CN102036561A

CN102036561A - 蛋白激酶调节剂

Info

Publication number: CN102036561A
Application number: CN2009801155149A
Authority: CN
Inventors: 彼得·C·乔; 马斯塔法·哈达科; 约翰尼·Y·纳加萨瓦; 法布里斯·皮埃尔
Original assignee: Cylene Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Cylene Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2008-02-29
Filing date: 2009-02-28
Publication date: 2011-04-27
Also published as: CA2716755A1; EP2259678A4; US20120208792A1; WO2009108912A1; US8168651B2; JP2011515337A; MX2010009445A; AU2009219154A1; EP2259678A1; US20090239859A1

Abstract

本发明部分涉及具有某些生物活性的分子，所述生物活性包括但不限于抑制细胞增殖、调节蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。本发明分子可调节Pim激酶活性和/或FMS-样酪氨酸激酶(Ht)活性。本发明还部分涉及使用所述分子的方法。

Description

蛋白激酶调节剂

相关申请

本申请要求2008年2月29日提交的美国临时申请61/067,845和2008年10月8日提交的美国临时申请61/103,908的优先权，将这两篇申请的全部内容并入本发明作为参考。

技术领域

本发明部分涉及具有某些生物活性的分子，所述生物活性包括但不限于细胞增殖、调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性和调节酪氨酸激酶活性。本发明分子可调节酪蛋白激酶(CK)活性(例如CK2活性)、Pim激酶活性(例如PIM-1、PIM-2和/或PIM-3活性)和/或Fms样酪氨酸激酶(Flt)活性(例如Flt-3活性)。本发明还部分涉及使用所述分子的方法。

背景技术

PIM蛋白激酶(包括密切相关的PIM-1、PIM-2和PIM-3)涉及各种生物进程(例如细胞存活、增殖和分化)。PIM-1参与多种与肿瘤发生高度相关的信号传导途径[参见Bachmann & Moroy，Internat.J.Biochem.Cell Bio1.，37，726-730(2005)]。这些激酶中的多种激酶参与细胞周期进程和凋亡。已经证明，PIM-1通过使前凋亡因子BAD(Bcl2相关死亡启动子(一种凋亡起始子))失活而充当抗凋亡因子。该发现暗示了PIM-1在预防细胞死亡中的直接作用，这是因为BAD的失活可提高Bcl-2的活性并可因此促进细胞的存活[Aho et al.，FEBS Letters，571，43-49(2004)]。PIM-1也已被认定为细胞周期进程的正调节剂。PIM-1结合Cdc25A并使Cdc25A磷酸化，这导致其磷酸酶活性的提高和G1/S转化的促进[参见Losman et al.，JBC，278，4800-4805(1999)]。此外，发现抑制G1/S进程的细胞周期蛋白激酶抑制剂p21^Waf通过PIM-1来失活[Wang et al.，Biochim.Biophys.Act.1593，45-55(2002)]。而且，PIM-1通过磷酸化来使C-TAK1失活并使Cdc25C活化，这导致G2/M转化的加速[Bachman et al.，JBC，279，48319-48(2004)]。

PIM-1似乎在造血系统的增殖中发挥重要作用。由gp130介导的STAT3增殖信号需要具有激酶活性的PIM-1[Hirano et al.，Oncogene 19，2548-2556，(2000)]。PIM-1在多种肿瘤和不同类型的肿瘤细胞系中是过表达的或甚至是突变的，并导致基因组的不稳定。Fedorov等人推断，开发用于治疗白血病的III期化合物即LY333’531是选择性的PIM-1抑制剂(O.Fedorov，et al.，PNAS 104(51)，20523-28(Dec.2007))。已经公开的证据显示，PIM-1涉及人类肿瘤[包括前列腺癌、口腔癌和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)(Gaidano & Dalla Faver，1993)]。所有这些发现表明，PIM-1在人类癌症(包括各种肿瘤和造血系统癌症)的引发和进程中发挥重要作用，因此PIM-1活性的小分子抑制剂为有前景的治疗策略。

此外，PIM-2和PIM-3具有与PIM-1重叠的功能，且对不止一种同工型的抑制可提供额外的治疗益处。然而，有时优选的是，PIM抑制剂很少通过抑制各种其它激酶或不通过抑制各种其它激酶来发挥体内作用，这是因为对各种其它激酶的抑制可能引起副作用或不可预测的结果。参见例如O.Fedorov，et al.，PNAS 104(51)，20523-28(Dec.2007)，其讨论了非特异性激酶抑制剂可产生的作用。因此，在一些实施方案中，本发明提供如下化合物，所述化合物为PIM-1、PIM-2和PIM-3中的至少一种或这些激酶的某种组合的选择性抑制剂，同时对某些其它人类激酶具有非常小的活性，如本发明进一步所述。

PIM-3在癌症中的作用涉及首先通过转录分布实验来暗示，所述转录分布实验显示，PIM3基因转录在由EWS/ETS诱导的NIH 3T3细胞恶性转化中是上调的。对这些结果的拓展显示，PIM-3在人类和小鼠肝细胞癌和胰腺癌中是选择性表达的，但在正常肝脏组织和胰腺组织中不是如此。此外，PIM-3mRNA和PIM-3蛋白在多种人类胰腺癌细胞系和肝细胞癌细胞系中是组成性表达的。

PIM-3的过表达和其在促进肿瘤发生中的功能性作用之间的联系来自在过表达PIM-3的人类胰腺癌细胞系和肝细胞癌细胞系中进行的RNAi研究。在这些研究中，内源性PIM-3蛋白的去除促进了这些细胞的凋亡。PIM-3抑制凋亡的分子机理部分通过调节前凋亡蛋白BAD的磷酸化来进行。与使BAD蛋白磷酸化的PIM-1和PIM-2类似，PIM-3蛋白通过siRNA的敲除导致BAD在Serll2处磷酸化的减少。因此，与PIM-1和PIM-2类似，PIM-3在内胚层源性癌症例如胰腺癌和肝癌中充当凋亡抑制剂。而且，由于胰腺癌的常规疗法具有差的临床结果，因此PIM-3可代表新的重要分子靶标以成功控制该不可治愈的疾病。

在2008AACR Annual Meeting，SuperGen宣布其已经确定了前导性PIM激酶抑制剂即SGI-1776，所述前导性PIM激酶抑制剂即SGI-1776在急性骨髓性白血病(AML)异种移植物模型中引起肿瘤的消退(Abstract No.4974)。在题目为“A potent small molecule PIM kinase inhibitor with activity in cell lines from hematological and solid malignancies”的口头报告中，Steven Warner博士详细描述了科学家如何使用SuperGen的CLIMB(TM)技术来构建产生小分子PIM激酶抑制剂的模型。SGI-1776被确定为PIM激酶的强效和选择性抑制剂，其诱导凋亡和细胞周期停滞，由此造成磷酸-BAD水平的降低和体外mTOR抑制的增强。最引入注意的是，SGI-1776在MV-4-11(AML)异种移植物模型和MOLM-13(AML)异种移植物模型中诱导了显著的肿瘤消退。这表明，PIM激酶抑制剂可用于治疗白血病。

Fedorov等人在PNAS vol.104(51)，20523-28中证明，PIM-1激酶的选择性抑制剂(Ly5333’531)在来自AML患者的白血病细胞中抑制细胞生长且诱导细胞死亡。已经证明PIM-3在胰腺癌细胞中表达，而其在正常胰腺细胞中是不表达的，这说明PIM-3可以是治疗胰腺癌的良好靶标(Li，et al.，Cancer Res.66(13)，6741-47(2006))。

另一种被证明是治疗某些癌症(包括白血病)的有用靶标的激酶为Flt3激酶(Fms样酪氨酸激酶3)。Flt3在顽固性AML患者中普遍存在，因此Flt3抑制剂可用于治疗这些患者。Smith等人报道了一种称作CEP-701的生物碱，其是Flt3的强效抑制剂，且在试验受试者中产生临床应答，而剂量相关毒性是非常小的(Blood，vol.103(10)，3669-76(2004))。有效对抗PIM和Flt3的双重抑制剂可优于任一靶标的单独抑制剂。具体地，Flt3的过度活性与顽固性AML相关，因此PIM和Flt3的双重抑制剂例如本发明披露的化合物可用于治疗顽固性AML。

此外，Flt3抑制剂可用于治疗炎症。已经证明Flt3抑制剂可有效治疗小鼠气道炎症(使用鼠科动物哮喘模型)(Edwan，et al.，J.Immunologoy，5016-23(2004))。因此，本发明化合物可用于治疗与Flt3过度活性相关的病症(包括炎症例如气道炎症和哮喘)。

总而言之，这些结果表明，PIM激酶和Flt3激酶的抑制剂可用于治疗某些类型的癌症。因此，期望对特异性抑制、调整和/或调节PIM-1、PIM-2、PIM-3和/或Flt3信号转导的化合物进行确定以作为治疗或预防与异常细胞增殖相关的病症(例如癌症)的手段。本发明提供满足上述需要且可用于治疗癌症、炎症和疼痛的化合物、组合物和方法。

发明内容

本发明部分提供具有某些生物活性的化合物，所述生物活性包括但不限于抑制细胞增殖、抑制血管发生和调节蛋白激酶活性。这些分子可调节酪蛋白激酶2(CK2)活性、Pim激酶活性和/或Fms样酪氨酸激酶3(Flt)活性，并因此影响生物功能，这包括但不限于例如抑制γ-磷酸由ATP转移至蛋白质或肽底物、抑制血管发生、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。本发明还部分提供用于制备新颖化合物及其类似物的方法和使用所述化合物及其类似物的方法。本发明还提供含有与其它药物组合的上述分子的组合物和使用与其它药物组合的上述分子的方法。

本发明化合物具有通式(A)：

其中被标记为α的基团表示稠合在含有Q¹的环上的5-6元芳族或杂芳族环，其中α为任选含有一个或多个氮原子作为环成员的6元芳基环或选自噻吩和噻唑的五元芳基环；

Q¹为C＝X，Q²为NR⁵，及Q¹和Q²之间的键为单键；或Q¹为C-X-R⁵，Q²为N，及Q¹和Q²之间的键为双键；和

其中X表示O、S或NR⁴，及Z¹-Z⁸和R⁴和R⁵如下定义；

条件是当式(A)中的Q¹为C-NHΦ，其中Φ为任选取代的苯基时：

如果被标记为α的环为含有至少一个N作为环成员的六元环，则存在的至少一个R³必须是极性取代基，或如果每个R³为H，则Φ必须被取代；及

如果被标记为α的环为苯基，且Z¹-Z⁴中的三个表示CH，则Z²不能是C-OR”，且Z³不能是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”为C1-C4烷基。

本发明还包括式(A)化合物的可药用盐。因此，在本发明每种化合物中，式(A)表示稠合三环环系，所述稠合三环环系通过Q1或Q2与基团R⁵相连，以下对此进行进一步描述。

因此，本发明提供式I、II、III和IV化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中

Z¹、Z²Z³和Z⁴各自为N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自为CR⁶或N；

每个R³和每个R⁶独立为H、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，

或每个R³和每个R⁶可为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR、极性取代基、羧基生物电子等排体或NO₂，

其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，

且其中同一原子上或相邻原子上的两个R可连接形成任选含有N、O或S中的一个或多个的3-8元环，

且每个R基团及通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’CSNR’₂、NR’C(＝NR’)NR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

其中每个R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团中的每个任选取代有一个或多个选自如下的基团：卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；

且其中两个R’可连接形成3-7元环，所述3-7元环任选含有最多三个选自N、O和S的杂原子，

R⁴为H或任选取代的选自如下的基团：C₁-C₆烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；

每个R⁵独立为H或任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或R⁵为取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基；及

在每个-NR⁴R⁵中，R⁴和R⁵与N一起可形成任选取代的3-8元环，所述3-8元环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子作为环成员；

条件是当式(I)中的-NR⁴R⁵为-NHΦ，其中Φ为任选取代的苯基时：

如果Z⁵-Z⁸中的至少一个为N，则存在的至少一个R³必须是极性取代基，或如果每个R³为H，则Φ必须被取代；及

如果Z⁵-Z⁸各自为CR⁶，且Z¹-Z⁴中的三个表示CH，则Z²不能是C-OR”，且Z³不能是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”为C1-C4烷基。

一些实施方案提供具有式I、II、III和IV结构的化合物及其可药用盐、酯和互变异构体；其中

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自为N或CR⁶；

Z¹-Z⁴中的零个、一个或两个为N，及Z⁵-Z⁸中的零个、一个或两个为N；

或每个R³和每个R⁶独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR、极性取代基、羧基生物电子等排体或NO₂，

且其中同一原子上或相邻原子上的两个R可连接形成3-8元环，所述3-8元环任选含有N、O或S中的一个或多个；

且每个R基团及通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’CSNR’₂、NR’C(＝NR’)NR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

且其中两个R’可连接形成3-7元环，所述3-7元环任选含有最多三个选自N、O和S的杂原子；

R⁴为H或任选取代的选自如下的基团：C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；

每个R⁵独立为H或任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或R⁵为取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8环的C_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基；及

如果Z⁵-Z⁸全部为CH或Z⁵-Z⁸中的一个为N，则Z¹-Z⁴中的至少一个为CR³，且至少一个R³必须是非氢取代基；或

如果每个R³为H，则Φ必须被取代；或

如果Z⁵-Z⁸全部为CH或Z⁵-Z⁸中的一个为N，则Z²不是C-OR”，且Z³不是NH₂、NO₂、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”为C1-C4烷基。

在式I、II、III和IV的一些实施方案中，Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中的一个、两个、三个或四个为N。对于其中Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中的两个为N的实施方案，环氮原子可以是相邻的(例如在Z⁵和Z⁶处为氮原子、在Z⁶和Z⁷处为氮原子或在Z⁷和Z⁸处为氮原子)或可相隔一个或两个环位置(例如在Z⁵和Z⁷处为氮原子、在Z⁶和Z⁸处为氮原子或在Z⁵和Z⁸处为氮原子)。在一些实施方案中，至少一个R³取代基为极性取代基，例如羧酸基或其盐、酯或生物电子等排体。在一些实施方案中，至少一个R³为例如含有羧酸的取代基或羧酸酯/盐生物电子等排体或其盐或酯。在一些实施方案中，至少一个R³为含有羧酸的取代基或其盐。在一些实施方案中，至少一个R³为羧酰胺基。在其它实施方案中，至少一个R³为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。

本发明使用的术语“极性取代基”是指具有电子偶极和任选具有偶极矩的任意取代基(例如具有偶极矩的不对称极性取代基和不具有偶极矩的对称极性取代基)。极性取代基包括接受或提供氢键的取代基和在生理pH水平的水溶液中可带有至少部分正电荷或负电荷的基团。在一些实施方案中，极性取代基为如下极性取代基，其可在与另一化学实体形成的非共价氢键中接受或提供电子。在一些实施方案中，极性取代基选自羧基、羧基生物电子等排体或其它由酸衍生的部分，它们在pH为约7至8时主要以阴离子的形式存在。其它极性取代基包括但不限于含有以下部分的基团：OH、NH、醚性氧(ether oxygen)、胺性氮(amine nitrogen)、被氧化的硫、被氧化的氮、羰基、氰基、芳族或非芳族的含氮杂环或芳族或非芳族的含氧杂环。在一些实施方案中，由R³表示的极性取代基为羧酸酯/盐基或羧酸酯/盐生物电子等排体。

本发明使用的“羧酸酯/盐生物电子等排体”或“羧基生物电子等排体”是指被认为在生理pH时荷负电至相当程度的部分。在一些实施方案中，羧酸酯/盐生物电子等排体为选自如下的部分及这些部分的盐和前药：

其中每个R⁷独立为H或任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或R⁷为取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基。在一些实施方案中，极性取代基(例如R^3P)选自羧酸基、羧酸酯基、羧酰胺基、四唑基、三唑基、咪唑基、羧基甲磺酰胺基、噁二唑基、氧代噻二唑基、噻唑基、氨基噻唑基和羟基噻唑基。在一些实施方案中，存在的至少一个R³为羧酸基或其盐、酯或生物电子等排体。在一些实施方案中，存在的至少一个R³为含有羧酸的取代基或其盐、酯或生物电子等排体。在后者实施方案中，R³取代基可以是例如与羧酸(或其盐、酯或生物电子等排体)相连的C1-C10烷基或C1-C10烯基，及在一些实施方案中，R³取代基不是-NHCOOCH₂CH₃。

在本发明一些优选的实施方案中，R^3P为三唑环或咪唑环，所述三唑环或咪唑环可以是取代或未取代的，且优选通过三唑环或咪唑环中的碳原子与稠合三环部分相连。R^3P通常为咪唑-2-基环或三唑-3-基环，所述咪唑-2-基环或三唑-3-基环各自可以是未取代或取代的。如果这些环在N上被取代，则它们通常被C1-C6烷基或C1-C6酰基取代，或如果这些环在环中的碳原子上被取代，则它们通常被卤素取代。对于R^3P，优选的基团是未取代的三唑-3-基。

在一些实施方案中，Z¹-Z⁴和Z⁵-Z⁸中的至少一个为氮原子，且一个或多个环氮原子可位于含有Z¹-Z⁴的环中或位于含有Z⁵-Z⁸的环中，从而使每个环独立为任选取代的吡啶环、嘧啶环、哒嗪环或吡嗪环。例如，含有Z⁵-Z⁸的环中的一个或多个环氮原子可如下排列：

其中R^6A、R^6B、R^6C和R^6D各自独立选自如上就式I、II、III或IV化合物所定义的R⁶取代基。

在一些实施方案中，两个相邻的Z¹-Z⁴或Z⁵-Z⁸不都是N。

极性取代基可在式I、II、III或IV中含有Z¹-Z⁴的环上的任意位置，且所述环可具有一个、两个、三个或四个极性取代基。在一些实施方案中，Z¹-Z⁴各自可为CR³，且R³取代基中的一个可为排列在含有Z¹-Z⁴的环中任一位置的极性取代基(例如羧酸盐基、羧酸酯基、羧酰胺基或四唑基)：

其中R^3P为极性取代基，且R^3A、R^3B、R^3C和R^3D各自独立选自如上就式I、II、III或IV化合物所定义的R³取代基。

在上式化合物的一些实施方案中，R⁴为H。在一些实施方案中，R⁴为H或CH₃，及R⁵为任选取代的3-8元环，所述3-8元环可以是芳族或非芳族的和可以是碳环或杂环的，或R⁵为取代有上述任选取代的3-8元环的C_1-10烷基。在具体的实施方案中，R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环，且有时为任选取代的苯基环。

在一些涉及式I化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，及R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基：卤素(例如F、Cl)取代基、氟代烷基(例如CF₃)取代基或炔属(acetylene)取代基，所述取代基有时在苯基环的3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。

在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、哌啶基或吡咯烷基环取代基的C_1-3烷基，或取代有羟基或-NR⁴R⁴，其中R⁴如上定义(例如R⁵可以是取代有-N(CH₃)₂的C_1-3烷基)。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，由R³表示的极性基团为羧基、羧基烷基(例如羧基甲基)、四唑基或羧酰胺基(例如-CONH₂)取代基。在其它实施方案中，R³表示羧酸酯/盐生物电子等排体。

在一些实施方案中，R⁶取代基例如R^6B有时为例如-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。在一些实施方案中，所述化合物具有式I结构；R⁴为H或CH₃；R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环，且有时为任选取代的苯基环；且一个R³为羧酸基或盐、酯、羧酰胺或羧酸酯/盐生物电子等排体。在一些实施方案中，所述化合物具有式I结构；R⁴为H或CH₃；R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环，且有时为任选取代的苯基环；且Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸中的一个或两个为N。

在式I、II、III或IV化合物的在一些实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。通常，至少一个R⁶为H，或至少两个R⁶为H。在一些实施方案中，(i)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、Z⁶和Z⁸各自为CR³，及Z⁷为氮；或(ii)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自为CR³，及Z⁵为氮；或(iii)Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁶和Z⁸各自为CR³，及Z⁵和Z⁷各自为氮。在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的每个R³和/或每个R⁶为氢。在一些实施方案中、R^3A、R^3C、R^3D、R^6A、R^6B、R^6C和R^6D各自为H，及R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐基、羧酸基、四唑基)。

本发明还提供式V、VI、VII或VIII化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中Z¹、Z²、Z³、Z⁴、R⁴和R⁵如上就式I、II、III和IV化合物所定义，且R^6A和R^6B各自独立选自如上就式I、II、III和IV化合物所定义的R⁶取代基。

对于式I、II、III和IV化合物，在优选的实施方案中，存在的至少一个R³为极性取代基例如上述极性取代基。在一些实施方案中，至少一个R³取代基为极性取代基例如羧酸基或其盐、酯或生物电子等排体。在一些实施方案中，至少一个R³为例如含有羧酸的取代基或羧酸酯/盐生物电子等排体或其盐或酯。在一些实施方案中，至少一个R³为含有羧酸的取代基或其盐。在其它实施方案中，至少一个R³为羧酰胺基。就式I、II、III和IV化合物所述的实施方案也可应用于式V、VI、VII和VIII化合物。

一些实施方案提供具有式V、VI、VII和VIII结构的化合物及其可药用盐、酯和互变异构体；其中

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立为N或CR³，及Z¹、Z²、Z³和Z⁴中的零个、一个或两个为N；

R³、R^6A和R^6B各自独立为H、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，

或R³、R^6A和R^6B各自独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、8O₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

且每个R基团和通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’CSNR’₂、NR’C(＝NR’)NR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

每个R⁵独立为H或任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或R⁵为取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的G_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基；及

在每个-NR⁴R⁵中，R⁴和R⁵与N一起可形成任选取代的3-8元环，所述3-8元环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子作为环成员。

在涉及式V、VI、VII和VIII化合物的一些实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。通常，R^6A和R^6B中的至少一个为H，且有时R^6A和R^6B各自为H。在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的每个R³和/或R^6A和R^6B中的每个为H。在一些实施方案中，R^3A、R^3C、R^3D、R^6A和R^6B各自为H，及R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐生物电子等排体、羧酸基、羧酰胺基或四唑基)。

在涉及式V化合物的一些实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环(例如任选取代的苯基环)。在涉及式V化合物的一些实施方案中，R⁴为H或CH₃，及R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基环：卤素(例如F、Cl)取代基、三氟代烷基(例如CF₃)取代基或炔属取代基，所述取代基有时在3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、吡咯基、哌啶基或吡咯烷基取代基的C_1-3烷基或取代有羟基或取代有取代基-NR⁴R⁴的C_1-3烷基，其中R⁴如上定义(例如R⁵可以是取代有-N(CH₃)₂的C_1-3烷基)。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，R⁶取代基例如R^6A或R^6B有时为例如-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。在其它实施方案中，R^6A和R^6B各自为H。

本发明还提供式IX、X、XI和XII化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中Z¹、Z²、Z³、Z⁴、R⁴、R⁵和R⁶如上就式I、II、III和IV化合物所定义。

对于式I、II、III和IV化合物，在一些实施方案中，存在的至少一个R³为极性取代基例如上述极性取代基(例如羧酸基、羧酸酯/盐基、羧酰胺基或四唑基)。对于式IX化合物，R⁴和R⁵不都是氢，且独立为H、-Y⁰或-LY¹，其中Y⁰为任选取代的5元环或任选取代的6元环(例如各自为芳基或非芳基的杂环或各自为芳基或非芳基的碳环)，Y¹为任选取代的5元芳基环或任选取代的6元芳基环，及L为C1-C20烷基连接基或C1-C20亚烷基连接基。

一些实施方案提供具有式IX、X、XI和XII结构的化合物及其可药用盐、酯和互变异构体；其中

Z¹、Z²、Z³和Z4各自为N或CR³，且Z¹、Z²、Z³和Z⁴中的零个、一个或两个为N；

R³和R⁶各自独立为H、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，

或R³和R⁶各自可为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

就式I、II、III、IV、V、VI、VII和VIII化合物所述的实施方案也可应用于式IX、X、XI和XII化合物。在涉及式IX、X、XI和XII化合物的一些实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。R⁶通常为H，且在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的R⁶和R³各自为H。在一些实施方案中，R^3A、R^3C、R^3D和R⁶各自为H，及R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐基、羧酸基、羧酰胺基或四唑基)。

在一些涉及式IX化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环(例如任选取代的苯基环)。在一些涉及式IX化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基环：卤素(例如F、Cl)取代基或炔属取代基，所述取代基有时在3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、吡咯基、哌啶基或吡咯烷基取代基的C_1-3烷基或取代有羟基取代基或取代有-NR⁴R⁴(例如-N(CH₃)₂)取代基的C_1-3烷基。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，R⁶有时为例如-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。

本发明还提供式XIII、XIV、XV和XVI化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中

Z5为N或CR6A；

R6A、R6B、R6C和R8各自独立为H、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，

或R6A、R6B、R6C和R8各自独立为卤素、CF3、CFN、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCSNR2、NRC(＝NR)NR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2，

R9独立为任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，或

R9独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR或NO2，

及每个R基团和通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’CSNR’2、NR’C(＝NR’)NR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，

n为0至4；及

p为0至4。

在式XIII、XIV、XV和XVI化合物的一些实施方案中，Z⁵为N。在一些实施方案中，R⁸为羧基部分例如羧酸酯/盐基或羧酸基。在一些实施方案中，R⁹选自-C≡CR、-C≡CH、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-CFN、-C≡N、-OR或卤素。在一些实施方案中，R⁹选自卤素、-C≡CR或-C≡CH。在一些实施方案中，R⁹选自卤素或-C≡CH，及在一些实施方案中，R⁹为卤素、氯、溴或-C≡CH。

本发明还提供式XVII、XVIII、XIX或XX化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

对于式I、II、III和IV化合物，在一些实施方案中，存在的至少一个R3为极性取代基例如上述极性取代基。就式I、II、III和IV化合物所述的实施方案也可应用于式XVII、XVIII、XIX或XX化合物。

一些实施方案提供具有式XVII、XVIII、XIX或XX结构的化合物及其可药用盐、酯和互变异构体；其中

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立为N或CR³，且Z¹、Z²、Z³和Z⁴中的零个、一个或两个为N；

或R³、R^6A和R^6B各自独立为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

R⁵各自独立为H或任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；或R⁵为取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基；及

在一些涉及式XVII、XVIII、XIX或XX化合物的实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。通常，R^6A和R^6B中的至少一个为H，且有时R^6A和R^6B各自为H。在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的每个R³和/或R^6A和R^6B中的每个为H。在一些实施方案中，R^3A、R^3C、R^3D、R^6A和R^6B各自为H，及R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐生物电子等排体、羧酸基、羧酰胺基或四唑基)。

在一些涉及式XVII化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环(例如任选取代的苯基环)。在一些涉及式XVII化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基环：卤素(例如F、Cl)取代基、氟代烷基(例如CF₃)取代基或炔属取代基，所述取代基有时在3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、吡咯基、哌啶基或吡咯烷基取代基的C_1-3烷基或取代有羟基取代基或取代有取代基-NR⁴R⁴(例如-N(CH₃)₂)的C_1-3烷基，其中R⁴如上定义。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，R⁶取代基例如R^6A或R^6B有时为例如卤素或-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。

本发明还提供式XXI、XXII、XXIII或XXIV化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中Z¹、Z²、Z³、Z⁴、R⁴和R⁵如上就式I、II、III和IV化合物所定义，且R^6A和R^6B各自独立选自如上就式I、II、III和IV化合物所定义的R⁶取代基。对于式I、II、III和IV化合物，在一些实施方案中，存在的至少一个R³为极性取代基例如上述极性取代基。就式I、II、III和IV化合物所述的实施方案也可应用于式XXI、XXII、XXIII或XXIV化合物。

一些实施方案提供具有式XXI、XXII、XXIII或XXIV结构的化合物及其可药用盐、酯和互变异构体；其中

且每个R基团及通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’COOR’、NR’CSNR’₂、NR’C(＝NR’)NR’₂、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

在一些涉及式XXI、XXII、XXIII或XXIV化合物的实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。通常，R^6A和R^6B中的至少一个为H，且有时R^6A和R^6B各自为H。在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的每个R³和/或R^6A和R^6B中的每个为H。在一些实施方案中，R^3A、R^3C、R^3D、R^6A和R^6B各自为H，及R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐生物电子等排体、羧酸基、羧酰胺基或四唑基)。

在一些涉及式XXI化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，及R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环(例如任选取代的苯基环)。在一些涉及式XXI化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基环：卤素(例如F、Cl)取代基、氟代烷基(例如CF₃)取代基或炔属取代基，所述取代基有时在3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、吡咯基、哌啶基或吡咯烷基取代基的C_1-3烷基或取代有羟基取代基或取代有取代基-NR⁴R⁴(例如-N(CH₃)₂)的C_1-3烷基，其中R⁴如上定义。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，R⁶取代基例如R^6A或R^6B有时为例如卤素或-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。

本发明还提供式XXV、XXVI和XXVII化合物及其可药用盐、酯、前药和互变异构体：

其中

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为N或CR³；

Z⁵、Z⁶、Z⁷和Z⁸各自为CR⁶；

或每个R³和每个R⁶可以是卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

条件是当-NR⁴R⁵为-NHΦ，其中Φ为任选取代的苯基时：

存在的至少一个R³必须是极性取代基，或如果每个R³为H，则Φ必须被取代。

在一些涉及式XXV、XXVI或XXVII化合物的实施方案中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自为CR³，且至少一个R³为H，或至少两个R³为H。通常，至少一个R⁶为H，且有时R⁶各自为H。在一些实施方案中，除存在的至少一个R³为极性取代基外，存在的每个R³和/或每个R⁶为H。在一些实施方案中，R^3A、R^3C、R^3D和R⁶各自为H，且R^3B为极性取代基(例如羧酸酯/盐生物电子等排体、羧酸基、羧酰胺基或四唑基)。就式I、II、III和IV化合物所述的实施方案也可应用于式XXV、XXVI或XXVII化合物。

在一些涉及式XXV、XXVI或XXVII化合物的实施方案中，R⁴为H或CH₃，且R⁵为任选取代的五、六或七元碳环或杂环(例如任选取代的苯基环)。在一些实施方案中，R⁴为H或CH₃，及R⁵为取代有以下取代基中的一个或多个的苯基环：卤素(例如F、Cl)取代基、氟代烷基(例如CF₃)取代基或炔属取代基，所述取代基有时在3-位、4-位、5-位或这些位置的组合(例如3-位和5-位)。在一些实施方案中，R⁵为取代有任选取代的苯基、吡啶基、吗啉代、吡咯基、哌啶基或吡咯烷基取代基的C_1-3烷基或取代有羟基取代基或取代有取代基-NR⁴R⁴(例如-N(CH₃)₂)的C_1-3烷基，其中R⁴如上定义。在其它实施方案中，R⁵为取代有SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR或CONR₂的C_1-3烷基，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基。在一些实施方案中，R⁶取代基有时为例如卤素或-NR⁴R⁵取代基例如-NH-(C1-C6烷基)部分(例如-NH-CH₃)。

在式I化合物的一些实施方案中，本发明提供对Pim激酶特别是Pim1和/或Pim2激酶具有活性的化合物。式IA(及IB和IC)化合物是这些Pim激酶中至少一种的抑制剂，并因此可用于治疗以Pim的过度活性为特征或与Pim的过度活性相关的病症。本发明该方面提供具有式IA、IB和IC的化合物、含有与一种或多种可药用赋形剂和/或载体混合的至少一种所述化合物的药物组合物和使用所述化合物治疗病症例如本发明所述癌症及疼痛和炎症的方法。所述化合物具有下式或为其可药用盐：

在一些优选的实施方案中，式IA化合物包括式IB或IC化合物或其可药用盐：

在式IA、IB和IC化合物中：

Z⁶⁰和Z⁷⁰独立为N或CR⁶⁰，条件是它们中的至少一个为N；

每个R³⁰和每个R⁶⁰独立为H、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的C2-C8杂烷基、任选取代的C2-C8烯基、任选取代的C2-C8杂烯基、任选取代的C2-C8炔基、任选取代的C2-C8杂炔基、任选取代的C1-C8酰基、任选取代的C2-C8杂酰基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C5-C12杂芳基、任选取代的C7-C12芳基烷基或任选取代的C6-C12杂芳基烷基，

或每个R³⁰和每个R⁶⁰可以是卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

每个R⁴⁰为H或任选取代的选自如下的基团：C₁-C₆烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；

每个R⁵⁰独立为任选取代的选自如下的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；

或R⁵⁰可以是取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_1-10烷基、取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10烯基或取代有任选取代的C_3-8碳环或C_3-8杂环的C_2-10杂烷基；

在每个-NR⁴⁰R⁵⁰中，R⁴⁰和R⁵⁰与N一起可形成任选取代的3-8元环，所述3-8元环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子作为环成员；

每个R^3P表示极性取代基；

且每个Φ独立表示任选取代的苯基。

式IA、IB和IC化合物的可药用盐和互变异构体也包括在本发明范围内。

在一些式IA化合物中，Z⁶⁰可以是N，同时Z⁷⁰为CH，或Z⁷⁰可以是N，同时Z⁶⁰为CH。在这些化合物的一些中，R⁴⁰为H或C1-C6酰基或C1-C6烷基。在这些化合物的一些中，R⁵⁰为任选取代的苯基，或R⁵⁰可以是-(CH₂)_q-RG，其中q为0-2的整数，及RG表示选自如下的任选取代的环：苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和环丙烷。式IA的优选实施方案包括其中R⁵⁰为任选取代的苯基(即Φ)的化合物。

在一些式IA化合物中，每个R³⁰独立为H或卤素或C1-C6烷基。优选地，在这些化合物中，至少一个R³⁰为H。

R^3P为极性取代基，且可以是如上就式I化合物所述的任意极性取代基。在式IA化合物的一些实施方案中，R^3P为三唑环或咪唑环，所述三唑环或咪唑环可以是取代或未取代的，且优选通过三唑环或咪唑环中的碳原子与式IA中的稠合三环部分相连。在其它实施方案中，R^3P为羧酸基或其盐、酯或生物电子等排体。在一些实施方案中，至少一个R³为例如含有羧酸的取代基或羧酸酯/盐生物电子等排体或其盐或酯。在一些实施方案中，至少一个R³为含有羧酸的取代基或其盐。在其它实施方案中，R^3P表示式-C(O)NR⁴⁰R⁵⁰酰胺基，其中NR⁴⁰R⁵⁰如上定义。在其它实施方案中，R^3P表示酯基-COOR⁸⁰，其中R⁸⁰为H或任选取代的C1-C6烷基。就式I化合物所述的R^3P的实施方案在本发明中也可用于式IA、IB和IC化合物。就式I、IA、IB和IC化合物所述的R^3P的实施方案也可用于式L、L-A和L-B化合物。

在式IB或IC化合物中，R³⁰通常为H或卤素。R^3P通常为咪唑-2-基环或三唑-3-基环，所述咪唑-2-基环或三唑-3-基环各自可以是未取代或取代的。如果这些环在N上被取代，则它们通常取代有C1-C6烷基或C1-C6酰基，或如果这些环在环中的碳原子上被取代，则它们通常取代有卤素。对于R^3P，未取代的三唑-3-基是优选的基团。

在式IB或IC化合物中，Φ为任选取代的苯基，所述苯基可以是未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基。在一些实施方案中，苯基环上的取代基选自卤素、氰基、CF₃、-OCF₃、COOR⁴⁰和SO₂NR⁴⁰R⁵⁰，且这些取代基中的一个或多个可以是任选取代的选自如下的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基。

在本发明一些实施方案中，所述化合物具有式L、L-A和L-B结构。本发明该方面提供具有式L的化合物、含有与一种或多种可药用赋形剂和/或载体混合的至少一种所述化合物的药物组合物和使用所述化合物治疗病症例如本发明所述癌症、炎症或疼痛的方法。所述化合物具有下式或为其可药用盐：

在一些优选的实施方案中，式L化合物包括式L-A或L-B化合物或其可药用盐：

在式L、L-A和L-B化合物中：

每个R^3P表示极性取代基；

且每个W表示任选取代的芳基环、任选取代的杂芳基环或任选取代的C_3-8环烷基环。

式L、L-A和L-B化合物的可药用盐和互变异构体也包括在本发明范围内。

在式L、L-A和L-B的一些实施方案中，每个R^3P表示任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环。

在式L的一些化合物中，Z60可以是N，同时Z70为CH，或Z70可以是N，同时Z60为CH。

在式L、L-A和L-B的一些实施方案中，W表示单环6元芳族环或单环5-6元杂芳族环或稠合二环8-10元芳族环或稠合二环8-10元杂芳族环，这些环中的每个可任选被取代。在一些这样的实施方案中，W表示任选取代的选自如下的芳族环或杂芳族环：苯基、萘基、吡啶、嘧啶、哒嗪、噻吩、噁唑、异噁唑、咪唑、吡唑、吡咯、噻唑和异噻唑。

式L的优选实施方案包括其中W为任选取代的苯基环的化合物。在其它实施方案中，W表示任选取代的C3-8环烷基环；有时W为环丙基。

在式L的一些实施方案中，每个R30独立为H、卤素或C1-C6烷基。优选地，在这些化合物中，至少一个R30为H。

R^3P为极性取代基，且可以是如上就式IA、IB和IC化合物所述的任意极性取代基。在式L的一些实施方案中，R^3P为三唑环或咪唑环，所述三唑环或咪唑环可以是取代或未取代的，且优选通过三唑环或咪唑环中的碳原子与式L中的稠合三环部分相连。

在式L-A或L-B化合物中，R30通常为H或卤素。R^3P通常为咪唑-2-基环或三唑-3-基环，所述咪唑-2-基环或三唑-3-基环各自可以是未取代或取代的。如果这些环在N上被取代，则它们通常取代有C1-C6烷基或C1-C6酰基，或如果这些环在环中的碳原子上被取代，则它们通常取代有卤素。对于R^3P，优选的基团是未取代的三唑-3-基。

在式L-A或L-B的一些实施方案中，W为任选取代的苯基，所述苯基可以是未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基。在一些实施方案中，苯基环上的取代基选自卤素、氰基、CF3、-OCF3、COOR40和SO2NR40R50，且这些取代基中的一个或多个可以是任选取代的选自如下的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基，其中R40和R50各自如就式IA所定义。

本发明还提供药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述任意式(包括式IA、IB、IC、L、L-A和L-B)化合物和至少一种可药用载体或赋形剂或两种或更多种可药用载体和/或赋形剂。应当理解的是，式I化合物可包括式IA、IB和IC化合物。药物组合物可用在本发明所述治疗中。

本发明还提供用于确定与CK2、Pim或Flt蛋白相互作用的候选分子的方法，所述方法包括使含有CK2、Pim或Flt蛋白激酶和本发明所述化合物的组合物与候选分子在所述化合物与所述蛋白激酶相互作用的条件下接触，并相对于在没有候选分子的情况下所述化合物和所述蛋白激酶之间的对照相互作用而确定与所述蛋白激酶相互作用的所述化合物的量是否被调节，由此相对于对照相互作用而调节与所述蛋白激酶相互作用的所述化合物的量的候选分子被确定为与所述蛋白激酶相互作用的候选分子。

在一些实施方案中，所述蛋白质在细胞中或在不含细胞的系统中。在一些实施方案中，使所述蛋白质、所述化合物或所述分子与固相结合。在一些实施方案中，所述化合物和所述蛋白质之间的相互作用通过可检测的标签来检测，其中在一些实施方案中，所述蛋白质包含可检测的标签，及在一些实施方案中，所述化合物包含可检测的标签。有时在没有可检测的标签的情况下检测所述化合物和所述蛋白质之间的相互作用。

在一些实施方案中，所述蛋白质为CK2蛋白，例如包含氨基酸序列SEQID NO：1、2或3或其基本相同变体的CK2蛋白，例如：

SEQ ID NO：1(NP_001886；酪蛋白激酶IIα1亚单元同工型a[人])

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361 psplgplags pviaaanplg mpvpaaagaq qSEQ ID NO：2(NP 808227；酪蛋白激酶IIα1亚单元同工型a[人])

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SEQ ID NO：3(NP_808228；酪蛋白激酶IIα1亚单元同工型b[人])

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本发明还提供用于调节CK2蛋白、Pim蛋白或Flt蛋白活性的方法，所述方法包括使含有所述蛋白质的系统与有效调节所述蛋白质活性量的本发明所述化合物接触。在一些实施方案中，所述蛋白质活性被抑制，且有时所述蛋白质为例如CK2蛋白例如含有氨基酸序列SEQ ID NO：1、2或3或其基本相同变体的CK2蛋白。在其它实施方案中，所述蛋白质为Pim蛋白或Flt蛋白。在一些实施方案中，所述系统为细胞，且在其它实施方案中，所述系统为不含细胞的系统。在一些实施方案中，可使所述蛋白质或所述化合物与固相结合。

本发明还提供用于抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效抑制细胞增殖量的本发明所述化合物接触。所述细胞有时在细胞系中，所述细胞系为例如癌细胞系(例如乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系、胰腺癌细胞系、肺癌细胞系、造血系统癌症细胞系、结肠直肠癌细胞系、皮肤癌细胞系、卵巢癌细胞系)。在一些实施方案中，所述癌细胞系为乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系或胰腺癌细胞系。所述细胞有时在组织中，有时在受试者中，有时在肿瘤中，及有时在受试者的肿瘤中。在一些实施方案中，所述方法还包括诱导细胞凋亡。细胞有时来自患有黄斑变性的受试者。

本发明还提供用于治疗与异常细胞增殖相关的病症的方法，所述方法包括将本发明所述化合物以有效治疗细胞增殖性病症的量给药有此需要的受试者。在一些实施方案中，所述细胞增殖性病症为肿瘤相关癌症。所述癌症有时为乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。在一些实施方案中，所述细胞增殖性病症为例如非肿瘤性癌症(non-tumor cancer)例如造血系统癌症。在其它实施方案中，所述细胞增殖性病症为黄斑变性(在一些实施方案中)。

本发明还提供用于在需要治疗癌症或炎性疾病的受试者中治疗癌症或炎性疾病的方法，所述方法包括给药所述受试者治疗有效量的可用于治疗所述疾病的治疗剂；及以有效提高所述治疗剂所需作用的量给药所述受试者抑制CK2、Pim或Flt的分子。在一些实施方案中，抑制CK2、Pim或Flt的分子为本发明所述式I、IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物或其可药用盐。在一些实施方案中，抑制CK2、Pim或Flt的分子为如上所示的已知化合物或本发明所述表格之一中的化合物或这些化合物之一的可药用盐。在一些实施方案中，所述治疗剂被抑制CK2、Pim或Flt的分子提高的所需作用为细胞增殖的减少。在一些实施方案中，所述治疗剂被抑制CK2、Pim或Flt的分子提高的所需作用为至少一种细胞类型中的凋亡增加。

在一些实施方案中，将所述治疗剂和抑制CK2、Pim或Flt的分子基本同时给药。所述治疗剂和抑制CK2、Pim或Flt的分子有时被受试者同时使用。在一些实施方案中，将所述治疗剂和抑制CK2、Pim或Flt的分子组合到一种药物组合物中。

本发明还提供组合物，所述组合物包含本发明所述化合物和分离的蛋白质。所述蛋白质有时为CK2蛋白，例如包含氨基酸序列SEQ ID NO：1、2或3或其基本相同变体的CK2蛋白。在一些实施方案中，所述蛋白质为Pim蛋白。在其它实施方案中，所述蛋白质为Flt蛋白。一些组合物包含与细胞组合的本发明所述化合物。所述细胞可来自细胞系，例如癌细胞系。在后者实施方案中，所述癌细胞系有时为乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系、胰腺癌细胞系、肺癌细胞系、造血系统癌症细胞系、结肠直肠癌细胞系、皮肤癌细胞系或卵巢癌细胞系。

在以下描述中说明了本发明这些和其它实施方案。

附图说明

图1描述了显示CK2活性抑制的测定数据。

图2A和2B显示了本发明所述化合物在静脉内给药ICR小鼠和口服给药ICR小鼠后随时间的平均血浆浓度。

图3A和3B分别显示了在给药本发明所述化合物的荷瘤异种移植物动物中随时间的肿瘤体积和随时间的体重。图3C和3D说明了所述化合物在各个动物中对肿瘤的作用。

图4A和4B分别显示了在给药本发明所述化合物的荷瘤异种移植物动物中随时间的肿瘤体积和随时间的体重。

具体实施方式

本发明提供的通式化合物(包括式IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物)可发挥生物活性，所述生物活性包括但不限于抑制细胞增殖。例如，所述通式化合物可调节CK2活性、Pim活性和/或Flt活性。因此，本领域技术人员可将所述化合物用于多种应用。例如，本发明所述化合物的用途可包括但不限于(i)调节蛋白激酶活性(例如CK2活性)，(ii)调节Pim活性(例如PIM-1活性)，(iii)调节Fms样酪氨酸激酶(Flt)活性(例如Flt-3活性)，(iv)调节细胞增殖，(v)调节凋亡，和(vi)治疗细胞增殖相关疾病、疼痛或炎症(例如单独给药或与其它分子共同给药)。

本发明使用的“任选取代”表明所述具体基团可不具有非氢取代基，或所述基团可具有一个或多个非氢取代基。除非另有说明，可存在的所述取代基的总数等于存在于所述基团未取代形式上的H原子数目。当任选的取代基通过双键连接(例如羰基氧(＝O))时，所述基团占据两个可用化合价，从而使可包括的取代基总数相对于可用化合价的数目是减少的。

本发明化合物通常具有可电离的基团，从而能制备成盐的形式。在这种情况下，无论在何种情况下提到所述化合物，在本领域中应当理解的是，也可使用可药用盐。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或在本发明化合物的酸性形式下，所述盐可由无机碱或有机碱来制备。通常，所述化合物以可药用盐的形式来制备或使用，所述可药用盐被制备成可药用酸或碱的加成物。合适的可药用酸和碱是本领域公知的，例如对于形成酸加成盐，所述酸为盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、枸橼酸或酒石酸，及对于形成碱加成盐，所述碱为氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡碱、各种胺等。制备合适盐的方法是本领域公知的。在一些情况下，所述化合物可既含有酸性官能团又含有碱性官能团，在这种情况下它们可具有两个离子化基团而没有净电荷。

在一些情况下，本发明化合物含有一个或多个手性中心。本发明包括每种单独的立体异构形式及各种手性纯度的立体异构体的混合物，包括外消旋混合物。本发明还涵盖可形成的各种非对映异构体和互变异构体。本发明化合物还可按不止一种互变异构形式存在；本发明对一种互变异构体的描述仅出于方便目的，且应当理解为涵盖所示形式的其它互变异构体。

本发明使用的术语“烷基”、“烯基”和“炔基”包括直链、支链和环状单价烃基和它们的组合，当它们未经取代时，它们仅含有C和H。实例包括甲基、乙基、异丁基、环己基、环戊基乙基、2-丙烯基、3-丁炔基等。上述每种基团中的碳原子总数有时如本发明所述，例如当所述基团可含有最多十个碳原子时，其可被表示为1-10C或C1-C10或C1-10。当容许杂原子(通常为N、O和S)代替碳原子时(例如在杂烷基中)，描述所述基团的数字(尽管仍写作例如C1-C6)表示所述基团中的碳原子数加上所述杂原子数的和，所述杂原子作为碳原子的代替物而被包括在环骨架或链骨架中。

通常，本发明中的烷基、烯基和炔基取代基包括1-10C(烷基)或2-10C(烯基或炔基)。优选地，它们包括1-8C(烷基)或2-8C(烯基或炔基)。它们有时包括1-4C(烷基)或2-4C(烯基或炔基)。单一基团可包含不止一种类型的重键或包含不止一个重键；当所述基团含有至少一个碳-碳双键时，它们包括在术语“烯基”的定义中，及当所述基团含有至少一个碳-碳叁键时，它们包括在术语“炔基”的定义中。

烷基、烯基和炔基通常任选被取代，其程度是这样的取代在化学上是合理的。通常的取代基包括但不限于卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR、＝NR、OR、NR₂、SR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、C≡CR、COOR、CONR₂、OOCR、COR和NO₂，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基，及每个R任选取代有卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’CSNR’₂、NR’C(＝NR’)NR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、C≡CR’、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，其中每个R’独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基。烷基、烯基和炔基也可被C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基取代，所述C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基各自可被适于具体基团的取代基取代。

“炔属”取代基为任选取代的2-10C炔基，且具有式-C≡C-R^a，其中R^a为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，及每个Ra基团任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’CSNR’2、NR’C(＝NR’)NR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，其中每个R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团中的每个任选取代有一个或多个选自如下的基团：卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；且其中两个R’可连接形成3-7元环，所述3-7元环任选含有最多三个选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，-C≡C-R^a中的R^a为H或Me。

“杂烷基”、“杂烯基”和“杂炔基”等的定义类似于相应的烃基(烷基、烯基和炔基)，但术语’杂’是指基团在骨架残基中含有1-3个O、S或N杂原子或它们的组合；因此，相应的烷基、烯基或炔基中的至少一个碳原子被上述杂原子之一代替以形成杂烷基、杂烯基或杂炔基。烷基杂化形式(heteroform)、烯基杂化形式和炔基杂化形式的常见和优选大小通常与相应的烃基相同，且可存在于所述杂化形式上的取代基与如上就烃基所述的那些取代基相同。也应当理解的是，除非另有说明，出于化学稳定性原因，上述基团不含有多于两个的相邻杂原子，但排除以下情况：在N或S上存在氧代基团(例如在硝基或磺酰基中)。

尽管本发明使用的“烷基”包括环烷基和环烷基烷基，但术语“环烷基”可在本发明中用于描述通过环碳原子连接的非芳族碳环基团，及“环烷基烷基”可用于描述通过烷基连接基与分子连接的非芳族碳环基团。类似地，“杂环基”可用于描述含有至少一个杂原子作为环成员并通过环原子(其可以是C或N)与分子连接的非芳族环状基团；及“杂环基烷基”可用于描述通过连接基与另一分子连接的上述基团。适于环烷基、环烷基烷基、杂环基和杂环基烷基的大小和取代基与如上就烷基所述的那些大小和取代基相同。本发明使用的这些术语还包括含有一个或两个双键的环，只要所述环不是芳族的。

本发明使用的“酰基”涵盖以下基团，所述基团含有在羰基碳原子的两个可用化合价位置之一连接的烷基、烯基、炔基、芳基或芳基烷基，及杂酰基是指以下相应的基团，其中至少一个非羰基碳的碳被选自N、O和S的杂原子代替。因此，杂酰基包括例如-C(＝O)OR和-C(＝O)NR₂及-C(＝O)-杂芳基。

酰基和杂酰基与任意基团或分子连接，所述酰基和杂酰基通过羰基碳原子的开放化合价(open valence)与所述基团或分子连接。通常，酰基和杂酰基为C1-C8酰基和C2-C8杂酰基，所述C1-C8酰基包括甲酰基、乙酰基、特戊酰基和苯甲酰基，及所述C2-C8杂酰基包括甲氧基乙酰基、乙氧基羰基和吡啶-4-甲酰基。包含酰基或杂酰基的烃基、芳基和烃基或芳基的杂化形式可取代有本发明所述取代基，例如通常适于酰基或杂酰基中各相应组分的取代基。

“芳族”部分或“芳基”部分是指具有公知芳香性特征的单环或稠合二环部分；实例包括苯基和萘基。类似地，“杂芳族”和“杂芳基”是指这样的单环或稠合二环环系，所述单环或稠合二环环系含有一个或多个选自O、S和N的杂原子作为环成员。杂原子的包括容许5元环及6元环中的芳香性。常见的杂芳族系统包括单环C5-C6芳族基团和通过使这些单环基团之一与苯基环或与任意杂芳族单环基团稠合以形成C8-C10二环基团而形成的稠合二环部分，所述单环C5-C6芳族基团为例如吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、噁唑基和咪唑基，及所述稠合二环部分为例如吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吡唑并吡啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基等。就整个环系中的电子分布而言具有芳香性特征的任意单环或稠合二环环系包括在该定义中。其还包括二环基团，其中与分子的其余部分直接连接的至少一个环具有芳香性特征。通常，所述环系含有5-12个环成员原子。优选地，单环芳基含有6个环成员，单环杂芳基含有5-6个环成员，及二环芳基和二环杂芳基含有8-10个环成员。

芳基和杂芳基部分可取代有各种取代基，包括C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-C12芳基、C1-C8酰基和这些基团的杂化形式，它们各自本身可被进一步取代；针对芳基和杂芳基部分的其它取代基包括卤素、OR、NR₂、SR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、C≡CR、COOR、CONR₂、OOCR、COR和NO₂，其中每个R独立为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，及每个R如以上就烷基所述那样被任选取代。芳基或杂芳基上的取代基当然可进一步取代有本发明所述适于每种类型所述取代基或适于所述取代基中各组件的基团。因此，例如芳基烷基取代基可在芳基部分上取代有本发明所述适于芳基的取代基，及其可在烷基部分上进一步取代有本发明所述适于烷基的取代基。

类似地，“芳基烷基”和“杂芳基烷基”是指芳族和杂芳族环系，所述芳族和杂芳族环系通过连接基例如亚烷基(包括取代或未取代的、饱和或不饱和的、环状或非环状的连接基)与它们的连接点连接。通常，所述连接基为C1-C8烷基或其杂化形式。这些连接基也可包括羰基，从而使它们能够提供如酰基或杂酰基部分那样的取代基。芳基烷基或杂芳基烷基中的芳基环或杂芳基环可取代有与如上就芳基所述相同的取代基。优选地，芳基烷基包含任选取代有如上就芳基所定义的基团的苯基环和未经取代或取代有一个或两个C1-C4烷基或杂烷基的C1-C4亚烷基，其中所述烷基或杂烷基可任选环合形成诸如环丙烷、二氧杂环戊烷或氧杂环戊烷那样的环。类似地，杂芳基烷基优选包含任选取代有如上就芳基上的常见取代基所述的基团的C5-C6单环杂芳基和未经取代或取代有一个或两个C1-C4烷基或杂烷基的C1-C4亚烷基，或杂芳基烷基包含任选取代的苯基环或C5-C6单环杂芳基和未经取代或取代有一个或两个C1-C4烷基或杂烷基的C1-C4亚杂烷基，其中所述烷基或杂烷基可任选环合形成诸如环丙烷、二氧杂环戊烷或氧杂环戊烷那样的环。

当将芳基烷基或杂芳基烷基描述为被任选取代时，取代基可在所述基团的烷基或杂烷基部分上或在所述基团的芳基或杂芳基部分上。任选存在于所述烷基或杂烷基部分上的取代基与如上就烷基所述的那些常见取代基相同；任选存在于所述芳基或杂芳基部分上的取代基与如上就芳基所述的那些常见取代基相同。

如果本发明使用的“芳基烷基”未经取代，则它们为烃基，且通过环和亚烷基或类似连接基中的碳原子总数来描述。因此，苄基为C7-芳基烷基，及苯基乙基为C8-芳基烷基。

上述“杂芳基烷基”是指包含通过连接基连接的芳基的部分，其与“芳基烷基”的区别在于芳基部分中的至少一个环原子或连接基中的一个原子为选自N、O和S的杂原子。本发明根据环和所结合的连接基中的原子总数来描述杂芳基烷基，且杂芳基烷基包括通过杂烷基连接基连接的芳基、通过烃基连接基例如亚烷基连接的杂芳基和通过杂烷基连接基连接的杂芳基。例如，例如C7-杂芳基烷基可包括吡啶基甲基、苯氧基和N-吡咯基甲氧基。

本发明使用的“亚烷基”是指二价烃基；因为其是二价的，所以其可将两个其它基团连接在一起。通常，亚烷基是指-(CH₂)_n-，其中n为1-8，及n优选为1-4，但在特定情况下，亚烷基也可被其它基团取代且可具有其它长度，且开放化合价无需在链的相对端。因此，-CH(Me)-和-C(Me)₂-也可称作亚烷基，环状基团例如环丙烷-1，1-二基也可称作亚烷基。当亚烷基被取代时，取代基包括本发明所述存在于烷基上的那些常见取代基。

通常，包含在取代基中的任意烷基、烯基、炔基、酰基、芳基、芳基烷基或这些基团之一的任意杂化形式本身可任选被其它取代基取代。如果没有另外描述这些取代基，则这些取代基的性质与就初级取代基本身所述的那些性质类似。因此，当例如R⁷的实施方案为烷基时，该烷基可任选被列作R⁷实施方案的其余取代基取代，其中这种取代在化学上是合理的，且其中这种取代没有超出就烷基本身所提供的大小限制；例如，被烷基或被烯基取代的烷基当然可扩大针对这些实施方案的碳原子上限，且不包括在本发明中。然而，被芳基、氨基、烷氧基、＝O等取代的烷基可包括在本发明范围内，且这些取代基中的原子不被算在用于描述所述烷基、烯基等基团的数字中。当没有指明取代基的数目时，上述烷基、烯基、炔基、酰基或芳基各自可根据其可用化合价而取代有多个取代基；具体地，例如这些基团中的任意一种可在其任意可用化合价或所有可用化合价处取代有氟原子。

本发明使用的“杂化形式”是指基团例如烷基、芳基或酰基的衍生物，其中所指碳环基团中的至少一个碳原子被选自N、O和S的杂原子代替。因此，烷基、烯基、炔基、酰基、芳基和芳基烷基的杂化形式分别为杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂酰基、杂芳基和杂芳基烷基。应当理解的是，通常连续连接不多于两个N、O或S原子，但排除以下情况：氧代基团与N或S连接形成硝基或磺酰基。

本发明使用的“卤素”包括氟、氯、溴和碘。通常优选的是氟和氯。

本发明使用的“氨基”是指NH₂，但当氨基被描述为“取代的”或“任选取代的”时，所述术语包括NR’R”，其中R’和R”各自独立为H、烷基、烯基、炔基、酰基、芳基、芳基烷基或这些基团之一的杂化形式，且烷基、烯基、炔基、酰基、芳基、芳基烷基或这些基团之一的杂环形式各自任选取代有本发明所述适于相应基团的取代基。所述术语还包括如下形式，其中R’和R”连接在一起形成3-8元环，所述3-8元环可以是饱和、不饱和或芳族的，且所述3-8元环含有1-3个独立选自N、O和S的杂原子作为环成员，且所述3-8元环任选取代有所述适于烷基的取代基，或如果NR’R”为芳族基团，则其任选取代有所述适于杂芳基的取代基。

本发明使用的术语“碳环”是指在环中仅含有碳原子的环状化合物，而“杂环”是指含有杂原子的环状化合物。碳环结构和杂环结构涵盖具有单环系统、二环系统或多环系统的化合物。碳环和杂环可以是饱和、部分不饱和或芳族的。

本发明使用的术语“杂原子”是指不是碳或氢的任意原子，例如氮、氧或硫。

杂环的示例性实例包括但不限于四氢呋喃、1，3-二氧杂环戊烷、2，3-二氢呋喃、吡喃、四氢吡喃、苯并呋喃、异苯并呋喃、1，3-二氢-异苯并呋喃、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、哌啶、吡咯烷、吡咯烷-2-酮、吡咯、吡啶、嘧啶、八氢-吡咯并[3，4-b]吡啶、哌嗪、吡嗪、吗啉、硫吗啉、咪唑、咪唑烷-2，4-二酮、1，3-二氢苯并咪唑-2-酮、吲哚、噻唑、苯并噻唑、噻二唑、噻吩、四氢噻吩-1，1-二氧化物、二氮杂

三唑、胍、二氮杂二环[2.2.1]庚烷、2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷、2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-β-咔啉、环氧乙烷、环氧丙烷、四氢吡喃、二噁烷、内酯、氮丙啶、氮杂环丁烷、哌啶和内酰胺，及杂环的示例性实例还可涵盖杂芳基。杂芳基的其它示例性实例包括但不限于呋喃、吡咯、吡啶、嘧啶、咪唑、苯并咪唑和三唑。

本发明使用的术语“无机取代基”是指不含有碳或含有与非氢元素连接的碳(例如元素碳、一氧化碳、二氧化碳和碳酸盐)的取代基。无机取代基的实例包括但不限于硝基、卤素、叠氮基、氰基、磺酰基、亚磺酰基、磺酸酯/盐基、磷酸酯/盐基等。

本发明使用的术语“治疗”是指改善、缓解、减轻和祛除疾病或病症的症状。本发明所述候选分子或化合物可按治疗有效量存在于制剂或药物中，所述治疗有效量为例如可引起生物作用(例如一些细胞(例如癌细胞)的凋亡、一些细胞的增殖减少)或使疾病或病症的症状得以改善、缓解、减轻或祛除的量。所述术语也可指使细胞增殖速率降低或停止(例如减慢或阻止肿瘤生长)或使增殖癌细胞的数目减少(例如祛除部分或全部肿瘤)。这些术语也可适用于降低感染有微生物的系统(即细胞、组织或受试者)中的微生物效价、降低微生物的繁殖速率、降低与微生物感染相关的症状数目或症状作用和/或从系统中除去可检测量的微生物。微生物的实例包括但不限于病毒、细菌和真菌。因此，本发明提供治疗原生动物病例如原生动物寄生虫病(包括引起神经障碍的寄生性原生动物所致的感染)的方法，所述神经障碍为例如精神分裂症、妄想症和免疫受损患者中的脑炎及查加斯病(Chagas’disease)。本发明还提供治疗各种病毒疾病的方法，所述病毒包括1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)、人乳头状瘤病毒(HPVs)、单纯性疱疹病毒(HSV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus，EBV)、人巨细胞病毒、丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒、流感病毒、博纳病病毒(Borna disease virus)、腺病毒、柯萨奇病毒(coxsackievirus)、冠形病毒(coronavirus)和水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus)。治疗这些疾病的方法包括向有此需要的受试者给药有效量的具有式A的CK2抑制剂。

本发明就癌症或细胞增殖性疾病所使用的“治疗”也覆盖在人中治疗病症(所述病症的特征为异常、过度和/或不期望的细胞增殖)，并包括如下至少一种：(i)预防所述病症在人中发生，特别是当所述人易患所述病症但尚未确诊患有所述病症时；(ii)抑制所述病症，即阻止其发展；(iii)抑制所述病症扩散至新的部位，例如减慢或预防肿瘤的转移；和(iv)缓解所述病症，即令所述病症消退。

就炎性病症而言的“治疗”包括在预期发生炎症的受试者中预防炎症或在具有炎症症状例如发红、肿胀、与这些症状相关的疼痛或高温的受试者中降低一种或多种炎症症状的程度或持续时间。

本发明使用的术语“凋亡”是指内源性的细胞自毁灭或自杀程序。在对引发刺激物的应答中，细胞经历事件级联，包括细胞皱缩、细胞膜起泡和染色体缩合和断裂。这些事件在细胞向膜结合粒子簇(凋亡体)的转化中达到极点，然后所述膜结合粒子簇(凋亡体)被巨噬细胞吞噬。

本发明部分提供药物组合物，其包含本发明所述在本发明范围内的至少一种化合物，且部分提供使用本发明所述化合物的方法。例如，本发明部分提供确定与CK2、Pim或Flt蛋白相互作用的候选分子的方法，所述方法包括使含有CK2、Pim或Flt蛋白和本发明所述分子的组合物与候选分子接触，并确定与所述蛋白质相互作用的本发明所述分子的量是否受到调节，由此将对与所述蛋白质相互作用的本发明所述分子的量进行调节的候选分子确定为与所述蛋白质相互作用的候选分子。

本发明还提供调节蛋白激酶活性的方法。蛋白激酶催化γ磷酸由三磷酸腺苷转移到肽底物或蛋白质底物中的丝氨酸或苏氨酸(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)、转移到酪氨酸(酪氨酸蛋白激酶)、转移到酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸(双重特异性蛋白激酶)或转移到组氨酸(组氨酸蛋白激酶)。因此，本发明包括以下方法，所述方法包括使含有蛋白激酶蛋白质的系统与有效调节(例如抑制)所述蛋白激酶活性量的本发明所述化合物接触。在一些实施方案中，蛋白激酶的活性为所述蛋白质的催化活性(例如催化γ磷酸由三磷酸腺苷转移到肽底物或蛋白质底物)。在一些实施方案中，本发明提供确定与蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，所述方法包括使含有蛋白激酶和本发明所述化合物的组合物与候选分子在所述化合物与所述蛋白激酶相互作用的条件下接触，并相对于在没有候选分子的情况下所述化合物和所述蛋白激酶之间的对照相互作用而确定与所述蛋白激酶相互作用的所述化合物的量是否被调节，由此相对于对照相互作用而对与所述蛋白激酶相互作用的所述化合物的量进行调节的候选分子被确定为与所述蛋白激酶相互作用的候选分子。上述实施方案中的系统为不含细胞的系统或含有细胞的系统(例如体外)。在一些实施方案中，使所述蛋白激酶、所述化合物或所述分子与固相结合。在一些实施方案中，所述化合物和所述蛋白激酶之间的相互作用通过可检测的标签来检测，其中在一些实施方案中，所述蛋白激酶包含可检测的标签，及在一些实施方案中，所述化合物包含可检测的标签。有时在没有可检测的标签的情况下检测所述化合物和所述蛋白激酶之间的相互作用。

本发明还提供含有蛋白激酶和本发明所述化合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物中的化合物不是化合物A2、化合物A1或化合物A3。在一些实施方案中，所述组合物中的蛋白激酶为丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶或酪氨酸蛋白激酶。在一些实施方案中，所述蛋白激酶为具有化合物结合活性的蛋白激酶片段。在一些实施方案中，所述组合物中的蛋白激酶为CK2、Pim亚家族蛋白激酶(例如PIM1、PIM2、PIM3)或Flt亚家族蛋白激酶(例如FLT1、FLT3、FLT4)的亚单元(例如催化性亚单元、SH2结构域、SH3结构域)或含有所述亚单元。在一些实施方案中，所述组合物是不含细胞的，且有时所述蛋白激酶为重组蛋白质。

所述蛋白激酶可来自任意来源(例如来自哺乳动物、猿或人的细胞)。可被本发明所述化合物抑制或可潜在被本发明所述化合物抑制的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的实例包括但不限于人版本的CK2、CK2α2、Pim亚家族激酶(例如PIM1、PIM2、PIM3)、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、HIPK3、HIPK2和ZIPK。丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶有时为如下亚家族的成员，所述亚家族在与人CK2中所列相应的位置含有一种或多种以下氨基酸：在45位的亮氨酸、在163位的甲硫氨酸和在174位的异亮氨酸。上述蛋白激酶的实例包括但不限于人版本的CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1。可被本发明所述化合物抑制或可潜在被本发明所述化合物抑制的酪氨酸蛋白激酶的实例包括但不限于人版本的Flt亚家族成员(例如FLT1、FLT2、FLT3、FLT3(D835Y)、FLT4)。可被本发明所述化合物抑制或可潜在被本发明所述化合物抑制的双重特异性蛋白激酶的实例包括但不限于DYRK2。针对蛋白激酶的核苷酸序列和氨基酸序列及试剂是公众可得的(例如World Wide Web URLs ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez/and Invitrogen.com)。例如，可使用以下登录号来得到各种核苷酸序列：针对PIM1的NM_002648.2和NP_002639.1；针对PIM2的NM_006875.2和NP_006866.2；针对PIM3的XM_938171.2和XP_943264.2；针对FLT3的NM_004119.2和NP_004110.2；针对FLT4的NM_002020.3和NP_002011.2；及针对FLT1的NM_002019.3和NP_002010.2。

本发明还部分提供治疗与异常细胞增殖相关的病症的方法。例如，本发明提供在受试者中治疗细胞增殖性病症的方法，所述方法包括以有效治疗所述细胞增殖性病症的量向有此需要的受试者给药本发明所述化合物。所述受试者可以是任选含有肿瘤例如异种移植物肿瘤(例如人肿瘤)的研究用动物(例如啮齿动物、狗、猫、猴)，或可以是人。细胞增殖性病症有时为肿瘤或非肿瘤性癌症，包括但不限于结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、淋巴结癌、结肠癌、前列腺癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、肾癌、血液癌症和心脏癌症(例如白血病、淋巴瘤、癌瘤)。在一些实施方案中，所述细胞增殖性病症为非肿瘤性癌症。在一些这样的实施方案中，所述非肿瘤性癌症为造血系统癌症。在具体的实施方案中，其为急性骨髓性白血病。在一些这样的实施方案中，所述白血病为顽固性AML或其中AML与突变的Flt3相关。

本发明还提供治疗与炎症或疼痛相关的病症的方法。例如，本发明提供在受试者中治疗疼痛的方法，所述方法包括以有效治疗疼痛的量向有此需要的受试者给药本发明所述化合物。本发明还提供在受试者中治疗炎症的方法，所述方法包括以有效治疗炎症的量向有此需要的受试者给药本发明所述化合物。例如，所述受试者可以是研究用动物(例如啮齿动物、狗、猫、猴)，或可以是人。

与炎症和疼痛相关的病症包括但不限于返酸(acid reflux)、胃灼热(heartburn)、痤疮、过敏症和敏感症(sensitivity)、阿尔茨海默病、哮喘、动脉粥样硬化、支气管炎、心炎、乳糜泻(celiac disease)、慢性疼痛、克罗恩病(Crohn’s disease)、肝硬化(cirrhosis)、结肠炎(colitis)、痴呆、皮炎、糖尿病、干眼症(dry eye)、水肿(edema)、肺气肿(emphysema)、湿疹(eczema)、纤维肌痛、肠胃炎(gastroenteritis)、牙龈炎(gingivitis)、心脏病(heart disease)、肝炎(hepatitis)、高血压(high blood pressure)、胰岛素抵抗(insulin resistance)、间质性膀胱炎(interstitial cystitis)、关节痛(joint pain)/关节炎(arthritis)/类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、代谢综合征(metabolic syndrome)(综合征X)、肌炎(myositis)、肾炎(nephritis)、肥胖症(obesity)、骨质减少(osteopenia)、肾小球肾炎(glomerulonephritis)(GN)、幼发性囊肾病(juvenile cystic kidney disease)和I型肾囊性病(type Inephronophthisis)(NPHP)、骨质疏松(osteoporosis)、帕金森病(Parkinson’s disease)、关岛-帕金森痴呆(Guam-Parkinson dementia)、核上性麻痹(supranuclear palsy)、库夫病(Kuf’s disease)和匹克病(Pick’s disease)及记忆缺陷、脑缺血(brain ischemia)和精神分裂症、牙周病(periodontal disease)、多动脉炎(polyarteritis)、多软骨炎(polychondritis)、牛皮癣(psoriasis)、硬皮病(scleroderma)、鼻窦炎(sinusitis)、舍格伦综合征(

syndrome)、痉挛性结肠(spastic colon)、系统性念珠菌病(systemic candidiasis)、腱炎(tendonitis)、尿路感染(urinary track infection)、阴道炎(vaginitis)、炎性癌症(例如炎性乳腺癌)等。

确定本发明化合物对疼痛或炎症的作用的方法是已知的。例如，可在给药本发明所述化合物后监测研究用动物中由福尔马林刺激的疼痛行为以评价对疼痛的治疗(例如Li et al.，Pain 115(1-2)：182-90(2005))。例如，还可在给药本发明所述化合物后监测对促炎分子(例如IL-8、GRO-α、MCP-1、TNFα和iNOS)的调节以评价对炎症的治疗(例如Parhar et al.，Int J Colorectal Dis.22(6)：601-9(2006))。因此，本发明还提供确定本发明化合物是否减少炎症或疼痛的方法，所述方法包括使系统与有效调节(例如抑制)疼痛信号或炎症信号活性量的本发明所述化合物接触。

本发明还提供确定减少炎症或疼痛的化合物的方法，所述方法包括使系统与具有本发明所述通式之一的化合物(包括式IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物)接触，并检测疼痛信号或炎症信号，由此将相对于对照分子而对疼痛信号进行调节的化合物确定为减少疼痛炎症的化合物。疼痛信号的非限制性实例为由福尔马林刺激的疼痛行为，及炎症信号的实例包括但不限于促炎分子的水平。

因此，本发明部分涉及在受试者中调节血管发生的方法，及在受试者中治疗与异常血管发生相关的病症例如增殖性糖尿病性视网膜病(proliferative diabetic retinopathy)的方法。

CK2已被证明在动脉粥样硬化的病理中发挥作用，且可通过保持层剪切应力流(laminar shear stress flow)来预防动脉粥样硬化形成。CK2在血管形成中发挥作用，并已被证明介导由缺氧诱导的组蛋白脱乙酰酶(HDACs)活化。CK2还参与与骨骼肌和骨组织相关的疾病，包括例如心肌肥大(cardiomyocyte hypertrophy)、心力衰竭(heart failure)、胰岛素信号传导受损(impaired insulin signaling)和胰岛素抵抗、低磷酸盐血症(hypophosphatemia)和骨基质矿化不足(inadequate bone matrix mineralization)。

因此，在一个方面，本发明提供治疗这些病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效量的CK2抑制剂例如式A化合物。

因此，本发明提供确定本发明化合物是否调节血管发生的方法，所述方法包括使系统与有效调节(例如抑制)血管发生量或有效调节(例如抑制)血管发生相关信号量的本发明所述化合物接触。与血管发生相关的信号为促血管发生生长因子例如VEGF的水平。评价对血管发生的调节的方法也是已知的，例如对人内皮血管(endothelial tube)的形成进行分析(来自BD Biosciences的BD BioCoat^TM血-管发生系统)。本发明还提供确定调节血管发生的化合物的方法，所述方法包括使系统与具有本发明所述通式之一的化合物(包括式IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物)接触；并检测所述系统中的血管发生或血管发生信号，由此将相对于对照分子而对血管发生或血管发生信号进行调节的化合物确定为调节血管发生的化合物。本发明还提供治疗血管发生病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗血管发生病症量的本发明所述化合物。血管发生病症包括但不限于实体肿瘤癌症、曲张性疾病等。

本发明还部分涉及在受试者中调节免疫应答的方法及在受试者中治疗与异常免疫应答相关的病症的方法。因此，本发明提供确定本发明化合物是否调节免疫应答的方法，所述方法包括使系统与有效调节(例如抑制)免疫应答量或有效调节(例如抑制)免疫应答相关信号量的本发明所述化合物接触。与免疫调节活性相关的信号包括例如对T-细胞增殖的刺激，对细胞因子(包括例如白细胞介素、干扰素-γ和TNF)的抑制或诱导。评价免疫调节活性的方法是本领域已知的。本发明还提供确定调节免疫应答的化合物的方法，所述方法包括使系统与具有本发明所述通式之一的化合物(包括式IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物)或其可药用盐接触；并检测系统中的免疫调节活性或与免疫调节活性相关的信号，由此将相对于对照分子而对免疫应答进行调节的化合物确定为免疫应答调节化合物。

本发明还提供在受试者中治疗与异常免疫应答相关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗所述病症量的本发明所述化合物。以异常免疫应答为特征的病症包括但不限于器官移植排斥(organ transplant rejection)、哮喘、自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、多发性硬化(multiple sclerosis)、重症肌无力(myasthenia gravis)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus)、硬皮病、多肌炎(polymyositis)、混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease)(MCTD)、克罗恩病(Crohn’s disease)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)。在一些实施方案中，可通过将本发明化合物与调节(例如抑制)mTOR途径成员或相关途径(例如mTOR、PI3激酶、AKT)成员生物活性的分子组合给药来调节免疫应答。在一些实施方案中，调节mTOR途径成员或相关途径成员生物活性的分子为雷帕霉素。在一些实施方案中，本发明提供组合物，其包含本发明所述化合物及调节mTOR途径成员或相关途径成员生物活性的分子(例如雷帕霉素)。

在本发明优选的实施方案中，所述化合物为本发明所述表格之一中的式IA、IB、IC、L、L-A或L-B化合物或这些化合物之一的可药用盐。

可制备上述化合物的任意合适制剂用于给药。可使用任意合适的给药途径，包括但不限于口服给药途径、胃肠外给药途径、静脉内给药途径、肌内给药途径、经皮给药途径、局部给药途径和皮下给药途径。基于待治疗的受试者、给药模式和所需要的治疗类型(例如防止、预防、治疗)，所述化合物以与这些参数匹配的方式来配制。适于每种给药途径的制剂的制备是本领域已知的。上述制剂方法和技术的总结参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，latest edition，Mack Publishing Co.，Easton，PA，将其并入本发明作为参考。每种物质的制剂或两种物质组合的制剂通常可包含稀释剂及一些情况下的辅料、缓冲剂、防腐剂等。待给药的物质也可按脂质体组合物或微乳剂来给药。

可将制剂制备成常规形式用于注射，例如液体溶液剂或混悬剂或适于在注射前溶解或混悬在液体中的固体形式或乳剂。合适的赋形剂包括例如水、盐水、葡萄糖、甘油等。上述组合物还可含有一定量的无毒辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如乙酸钠、失水山梨醇单月桂酸酯等。

还已经设计出各种用于药物的持续释放系统且可应用于本发明化合物。参见例如美国专利5,624,677，将其方法并入本发明作为参考。

系统给药也可包括相对非侵入性方法，例如使用栓剂、经皮贴剂、经粘膜递送和鼻内给药。口服给药也适于本发明化合物。如本领域所理解的那样，合适的形式包括糖浆剂、胶囊剂和片剂。

为了给药动物或人受试者，上述化合物的合适剂量通常为0.01-15mg/kg，且有时为0.1-10mg/kg。剂量水平取决于病症的性质、药物的功效、患者的状态、执业人员的判断及给药的频率和模式；然而，对这些参数的优化在本领域技术人员的普通能力中。

治疗组合

本发明化合物可单独使用或与另一种治疗剂组合使用。本发明提供治疗诸如癌症、炎症和免疫疾病那样的病症的方法，所述方法包括向需要上述治疗的受试者给药治疗有效量的可用于治疗所述疾病的治疗剂和向相同受试者给药治疗有效量的本发明调节剂。CK2、Pim或Flt调节剂是抑制或提高CK2蛋白、Pim蛋白或Flt蛋白生物活性的物质，且在下文中统称作“调节剂”。所述治疗剂和所述调节剂可一起给药，其形式为分开的药物组合物或混合在单一的药物组合物中。所述治疗剂和所述调节剂也可分开给药，包括在不同时间和以不同频率来分开给药。所述调节剂可通过任意已知途径来给药，例如口服给药、静脉内给药、肌内给药、经鼻给药等；及所述治疗剂也可通过任意常规途径来给药。在多个实施方案中，可口服给药所述调节剂和所述治疗剂中的至少一种和任选两种。

当组合使用时，在一些实施方案中，本发明化合物可按含有本发明化合物和另一种治疗剂的单一药物剂型来给药。在其它实施方案中，给药分开的剂型；本发明化合物和其它治疗剂可在基本相同的时间给药，例如同时给药，或在分别错开的时间给药，例如顺序给药。在一些实施方案中，所述组合中的各个组分可在疗程中的不同时间分开给药，或以分开的组合形式或单一的组合形式同时给药。本发明提供例如同时治疗、错开治疗或交替治疗。因此，本发明化合物可按同一药物组合物在与另一种治疗剂相同的时间给药；本发明化合物可按分开的药物组合物给药；本发明化合物可在其它治疗剂前给药，或其它治疗剂可在本发明化合物前给药，例如其中时间差为数秒、数分钟、数小时、数天或数周。在错开治疗的实例中，可给药用本发明化合物进行的疗程，然后给药用其它治疗剂进行的疗程，或可使用相反的治疗顺序，针对每种组分可使用不止一个系列的治疗。在本发明一些实施例中，将一种组分例如本发明化合物或其它治疗剂给药哺乳动物，同时另一种组分或其衍生产物保留在所述哺乳动物的血流中。在其它实施例中，在第一种组分或其衍生物已经全部或大部分离开所述哺乳动物的血流后给药第二种组分。

本发明化合物当与以下物质组合使用时是有用的：烷化剂、血管发生抑制剂、抗体、抗代谢剂、抗有丝分裂剂、抗增殖剂、Aurora激酶抑制剂、Bcr-Abl激酶抑制剂、生物应答调节剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、细胞周期抑制剂、环加氧酶-2抑制剂、白血病病毒癌基因同系物(ErbB2)受体抑制剂、生长因子抑制剂、热休克蛋白(HSP)-90抑制剂、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、激素疗法、免疫剂、嵌入性抗生素、激酶抑制剂、雷帕霉素抑制剂的哺乳动物靶标、由促分裂原活化的经细胞外信号调节的激酶抑制剂、非甾体抗炎药(NSAID’s)、铂化疗药物、polo样激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、嘌呤类似物、嘧啶类似物、受体酪氨酸激酶抑制剂、类视黄醇/deltoid、植物碱、拓扑异构酶抑制剂等。

烷化剂包括六甲密胺(altretamine)、AMD-473、AP-5280、apaziquone、苯达莫司汀(bendamustine)、brostallicin、白消安(busulfan)、卡波醌(carboquone)、卡莫司汀(carmustine)(BCND)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、VNP40101M、环磷酰胺(cyclophosphamide)、氨烯咪胺(decarbazine)、阿雌莫司汀(estramustine)、福莫司汀(fotemustine)、葡磷酰胺(glufosfamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、KW-2170、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、马磷酰胺(mafosfamide)、美法仑(melphalan)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴卫矛醇(mitolactol)、尼莫司汀(nimustine)、氮芥N-氧化物(nitrogen mustard N-oxide)、雷莫司汀(ranimustine)、替莫唑胺(temozolomide)、塞替派(thiotepa)、曲奥舒凡(treosulfan)、曲磷胺(trofosfamide)等。

血管发生抑制剂包括内皮特异性受体酪氨酸激酶(endothelial-specific receptor tyrosine kinase)(Tie-2)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、胰岛素生长因子-2受体(IGFR-2)抑制剂、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抑制剂、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制剂、血小板源性生长因子受体(PDGFR)抑制剂、血小板反应蛋白类似物、血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶(VEGFR)抑制剂等。

Aurora激酶抑制剂包括AZD-1152、MLN-8054、VX-680等。

Bcr-Abl激酶抑制剂包括BMS-354825、伊马替尼(imatinib)等。

CDK抑制剂包括AZD-5438、BMI-1040、BMS-032、BMS-387、CVT-2584、flavopyridol、GPC-286199、MCS-5A、PD0332991、PHA-690509、seliciclib(CYC202、R-roscovitine)、ZK-304709等。

COX-2抑制剂包括ABT-963、艾托考昔(etoricoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、BMS347070、塞来考昔(celecoxib)、COX-189(lumiracoxib)、CT-3、地拉考昔(deracoxib)、JTE-522、4-甲基-2-(3，4-二甲基苯基)-1-(4-氨磺酰基苯基)-1H-吡咯、MK-663(艾托考昔)、NS-398、帕瑞考昔(parecoxib)、RS-57067、SC-58125、SD-8381、SVT-2016、S-2474、T-614、罗非考昔(rofecoxib)等。

EGFR抑制剂包括ABX-EGF、抗EGFr免疫脂质体(anti-EGFr immunoliposome)、EGF疫苗、EMD-7200、西妥昔单抗(cetuximab)、HR3、IgA抗体、gefitinib、erlotinib、TP-38、EGFR融合蛋白、lapatinib等。

ErbB2受体抑制剂包括CP-724-714、CI-1033(canertinib)、曲妥单抗(trastuzumab)、lapatinib、pertuzumab、TAK-165、GW-572016(ionafarnib)、GW-282974、EKB-569、PI-166、dHER2(HER2疫苗)、APC-8024(HER-2疫苗)、抗HER/2neu双重特异性抗体、B7.her2IgG3、AS HER2三重功能双重特异性抗体、mAB AR-209、mAB 2B-1等。

组蛋白脱乙酰酶抑制剂包括缩酚酸肽(depsipeptide)、LAQ-824、MS-275、trapoxin、辛二酰基苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid)(SAHA)、TSA、丙戊酸等。

HSP-90抑制剂包括17-AAG-nab、17-AAG、CNF-101、CNF-1010、CNF-2024、17-DMAG、格尔德霉素(geldanamycin)、IPI-504、KOS-953、

NCS-683664、PU24FCI、PU-3、根赤壳菌素(radicicol)、SNX-2112、STA-9090、VER49009等。

MEK抑制剂包括ARRY-142886、ARRY-438162、PD-325901、PD-98059等。

mTOR抑制剂包括AP-23573、CC1-779、依维莫司(everolimus)、RAD-001、雷帕霉素、temsirolimus等。

非甾体抗炎药物包括双水杨酯(salsalate)、二氟尼柳(diflunisal)、布洛芬(ibuprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、萘丁美酮(nabumetone)、吡罗昔康(piroxicam)、异丁普生乳膏(ibuprofin cream)、萘普生(naproxen)、双氯芬酸(diclofenac)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、依托度酸(etodolac)、酮咯酸(ketorolac)、奥沙普秦(oxaprozin)等。

PDGFR抑制剂包括C-451、CP-673、CP-868596等。

铂化疗药物包括顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、依他铂(eptaplatin)、洛铂(lobaplatin)、奈达铂(nedaplatin)、卡铂(carboplatin)、沙铂(satraplatin)等。

polo样激酶抑制剂包括B1-2536等。

血小板反应蛋白类似物包括ABT-510、ABT-567、ABT-898、TSP-1等。

VEGFR抑制剂包括贝伐单抗(bevacizumab)、ABT-869、AEE-788、RPI.4610、axitinib(AG-13736)、AZD-2171、CP-547,632、1M-862、pegaptanib、sorafenib、pazopanib、PTK-787/ZK-222584、sunitinib、VEGF trap、vatalanib、vandetanib等。

抗代谢剂包括培美曲塞(pemetrexed)、5-氮杂胞苷、卡培他滨(capecitabine)、carmofur、克拉屈滨(cladribine)、clofarabine、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)、地西他滨(decitabine)、去铁胺(deferoxamine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、eflornithine、EICAR、依诺他滨(enocitabine)、ethnylcytidine、氟达拉滨(fludarabine)、羟脲(hydroxyurea)、5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)(单独或与亚叶酸(leucovorin)组合)、吉西他滨(gemcitabine)、羟脲、美法仑(melphalan)、巯嘌呤(mercaptopurine)、6-巯嘌呤肌苷(6-mercaptopurine riboside)、甲氨蝶呤(methotrexate)、麦考酚酸(mycophenolic acid)、奈拉滨(nelarabine)、诺拉曲塞(nolatrexed)、ocfosate、pelitrexol、喷司他丁(pentostatin)、雷替曲塞(raltitrexed)、利巴韦林(Ribavirin)、triapine、三甲曲沙(trimetrexate)、S-1、噻唑呋林(tiazofurin)、替加氟(tegafur)、TS-l、阿糖腺苷(vidarabine)、UFT等。

抗生素包括嵌入性抗生素阿柔比星(aclarubicin)、放线菌素D(actinomycin D)、氨柔比星(amrubicin)、annamycin、阿霉素(adriamycin)、博来霉素(bleomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、多柔比星脂质体(liposomal doxorubicin)、依沙芦星(elsamitrucin)、epirbucin、glarbuicin、伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素C(mitomycin C)、奈莫柔比星(nemorubicin)、新制癌菌素(neocarzinostatin)、培洛霉素(peplomycin)、吡柔比星(pirarubicin)、rebeccamycin、stimalamer、链佐星(streptozocin)、戊柔比星(valrubicin)、净司他丁(zinostatin)等。

拓扑异构酶抑制剂包括阿柔比星(aclarubicin)、9-氨基喜树碱(9-amino camptothecin)、氨萘非特(amonafide)、安吖啶(amsacrine)、becatecarin、belotecan、BN-80915、伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecin)、右旋丙亚胺(dexrazoxine)、diflomotecan、edotecarin、表柔比星(epirubicin)、依托泊苷(etoposide)、依沙替康(exatecan)、10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin)、gimatecan、勒托替康(lurtotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone)、orathecin、pirarbucin、pixantrone、卢比替康(rubitecan)、索布佐生(sobuzoxane)、SN-38、tafluposide、托泊替康(topotecan)等。

抗体包括贝伐单抗(bevacizumab)、CD40特异性抗体、chTNT-l/B、denosumab、西妥昔单抗(cetuximab)、zanolimumab、IGF1R特异性抗体、林妥珠单抗(lintuzumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、WX-G250、利妥昔单抗(rituximab)、ticilimumab、曲妥单抗(trastuzimab)等。

激素疗法包括阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)、阿佐昔芬(arzoxifene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、西曲瑞克(cetrorelix)、degarelix、地洛瑞林(deslorelin)、曲洛司坦(trilostane)、地塞米松(dexamethasone)、氟他胺(flutamide)、雷洛昔芬(raloxifene)、法倔唑(fadrozole)、托瑞米芬(toremifene)、氟维司群(fulvestrant)、来曲唑(letrozole)、福美坦(formestane)、糖皮质激素(glucocorticoid)、度骨化醇(doxercalciferol)、拉索昔芬(lasofoxifene)、乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、甲地孕酮(megesterol)、米非司酮(mifepristone)、尼鲁米特(nilutamide)、枸橼酸他莫昔芬(tamoxifen citrate)、阿巴瑞克(abarelix)、泼尼松(predisone)、非那雄胺(finasteride)、rilostane、布舍瑞林(buserelin)、曲普瑞林(triptorelin)、促性腺激素释放激素(luteinizing hormonereleasing hormone)(LHRH)、vantas、曲洛司坦(trilostane)、fosrelin(戈舍瑞林(goserelin))等。

deltoid和类视黄醇包括西奥骨化醇(seocalcitol)(EB1089、CB1093)、来沙骨化醇(lexacalcitrol)(KH1060)、芬维A胺(fenretinide)、aliretinoin、维A酸脂质体(liposomal tretinoin)、贝沙罗汀(bexarotene)、LGD-1550等。

植物碱包括但不限于长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)等。

蛋白酶体抑制剂包括bortezomib、MG132、NPI-0052、PR-171等。

免疫剂的实例包括干扰素和其它免疫促进剂。干扰素包括干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a、干扰素γ-1b、干扰素γ-n1或它们的组合等。

其它药物包括

BAM-002、他索纳明(tasonermin)、托西莫单抗(tositumomab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、CTLA4(细胞毒性淋巴细胞抗原4(cytotoxic lymphocyte antigen 4))、氨烯咪胺(decarbazine)、地尼白介素(denileukin)、依帕珠单抗(epratuzumab)、来格司亭(lenograstim)、香菇多糖(lentinan)、白细胞α干扰素(leukocyteαinterferon)、咪喹莫特(imiquimod)、MDX-010、黑素瘤疫苗(melanoma vaccine)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫拉司亭(molgramostim)、吉姆单抗(gemtuzumab)、奥佐米星(ozogamicin)、非格司亭(filgrastim)、OncoVAC-CL、oregovomab、pemtumomab(Y-muHMFG1)、sipuleucel-T、sargaramostim、裂裥多糖(sizofilan)、替西白介素(teceleukin)、

(活BCG)、乌苯美司(ubenimex)、

Z-100、WF-10、阿地白介素(aldesleukin)、胸腺法新(thymalfasin)、达珠单抗(daclizumab)、替伊莫单抗(Ibritumomab tiuxetan)等。

生物应答调节剂为调节活体防御机制或生物应答(例如组织细胞的存活、生长或分化)以说明药物具有抗肿瘤活性的药物，且包括云芝多糖(krestin)、香菇多糖(lentinan)、西佐喃(sizofiran)、溶链菌PF-3512676(picibanil PF-3512676)(CpG-8954)、乌苯美司(ubenimex)等。

嘧啶类似物包括阿糖胞苷(cytarabine)(ara C)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、氟达拉滨(fludarabine)、5-FU(5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil))、氟脲嘧啶脱氧核苷(floxuridine)、吉西他滨(gemcitabine)、ratitrexed、triacetyluridine、曲沙他滨(troxacitabine)等。

嘌呤类似物包括硫鸟嘌呤(thioguanine)和巯嘌呤。

抗有丝分裂剂包括batabulin、epothilone D、N-(2-((4羟基苯基)氨基)吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺、ixabepilone(BMS 247550)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、PNUI00940(109881)、patupilone(epothilone B)、XRP-9881、长春氟宁(vinflunine)、ZK-EPO等。

本发明化合物也意欲用作提高放射疗法效力的放射敏化剂。放射疗法的实例包括但不限于外束放射疗法(external beam radiotherapy)、远程放射疗法(teletherapy)、短程放射疗法(brachtherapy)及密封源和开放源放射疗法(sealed and unsealed source radiotherapy)。

此外，本发明化合物可与其它化学治疗剂组合，所述化学治疗剂为例如ABI-007、ABT-100(法尼基转移酶抑制剂(farnesyl transferase inhibitor))、洛伐他汀(lovastatin)、poly I：poly CI2U、依昔舒林(exisulind)、帕米磷酸(pamidronic acid)、精亮氨素(arglabin)、左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)、阿他美坦(atamestane)(1-甲基-3，17-二酮-雄甾-1，4-二烯)、tazarotne、AVE-8062、BEC2(米妥莫单抗(mitumomab))、恶液质素(cachectin)或恶病质素(cachexin)(肿瘤坏死因子)、canvaxin(疫苗)、CeaVacTM(癌症疫苗)、西莫白介素(celmoleukin)、二盐酸组胺、人乳头状瘤病毒疫苗(human papillomavirusvaccine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱(Vincristine)、泼尼松(prednisone)、醋酸环丙孕酮(Cyproterone Acetate)、combrestatin A4P、DAB(389)EGF或TransMID-107RTM(白喉毒素(diphtheria toxin))、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D、5，6-二甲基呫吨酮-4-乙酸(DMXAA)、恩尿嘧啶(eniluracil)、乳酸角鲨烯(squalamine lactate)、T4N5脂质体洗液(T4N5 liposome lotion)、discodermolide、DX-895lf(甲磺酸依沙替康(exatecan mesylate))、enzastaurin、EP0906、四价人乳头状瘤病毒(类型6、11、16、18)重组疫苗(quadrivalent human papillomavirus(types 6，11，16，18)recombinant vaccine)、gastrimmune、genasense、GMK(神经节苷脂共轭物疫苗(ganglioside conjugate vaccine))、

(前列腺癌疫苗)、卤夫酮(halofuginone)、histerelin、羟基脲(hydroxycarbamide)、伊班膦酸(ibandronic acid)、IGN-101、IL-13-PE38、IL-13-PE38QQR(cintredekin besudotox)、IL-13-假单胞菌外毒素(IL-13-pseudomonas exotoxin)、干扰素-α、干扰素-γ、mifamurtide、lonafamib、5，10-亚甲基四氢叶酸酯(5，10-methylenetetrahydrofolate)、米替福新(miltefosine)(十六烷胆碱磷酸(hexadecylphosphocholine))、AE-941、葡萄糖醛酸三甲曲沙(trimetrexate glucuronat)、喷司他丁(pentostatin)、

(一种核糖核酸酶(ribonuclease enzyme))、

(黑素瘤疫苗治疗(melanoma vaccine treatment))、OncoVAX(IL-2疫苗)、卢比替康(rubitecan)、

(基于抗体的细胞药物(antibody-based cell drug))、MAb(鼠单克隆抗体(murine monoclonal antibody))、紫杉醇(paclitaxel)、来自人参的含有20(S)原人参萜二醇(aPPD)和20(S)原人参萜三醇(aPPT))的苷元皂苷、panitumumab、

-VF(研究中的癌症疫苗)、培门冬酶(pegaspargase)、PEG干扰素A、phenoxodiol、丙卡巴肼(procarbazine)、rebimastat、catumaxomab、lenalidomide、RSR13(efaproxiral)、兰瑞肽(lanreotide)、阿维A(acitretin)、十字孢碱(staurosporine)(链霉菌属星状孢子(Streptomyces staurospore))、talabostat(PTI00)、贝沙罗汀(bexarotene)、DHA-紫杉醇(DHA-paclitaxel)、TLK286、temilifene、替莫唑胺(temozolomide)、替米利芬(tesmilifene)、沙利度胺(thalidomide)、STn-KLH、thymitaq(2-氨基-3，4-二氢-6-甲基-4-氧代-5-(吡啶-4-基硫基)-喹唑啉二盐酸盐)、TNFerade^TM(adenovector：含有肿瘤坏死因子-α基因的DNA载体)、bosentan、维A酸(tretinoin)(Retin-A)、粉防己碱(tetrandrine)、三氧化二砷(arsenic trioxide)、

ukrain(来自白屈菜(greater celandine)植物的生物碱衍生物)、vitaxin(抗αvβ3抗体(anti-alphavbeta 3 antibody))、莫特沙芬钆(motexafin gadolinium)、阿曲生坦(atrasentan)、paclitaxel poliglumex、trabectedin、ZD-6126、右雷佐生(dexrazoxane)、zometa(zolendronic acid)、佐柔比星(zorubicin)等。

在一些实施方案中，本发明调节剂化合物可与如下治疗剂组合使用，所述治疗剂可通过与可形成一些四元结构的DNA区域结合来发挥作用。在上述实施方案中，所述治疗剂本身具有抗癌活性，但当它们与调节剂组合使用时，它们的活性得以提高。该协同作用容许以较低剂量给药所述治疗剂，同时实现相同或更高水平的至少一种所需作用。

对于治疗癌症，调节剂可单独具有活性。对于上述组合疗法，当与治疗剂组合使用时，调节剂的剂量通常可比当所述调节剂单独用于治疗相同病症或受试者时所需要的剂量低两倍至十倍。用于与治疗剂组合使用的所述调节剂的合适量通过本领域已知的方法来容易地确定。

以下实施例说明但不限制本发明。

实施例

合成式I、II、III和IV化合物的方法

方法1

用浓硫酸(5mL)处理3-溴-吡啶-4-甲酸(3.0g，14.9mmol)于乙醇(100mL)中的溶液。

使混合物达到回流，此时每种物质都进到溶液中。回流12小时后，LCMS表明反应完成。将反应混合物冷却至室温并在旋转蒸发仪上浓缩至其初始体积的三分之一。然后用250mL乙酸乙酯稀释混合物并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。在旋转蒸发仪上浓缩，得到3.25g乙酯，其为微黄色油状物，所述油状物的纯度足以用于随后的化学转化。LCMS(ESI)216.2(M+1)⁺。

将3-溴-吡啶-4-甲酸乙酯(1.15g，5.0mmol)、2-氨基-4-甲氧基羰基-苯基硼酸(1.04g，4.5mmol)、乙酸钠(1.64g，20mmol)、1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(与二氯甲烷复合)(182mg，0.25mmol)和二甲基甲酰胺(7.5mL)在烧瓶中混合。将烧瓶排空并充入氮气，如此进行两次，在搅拌下加热至125℃且保持12小时或直到LCMS表明不存在任意原料。将混合物冷却至室温，加入水(100mL)，形成棕色沉淀物。过滤沉淀物，得到637mg 5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯。LCMS(ESI)255.4(M+1)⁺。

将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(200mg，0.787mmol)与磷酰氯(1mL)混合并加热至回流。2小时后，LCMS表明不存在任意原料。减压除去挥发物。将残余物吸收在二氯甲烷(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。用硫酸钠干燥有机相并在旋转蒸发仪上浓缩，得到5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(140mg)，其为淡灰色固体。LCMS(ESI)273.3(M+1)⁺。

将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(20mg，0.074mmol)与苯胺(60mg，0.65mmol)和N-甲基吡咯烷酮(0.2mL)在微波管中混合，将混合物加热至120℃且保持10分钟，此时LCMS表明反应完成(不存在任意原料)。然后通过HPLC来纯化混合物，得到酯(22mg)，或可用6N氢氧化钠对其进行处理，得到酸(19mg)。LCMS(ESI)316.3(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ10.17(1H，s)，9.67(1H，br)，8.99(1H，d，5.9Hz)，8.83(1H，d，8.6Hz)，8.62(1H，d，5.9Hz)，8.24(1H，d，1.6Hz)，8.04(1H，s)，8.02(1H，s)，7.93(1H，dd，8.2，1.6Hz)，7.43(1H，d，7.4Hz)，7.41(1H，d，7.4Hz)，7.10(1H，m)。

将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(232mg，0.853mmol)与间氯苯胺(217mg，1.71mmol)和N-甲基吡咯烷酮(1mL)在烧瓶中混合并将混合物加热至80℃且保持2小时，此时LCMS表明反应完成(不存在任意原料)。将混合物溶解在CH₂Cl₂中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤并用Na₂SO₄干燥。通过快速色谱(SiO₂，EtOAc/己烷的1∶1至9∶1梯度)来纯化物质，得到酯。将物质溶解在甲醇和6N NaOH溶液中并将混合物在50℃搅拌30分钟。真空除去挥发物。将残余物在乙酸/THF/甲醇中研磨(使用己烷和乙酸乙酯的混合物)。过滤并干燥，得到147mg 5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸。LCMS(ESI)350(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.21(s，1H)，9.72(brs，1H)，9.02(d，J＝5.6，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，8.62(d，J＝5.6，1H)，8.31(br s，1H)，8.28(d，J＝1.6，1H)，8.10(br d，J＝8，1H)，7.99(dd，J＝2，J＝8.4，1H)，7.46(t，J＝8.0，1H)，7.16(br d，J＝7.2，1H)ppm。

将乙酸钠(410mg，5mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(与二氯甲烷复合)(36mg，0.05mmol)加到3-溴-吡啶-4-甲酸乙酯(230mg，1.0mmol)和2-氨基-4-氰基苯基硼酸盐酸盐(179mg，0.9mmol)的混合物中。将混合物与出口鼓泡器(exit bubbler)相连并加热至120℃且保持18小时，此时LCMS分析表明反应完成(基于原料消失)。冷却至室温后，加入水并过滤黑色固体，用二氯甲烷洗涤，得到5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(156mg)，其为灰色固体，所述固体的纯度足以用于随后的化学转化。

LCMS(ESI)222.4(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.2(1H，s)，9.96(1H，s)，8.90(1H，d，5.1Hz)，8.77(1H，d，8.2Hz)，8.13(1H，d，5.1Hz)，7.73(1H，dd 8.2，1.6Hz)，7.70(1H，d，1.6Hz)。

将磷酰氯(2mL)加到5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(150mg，0.66mmol)中。将混合物加热回流3小时，此时LCMS分析表明不存在任意原料。真空除去挥发物并将粗产物溶解在二氯甲烷中，用盐水和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥。真空浓缩后，用乙酸乙酯和己烷研磨粗产物，得到5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(125mg)。LCMS(ESI)240.3(M+1)⁺。

将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(30mg，0.13mmol)、苯胺(60mg，0.65mmol)和二甲基甲酰胺(0.2mL)的混合物在微波反应器中加热至120℃且保持10分钟。LCMS表明不存在原料。混合物用水稀释并静置几分钟，5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(25mg)沉淀出来，其为灰白色固体。LCMS(ESI)297.3(M+1)⁺。

将叠氮化钠(65mg，1mmol)和氯化铵(53mg，1mmol)加到5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲腈(25mg，0.084mmol)于二甲基甲酰胺(0.2mL)中的粗混合物中。将混合物在120℃加热18小时，此时LCMS分析表明不存在任意原料。混合物用水稀释并通过制备性HPLC来纯化，得到N-苯基-8-(1H-四唑-5-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺(14mg)。LCMS(ESI)340.3(M+1)⁺。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ10.11(1H，s)，8.96(1H，d，5.9Hz)，8.85(1H，d，8.2Hz)，8.53(1H，d，5.5Hz)，8.47(1H，s)，8.16(1H，d，8.6Hz)，7.88(1H，s)，7.86(1H，d，0.8Hz)，7.57-7.51(3H，m)，7.36-7.31(2H，m)。

代表性化合物列于下表1中。

表1

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法2

将5-溴嘧啶-4-甲酸(根据美国专利4,110,450中描述的操作来制备)(1.0当量，6.14g，30.2mmol)悬浮在CH₂Cl₂(100mL)中。先后加入草酰氯(1.1当量，2.9mL，33.0mmol)和2滴DMF。将混合物在室温搅拌过夜并真空除去挥发物。将残余物吸收在MeOH(50mL)中并加热。真空蒸发MeOH后，将化合物溶解在CH₂Cl₂中并倒在预填充硅胶柱上。洗脱物质(使用20％乙酸乙酯/己烷)。蒸发溶剂，得到5-溴嘧啶-4-甲酸甲酯，其为浅橙色结晶固体(2.54g，39％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 217[M]⁺；219[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

4.04(s，3H)，9.02(s，1H)，9.21(s，1H)ppm。

方法3

将乙酸钠(4.0当量，1.92g，23.41mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(与二氯甲烷复合)(0.05当量，214mg，0.29mmol)加到5-溴嘧啶-4-甲酸甲酯(1.0当量，1.27g，5.85mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，1.35g，5.85mmol)于无水DMF(10mL)中的混合物中。将混合物在120℃和氮气气氛下搅拌18小时。加入水和盐水，并滤出所得固体杂质。用CH₂Cl₂(4×)萃取物质且合并的萃取物用Na₂SO₄干燥。蒸发CH₂Cl₂后，通过真空加热残余物来蒸发剩余的DMF。将所得固体在CH₂Cl₂中研磨，过滤并干燥，得到5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯，其为米色固体(127mg，8.5％收率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z 256[M+1]⁺；¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.79(s，3H)，7.81(d，J＝8.0，1H)，8.68(d，J＝8.8，1H)，9.49(s，1H)，10.19(s，1H)，12.37(s，1H)ppm。

方法4

在小瓶中将5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(1.0当量，151mg，0.59mmol)与DIEA(1.5当量，155μl，0.89mmol)和POCl₃(5当量，270μl，3.0mmol)在甲苯(1mL)中混合。将混合物在120℃搅拌1小时并冷却至室温。加入冰和水后，化合物用CH₂Cl₂(4×)萃取。溶液用Na₂SO₄干燥并过滤通过硅藻土垫。蒸发挥发物后，将物质在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨，过滤并干燥，得到5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯，其为浅棕色蓬松固体(11mg，71％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 274[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.96(s，3H)，8.37(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.60(d，J＝1.6，1H)，9.15(d，J＝8.8，1H)，9.74(s，1H)，10.61(s，1H)ppm。

方法5

将5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(10mg)与3，5-二氟苯胺(100mg)在NMP(0.1mL)中混合。在微波条件下将混合物在120℃加热10分钟。加入水并用CH₂Cl₂萃取物质。除去溶剂。在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨并过滤，得到5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯。将该物质悬浮在THF和MeOH的1∶1混合物(2ml)中，并加入5N氢氧化锂水溶液。将混合物在室温剧烈搅拌5小时。加入水和6N盐酸以使所需物质沉淀出来。过滤固体，用水洗涤，干燥并悬浮在MeOH中。过滤并干燥，得到5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸，其为黄色固体(4mg，31％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 353[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ6.90(brt，J＝9.6，1H)，8.02(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.18(br d，J＝10.8，2H)，8.34(d，J＝1.6，1H)，8.86(d，J＝8.4，1H)，9.65(s，1H)，10.40(s，1H)，10.44(s，1H)ppm。

方法6

使用相同方法，由5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯和3-乙炔基苯胺开始，制备5-(3-乙炔基苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 341[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ4.20(s，1H)，7.19(d，J＝7.6，1H)，7.42(t，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.30(d，J＝1.6，1H)，8.34(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.49(br s，1H)，8.85(d，J＝8.8，1H)，9.65(s，1H)，10.11(s，1H)，10.43(s，1H)ppm。

代表性类似物(表2)通过相同方法使用5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯和合适的胺来制备。

表2

方法7

5-溴-2-(甲基硫基)嘧啶-4-甲酸甲酯根据方法2中用于制备5-溴嘧啶-4-甲酸甲酯的操作来制备。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z 263[M]⁺，265[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ2.59(s，3H)，4.00(s，3H)，8.71(s，1H)ppm。

方法8

将5-溴-2-(甲基硫基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.0当量，661mg，2.52mmol)溶解在CH₂Cl₂(10mL)中。加入间氯过氧苯甲酸(m-cpba，77％纯度，2.5当量，1.42g，6.34mmol)并将混合物在室温搅拌1小时。向所得悬浮液中加入无水THF(10mL)、甲胺盐酸盐(10当量，1.7g，25.18mmol)和DIEA(10当量，4.3mL，24.69mmol)，将混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，然后加入CH₂Cl₂和饱和碳酸氢钠水溶液。滗出两相并再进行两次CH₂Cl₂萃取。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并蒸发溶剂。通过快速硅胶色谱(20-30％乙酸乙酯/己烷)来纯化，得到5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯，其为灰白色固体(461mg，75％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 246[M]⁺，248[M+2]⁺。

方法9

将乙酸钠(3.0当量，240mg，2.93mmol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(与二氯甲烷复合)(0.05当量，36mg，0.049mmol)加到5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.0当量，240mg，0.975mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，226mg，0.98mmol)于无水DMF(2mL)中的混合物中。在微波条件下将混合物在120℃加热10分钟。加入水以使所需化合物沉淀出来，过滤并干燥所述化合物。3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(57mg，21％收率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z285[M+1]⁺。

方法10

使用方法3和4中描述的方法，由3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯开始，制备3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸。最终产物通过快速色谱来纯化并分离为黄色固体(0.35mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 346[M+1]⁺。

方法11

在微波容器中将5-溴-2-(甲基硫基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.0当量，274mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.2当量，329mg，1.42mmol)和乙酸钠(3.0当量，291mg，3.55mmol)在无水DMF(2mL)中混合。通过将氮气鼓泡到溶液中10分钟来使混合物脱气并在微波条件下将反应混合物在120℃加热30分钟。冷却后，所需物质用NMP分散。过滤固体，悬浮在水中，过滤并干燥。将物质在AcOEt中研磨并过滤，得到黄色固体。将相同操作重复9次(使用相同量的物质)，得到3-(甲基硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(283mg，10％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 302[M+1]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ2.71(s，3H)，3.89(s，3H)，7.80(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.97(d，J＝1.6，1H)，8.59(d，J＝8.8，1H)，9.98(s，1H)，12.34(s，1H)ppm。

方法12

将3-(甲基硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(1.0当量，279mg，0.926mmol)悬浮在甲苯(2mL)中。加入POCl₃(2mL)和DIEA(0.5mL)，将混合物在120℃搅拌5小时。真空除去挥发物并加入CH₂Cl₂。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。使溶液过滤通过硅藻土垫并真空除去溶剂。将物质在己烷和AcOEt中研磨，过滤并干燥，得到5-氯-3-(甲基硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯，其为米色固体(184mg，63％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 320[M+1]⁺，322[M+3]⁺。

方法13

将5-氯-3-(甲基硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(1.0当量，182mg，0.57mmol)与苯胺(0.5mL)在NMP(1ml)中混合。在微波条件下将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤所得固体并干燥。将化合物在EtOAc和己烷中研磨并过滤，得到3-(甲基硫基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯，其为黄色固体。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 377[M+1]⁺。将该物质悬浮在CH₂Cl₂(4mL)中，分小份加入间氯过氧苯甲酸(77％纯度，2.5当量，165mg，0.737mmol)。一小时后，加入额外量(100mg)的m-cpba并将混合物搅拌1.5小时。再加入CH₂Cl₂后，有机相用水(4×)洗涤，用Na₂SO₄干燥并使溶液过滤通过硅胶垫(用MeOH/CH₂Cl₂混合物洗脱)。蒸发溶剂后，分离3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯，其为黄色固体(166mg，72％纯度)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 409[M+1]⁺，¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ3.77(s，3H)，3.93(s，3H)，7.15(t，J＝7.2，1H)，7.45(t，J＝7.6，2H)，7.99(dd，J＝2.0，J＝8.4，1H)，8.16(d，J＝7.6，2H)，8.28(d，J＝2.0，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，9.76(s，1H)，10.61(s，1H)ppm。

方法14

在密封小瓶中将3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯(1.0当量，62mg，0.152mmol)与甲胺盐酸盐(100mg)和DIEA(260μl)在DMF(1ml)中混合。将混合物在60℃搅拌40分钟。加入水以使3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸甲酯沉淀出来，过滤分离沉淀物。将该物质悬浮在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(4mL)中，并在LiOH(200mg)存在下在60℃剧烈搅拌1.5小时。加入水和HCl水溶液至pH＝1。过滤固体，干燥并在AcOEt/己烷中研磨，得到3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸，其为黄色固体(40mg，74％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z346[M+1]⁺。

以下类似物(表3)使用相同方法来制备。通过制备性HPLC来纯化并通过Genevac来蒸发后，分离物质，其为固体。

表3

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法15

将3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸(20mg)与2当量合适的伯胺在NMP(0.5mL)中混合。加入HOBt(14mg)、三乙胺(13μl)和EDCI(18mg)，并将混合物在70℃搅拌1小时。加入水和HCl并通过过滤来分离物质。使用该方案来制备表4所示的化合物。

表4

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法16

在异丙醇(8mL)中使3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-甲酸(100mg，0.23mmol)与二苯基磷酰叠氮(50μl，0.23mmol)和三乙胺(34μl，0.23mmol)反应。将混合物在95℃搅拌3小时。除去溶剂并使残余物在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂。加入CH₂Cl₂以使固体形成，滤出所述固体并干燥，得到3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-基氨基甲酸异丙酯。LCMS(ES)：90％纯度，m/z 497[M+1]⁺。

向3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-基氨基甲酸异丙酯(60mg)于EtOH(3mL)中的溶液中加入1.5mL NaOH溶液(6N)并将混合物加热回流3小时。除去EtOH，并将所得残余物在二氯甲烷和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去二氯甲烷且所得黄色固体不经进一步纯化即用于下一步骤。将19.5mg黄色固体溶解在二氯甲烷(3mL)中并先后加入乙酰氯(7.4μL)和三乙胺(14.54μL)。将混合物在室温搅拌过夜。加入水和二氯甲烷，并分离有机层，用1N NaOH和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。通过制备性TLC(用二氯甲烷-甲醇(9-1)洗脱)来纯化所得残余物，得到N-(3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-基)乙酰胺。LCMS(ES)m/z 453[M+1]⁺。

实施例2

合成式V、VI、VII和VIII化合物的方法

方法1

将2-溴-噻吩-3-甲酸(1.0当量，12.56g，60.66mmol)悬浮在CH₂Cl₂(200mL)中。加入草酰氯(1.1当量，5.9mL，67.16mmol)和5滴DMF，由此形成气体。将混合物在室温搅拌过夜并真空除去挥发物。将所得固体悬浮在无水甲醇(150mL)中并将混合物加热至沸腾。蒸发溶剂，得到2-溴-噻吩-3-甲酸甲酯(13.16g，98％收率)，其为粗棕色油状物。LCMS(ES)：99％纯度，m/z未检测到；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ3.88(s，3H)，7.23(d，J＝5.6，1H)，7.56(d，J＝5.6，1H)ppm。

方法2

在微波容器中将2-溴-噻吩-3-甲酸甲酯(1.0当量，260mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.1当量，300mg，1.30mmol)、乙酸钠(3.0当量，292mg，3.56mmol)和PdCl₂(dppf)(0.05当量，31mg，0.059mmol)一起混合在无水DMF(2mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤固体并干燥。将物质悬浮在CH₂Cl₂中，过滤并干燥，得到4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯，其为黄色固体(152mg，50％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 260[M+1]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.54(d，J＝5.2，1H)，7.79(d，J＝4.8，1H)，7.86(d，J＝8.4，1H)，7.91(dd，J＝8.4，J＝1.6，1H)，8.03(d，J＝1.2，1H)ppm。

方法3

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，618mg，2.38mmol)悬浮在MeOH、THF和水的10mL混合物(1∶1∶1，v∶v∶v)中。加入LiOH(2.0当量，114mg，4.76mmol)并将混合物在室温搅拌2小时。再加入LiOH(114mg)并将混合物搅拌1小时。加入LiOH(50mg)并将混合物再搅拌2小时。加入水并使溶液过滤通过硅藻土垫。硅藻土垫用1N NaOH水溶液充分洗涤。溶液用6N HCl水溶液酸化以使所需物质沉淀出来。过滤并干燥，得到4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为黄色固体(562mg，96％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 246[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.61(d，J＝5.2，1H)，7.73(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.88(d，J＝5.6，1H)，7.92(d，J＝8.4，1H)，8.02(d，J＝1.6，1H)，11.92(s，1H)，13.21(br.s，1H)ppm。

方法4

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸(1.0当量，38mg，0.155mmol)悬浮在二噁烷(1mL)中。加入LiAlH₄(7.0当量，40mg，1.05mmol)并将混合物在100℃搅拌45分钟。加入水，然后加入MeOH和CH₂Cl₂。滤出固体盐并用MeOH和CH₂Cl₂洗涤。真空蒸发挥发物后，将物质溶解在NMP、MeOH和水的混合物中并通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到7-(羟基甲基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮，其为灰白色固体(12mg，34％)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 232[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ4.56(s，2H)，7.15(d，J＝7.6，1H)，7.39(br s，1H)，7.55(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.2，1H)，7.76(d，J＝8.0，1H)，11.73(s，1H)ppm。

方法5

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，17mg，0.066mmol)悬浮在氯仿(0.3mL)和乙酸(0.1mL)的混合物中。加入NBS(9.5当量，112mg，0.63mmol)并将混合物在70℃搅拌16小时。加入水和氨水，且物质用CH₂Cl₂(2×)萃取。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂，得到2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(17mg，76％)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 338[M]⁺，340[M+2]⁺；¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.30(m，1H)，7.69(d，J＝8.4，1H)，7.45(m，1H)，7.88(br d，J＝8，1H)，8.05(br s，1H)ppm。

方法6

将2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，17mg，0.050mmol)悬浮在MeOH/THF/水的1∶1∶1混合物(0.6mL)中。加入LiOH(39mg)并将混合物在室温搅拌一小时。加入水和6N HCl并过滤所得沉淀物。物质通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为固体(2.1mg，13％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 324[M]⁺，326[M+2]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.75(s，1H)，7.75(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.90(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.06(s，1H)ppm。

方法7

在封闭容器中将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(44mg，0.170mmol)悬浮在浓氨水(1ml)中。将混合物在100℃搅拌过夜。加入1NNaOH水溶液并将混合物在室温搅拌2小时。过滤固体并干燥，得到4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酰胺，其为棕色固体(13mg，32％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 245[M+1]⁺。

方法8

在微波容器中将2-溴-噻吩-3-甲酸甲酯(1.0当量，64mg，0.29mmol)、2-氨基苯基硼酸(1.2当量，48mg，0.35mmol)、乙酸钠(3.0当量，71mg，0.86mmol)和PdCl₂(dppf)(0.1当量，15mg，0.028mmol)一起混合在无水DMF(0.2mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热5分钟。物质通过制备性HPLC来纯化。蒸发乙腈，并用CH₂Cl₂(3×)萃取化合物。合并的萃取物用水洗涤，用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂。在EtOH中重结晶，得到噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮，其为褐色结晶固体(7mg，12％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 202[M+1]⁺；¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ7.28(m，1H)，7.33(m，1H)，7.43-7.50(m，2H)，7.74(d，J＝4.4，1H)，7.82(d，J＝7.6，1H)ppm。

方法9

在微波容器中将2-溴-噻吩-3-甲酸甲酯(1.0当量，250mg，1.13mmol)、2-氨基-3-氰基苯基硼酸HCl(1.1当量，250mg，1.24mmol)、乙酸钠(3.0当量，278mg，3.39mmol)和PdCl₂(dppf)(0.007当量，4.3mg，0.0082mmol)一起混合在无水DMF(2.5mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入水并用CH₂Cl₂萃取物质。有机萃取物用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂。在AcOEt中对所得固体进行超声波处理，过滤并干燥，得到4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为米色固体(121mg，48％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 227[M+1]⁺。

方法10

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，20mg，0.088mmol)溶解在无水DMF(0.15mL)中。加入叠氮化钠(4.0当量，23mg，0.354mmol)和氯化铵(4.0当量，19mg，0.354mmol)并将混合物在120℃搅拌过夜。将反应混合物冷却并加入水。加入6N HCl水溶液以使沉淀物形成。过滤并真空干燥后，分离7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮，其为淡绿色固体(18mg，76％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 270[M+1]⁺，242[M+1-N2]⁺；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.64(d，J＝5.2，1H)，7.86(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.89(d，J＝5.2，1H)，8.09(d，J＝8.0，1H)，8.16(d，J＝1.6，1H)，12.03(s，1H)ppm。

方法11

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，18mg，0.069mmol)溶解在无水DMF(0.4mL)中。加入K₂CO₃(7.0当量，70mg，0.506mmol)和3-溴-1-丙醇(16当量，100μl，1.144mmol)，将混合物在100℃搅拌1.5小时。加入水后，混合物用CH₂Cl₂萃取。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂。通过制备性硅胶TLC来分离化合物8和9(用30％AcOEt/己烷洗脱两次，然后用50％AcOEt/己烷洗脱一次)。极性较小的化合物为4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(12mg)。LCMS(ES)：80％纯度，m/z 318[M+1]⁺。极性较大的化合物为5-(3-羟基丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(19mg)。LCMS(ES)：80％纯度，m/z 318[M+1]⁺。两种化合物不经进一步纯化即用于以下步骤。

方法12

将5-(3-羟基丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，19mg，0.060mmol)溶解在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(0.5mL)中。加入LiOH(40mg)并将所得混合物在室温搅拌1.5小时。加入水、MeOH和HCl且溶液通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到5-(3-羟基丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为白色固体(4mg，22％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺。¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ2.08(qi，J＝6.0，2H)，3.61(t，J＝5.2，2H)，4.62(t，J＝6.0，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.77(d，J＝5.2，1H)，7.93(d，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.2，J＝8.4，1H)，8.26(d，J＝0.8，1H)ppm。

方法13

根据方法12中使用的操作，由4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯开始，进行制备。分离4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为固体(3mg，26％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺。

方法14

根据方法11中使用的操作，由4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯和2-二甲基氨基乙基氯开始，制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯。LCMS(ES)：95％纯度，m/z331[M+1]⁺。

方法15

根据方法12中使用的操作来制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸。进行制备性HPLC和Genevac蒸发，得到物质，其为TFA盐。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 317[M+1]⁺；¹HNMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1，400MHz)δ3.06(s，6H)，3.50(t，J＝7.6，2H)，4.88(t，J＝7.6，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.6，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，7.95(br d，J＝8.4，1H)，8.2(br s，1H)ppm。

方法16

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，1.50g，5.79mmol)悬浮在无水甲苯(15mL)中。加入POCl₃(1.2当量，0.64mmol，6.99mmol)和DIEA(0.8当量，0.81mmol，4.65mmol)并在氮气气氛下将混合物在120℃剧烈搅拌3小时。混合物通过加入冰和水来水解。化合物用CH₂Cl₂(4×)萃取。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并使黑色溶液过滤通过硅藻土垫。真空蒸发挥发物后，将所得固体在AcOEt和己烷的混合物中研磨。过滤并干燥，得到4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯，其为黄色蓬松固体(1.14g，71％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 278[M+1]⁺；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ4.01(s，3H)，7.72(d，J＝4.8，1H)，7.74(d，J＝5.2，1H)，8.14(d，J＝8.4，1H)，8.25(d，J＝8.4，1H)，8.85(d，J＝1.6，1H)ppm。

方法17

根据方法16中使用的操作，由噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮开始，制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉。分离4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉，其为固体(71mg，93％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 220[M+1]⁺，223[M+3]⁺。

方法18

根据方法16中使用的操作来制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈。分离4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为黄色蓬松固体(833mg，77％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 245[M+1]⁺，247[M+3]⁺。

方法19

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1mL)和NMP(0.1mL)在小瓶中混合。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤所得固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈并干燥。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 302[M+1]⁺。

方法20

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(34mg，0.113mmol)溶解在NMP(0.3mL)中。先后加入30％H₂O₂水溶液(0.2mL)和6N NaOH(50μl)。将混合物在50℃搅拌2小时。再加入30％H₂O₂水溶液(0.3mL)和6N NaOH(100μl)，30分钟后实现70％转化。加入水，过滤固体并干燥。使物质在相同条件下进一步反应，从而实现完全转化。分离4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酰胺，其为固体(30mg，83％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 320[M+1]⁺。

方法21

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酰胺(28mg，0.088mmol)悬浮在N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇中，并在氮气气氛下将混合物在80℃搅拌2小时。真空除去挥发物。加入乙酸(0.5mL)和无水肼(0.1mL)，将混合物在115℃搅拌1小时。加入水和盐水并过滤固体。物质通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发并在AcOEt/己烷中研磨，得到N-苯基-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺，其为灰白色固体(9mg，30％收率)。LCMS(ES)：94％纯度，m/z 344[M+1]⁺。

方法22

将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，27mg，0.0897mmol)、羟胺盐酸盐(10当量，62mg，0.892mmol)和K₂CO₃(10当量，124mg，0.896mmol)在EtOH(0.5mL)中混合，并在微波条件下将混合物在100℃加热10分钟。过滤除去固体并用EtOH洗涤。真空除去溶剂。将粗物质悬浮在氯仿(0.5mL)中。加入氯甲酸乙酯(20μl)和三乙胺(20μl)并将混合物在室温搅拌10分钟。加入CH₂Cl₂，有机相用盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥有机相并除去溶剂。将粗物质悬浮在NMP(1mL)中并在微波条件下在160℃加热10分钟。物质通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到3-(4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮，其为灰白色固体(7mg，22％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 361[M+1]⁺。

方法23

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1mL)和NMP(0.1mL)在小瓶中混合。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤所得固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈并干燥。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 302[M+1]⁺。将该物质在小瓶中与DMF(0.5mL)、NH₄Cl(50mg)和NaN₃(50mg)混合。将混合物在120℃搅拌3小时。加入水并过滤后，分离N-苯基-7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺，其为米色固体(13mg，41％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 345[M+1]⁺，317[M+1-N₂]⁺。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.07(t，J＝7.2，1H)，7.40(t，J＝7.6，2H)，8.00(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.04(d，J＝5.2，1H)，8.10(dd，J＝1.2，J＝8.8，2H)，8.19(d，J＝8.0，1H)，8.25(d，J＝5.6，1H)，8.43(d，J＝1.6，1H)，9.34(s，1H)ppm。

代表性类似物(表5)通过相同方法使用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈和合适的胺来制备。用于微波反应的反应温度范围为120℃至180℃。合成四唑类化合物后，物质通过制备性HPLC/Genevac蒸发来分离。在一些情况下，向反应混合物中加入水后，物质沉淀出来，其通过过滤来分离。

表5

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法24

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉(23mg)与苯胺(0.1mL)和NMP(0.1mL)混合并在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入NMP(0.8mL)且化合物通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到N-苯基噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺，其为淡红色固体(31mg，定量)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 277[M+1]⁺。

方法25

N1，N1-二甲基-N2-(噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基)乙烷-1，2-二胺根据方法24中的操作使用N，N-二甲基乙二胺来制备。进行制备性HPLC和Genevac蒸发，得到所需物质，其为TFA盐。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 272[M+1]⁺。

方法26

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(10mg，0.036mmol)悬浮在NMP(0.1mL)和3-氨基甲基吡啶(0.1mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。将反应混合物溶解在NMP和MeOH的混合物中并通过制备性HPLC来纯化酯中间体。对溶剂进行Genevac蒸发后，将所得固体溶解在THF和MeOH的1∶1混合物(0.6mL)中。加入5N LiOH水溶液(0.2mL)并将混合物在室温搅拌17小时。加入水和HCl水溶液并通过制备性HPLC来纯化4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸的溶液。通过Genevac蒸发来除去溶剂，得到化合物4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为白色固体(10mg，62％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 336[M+1]⁺。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ5.23(s，2H)，7.71-7.78(m，4H)，8.11(d，J＝5.6，1H)，8.47(d，J＝8.0，1H)，8.49(d，J＝0.8，1H)，8.62(d，J＝5.2，1H)，8.97(s，1H)ppm。

代表性类似物(表6)通过相同方法使用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯和合适的胺来制备。用于微波反应的反应温度范围为120℃至180℃。对酯进行水解后，物质通过HPLC/Genevac蒸发来分离。在一些情况下，对水解混合物进行酸化后，物质沉淀出来，其通过过滤来分离。

表6

结构 M.W. LCMS(ES)m/z

方法27

在无水DMF(0.5mL)中使4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸(6mg)与甲磺酰胺(120mg)、EDCI(80mg)和DMAP(20mg)反应。5小时后，加入水并使溶液经历制备性HPLC。进行Genevac蒸发，得到N-(甲基磺酰基)-4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酰胺，其为固体(6mg，81％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 398[M+1]⁺。

方法28

在小瓶中将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸(1.0当量，20mg，0.081mmol)、N-羟基苯并三唑一水合物(2.0当量，22mg，0162mmol)、对甲氧基苄基胺(2.0当量，21μl，0.162mmol)和三乙胺(2.0当量，23μl，0.165mmol)溶解在无水DMF(0.5mL)中。加入EDCI(2.0当量，31mg，0.162mmol)并将反应混合物在70℃搅拌过夜。加入MeOH(0.5mL)和水(2mL)，过滤所得沉淀物并干燥。将物质在AcOEt中研磨，过滤并干燥，得到灰白色固体(19mg，65％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 365[M+1]⁺；¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.71(s，3H)，4.40(d，J＝6.0，2H)，6.88(d，J＝8.8，2H)，7.24(d，J＝8.8，2H)，7.60(d，J＝5.6，1H)，7.69(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.84(d，J＝5.6，1H)，7.90(s，1H)，7.91(d，J＝8.8，1H)，9.11(t，J＝5.6，1H)ppm。

以下代表性类似物(表7)通过这些方法使用4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸和合适的胺来制备。在一些情况下，物质通过制备性HPLC来纯化并分离，其在Genevac蒸发后为干燥固体。

表7

以下代表性类似物(表8)由其相应的甲酯来制备。化合物根据用于化合物15的水解操作来制备。

表8

以下代表性类似物(表9)由其相应的叔丁酯或N经Boc(叔丁氧羰基)保护的前体来制备。前体用30％三氟乙酸/CH₂Cl₂处理2小时。真空除去挥发物，得到所需物质。

表9

方法29

将3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸乙酯(1.0当量，7.6mg，0.018mmol)悬浮在THF(四氢呋喃)、MeOH(甲醇)和水的1∶1∶1混合物中。加入氢氧化锂(40mg，1.66mmol)并将混合物在室温搅拌一小时。加入水和盐酸，过滤所得固体并干燥，得到3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸，其为固体。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 389[M+1]⁺。

以下代表性类似物(表10)使用方法28中描述的操作通过使3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应来制备。物质通过制备性HPLC来纯化并分离，其在Genevac蒸发后为干燥固体。

表10

方法30

以下代表性类似物(表11)使用方法28中描述的反应条件通过使3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应来制备。酯使用方法29中描述的条件来水解，得到以下类似物。

表11

结构 MW LCMS(ES)m/z

方法31

以下代表性类似物(表12)使用方法30中描述的反应条件通过使2-(3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯基)乙酸与合适的胺反应来制备。

表12

结构 MW LCMS(ES)m/z

实施例3

合成式IX、X、XI和XII化合物的方法

方法1

将2-氨基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯(1.0当量，100mg，0.42mmol)溶解在无水DMF(二甲基甲酰胺)(0.8mL)中。将混合物在氮气气氛下加热至80℃。向热混合物中滴加亚硝酸叔丁酯(1.2当量，60μl，0.50mmol)于DMF(0.8mL)中的溶液。几分钟后，不再放出气体，这表明反应完成。将混合物冷却并倒在预填充硅胶柱上。进行快速色谱(先后使用己烷和AcOEt(乙酸乙酯)/己烷(2∶8))，得到5-溴噻唑-4-甲酸甲酯，其为黄色固体(49mg，53％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 222[M]⁺，224[M+2]⁺。

方法2

在微波容器中将5-溴噻唑-4-甲酸甲酯(1.0当量，97mg，0.44mmol)、2-氨基-3-甲氧基羰基苯基硼酸HCl(1.1当量，111mg，0.48mmol)、乙酸钠(3.0当量，107mg，1.31mmol)和PdCl₂(dppf)(二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯)(0.05当量，11mg，0.022mmol)一起混合在无水DMF(1mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。加入水，物质用CH₂Cl₂萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸发除去溶剂。将物质溶解在CH₂Cl₂和MeOH的混合物中，并使溶液过滤通过硅藻土垫。蒸发挥发物，得到粗4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯，其为黑色固体(44mg，39％收率)。使小部分化合物经历制备性HPLC用于分析目的。LCMS(ES)：95％纯度，m/z261[M+1]⁺。

方法3

将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯(35mg，0.12mmol)和LiOH(60mg，0.83mmol)在THF、MeOH和水的混合物(1∶1∶1，v∶v∶v)(0.6mL)中搅拌2小时。加入6N NaOH水溶液并使溶液过滤通过硅藻土。对溶液进行酸化并过滤所得固体。进行制备性HPLC纯化和Genevac蒸发，得到4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸，其为白色固体(0.8mg)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 247[M+1]⁺。

方法4

将2-氨基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯(1.0当量，2.0g，8.44mmol)溶解在CH₂Cl₂(4mL)中。加入乙酸酐(1.5当量，1.2mL，12.66mmol)和三乙胺(1.1当量，1.3mL，9.28mmol)并将混合物在100℃搅拌一小时。过滤所得固体，在AcOEt中研磨，然后再次过滤。干燥后，分离2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯，其为米色固体(1.81g，77％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 280[M+1]⁺。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ2.25(s，3H)，3.95(s，3H)ppm。

方法5

根据方法2中使用的操作，由2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯开始，制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯。分离2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯，其为黑色固体(106mg，37％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 318[M+1]⁺。

方法6

根据方法3中的操作，由2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯开始，制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸。分离2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸，其为黑色固体(14mg，44％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 304[M+1]⁺;¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ2.22(s，3H)，7.74(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.07(s，1H)，12.80(s，1H)ppm。

方法7

在120℃将2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸(102mg，0.34mmol)在6N HCl水溶液中搅拌过夜。加入水，过滤化合物并干燥，得到2-氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸，其为黑色固体(76mg，86％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 262[M+1]⁺，¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ7.60(d，J＝8.4，1H)，7.70(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.99(d，J＝1.2，1H)，11.94(s，1H)ppm。

方法8

将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，0.62g，2.38mmol)悬浮在甲苯中。加入DIEA(二异丙基乙基胺)(1.5当量，122μd，3.57mmol)和POCl₃(2.3当量，507μl，5.47mmol)，将混合物在120℃剧烈搅拌1小时。加入水、冰和CH₂Cl₂并使所得乳液过滤通过硅藻土。滗出有机相，水相用CH₂Cl₂进一步萃取。用Na₂SO₄干燥合并的有机萃取物并真空除去溶剂，得到4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯(0.31g，47％收率)。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z 279[M+1]⁺。

方法9

在微波容器中将4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯(1.0当量，23mg，0.084mmol)和苯胺(13当量，0.1mL，1.1mmol)在NMP(N-甲基吡咯烷酮)(0.1mL)中混合。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。中间体酯通过制备性HPLC来纯化并分离，其在Genevac蒸发后为固体。在室温将固体在THF、MeOH和水的混合物(1∶1∶1，v∶v∶v)(0.6mL)中与LiOH(41mg)一起搅拌2小时。加入HCl和水，蒸发有机溶剂并使溶液静置2小时。过滤缓慢形成的沉淀物并干燥，得到4-(苯基氨基)噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸，其为固体(两步收率为8％)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 322[M+1]⁺。

代表性类似物(表13)通过相同方法使用4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-甲酸甲酯和合适的胺来制备。用于微波反应的反应温度范围为120℃至180℃。合成最终化合物后，物质通过制备性HPLC/Genevac蒸发来分离。在一些情况下，酸化后，物质沉淀出来，其通过过滤来分离。

表13

实施例4

在不含细胞的体外测定中调节CK2和PARP活性

在不含细胞的CK2测定中对本发明所述化合物的调节活性进行体外评价。还在不含细胞的PARP测定中对本发明所述化合物的调节活性进行体外评价。下面描述了这些测定。

CK2测定

将试验化合物的水溶液以10微升体积加到反应混合物中，所述反应混合物含有10微升测定稀释缓冲液(ADB；20mM MOPS(pH 7.2)、25mM β-磷酸甘油、5mM EGTA、1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)、10微升底物肽(RRRDDDSDDD，以1mM浓度溶解在ADB中)、10微升重组人CK2(25ng，溶解在ADB中；Upstate)。通过加入10微升ATP溶液(90％[75mM MgCl₂、75-ATP(溶解在ADB中)]；10％{[γ-³³p]ATP(原液为1mCi/100μl；3000Ci/mmol(Perkin Elmer)})来引发反应并在30℃保持10分钟。反应用100微升0.75％磷酸淬灭，然后转移到磷酸纤维素滤板(Millipore)中并过滤通过磷酸纤维素滤板(Millipore)。每个孔用0.75％磷酸洗涤5次后，将板真空干燥5分钟，向每个孔中加入15μl闪烁液后，使用Wallac发光计数器来测量残余的放射性。

PARP测定

PARP测定使用化学发光PARP测定试剂盒(Trevigen)来进行。简言之，反应在经组蛋白涂覆的条形孔中如下进行：将10微升溶解在1×PARP缓冲液(通过对用高纯水稀释的20×PARP缓冲液进行混合来制备)中的试验化合物和15微升稀PARP-HAS酶(稀释在1×PARP缓冲液中，每孔0.1单位)加到25微升PARP混合物(cocktail)(由10×PARP混合物和10×活化DNA来制备，两者均为每孔2.5微升，且1×PARP缓冲液为每孔20微升)中。将反应混合物在环境温度孵育60分钟，然后除去液体。用PBS(200μl)将各孔洗涤四次后，加入50微升STREP-HRP(辣根过氧化物酶)溶液(在1×Strep-Diluent中稀释500倍)并将反应混合物在环境温度孵育30分钟。除去液体，用PBS(200μl)将各孔洗涤四次后，加入各自为50微升的PeroxyGlo A和B(化学发光辣根过氧化物酶底物)，并在SpectraMax M5读板器上对所得化学发光进行量化。

表14A、14B和15-18显示了化合物对CK2和/或PARP活性的调节作用。

表14A

表14B

表15显示了化合物对PARP和CK2的调节作用。

表15

表16

表17

表18

实施例5

细胞增殖调节活性

下面描述了使用Alamar蓝色染料(贮存在4℃，每孔使用20μl)的代表性细胞增殖测定方案。

96孔板布置和化合物处理

a.使细胞分离并用胰蛋白酶处理细胞。

b.使用血细胞计数器对细胞进行计数。

c.以每孔4,000-5,000个细胞将细胞铺在100μl培养基中并按照以下板布置接种到96孔板中。仅将细胞培养基加到孔B10至B12中。孔B1至B9具有细胞但没有加入化合物。

d.以上述板布置中所示的浓度向每个孔中加入100μL2×药物稀释液。同时，向对照孔(孔B10至B12)中加入100μl培养基。总体积为200μl/孔。

e.在加湿培养箱中以37℃和5％CO₂孵育四天。

f.向每个孔中加入20μl Alamar蓝色试剂。

g.在加湿培养箱中以37℃和5％CO₂孵育四天。

h.使用微量板读取器以激发波长544nm和发射波长590nm记录荧光。

在测定中将细胞与试验化合物一起培养约四天，然后将染料加到细胞中，约四小时后检测未被还原的染料的荧光。可在测定中使用不同类型的细胞(例如HCT-116人结肠直肠癌细胞、PC-3人前列腺癌细胞和MiaPaca人胰腺癌细胞)。下面提供代表性化合物的抗增殖作用。

实施例6

对内源性CK2活性的调节

将人白血病Jurkat T细胞系保持在RPMI 1640(Cambrex)(补充有10％胎牛血清和50ng/ml庆大霉素)中。将细胞在处理前洗涤，以约10⁶个细胞/毫升的密度重新悬浮在含有1％胎牛血清的培养基中并在所述量的药物存在下孵育两小时。离心回收细胞，使用低渗缓冲液(20mM Tris/HCl(pH7.4)；2mMEDTA；5mM EGTA；10mM巯基乙醇；10mM NaF；1μM冈田酸；10％v/v甘油；0.05％NP-40；1％蛋白酶抑制剂混合物)来进行溶胞，并将来自澄清溶胞液的蛋白质在测定稀释缓冲液(ADB；20mM MOPS(pH7.2)、25mM β-磷酸甘油、5mM EGTA、1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)中稀释至1微克/微升。向20微升经稀释的蛋白质中加入10微升底物肽(RRRDDDSDDD，以1mM浓度溶解在ADB中)和10微升PKA抑制剂混合物(Upstate)。通过加入10微升ATP溶液(90％[75mM MgCl₂、100μM ATP(溶解在ADB中)]；10％{[γ-³³P]ATP(原液为1mCi/100微升；3000Ci/mmol(Perkin Elmer)})来引发反应并在32℃保持15分钟。反应用100微升0.75％磷酸淬灭，然后转移到磷酸纤维素滤板(Millipore)中并过滤通过磷酸纤维素滤板(Millipore)。每个孔用0.75％磷酸洗涤5次后，使用Wallac发光计数器来测量残余的放射性。

测定评价的两种化合物的调节活性显示在图1中。下面提供化合物的结构：

化合物1

化合物2

如图1所示，与未经处理的对照相比，两种化合物各自显著抑制内源性CK2活性。与参考化合物4，5，6，7-四溴苯并三唑(TBB)(一种已知的CK2抑制剂)(Ruzzene et al.，Biochem J.15：364(Pt 1)：41-7(2002))相比，两种化合物各自也更强效抑制内源性CK2活性。

表20：对内源性CK2活性的调节

表21：对内源性CK2活性的调节

实施例7

对药物代谢动力学性质的评价

在ICR小鼠中在分别以5mg/kg和25mg/kg静脉内(IV)推注药物和口服(PO)给药药物后对药物的药物代谢动力学性质进行研究。在预定时间收集血液样品并分离血浆。从在给药后5、15和30分钟及1、2、4、8和24小时收集的血液样品中分离血浆。

也在SD大鼠和比格犬中在静脉内(IV)推注药物和口服(PO)给药药物后使用类似方法对药物的药物代谢动力学性质进行研究。在预定时间收集血液样品并分离血浆。

药物水平通过下述LC/MS/MS方法来量化。将无房室药物代谢动力学分析应用于静脉内给药。使用线性梯形法来计算AUC(0-24)。分别使用最后三个和最先三个数据点来计算最终要得到的t_1/2和C₀。

生物分析使用Quattro Micro LC/MS/MS设备以具有内标(IS)的MRM检测模式来进行。简言之，使用具有120μL乙腈的蛋白质沉淀物来制备15μL血浆样品用于分析。将上清液转移到96孔板中并经历LC-MS/MS分析(使用Phenomenex Polar-RP HPLC柱)。流动相为10mM NH₄HCO₃/水(溶液A)和10mM NH₄HCO₃/甲醇(溶液B)。柱最初用25％溶液B平衡，然后历时5分钟用100％溶液B平衡。方法的动态范围为1至10,000ng/mL。以批次模式根据所列生物分析样品用两条插入法校正曲线(bracketing calibration curve)对分析物进行量化。

以下化合物A1的药物代谢动力学分布和所估测的药物代谢动力学参数显示在图2A和表22中。

表22.在ICR小鼠中在分别以5和25mg/kg静脉内给药和口服给药后

所估测的药物代谢动力学参数

PK参数 IV PO 单位

剂量 5 25 mg/kg

AUC_(0-8h) 2910 1580

AUC_(0-24h) 3337 2915 ng.h.ml^-1

AUC_(0-Inf) 3364 3149 ng.h.ml^-1

Cmax-obs N/A 343 ng/mL

Cp0-exp 13201 N/A ng/mL

Tmax N/A 0.25 hr

Kel 0.1586 0.1076 hr^-1

t_1/2 4.4 6.4 hr

Vd 9.4 N/A L/kg

CL_s 1.5 N/A L/kg/hr

F_(0-8h) N/A 10.9 ％

F_(0-infh) N/A 18.7 ％

以下试验化合物的药物代谢动力学分布和所估测的药物代谢动力学参数显示在图2B和表23中。

表23.在ICR小鼠中在IV给药和PO给药后所估测的药物代谢动力学参数

PK参数	IV	PO	单位
				剂量	3.4	24.5	mg/kg
AUC_(0-8h)	3716	6005
				AUC_(0-24h)	4806	9120	ng.h.ml^-1
AUC_(0-Inf)	4898	10895	ng.h.ml^-1
				Cmax-obs	4744	1600.5	ng/mL
Cp0-exp	5631	N/A	ng/mL
				Tmax	N/A	0.5	hr
Kel	0.1418	0.0594	hr^-1

t_1/2	4.9	11.7	hr
				Vd	4.9	N/A	L/kg
CL_s	0.7	N/A	L/kg/hr
				F_(0-24h)	N/A	26.5	％
F_(0-Inf)	N/A	31.1	％

试验化合物A1在狗中的药物代谢动力学分布和所估测的药物代谢动力学参数显示在表24中。试验化合物A1在大鼠中的药物代谢动力学分布和所估测的药物代谢动力学参数显示在表25中。

表24.在比格犬中在IV给药和PO给药后

所估测的试验化合物A1的药物代谢动力学参数

PK参数 IV PO IV MC PO MC 单位

剂量 0.80 3.80 0.80 3.80 mg/kg

AUC_(0-8h) 345 1024 633 1775

AUC_(0-12h) 349 1064 N/A N/A ng.h.mI^-1

AUC_(0-Inf) 352 1073 633 1804 ng.h.mI^-1

Cmax-obs 1043 494.7 1979 908 ng/mL

Cp0-exp 1406 N/A 2723 N/A ng/mL

Tmax N/A 0.5 N/A 0.25 hr

Kel 0.5546 0.5546 N/D 0.4318 hr^-1

t_1/2 1.2 1.2 N/D N/D hr

Vd 4.1 N/A N/D N/D L/kg

CL_s 2.3 N/A N/D N/D L/kg/hr

F_(0-8h) N/A 62.5 N/A 59.0 ％

F_(0-12h) N/A 64.2 N/A N/A ％

F_(0-Inf) N/A 64.1 N/A N/A ％

表25.在SD大鼠中在IV给药和PO给药后

所估测的试验化合物A1的药物代谢动力学参数

PK参数 IV PO 单位

剂量 2.50 12.50 mg/kg

AUC_(0-12h) 13119 19025 ng.h.mI^-1

AUC_(0-24h) 14352 25858 ng.h.mI^-1

AUC_(0-Inf) 13997 26587 ng.h.mI^-1

Cmax-obs 21339 4207.4 ng/mL

Cp0-exp 27117 N/A mg/mL

Tmax N/A 1.0 hr

Kel 0.0707 0.1529 hr^-1

t_1/2 9.8 4.5 hr

Vd 2.5 N/A L/kg

CL_s 0.2 N/A L/kg/hr

F_(0-12h) N/A 29.0 ％

F_(0-24h) N/A 36.0 ％

F_(0-Inf) N/A 38.0 ％

试验化合物A2在比格犬和SD大鼠中的药物代谢动力学分布和所估测的药物代谢动力学参数显示在表26中。

表26.在IV给药和PO给药后

所估测的试验化合物A2的药物代谢动力学参数

PK参数 IV SD大鼠 PO SD大鼠 IV狗 PO狗单位

剂量 1.56 8.06 2.00 7.50 mg/kg

AUC_(0-8h) 35755 55808 1394 2253

AUC_(0-12h) 39194 73945 1414 2315 ng.h.mI^-1

AUC_(0-Inf) 36659 80286 1437 2355 ng.h.mI^-1

Cmax-obs 34264.8 6668.3 3070.8 1212.8 ng/mL

Cp0-exp 47935 N/A 3847 N/A ng/mL

Tmax N/A 2.0 N/A 1.0 hr

Kel 0.1215 0.1077 0.1360 0.2092 hr^-1

t_1/2 5.7 6.4 5.1 3.3 hr

Vd 0.6 N/A 10.2 N/A L/kg

CL_s 0.1 N/A 1.4 N/A L/kg/hr

F_(0-8h) N/A 31.2 N/A 43.1 ％

F_(0-12h) N/A 37.7 N/A 43.7 ％

F_(0-Inf) N/A 43.8 N/A 43.7 ％

实施例8

评价化合物在肿瘤抑制中的效力

通过静脉内和口服给药至荷瘤异种移植物小鼠来评价化合物A1和化合物A2(如前所示)的体内活性。体内实验按照由Animal Use and Care Committee批准的方案来进行。雌性NCr nu/nu小鼠购自Taconic Farms，并分组饲养在通风笼架系统(12/12光照循环)中。将所有饲料和水在使用前高压灭菌。小鼠随意食用经γ射线照射的实验室食物和酸化水。在层流通风橱下处理动物。

肿瘤大小(mm³)使用公式(l×w²)/2来计算，其中w＝肿瘤宽度，及l＝肿瘤长度，单位为mm。假设1mg相当于1mm³肿瘤体积对肿瘤重量进行估测。

对于静脉内给药化合物A1，动物在右肋中皮下接种有5×10⁶个MiaPaca细胞。每周两次监测肿瘤，然后随着它们接近适于研究的大小，每日两次监测肿瘤。在进行研究的第一天，将动物随机分到处理组(n＝5)中，其中组平均肿瘤大小为160mm³。

组1 平均值 160.966 UTC

组2 平均值 161.816 Gemzar

组3 平均值 161.807 30mg/kg CK2化合物

组4 平均值 159.621 60mg/kg CK2化合物

差异％ 1.363

SD 1.034

动物通过QD静脉内给药而接受14份剂量的媒介物、Gemzar(100mg/kgQ3D)或化合物A1(30mg/kg或60mg/kg)。在第3、6、8、10、13和15天记录肿瘤体积测量值(图3A)和体重(图3B)。未经处理的具体对照动物的照片和给药60mg/kg化合物A1的具体动物的照片显示在图3C和3D中。化合物A1在图3A、3B、3C和3D中称作“CK2抑制剂”。

也将化合物A1口服给药至MiaPaca异种移植物动物并抑制肿瘤生长。用2％PEG 300将化合物A1以钠盐的形式配制成浓度为10mg/mL并使用磷酸钠缓冲液来缓冲至pH 8.4。当先后以100mg/kg QD×8和200mg/kg QD×5的剂量将化合物A1口服给药至动物时，化合物A1相对于未经处理的对照组而显著抑制肿瘤生长。以80mg/kg IP Q3D的剂量给药的Gemzar^TM用作阳性对照。也将化合物A1以100mg/kg口服给药至荷MCF-7异种移植物动物和以150mg/kg口服给药至荷PC-3异种移植物动物，且化合物A1在这两组研究中显著抑制肿瘤生长。

还确定的是，化合物A1减少肿瘤中的CK2活性。对肿瘤中CK2活性的评价显示，来自用化合物A1处理的动物的肿瘤的CK2活性为来自未用化合物A1处理或用Gemzar^TM处理的动物的肿瘤的CK2活性的约40％。

评价化合物A1在动物血浆和肿瘤中的分布。在静脉内给药30mg/kg化合物A1、静脉内给药60mg/kg化合物A1和口服给药200mg/kg化合物A1的动物中，在血浆中分别确定了约6.8、2.2和9.5微摩尔浓度的化合物A1，及在肿瘤中分别确定了约42.9、7.0和6.4微摩尔浓度的化合物A1。

对于用化合物A1处理的肿瘤，还评价了作为生物标志的胱天蛋白酶染色。在用60mg/kg化合物A1处理(静脉内给药)的动物中，胱天蛋白酶-3细胞染色水平比未经处理的对照细胞高四倍。这些结果暗示，胱天蛋白酶-3染色可以是用于监测细胞增殖抑制和肿瘤抑制的有用生物标志。

还确定的是，化合物A1显著抑制A549(人肺细胞)和BX-PC3(人胰腺癌细胞)异种移植物小鼠中的肿瘤生长。口服给药化合物用于上述确定。

为了评价化合物A2，将化合物静脉内和腹膜内给药至荷瘤异种移植物小鼠。动物在右肋中皮下接种有5×10⁶个BC-PC3细胞。每周两次监测肿瘤，然后随着它们接近适于研究的大小，每日两次监测肿瘤。在进行研究的第一天，将动物随机分到处理组(n＝8)(对于阳性对照组和阴性对照组，n＝5)中，其中组平均肿瘤大小为97mm³。

组1 平均值 97.80 UTC

组1 平均值 96.95 Gemzar Q3D

组1 平均值 96.68 50mg/kg CX-5011IV BID×10天

组1 平均值 98.95 60mg/kg CX-5011IV QD×17天

组1 平均值 96.51 100mg/kg CX-5011IP BID×17天

差异％ 2.50

SD 1.01

动物接受17份剂量的媒介物、Gemzar(100mg/kg Q3D)或化合物(60mg/kgQD静脉内给药或100mg/kg BID腹膜内给药)。一个组(#3)接受10份剂量的化合物(50mg/kg BID静脉内给药)。在第1、4、7、11、13、15和18天记录肿瘤体积测量值和体重，且数据显示化合物A2显著抑制肿瘤进程(图4A)，同时不显著改变体重(图4B)。将化合物A2以50和60mg/kg静脉内给药和以100mg/kg腹膜内给药至荷MiaPaca异种移植物动物，这显著抑制肿瘤进程。还将化合物A2以30和60mg/kg静脉内给药和以200mg/kg口服给药至荷MDA-MB-231异种移植物动物，这显著抑制肿瘤进程。将化合物A2以100mg/kg QD×8和200mg/kg QD×6口服给药至荷MiaPaca异种移植物动物，这显著抑制肿瘤进程。化合物A2的葡甲胺盐(pH为10.0且浓度为10mg/mL)作为用于研究的口服制剂。

对化合物A2进行肿瘤药物代谢动力学研究，其中将化合物以30mg/kgQD×6静脉内给药。在第1、4和6天采集血浆、血液和肿瘤样品，且在每个时间点处死三只动物。约三天后达到稳态，终坡度降低，半衰期约翻倍，六天后最低浓度提高4-5倍，且在第4天和第6天之间没有显著差别。

将化合物A3静脉内给药至荷MiaPaca异种移植物动物，这也显著抑制肿瘤进程。

化合物A3

实施例9

对非CK2蛋白激酶活性的调节

描述了本发明所述化合物对非CK2蛋白激酶的体外调节活性。体外分析使用已知方案来进行(测定方案例如参见网址upstate.com/img/pdf/KP_Assay Protocol_Booklet_v3.pdf)。在测定中筛选本发明所述化合物并基于对非CK2蛋白激酶的调节活性和对CK2或PARP的特异性而进行优先排序。

实施例10

通过内皮血管形成测定来评价血管发生抑制

人内皮血管形成测定使用来自BD Biosciences的96孔BD BioCoat^TM血管发生系统来进行(使用制造商的推荐方案)。

简言之，在存在或不存在各种浓度的化合物A2的情况下，在96孔基质胶涂覆板的每个孔中，将HUVEC细胞(来自ATCC)以4×10⁵个细胞/ml悬浮在含有10％FBS的150μl培养基中。将板在37℃孵育18小时。细胞用钙黄绿素AM染色，且结果通过荧光显微镜或通过相差法来观察。观察到化合物A2在上述测定中当浓度范围为1至5μM时抑制血管形成。

实施例11

在不含细胞的体外测定中对蛋白激酶活性的调节

在不同蛋白激酶测定中测试数种化合物的生物活性。

在不含细胞的体外测定中对PIM-1激酶活性的调节

将试验化合物在95％[20mM MOPS(pH7.2)]、5％DMSO中的溶液(10mL)加到反应混合物中，所述反应混合物含有10μl 5×反应缓冲液(40mMMOPS(pH7.0)、5mM EDTA)、10μl底物肽(KKRNRTLTV，以1mM浓度溶解在水中)、10mL重组人PIM1(4ng，溶解在PIM1稀释缓冲液(20mM MOPS(pH7.0)；1mM EDTA；5％甘油；0.01％Brij 35；0.1％2-巯基乙醇；1mg/ml BSA)中)。通过加入10μl ATP溶液(49％(15mM MgCl₂、75μM ATP)；1％([γ³³P]ATP(原液为1mCi/100μl；3000Ci/mmol(Perkin Elmer))来引发反应并在30℃保持10分钟。反应用100μk 0.75％磷酸淬灭，然后转移到磷酸纤维素滤板(Millipore)中并过滤通过磷酸纤维素滤板(Millipore)。每个孔用0.75％磷酸洗涤4次后，使用Wallac发光计数器来测量残余的放射性。

在不含细胞的体外测定中对FLT-3激酶活性的调节

对FLT-3的抑制如下确定：在反应混合物中使用10μM ATP来测量重组人FLT-3对肽EAIYAAPFAKKK的磷酸化的被抑制程度，所述反应混合物含有20mM Hepes(pH7.5)、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.02％Brij35、0.02mg/ml BSA、0.1mM Na₃VO₄、2mM DTT和1％DMSO。

在标准化放射分析激酶测定中对蛋白激酶活性的调节

还测试了化合物对其它蛋白激酶的活性。蛋白激酶抑制IC₅₀数据使用针对每种激酶的标准化放射分析激酶测定来确定，所述测定需要相关激酶所致³³P标记的底物蛋白的滤器结合。每个IC₅₀值以10种药物浓度来确定。反应条件参见网址upstate.com/discovery/services/ic50profiler.q。

以下激酶抑制数据使用针对每种激酶的标准化放射分析激酶测定来确定，所述测定需要相关激酶所致³³P标记的底物蛋白的滤器结合。每个活性百分比以0.5μM药物浓度来确定。反应条件参见网址upstate.com/discovery/services/ic50_profiler.q。

实施例12

合成方法

方法1

将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(47mg，0129mmol)悬浮在甲醇(1mL)和水合肼(1mL)的混合物中。加入3滴DMF，将混合物在60-70℃搅拌2小时。真空除去挥发物。将所得物质悬浮在AcOEt/己烷中，过滤并干燥，得到5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酰肼，其为固体(47mg，100％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 364[M+1]⁺。

方法2

将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酰肼(1.0当量，21mg，0.057mmol)悬浮在原甲酸三乙酯(0.5mL)中并在微波反应器中使混合物在120℃反应80分钟。过滤一经冷却即形成的沉淀物并干燥，得到N-(3-氯苯基)-8-(1，3，4-噁二唑-2-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺，其为固体(12mg，56％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 374[M+1]⁺。

方法3

在80℃将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-甲酰胺(1.0当量，36mg)在N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇(2mL)中搅拌4小时。真空除去挥发物。加入乙酸(0.5mL)和水合肼(0.1mL)。将混合物在80℃搅拌1小时。加入水，过滤固体并干燥。在CH₂Cl₂和己烷的混合物中研磨后，分离N-(3-氯苯基)-8-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺，其为固体(22mg，67％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 373[M+1]⁺。

方法4

将3-溴吡啶-4-甲酸甲酯(1.0当量，1.76g，7.65mmol)、2-氨基苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，1.33g，7.67mmol)和碳酸铯(2.0当量，4.99g，15.31mmol)悬浮在二噁烷(15mL)中。混合物通过鼓泡氮气10分钟来脱气。加入PdCl₂(dppf)(0.05当量，280mg，0.383mmol)，将混合物回流搅拌2小时。过滤所得固体，用甲醇、水和甲醇洗涤并干燥。分离苯并[c][2，6]二氮杂萘-5(6H)-酮，其为灰白色固体(823mg，55％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 197[M+1]⁺。

方法5

将苯并[c][2，6]二氮杂萘-5(6H)-酮(1.0当量，813mg，4.15mmol)在磷酰氯(5.0当量，2mL，21.84mmol)和乙腈(10mL)中搅拌。将混合物回流搅拌5小时。将混合物倒在冰上，过滤所得固体并干燥。分离5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘，其为灰色固体(459mg，52％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 215[M+1]⁺。

方法6

将2-甲基-5-硝基苯甲酸(24g)溶解在甲醇(240mL)和浓硫酸(8mL)中。将混合物回流搅拌过夜。酯一经冷却即结晶出来。物质通过过滤来分离，得到2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯，其为白色固体(19.0g，74％收率)。一经浓缩母液并向其中加入水即分离第二批物质(4.92g，19％收率)。

将2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(5.06g)悬浮在甲醇(100mL)中。混合物通过鼓泡氮气15分钟来脱气。加入Pd/C 10％湿的Degussa E101NE/WW(260mg)并将混合物在氢气气氛(气囊)下搅拌过夜。过滤悬浮液并蒸发溶剂，得到5-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯，其为橙色油状物(4.18g，97％收率)。

将5-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯(1.0当量，3.75g)溶解在乙酸(70mL)中。历时60分钟逐份加入N-碘琥珀酰亚胺(1.0当量，5.27g)。将混合物在室温搅拌30分钟。蒸发乙酸。残余物用乙酸乙酯(80mL)稀释并用饱和碳酸钠(80mL)中和。有机层用1M硫代硫酸钠(2×40mL)洗涤，然后用水(2×40mL)和盐水(2×40mL)洗涤。物质通过快速硅胶色谱(梯度为10％至30％乙酸乙酯/己烷)来纯化，得到5-氨基-4-碘-2-甲基苯甲酸甲酯，其为黄色-橙色固体(3.19g，49％收率)。GCMS：＞95％纯度，m/z 291。¹H NMR(400MHz，DMSO，d_-6)δ2.30(s，3H)，3.78(s，3H)，5.27(br s，2H)，7.24(s，1H)，7.54(s，1H)。

方法7

将2-氨基-3-溴苯甲酸(1.00g)与甲醇(10mL)和浓硫酸(1ml)混合。将混合物回流搅拌31小时。蒸发溶剂，并小心加入饱和碳酸氢钠水溶液。固体用CH₂Cl₂(3×)萃取。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂，得到2-氨基-3-溴苯甲酸甲酯，其为半结晶固体(976mg，91％收率)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 230[M+1]⁺。

方法8

将2-氨基-3-溴苯甲酸甲酯(1.0当量，652mg，2.61mmol)和4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基硼酸(根据PCT专利申请WO2005/105814中描述的操作来制备，1.0当量，600mg，2.61mmol)与碳酸铯(2.0当量，1.699g，5.21mmol)在含有5％水的二噁烷(6mL)中混合。混合物通过鼓泡氮气10分钟来脱气。加入PdCl₂(dPPf)(0.05当量，95mg)并将反应混合物回流搅拌2小时。蒸发二噁烷，加入水并用CH₂Cl₂(3×)萃取物质。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥并真空除去溶剂。物质通过快速硅胶色谱来纯化(洗脱剂为0.5％MeOH/CH₂Cl₂)得到2-氨基-3-(4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)苯甲酸甲酯，其为浅绿色泡沫(244mg，31％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 356[M+1]⁺。

方法9

在氮气气氛下将2-氨基-3-(4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(1.0当量，244mg，0.686mmol)溶解在无水THF(1.5mL)中。通过注射器滴加NaHMDS溶液(1.0M于THF中，2.0当量，1.4mL，1.4mmol)。将所得悬浮液在室温搅拌1小时。反应通过加入饱和氯化铵水溶液来淬灭。过滤形成的固体并干燥。在甲醇中研磨并过滤后，分离5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯，其为灰色蓬松固体(93mg，53％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 255[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的两步操作由4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基硼酸和合适的2-碘胺或2-溴胺来制备：

表27.

方法10

在120℃将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(1.0当量，85mg，0.334mmol)在磷酰氯(2mL)中搅拌2小时。真空除去溶剂。加入冰和水。过滤所得固体并干燥，得到5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯，其为固体(84mg，92％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 273[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备：

表28.

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法11

在120℃的微波加热条件下将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(1.0当量，48mg，0.176mmol)和3-氯苯胺(3.0当量，60μl，0.56mmol)在NMP(0.3mL)中搅拌10分钟。加入水并过滤分离固体。在甲醇中研磨并过滤，得到5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯，其为固体(29mg，45％收率)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 364[M+1]⁺。

在60℃将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(29mg)在乙醇(2mL)和6N NaOH水溶液(1mL)中搅拌30分钟。加入水和HCl至pH＝1。过滤所得沉淀物，用水洗涤并干燥，得到物质。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z350[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表29.

方法12

在70℃使5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸(20mg)与HOBt.H₂O(40mg)、氯化铵(40mg)、DIEA(100μl)和EDCI(50mg)在NMP(0.4mL)中反应1小时。加入水，过滤沉淀物并干燥。在甲醇中研磨并过滤后，分离5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺，其为固体(8mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 349[M+1]⁺

方法13

将5-氯吡啶并[4，3-c][1，7]二氮杂萘(10mg)与3-氯苯胺(60μl)在NMP(0.3mL)中混合，并将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤所得固体并干燥。分离N-(3-氯苯基)吡啶并[4，3-c][1，7]二氮杂萘-5-胺，其为固体(5mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 307[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表30.

方法14

将4-氯吡啶-3-甲酸甲酯(1.68g，6.05mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(3.17g，13.70mmol)、Cs₂CO₃(8.90g，27.32mmol)和PdCl₂(dppf)(335mg，0.46mmol)于二噁烷(5％H₂O，60mL)中的溶液加热回流40分钟。将反应混合物冷却至室温，过滤收集沉淀物，洗涤(先后用二噁烷、H₂O和MeOH)，得到所需内酰胺(2.07g，90％)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 255[M+1]⁺。

方法15

将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，7]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(650mg，2.56mmol)于POCl₃(4.0mL)中的溶液在120℃加热2.5小时。减压浓缩反应混合物并用ACN(乙腈)(20mL)和H₂O(40mL)稀释。溶液用NaOH(3N)中和，过滤收集所得沉淀物，得到所需氯化物(600mg，86％)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z273[M+1]⁺。

将5-氯苯并[c][2，7]二氮杂萘-8-甲酸甲酯(60mg，0.22mmol)和3-氯苯胺(50μl)于NMP(1.0mL)中的溶液在80℃加热1小时。加入NaOH水溶液(3N，0.3mL)并再继续加热30分钟。将反应混合物冷却至室温并加入HCl(1N)直到形成沉淀物。过滤收集固体并用ACN洗涤，得到所需产物(50mg，77％)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 350[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表31.

方法16

将3-溴噻吩甲酸甲酯(1.0当量，2.42g，10.95mmol)、2-氨基-4-氰基苯基硼酸盐酸盐(1.05当量，2.28g，11.49mmol)和碳酸铯(2.0当量，7.13g，21.9mmol)悬浮在含有5％水的二噁烷(25mL)中。混合物通过鼓泡氮气10分钟来脱气。加入PdCl₂(dppf)(0.05当量，400mg，0.55mmol)，并将混合物回流搅拌1.5小时。将混合物冷却，过滤固体，用二噁烷、水和甲醇洗涤。真空干燥后，分离4-氧代-4，5-二氢噻吩并[2，3-c]喹啉-7-甲腈，其为固体(1.81g，73％收率)。LCMS(ES)m/z 227[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表32.

方法17

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[2，3-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，1.22g，5.40mmol)在乙腈(12mL)和磷酰氯(5.0当量，2.5mL，26.8mmol)中回流搅拌6小时。真空除去挥发物，加入水和冰。过滤所得固体，用水洗涤并干燥，得到4-氯噻吩并[2，3-c]喹啉-7-甲腈，其为浅棕色固体(1.18g，90％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 245[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备：

表33.

方法18

方法19

将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸甲酯(10mg，0.036mmol)悬浮在NMP(0.1mL)和3-氨基甲基吡啶(0.1mL)中。在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。将反应混合物溶解在NMP和MeOH的混合物中，且酯中间体通过制备性HPLC来纯化。对溶剂进行Genevac蒸发后，将所得固体溶解在THF和MeOH的1∶1混合物(0.6mL)中。加入5N LiOH水溶液(0.2mL)并将混合物在室温搅拌17小时。加入水和HCl水溶液，通过制备性HPLC来纯化4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸的溶液。通过Genevac蒸发来除去溶剂，得到化合物4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸，其为白色固体(10mg，62％收率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 336[M+1]⁺。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ5.23(s，2H)，7.71-7.78(m，4H)，8.11(d，J＝5.6，1H)，8.47(d，J＝8.0，1H)，8.49(d，J＝0.8，1H)，8.62(d，J＝5.2，1H)，8.97(s，1H)ppm。

下表中的分子通过与方法18和19类似的操作使用合适的原料来制备。

表34.

方法20

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表35.

方法21

向叔丁醇钾(59mg，0.53mmol)和用EtOH(乙醇)洗涤的兰尼镍于EtOH(50mL)中的溶液中加入4-(3-氟苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(560mg，1.75mmol)于EtOH(5mL)中的溶液。向反应混合物中通入氢气并在室温搅拌3小时。过滤通过硅藻土以除去兰尼镍，减压除去溶剂。在Et₂O(乙醚)中研磨，得到所需胺(300mg，53％)，其为白色固体。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 324[M+1]⁺。

方法22

向7-(氨基甲基)-N-(3-氟苯基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(30mg，0.09mmol)于DCM(二氯甲烷)(2mL)中的溶液中加入异氰酸苯酯(10μl，0.09mmol)。立即出现沉淀物并对其进行过滤收集，得到所需脲，其为白色固体。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 443[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作由相应的胺和异氰酸酯或氯化物来制备。

表36.

方法23

将4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酸(1.0当量，100mg)与氯化铵(2.0当量，34mg)、DIEA(114μl)、HOBt.H₂O(2.0当量，86mg)和EDCI(2.0当量，122mg)在NMP(3mL)中混合。将混合物在70℃搅拌直到LCMS监测表明反应完成。加入水，将pH调整至10，且物质用CH₂Cl₂萃取。蒸发溶剂后，物质通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲酰胺的TFA(三氟乙酸)盐，其为黄色固体(92mg，69％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 315[M+1]⁺。

下表中的分子使用类似的操作来制备。

表37.

结构 MW LCMS(ES)m/z[M+1]⁺

方法24

将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，350mg，1.55mmol)与N-溴琥珀酰亚胺(1.1当量，303mg，1.70mmol)在乙酸(4mL)中混合。将混合物在100℃搅拌4小时。将混合物冷却至80℃，再加入NBS(N-溴琥珀酰亚胺)(303mg)并将混合物搅拌过夜。加入水，过滤物质并干燥。在甲醇中研磨并过滤，得到2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为灰色固体(396mg，84％收率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z 305[M]⁺，307[M+2]⁺。

该粗物质在乙腈(4mL)中用磷酰氯(5.0当量，0.6mL，6.33mmol)回流处理4小时。再加入POCl₃(2mL)并将混合物在110℃加热7小时。除去挥发物，加入冰并过滤固体。在乙酸乙酯/己烷中研磨并过滤后，分离2-溴-4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为固体(324mg，78％收率)。LCMS(ES)：＞80％纯度，m/z 323[M]⁺，325[M+2]⁺。

将2-溴-4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，309mg，0.955mmol)和N，N-二甲基乙二胺(3.0当量，312μl，2.85mmol)在NMP(1ml)中混合。在微波条件下将混合物在100℃加热10分钟。加入水并过滤固体。物质通过在热乙酸乙酯中研磨来纯化。分离2-溴-4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为固体(252mg，70％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 375[M]⁺，377[M+2]⁺。

方法25

将2-溴-4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(20mg)与叠氮化钠(50mg)和氯化铵(50mg)在DMF中混合。将混合物在120℃搅拌3小时。加入水并过滤分离固体(6mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 418[M]⁺，420[M+2]⁺。

方法26

将2-溴-4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，55mg，0.146mmol)、苯硼酸(2.0当量，36mg，0.295mmol)、碳酸铯(2.0当量，95mg，0.292mmol)和PdCl₂(dppf)(0.05当量，5mg，0.068mmol)在含有5％水的二噁烷(0.5mL)中混合。在微波条件下将混合物在120℃加热10分钟。加入水并过滤，分离4-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)-2-苯基噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为固体。LCMS(ES)m/z 373[M+1]⁺。

将该固体溶解在DMF(0.5mL)中，在120℃用叠氮化钠(100mg)和氯化铵(100mg)处理1.5小时。加入水并过滤固体，得到N1，N1-二甲基-N2-(2-苯基-7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基)乙烷-1，2-二胺(35mg)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 416[M+1]⁺。

方法27

将苯酚(2.0当量，85mg)溶解在无水DMF中。加入60％氢化钠(2.0当量，36mg)，并将反应混合物搅拌数分钟。向混合物中加入4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，110mg)并将全部反应混合物在100℃搅拌两天。加入水，过滤固体并干燥。分离4-苯氧基噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈，其为固体(114mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 303[M+1]⁺。

方法28

在氮气气氛下向经烘箱干燥的烧瓶中加入叠氮化钠(1.4当量，84mg)。通过注射器加入Et₂AlCl(二乙基氯化铝)(1.4当量，1.08mL浓度为1.8M的甲苯溶液)。将混合物在室温搅拌4小时。将4-苯氧基噻吩并[3，2-c]喹啉-7-甲腈(1.0当量，20mg)加到小瓶中。加入Et₂AlN₃溶液(0.15mL)并将所得混合物在80℃搅拌5天。混合物用NaOH溶液处理并加入一些亚硝酸钠(pH＝13-14)。用6NHCl将pH调整至1.5。物质用乙酸乙酯萃取。使用饱和K₂CO₃水溶液从有机相中萃取物质。用6N HCl将pH调整至2.5，且物质用乙酸乙酯萃取。蒸发溶剂，得到4-苯氧基-7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 303[M+1]⁺。

下表中的分子使用与方法27和方法28类似的操作来制备。

表38.

各种化合物的生物活性总结在下表中。

提供制备本发明一些化合物(包括式IA、IB和IC化合物)的额外方法。

方法29：卤代苯胺的合成

在室温使2-氨基-5-氟苯甲酸甲酯(1.0当量，8.47g，0.051mol)与N-碘琥珀酰亚胺(1.03当量，11.6g，0.0515mol)在乙酸(100mL)中反应20分钟。真空除去溶剂。加入K₂CO₃水溶液，且化合物用乙酸乙酯萃取。有机层先后用1M硫代硫酸钠、水和盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥并蒸发溶剂后，分离2-氨基-5-氟-3-碘苯甲酸甲酯，其为紫色固体(14.21g，96％收率)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ3.8(s，3H)，6.3(br s，2H)，7.6(m，2H)ppm。

方法30

硼酸酯使用Alessi et al.，J.Org.Chem.，2007，72，1588-1594所述的操作分两步来制备。

方法31

步骤A

将2-氨基-3-溴苯甲酸甲酯(1.0当量，652mg，2.61mmol)和4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基硼酸(根据PCT专利申请WO2005/105814中描述的操作来制备，1.0当量，600mg，2.61mmol)与碳酸铯(2.0当量，1.699g，5.21mmol)在含有5％水的二噁烷(6mL)中混合。混合物通过鼓泡氮气10分钟来脱气。加入PdCl₂(dpPf)(0.05当量，95mg)并将反应混合物回流搅拌2小时。蒸发二噁烷，加入水并用CH₂Cl₂(3×)萃取物质。用Na₂SO₄干燥合并的萃取物并真空除去溶剂。物质通过快速硅胶色谱(洗脱剂为0.5％MeOH/CH₂Cl₂)来纯化，得到2-氨基-3-(4-(二异丙基氨甲酰基)吡啶-3-基)苯甲酸甲酯，其为浅绿色泡沫(244mg，31％收率)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 356[M+1]⁺。

步骤B

以下化合物使用类似的化学反应通过使合适的硼酸酯和酸与合适的2-卤代苯胺反应来制备。

表40.

方法32

以下化合物使用类似的化学反应由合适的内酰胺来制备：

表41.

本发明一些化合物(包括式IA、IB和IC化合物)可根据以下一般方法使用合适的物质来制备。

以下分子可使用一般方法1的化学反应来制备：

以下分子可使用一般方法2的化学反应来制备：

以下分子可使用一般方法3的化学反应来制备：

方法33

步骤A

步骤B

在60℃将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(29mg)在乙醇(2mL)和6N NaOH水溶液(1mL)中搅拌30分钟。加入水和HCl至pH＝1。过滤所得沉淀物，用水洗涤并干燥，得到5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸，其为固体。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 350[M+1]⁺。

以下化合物使用类似的化学反应来制备。

表42.

方法34

在70℃使5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸(20mg)在NMP(0.4mL)中与HOBt.H₂O(40mg)、氯化铵(40mg)，DIEA(100μl)和EDCI(50mg)反应1小时。加入水，过滤沉淀物并干燥。在甲醇中研磨并过滤后，分离5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺，其为固体(8mg).LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 349[M+1]⁺。

以下化合物使用类似的化学反应通过使合适的羧酸与取代或未取代的合适胺反应来制备。

表43.

方法35

将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(19mg，0.052mmol)悬浮在无水THF(0.5mL)中。加入浓度为1.0M的LiAlH₄的THF溶液(0.2mL，0.2mmol)并将混合物在室温搅拌3小时。再加入LiAlH4溶液(0.3mL，0.3mmol)并将混合物在60℃搅拌45分钟。加入水并将混合物在室温搅拌过夜。加入甲醇并使混合物过滤通过硅藻土。蒸发溶剂。物质通过硅胶制备性TLC(5％MeOH/CH₂Cl₂)和制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到(5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-基)甲醇的TFA盐(4mg)，其为固体。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z 336[M+1]⁺。

方法36

将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(47mg)与甲醇(1ml)和水合肼(1ml)混合。加入2-3滴DMF并将混合物在60℃搅拌2小时。除去挥发物并再加入试剂甲醇(1ml)和肼(1ml)，将混合物在60℃再搅拌2小时。真空除去挥发物且物质使用AcOEt/己烷来分散。过滤并干燥，得到5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰肼，其为固体(29mg，62％收率)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 364[M+1]⁺。

方法37

在120℃将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰肼(24mg)在原甲酸三乙酯(1mL)中搅拌4小时。过滤固体并在CH₂Cl₂/MeOH中研磨。过滤除去杂质(主要是原料)并浓缩含有所需化合物的滤液。物质通过硅胶制备性TLC(5％甲醇/CH₂Cl₂)来纯化，得到N-(3-氯苯基)-7-(1，3，4-噁二唑-2-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺，其为固体(8mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z374[M+1]⁺。

方法38

将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺(12mg，0.034mmol)悬浮在二氯乙烷(0.2mL)中。先后加入氯化钠(70mg)和磷酰氯(20μl)。将混合物在80℃搅拌1.5小时。再加入磷酰氯(50μl)并将混合物在80℃加热8小时。真空除去挥发物。加入水并过滤固体。物质通过硅胶制备性TLC(5％MeOH/CH₂Cl₂)来纯化，得到6mg 5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲腈。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 331[M+1]⁺。

方法39

在120℃在小瓶中将5-(2-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲腈(50mg，0.151mmol)在DMF(0.5mL)、叠氮化钠(88mg，1.35mmol)和氯化铵(72mg，1.35mmol)存在下搅拌2小时。加入水，降低pH并过滤所得固体。将物质溶解在NMP中并通过制备性HPLC来纯化。进行Genevac蒸发，得到N-(2-氯苯基)-7-(1H-四唑-5-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺的TFA盐(8mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z 374[M+1]⁺，346[M+1-N2]⁺。

方法40

在80℃将5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺(18.5mg)在DMF-DMA(0.7mL)中搅拌过夜。蒸发溶剂。加入水合肼(1mL)和乙酸(1mL)并将混合物在80℃搅拌一小时。加入水并过滤所得固体。将物质悬浮在甲醇中，过滤并干燥，得到N-(3-氯苯基)-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺，其为黄色固体(4.8mg)。LCMS(ES)：＞90％纯度，m/z373[M+1]⁺。

方法41

将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸甲酯(2.17g，8.53mmol)与6N氢氧化钠水溶液(10mL)和乙醇(40mL)混合。将混合物回流搅拌5小时。冷却后，加入水且混合物用6N HCl酸化。过滤并干燥后，分离5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸，其为灰色固体(1.91g，93％收率)。LCMS(ES)：m/z 241[M+1]⁺。

方法42

将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酸(1.0当量，1.91g，7.96mmol)与HOBt.H₂O(2.0当量，2.15g，15.91mmol)和NH₄Cl(8.0当量，3.41g，63.6mmol)在NMP(30mL)中混合。加入DIEA(4.0当量，5.5mL，31.57mmol)和EDCI(2.0当量，3.05g，15.91mmol)并在密闭容器中将混合物在80℃搅拌2.5小时。加入水和盐水。过滤固体，用水洗涤，用甲醇洗涤并在真空烘箱中干燥。分离5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺，其为灰白色固体(1.81g，96％收率)。LCMS(ES)：m/z 240[M+1]⁺。

方法43

在80℃将5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-7-甲酰胺(1.81g，7.59mmol)在DMF-DMA(20mL)中搅拌1.5小时。真空除去挥发物。将该操作重复数次直到原料的量(通过LCMS来检测)保持不变。蒸发挥发物后，将粗中间体悬浮在乙酸(40mL)中。滴加水合肼(4mL)并将反应混合物在无外部温度控制的情况下搅拌10分钟。然后将反应混合物在80℃搅拌45分钟，此时混合物变成稠厚物质。加入水并过滤固体。用水洗涤并干燥后，分离7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5(6H)-酮，其为浅灰色固体(1.84g，92％收率)。LCMS(ES)：m/z 264[M+1]⁺。

方法44

步骤A

在氮气气氛下将7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5(6H)-酮(1.8g，6.84mmol)与磷酰氯(3.2mL)在乙腈(20mL)中混合。将混合物在100℃搅拌过夜。真空除去挥发物。将所得固体悬浮在CH₂Cl₂和一些MeOH中。过滤并干燥后，分离粗5-氯-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘(2.04g)，其为浅绿色固体。LCMS(ES)m/z 282[M+1]⁺。

步骤B

将步骤A的产物(57mg)与苯胺(100μl)在NMP(0.5mL)中混合，在微波炉中将混合物在120℃加热10分钟。再加入NMP(1.5mL)并过滤溶液。通过制备性HPLC来纯化并进行Genevac蒸发，得到固体，所述固体通过在AcOEt/己烷中研磨来进一步纯化。分离N-苯基-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺的TFA盐，其为固体(34mg)。LCMS(ES)：＞95％纯度，m/z339[M+1]⁺。

下表中描述的分子使用与方法40和44中所述类似的化学反应来制备：

表44.

以下分子可使用类似的化学反应来制备：

提供制备本发明一些化合物(包括式IA、IB和IC化合物)的其它方法。

方法45

在100℃将2-氯-4-氟硝基苯(1.0当量，1g，5.7mmol)、N-甲基哌嗪(1.2当量，1.18g，6.84mmol)和碳酸钾(2.0当量，1.6g，11.6mmol)在DMF中搅拌3小时。将混合物冷却并用水稀释。物质用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并真空蒸发溶剂。在乙醚中研磨并过滤后，分离1-(3-氯-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪，其为固体(0.9g，62％)。LCMS(ES)：m/z 256[M+1]⁺。将该物质与兰尼镍(0.2g)一起悬浮在MeOH(20mL)中并在氢气气氛下搅拌过夜。催化剂通过硅藻土来滤出。蒸发溶剂，得到2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺，其为深棕色油状物(0.68g，86％)。LCMS(ES)：m/z 226[M+1]⁺。

方法46

2-氯-4-(2-吗啉代乙氧基)苯胺使用专利申请WO2008/42282中描述的方案由2-氯-4-氟硝基苯和4-(2-羟基乙基)吗啉分两步来制备。

方法47

2-氯-4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯胺根据一般方法2中描述的操作来制备。

方法48

2-氟-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺使用专利申请WO2007/7152中描述的操作分两步来制备。

方法49

4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-氟苯胺使用方法46中描述的操作分两步来制备。

方法50

2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺使用专利申请US2006/155128中描述的操作以一步来制备。

方法51

步骤A

将4-氨基-3-氯苯甲腈加到小瓶中。加入NaHMDS(浓度为1M的THF溶液，0.2mL)并将溶液在80℃搅拌5分钟。加入5-氯-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘(30mg)于NMP(0-5mL)中的悬浮液并将溶液在80℃搅拌30分钟。冷却混合物，加入几滴HCl和NMP(1mL)且混合物通过制备性HPLC来纯化，得到4-(7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-基氨基)-3-氯苯甲腈(25mg)。

步骤B

来自步骤A的物质在无水THF(1mL)中用LiAlH₄(20mg)处理并将溶液在60℃搅拌数小时。然后反应混合物用Na₂SO₄.10H₂O处理并过滤。残余物通过制备性HPLC来纯化，得到N-(4-(氨基甲基)-2-氯苯基)-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺，其为TFA盐(3mg)。LCMS(ES)：＞85％纯度，m/z 402[M+1]⁺，385[M+1-NH₃]⁺。

方法52

使5-氯-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘与有机硼烷在苏楚基反应条件下反应，得到化合物m。

以下是可用于与5-氯-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘进行苏楚基偶联反应的有机硼烷的实例。

方法57

5-苯基-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘的合成：

在氮气气氛下向5-氯-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘(21.3mg)、碳酸铯(49mg)和苯基硼酸(19mg)于二噁烷(1mL)中的溶液中加入PdCl₂(dppf)。将混合物在120℃[300W(微波)]搅拌10分钟。加入水且用二氯甲烷萃取后得到的残余物通过制备性HPLC来纯化。LCMS(ES)：m/z[M+1]⁺324。

在表45和46中提供本发明代表性化合物的生物数据：

表45.生物数据

表46.生物数据

下表为化合物A当ATP为0.5μM时在不同激酶中的活性％数据。

表47.

激酶	活性％	激酶	活性％	激酶	活性％
						DYRK2(h)	-4	Mer(h)	38	EphB4(h)	87
HIPK2(h)	-1	ARK5(h)	39	cKit(h)	89
						Pim-1(h)	1	JAK2(h)	39	CaMKI(h)	90
HIPK3(h)	2	PKCθ(h)	39	DDR2(h)	90
						Pim-2(h)	2	PKG1α(h)	40	Fer(h)	90
Flt3(h)	5	Aurora-A(h)	43	Ros(h)	90
						Rsk1(h)	6	KDR(h)	43	ASK1(h)	92
TrkA(h)	6	Ret(h)	43	FGFR2(h)	93
						Rsk3(h)	7	MST1(h)	44	PDGFRβ(h)	94
cKit(D816H)(h)	8	Fyn(h)	49	ROCK-I(h)	94
						IRAK4(h)	12	CDK7/cyclinH/MAT1(h)	50	EphA5(h)	95
Pim-3(h)	12	MSK2(h)	51	EphA7(h)	96
						Rsk4(h)	12	EGFR(T790M)(h)	53	Plk1(h)	96

MELK(h)	13	Mnk2(h)	54	PDGFRα(h)	97
						Rsk2(h)	13	EGFR(L858R)(h)	56	PKA(h)	97
CK1γ2(h)	17	CK2(h)	58	PRAK(h)	97
						Flt4(h)	17	EGFR(L861Q)(h)	60	ZAP-70(h)	97
Fms(h)	17	Hck(h)	61	PKBα(h)	98
						PDGFRα(D842V)(h)	17	Flt1(h)	62	mTOR(h)	99
EGFR(T790M，L858R)(h)	20	LOK(h)	63	PKCα(h)	99
						CK1γ3(h)	21	cSRC(h)	64	Ron(h)	99
Lck(h)	21	c-RAF(h)	66	FGFR1(h)	100
						Met(h)	22	MEK1(h)	72	ZIPK(h)	100
GSK3β(h)	23	CK2α2(h)	73	IGF-1R(h)	101
						Flt3(D835Y)(h)	24	DRAK1(h)	75	PDK1(h)	101
MLK1(h)	24	Lyn(h)	75	PAK2(h)	106
						Yes(h)	26	ErbB4(h)	77	SRPK1(h)	107

TAK1(h)	28	MAPK1(h)	77	CHK1(h)	108
						CK1γ1(h)	30	p70S6K(h)	77	IKKα(h)	108
FAK(h)	30	Snk(h)	79	Tie2(h)	108
						CDK2/cyclihA(h)	31	MKK7β(h)	81	Rse(h)	109
CDK1/cyclinB(h)	37	Fes(h)	84	eEF-2K(h)	111
						CDK9/cyclin T1(h)	37	PKD2(h)	86	EGFR(h)	111
cKit(V560G)(h)	38	Abl(h)	87	IR(h)	112

估测的化合物A的IC₅₀值如下：

化合物

激酶

IC₅₀(nM)

A	Flt3(h)	104
			A	Pim-1(h)	1
A	Pim-2(h)	6
			A	Pim-3(h)	86
A	Rsk1(h)	41
			A	Rsk2(h)	72
A	Rsk3(h)	73

下表为化合物B当ATP为0.5μM时在不同激酶中的活性％数据。

表48.

激酶	活性％	激酶	活性％	激酶	活性％
						HIPK3(h)	-1	JAK2(h)	55	PDK1(h)	88
Flt3(D835Y)(h)	2	EGFR(L858R)(h)	56	EphA7(h)	90
						HIPK2(h)	2	GFR(T790M，L858R)(h	59	IGF-1R(h)	90
DYRK2(h)	5	CaMKI(h)	62	CHK1(h)	91
						Flt3(h)	7	Hck(h)	62	SRPK1(h)	91
cKit(D816H)(h)	9	CDK6/cyclinD3(h)	63	Ab1(h)	92
						Pim-1(h)	9	CK1γ2(h)	63	ASK1(h)	93
MELK(h)	14	MSK2(h)	65	eEF-2K(h)	93
						DRAK1(h)	15	Pim-3(h)	65	EphA5(h)	93
PDGFRα(D842V)(h)	15	Flt1(h)	66	FGFR1(h)	93
						CDK2/cyclinA(h)	17	c-RAF(h)	69	Tie2(h)	93
CDK7/cyclinH/MAT1(h)	17	CK1γ1(h)	71	Fes(h)	94
						CDK1/cyclinB(h)	18	Ret(h)	73	FGFR2(h)	94

CDK9/cyclin T1(h)	18	cSRC(h)	74	PDGFRβ(h)	94
						ZIPK(h)	19	KDR(h)	75	IR(h)	95
Rsk1(h)	21	Lyn(h)	75	NEK2(h)	95
						TrkA(h)	23	MKK7β(h)	75	Ron(h)	95
Lck(h)	24	EGFR(T790M)(h)	76	Met(h)	96
						GSK3β(h)	25	Plk1(h)	76	PKCα(h)	97
cKit(V560G)(h)	33	Aurora-A(h)	77	ROCK-I(h)	97
						Mnk2(h)	33	ErbB4(h)	77	ARK5(h)	98
PKG1α(h)	34	MLK1(h)	77	IKKα(h)	99
						CK1γ3(h)	38	TAK1(h)	79	PKBα(h)	99
Mer(h)	39	MST1(h)	80	ALK(h)	100
						Rsk2(h)	40	IRAK4(h)	81	PKA(h)	100
Rsk3(h)	40	Snk(h)	82	EGFR(h)	101
						Flt4(h)	41	PKCθ(h)	83	mTOR(h)	101

Rsk4(h)	41	PRAK(h)	84	Plk3(h)	102
						Fms(h)	42	MAPK1(h)	86	Fer(h)	103
Yes(h)	44	PKD2(h)	86	MAPKAP-K2(h)	104
						Pim-2(h)	46	LOK(h)	87	EphB4(h)	105
CK2(h)	48	p70s6K(h)	87	PDGFRα(h)	105
						Fyn(h)	49	Rse(h)	87	FAK(h)	106
CK2α2(h)	51	cKit(h)	88	ZAP-70(h)	106
						EGFR(L861Q)(h)	54	MEK1(h)	88	PAK2(h)	108

将本发明引用的每篇专利、专利申请、公开出版物和文献并入本发明作为参考。对上述专利、专利申请、公开出版物和文献的引用并非承认它们中的任意一篇为相关现有技术，其也不构成对这些公开出版物或文献的内容或日期的任意承认。

可对前述内容进行修改而不背离本发明基本方面。尽管已经就一个或多个具体的实施方案而基本详细地描述了本发明，但本领域技术人员会意识到的是，可对本申请具体披露的实施方案进行修改，且这些修改和改进在本发明范围和主旨内。本文示例性描述的本发明可在本文没有具体披露的任意要素存在下来适当地实施。因此，例如在本发明每种情况下，术语“包含”、“基本由...组成”和“由...组成”中的任一个可用另外两个术语中的任一个代替。因此，所用术语和表达方式用作进行描述而非进行限制的术语，不排除所示和所述特征或其部分的等同形式，且应该理解的是，各种修改在本发明范围内是可能的。

本发明代表性实施方案示于以下方面，且对本发明进行说明而非限制。

E1.式IA化合物或其可药用盐：

其中

且其中同一原子上或相邻原子上的两个R可连接形成任选含有N、O或S中的一个或多个的3-8元环，；

每个R⁴⁰为H或选自如下的任选取代的基团：C₁-C₆烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；

每个R⁵⁰独立为选自如下的任选取代的基团：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10杂烷基、任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8碳环和任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合的C_3-8杂环；

在每个-NR⁴⁰R⁵⁰中，R⁴⁰和R⁵⁰与N一起可形成任选取代的3-8元环，所述3-8元环可任选含有选自N、O和S的额外杂原子作为环成员；及

每个R^3P表示极性取代基。

E2.实施方案E1的化合物，其中Z⁶⁰为N，及Z⁷⁰为CH。

E3.实施方案E1的化合物，其中Z⁷⁰为N，及Z⁶⁰为CH。

E4.实施方案E1、E2或E3的化合物、其中R⁶⁰和R⁴⁰各自为H。

E5.实施方案E1至E4中任一个实施方案的化合物，其中R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环。

E6.实施方案E1至E5中任一个实施方案的化合物，其中R⁵⁰为未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基，所述取代基选自卤素、氰基、CF₃、-OCF₃、COOR⁴⁰和SO₂NR⁴⁰R⁵⁰，且这些取代基中的一个或多个可为选自如下的任选取代的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基。

E7.实施方案E1的化合物，其为式IB化合物或其可药用盐：

其中R³⁰如就实施方案1所定义，

及R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环；

且每个Φ独立表示任选取代的苯基。

E8.实施方案E1的化合物，其为式IC化合物或其可药用盐：

其中R³⁰如就实施方案1所定义，

及R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环；

且每个Φ独立表示任选取代的苯基。

E9.实施方案E7或E8的化合物，其中Φ为未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基，所述取代基选自卤素、氰基、CF₃、-OCF₃、COOR⁴⁰和SO₂NR⁴⁰R⁵⁰，且这些取代基中的一个或多个可为选自如下的任选取代的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基。

E10.实施方案E1至E5中任一个实施方案的化合物，其中R⁵⁰为任选取代的C_3-8碳环或任选取代的C_3-8杂环，所述C_3-8碳环和C_3-8杂环各自可任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合。

E11.实施方案E10的化合物，其中所述任选取代的C_3-8碳环或任选取代的C_3-8杂环为任选取代的芳族环或任选取代的杂芳族环。

E12.一种化合物或其可药用盐，所述化合物选自：

E13.式L化合物或其可药用盐：

其中

或每个R³⁰和每个R⁶⁰可为卤素、OR、NR₂、NROR、NRNR₂、SR、SOR、SO₂R、SO₂NR₂、NRSO₂R、NRCONR₂、NRCSNR₂、NRC(＝NR)NR₂、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR₂、OOCR、COR或NO₂，

且其中同一原子上或相邻原子上的两个R可连接形成任选含有N、O或S中的一个或多个的3-8元环；

每个R^3P表示极性取代基；及

每个W表示任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或任选取代的C_3-8环烷基环。

E14.实施方案E13的化合物，其为式L-A或式L-B化合物或其可药用盐：

E15.实施方案E13或E14的化合物，其中R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环。

E16.一种药物组合物，其包含实施方案E1至E12中任一个实施方案的化合物和可药用赋形剂。

E17.一种药物组合物，其包含实施方案E13、E14或E15的化合物和可药用赋形剂。

E18.一种抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效抑制所述细胞增殖量的实施方案E1至E17中任一个实施方案的化合物或组合物接触。

E19.实施方案E18的方法，其中所述细胞在癌细胞系中。

E20.实施方案E19的方法，其中所述癌细胞系为乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系、胰腺癌细胞系、肺癌细胞系、造血系统癌症细胞系、结肠直肠癌细胞系、皮肤癌细胞系或卵巢癌细胞系。

E21.实施方案E18或E19的方法，其中所述细胞在受试者的肿瘤中。

E22.实施方案E18至E21中任一个实施方案的方法，其中使细胞与具有实施方案E1至E17中任一个实施方案的结构的化合物接触，从而诱导细胞凋亡。

E23.一种治疗与异常细胞增殖有关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗细胞增殖性病症量的实施方案E1至E17中任一个实施方案的化合物或组合物。

E24.实施方案E23的方法，其中所述细胞增殖性病症为肿瘤相关癌症。

E25.实施方案E24的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、淋巴结癌、结肠癌、前列腺癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、肾癌、血液癌症和心脏癌症。

E26.实施方案E23的方法，其中所述细胞增殖性病症为非肿瘤性癌症。

E27.实施方案E26的方法，其中所述非肿瘤性癌症为造血系统癌症。

E28.实施方案E27的方法，其中所述造血系统癌症为急性骨髓性白血病。

E29.实施方案E28的方法，其中所述白血病为顽固性AML，或其中所述AML与突变的Flt3有关。

E30.一种在受试者中治疗疼痛或炎症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗所述疼痛或所述炎症量的实施方案E1至E17中任一个实施方案的化合物或组合物。

Claims

1.式IA化合物或其可药用盐：

其中

每个R^3P表示极性取代基。

2.权利要求1的化合物，其中Z⁶⁰为N，及Z⁷⁰为CH。

3.权利要求1的化合物，其中Z⁷⁰为N，及Z⁶⁰为CH。

4.权利要求1的化合物、其中R⁶⁰和R⁴⁰各自为H。

5.权利要求1的化合物，其中R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环。

6.权利要求1的化合物，其中R⁵⁰为未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基，所述取代基选自卤素、氰基、CF₃、-OCF₃、COOR⁴⁰和SO₂NR⁴⁰R⁵⁰，且这些取代基中的一个或多个可为选自如下的任选取代的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基。

7.权利要求1的化合物，其为式IB化合物或其可药用盐：

其中R³⁰如就权利要求1所定义，

及R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环；

且每个Φ独立表示任选取代的苯基。

8.权利要求1的化合物，其为式IC化合物或其可药用盐：

其中R³⁰如就权利要求1所定义，

及R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环；

且每个Φ独立表示任选取代的苯基。

9.权利要求8的化合物，其中Φ为未取代的苯基或取代有1-3个取代基的苯基，所述取代基选自卤素、氰基、CF₃、-OCF₃、COOR⁴⁰和SO₂NR⁴⁰R⁵⁰，且这些取代基中的一个或多个可为选自如下的任选取代的基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基和C2-C6炔基。

10.权利要求1的化合物，其中R⁵⁰为任选取代的C_3-8碳环或任选取代的C_3-8杂环，所述C_3-8碳环和C_3-8杂环各自可任选与任选取代的额外碳环或杂环稠合。

11.权利要求10的化合物，其中所述任选取代的C_3-8碳环或任选取代的C_3-8杂环为任选取代的芳族环或任选取代的杂芳族环。

12.一种化合物或其可药用盐，所述化合物选自：

13.式L化合物或其可药用盐：

其中

且每个R基团及通过将两个R基团连接在一起而形成的每个环任选取代有一个或多个选自如下的取代基：卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’₂、SR’、SO₂R’、SO₂NR’₂、NR’SO₂R’、NR’CONR’₂、NR’CSNR’₂、NR ’C(＝NR’)NR’₂、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’₂、OOCR’、COR’和NO₂，

每个R^3P表示极性取代基；及

14.权利要求13的化合物，其为式L-A或式L-B化合物或其可药用盐：

15.权利要求13的化合物，其中R^3P为任选取代的咪唑环或任选取代的三唑环。

16.一种药物组合物，其包含权利要求1的化合物和可药用赋形剂。

17.一种药物组合物，其包含权利要求13的化合物和可药用赋形剂。

18.一种抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效抑制所述细胞增殖量的具有权利要求1的式IA结构的化合物接触。

19.权利要求18的方法，其中所述细胞在癌细胞系中。

20.权利要求19的方法，其中所述癌细胞系为乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系、胰腺癌细胞系、肺癌细胞系、造血系统癌症细胞系、结肠直肠癌细胞系、皮肤癌细胞系或卵巢癌细胞系。

21.权利要求18的方法，其中所述细胞在受试者的肿瘤中。

22.权利要求18的方法，其中使细胞与具有式IA结构的化合物接触，从而诱导细胞凋亡。

23.一种治疗与异常细胞增殖有关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗细胞增殖性病症量的具有权利要求1的式IA结构的化合物。

24.权利要求23的方法，其中所述细胞增殖性病症为肿瘤相关癌症。

25.权利要求24的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、淋巴结癌、结肠癌、前列腺癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、肾癌、血液癌症和心脏癌症。

26.权利要求23的方法，其中所述细胞增殖性病症为非肿瘤性癌症。

27.权利要求26的方法，其中所述非肿瘤性癌症为造血系统癌症。

28.权利要求27的方法，其中所述造血系统癌症为急性骨髓性白血病。

29.权利要求28的方法，其中所述白血病为顽固性AML，或其中所述AML与突变的Flt3有关。

30.一种在受试者中治疗疼痛或炎症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效治疗所述疼痛或所述炎症量的权利要求1的式IA化合物。