时。这样得到的溶液以后称为溶液A。另一方面，3.43克二盐酸L-组氨酰基-L-脯氨酸苄基酯溶于二甲基甲酰胺中;然后加入1.67克三乙胺。混合物在0℃下搅拌20分钟;过滤出不溶性物质。滤液加到溶液A中。混合物在0℃下搅拌4小时，然后在10℃下搅拌1天。过滤出不溶性物质;滤液在40℃下减压浓缩，除去二甲基甲酰胺。残留物溶于水中;过滤出不溶性物质。用碳酸氢钠把滤液PH值调节到8;然后通过CHP-20P树脂的填充柱。用500毫升水、500毫升20%甲醇和300毫升50%甲醇逐次洗涤柱子。然后用70%甲醇洗脱目的产物。从洗脱液中收集对泡利反应呈阳性的馏分，并在减压下浓缩，从而得到3.65克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酸苄基酯油性产物。

IRν^氯仿 _最大（厘米^-1）：3300，1725，1680

650毫克上面得到的产物溶于1N盐酸中，然后冷冻干燥，得到690毫克盐酸（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酸苄基酯一水合物粉末产物。

〔α〕²² _D-39.8°（C＝0.5，H₂O）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1720、1640-1680

NMR（DMSO-d₆，δ）：1.7-2.4（m，4H），2.90（S，3H），2.4-3.9（m，6H），3.9-4.2 （m，1H）， 4.3-4.5（m，1H），4.6-5.0（m，1H）， 5.09（S，2H），7.2-7.5（m，5H）， 8.96（S，1H）

Mass（m/e）：496（M⁺）

（2）700毫克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酸苄基酯溶于20毫升甲醇中，加入20毫克钯黑。混合物在室温下氢气氛中搅拌3小时。20毫升水加到反应混合物中，过滤出催化剂。蒸发滤液，除去溶剂。残留物用甲醇结晶，从而得到290毫克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酸四分之五水合物。

熔点 233-236℃（分解）

〔α〕²⁰ _D-17.2°（C＝0.5，H₂O）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1715，1680，1630

NMR（D₂O，δ）：1.7-2.4（m，4H），2.6-3.9（m，6H），3.03（S，3H），4.0-4.45（m，2H），4.95（t，1H），7.27（S，1H），8.57（S，1H）

（3）4.29克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酸、1.15克N-羟基琥珀酰亚胺、2.26克二环己基碳化二亚胺和30毫升二甲基甲酰胺的混合物在0℃下搅拌40分钟，然后在室温下搅拌80分钟。然后在0℃下加30毫升15%氨一甲醇到该混合物中;混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1小时。过滤出不溶性物质;蒸发滤液除去二甲基甲酰胺。残留物溶于20毫升水中;再次过滤出不溶性物质。用碳酸氢钠把滤液PH值调节到8;然后通过CHP-20P树脂的填充柱。用2立升水洗涤柱子后，用10%甲醇洗脱目的产物。收集对泡利反应呈阳性的馏分，并在减压下浓缩。残留物溶于10毫升水中，并放入冷冻器。用过滤的方法收集结晶沉淀;用水洗涤;然后在25℃下干燥1天，从而得到3.3克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺二分之七水合物。

熔点 72-75℃

〔α〕²⁵ _D-13.6°（C＝1，H₂O）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：3400，3250，1710，1660，1610，1540

例3

（1）900毫克3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸、449毫克N-羟基琥珀酰亚胺和782毫克二环己基碳化二亚胺溶于13毫升二甲基甲酰胺中;该混合物在0℃下搅拌40分钟，然后在室温下搅拌80分钟。反应混合物冷却到-5℃;加入1.4克二氢溴酸L-组氨酰基-L-脯氨酰胺和0.94毫升三乙胺。混合物在0℃下搅拌3小时;然后在10℃下搅拌1天。过滤出不溶性物质，蒸馏滤液，除去溶剂。残留物溶于50毫升1%盐酸中;用氯仿洗涤。用碳酸氢钠把水层PH值调节到8，并在冷冻器中放置1天。用过滤的方法收集沉淀;用水洗涤;然后在50℃下干燥，从而得到1.05克（3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺。

熔点 228-230℃（分解）

〔α〕²³ _D+27.2°（C＝0.5，二甲基甲酰胺）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：3400，3200，1738，1680，1620

NMR（DMSO-d₆，δ）：1.6-2.2（m，4H），2.6-3.8（m，6H），3.00（S，3H），4.0-4.8（m，2H），4.9-5.1（m，1H），6.9-7.1（m，2H），7.3-7.8（m，6H），8.1（br，1H），8.65（brd，1H）

（2）510毫克（3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺溶于3毫升甲醇中;加入136毫克15%氨-甲醇。该混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸馏除去甲醇。5毫升水加到残留物中;过滤出不溶性物质。用乙酸乙酯洗涤水层，并浓缩到1毫升。残留物在冷冻器中放置1天后，用过滤的方法收集结晶沉淀;用水洗涤;在25℃下干燥1天。得到400毫克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）L-组氨酰基-L-脯氨酰胺二分之七水合物。

该产物的物理化学性质与例2-（3）得到的样品相同。

例4

（1）6.37克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸和11.3克95%五氯苯酚溶于80毫升二甲基甲酰胺中;在-5-0℃下加入8.3克二环己基碳化二亚胺;该混合物在相同温度下搅拌1小时。在-5-0℃下加入21.8克组氨酸二甲苯磺酸苄基酯（Bull.Chem.SOc.Jap.，31，784（1958））和75毫升三乙胺。混合物在5℃下搅拌2小时，然后在室温下搅拌1天。过滤出不溶性物质;滤液在减压下浓缩。残留物溶于80毫升水中;用80毫升乙醚洗涤;然后在减压下浓缩。残留物用硅胶柱色谱纯化（溶剂∶氯仿∶甲醇＝4∶1），然后从甲醇中重结晶。得到6.0克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酸苄基酯。

熔点 194-195℃

〔α〕²¹ _D+21.8°（C＝0.5，二甲基甲酰胺）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：3300，3200，1735，1710，1660

（2）2.7克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酸苄基酯溶于50毫升水中;加入50毫克钯黑。该混合物用例2-（2）中描述的相同方式处理，从而得到1.8克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酸四分之一水合物粉末产物。

〔α〕²¹ _D+68.8°（C＝0.5，H₂O）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1720，1660

（3）1.23克二环己基碳化二亚胺在-10-5℃下加到1.56克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酸、565毫克N-羟基琥珀酰亚胺和15毫升二甲基甲酰胺的混合物中;然后该混合物在相同的温度下搅拌30分钟。加入570毫克L-多巴胺;混合物在-5-0℃下搅拌2小时，然后在室温下搅拌1天。反应后，过滤出不溶性物质;用50毫升水洗涤。滤液和洗涤液混合，并用氯仿洗涤。用碳酸氢钠把溶液PH值调节到8，然后通过CHP-20P树脂填充柱。用200毫升水洗涤柱子，然后用20%甲醇洗脱目的产物。从洗脱液中收集对泡利反应呈阳性的馏分，然后在减压下浓缩。冷却残留物，用过滤的方法收集结晶沉淀。得到1.17克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺二分之七水合物结晶产物。

该产物的物理化学性质与例2-（3）得到的样品相同。

例5

（1）516毫克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸和345毫克N-羟基琥珀酰亚胺溶于9毫升二甲基甲酰胺;在0-5℃下加入680毫克二环己基碳化二亚胺。混合物在相同的温度下搅拌40分钟，然后在室温下搅拌80分钟。1.6克N^im-甲苯磺酰基-L-脯氨酰胺三氟乙酸酯（Bull.Chem.Soc.Jap.，49，1595（1976））和0.5毫升三乙胺加到混合物中，在10℃下搅拌1天。反应后，混合物在减压下浓缩;残留物溶于30毫升氯仿中。过滤出不溶性物质，用水洗涤滤液，然后干燥。混合物在减压下浓缩后，残留物用硅胶柱色谱纯化（溶剂∶氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇＝5∶4∶2）。从而得到1.2克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-N^im-甲苯磺酰基-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺粉末产物。

〔α〕²⁵ _D+8.3°（C＝1，二甲基甲酰胺）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1720，1680，1670，1640

（2）1.2克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-N^im-甲苯磺酰基-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺溶于10毫升25%氨-甲醇中，并在室温下放置1天。混合物在减压下浓缩后，残留物溶于10毫升水中，用氯仿洗涤。水溶液浓缩到3毫升，并冷却。用过滤的方法收集结晶沉淀，用水洗涤，然后干燥，从而得到620毫克（1-甲基-L-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺二分之七水合物。

该产物的物理化学性质与例2-（3）中得到的样品相同。

例6

（1）1.24克二环己基碳化二亚胺在0-5℃下加到1.36克3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酸、690毫克N-羟基琥珀酰亚胺和20毫升二甲基甲酰胺的混合物中。混合物在室温下搅拌1.5小时。2.06克二氢溴酸L-组氨酰基-L-脯氨酰胺和1.7毫升三乙胺在-5-0℃下加到反应混合物中，混合物在10℃下搅拌1天。过滤出不溶性物质后，滤液在减压下浓缩。30毫升20%柠檬酸水溶液加到残留物中，过滤出不溶性物质。用碳酸氢钠把滤液PH值调节到8，并用氯化钠饱和。然后用氯仿抽提滤液，并浓缩抽提液。残留物用正己烷结晶，过滤结晶沉淀，从而得到2.1克（3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺四水二分之一正己烷化合物。

熔点 80-90℃

〔α〕²² _D-16.8°（C＝1，二甲基甲酰胺）

（2）1克（3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺四水二分之一正己烷化合物和3毫升三氟乙酸的混合物在室温下搅拌30分钟。混合物在减压下浓缩除去三氟乙酸。残留物溶于20毫升水中，用碳酸氢钠把PH值调节到8。溶液注入CHP-20P树脂的填充柱。用300毫升水洗涤柱子后，用20%甲醇洗脱目的产物。收集对泡利反应呈阳性的馏分，并冷冻干燥，从而得到560毫克（1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酰基）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺一水化物。

〔α〕²² _D-65.6°（C＝1，H₂O）

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：3250，1720，1660

制备方法1

（1）5.0克L-4，5-二氢乳清酸（J.Am.Chem.Soc.，75，6086（1953））悬浮在80毫升二甲基甲酰胺中，再加入4.4毫升三乙胺和3.76毫升基溴。混合物在室温下搅拌2天。再加6.6毫升三乙胺和3.76毫升基溴加到混合物中;混合物在室温下搅拌2天。混合物在减压下浓缩，除去溶剂。水加到残留物中，用过滤的方法收集沉淀的晶体;用水洗涤;然后从甲醇中重结晶。得到5.8克L-4，5-二氢乳清酸苄基酯。

熔点 187-189℃

〔α〕²⁵ _D+56.3°（C＝1，二甲基甲酰胺）

（2）6.6克L-4，5-二氢乳清酸苄基酯溶于66毫升二甲基甲酰胺中，然后加入5毫升甲基碘。1.29克氢化钠（62%油分散液）在22-28℃下加到混合物中;该混合物在25℃左右搅拌40分钟。然后用乙酸把混合物PH值调节到4，并在40℃以下减压下浓缩除去二甲基甲酰胺。把乙酸乙酯加到残留物中;并用过滤的方法收集沉淀的晶体;用乙酸乙酯洗涤，然后干燥。把水加到晶体中;含水混合物搅拌20分钟。用过滤的方法收集晶体，然后从乙酸乙酯中重结晶。得到3.25克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄基酯。

熔点 162-164℃

〔α〕²⁵ _D+51.7℃（C＝1，二甲基甲酰胺）

（3）4克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄基酯溶于80毫升四氢呋喃中，加入340毫升乙醇。把0.4克披钯木炭加到混合物中，然后在室温常压氢气氛中摇动混合物。反应完全后，过滤出不溶性物质。滤液在降低下浓缩干燥，残留物从甲醇中重结晶。得到1.9克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸。

熔点 214-216℃

〔α〕²⁰ _D+49.2°（C＝1，二甲基甲酰胺）

该产物可用作例1的原料。

制备方法2

（1）2.61克二环己基碳化二亚胺加到5克N^α _-叔丁氧基羰基-N^im _-甲苯磺酰基-L-组氨酸、2.94克盐酸L-脯氨酸苄基酯、1.23克三乙胺和50毫升四氢呋喃的混合物中。上述添加过程在0℃下完成，混合物在室温下搅拌1天。反应后，过滤出不溶性物质;蒸发滤液除去溶剂。把乙酸乙酯加到残留物中;混合物用1N硫酸氢钠饱和水溶液和盐水逐次洗涤。蒸发干燥乙酸乙酯层，除去溶剂。残留物放入硅胶柱。用乙醚洗涤柱子后，用乙酸乙酯洗脱目的产物。洗脱液浓缩干燥，从而得到6.0克（N^α _-叔丁氧基羰基-N^im _-甲苯磺酰基-L-组氨酰基）-L-脯氨酸苄基酯油性产物。

（2）6.0克（N^α-叔丁氧基羰基-N^im-甲基磺酰基-L-组氨酰基）-L-脯氨酸苄基酯溶于50毫升四氢呋喃中，加入4.1克1-羟基苯并三唑。混合物在室温下搅拌4小时。反应后，蒸发混合物除去溶剂。把乙酸乙酯和1N硫酸加到残留物中。过滤出不溶性物质后，从滤液中分离出水层;用碳酸氢钠把PH值调节到8，然后用乙酸乙酯抽提。干燥抽提物，然后蒸发除去溶剂。用硅胶柱色谱（溶剂∶氯仿∶甲醇＝9∶1）纯化这样得到的残留物。从而得到4.5克（N^α-叔丁氧基羰基-L-组氨酰基）-L-脯氨酸苄基酯油性产物。

IRν^氯仿 _最大（厘米^-1）：3400，3300

（3）4.5克（N^α-叔丁氧基羰基-L-组氨酰基）-L-脯氨酸苄基酯溶于40毫升15%盐酸-二噁烷中;混合物在室温下搅拌30分钟。蒸发反应混合物，除去溶剂;把二异丙基醚加到残留物中。用过滤的方法收集沉淀粉末;用二异丙基醚洗涤;在减压下干燥，从而得到4.0克二盐酸L-组氨酰基-L-脯氨酸苄基酯（产率为定量产率）。该产物可不经纯化就用作例2的原料。

制备方法3

（1）2.62克1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄基酯和10克三乙胺悬浮在25毫升二噁烷中。在室温下滴入2.81克苯甲酰氯;混合物在60-65℃下搅拌3小时。蒸发反应混合物除去溶剂后，把氯仿加到残留物中，再用水洗涤混合物。用硅胶色谱（溶剂∶氯仿）纯化混合物，然后蒸发除去溶剂。残留物从乙酸乙酯-正己烷（1∶1）中重结晶，从而得到1.6克3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄基酯。

熔点 110-111℃

〔α〕²⁵ _D+63.0°（C＝0.5，甲醇）

（2）150毫克10%披钯木炭和30毫升乙醇到1.5克3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄基酯中;混合物在室温下氢气氛中搅拌40分钟。过滤出催化剂后，蒸馏滤液除去溶剂。用正己烷结晶残留物;然后从乙酸乙酯-正己烷（5∶1）重结晶，从而得到850毫克3-苯甲酰基-1-甲基-L-4，5-二氢乳清酸。

熔点 185-187℃

〔α〕²⁴ _D+95.2°（C＝0.5，甲醇）

该产物可用作例3的原料。

制备方法4

（1）在25-27℃下搅拌1.31克1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酸苄基酯、1.2克碳酸氢二叔丁基酯、0.7毫升三乙胺、0.06克4，4-二甲基氨基吡啶、1.7毫升四氢呋喃和3毫升二甲基甲酰胺的混合物2小时。反应混合物在减压下浓缩。残留物溶于30毫升乙酸乙酯中，用水和10%柠檬酸水溶液洗涤。然后干燥和蒸发溶液除去溶剂;残留物用乙醚-正己烷结晶，从而得到0.7克3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酸苄基酯。

熔点 157-159℃

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1760，1745，1695

（2）600毫克3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酸苄基酯、200毫克10%披钯木炭和30毫升甲醇的混合物在常温常压氢气氛中摇动3小时。反应后，过滤出不溶性物质，滤液减压下浓缩。残留物从乙酸乙酯-正己烷中重结晶，从而得到400毫克3-叔丁氧基羰基-1-甲基-DL-4，5-二氢乳清酸。

熔点 129-130℃

IRν^液体石蜡 _最大（厘米^-1）：1795，1740，1725，1675

该产物可用作例6的原料。

勘误表

文件名称页行补正前补正后

说明书 1 倒7 一脯氨酰胺 -L-脯氨酰胺

倒6 乳清基乳清基-L-组氨酰基

3 2、倒2 与上步骤同与上述定义同

5 脯氨酰胺脯氨酸

4 11 咪唑或咪唑，4-取代咪唑

或

倒9 甲氟羰基甲氧羰基

低级烷氟羰基低级烷氧羰基

5 8 二甲基苯胺 N，N-二甲基苯胺

9 吗啡碱）吗啡碱（如N-甲基

吗啡碱）

9 二噁烷、二噁烷、四氢呋喃、

倒10 亚硫酰氯亚硫酰氯、草酰氯

倒9 磷酰氯、磷酰氯、草酰氯、

6 3 风应步骤反应步骤

5 二甲基五砜二甲基亚砜

倒12 水解法、水解法、电解法、

倒9 烧基胺烷基胺

倒6 叙丁基羰基叔丁氧基羰基

倒3 氯化氢或溴化氢氢氯酸或氢溴酸

勘误表

文件名称页行补正前补正后

说明书 6 倒1 苄基对一甲氧基苄氧基羰

基、苄基

7 7 保拥基保护基

8 1 化合物（Ⅳ）的缩化合物（Ⅳ）与脯氨酸的缩合

2 （Ⅳ）（Ⅵ）

倒8 溶剂溶液

倒1 THR TRH

9 5 孤独癖、孤独癖、运动机能亢

进、

倒1 组氨酰基组氨酰基-L-

10 2 -L- -L-组氨酰基-L-

12 8 戊巴比妥戊巴比妥钠

倒10 皮上给药皮下给药

14 4 1/12-1/13 1/40

1/20-1/40^d）1/12-1/13^e）

8-9 参见Brain…… 参见“化学与药学通

389（1982）报”，28（6）1667-1672（1980）

勘误表

文件名称页行补正前补正后

说明书 14 10 无补上：e）已发表的数

实验据（参见“促甲状腺

4上面激素释放激素”，

327-340（1983），

Griffiths版，

E.C.;Bennet，G.W.

Raven：纽约，N.Y.）

倒3 558 -

16 8-9 脯氨酸基酯脯氨酸苄基酯

（以下同）

19 倒7 磺酸基酯磺酸苄基酯

20 倒9 多巴胺脯氨酰胺

21 6 -L- -L-组氨酰基-L-

23 6、7 毫升基溴毫升苄基溴

24 3 降低下减压下

倒12 硫酸氢钠硫酸，碳酸氢钠

25 倒5 乙醇到乙醇加到

勘误表

文件名称页行补正前补正后

说明书 1 7

倒7 -L-S- -L-5-

2 倒5 -CONH₃（结构式Ⅲ中） -CONH₂

3 1

倒4 脯氨酰胺脯氨酸

4 倒3 取代未取代

5 9 二氯乙烷二氯甲烷

倒6 甲基甲酰胺二甲基甲酰胺

6 倒8 丙基异丙基

7 4 酸处理碱处理

7-8 甲苯磺酸甲苯磺酰基

8 倒3-2 与TRH…所指出的，与美国专利4，100，152

和4，045，556所指出的

TRH和其衍生物相比，

Claims

1、制备下式的(1-甲基-L-或DL-4，5-二氢乳清基)-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺或其药用酸加成盐的方法，

(Ⅰ)

其特征在于该方法包括以下一步骤或数步骤：

(A)将下式(Ⅱ)的1-甲基-L或DL-4，5-二氢乳清酸或其活性衍生物与下式(Ⅲ)的L-组氨酰基-L-脯氨酰胺或其盐进行缩合，

(Ⅱ)

其中X¹为亚氨基或被护亚氨基，

(Ⅲ)

其中X²为亚氨基或被护亚氨基，

(B)将下式(Ⅳ)的(1-甲基-L-或DL-4，5-二氢乳清基)-L-组氨酸、其盐或其活性衍生物与下式(Ⅴ)的L-脯氨酰胺或其盐进行缩合，

(Ⅳ)

其中，X¹和X²的定义同上，

(C)将下式(Ⅵ)的(1-甲基-L或DL-4，5-二氢乳清基)-L-组氨酰基-L-脯氨酸化合物、其盐或其活化衍生物转变成与其相应的酰胺，

(Ⅵ)

其中，X¹和X²的定义同上，

(D)当在反应步骤(A)、(B)或(C)中所得的产物的X¹和/或X²是被护亚氨基时，进一步从其中脱除保护基，

(E)如果需要，可以将此产物进一步转化成其药用酸加成盐。

2、根据权利要求1所述制备化合物的方法，其中所述的化合物为（1-甲基-L-4，5-二氢乳清基-）-L-组氨酰基-L-脯氨酰胺或其药用酸加成盐。