CN112739345A - Pim激酶抑制剂组合物，方法和其用途 - Google Patents

Abstract

本申请涉及用作PIM激酶抑制剂的式(I)和(II)化合物及其组合物。还提供了在治疗患有癌性恶性肿瘤的个体中使用PIM抑制剂的合成方法和方法。

Description

PIM激酶抑制剂组合物，方法和其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年11月6日提交的美国临时申请no.62/581,917的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。

对序列表的引用

2018年10月31日创建且具有33千字节的大小的ASCII文本文件的全部内容以全文引用的方式并入本文中。

背景技术

近年来，通过更好地理解与疾病相关的酶和其它生物分子的结构，已经极大地辅助了对新治疗剂的搜索。过去二十年广泛研究的一类重要酶是蛋白激酶。

蛋白激酶构成了大量结构相关的酶，其负责催化蛋白质中特定氨基酸残基的磷酸化，从而响应于外部刺激(Ubersax，ja，Ferrell，je，Nat)控制细胞内的多种信号转导过程。rev。摩尔比。细胞生物学.2007，8，530-541；shchellin，I。等，Folia Biol.2006，52，81-101)由于其结构和催化功能(Manning，g。等，Science，2002298，1912-1934)的保存，蛋白激酶被认为已经从共同的祖先基因发展。在人体中存在至少518个激酶，几乎所有激酶含有类似结构化的ATP结合袋和含有250-400个氨基酸的催化结构域。根据所述基质将激酶分类为家族(例如，，蛋白质-酪氨酸残基的羟基，蛋白-丝氨酸/苏氨酸残基或脂质)。

通常，蛋白激酶通过实现从核苷三磷酸到参与信号途径的蛋白质受体的磷酰转移来介导胞内信令。这些磷酸化事件充当可以调节或调节靶蛋白生物功能的分子开/关开关。这些磷酸化事件最终响应于各种细胞外和其它刺激而被触发此类刺激的实例包括环境和化学应力信号(例如，渗透压，热休克，紫外线辐射，细菌内毒素和H₂O₂)，细胞因子(例如白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))细胞外刺激可影响与细胞生长，迁移，分化，激素分泌，转录因子激活，肌肉收缩，葡萄糖代谢，蛋白质合成的控制和细胞周期的调节相关的一个或多个细胞响应。

许多疾病与如上所述由蛋白激酶介导的事件触发的异常细胞反应相关联(Roskoski，R。Jr.，Pharmacol。res，2015100，1-23；fleurren，edg等，Nat。rev。癌症，2016，16，83-98)。这些疾病包括但不限于癌症，自身免疫性疾病，炎性疾病，骨疾病，代谢性疾病，神经和神经变性疾病，侧柏血管疾病，过敏和哮喘，阿尔茨海默氏病，以及激素相关疾病。因此，仍然需要发现可用作治疗剂的新的安全和有效的蛋白激酶抑制剂。

癌症是衍生自细胞和组织的疾病，所述细胞和组织克服固有的细胞生长检查点和调节剂，从而导致转化为非受控增殖的恶性状态。如上所述，激酶在调节和换能从细胞表面到核的信号方面起到中心作用，以便引起对细胞外刺激的反应异常激酶介导的信令，例如通过过度激活或异常丰富的激酶丙泊，通常与细胞生长，增殖，迁移和存活相关联，这些细胞生长，增殖，迁移和存活已知是癌症病理的关键驱动程序。许多类型的癌症是已知的，并且包括以下：

内胚癌是源自内胚层内胚层的组织的严重恶性肿瘤，所述内胚层包括胃，肝，结肠，胆囊，前列腺和胰腺。这些癌症中的几种在诊断时通常具有较差的预后。例如，据估计在美国41,000个成人将被诊断患有原发性肝癌，而29，000个死亡将在2017年的该疾病中发生在1980年以来，肝癌的发病率有三倍，现在男性中癌症死亡的第5次最常见的原因，一般的5年存活率仅为18％。类似地，美国的28，000个成人将被诊断患有胃癌，而10，960个死亡(6720个男性和4，240个妇女)将从该疾病中出现在2017中。对于胃癌的人来说，一般的5年存活率为30％此外，在美国将诊断出在美国估计的53，000个成人，并且在2017年，在此疾病中会发生41，780个死亡。胰腺导管腺癌弥补了所有胰腺恶性肿瘤的绝大多数(90％)，并且仍然是具有非常差的预后和高发病率的疾病胰腺癌是美国和预后中癌症死亡的第四主要原因，因为胰腺癌难以诊断，估计的1年存活率为29％，5年存活率仅为7％。如果癌症未被早期诊断，则存活率进一步降低，并且对新的治疗剂有重要的需要，所述新的治疗剂能够更有效地治疗所有阶段的内皮癌(用于内皮癌统计，参见网站：ww癌)net和www.cancept.org)。

所述PIM(mooney小鼠白血病病毒的提供整合位点)激酶是一系列三种组成性活性的原发性丝氨酸/苏氨酸激酶，PIM1，PIM2，和PIM3，它们已经显示调节与几个重要的正常生物过程相关的信令，包括细胞存活，增殖，分化和凋亡。然而，当这些过程变得中断或过度激活时，它们表现出癌症的标志PIM激酶促进细胞存活和下调细胞凋亡，因此，已显示直接参与与肿瘤发生相关的信号机制。重要的是，已经发现pimb 1和pimb 3激酶被广泛地和异常地表达，特别是在人结肠，胃，肝，前列腺和胰腺的内皮癌中显示抑制PIM 1和/或pde 3(例如具有靶向的短发夹shRNA)显著增加细胞凋亡水平并减少小鼠中内皮癌细胞系和内皮肿瘤的增殖(参见：Liyy。et al。cancer Res，2006，66(13)，6741-647；Zheng HC，et al，J。cancerRes Clin。oncol.2008，134(4)，481-488；Fujii C，etal，Int。J。cancer，2005，114(2)，209-218；popoivanova bk等，cancerSci，2007，98(3)，321-328；Qu，Y等，Med。SciMonit.2016，22，4254-4260；Xu，J。等，J。Exp Clin。本发明公开了一。res，2016，35(133)，1-12，DOI 10.1186/sl 3046-016-0406-z)。此外，pii和/或pimb 3过表达被显示为涉及其它恶性肿瘤，例如卵巢癌(Zhuang，H。等，亚洲Pac。J。癌症Prev.2015，16(8)，3325-3331)和神经胶质瘤(Quan，J。等，Cell。摩尔比。biol.2015，61(1)，42-50)。

由于上述不良的预后和与内皮和其它癌症相关的有限的治疗性选项，其过度表达PIM1和/或PIM3，开发了PIM1和/或PIM3激酶的选择性抑制剂，代表了用于特别治疗癌症，尤其是胃，肝，结肠，前列腺，食道，胰腺和其它内皮器官的癌症的新策略，其单独地或与其它治疗剂组合显示出更高的功效具有较低的毒性，并且相对于现有治疗模态具有较低的对电阻的敏感性。

[发明概要]

本公开提供了三种蛋白激酶家族的有效和选择性抑制剂，其被称为PIM(mooney鼠白血病病毒的临时整合位点)，以下通式(I)-(II)的PIM抑制剂组合物，药物制剂，它们的制备方法和其用途，包括通过选择性抑制PIM3靶向内皮癌的用途。

本文描述了用于治疗患有内皮器官的癌症的个体的化合物，组合物和方法，包括盲肠，肠，胃，胸腺，肝，胰腺，肺，食道，胆囊，甲状腺，肺和前列腺，并且其表现为多种形式，例如食管腺癌，鳞状细胞癌，鼻咽癌，胃癌腺癌，胰腺导管腺癌，肝细胞癌，胆囊腺癌，前列腺腺癌，结肠直肠腺癌，胃肠基质肿瘤(GIST)和胃肠癌肿瘤等，通过向个体施用包含治疗有效量的PIM激酶抑制剂的药物组合物，如本文所述本发明的化合物可以通过竞争性地和选择性地结合激酶的ATP结合袋来可逆地抑制PIM。本发明的某些化合物可用于选择性地抑制pde 3，并达到较小程度的pii和pimb 2，特别是靶向癌症，其作为存活，生长和增殖的手段，导致癌症病理和疾病进展本发明的其它化合物抑制pii和P im 3，和较低程度的pm 1 M 2，因此可用于过度表达这些激酶的疾病。本发明的其它化合物以大致相同的效力靶向所有的三种PIM激酶(pm1 1-3)，并且可用于治疗所有三种PIM激酶涉及疾病的疾病。

在我们研究的过程中，我们出乎意料地发现，在广泛的激酶筛选方案中，天然产物acyriaflavin a和K252a(参见：nakno，H和Omura，S，J。Antibiot，2009，62，17-26)对激酶pim 3具有高亲和力。例如，当使用激酶筛选平台。(disclox，Inc。San Diego，CA)对照450激酶分析阿魏酸酯对450激酶的亲和力时，我们发现该分子与具有2nM Kd的pd 3紧密结合并且具有对于PIM1(K_d＝21nM)和PIM2(K_d＝19nM)，对于p im 1(kd＝21nm)和p im 2(kd＝19nm)。相对于arcyriaflavina，K252a被显示为对ph3(Kd ca)具有稍微降低的结合亲和力.10nm)，甚至更低的pim 1和pim2。在ATP存在下进行的生物化学测定(反应生物公司，Malvern，PA)证实了由阿魏酸阿魏酸对ph 3的有效抑制，IC₅₀＝0.13nM。

类似地，针对已知激酶抑制剂的板的激酶的广泛筛选出乎意料地揭示了反刍动物(参见：jirosek，mr等，J。Med。chem，1996，39，2664-2671)，临床上作为糖尿病性视网膜病变和神经病的有效PKC抑制剂开发的药物，也是pevp 13的有效和选择性抑制剂(参见：keraman，mw等，Nat。生物技术醇.2008，26，127-132；Davis，mi等，Nat。生物技术.2011，11，1046-1051)ruboinia(LY333531)是已知的天然产物arcyriarbin的二烷基化大环类似物，这些结果表明，这些铅分子的进一步优化将能够开发作为患有严重内皮癌的患者的新治疗的pi 3的有效和选择性抑制剂。

本发明的一个方面是具有式(I)结构或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体混合物，非对映体混合物，同位素变体及其代谢物的化合物；其中式(I)如以下具体实施方式所定义。

在本发明的另一个实施方案中是具有式(II)结构的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映异构体，同位素变体及其代谢物的混合物，它们是代表激酶抑制剂的实例，其中式(II)如以下具体实施方式中所定义。

本文还提供了包含本文公开的化合物的药物组合物，例如式(I)和(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药；以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中涉及pde 3表达的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药。

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，所述方法包括诸如胃，肝，结肠，胰腺，前列腺和胆囊的内皮器官的癌症，以及涉及pde 3表达的其它癌症，包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如，式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药。

本文另外提供了调节ph 3激酶活性的方法，包括在体外或体内与治疗有效量的本文公开的化合物(例如式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体)接触；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药。

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中的pde 3激酶介导的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如，式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映异构体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药，其中所述化合物部分或完全地抑制p im 3活性，并且显示相对于pde 3激酶的增加的效力和/或相对于pde1激酶抑制pde 3激酶的增加的选择性，P1M 2激酶和已知存在于人体中的其它激酶。

附图说明

图1A-1S表示各种1-307化合物的实施方案。

图2是分析HPLC数据的图形表示，其显示化合物3的阿魏酸烷基化异构体的清洁分离。

图3是靶向pde 3的化合物122的K_d曲线的图形表示。

图4是针对SNU-16和MIA PaCa-2中的细胞系的IC₅₀曲线的图形表示。

化合物122

具体实施方式

本发明的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考以下详细描述将获得对本发明的特征和优点的更好理解，所述详细描述阐述了本发明的原理。为便于全面理解本文所阐述的公开内容，下文定义了多个术语。

通常，本文所用的命名法和在有机化学中的实验室程序，药物化学，分子生物学，微生物学，生物化学，酶学，计算生物学，计算化学和本文所述的药理学是本领域公知的和通常使用的那些。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语通常具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

所属技术领域。本发明的化合物包括上文所述的那些，并且进一步由本文所公开的类，亚类和物种示出。如本文所用，除非另有说明，否则以下定义应适用。为了本发明的目的，根据元素的周期表，CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics，第75版来识别化学元素另外，在″有机化学″，Thomas sorell，University Science book，Sausalito：1999和″March′s Advanced organic chemistry″，6 theed中描述了有机化学的一般原理。Ed：Smith，M。B。和March，J。John Wiley&ambp；Sons，New York：2007，其全部内容通过引用并入本文。

本文提供了通过向需要的受试者施用PIM激酶的选择性抑制剂来治疗某些形式的癌症的化合物和方法。在某些实施方案中，受试者已被诊断患有癌症的患有或怀疑患有与过度表达或高活性PIM激酶相关的癌症诸如胃，肝，结肠，胰腺和胆囊的皮肤器官的癌症代表了其中已经证明了PIM1和/或pimb3参与的癌症的实例，并且因此是用有效的pde 1和/或pde 3抑制剂治疗的候选物。

在一些情况下，本文提供了用于治疗癌性病症的方法，其特征在于，例如，异常疲劳，疼痛，持久性团块，出血，刚度，头晕，贫血，感染敏感性，持久性咳嗽或瘙痒，头痛，突然体重减轻，不愈合疮和发烧癌性恶性肿瘤可影响身体的几乎任何部分，包括心脏，脑，神经，肌肉，皮肤，眼睛，关节，肺，胰腺，前列腺，生殖器官，肾脏，腺，淋巴系统，免疫系统，胃肠系统，循环系统和血管。

诊断了超过14百万个新的癌症病例，并且在2012年全局发生了8.2万个癌症相关死亡，表示世界人口的0.12％(参见：Global cancer Facts&amp；图，第3版，Americancancer Society；Atlanta，Georgia，2015)。投影表明，这些数字将长达40％乘以2030，表明开发新的，更有效的方法来治疗这种渗透性和普适性疾病以及其多重性指示的关键需要。

PIM激酶

PIM激酶是在c-Myc诱导的鼠淋巴瘤中的一系列逆转录病毒插入诱变研究中首先鉴定并命名用于基因组位点的三种组成性活性原发性丝氨酸/苏氨酸激酶p im 1，p im 2和p im 3的家族(参见，例如：Cuypers，H。T，Cell，1984，37，141-150；mikers，H，Nat。genet，2000，32，153-159)PIM-1基因由于使用上游CUG密码子的替代翻译起始而编码34和44kDa的两个蛋白质。PIM-2编码三种同种型(34，38和40kDa)，并且PIM 3产生为单个34kDa蛋白(参见：Brault，L。等，haeatologica，2010，95，1004-1015；Nawijn，M。C，Nat。rev。癌症，2011，11，23-34)。PIM激酶在氨基酸水平和其激酶结构域中是高度同源的PIM-1蛋白序列与PIM-2相同且与PIM-3相同71％，并且所有PIM家族成员在ATP结合袋中共享高水平的保存。与该高同源性水平一致，PIM激酶已经表明，当检查细胞因子介导的细胞生长和敲除模型分化时，通过体外鉴定保守的基质结合序列和体内冗余，显示出一些重叠的功能(参见：BullockAN，et al，J。Biol。chem，2005，280(50)，41675-41682)。所述PIM激酶在其正常组织分布方面不同PIM-1在造血细胞中以较高水平表达，而PIM-2在脑和淋巴细胞中更普遍，并且PIM-3在肾，乳腺和脑细胞的正常条件下更高表达(参见：echmannA，et al，Oncogene，2000，19(9)，1215-1224)。

PIM激酶mRNA和蛋白质的表达水平由细胞间和细胞内信号分子调节，包括各种生长因子，细胞因子，趋化因子和激素，尤其是造血原点，例如IL-2，-3，-5和-7，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，干扰素γ(IFN-γ)和红细胞生成素的表达水平这些分子与它们的受体相互作用，并激活下游信号通路，包括涉及JAK STAT，PKC和NF-KB的那些(参见：Lilly，M。等，Oncogene，1999，18，4022-4031)。转录因子STAT 3/5和NF-κb上调PIM转录物水平，其进而上调PIM激酶蛋白水平。

与大多数其它激酶相反，PIM激酶是不需要翻译后修饰以诱导其激酶活性的组成性活性酶。由于它们是短暂的蛋白质(&lt；5分钟)，它们的活性很大程度上通过蛋白质稳定性调节，例如通过泛素化和蛋白酶体降解。(参见：Shay kp，et al，Mol。cancer Res，2005，3：170-181)。

PIM激酶在其激酶结构域的结构中也是不常见的，其中ATP结合袋的铰链区含有未在其它激酶中发现的脯氨酸残基。这导致在激酶家族中独特的分子识别基序，因为它们是由于存在于典型氢键供体的位置的脯氨酸残基而不能与ATP和ATP-竞争性抑制剂形成规范双齿氢键的唯一激酶(参见：Qian，K。C。等，J。Biol。chem，2005，280，6130-6137；Kumar，A等，J。Mol。Biol.2005，348，183-193。Jacobs，M。D。J。Biol。chem，2005，280，13728-13734)。

PIM激酶通过其下游基底调节多个途径，包括蛋白H 3和c-Myc，它们是转录的共活化剂，而4E-BP 1和Bad通过磷酸化失活以促进翻译和细胞存活过程。PIM激酶在重压p 21和p 27的同时激活cd 25 Ac，以调节细胞周期，并且它们还有利于形成产生耐药性的ABCB 1和ABCG 2流出泵已经证明PIM激酶通过诱导抗凋亡Bcl-2表达或通过血清112，血清36和血清55上的磷酸化使促凋亡蛋白BAD失活而抑制凋亡，这导致蛋白质14-3-3螯合(参见，例如：Lilly，M。等，Oncogene，1999，18，4022-4031；Fox，C。J，Genes Dev.2003，17，1841-1854；Yan，B，J。Biol。chem，2003278，45358-415367，macinald，A，BMC Cell Biol.2006，7，1)PIM-1/PIM-2/P 1 M-3三重敲除小鼠是可行的，但它们明显小于它们的野生型对应物，这是由于细胞增殖减少(mikers，H等，Mol。细胞。biol.2004，24，6104-6115)。通过RNA干扰或显性阴性作用突变体的敲低实验表明PIM激酶对于维持转化表型是重要的。

已显示PIM激酶涉及调节几个重要的生物学过程，包括细胞存活，增殖，分化和凋亡。PIM激酶在体外和体内肿瘤细胞的生长和存活中通过多种常见的以及异构型的基质的修饰来支持，包括几个细胞周期调节剂和凋亡介质然而，当涉及PIM激酶的这些方法被破坏或过度激活时，它们表达癌症和PIM激酶的标记，特别涉及与肿瘤发生相关的信号机制。例如，PIM激酶共享诸如BAD，p 21，p 27和c-Myc的底物，并且是Myc诱导的肿瘤发生的有利配偶体(参见：Nawijn，M。c，Nat。rev。癌症，2011，11，23-34)血清L12和血清36上的不良磷酸化诱导14-3-3蛋白结合并似乎需要血清55上的磷酸化(参见：Danial，N。N。Oncogene，2008，27(Suppl.1)，S 53-S 70；Zha，J等，Cell，1996，87，619-628)。血清55磷酸化是用于从BCL-2和BCL-2-like 1(BCLX；也称为BCL 2 L 1)解离的速率限制步骤，从而允许这些存活因子失活BAX和BAK，从而导致诱导凋亡的增加的阈值此外，血清55磷酸化诱导GCK结合不良，导致增殖癌细胞所需的糖酵解速率提高。因此，已经提出了血清55磷酸化以构成BAD的促凋亡和代谢活动之间的分子开关(参见：Danial，N。N。等，Nature，2003 424，952-956)此外，发现PIM激酶分别在血清1 101和Serl 149处磷酸化污损受体基质1和2，这显著地降低了IRS的半衰期并导致胰岛素抵抗(参见：Song，jh，et al，Oncotarget，2016，7(15)，20152-20165)。

机理研究表明，PIM激酶的高表达水平与人类的血液学和上皮癌相关。个体PIM成员的表达水平在肿瘤类型之间变化，并且大量的证据表示PIM激酶作为原癌基因(参见：Brault，L。等，haeatologica，2010，95，1004-1015；Nawijn，M。C，Nat。rev。癌症，2011，11，23-34)pim-1在B细胞非霍奇金淋巴瘤中上调，这通常与不良预后相关。此外，pim-1的过表达也在急性髓系白血病(AML)和非血液学癌症如前列腺中指出。piim 1主要在急性髓系白血病中过表达，pimb 2在多发性骨髓瘤中发挥主要作用发现PIM-1和PIM-2在实体瘤如前列腺癌和多种人造血恶性肿瘤如白血病和淋巴瘤中过表达。PIM-3在内皮癌组织的范围内过度表达，并且已经显示促进Ewing的家族肿瘤细胞系的生长(参见：Blanco-公寓，C。等，Biochem Pharmacol.2013，85，629-643)。

重要的是，PIM激酶通常在恶性病变中异常表达，但不在正常组织中表达，因此代表有吸引力的治疗靶(参见，例如：Liyy。etal。CancerRes，2006，66(13)，6741-647；ZhengHC，et al，J。Cancer Res Clin。oncol.2008，134(4)，481-488；Pagano MA。etal，Mol。细胞。biochem，2005，274(1-2)，23-29；Fujii C，etal，Int。J。Cancer，2005，114(2)，209-218)。

P1M3激酶

已经发现ργμ3激酶在人结肠，胃，肝，前列腺和胰腺的内皮癌中特异性地表达，并且示出了pde 3(例如具有靶向shRNA)的抑制，以显著增加细胞凋亡水平并减少增殖(参见：Liyy。et al。CancerRes，2006，66(13)，6741-647；ZhengHC，etal，J。Cancer Res Clin。oncol，2008，134(4)，481-488；Fujii C等Int。J。Cancer，2005，114(2)，209-218；poivanovaB。K等cancer Sci，2007，98(3)，321-328；Qu，Y等，Med。Sci Monit，2016，22，4254-4260)。此外，p im 3过表达被显示为涉及其它恶性肿瘤，例如卵巢癌(Zhuang，H等，亚洲Pac)。J。cancer Prev，2015，16(8)，3325-3331)和神经胶质瘤(Quan，J。et al。Cell。摩尔比。biol，2015，61(1)，42-50)重要的是，通过pimb 1/3抑制剂抑制pde 3抑制胰腺癌细胞系范围的生长，而pimb 1选择性抑制剂没有减少相同细胞系的生长，证明胰腺癌生长对pimb 3激酶活性的依赖性(参见：nakno，H等，Bioorg。&amormed。chem Lett，2015，25，5687-5693)。

已经报道了内胚性癌症强烈依赖于pimb 1和/或pimb 3活性，用于存活和增殖(参见：Mukaida，N。et al。Cancer Sci，2011；102，1437-1442；Li，Y。Y，et al。J。Gastroenterol，2014；20，9392-9404。。具有选择性pde 3抑制剂的抑制研究能够显示pde3，但不是pde 1或pde2肯定调节IL-6/STAT 3途径(Chang，M，et al，Mol。治疗癌症.2010，9(9)，2478-87)STAT 3途径在多种不同的癌症，特别是前列腺癌中上调。

当开发新的治疗剂时，毒性很重要。数据表明，pimb 3基因的缺乏不会导致小鼠的表型变化，表明pde 3在正常组织中可以是生理上可分配的此外，与另一种存活激酶(即Akt激酶)不同，PIM激酶不位于胰岛素受体信号通路的下游，因此对PIM激酶的抑制似乎对正常代谢(苋菜adi R和Thompson CB，J Clin。invest，2005；115：2618-2624)因此，靶向PIM表示用于开发更安全和更有效的药物的新途径，所述药物用于治疗PIM激酶，特别是pm 1和/或pde 3的实体瘤，并不明确表达。

PIM抑制剂

PIM激酶的原癌性质和其参与许多癌症病理的直接验证在开发PIM激酶的抑制剂中具有启发的兴趣。通常，迄今为止，最新的努力集中于对pde 1具有选择性的抑制剂，或者是pan-PIM抑制剂(抑制所有PIM激酶)，仅有几个示例，证明了pde 3选择性抑制剂设计选择性抑制剂是具有挑战性的，因为所有PIM共有高同源性，而唯一特征是在铰链中具有脯氨酸的唯一激酶，这导致仅一个与ATP或抑制剂的氢键相互作用(参见：Qian，K。C。等，J。Biol。chem，2005280，6130-6137)。此外，p im 2的ATP Km比p im 1和p im 3低10-loocx，因此细胞活性pan PIM抑制剂比p im 1或p im 1/3抑制剂更具挑战性下面提供了示例。

pimb 1和pan PIM抑制剂

SuperGen/fastex Pharmaceuticals已经描述了咪唑并[1，2-b]哒嗪和吡唑并[1，5-a]嘧啶衍生物作为用于白血病和前列腺癌的PIM选择性抑制剂，包括在阶段1试验中由于高hERG介导的心脏毒性而发生故障的SGI-1776，以及pimb 1/3抑制剂sgoi-9481(Chen，ls等，血液).2009；114：4150-4157；beauss DJ等人，PCT专利申请WO2008058126a2)Novartis报道了一系列有效的pan-PEVI抑制剂，包括LGB 321和氨基环己基吡啶甲酰胺pm 447(LGH447)，其在用于耐火多发性骨髓瘤和其它血液恶性肿瘤的I期临床试验中(参见：Burger，mt等，ACS Med。chem Lett.2013，4，1193-1197；Burger，mt等，J。Med。chem，2015，58，8373-8386；Burger，M。等，美国专利申请No.2010/0216839；Burger，M。等，美国专利申请No 2014/0228363；Burger，M。等人，美国专利申请号2015/0336960)。环烯报告了一系列不同的PIM抑制剂，包括双CK 2/pde 1抑制剂CX-4595，所述抑制剂CX-4595在相I试验中用于耐火多个myleoma和其它癌症，以及pan-PIM抑制剂CX-6258(参见：Chua，pc等，美国专利8，168，651 B2；Siddiqui-Jain a，et al Cancer Res，2010，70(24)，10288-10298；Pierre F，et al，Bioorg。Med。chem Lett，2011，21(22)，6687-6692；hadach，M。等，ACS Med。ChemLett.2012，3，135-139)。astratazeneca开发了高度有效的pan-PIM抑制剂，包括AZD-1208，其在急性髓系白血病的I期试验中(参见：Dakin，L。A等，Bioorg。med。Chem Lett，2012，22，4599-4604；Keeton E。K，et al。Blood，2014，123(6)，905-913；Dakin，L。等，PCT专利申请WO2010/001169 A2；Dakin，L。等，美国专利8，901，307B 2)AZD-1208显然由于出乎意料的高CYP 3 a 4介导的清除和相关缺乏功效而经历了临床上的挑战(参见：Cortes，J。等Proceedings：AACR 107 th Annual Meeting 2016；New Orleans，LA，DOI：10.1158/1538-7445。AM 2016-CT 147)。基于一系列嘧啶-4-酮化合物(参见：Tao，Z-F，etal，J。Med。chem，2009，52，6621-6636)Biogenimie设计了强效的吡咯并嘧啶基pimb 1/3抑制剂(参见：Ishchenko，a。等，Bioorg。med。chem Lett，2015，25，474-480)。genetech/Roche已经发现了一系列PIM抑制剂，包括一系列基于吡唑并[1，5-a]嘧啶(GNE-652)和皮摩尔效力(参见：Wang，X，etal，Bioorg。med。chem Lett，2013，23，3149-3153；Wang，X，美国专利申请No.2014/0128376 al；Wang，X，美国专利No.9,573,943B 2；Do，S。等，美国专利No。9,434,725 B2)。单核细胞报道了基于芳香羧酰胺的PIM抑制剂(参见：Li，Y-L等，美国专利No.9,676,750B 2)。jikai Biosciences已描述了pan-PIM抑制剂(参见：Ge，J，美国专利No.9,452,995 B2)。nerviano Medical Sciences已报道了PIM 1和2的有效的吡咯并[1，2-a]吡嗪酮抑制剂(参见：camuscelli，F。等，Bioorg。med。chem，2013，21，7364-7380)。最后，日本的团队已经描述了pi 1/3的有效抑制剂(参见：nakno，H。等，Bioorg。med。chemLett，201525，5687-5693；nakno，H等，ACS Med。chem Lett，2017，8，504-509；nagaano，T。等，美国专利申请No.2017/0145005)。

pde 3选择性抑制剂

对于我们的知识，存在几个描述激酶抑制剂的报告，所述激酶抑制剂相对于其它PIM同种型选择性地抑制pde 3。报告抑制剂M-110显示50X偏好p im 3超过p im 1和p im2，但基于在体内代谢不稳定基团的加氢区官能团(参见：Chang，M。等，Mol。治疗癌症.2010，9(9)，2478-2487)。pimb 3选择性抑制剂的另一个实例是ruboxinia，其最初在临床上被开发为蛋白激酶Cβ抑制剂，但随后也被示出为分别将pim3(Kd 12nM)与23X和140X选择性结合在p im 1和p im 2上(参见：keraman，mw，et al，Nat。生物技术醇，2008，26，127-132；jirosek，mr等，J。Med。chem，1996，39，2664-2671)。能够进一步增强pim3选择性并同时降低对PKC激酶的活性，从而表现出开发用于治疗癌症的高度选择性的pep 13抑制剂的机会。

本文描述的是PIM激酶的抑制剂，其中某些化合物表现出pde 3的选择性抑制。高度选择性的pde 3抑制剂可用于特别地治疗表达和/或取决于该激酶对其病理生长和增殖的活性的癌症已经证明，包括胃，结肠，肝脏，胰腺，前列腺和galbaldderl的恶性肿瘤的内皮癌已经被显示为过度表达pde 3，并且已经证明了pde 3的抑制以抑制这些癌症的生长。本文还描述了包含PIM抑制剂(例如，本文所述的PEVI抑制剂化合物)的药物组合物，所述PIM抑制剂用于逆转或减少与癌恶性肿瘤相关的一个或多个阴性症状，包括内皮癌本文还描述了包含PIM抑制剂(例如，本文所述的PIM抑制剂化合物)的药物组合物，所述PIM抑制剂用于停止或延迟与癌恶性肿瘤相关的负面症状的进展，包括内皮癌。本文描述了PIM抑制剂用于制备治疗癌症的一种或多种症状的药物的用途。

在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂抑制具有近似相等效价的所有PIM激酶。在某些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少或抑制PIM激酶中的一种或多种的活性，同时很大程度上不影响其它的活性。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂基本上减少或抑制pde 3的激酶活性在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂是pimb 3激酶的基本上完全抑制剂。如本文所用，″基本上完全抑制″是指，例如，p im 3抑制的95％。在其它实施方案中，″基本上完全抑制″是指，例如，p im 3抑制的90％。在一些其它实施方案中，″基本上完全抑制″是指，例如，p im 3抑制的80％在一些实施方案中，本文所述的pimb 3抑制剂是pde 3的部分抑制剂。如本文所用，″部分抑制″是指，例如，约40％至约60％的pde 3抑制。在其它实施方案中，″部分抑制″是指，例如，约50％至约70％的pde 3抑制如本文所用，其中pimb 3抑制剂基本上抑制或部分地抑制pde 3的活性，同时很大程度上不影响PIM 1和/或pde 2的活性，这意味着，例如，当pimb 1和/或PIM 2与相同浓度的pde 3抑制剂接触时，其意味着例如小于约10％的pde 1和/或pde 2的抑制在其它情况下，其中pimb 3抑制剂基本上抑制或部分地抑制pde 3的活性，同时不影响PIM 1和/或pde 2的活性，这意味着，例如，当PIM 1和/或PIM 2与PIM 1和/或PIM 2接触时，其小于约5％的抑制。

用于ph 3的相同浓度。在其它情况下，其中pimb 3抑制剂基本上抑制或部分地抑制pde 3的活性，同时很大程度上不影响PIM 1和/或pde 2的活性，这意味着，例如，当PIM 1和/或PIM 2与用于pde 3的PIM 3抑制剂的相同浓度接触时，其意味着例如小于约1％的pdel和/或pde 2的抑制。

本发明的一个方面是具有式(I)结构或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体混合物，非对映体混合物，同位素变体及其代谢物的化合物；其中：

式(I)

每个A，B，C和D相同或不同且独立地选自H，卤素，-N₃，-CN，-NO₂，--OH，-OCF₃.-OCH₂F，-OCF₂H，-CF₃，-SR¹，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-OS(＝O)₂F，-OS(＝O)₂(OR²)，-S(＝O)₂(OR²)，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-OC(＝O)R²，-CO₂R³，

-OR³，-N(R³)₂，-NR³C(＝O)R²，-NR³C(＝O)OR³，-NR³C(＝O)N(R³)₂，CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代或未取代的烷基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基或选自例如卤代烷基，烯基，芳基烷基，烷氧基烷基，羟烷基，单烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，酰氨基烷基，酰氧基烷基，氰基烷基，脒基烷基，羧基烷基，烷氧基羰基烷基，氨基羰基烷基，芳基，烷基芳基，氨基烷基，杂芳基，羰基烷基，氨基硫代烷基，硝基胍基烷基，保护基，糖基，氨基糖或烷基糖残基的取代基；

每个A′，B′，C和D′相同或不同，并且独立地选自H，卤素，-N₃，-CN，-NO₂，--OH，-OCF₃.OCH₂F，-OCF₂H，-CF₃，-SR¹，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-OS(＝O)₂F，-OS(＝O)₂(OR²)，-S(＝O)₂(OR²)，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-OC(＝O)R²，-CO₂R³，-N(R³)₂，-OR³，-NR³C(＝O)R²，-NR³C(＝O)OR³，-NR³C(＝O)N(R³)₂，CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或选自例如卤代烷基，烯基，芳基烷基，烷氧基烷基，羟烷基，单烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，酰基氨基烷基，酰氧基烷基，氰基烷基，脒基烷基，羧基烷基，烷氧基羰基烷基的任选取代基，氨基羰基烷基，芳基，烷基芳基，氨基烷基，杂芳基，羰基烷基，

氨基硫代烷基，硝基胍基烷基，保护基，糖基，氨基糖或烷基糖残基；

每个E，F，G和M独立地是C或N；

每个E′，F′，G′和M′独立地为C或N；

Y和Z各自独立地为H，-OH，-OR³，N(R³)₂，，卤素，-N₃，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或Y和Z可组合在一起以表示O，N(NR³)，N(OH)，或S对应于C＝0，C＝NNR³，C＝NOH或C＝S基团；

R¹为H或直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；

R²为直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；

每个R³独立地为H，直链或支链取代或未取代的烷基。取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，或取代或未取代的酰基((-C(＝O)R¹))，或两个R³与它们连接的原子一起形成取代或未取代的杂环；

每个Q和R独立地是H，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-C(＝O)R²，-CO₂R³，-N(R³)₂，-C(O)N(R³)₂，直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，天然或非天然的取代或未取代的糖基，天然或非天然的取代或未取代的糖基糖基，天然或非天然的取代或未取代的糖基烷基糖基，天然或非天然的取代或未取代的糖，氨基糖或烷基糖，其中Q和R连接，取代或未取代的烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的杂烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的环烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的杂环烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的芳基，其中Q和R连接，或取代或未取代的杂芳基，其中Q和R连接形成环；

式(I)的化合物本身可用作蛋白激酶抑制剂，或代表可用于制备表现出激酶抑制活性的化合物的中间体。如上所述，激酶抑制剂可用于治疗多种病症，包括癌症，中枢神经系统病症，阿尔茨海默氏病，心血管疾病，皮肤病，炎症，自身免疫性疾病如类风湿性关节炎和糖尿病并发症。

在本发明的另一个实施方案中是具有式(II)结构或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体混合物，非对映体混合物，同位素变体及其代谢物的化合物，它们是代表激酶抑制剂的例子，其中：

式(II)

A，B，C，D，A′，B′，C′，D′，E，F，G，M，E′，F′，G′，M′，R¹，R²，R³，Y和Z如上所定义；

每个U，V，U′和V′独立地为H，OH，OR³，N(R³)₂，，卤素，-N₃，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或U和V和/或U′和V可组合在一起以表示O，N(NR³)，N(OH)或对应于C＝0，C＝NNR³，C＝NOH，或C＝S基团的S；

各X为H，-OH，-OR³，N(R³)₂，卤素，-N₃，-NO₂，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；

在本发明的一个实施方案中是式的化合物(I)和(II)其中未取代的烷基选自甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，正戊基，正己基等。在另一个实施方案中，A，B，C和D各自独立地为H，F，Cl，Br，I，-OH，-CN，-N₃，-OR³，-NO₂，-NH₂，-CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代的1，2，3-三唑，取代或未取代的芳基取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基或取代或未取代的酰基；在另一个实施方案中，A′，B′，C和D′独立地为H，F，Cl，Br，I，-OH，-CN，-N₃，-OR³，-NO₂，-NH₂，-CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代的1，2，3-三唑，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基或取代或未取代的酰基；在另一个实施方案中，E，F，G或M独立地为氮。在另一个实施方案中，E′，F′，G′或M′独立地为氮。在另一个实施方案中，E和F是氮。在另一个实施方案中，E′和F′是氮。在另一个实施方案中，E和F是氮。在另一个实施方案中，E和G是氮。在另一个实施方案中，E′和G′是氮。

在另一个实施方案中，E和M是氮。在另一个实施方案中，E′和M′是氮。在另一个实施方案中，F和M是氮。在另一个实施方案中，F′和M′是氮。

在本发明的另一个实施方案中是式(II)的化合物，其中Y，Z，Y′和Z′是氢，并且X是--CH2N(Me)2。

在可选的实施方案中，本文提供了通过偶联的转录/翻译(TX-TL)无细胞生物合成(CFB)系统产生式(I)的双吲哚生物碱和类似物的方法，其中通过将双吲哚生物碱途径基因添加到含有代谢酶，盐，辅因子，氨基酸，糖，核苷酸和前体分子(例如色氨酸和/或色氨酸衍生物)的无细胞提取物来进行反应，并且其中任选地，所述混合物能够体外转录，翻译和/或偶联的转录/翻译以产生式(I)的分子，其中Q和R独立地是氢，连接到一个吲哚氮原子的糖基，或一起形成桥接吲哚氮原子的糖。随后可通过引入非氢Q和R基团的化学转化制备式(I)的化合物。

在可选的实施方案中，本文提供了通过偶联的转录/翻译(TX-TL)无细胞生物合成(CFB)系统产生式(II)的双吲哚生物碱和类似物的方法，其中通过将双吲哚生物碱途径基因添加到含有代谢酶，盐，辅因子，氨基酸，糖，核苷酸和前体分子(例如色氨酸和/或色氨酸衍生物)的无细胞提取物来进行反应，并且其中任选地，所述混合物能够体外转录，翻译和/或偶联的转录/翻译以产生式(ii)的分子，其中

式(III)

每个A，B，C，D，A′，B′，C′，D′，E，F，G，M，E′，F′，G′，M′，R¹，R²，and R³如上文所定义

(I)；

式(II)的化合物随后可通过化学转化制备，所述化学转化通过例如与通式(IV)的中间体反应而将大环基团连接至式(III)，其中

式(IV)

X，Y，Z，Y′，Z′如上所定义，且LG和LG′各自独立地为相同或不同的离去基团，例如但不限于碘，溴，氯，O-甲苯磺酸盐，O-甲磺酸盐，或一起形成环状硫酸盐

在可供选择的实施方案中，通过生长和破碎开孔细胞，除去细胞膜和细胞壁材料，并消化天然DNA和/或RNA来形成无细胞提取物，其中所述细胞来源于不同的kingdom，页，类，订单，家族，属或物种，并且所述细胞是原核或真核细胞；或细菌细胞，真菌细胞，藻类细胞，古细菌细胞，酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞，哺乳动物细胞或人细胞

在可选的实施方案中，本文提供了制备式(I)和(III)的双吲哚生物碱和类似物的方法，所述方法涉及使用对应于用于双吲哚生物碱合成的天然或非天然途径酶的分离的酶，其中色氨酸和/或色氨酸衍生物与这样的酶结合以提供式(I)和(iiia)的分子

本文还提供了包含本文公开的化合物的药物组合物，例如式(I)和(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药；以及一种或多种药学上可接受的赋形剂

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中涉及pde 3表达的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，包括诸如胃，肝，结肠，胰腺，前列腺和胆囊癌的内皮器官的癌症，以及涉及ρiμ3表达的其它癌症，包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如，式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药

本文另外提供了调节PIM激酶活性的方法，包括在体外或体内与治疗有效量的本文公开的化合物接触PIM激酶，例如式(I)或(II)的化合物，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药

本文还提供了治疗，预防或改善受试者中PIM激酶介导的病症，疾病或病症的一种或多种症状的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物，例如式的化合物

(I)或(II)，包括立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映异构体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药，其中所述化合物部分或完全地抑制PIM活性，并且显示相对于一个PIM激酶增加的效力和/或相对于已知存在于人体中的其它激酶抑制一个PIM激酶的增加的选择性

本发明的另一方面是具有图1所示结构的示例性化合物，其中所提供的结构是代表性的，并且不意味着是全面的，并且其中吲哚芳族取代可以以对称方式在吲哚苯环上发生，如所描绘的，或者以不对称的方式发生，其中每个苯环被不同地取代，且其中所述结构表示式(I)的实例，其中Y和Z一起为C＝O且Q和R各自独立地为H或连接到吲哚N的含杂原子的尾部，如式(V)所示，且含杂原子的尾部为含有取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂芳基的直链或支链烷基链

式(V)

式(I)的示例性化合物包括图1所示的那些，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物，同位素变体及其代谢物。

在一些实施方案中，PIM抑制剂是小分子。如本文所述，″小分子″是尺寸小于约5千道尔顿(kDa)的有机分子。在一些实施方案中，小分子小于约4kDa，3kDa，约2kDa或约1kDa。在一些实施方案中，小分子小于约800道尔顿(Da)，约600Da，约500Da，约400Da，约300Da，约200Da或约100Da在一些实施方案中，小分子小于约4000g mol，小于约3000g mol，2000gmol，小于约1500g mol，小于约1000g mol，小于约800g mol，或小于约500g mol。在一些实施方案中，小分子是非聚合的。通常，小分子不是蛋白质，多肽，多核苷酸，寡核苷酸，多糖，糖蛋白或蛋白聚糖，但包括至多约40个氨基酸的肽小分子的衍生物是指与原始小分子共享相同结构核的分子，但其是通过一系列化学反应制备的，所述化学反应变化并形成原始小分子的衍生物。作为一个实例，小分子的前药是该小分子的衍生物。小分子的类似物是指共享相同或相似结构核的分子作为原小分子，通过与原小分子相似或相关的途径或本领域公认的变化来合成。

在某些实施方案中，本文所述的化合物具有一个或多个手性中心。因此，本文设想了所有立体异构体。在各种实施方案中，本文所述的化合物以光学活性或外消旋形式存在。应当理解，本文所述的化合物包括外消旋的，光学活性的，区域异构的和立体异构的形式，或其组合，其具有本文所述的治疗上有用的性质光学活性形式的制备以任何合适的方式实现，包括作为非限制性实例，通过重结晶技术的外消旋形式的分辨率，通过从光学活性起始材料合成，通过手性合成，或通过使用手性固定相的色谱分离来实现。在一些实施方案中，一种或多种异构体的混合物用作本文所述的治疗化合物在某些实施方案中，本文所述的化合物含有一个或多个手性中心。这些化合物通过任何方式制备，包括对映体和/或非对映异构体的混合物的对映选择性合成和/或分离。化合物及其异构体的分辨率通过任何方式实现，包括但不限于化学过程，酶法，分级结晶，蒸馏，色谱法等。

在各种实施方案中，本文所述的药学上可接受的盐包括，作为非限制性实例，硝酸盐，氯化物，溴化物，磷酸盐，硫酸盐，乙酸盐，六氟磷酸盐，柠檬酸盐，葡糖酸盐，苯甲酸盐，丙酸盐，丁酸盐，磺基水杨酸盐，马来酸盐，月桂酸酯，苹果酸盐，富马酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，戊酸盐，双羟萘酸盐，对甲苯磺酸盐，甲磺酸盐等此外，药学上可接受的盐包括，作为非限制性实例，碱土金属盐(例如钙或镁)，碱金属盐(例如，钠依赖性或钾)，铵盐等。

本文所述的化合物还包括同位素标记的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数的原子取代，但是原子质量或质数不同于通常在性质中发现的原子质量或质量数。用于包含在本文所述的化合物中的同位素的实例包括但不限于²H，³H，¹¹C，¹³C，¹⁴C，³⁶Cl，¹⁸F¹²³I，¹²⁵I，¹³N ¹⁵N ¹⁵O，¹⁷O，¹⁸O，³²P，³⁵S等在一些实施方案中，同位素标记的化合物可用于药物和/或基质组织分布研究。在一些实施方案中，用较重同位素(例如氘)取代提供了由更大的代谢稳定性(例如，体内半衰期或减少剂量要求)引起的某些治疗优点在一些实施方案中，用正电子发射同位素(例如C，F，O和N)取代在正电子发射形貌(PET)研究中可用于检查衬底受体占用。同位素标记的化合物通过任何合适的方法或通过使用适当同位素标记的试剂代替以其它方式使用的未标记试剂的方法来制备。

本文所述的化合物和具有不同取代基的其它相关化合物是使用本文所述的技术和材料和/或如例如在fieller and fieller′s试剂用于有机合成，第1-17卷(John Wileyand Sons，1991)中所描述的；Rodd′s chemistry of Carbon Compounds，volume 1-5andsupplement(Elsevier Science Publishers，1 989)；organic Reactions，volume 1-40(John Wiley and Sons，1991)，lack′s Comprehensive organic transformation(VCHPublishers Inc，1 989).3月，ADVANCED organic chemistry 6 th Ed，(Wiley 2007)；Carey and Sundberg，ADVANCED organic chemistry 4th Ed，volts。a和B(Plenum 2000，2001)和Green和Wuts，PROTECTIVE GROUPS IN organic SYNTHESIS 3″Ed，(Wiley 1999)，所有这些通过引用结合于此。用于制备如本文所述的化合物的一般方法通过使用适当的试剂和条件来修饰，用于引入本文提供的式中发现的各种部分。

定义

本文所用的术语″卤代″和″卤素″表示取代基部分，表示氟，氯，溴或碘，优选氟，氯或溴。

术语″烷基″单独或组合表示环状，直链或支链饱和烃基，其在直链和支链的情况下优选具有1-4个碳原子(C₁-C₄烷基))例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，环丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，正己基等，并且在环状烃的情况下优选具有3至7个碳原子，例如环丙基和环己基术语″取代的烷基″旨在包括被取代基取代的烷基，所述取代基不是H。″烷基″基团是指脂族烃基。对烷基的引用包括″饱和烷基″和/或″不饱和烷基″。所述烷基，无论是饱和的还是不饱和的，包括支链，直链或环状基团仅以举例的方式，烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基和己基。在一些实施方案中，烷基包括但不限于甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，戊基，己基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基等。″低级烷基″是C₁-C₆烷基。

术语″环烷基″是指环状烃链，其中所述环烷基任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。在一个实施方案中，单环或多环烷基可以是饱和或不饱和的，但非芳族的和/或螺的和/或非螺的，和/或桥连的和/或非桥连的和/或稠合的双环基团，其中形成环(即骨架原子)的每个原子是碳原子在各种实施方案中，环烷基是饱和的或部分不饱和的。在一些实施方案中，环烷基与芳环稠合。环烷基包括具有3-10个环原子的基团：单环的环烷基包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基，环戊烯基，环己烯基，环己二烯基，环庚烯基双环烷基包括但不限于四氢萘基，茚满基，四氢戊二烯，二环[2.2.1.1]己基，二环[2.2.1]庚基，癸炔基等。多环烷基包括金刚烷，降冰片烷等。术语环烷基包括″不饱和非芳族碳环基″或″非芳族不饱和碳环基″基团，它们均指非芳族碳环，如本文所定义的，其包含至少一个碳-碳双键或一个碳-碳三键。在某些实施方案中，所述环烷基具有3至20(C₃-C₂₀)，3至15(C₃-C₁₅)，3至10(C₃-C₁₀)，或3至6(C₃-C₆)碳原子。

术语″卤代烷基″是一个这样的取代的烷基，被一个或多个卤素原子取代，优选是被1-5个卤素原子取代的C₁-C₁₀烷基。卤代烷基的实例包括但不限于：二氟甲基，二氯甲基，三氟甲基，2，2，2-三氟乙基和五氟乙基。

单独或组合使用的术语″烷氧基″是烷基，优选C₁-C₄烷基，单独或组合通过-O-键共价结合到母体分子。烷氧基的实例是甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基和叔丁氧基。术语烷氧基羰基是例如叔丁氧基羰基或BOC。″烷氧基″基团是指(烷基)0-基团，其中烷基如本文所定义。

术语″烷基胺″是指-N(烷基)_xH_y基团，其中烷基如本文所定义，x和y选自x＝1，y＝1和x＝2，y＝0，当x＝2时，所述烷基与它们所连接的氮一起任选地形成环状环体系。

如本文所用，术语″芳基″是指芳环，其中形成环的每个原子是碳原子。本文所述的芳环包括具有五个，六个，七个，八个，九个或多于九个碳原子的环。芳基任选被取代。芳基的实例包括但不限于苯基和萘基。当单独使用或组合使用时，术语″芳基″表示取代或未取代的苯基，联苯基或萘基芳基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自羟基，羧基，烷氧基，优选C₁-C₁₀烷氧基，烷基，优选C₁-C₁₀烷基，卤代烷基，硝基，-NR²R³，-NHCO(C₁-C₁₀烷基))，-NHCO(苄基)，-NHCO(苯基)，-SH，-S(C₁-C₄烷基)，-(C₁-C₄烷基)，-SO₂(NR²R³)，-SO₂(C₁-C₁₀烷基)，-SO₂(苯基)或卤素，其中R²和R³如上所定义。

术语″芳氧基″是通过O-键共价结合的一种这样的芳基。术语″芳基烷基″可以被认为是取代的烷基并且表示-(CH₂)卤基，其中m是通常为1-3的整数，并且优选是苄基。相反，术语烷基芳基可以被认为是取代的芳基，并且可以例如表示诸如芳基(CH₂)CH₃的部分，其中n是通常为0至6的整数。

术语″烯基″是指含有一个或多个碳-碳双键，优选一个或两个双键的二至十个碳，直链或支链的烃，其中烯基任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。烯基的实例包括乙烯基，丙基，1，3-丁二烯基和1，3，5-己三烯基。

术语″炔基″是指含有一个或多个碳-碳三键的直链或支链的烃，其中炔基任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。例如，C₂-C₆炔基是指具有2-6个碳原子的直链不饱和一价烃基或具有3-6个碳原子的支化不饱和一价烃基在某些实施方案中，炔基是2-20(C₂-C₂₀)，2-15(C₂-C₁₅)，2-10(C₂-C₁₀)，或2-6(C₂-C₆)碳原子的直链单价烃，或3-20(C₃-C₂₀)，3-15(C₃-C₁₅)，3-10(C₃-C₁₀)或3-6(C₃-C₆)碳原子的支化单价烃。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-CCH)，丙炔基(包括所有异构形式，例如1-丙炔基)(C-CCH₃)和炔丙炔基(CH₂CCH))和丁炔基(包括所有异构形式，例如，1-丁炔-1-基和2-丁炔-1-基)。

酰氨基或酰基氨基烷基的酰基部分衍生自链烷酸，所述链烷酸含有最大值10，优选最大值6，碳原子(例如，乙酰基，丙酰基或丁酰基)或芳族羧酸(例如苯甲酰基)。酰氧基是例如乙酰氧基，，CH₃C(＝O)O-键合的一种这样的酰基，例如乙酰氧基，CH₃(C＝O)NH-。酰基氨基例如CH₃(C＝O)NH-(乙酰氨基)。同样地，酰基氨基烷基是CH₃(C＝O)NH(CH₂)_m-。

术语″杂原子″是指不是碳或氢的任何原子，例如卤素，磷，氮，氧或硫，并且包括任何氧化形式的氮或硫，以及碱性氮的任何季铵化形式。″杂烷基″基团取代了烷基的碳中的任何一个，其中杂原子具有适当数量的附接的氢原子(例如，CH，基团到NH基团或O基团)。

″酰胺″是式-C(O)NHR或-NHC(O)R的化学部分，其中R选自烷基，环烷基，芳基，杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环族(通过环碳键合)。

术语″酯″是指具有式-C(O)OR的化学部分，其中R选自烷基，环烷基，芳基，杂芳基和杂脂环族。

术语杂环或杂环基团，也由″Het″或″杂环基″表示，可以是稳定的，饱和的，部分不饱和的或芳族的5-或6-元杂环基。所述杂环由碳原子和1-3个独立地选自氮，氧和硫的杂原子组成。杂芳基是芳族的杂环，例如吡啶杂环基可以任选地被1-4个独立选自卤素，烷基，芳基，羟基，烷氧基，卤代烷基，硝基，氨基，酰基氨基，单烷基氨基，二烷基氨基，烷硫基，烷基亚磺酰基和烷基磺酰基的取代基取代，或者当杂环基是含芳族含氮杂环基时，氮原子可以携带氧化物基团这种杂环基的实例是咪唑基，咪唑啉基，噻唑烷基，吡啶基，吲哚基，呋喃基，嘧啶基，吗啉基，哒嗪基，吡嗪基，三嗪基和三唑基。可以融合两个或更多个杂环以形成多杂环，例如氮杂吲哚或嘌呤。

术语″杂芳基″或者，″杂芳基″是指包括选自氮，氧和硫的一个或多个环杂原子的芳基。含N的″杂芳基″或″杂芳基″部分是指其中环的至少一个骨架原子是氮原子的芳基。在某些实施方案中，杂芳基是单环或多环的单环杂芳基的实例包括但不限于吡咯，呋喃，噻吩，吡唑，咪唑，异噁唑并被称为吡咯基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，咪唑基和异噁唑基。术语杂芳基是指含有5或6个原子与至少一个杂原子的环状芳族化合物，其中杂芳基衍生自例如但不限于1-H-吡咯，吡唑，咪唑，1，2，4-三唑，1，2，3-三唑，四唑，呋喃，噻吩，噁唑，异噁唑，异噻唑，噻唑，1，2，5-噁二唑，1，2，3-噁二唑，1，3，4-噻二唑，1，2，5-噻二唑，吡啶，1，哒嗪，嘧啶，吡嗪或1，2，4-三嗪。杂芳基包括但不限于噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，噁唑基，异噁唑基，噁二唑基，噻唑基，异噻唑基，噻二唑基，吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，吲嗪基，嘌呤基，萘啶基和蝶啶基两个或更多个杂芳环可与另一芳基或杂芳环稠合，以形成聚杂芳基，例如吲哚，苯并呋喃，苯并恶唑，喹诺酮，异喹啉，喹喔啉，喹唑啉，朱砂或1，8-萘啶。本文所用的术语″杂芳基″还包括其中杂芳环与一个或多个芳基，脂环族或杂环基环稠合的基团，其中所述基团或连接点在所述杂芳环上含有两个或多个稠环的杂芳基的非限制性实例包括吲哚基，异吲哚基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，二苯并呋喃基，吲唑基，苯并咪唑基，苯并噻唑基，喹啉基，异喹啉基，朱砂基，酞嗪基，喹唑啉基，喹喔啉基，4H-喹啉基，咔唑基，吖啶基，吩嗪基，吩噻嗪基，吩噁嗪基，四氢喹啉基，四氢异喹啉基和吡啶并[2，3-b]-1，4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单或双环术语″杂芳基″可与术语″杂芳环″，″杂芳基″或″杂芳基″互换使用，其中任何术语包括任选被取代的环。术语″杂芳烷基″是指被杂芳基取代的烷基，其中所述烷基和杂芳基部分独立地是被取代的。

术语″杂环烷基″是指环状非芳族化合物，其是饱和或部分不饱和的，并且可以包含环中的一个或多个羰基(C＝O)官能团，其中杂环烷基衍生自例如哌嗪，哌啶，噻烷，1，3-二硫杂环，四氢吡喃，1，4-二噁烷，4-H-吡喃，硫代吗啉，吗啉，氮丙啶，环氧乙烷，硫杂环丁烷，氮杂环丁烷，1，3-二氮杂环丁烷，氧杂环丁烷，硫杂环丁烷，氮杂环丁烷-2-酮，吡咯烷，3-吡咯啉2-吡唑啉，2-咪唑啉，四氢呋喃，1，3-二氧戊环，四氢噻吩，1，2-氧杂环戊烷，1，3-氧杂环戊烷，环丁砜，2-哌啶酮，2-吡咯烷酮，己内酰胺，琥珀酰亚胺，1，3，5-三噻烷，硫代吗啉二氧化物，尿嘧啶或胸腺嘧啶。杂环烷基可以与另一个杂环烷基或杂芳基稠合，以形成多杂环，例如吲哚啉或2，3-二氢苯并呋喃术语″杂环基″是指含有1-4个环杂原子的杂芳族和杂脂环基，每个环选自O，S和N。在某些情况下，每个杂环在其环体系中具有4-10个原子，条件是所述基团的环不含有两个相邻的O或S原子。非芳族杂环基团包括在其环体系中具有3个原子的基团，但是芳族杂环基团在它们的环体系中必须具有至少5个原子所述杂环基团包括苯并稠环体系.3-元杂环基的实例是氮丙啶基(衍生自氮丙啶).4-元杂环基的实例是氮杂环丁基(衍生自氮杂环丁烷).5元杂环基的实例是噻唑基.6元杂环基的实例是吡啶基，并且10元杂环基的实例是喹啉基非芳族杂环基的实例是吡咯烷基，四氢呋喃基，二氢呋喃基，四氢噻吩基，四氢吡喃基，二氢吡喃基，四氢噻喃基，哌啶子基，吗啉代，硫代吗啉基，噻吨基，哌嗪基，氮丙啶基，氮杂环丁基，氧杂环丁烷基，噻吨基，高哌嗪基，氧杂环丁基，噻吩基，氧氮杂基，二氮杂基，硫氮杂基，1，2，3，6-四氢吡啶基，2-吡咯基，3-2H-吡喃基，4H-吡喃基，二氧杂环烷基，1，3-二氧戊环基，吡唑啉基，二硫代烷基，二硫醇基，二氢吡喃基，二氢噻吩基，二氢呋喃基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，3-氮杂二环[4.1.0]庚基，3H-吲哚基和喹啉基芳杂环基的实例是吡啶基，咪唑基，嘧啶基，吡唑基，三唑基，吡嗪基，四唑基，呋喃基，噻吩基，异噁唑基，噻唑基，噁唑基，异噻唑基，吡咯基，喹啉基，异喹啉基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，哒嗪基，三嗪基，异吲哚基，蝶啶基，嘌呤基，噁二唑基，噻二唑基，呋喃嗪基，苯并呋喃基，噁二唑基，噻二唑基，苯并噁唑基，喹唑啉基，喹喔啉基，萘啶基和呋喃吡啶基。

术语″色氨酸衍生物″或″色氨酸类似物″是指用除氢以外的一个或多个取代基取代其芳环中的一个或多个上的氨基酸色氨酸，并且使得取代基对应于为a，B，C，D，a′，B′，C和D′提供的定义，和/或在环位置处被C或N取代的色氨酸，如以上针对E，F，G，M，E′，F′，G′和M′所定义的。

术语″取代的″是指取代基或官能团或基团，例如描述于a，B，C和D的那些基团，以取代氢的形式连接到主烃支架的碳上。

在说明书中使用的术语″离去基团″(LG)是本领域技术人员容易理解的。通常，离去基团是增强其所连接的原子的亲电性的任何基团或原子，以易于通过亲核基团或原子置换。优选的离去基团的实例为三氟甲磺酸盐(-OSO2CF3)，甲磺酸甲酯，甲苯磺酸盐，咪唑盐，氯化物，溴化物和碘化物。

在某些情况下，在合成具有合适的″保护基″的式(I)化合物的过程中，至少需要并且经常需要保护中间体的氮(N)，这是已知的。这种氮保护基团的引入和去除是本领域技术人员公知的。

就这一点而言，术语″-NH保护基团″和″保护基团″当用在类似的上下文中时，并且如说明书和权利要求书中所用，是指通常用于阻断或保护-NH官能度同时使化合物上的其它官能团反应的亚类氨基保护基团用于实施本发明的方法的保护基团的种类不是关键的，只要衍生的-NH基团对随后的反应的条件是稳定的，并且可以在不破坏分子的其余部分的情况下在适当的点被除去。t。W。Greene和P。Wuts，Protective groups in OrganicSynthesis，第7章，第385-394页和397-403页提供了用于吲哚和马来酰亚胺的常用保护基的列表优选的吲哚保护基团是三甲基甲硅烷基乙氧基甲基，苄基，甲苯磺酰基，氨基甲酸酯，酰胺，烷基或芳基磺酰胺，而马来酰亚胺保护基团包括烷氧基，苄基，二烷氧基苄基，苄氧基烷基或烯丙基。相关术语″受保护的-NH″定义了被定义为-NH保护基团的基团。

在某些情况下，还可能需要在本发明的合成过程中保护羟基和氨基。本领域技术人员熟悉这样的技术。

″羟基保护基团″和这种″氨基保护基团″。″羟基保护基团″是指通常用于阻断或保护羟基的羟基基团的醚或酯衍生物之一，而反应在化合物上的其它官能团上进行所用的羟基保护基团的种类不是关键的，只要衍生化的羟基对后续反应的条件是稳定的，并且可以在不破坏分子的剩余部分的情况下在适当的点被除去。优选的羟基保护基团是叔丁基二苯基甲硅烷氧基(TBDPS)，叔丁基二甲基甲硅烷氧基(TBDMS)，三苯基甲基(三苯甲基)，单-或二甲氧基三苯甲基或烷基或芳基酯。

术语″氨基保护基团″是指通常用于阻断或保护氨基官能团同时使化合物上的其它官能团反应的氨基基团的取代基。在实施本发明的方法中采用的氨基保护基团的种类不是关键的，只要衍生的氨基对后续反应的条件是稳定的，并且可以在不破坏其余部分的情况下在适当的点被除去分子。优选的氨基保护基团是叔丁氧基羰基，邻苯二甲酰亚胺，环状烷基和苄氧基羰基。

本说明书中使用的术语″活化马来酰亚胺″是指3，4-二取代马来酰亚胺(吡咯基-2，5-二酮)或2，3，4-三取代马来酰亚胺，其被至少一个离去基团取代，该离去基团便于与试剂反应，特别是与任选N-取代的有机金属-3-吲哚反应。

术语″吲哚基马来酰亚胺″包括具有作为其根部结构的3-(吲哚-3-基)-吡咯基-2，5-二酮的化合物，并且包括″双吲哚基马来酰亚胺″的亚属，其具有作为其根部结构的3，4-(吲哚-3-基)-吡咯基-2，5-二酮，其中所述吲哚-3-基部分或部分是/任选地N-取代的可以任选地被取代在吲哚基部分的稠合的6-元芳环上，并且可以任选地在吲哚-3-基部分或部分的位置2处被取代。还包括那些双吲哚基马来酰亚胺，其中所述吲哚基的N-取代基通过桥连部分连接在一起，如式(I)和式(II)中的Q和R所述。现有技术描述了这样的任选取代的吲哚基马来酰亚胺的范围。

术语″吲哚并咔唑″是指含有衍生自色氨酸和稠合马来酰亚胺或内酰胺官能团的两个吲哚环的生物碱化合物及其衍生物。最频繁的分离的天然吲哚咔唑是吲哚(2，3-a)咔唑，最常见的亚组是吲哚(2，3-a)吡咯(3，4-c)咔唑。

如本文所述，本发明的化合物可含有″任选取代的″部分。通常，术语″取代的″，无论是在术语″任选地″之前，是指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基取代除非另有说明，否则″任选取代的″基团可以在基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被选自指定基团的多于一个取代基取代时，取代基可以在每个位置处相同或不同。本发明所设想的取代基的组合优选地是导致形成稳定或化学上可行的化合物的那些术语″任选取代的″或″取代的″是指所引用的基团被一个或多个另外的基团取代。在某些实施方案中，所述一种或多种更多的附加基团独立地且独立地选自酰胺，酯，烷基，环烷基，杂烷基，芳基，杂芳基，杂脂环基，羟基，烷氧基，芳氧基，烷硫基，芳硫基，烷基亚砜，芳基亚砜，酯，烷基砜，芳基砜，氰基，卤素，烷酰基，烷氧基，卤代烷基，卤代烷氧基，氟烷基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，酰胺基。

如本文所用，术语″稳定的″是指当经受条件以允许其生产，检测，以及在某些实施方案中，它们的回收，纯化和用于本文公开的一个或多个目的的化合物时基本上不改变的化合物。

如本文所用，术语″增溶基团″是指促进其所连接的化合物的溶解度的化学部分。合适的增溶剂包括，例如，饱和杂环，例如吗啉代，哌嗪基和哌嗪基，和氨基，例如二甲基氨基和甲氧基丙基氨基。

除非另有说明，否则本文描述的结构也意在包括结构的所有异构体(例如对映体，非对映体和几何(或构象))形式；例如，对于每个不对称中心，Z和e双键异构体的R和S构型，以及Z和e构象异构体因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映体，非对映体和几何(或构象)混合物在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。

术语″同位素变体″是指在构成这种化合物的原子中的一个或多个原子处含有非天然比例的同位素的化合物。在某些实施方案中，化合物的″同位素变体″包含一种或多种同位素的非天然比例，包括但不限于氢(¹H)，氘(²H)，氚(³H)，碳-11(¹¹C)，碳-12(¹²C)碳-13(¹³C)，碳-14(¹⁴C)，氮-13(¹³N)，氮-14(¹⁴N)，氮-15(¹⁵N)，氧-14(¹⁴O)，氧-15(¹⁵O)，氧-16(¹⁶O)，氧-17(¹⁷O)，氧-18(¹⁸O)氟-17(¹⁷F)，氟-18(¹⁸F)，磷-31(³¹P)，磷-32(³²P)，磷-33(³³P)，硫-32(³²S)，硫-33(³³S)，硫-34(³⁴S)，硫-35(³⁵S)，硫-36(³⁶S)，氯-35(³⁵Cl)，氯-36(³⁶Cl)，氯-37(³⁷Cl)，溴-79(⁷⁹Br)，溴-81(⁸¹Br)，碘-123(¹²³I)碘-125(¹²⁵I)碘-127(¹²⁷I)碘-129(¹²⁹I)和碘-131(¹³¹I)″异位变体″为稳定形式，即非放射性。在某些实施方案中，化合物的″同位素变体″含有一种或多种同位素的非天然比例，包括但不限于：氢(¹H)，氘(^2H)，碳-12(¹²C)，碳-13(¹³C)，氮-14(¹⁴N)，氮-15(¹⁵N)，氧-16(¹⁶O)氧-17(¹⁷O)，氧-18(¹⁸O)氟-17(¹⁷F)，磷-31(³P)，硫-32(³²S)，硫-33(³³S)，硫-34(³⁴S)，硫-36(³⁶S)，氯-35(³⁵Cl)，氯-37(³⁷Cl)，溴-79(⁷⁹Br)，溴-81(⁸¹Br)和碘-127(¹²⁷I)。在某些实施方案中，化合物的″同位素变体″是不稳定的形式，即放射性。在宫颈实施方案中，化合物的″同位素变体″含有一种或多种同位素的非天然比例，包括但不限于氚(³H)，碳-11(¹¹C)，碳-14(¹⁴C)，氮-13(¹³N)，氧-14(¹⁴O)，氧-15(¹⁵O)，氟-18(¹⁸F)，磷-32(³²P)，磷-33(³³P)，硫-35(³⁵S)，氯-36(³⁶Cl)，碘-123(¹²³I)碘-125(¹²⁵I)，碘-129(¹²⁹I)和碘-131(¹³¹I)。它将可以理解的是，在如本文提供的化合物中，任何氢可以是²H，例如，或者任何碳可以是¹³C，例如，或者任何氮可以是¹⁵N，例如，在根据本领域技术人员的判断可行的情况下，任何氧可以是¹⁸O。在某些实施方案中，化合物的″同位素变体″含有非天然比例的氘除非另有说明，否则本文描述的结构也意味着包括仅在存在一个或多个同位素富集原子的情况下不同的化合物。例如，具有本结构的化合物包括用氘或氚置换氢，或者用¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替碳也在本发明的范围内此类化合物可用于例如分析工具，作为生物测定中的探针，或作为根据本发明的治疗剂。

术语″溶剂化物″是指由溶质(例如本文提供的化合物)的一种或多种分子和溶剂(其以化学计量或非化学计量量存在)的一种或多种分子形成的复合物或聚集体。合适的溶剂包括但不限于水，甲醇，乙醇，正丙醇，异丙醇和乙酸。在某些实施方案中，所述溶剂是药学上可接受的。在一个实施方案中，所述复合物或聚集体为结晶形式在另一个实施方案中，所述复合物或聚集体为非晶型。溶剂为水，溶剂化物为水合物。水合物的实例包括但不限于半水合物，一水合物，二水合物，三水合物，四水合物和五水合物。

当与天然存在的生物材料如核酸分子，氨基酸，多肽，小分子天然产物，宿主细胞等结合使用时，术语″天然存在的″或″天然的″或″天然的″是指直接从本质上发现或直接分离并且不被人改变或操纵的材料类似地，″非天然存在的″或″非天然的″或″非天然的″或″非天然的″是指天然存在或未知的材料，或者已经在结构上被人改性或合成。

术语″半合成″是指合成以产生原始天然材料的新变体，衍生物或类似物的天然材料。术语″衍生物″或″类似物″是指衍生自天然或nan天然材料的化合物的结构变体。

术语″光学活性″和″对映体活性″是指分子的集合，其对映体过量不小于约50％，不少于约70％，不少于约80％，不少于约90％，不少于约91％，不少于约92％，不少于约93％，不少于约94％，不少于约95％，不少于约96％，不少于约97％，不少于约98％，不少于约99％，不少于约995％，或不小于约99.8％。在某些实施方案中，所述化合物包含约95％或更多的一种对映异构体和约5％或更少的另一对映异构体，基于所讨论的外消旋物的总重量。在描述光学活性化合物时，前缀R和s用于表示分子围绕其手性中心的绝对构型符号(+)和(-)用于表示化合物的光旋转，即，偏振光平面被光学活性化合物旋转的方向。所述(-)前缀指示所述化合物是左旋的，即所述化合物使偏振光平面向左或逆时针旋转。所述(+)前缀指示所述化合物是右旋性的，即所述化合物是右旋性的。

化合物使偏振光平面向右或顺时针旋转。然而，光学旋转(+)和(-)的符号与分子，R和S的绝对构型无关。

短语″立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其同位素变体；或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药具有与短语″立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物或其中引用的化合物的同位素变体相同的含义；其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或前药，其立体异构体，对映异构体，对映异构体的混合物，非对映体的混合物，或其中引用的化合物的同位素变体。

术语″大约″或″大约″是指本领域普通技术人员所确定的用于特定值的可接受的误差，这部分取决于所述值是如何被测量或确定的。在某些实施方案中，术语″约″或″约″意指在1，2，3或4个标准偏差内。在某些实施方案中，术语″约″或″约″意指在给定值或范围的50％，20％，15％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％，1％，0.5％或0.05％内。

术语″活性成分″和″活性物质″是指单独或与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合给药的化合物，用于治疗，预防或改善病症，疾病或病症的一种或多种症状。如本文所用，″活性成分″和″活性物质″可以是本文所述化合物的光学活性异构体或同位素变体。

术语″药物″，″治疗剂″和″化疗剂″是指化合物或其药物组合物，其施用于治疗，预防或改善病症，疾病或病症的一种或多种症状的受试者。

术语″受试者″是指动物，包括但不限于灵长类动物(例如，人)，牛，猪，绵羊，山羊，马，狗，猫，兔，大鼠或小鼠。术语″受试者″和″患者″在本文中可互换地用于例如哺乳动物受试者，例如人类受试者，在一个实施方案中，人。

如本文所用，术语″患者″是指动物，优选哺乳动物，最优选是人。

术语″治疗″，″治疗″和″治疗″意在包括减轻或消除病症，疾病或病症，或与病症，疾病或病症相关的症状中的一个或多个；或减轻或根除病症，疾病或病症本身的原因。

术语″预防″，″预防″和″预防″意在包括延迟和/或排除病症，疾病或病症和/或其伴随症状的发作的方法；阻止受试者获得病症，疾病或病症；或降低受试者获得病症，疾病或病症的风险。

术语″治疗有效量″意在包括化合物的量，所述化合物在施用时足以防止或在某种程度上减轻所治疗的病症，疾病或病症的症状中的一种或多种。术语″治疗有效量″还涉及足以引发生物分子(例如蛋白质，酶，RNA或DNA)，细胞，组织，系统，动物或人的生物或医学反应的化合物的量，所述生物分子正由研究者，兽医，医学医生或临床医生寻求。

术语″IC₅₀″或″EC₅₀″是指在测量这种响应的测定中对最大响应的50％抑制所需的化合物的量，浓度或剂量。术语″CC₅₀″是指导致宿主活力降低50％的化合物的量，浓度或剂量在某些实施方案中，与未处理的细胞相比，化合物的CC₅₀是降低用化合物处理的细胞生存力50％所需的化合物的量，浓度或剂量。该术语是指配体和蛋白质的平衡解离常数，其被测量以评估小分子配体(例如小分子药物)对诸如激酶的蛋白质的结合强度解离常数k_d通常用于描述配体和蛋白质之间的亲和力；即，配体与特定蛋白质有多紧密结合，并且是关联常数的倒数。配体-蛋白质亲和性受到两个分子之间的非共价的分子间相互作用，例如氢键合，静电相互作用，疏水和范德华力的影响类似的术语″K″是抑制剂常数或抑制常数，其是酶抑制剂的平衡解离常数，并提供抑制剂效力的指示。

如本文所用，短语″生物活性″是指在生物系统和/或生物体中具有活性的任何物质的特性。例如，当被施用于生物体时，该物质对该生物体具有生物学作用并被认为是生物活性的在特定实施方案中，其中蛋白质或多肽是生物活性的，所述蛋白质或多肽的与所述蛋白质或多肽的至少一个生物活性共享的部分通常被称为″生物活性″部分。

如本文所用，术语″有效量″是当全身给药时足以实现有益的或期望的结果的量，例如有益的或期望的临床结果，或导致疾病状况的改善的其它期望的效果。有效量也是产生预防效果的量，例如，延迟，减少或消除与自身免疫疾病或癌症相关的病理或不期望病症的外观的量。有效量任选地在一个或多个施用中施用。在治疗方面，本文所述的组合物的″有效量″是足以减轻，减轻，改善，稳定，逆转或减慢自身免疫疾病或癌症的进展的量。

″有效量″包括单独或与用于治疗疾病或病症的一种或多种药剂联合使用的任何PIM抑制剂。如本文所述的治疗剂的″有效量″将由患者的主治医师或其他医疗护理提供者确定。影响治疗有效量的因素将包括，吸收曲线(例如，，其摄取到脑或其它组织中的速率，起到疾病的开始所经过的时间，以及年龄，身体状况，其他疾病状态的存在，以及被治疗的对象的营养状况。另外，所述患者正在接受的其它药物与pde 3抑制剂组合使用，通常会影响要施用的治疗剂的治疗有效量的确定。

如本文所用，术语″抑制剂″是指能够抑制(包括部分抑制或变构抑制)靶分子(例如PIM激酶)的一个或多个生物学活性的分子。抑制剂例如通过减少或抑制靶分子的活性和/或减少或抑制信号转导起作用。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂引起所有三种PIM激酶的基本完全抑制在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂基本上完全抑制两种PIM激酶，例如pde 1和pde 3。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂基本上完全抑制一种PIM激酶，例如pde 3在一些实施方案中，短语″部分抑制剂″是指能够例如通过部分地减少或抑制靶分子的活性和/或部分地减少或抑制信号转导而引起部分响应的分子。在一些情况下，部分抑制剂模拟抑制剂的空间布置，电子性质或一些其它物理化学和/或生物学性质在一些情况下，在抑制剂的升高水平的存在下，部分抑制剂与抑制剂竞争以用于靶分子的占用，并且提供相对于单独抑制剂的功效降低。

在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂是PIM激酶的部分抑制剂。在一些实施方案中，本文描述的PIM抑制剂是PIM激酶的变构调节剂。在一些实施方案中，PIM抑制剂结合PIM激酶的激酶结构域。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂阻断PIM的ATP结合位点。在一些实施方案中，PIM抑制剂是″II型″激酶抑制剂在一些实施方案中，PIM抑制剂使PIM激酶在其非活性构象或状态下稳定。在一些实施方案中，PIM抑制剂稳定PIM激酶的″DFG-out″构象。

在一些实施方案中，PIM抑制剂减少，消除和/或移除PIM与其天然结合配偶体中的至少一种(例如凋亡Bcl-2相关的死亡启动子蛋白(BAD)，核糖体蛋白4e-BP 1和转录因子c-Myc)之间的结合。在一些情况下，PIM与其天然配偶体中的至少一者之间的结合在不存在PIM抑制剂(例如，90％，80％，70％，60％，50％，40％，30℃或20％)的情况下比在PIM抑制剂的存在下更强可选地或另外地，PIM抑制剂抑制PIM激酶的磷酸转移酶活性，例如通过直接结合到催化位点或通过改变PIM的构象使得催化位点变得不能接近基质。在一些实施方案中，PIM抑制剂抑制PIM激酶磷酸化其目标基质中的至少一种的能力，例如，转录因子STAT 3和STAT 5(信号换能器和转录活化剂)，c-Myc，foxo 1a和foxo 3a，细胞周期调节剂p 27，cdca 25a和cdc 25c，或其自身。pim抑制剂包括无机和/或有机化合物。

在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少由促有丝分裂生长因子引起的信号转导，例如白细胞介素和与细胞因子受体结合的干扰素。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂降低促凋亡BAD的磷酸化，从而实现细胞凋亡。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂降低细胞水平转录因子蛋白c-Myc。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂降低过氧化物酶体增殖物激活受体γ共活化剂1α(PGC-1α)的细胞水平，能够调节糖酵解和线粒体生物发生的酶。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂降低转录因子STAT 3，Myb，foxo 1a和foxo 3a的磷酸化和活化在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂提高葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂通过磷酸化STAT 3来降低VEGF和血管生成的水平。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少胰腺癌细胞的细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少胰腺癌细胞的细胞增殖在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少胃癌细胞的细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少结肠直肠癌细胞的细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少前列腺癌细胞的细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂降低胆囊癌细胞的细胞增殖在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂减少鼻咽癌细胞的细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的PIM抑制剂在一些实施方案中减少肝癌细胞的细胞增殖，适合于本文所述方法的PIM抑制剂是直接PIM抑制剂。在一些实施方案中，适用于本文所述方法的PIM抑制剂是间接PIM抑制剂在一些实施方案中，适合于本文的方法的PIM抑制剂相对于PIM活性的基础水平降低PIM活性约1.1倍至约1000倍，例如至约1.2倍，1.5倍，1.6倍，1.7倍，2.0倍，3.0倍，5.0倍，6.0倍，7.0倍，8.5倍，9.7倍，10倍，12倍，14倍，15倍，20倍，30倍，40倍，50倍，60倍，70倍80折叠，90倍，95倍，100倍，200倍，300倍，400倍，500倍，600倍，700倍，800倍，900倍，1000倍，或相对于基础pim 3活性约1.1倍至约1000倍的任何其他量。在一些实施方案中，PIM抑制剂是可逆PIM抑制剂。在其它实施方案中，PIM抑制剂是不可逆PIM抑制剂。直接PIM抑制剂任选地用于制造用于治疗恶性或癌性疾病的药物。

在一些实施方案中，用于本文所述的方法的PIM抑制剂具有体外IC₅₀，其被定义为抑制浓度，其中在使PIM抑制剂与PIM激酶接触之后剩余50％的一种或多种PIM激酶的活性，或解离常数(Kd))，或抑制常数(Ki)小于100μm(例如，小于10μm，小于5μm，小于4μm，小于3μm，小于1μm，小于0.8μm，小于0.6μm，小于0.5μm，小于0)4μm，小于0.3μm，小于0.2μm。小于0.1μm，小于0.08μm，小于0.06μm，小于0.05μm，小于0.04μm，小于0.03μm，小于0.02μm，小于0.01μm，小于0.0099μm，小于0.0098μm，小于0.0097μm，小于0.0096μm，小于0.0095μm，小于0.0094μm，小于0.0093μm，小于0.00092μm，小于0.0090μm，小于0.0010μm或小于0.00010μm)。

如本文所用，核酸序列的″表达″是指以下事件中的一个或多个：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如，通过将DNA转录成信使RNA)；(2)RNA转录本的处理(例如，通过拼接，编辑).5′cap形成，和/或3″末端形成″)；(3)RNA翻译成多肽或蛋白质；(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。

如本文所用，术语″ργμ多肽″或″PIM蛋白″或″PIM″或″PIM激酶″是指属于人激酶的丝氨酸/苏氨酸家族的蛋白质。pimb 1氨基酸序列的代表性实例包括但不限于人pde 1(GenBank登录号PI 1309)。人pde 1还具有已经鉴定的34kDa和44kDa的两种截短的同种型，并且在整个动物模型中存在pimb 1同源物pimb 2氨基酸序列的代表性实例包括但不限于人p im 12(genbank登录号q9p1w9)。人PIM 2还具有34kda，37kda和40kda的三种截短的同种型，并且在整个动物模型中存在pimb2同源物。pimb 3氨基酸序列包括但不限于人p im 3(genbank登录号q 86 v 86)人pde 3还具有许多已鉴定的截短的同种型，并且在整个动物模型中存在pimb 3同源物。

在一些实施方案中，pde 1多肽包含至少60％至100％相同的氨基酸序列，例如至少75％，80％，85％，86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％，或与GenBank登录号P11309的序列相同的约70％至约100％的任何其它百分比。在一些实施方案中，pde 2多肽包含至少60％至100％相同的氨基酸序列，例如，至少75％，80％，85％，86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％)，或与GenBank登录号Q9P1w9的序列相同的约70％至约100％的任何其它百分比。在一些实施方案中，pde 3多肽包含与GenBank登录号Q 86V 86的序列相同，例如至少60％至100％相同，例如至少75％，80％，85％，86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％或任何其它百分比的氨基酸序列。

编码p im 1蛋白的人p im 1基因的代表性实例包括但不限于人pde 1(GenBank登录号5292)。在一些实施方案中，人pde 1基因包含至少70％至100％相同的核苷酸序列，例如至少75％，80％，85％.86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％，或与GenBank登录号5292的序列相同的约70％至约100％的任何其它百分比编码p im 2蛋白的人p im 2基因的代表性实例包括但不限于人p im 2(GenBank登录号11040)。在一些实施方案中，人pde 2基因包含至少70％至100％相同的核苷酸序列，例如至少75％，80％，85％.86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％，或与GenBank登录号11040的序列相同的约70％至约100％的任何其它百分比编码p im 3蛋白的人p im 3基因的代表性实例包括但不限于人p im 3(GenBank登录号415116)。在一些实施方案中，人pde3基因包含至少70％至100％相同的核苷酸序列，例如至少75％，80％，85％.86％，87％，88％，90％，91％，92％，94％，95％，96％，97％，98％，或从约70％至约100％的与GenBank登录号415116的序列相同的任何其它百分比。

为了确定两个氨基酸序列或两个核酸的同源性百分比，将序列对准以用于最佳比较目的(例如，可以在序列中引入间隙)第一氨基酸或核酸序列，用于与第二氨基酸序列或核酸序列最优对齐)。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中的相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的两个序列之间的同源性百分比是由序列共享的相同位置的数目的函数(即，％身份＝相同位置/总数#的位置(例如，重叠位置)x 100)。在一个实施方案中，所述两个序列具有相同的长度。

为了确定两个序列之间的同源性百分比，使用Karlin，S。和Altschul，sf，ProcNatl Acad Sci USA，1990，87：2264-2268的算法，如Karlin，S。and Altschul sf，ProcNatl Acad Sci USA，1993，90：5873-5877。这种算法结合到Altschul，sf，et al，J Mol的NBLAST和BLAST程序中。biol.1990，215，403-410BLAST核苷酸搜索用NBLAST程序进行，score＝100；wordlength＝12，以获得与本文所述或公开的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索用BLAST程序进行，score＝50，wordlength＝3以获得用于比较目的的间隙比对，如Altschul，sf，et al nucleic Acids Res，1997，25，3389-3402中所描述的那样利用有间隙的BLAST当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用相应程序(例如BLAST和NBLAST)的默认参数。参见国家生物技术信息中心，进一步详述(www。ncbi。nlm。nih。gov)。适用于本文所述的方法的蛋白质还包括具有1至15个氨基酸变化的蛋白质，例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个氨基酸取代，缺失或添加，与本文所述的任何蛋白质pim 3抑制剂的氨基酸序列相比。在其它实施方案中，改变的氨基酸序列为至少75％相同，例如77％，80％，82％，85％，88％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或100％相同于本文所述的任何蛋白质pim3抑制剂的氨基酸序列此类序列变体蛋白适合于本文所述的方法，只要改变的氨基酸序列保留足够的生物活性以在本文所述的组合物和方法中起作用。在进行氨基酸取代的情况下，所述取代应是保守氨基酸取代在20种常见的蛋白原氨基酸中，例如，″保守氨基酸取代″是通过以下基团中的每一个内的氨基酸取代的：(1)甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸，(2)苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸，(3)丝氨酸和苏氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨酰胺和天冬酰胺，和(6)赖氨酸，精氨酸和组氨酸BLOSUM62表是衍生自蛋白质序列片段的约2，000个局部多重比对的氨基酸取代基质，代表多于500个相关蛋白质组的高度保守区域(Henikoff，S。等，ProcNatlAcadSciUSA，1992，89，10915-10919)。因此，BLOSUM 62取代频率用于定义保守氨基酸取代，其可被引入本文所述或所述的氨基酸序列中尽管可能仅基于化学性质来设计氨基酸取代(如上所述)，但语言″保守氨基酸取代″优选是指由大于1的BLOSUM 62值表示的取代。例如，氨基酸取代是保守的氨基酸取代的特征在于BLOSUM 62值为0，1，2或3。根据该系统，优选的保守氨基酸取代的特征在于BLOSUM 62值为至少1(例如，1，2或3)，而更优选的保守氨基酸取代的特征在于BLOSUM 62值至少为2(例如，2或3)。

如本文所用，除非另有说明，否则术语″PIM活性″包括但不限于PIM激酶蛋白-蛋白相互作用，PIM磷酸转移酶活性(分子间或分子间)，易位等中的至少一种。如本文所用，″PIM抑制剂″是指直接或间接地降低PIM活性的任何分子，化合物或组合物在一些实施方案中，PIM抑制剂抑制，降低和/或消除PIMmRNA和/或蛋白质的水平或PIMmRNA和/或蛋白质的半衰期，这些抑制剂被称为″清除剂″。在一些实施方案中，PIM抑制剂是抑制，降低和/或降低PIM活性的PIM拮抗剂。在一些实施方案中，PIM抑制剂还破坏，抑制或消除PIM与其天然结合配偶体之间的相互作用(例如，，piim 3激酶的基底，BAD或c-Myc)或作为病理状态的PIM的结合配偶体的蛋白质，如使用标准方法所测量的。

在一些实施方案中，pde 3抑制剂减少，消除和/或去除PIM与其天然结合配偶体中的至少一种的结合(例如，BAD，AMPK，STAT 3，c-Myc，Myb，foxo la和foxo 3a，p 21，p 27，PGC-1α，eIF 4B，cdca 25a，cdsc 25c或翻译控制的肿瘤蛋白TCTP TPT 1)。在一些情况下，PIM与其天然结合配偶体中的至少一者之间的结合在不存在PIM抑制剂(例如，，90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％或20％)。在一些实施方案中，PIM抑制剂防止，减少或消除PIM与异常积累或聚集在疾病状态的细胞或组织中的蛋白质之间的结合。在一些情况下，PIM与聚集或聚集在细胞或组织中的至少一种蛋白质之间的结合在不存在PIM抑制剂(例如，，90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％或20％)。本文所用的″个体″或″个体″是哺乳动物。在一些实施方案中，个体是动物，例如大鼠，小鼠，狗或猴。在一些实施方案中，个体是人类患者。在一些实施方案中，″个体″或″个体″是人在一些实施方案中，个体患有癌症或被怀疑患有癌症或被遗传地预设于癌症。在一些实施方案中，包含PIM抑制剂的药理学组合物″周向施用″或″外周施用″。如本文所用，这些术语指的是任何形式的药剂(例如治疗剂)给药至不直接施用于中枢神经系统的个体，即，使所述药剂与血脑屏障的非脑侧接触。本文所用的″外周施用″包括静脉内，动脉内，皮下，肌内，腹膜内，透皮，吸入，经口，鼻内，直肠，口服，肠胃外，舌下或经鼻。在一些实施方案中，通过脑内途径施用p im 3抑制剂。

术语″多肽″和″蛋白质″在本文中可互换使用以指氨基酸残基的聚合物。即，涉及多肽的描述同样适用于蛋白质的描述，反之亦然。这些术语适用于天然存在的氨基酸聚合物以及氨基酸其中一种或多种氨基酸残基是非天然存在的氨基酸的聚合物，例如氨基酸类似物。如本文所用，术语包括任何长度的氨基酸链，包括全长蛋白质(即，抗原)，其中氨基酸残基通过共价键连接。

术语″氨基酸″是指天然存在的和非天然存在的氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然编码的氨基酸是20种常见氨基酸(丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸)和缬氨酸)和热解正弦和硒代半胱氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的碱性化学结构的化合物，即与氢，羧基，氨基和R基团结合的碳，如高丝氨酸，正亮氨酸，甲硫氨酸亚砜，甲硫氨酸甲基锍此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的碱性化学结构。氨基酸在本文中可以通过它们的通常已知的三个字母符号或由IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的单字母符号来提及。同样地，核苷酸可通过它们通常接受的单字母代码来指代。

术语″核酸″是指以单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸，脱氧核糖核苷，核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特别限定，否则术语包括含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，其具有与参考核酸类似的结合性质，并且以类似于天然存在的核苷酸的方式代谢除非另外特别限定，否则该术语还指寡核苷酸类似物，包括PNA(肽去核酸)，在反义技术中使用的DNA的类似物(硫代磷酸酯，亚磷酰胺等)。除非另有说明，否则特定核酸序列也隐含地包含其保守修饰的变体(包括但不限于简并密码子取代)和互补序列以及明确指示的序列具体地，可以通过生成其中一个或多个所选(或全部)密码子的第三位置被混合碱和草胺脱氧肌苷残基(Batzer，ma等，Nucleic Acid Res，1991，19，5081-1585；Ohtsuka，E。等，J。Biol。chem，1985260，2605-2608；和rossoini，G。M，etal，Mol。细胞。探针，1994，8，91-98)。

术语″分离的″和″纯化的″是指基本上或基本上从其天然环境中除去或浓缩的材料。例如，分离的核酸是与通常在样品中侧翼的核酸或其它核酸或组分(蛋白质，脂质等)分离的核酸。在另一个实例中，如果从其天然环境中基本上除去或浓缩多肽，则纯化多肽本发明公开了用于纯化和分离核酸和蛋白质的方法。

术语″抗体″描述了天然或部分或全部合成产生的免疫球蛋白。该术语还涵盖具有结合结构域的任何多肽或蛋白质，所述结合结构域与抗原结合结构域相同或同源。本发明还考虑了cdr接枝的抗体。

术语。本文中使用的术语抗体也将被理解为意指保持特异性结合抗原的能力的抗体的一个或多个片段(参见总体上：hollier，P。等，Nature Biotech.2005，23(9)，1126-1129)。此类抗体的非限制性实例包括(i)Fab片段，由VL，VH，CL和CH 1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含由在铰链区处的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CHI结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward，es，et al，Nature，1989，341，544-546)，其由VH结构域组成：和(vi)分离的互补性决定区(CDR)此外，尽管Fv片段的两个域，VL和VH被单独的基因编码，但是它们任选地使用重组方法通过合成接头结合，所述合成接头使得它们能够被制成单个蛋白链，其中VL和VH区对形成一价分子(称为单链Fv(scFv)))；参见例如Bird，re等，Science 1988，242，423-426；Huston，js等，Proc Natl Acad Sci USA，1988，85，5879-5883；以及Osbourn，jk等，Nat生物技术醇.1998，16，778-781)。这样的单链抗体也旨在被包含在术语抗体内。特定scFv的任何VH和VL序列任选地连接到人免疫球蛋白恒定区cDNA或基因组序列，以便产生编码完整IgG分子或其它同种型的表达载体vh和v1也可选地用于使用蛋白质化学或重组DNA技术生成Fab，Fv或其它免疫球蛋白片段。也包括其它形式的单链抗体，例如双糖尿病。″F(aW)″和″Fab″部分任选地通过用蛋白酶如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶治疗免疫球蛋白(单克隆抗体)来生产，并且包括通过在两个H链中的每一个中的铰链区之间存在的二硫键附近消化免疫球蛋白而产生的抗体片段。例如，木瓜蛋白酶在两个H链中的每一个中的铰链区之间存在二硫键的上游，以生成两个同源抗体片段，其中L链由VL(L链可变区)和CL(L链恒定区)组成，H链片段由VH(H链可变区)和ch 1(在H链恒定区中的y 1区)组成的H链片段通过二硫键连接在它们的C末端区。这两个同源抗体片段中的每一个被称为Fab′胃蛋白酶还在两个H链中的每一个中的铰链区之间的二硫键的下游裂解IgG，以产生略大于两个上述Fab′在铰链区连接的片段的抗体片段。该抗体片段称为F(ab′)2。

fab片段还含有轻链的恒定区和重链的第一恒定区(CH1)。fab′片段与fab片段不同，通过在重链CHI结构域的羧基末端添加几个残基，所述残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。fab′-SH是本文中针对fab′的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基具有游离硫醇基团F(ab′)2抗体片段最初作为一对Fab′片段产生，所述片段在它们之间具有铰链半胱氨酸。记载了抗体片段的其它化学偶联。″Fv″是含有25个完全抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该区域由一重链和一条轻链的二聚体组成可变结构域，非共价缔合。在该配置中，每个可变区的三个超可变区相互作用以在VH-VL二聚体的表面上限定抗原结合位点。共同地，所述六个超可变区赋予所述抗体的抗原结合特异性然而，甚至单个可变结构域(或仅包含针对抗原特异性的三个超可变区的Fv的一半)具有识别和结合抗原的能力，尽管在比整个结合位点低的亲和力下。″单链Fv″或″sFv″抗体片段包括抗体的VH，VL或VH和VL结构域，其中两个域都存在于单个多肽链中在一些实施方案中，Fv多肽还包括VH和VL结构域之间的多肽连接体，其使得sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。对于sFv的综述，例如，plukthun在″the Pharmacology of Monoclonal Antibodies″，Vol 113，Rosenburg和Moore eds中。springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。

″嵌合″抗体包括来源于不同哺乳动物的组合的抗体。所述哺乳动物例如是兔，小鼠，大鼠，山羊或人。不同哺乳动物的组合包括来自人和小鼠源的片段的组合。在一些实施方案中，本文描述或描述的抗体是单克隆抗体(MAb)，通常是通过人源化小鼠单克隆抗体而得到的嵌合人-小鼠抗体这样的抗体是从例如转基因小鼠获得的，所述转基因小鼠已被″工程化″以响应于抗原性挑战产生特定的人抗体。在该技术中，人重链基因座和轻链基因座的元素被引入源自包含内源重链和轻链基因座的靶向破坏的胚胎干细胞系的小鼠的菌株中在一些实施方案中，所述转基因小鼠合成对人抗原特异性的人抗体，并且所述小鼠用于产生人抗体分泌杂交瘤。

″测定″是指产生实验条件和收集有关暴露于特定实验条件的特定结果的数据。例如，可以基于它们作用于可检测基质的能力来测定酶。可以基于其与特定靶分子或分子结合的能力来测定化合物。

如本文所用，术语″调节″或″调节″是指改变生物活性(即，增加或降低活性)的效果，特别是与特定生物分子如蛋白激酶相关的生物活性。例如，特定生物分子的抑制剂通过降低生物分子如酶的活性来调节该生物分子(例如酶)的活性这样的活性通常用关于例如酶的抑制剂的化合物的抑制浓度(IC 50)来指示。

在使用，测试或筛选作为或可以是调节剂的化合物的上下文中，术语″接触″是指化合物与特定分子，复合物，细胞，组织，生物体或其它指定的材料足够接近，从而可能发生化合物与其它指定材料之间的潜在结合相互作用和/或化学反应。激酶活性测定可利用多种不同的激酶活性测定法测定活性调节剂和/或测定特定激酶或激酶组的调节剂的特异性。除了下面的实施例中所述的测定之外，本领域普通技术人员将知道可以使用的其它测定，并且可以修改用于特定应用的测定。例如，许多关于激酶的论文描述了可以使用的测定另外的替代测定可采用结合测定。例如，可以通过改变附着于链霉亲和素或磷光体特异性抗体的供体和受体试剂，以荧光共振能量转移(FRET)格式或使用AlphaScreen(扩增的发光接近均匀测定)形式来格式化这种测定。

如本文所用，术语″生物制药性质″是指本发明化合物或复合物的药代动力学作用，包括化合物在给药对象上的溶解，吸收和分布因此，本发明化合物的某些固体形式，例如本发明化合物的无定形复合物，旨在提供活性化合物的改进的溶解和吸收，其通常反映在改进的Cmax，(药物施用后血浆中达到的最大浓度)和改进的AUC(即，在施用药物后药物血浆浓度对时间的曲线下的面积)。

在本文中，术语″治疗有效″或″有效量″表示材料或材料的量有效地预防，减轻或改善疾病或医疗状况的一种或多种症状，和/或延长被治疗对象的存活。

可选的化合物形式或衍生物

本文中预期的化合物参考通式和具体化合物两者来描述。替代形式或衍生物包括例如(a)前药和活性代谢物(b)互变异构体，异构体(包括立体异构体和区域异构体)和外消旋混合物(c)药学上可接受的盐和(d)固体形式，包括不同的晶型，多晶形或无定形固体，

(a)前药和代谢物

除了本文所述的本式和化合物之外，本发明还包括前药(通常药学上可接受的前药)，活性代谢衍生物(活性代谢物)和它们的药学上可接受的盐。

前药是化合物或其药学上可接受的盐，其在生理条件下或通过溶剂解转化时产生所需的活性化合物。前药包括但不限于酯，酰胺，氨基甲酸酯，碳酸盐，脲，溶剂化物或活性化合物的水合物通常，前药是非活性的，或低于活性化合物的活性，但是可以提供一个或多个有利的处理，给药和/或代谢性质。例如，一些前药是活性化合物的酯；在代谢过程中，将酯基团裂解以产生活性药物。酯包括例如羧酸基团的酯，或硫醇，醇或酚基团的S-酰基或O-酰基衍生物在该上下文中，一个常见的例子是羧酸的烷基酯。前药也可包括其中化合物的NH基团经历酰化的变体，例如吡咯并[2，3-d]嘧啶环的7位，1 H-吡咯并[2，3-b]吡啶环，或如本文所述的化合物的磺酰胺基团的氮，其中所述酰基的裂解提供所述活性药物的游离NH基团。一些前药经酶促活化以产生活性化合物，或化合物可经历进一步的化学反应以产生活性化合物。前药可在单一步骤中从前药形成为活性形式，或可具有可自身具有活性或可为非活性的一种或多种中间形式。

如在Medicinal Chemistry，Ch。的实践中所述.31-32(EdWermuth，AcademicPress，San Diego，ca，2001)，前药可在概念上分为两种非排他性类别，生物前体前药和载体前药。通常，与含有一个或多个保护基团的相应的活性药物化合物相比，生物前体前药是非活性的或具有低活性，并且通过代谢或溶剂分解转化为活性形式活性药物形式和任何释放的代谢产物都应当具有可接受的低毒性。典型地，活性药物化合物的形成涉及代谢过程或反应，所述代谢过程或反应是以下类型之一：

氧化反应：氧化反应的示例不受例如醇，羰基和酸官能团的氧化，脂族碳的羟基化，脂环碳原子的羟基化，芳族碳原子的氧化，碳-碳双键的氧化，含氮官能团的氧化，硅，磷，砷和硫的氧化，氧化性N-脱烷基化，氧化O-和S-脱烷基化，氧化脱氨，以及其它氧化反应。

还原反应：通过诸如还原羰基官能度，减少醇官能度和碳-碳双键，减少含氮官能团和其它还原反应的反应来举例说明还原反应。

氧化态不发生变化的反应：不受氧化态变化的反应，例如酯和醚的水解，碳-氮单键的水解裂解，非芳族杂环的水解裂解，多个键处的水合和脱水，由脱水反应产生的新的原子键，水解脱卤，卤化氢分子的去除和其它此类反应。

载体前药是含有转运部分的药物化合物，例如，其改善对一种或多种作用部位的摄取和/或局部递送。理想地，对于这样的载体前药，药物部分和传输部分之间的连接是共价键，前药是非活性的或者比药物化合物更少活性，前药和任何释放转运部分是可接受的无毒的对于其中运输部分旨在增强摄取的前药，通常所述转运部分的释放应该是快速的。在其它情况下，希望利用提供缓慢释放的部分，例如某些聚合物或其它部分，例如环糊精。(参见，例如Cheng等，美国专利No.7 270 808，通过引用并入本文)。这样的载体前药对于口服给药的药物通常是有利的在一些情况下，传输部分提供药物的靶向递送，例如药物可以与抗体或抗体片段缀合。载体前药可以例如用于改善以下性质中的一种或多种：增加的亲脂性，增加的药理作用持续时间，增加的位点特异性，降低的毒性和不良反应，和/或药物制剂的改善(例如稳定性，水溶性，抑制不期望的感官或物理化学性质)。例如，亲脂性可以通过羟基基团与亲脂性羧酸或羧酸基团与醇(例如脂族醇)的酯化而增加。wermuth，supra。

如上文所述，代谢物，例如活性代谢物与前药交叠，例如，生物前体前药。因此，这样的代谢物是药理学活性化合物或化合物，其进一步代谢为药理学活性化合物，所述药理学活性化合物是由受试者体内的代谢过程产生的衍生物。其中，活性代谢物是这样的药理学活性衍生物化合物对于前药，前药化合物通常是非活性的或低于代谢产物的活性。对于活性代谢物，母体化合物可以是活性化合物或可以是非活性前药。例如，在一些化合物中，一个或多个烷氧基可以被代谢为羟基，同时保留药理学活性和/或羧基可以被酯化，例如葡萄糖醛化在一些情况下，可以存在多于一种代谢物，其中中间代谢物被进一步代谢以提供活性代谢物。例如，在一些情况下，由代谢葡萄糖醛化产生的衍生物化合物可以是非活性的或低活性，并且可以进一步代谢以提供活性代谢物。化合物的代谢物可以使用本领域已知的常规技术来鉴定，并且它们的活性使用如本文所述的试验确定参见，例如bertoini等，1997，J。Med。chem，40：2011-2016；山等人，1997，J。Pharm。Sci.86(7)：756-757；Bagshawe，1995，Drug Dev。res，34：220-230；Wermuth，同上。

(b)互变异构体。立体异构体和区域异构体

应当理解，一些化合物可以表现出互变异构体。在这种情况下，本文提供的式明确描述了可能的互变异构形式中的仅一种。因此，应当理解，本文提供的式旨在表示所描绘的化合物的任何互变异构形式，并且不应仅限于由下式的附图所描绘的具体的互变异构形式同样地，根据本发明的一些化合物可以作为立体异构体存在，即在原子的空间取向上具有相同的共价键合原子的原子连接性。例如，化合物可以是光学立体异构体，其含有一个或多个手性中心，因此可以以两种或更多种立体异构形式(例如对映体或非对映体)存在。因此，这样的化合物可以作为单一立体异构体存在(即基本上不含其它立体异构体)，外消旋物和/或对映异构体和/或非对映异构体的混合物。作为另一实例，立体异构体包括几何异构体，例如双键的相邻甲苯磺酸盐碳上的取代基的顺式或反式。所有这样的单一立体异构体，外消旋物及其混合物都在本发明的范围内除非有相反的说明，所有这样的立体异构形式都包括在本文提供的式中。

在一些实施方案中，本发明的手性化合物为含有至少80％的单一异构体(60％对映体过量(″ee″)或非对映体过量(″de″))，或至少85％(70％ee或de)，90％(80％ee或de)，95％(90％ee或de)，97.5％(95％ee或de)或99％(98％ee或de)的形式。如本领域技术人员通常理解的那样，光学纯化合物具有一个手性中心是基本上由两种可能的对映异构体之一(即对映异构纯)组成的，并且具有多于一个手性中心的光学纯化合物是非对映体纯和对映体纯的。在一些实施方案中，化合物以光学纯的形式存在，这种光学纯的形式通过本领域已知的方法制备和/或分离(例如，通过重结晶技术，手性合成技术(包括来自光学纯起始材料的合成)和使用手性柱的色谱分离。

(c)药学上可接受的盐

除非有相反说明，否则本文的化合物的说明书包括此类化合物的药学上可接受的盐。因此，本文所述的化合物可以是药学上可接受的盐的形式，或者可以配制为药学上可接受的盐。预期的药学上可接受的盐形式包括但不限于单，双，三，四等药学上可接受的盐在给予它们的量和浓度方面是无毒的。此类盐的制备可通过改变化合物的物理特性而不防止其发挥其生理效应来促进药理使用在这样的物理性质中有用的改变包括降低熔点以促进经粘膜给药并增加溶解度以促进施用更高浓度的药物。本发明的化合物可以具有足够的酸性，足够的碱性或两种官能团，酸/碱，并且因此可以与许多无机或有机碱和无机和有机酸中的任何一种反应，以形成药学上可接受的盐。

如本文所用，术语″药学上可接受的盐″是指在声音医学判断的范围内适用于与人和下动物的组织接触而没有过度毒性，刺激，过敏反应等的那些盐，并且与合理的益处/风险比相称。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，在S。M。Berge等，J。PharmaceuticalSciences，1977，66中描述了药学上可接受的盐，1-19，其通过引用并入本文。

本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是由无机酸例如盐酸，氢溴酸，磷酸，亚硫酸盐和高氯酸或与有机酸如乙酸，草酸，马来酸，酒石酸，柠檬酸形成的氨基的盐，琥珀酸或丙二酸，或通过使用本领域中使用的其它方法如离子交换。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，硫酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，柠檬酸盐，环戊烷酸盐，富马酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，富马酸盐，葡庚酸盐，2乳酸盐，月桂酸酯，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸酯，双羟萘酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸酯，磷酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一烷酸盐，戊酸盐等。衍生自合适的碱包括碱金属，碱土金属，铵和季铵，N(C1-C4烷基)4，盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁等。另外的药学上可接受的盐包括，当适当时，使用诸如卤化物，氢氧化物，羧酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硝酸盐，烷基磺酸盐和芳基磺酸盐的抗衡离子形成无毒铵，季铵和胺阳离子。

(d)其它化合物形式

在固体的试剂的情况下，本领域技术人员应当理解，化合物和盐可以以不同的晶体或多晶型存在，或者可以配制为共晶体，或者可以是无定形形式，或者可以是它们的任意组合(例如，部分结晶的，部分无定形的，或多晶型物的混合物)，所有这些都在本发明和指定的式的范围内。而盐是通过添加而形成的，即所述感兴趣的化合物的游离碱或游离酸分别与相应的添加碱或添加酸形成酸/碱反应，导致离子电荷相互作用，共晶体是形成于中性化合物之间的新的化学物质，导致化合物和在同一晶体结构中的另外的分子物质。

在一些情况下，本发明的化合物与酸或碱络合，包括碱加成盐，例如铵，二乙胺，乙醇胺，乙二胺，二乙醇胺，丁胺，哌嗪，甲磺酸甲酯，甲苯磺酸盐，柠檬酸盐，甲酸盐，富马酸盐，戊二酸盐，盐酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，硝酸盐，草酸盐，磷酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐和甲苯磺酸盐；以及氨基酸，例如丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，硬脂醇，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸或缬氨酸。在将本发明的化合物与酸或碱结合时，优选地形成非晶复合物而不是诸如典型的盐或共晶体的结晶材料在一些情况下，通过诸如通过喷雾干燥，机械-化学方法(诸如辊压实)或与酸或碱混合的母体化合物的微波辐射的附加处理来促进复合物的无定形形式。此类方法还可包括添加离子和/或琥珀酸盐，非离子聚合物系统，包括但不限于羟丙基甲基纤维素乙酸酯(HPMCAS)和甲基丙烯酸共聚物(例如，EUDRAGIT_L10055)，其进一步稳定复合物的非晶性质。这样的无定形复合物提供了若干优点。例如，相对于游离碱的熔融温度降低了另外的加工，例如热熔挤出，进一步提高了该化合物的生物制药性能。此外，所述无定形复合物容易脆化，这提供了改进的压缩以将固体装入胶囊或片剂形式另外，所述式旨在涵盖水合的或溶剂化的以及所识别的结构的未水合或未溶剂化的形式。例如，所指示的化合物包括水合和非水合形式。溶剂化物的其它实例包括与合适的溶剂组合的结构，例如异丙醇，乙醇，甲醇，二甲基亚砜，乙酸乙酯，乙酸或乙醇胺。

药学上可接受的组合物

术语″药学上可接受的载体″，″药学上可接受的赋形剂″，″生理学上可接受的载体″或″生理学上可接受的赋形剂″是指药学上可接受的材料，组合物或载体，例如液体或固体填料，稀释剂，溶剂或包封材料在一个实施方案中，每个组分在与药物制剂的其它成分相容的意义上是″药学上可接受的″，并且适用于与人类和动物的组织或器官接触而没有过度毒性，刺激，过敏反应，免疫原性或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相称。参见Remington：the Science and Practice of Pharmacy，21 st ed；Lippincott Williams&amp；Wilkins·Philadelphia，Pa，2005；Handbook of药用赋形剂，第6版；Rowe等，Eds。thePharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association：2009；Handbook of Pharmaceutical Additives，3rd ed，Ash and Ash Eds。Gower PublishingCompany：2007；药物前调配物和制剂，第二版；Gibson；CRC Press LLC：Boca Raton，fl，2009术语″药学上可接受的载体，佐剂或载体″是指不破坏其配制的化合物的药理活性的无毒载体，佐剂或载体。可用于本发明组合物的药学上可接受的载体，佐剂或载体包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，例如人血清白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和蔬菜脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如丙胺硫酸盐，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶体二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。

根据另一个实施方案，本发明提供了包含本发明化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体，佐剂或载体的组合物。本发明的组合物中化合物的量使得能够有效地抑制生物样品或患者中的靶蛋白激酶，特别是pde 3或其突变体在某些实施方案中，本发明组合物中的化合物的量使得能够有效地抑制生物样品或患者中的pde 3或其突变体。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制用于给予需要这种组合物的患者。在一些实施方案中，配制本发明的组合物用于口服给药至患者。

″药学上可接受的衍生物″是指本发明化合物的酯或其它衍生物的任何无毒盐，酯，盐或其其它衍生物，其在给予接受者时能够直接或间接地提供本发明的化合物或其抑制活性代谢物或残基。

如本文所用，术语″缓蚀活性代谢物或其残基是指其代谢物或残基也是pde 3或其突变体的抑制剂。

本发明的组合物可经口，肠胃外，通过吸入喷雾，局部，直肠，鼻，鼻，阴道或经植入的贮存器给药。本文所用的术语″肠胃外″包括皮下，静脉内，肌内，关节内，滑膜内，胸骨内，鞘内，肝内，颅内和颅内注射或输注技术。

优选地，所述组合物口服，腹膜内或静脉内给药。本发明组合物的无菌可注射形式可以是含水或油质悬浮液。可根据本领域已知的使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的技术来配制这些悬浮液所述无菌可注射制剂还可以是无毒的非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如作为1，3-丁二醇的溶液。在可使用的可接受的载体和溶剂中，可以使用的是水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌，固定油作为溶剂或悬浮介质为此目的，可以使用任何bla固定的油或合成的单或二甘油酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是在它们的聚氧乙基化形式中这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们通常用于包含乳液和悬浮液的药学上可接受的剂型的制剂中其它常用的表面活性剂，例如吐温，跨度和其它乳化剂或生物利用增强剂，它们通常用于制造药学上可接受的固体，液体或其它剂型，用于制剂的目的。

本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服给药，包括但不限于胶囊，片剂含水悬浮液或溶液。在口服片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉当需要水性悬浮液用于口服使用时，活性成分与乳化和悬浮剂结合。如果需要，还可添加某些甜味剂，调味剂或着色剂。

或者，本发明的药学上可接受的组合物可以栓剂形式给药用于直肠给药。这些可通过将所述试剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中熔融以释放所述药物。这样的材料包括可可脂，蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药学上可接受的组合物也可以局部给药，特别是当治疗靶包括局部施用容易接近的区域或器官时，包括眼睛，皮肤或下肠道的疾病。为这些区域或器官中的每一个容易地制备合适的局部制剂用于下肠道的局部应用可以是直肠栓剂制剂(参见同上)或合适的灌肠制剂。还可以使用局部透皮贴剂。对于局部应用，提供了药学上可接受的组合物。

可在含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的合适的软膏中配制。本发明化合物局部给药的载体包括但不限于矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯化合物，乳化蜡和水或者，所提供的药学上可接受的组合物可配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，聚山梨酯60，鲸蜡酯蜡，鲸蜡硬脂醇，2-辛基十二烷醇，苯甲醇和水对于眼用用途，所提供的药学上可接受的组合物可以配制为等渗，pH调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或优选作为等渗，pH调节的无菌盐水中的溶液，具有或不含防腐剂如苄基氯铵。或者，对于眼用用途，药学上可接受的组合物可配制在软膏如凡士林中本发明的药学上可接受的组合物也可通过鼻气溶胶或吸入来施用。此类组合物是根据药物制剂领域公知的技术制备的，并且可以制备为盐水中的溶液，采用苄醇或其它合适的防腐剂，吸收促进剂以增强生物利用度，碳氟化合物和/或其它常规的增溶剂或分散剂。

最优选地，本发明的药学上可接受的组合物配制用于口服给药。可与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明化合物的量将根据所治疗的宿主，特定给药模式而变化。优选地，所提供的组合物应配制成剂量为001可以向接受这些组合物的患者施用100mgkg体重/天的抑制剂。还应当理解，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性，年龄，体重，一般健康，性别，饮食，给药时间，排泄速率，药物组合以及所述治疗医师的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明化合物的量也将取决于组合物中的特定化合物。

如本文所用，术语″抑制剂″定义为结合和/或抑制具有可测量亲和性的靶蛋白激酶的化合物。在某些实施方案中，抑制剂具有小于约50μm，小于约1μm，小于约500nM，小于约100nM，小于约10nM或小于约1nM的IC 50和/或结合常数。

本发明的化合物可以系留在可检测部分上。本领域普通技术人员将认识到，可检测部分可以通过合适的取代基连接到所提供的化合物。如本文所用，术语″合适的取代基″是指能够与可检测部分共价连接的部分。这样的部分是本领域普通技术人员所公知的，并且包括含基团的基团，例如，羧酸根部分，氨基部分，硫醇部分或羟基部分，仅举几个例子。应当理解的是，这样的部分直接连接到所提供的部分。

化合物或通过系链基团如二价饱和或不饱和烃链。在一些实施方案中，这样的部分可以通过点击化学连接。在一些实施方案中，此类部分可经由叠氮化物与炔的1，3-环加成，任选地在铜催化剂的存在下附接。使用点击化学的方法在本领域中是已知的，并且包括由rostovtav，V。V，et al，Angew描述的那些。chem Int。ed。Engl.2002，41，2596-2599和Sun，X-L等，Bioconjugate Chem，2006，17，52-57。

如本文所用，术语″可检测部分″与术语″标记″可互换使用，并且涉及能够被检测的部分，例如，初级标记和次级标记。诸如放射性同位素(例如，氚，32P，33P，35S或14C)，质标签和荧光标记的主要标记是能够在没有进一步修改的情况下检测的信号生成报告基团。可检测部分还包括发光和磷光基团。

本文所用的术语″次级标记″是指需要存在用于产生可检测信号的第二中间体的部分，例如生物素和各种蛋白质抗原。对于生物素，二级中间体可包括链霉亲和素-酶缀合物。对于抗原标记，二级中间体可包括抗体-酶缀合物一些荧光基团充当次级标记，因为它们在非辐射荧光共振能量传递(FRET)的过程中将能量转移到另一基团，并且第二基团产生检测到的信号。本文所用的术语″荧光标记″，″荧光染料″和″荧光团″是指在限定的激发波长下吸收光能并在不同波长发射光能的部分荧光标记的实例包括但不限于：Alexa Fluor染料(Alexa Fluor 350，Alexa Fluor 488，Alexa Fluor 532，Alexa Fluor 546，AlexaFluor 568，Alexa Fluor 594，Alexa Fluor 633，Alexa Fluor 660和Alexa Fluor680)，AMCA，AMCA-S，BODIPY染料(BODIPY FL，BODIPY R6G，BODIPY TMR，BODIPY TR，BODIPY 530/550，BODIPY 558/568，BODIPY 564/570，BODIPY 576/589，BODIPY 581/591，BODIPY 630/650，BODIPY 650/665)，羧基-罗丹明6G，羧基-X-罗丹明(ROX)，级联蓝，级联黄，香豆素343，花青染料(Cy3，Cy5，Cy3.5，Cy5.5)，丹磺酰基，达氧基，二烷基氨基香豆素，4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基-荧光素，DM-nef，曙红，红素，荧光素，FAM，羟基-40香豆素，IRD 40，IRD 700，IRD800)，JOE，lis胺罗丹明B，Marina Blue，甲氧基香豆素，萘醌荧光素，Oregon Green488，Oregon Green 500，Oregon Green 514，paciic Blue，PyMPO，芘，罗丹明B，罗丹明6G，罗丹明绿，罗丹明红，Rhodol Green，2′，4′，5′，7′-四溴砜-荧光素，四甲基-罗丹明(TMR)，羧基四甲基-rho达九(TAMRA)，Texas Red，Texas Red-X。

本文所用的术语″质量标签″是指能够通过使用质谱(MS)检测技术唯一地检测到的任何部分。质标签的实例包括诸如N-[3-[4′-[(对-甲氧基四氟苄基)-苯氧基]-3-甲基甘油基]异壬酸，4′-[2，3，5，6-四氟-4-(五氟苯氧基)]甲基苯乙酮及其衍生物的电泳释放标签。这些质标签的合成和效用描述于美国专利no。4，50，750；4，709，016；5，360，819；5，516，931；5，602，273；5，604，104；5，610，020；和5，650，270变化的长度和基质组成，寡肽，寡糖和不同长度和单体组合物的其它合成聚合物。合适的质量范围(100-2000道尔顿)的大量有机分子，中性和带电(生物分子或合成化合物)也可以用作质量标签。

如本文所用，术语″可测量亲和性″和″可测量抑制″是指在包含本发明化合物或其组合物和蛋白质的样品与包含蛋白激酶，不存在所述化合物或其组合物的等效样品之间的蛋白激酶活性的可测量变化。

如本文所用，本文所用的术语″PIM-介导的″病症或条件是指已知PIM激酶或其突变体发挥作用的任何疾病或其它有害条件。因此，本发明的另一个实施方案涉及治疗或减轻其中一种或多种PIM激酶或其突变体已知起作用的一种或多种疾病的严重性具体地，本发明涉及治疗或减轻从增殖性疾病中选择的疾病或病症的严重程度的方法，其中所述方法包括向需要其的患者施用根据本发明的化合物或组合物。

在一些实施方案中，本发明提供治疗或减轻选自各种形式的癌症的一种或多种病症的严重性的方法。在一些实施方案中，所述癌症与固体肿瘤相关。在某些实施方案中，所述癌症是乳腺癌，胰腺癌，肝细胞癌，前列腺癌，胃癌，胶质母细胞瘤，肺癌，头颈癌，结肠直肠癌，膀胱癌或非小细胞肺癌在一些情况下，本发明提供治疗或减轻选自鳞状细胞癌，唾液腺癌，卵巢癌或胰腺癌的一种或多种病症的严重程度的方法。在其它实施方案中，所述癌症与可溶性肿瘤相关，例如白血病，淋巴瘤或骨髓瘤。

在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗或减轻一种或多种免疫或高敏感性病症的严重程度的方法，例如哮喘，过敏，移植排斥，移植物对宿主病，以及自身免疫性疾病如类风湿性关节炎，肌萎缩性侧索硬化和多发性硬化，以及固体和血液学恶性肿瘤，如白血病，淋巴瘤和骨髓瘤其中所述方法包括向需要其的患者施用根据本发明的组合物。根据待治疗的特定条件或疾病，通常给予治疗该病症的其它治疗剂也可存在于本发明的组合物中如本文所用，通常施用以治疗特定疾病或病症的其它治疗剂已知为″适合于治疗疾病或病症″。例如，本发明的化合物或其药学上可接受的组合物与化疗剂联合给药以治疗增殖性疾病和癌症已知的化疗剂的实例包括但不限于阿霉素，地塞米松，长春新碱，环磷酰胺，氟尿嘧啶，拓扑替康，紫杉醇，干扰素，铂衍生物，紫杉烷(例如，紫杉醇)，长春花生物碱(例如长春碱)，蒽环(例如阿霉素)，表播毒素(例如依托泊苷)，顺铂，mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素)，甲氨蝶呤，放线菌素D，杜美他汀10，秋水仙碱，艾司汀，曲美曲酸，米托林，环孢菌素，柔红霉素，替尼泊苷，两性霉素，烷基化剂(例如，氯丁酸氮芥)，5-氟尿嘧啶，骆驼蓬素，顺铂，甲硝唑和GLEEVECtm。在其它实施方案中，本发明的化合物与生物制剂联合给药，所述生物制剂例如avattin tm或VECTIBIX tm在某些实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的组合物与抗增殖剂或化疗剂联合给药，所述抗增殖剂或化疗剂选自abrelix，aldesleukin，aldesley，almimzumab，altretinin，别嘌呤醇，阿维特胺，阿米莫司汀，阿那曲唑，三氧化二砷，天冬酰胺酶，阿扎替丁，BCG活，贝伐昔单抗，氟尿嘧啶，阿扎罗汀，博来霉素，硼替佐米，布磺酸，降钙素，卡培他滨，喜树碱，卡铂，卡莫司汀，塞拉滨，西他滨，环磷酰胺，阿糖胞苷，d放线菌，多西他滨，柔红霉素，依泊苷，盐酸多柔比星，多西他赛，阿霉素，Epoetin alfa，厄洛替尼，雌莫司汀，依托泊苷磷酸，依托泊苷，依立替尼，沙司他滨，氟尿苷氟达拉滨，氟维司替尼，吉非替尼，吉西他滨，吉妥珠单抗，鹅血清素乙酸酯甲磺酸伊马替尼，干扰素α-2a，干扰素α-2b，伊立替康，Lenalidomide，leroxazole，leucovortin，伊立替康，Lenalidomide，罗莫司汀，美孕酮，甲氨蝶呤，巯基嘌呤，丝裂霉素C，米特戊烷，丝米曲酮，奥沙利铂，奈拉滨，帕米松，奥普拉金，奥沙利铂，紫杉醇，帕利费米，普鲁兰金属，奥沙利铂，pegadegase，pegfiltertimppeetrexed二钠，Pentostatin，Pipobroman，placicin，Porfimer钠，普卡巴嗪，奎宁，雷沙霉素，利妥昔单，马来酸舒尼替尼，滑石，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊替尼，VM-26，托泊替康，硫鸟嘌呤，6-TG，硫代tepa，托泊替康，托美芬，尿嘧啶芥，缬氨酸，长春碱，长春新碱，长春瑞滨，唑来膦酸或唑来膦酸。

也可与本发明的抑制剂组合的试剂的其它实例包括但不限于：阿尔茨海默氏病的treal，如。和。帕金森病的治疗，例如L-DOPA卡宾a，恩他那一，罗匹坦，普拉克索，溴莫曲坦，过格列奈，三己基苯基和金刚烷胺；用于治疗多发性硬化症(MS)如β干扰素(例如β干扰素(例如β干扰素)的活性剂)；用于治疗精神分裂症的试剂，例如酶前体，利培南，血清quel和卤代哌啶；抗炎剂，例如皮质类固醇，TNF阻断剂，IL-1 RA，氮杂嘌呤，环磷酰胺和磺胺嘧啶；免疫调节和免疫抑制剂，例如环孢菌素，他克莫司，雷帕霉素，麦考酚酸酯，干扰素，皮质类固醇，环辛酰胺，氮硫嘌呤和磺胺嘧啶；神经营养因子如乙酰胆碱酯酶抑制剂，MAO抑制剂，干扰素，抗惊厥剂，离子通道阻断剂，利鲁唑和抗帕金森氏试剂；用于治疗心血管疾病的试剂，例如β-阻滞剂，ACE抑制剂，利尿剂，硝酸盐，钙通道阻滞剂和他汀；用于治疗肝病的药剂，例如皮质类固醇，胆甾烯胺，干扰素和抗病毒剂；治疗血液的药剂，如皮质类固醇，抗炎剂，白血病药物和生长因子；以及用于治疗免疫缺陷障碍如γ球蛋白的试剂。

在某些实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的组合物与单克隆抗体或siRNA治疗结合施用。

这些另外的试剂可以与含有本发明化合物的组合物分开施用，作为多剂量方案的一部分。或者，这些试剂可以是单一剂型的一部分，与本发明化合物在单一组合物中混合。如果作为多剂量方案的一部分给药，则两种活性剂可以同时，顺序地或在一段时间内从彼此同时提交。

如本文所用，术语″组合″，″组合″和相关术语是指根据本发明的治疗剂的同时或顺序施用。例如，本发明的化合物可以与另一种治疗剂同时或顺序地以单独的单位剂型或一起以单一单位剂型给药因此，本发明提供了包含式(I)或(II)化合物，附加治疗剂和药学上可接受的载体，佐剂或载体的单一单位剂型。本发明化合物和另外的治疗剂(在包含如上所述的附加治疗剂的那些组合物中)的量，可与载体材料结合以产生单一剂型将根据宿主而变化治疗的特定模式和给药的特定模式。优选地，本发明的组合物应配制成可给予0.01-100mg kg体重/天的本发明化合物的剂量。

在包含另外的治疗剂的那些组合物中，本发明的其它治疗剂和化合物可协同作用。因此，在这种组合物中的额外治疗剂的量将小于仅利用该治疗剂的单一疗法中所需的量。在这样的组合物中，可以施用0.01-1000mg kg体重/天的附加治疗剂的剂量本发明组合物中存在的额外治疗剂的量将不超过通常在包含该治疗剂作为唯一药剂的组合物中施用的量。优选地，本公开的组合物中的附加治疗剂的量为通常存在于组合物中的量的约50％至100％，所述组合物包含该试剂作为唯一的治疗活性剂。

本发明的化合物或其药物组合物也可结合到用于涂覆可植入医疗装置的组合物中，例如假体，人工瓣膜，血管移植物，支架和导管。

药物抗性作为靶向疗法的重大挑战而出现。例如，已经报道了GLEEVECtm和iresratm的耐药性，以及在开发中的几种其它激酶抑制剂。例如，已经报道了用于癌症治疗的抑制剂cKit和EGFR激酶的耐药性。据报道，不可逆抑制剂对于耐药是有效的蛋白激酶的形式(参见：Kwak，el等，Proc Nat。acad Sci USA，2005 102，7665-7670)。本发明的化合物可以是抗药物形式的蛋白激酶的有效抑制剂。

如本文所用，术语″临床耐药性″是指药物靶向药物治疗的敏感性，作为药物靶点突变的结果。如本文所用，术语″电阻″是指编码靶蛋白或其启动子的野生型核酸序列的变化，和/或靶的蛋白质序列，其改变或消除抑制剂对靶蛋白的抑制作用例如，p im 3抑制剂抗性还可涉及另一种蛋白激酶(例如pde 1)的表达，其补偿p im 3激酶活性的损失。本文中所述的化合物和组合物抑制的激酶的实例以及本文所述的方法可用于PIM激酶或其突变体。

本发明中所用化合物作为靶激酶，特别是PIM激酶，优选ph3或其突变体的抑制剂的活性可以在体外，体内或细胞系中进行测定。体外测定包括测定磷酸化活性和/或后续功能后果的抑制，或活化的靶激酶的ATPase活性或其突变体的更多测定替代体外试验定量抑制剂与靶激酶(例如pde3)结合的能力。抑制剂结合可以通过在结合之前通过放射性标记抑制剂来测量，分离抑制剂/靶激酶复合物并确定放射性标记的量。或者，可以通过运行竞争实验来确定抑制剂结合，其中将新的抑制剂与结合到已知放射性寡核苷酸的靶激酶一起孵育用于测定本发明中用作某些激酶抑制剂的化合物或其突变体的详细条件列于下面的实施例中。

蛋白激酶是一类酶，其催化磷酸基团从ATP或GTP向位于蛋白质基底上的受体氨基酸残基(例如酪氨酸，丝氨酸和苏氨酸)的转移。受体激酶用于通过经由磷酸化事件激活次级消息传递效应物来将信号从细胞的外部传递到内部这些信号促进了多种细胞过程，包括增殖，碳水化合物利用，蛋白质合成，血管生成，细胞生长和细胞存活。

如本文所用，术语″治疗″，″治疗″和″治疗″是指逆转，减轻，延迟或抑制疾病或病症的进展，或其一种或多种症状，如本文所述。在一些实施方案中，可以在已经开发出一种或多种症状之后施用治疗。在其它实施方案中，可以在不存在症状的情况下施用治疗例如，治疗可以在症状发作之前(例如，根据症状的历史和/或在基因或其它易感性因子的光中)给药至易感个体。在症状已解决之后，还可以继续治疗，例如以防止或延迟他们的复发。

所提供的化合物是靶PIM激酶的抑制剂，并且可用于治疗与PIM激酶活性相关的一种或多种病症。因此，在某些实施方案中，本发明提供了治疗PIM介导的病症的方法，所述方法包括向需要其的患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。

在一些实施方案中，本发明的化合物任选与PIM抑制剂清除剂组合施用。在一些实施方案中，本发明的化合物任选与直接或间接降低PEVI上游效应物的活化或活性的化合物联合施用例如，在一些实施方案中，联合使用抑制Janus激酶(JAK 1-3)活性的化合物，从而减少PIM激酶的激活。例如，JAK抑制剂托克替尼的使用可降低活性STAT 3和STAT 5的磷酸化和产生，从而降低pde 3的表达，活性或活化(参见：Hodge，J。a。等，Clin。expRheumatol.2016；34，318-328)在一些实施方案中，p im 3活化也通过直接与STAT 3和STAT5结合的小分子减少。在一些实施方案中，pde 3抑制剂与直接结合到BAD的试剂结合使用，或防止PIM激酶磷酸化这些下游效应物中的丝氨酸残基(例如，BAD血清112)。

在一些实施方案中，本发明的化合物任选与降低PIM激酶水平的化合物联合施用，所述化合物包括肽，多肽或抑制PIM下游靶的脱磷酸化的小分子，使得下游靶的磷酸化保持在导致PIM水平下调的水平在一些实施例中，通过激活和/或抑制上游调节器和/或PIM的下游目标来减少或抑制PIM活动。在一些实施方案中，PIM的蛋白表达被下调。在一些实施方案中，减少细胞中PIM的量。在一些实施方案中，降低细胞中的ph3蛋白水平的化合物也降低了细胞中PIM激酶的活性在一些实施方案中，降低PIM蛋白水平的化合物在细胞中不降低PIM活性。在一些实施方案中，增加细胞中PIM活性的化合物降低了细胞中的PIM蛋白水平。

PIM抑制剂和第二治疗剂的任何组合与本文所述的任何方法相容。本文所述的PIM抑制剂组合物还任选地与其它治疗试剂组合使用，所述其它治疗试剂选择用于其治疗值以治疗所述病症通常，本文所述的组合物和在使用组合疗法的实施方案中，其它试剂不需要在相同的药物组合物中施用，并且由于不同的物理和化学特性，任选地由不同的途径施用初始给药通常根据已建立的方案进行，然后基于观察到的效果，给药方式和随后修饰的给药次数。

在某些情况下，适于施用本文所述的PIM抑制剂组合物与另一种治疗剂组合。仅以举例的方式，如果在接收到本文所述的PIM抑制剂组合物时患者所经历的副作用之一是恶心，则适合于与所述初始治疗剂组合施用抗恶心剂或者，仅作为示例，通过给予佐剂(即，其自身具有最小的治疗益处，但与另一种治疗剂组合，增强PIM抑制剂的治疗效果，增强对患者的整体治疗益处)。或者，仅作为示例，通过给予具有另一种治疗剂的PIM抑制剂来增加患者所经历的益处(包括治疗方案)，其还具有治疗益处。在任何情况下，不管被治疗的疾病，病症或病症，患者所经历的整体益处是两种治疗剂的简单添加，或者患者经历协同的益处。

当药物用于治疗组合时，治疗有效剂量是不同的。用于实验确定药物和其它药剂的治疗有效剂量的合适方法包括，例如，使用节理配量，即，提供更频繁，更低的剂量以最小化毒副作用。组合治疗还包括定期治疗，其在各个时间开始和停止，以帮助患者的临床管理。

在任何情况下，多个治疗剂(其中之一是本文所述的PIM抑制剂)以任何顺序或甚至同时施用。如果同时，所述多个治疗剂任选地以单一，统一的形式或以多种形式(仅以举例的方式，作为单个药丸或作为两个单独的药丸)提供。在一些实施方案中，所述治疗剂中的一种以多种剂量给出，或者两者都被给予多个剂量如果不同时，则所述多个剂量之间的定时可选地从大于0周到小于4周变化。此外，组合方法，组合物和制剂不限于仅使用两种试剂。还设想了多种治疗组合的使用。

组成本文公开的组合疗法的药剂任选地是组合的剂型或以单独的剂型形式，用于基本上同时给药。组成联合治疗的药物试剂任选地也可以按顺序给药，其中任一种治疗化合物通过给药两步给药的方案给药所述两步给药方案任选地要求连续施用活性剂或间隔开的单独活性剂给药。所述多个给药步骤之间的时间周期在几分钟到几小时的范围内，这取决于每种药剂的性质，例如效价，溶解度，生物利用度，血浆半衰期和药剂的药代动力学特性靶分子浓度的昼夜变化任选地用于确定最佳剂量间隔。

此外，PIM抑制剂任选地与为患者提供额外或协同益处的程序结合使用。仅以举例的方式，预期患者在本文所述的方法中发现治疗性和/或预防性益处，其中PIM抑制剂的药物组合物和/或与其它治疗剂的组合与遗传测试结合以确定个体是与某些疾病或病症相关的突变基因的载体。

在一些实施方案中，在发生疾病或病症之前，期间或之后任选地施用PIM抑制剂和另外的疗法，并且施用含有PIM抑制剂的组合物的定时变化。因此，例如，PIM抑制剂被用作预防性的，并且连续给予个体，具有发展条件或疾病的倾向，以防止疾病或病症的发生。

PIM抑制剂和组合物可任选地在症状发作之后或尽快施用于个体。所述化合物的施用任选地在症状发作的前48小时内开始，优选在症状发作的前48小时内，更优选在症状发作的前6小时内，最优选在症状发作的3小时内开始初始施用任选地经由任何途径实践，例如静脉内注射，丸剂注射，5分钟至约5小时内的输注，丸剂，胶囊，经皮贴剂，颊递送等，或其组合，在检测或怀疑疾病或病症的发作之后，可任选地施用PIM抑制剂，并且对于治疗疾病所需的时间长度，例如，例如，约1个月至约3个月。对于慢性非生命威胁性疾病，治疗持续时间可延长多年。治疗的长度可选地针对每种疾病和每个个体而变化，并且然后使用已知标准来确定长度例如，PIM抑制剂或含有PIM抑制剂的制剂可施用至少2周，优选约1个月至约5年，更优选约1个月至约2年来治疗癌症。

在一些实施方案中，化合物的具体选择取决于主治医师的诊断以及他们对个体状况的判断和适当的治疗方案。所述化合物任选地同时施用(例如，，同时，基本上同时或在相同的治疗方案内)，或依序，取决于疾病，病症或病症的性质，个体的状况，以及所使用的化合物的实际选择。在某些情况下，所述给药顺序和在治疗方案期间给药每个治疗剂的重复次数基于对正被治疗的疾病的评估和个体的状况。

在一些实施方案中，治疗有效剂量在药物用于治疗组合时变化。在文献中描述了用于实验确定治疗有效剂量的药物和用于联合治疗方案的其它试剂的方法。

在本文所述的组合疗法的一些实施方案中，共同给药的化合物的剂量取决于所采用的共药物的类型，所采用的特定药物，治疗的疾病或病症等而变化。此外，当与一种或多种生物活性剂共同施用时。本文提供的化合物任选地与生物活性剂同时或按顺序施用在某些情况下，如果顺序给药，主治医师将决定本文所述的治疗化合物与另外的治疗剂的适当序列。

所述多种治疗剂(其中至少一种为本文所述的治疗化合物)任选地以任何顺序或甚至同时施用。如果同时，所述多个治疗剂任选地以单一，统一的形式或以多种形式(仅以举例的方式，作为单个药丸或作为两个单独的药丸)提供。在某些情况下，所述治疗剂之一任选地以多种剂量给出在其它情况下，两者任选地被给予多个剂量。如果不同时，则多个剂量之间的定时是任何合适的正时，例如，从大于零周至少于4周。在一些实施方案中，使用另外的治疗剂来实现疾病或病症的症状的逆转或改善，于是随后施用本文所述的治疗剂(例如，式(I)和/或(II)的化合物)。此外，组合方法，组合物和制剂不限于仅使用两种试剂；也可设想使用多种治疗组合。

在某些实施方案中，根据多种因素修改治疗，预防或改善寻求缓解的病症的剂量方案。这些因素包括个体患有个体的病症，以及个体的年龄，体重，性别，饮食和医疗状况。因此，在各种实施方案中，实际使用的剂量方案变化并且偏离本文所述的给药方案

药物组合物。制剂和给药方法。

本文提供了包含治疗有效量的本文所述的任何化合物(例如，式(I)和/或(II)的化合物)的组合物。使用一种或多种生理学上可接受的载体来配制药物组合物，所述载体包括赋形剂和助剂，所述赋形剂和助剂促进活性化合物在药学上使用的制剂中的加工合适的制剂取决于所选择的给药途径。药物组合物的概述例如在Remington：the Science andPractice ofPharmacy，第十九版(Easton，Pa：MackPublishing Company，1995)；Hoover，John E，Remington′s pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co，Easton，Pa 1975；Liberman，H。A和Lachman，L，Eds。药物剂型，Marcel Decker，New York，ny，1980；和药物剂量形式和药物递送系统，第七版(Lippincott Williams&amp；Wilkins，1999)。

本文提供了包含PIM抑制剂和药学上可接受的稀释剂，赋形剂或载体的药物组合物。此外，所述PIM抑制剂任选地作为药物组合物施用，在所述药物组合物中，所述药物组合物与其它活性成分混合，如联合治疗在一些实施方案中，药物组合物包括其它药物或药剂，载体，佐剂，例如保存，稳定，润湿或乳化剂，溶液促进剂，调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，所述药物组合物还含有其它治疗有价值的物质本文所用的药物组合物是指PIM抑制剂与其它化学成分如载体，稳定剂，稀释剂，分散剂，悬浮剂，增稠剂和/或赋形剂的混合物。该药物组合物便于将PIM抑制剂施用于生物体在实践本文提供的方法治疗或使用时，治疗有效量的PIM抑制剂以药物组合物给药至患有病症，疾病或病症的哺乳动物。优选地，所述哺乳动物是人。治疗有效量根据病症的严重性和阶段，个体的年龄和相对健康，使用的PIM抑制剂的效力和其它因素而变化所述PIM抑制剂任选地单独使用或与一种或多种治疗剂组合用作混合物的组分。

本文所述的药物制剂任选地通过多种施用途径施用于个体，包括但不限于口服，肠胃外(例如，静脉内，皮下，肌内)，鼻内，颊，局部，直肠或经皮给药途径。仅以举例的方式，实施例40描述了肠胃外制剂，实施例41和42描述了本发明化合物的口服制剂。

本文所述的药物制剂包括但不限于水性液体分散体，自乳化分散体，固溶体，脂质体分散体，气溶胶，固体剂型，粉末，立即释放制剂，受控释放制剂，快速熔融制剂，片剂，胶囊剂，丸剂，延迟释放制剂，延长释放制剂，脉动释放制剂，多颗粒制剂和混合的立即和可控释放制剂。所述药物组合物将包括至少一种PIM抑制剂，作为游离酸或游离碱形式的活性成分，或以药学上可接受的盐形式。此外，本文所述的方法和药物组合物包括使用N-氧化物，结晶形式(也称为多晶型物)，以及具有相同类型活性的这些PIM抑制剂的活性代谢物在一些实施方案中，PIM抑制剂作为互变异构体存在。所有互变异构体包括在本文所呈现的化合物的范围内。另外，PIM抑制剂存在于非溶剂化形式以及溶剂化形式与药学上可接受的溶剂如水，乙醇等中。本文呈现的PIM抑制剂的溶剂化形式也被认为是本文所公开的。

″载体材料″包括药物中的任何常用的赋形剂，并且应基于与本文所公开的化合物(例如PIM抑制剂)的相容性和所需剂型的释放曲线性质来选择。示例性载体材料包括例如粘合剂，悬浮剂，崩解剂，填充剂，表面活性剂，增溶剂。稳定剂，润滑剂，润湿剂，稀释剂等此外，本文所述的包括PIM抑制剂的药物组合物被配制成任何合适的剂型，包括但不限于水性口服分散体，液体，凝胶，糖浆剂，酏剂，浆料，悬浮液等，用于由待治疗的患者口服摄入，固体口服剂型，气雾剂，控释制剂，快速熔体制剂，泡腾制剂，冻干制剂，片剂，粉剂，丸剂，糖衣丸，胶囊剂，延迟释放制剂，延长释放制剂，脉动释放制剂，多颗粒制剂和混合的立即释放制剂和受控释放制剂。在一些实施方案中，包含pde 3抑制剂的制剂是固体药物分散体。固体分散体是在通过熔融(或融合)，溶剂或熔融-溶剂方法制备的固态下的惰性载体或基质中的一种或多种活性成分的分散体。(参见：chiu，wl，Riegelman，S，J。Pharm。sci，1971，60，1281-1302)。在不机械混合的情况下实现固体稀释剂中的一种或多种活性剂的分散。固体分散体也称为固态分散体。在一些实施方案中，本文所述的任何化合物(例如，式(I)和/或(II)的化合物)被配制为喷雾干燥分散体(SDD)。SDD是药物在聚合物基质中的单相无定形分子分散体它是通过将药物和聚合物溶解在溶剂(例如丙酮，甲醇等)中并喷雾干燥溶液而制备的固溶体。所述溶剂从液滴快速蒸发。

以无定形形式将所述聚合物和药物混合物快速固化成无定形分子分散体。在一些实施方案中，这样的无定形分散体被填充在胶囊中和/或构成为用于重构的口服粉末。包括药物的SDD的溶解度高于药物的结晶形式或药物的非SDD非晶型的溶解度在本文所述的方法的一些实施方案中，PIM抑制剂被施用为如本文所述的由合适的剂型构成的sd。

用于口服使用的药物制剂任选地通过将一种或多种固体赋形剂与PIM抑制剂混合，任选地研磨所得到的混合物，并在加入合适的助剂(如果需要的话)之后处理所述颗粒的混合物来获得合适的赋形剂包括，例如，填料如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，微晶纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠；或其它，例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙如果需要，加入崩解剂，例如交联的交联羧甲基纤维素钠，聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。饮用型芯具有合适的涂层。为此，通常使用浓缩的糖溶液，其任选地含有阿拉伯树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，carbopol凝胶，聚乙二醇，和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物任选地将染料或颜料添加到片剂或糖衣包衣中用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。

在一些实施方案中，本文公开的固体剂型为片剂(包括悬浮片，快熔片，咬合崩解片，快速崩解片，泡腾片或囊片)，丸剂，粉末(包括无菌包装粉末，可分配粉末或泡腾粉末)，胶囊(包括软胶囊或硬胶囊)的形式，由动物来源的明胶或植物来源的HPMC制成的胶囊，或″喷洒胶囊″)，固体分散体，固溶体，可生物蚀解的剂型，控释制剂，脉动释放剂型，多颗粒剂型，丸粒，颗粒剂或气雾剂。作为示例，示例42描述了作为片剂的口服固体剂型。

在其它实施方案中，所述药物制剂为粉末形式。在其它实施方案中，所述药物制剂为片剂的形式，包括但不限于快熔片剂。另外，PIM抑制剂的药物制剂任选地作为单个胶囊或以多种胶囊剂型给药。在一些实施例中。所述药物制剂以两种，或三种，或四种，胶囊或片剂给药在另一方面，剂型包括微胶囊化制剂。在一些实施方案中，在微胶囊化材料中存在一种或多种其它相容材料。示例性材料包括但不限于pH调节剂，侵蚀促进剂，消泡剂，抗氧化剂，调味剂和载体材料，例如粘合剂，悬浮剂，崩解剂，填充剂，表面活性剂，增溶剂，稳定剂，润滑剂，润湿剂和稀释剂。可用于治疗的示例性微囊封材料。

延迟释放包含pde 3抑制剂的制剂，包括但不限于羟丙基纤维素醚(HPC)如KLUCEL_或niso HPC，低取代羟丙基纤维素醚(L-HPC)，羟丙基甲基纤维素醚(HPMC)，如Seppifilm-LC，pharmacol羟丙基甲基纤维素乙酸酯Aqoat(HF-LS，HF-LG，HF-MS)和METOLOSE_，乙基纤维素(EC)及其混合物，例如E 461，ETHOCEL_。聚乙烯醇(PVA)如opticaryAMB，羟乙基纤维素如NATROSOL，羧甲基纤维素，和羧甲基纤维素(CMC)的钠盐，例如AQUALON_-CMC，聚乙烯醇和聚乙二醇共聚物，例如kolihooir_，单甘油酯(Myverol)，甘油三酯(KLX)，聚乙二醇，改性食品淀粉，丙烯酸类聚合物和丙烯酸类聚合物与纤维素醚如EUDRAGIT_EPO，EUDRAGIT_L 30 D-55，EUDRAGIT_s 30 D EUDRAGIT_L 100-55，EUDRAGIT_L100，EUDRAGIT_L 12.5，EUDRAGIT_512.5，EUDRAGIT_NE 30 D和EUDRAGIT_NE 40 D的混合物。

所述药物固体口服剂型包括本文所述的包含PIM抑制剂的制剂，任选地进一步配制以提供PIM抑制剂的受控释放。受控释放是指PIM抑制剂从剂型的释放，在所述剂型中，所述PIM抑制剂根据所需的分布在延长的时间段内结合受控释放曲线包括例如持续释放，延长释放，脉动释放和延迟释放曲线。与立即释放组合物相比，受控释放组合物允许在延长的时间段内根据预定的分布向个体递送药剂这样的释放速率在延长的时间段内提供治疗有效水平的试剂，从而与常规的快速释放剂型相比，提供更长的药效响应期，同时最小化副作用。这样的较长的反应周期提供了许多固有的益处，这些益处不用相应的短效，立即释放制剂来实现。

在其它实施方案中，本文所述的包含PIM抑制剂的制剂使用脉动剂型递送。脉动剂型能够在受控滞后时间或特定位点之后在预定时间点提供一个或多个立即释放脉冲包括PIM抑制剂的包括本文所述的制剂的脉动剂型任选地使用多种脉动制剂施用，所述脉动制剂包括但不限于美国专利号5,011,692；5017381,5,229,135和5,840,329中所描述的剂型。适用于本制剂的其它脉动释放剂型包括但不限于例如美国专利4,871,549；5,260,068；5,260 069；5,508,040；5,567,441；和5,837,284。

用于口服给药的液体制剂剂型任选地是选自包括但不限于药学上可接受的水性口服分散体，乳液，溶液，酏剂，凝胶和糖浆的水性悬浮液。参见例如Singh等，Encyclopediaof。

药物技术，第2版，第pp.754-757(2002)。除了PIM抑制剂，液体剂型任选地包括添加剂，例如：(a)崩解剂；(b)分散剂；(c)润湿剂；(d)至少一种防腐剂；(e)粘度增强剂；(f)至少一种甜味剂；和(g)至少一种调味剂。在一些实施方案中，所述水分散体还包括晶体形成抑制剂。

在一些实施方案中，本文所述的药物制剂是自乳化药物递送系统(镇静ds)。乳液是另一种不混溶相的分散体，通常为液滴形式。通常，通过剧烈的机械分散来形成乳液。与乳液或微乳液相反，与乳液或微乳液相反，当在没有任何外部机械分散或搅拌的情况下添加到过量的水中时自发地形成乳液SEDDS的优点是仅需要温和的混合来在整个溶液中分配液滴。另外，任选地在施用之前添加水或水相，这确保不稳定或疏水性活性成分的稳定性。因此，SEDDS为疏水性有效成分的口服和肠胃外递送提供了有效的递送系统在一些实施方案中，镇静ds提供疏水性活性成分的生物利用度的改进。生产自乳化剂型的方法包括但不限于例如美国专利5,858,401；6,667,048；和6,960,563。

合适的鼻内制剂包括在例如美国专利4,476,116和5,116,817中描述的那些以及除了活性成分之外的水的量。任选存在少量其它成分，例如pH调节剂，乳化剂或分散剂，防腐剂，表面活性剂，胶凝剂或缓冲剂和其它稳定剂和增溶剂。

对于通过吸入给药，PIM抑制剂任选地呈气溶胶，雾或粉末形式。本文所述的药物组合物通过使用合适的推进剂如二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其它合适的气体方便地以气溶胶喷雾呈现形式从加压包装或喷雾器递送在加压气雾剂的情况下，通过提供阀以输送计量的量来确定剂量单位。仅以举例的方式，将用于吸入器或吹入器中的明胶配制成含有PIM抑制剂的粉末混合物和合适的粉末基如乳糖或淀粉。

包含PIM抑制剂的含颊制剂包括但不限于美国专利4 229 447,4 596 795,4,755,386和5,739,136中所述的那些。此外，本文所述的颊用剂型任选地还包括还用于将剂型粘附到口腔粘膜的可生物蚀解的(可水解的)聚合物载体所述颊用剂型被制造成在预定时间段内逐渐侵蚀，其中所述PIM抑制剂的递送基本上贯穿提供。口腔药物递送避免了口服药物施用所遇到的缺点，例如，缓慢吸收，通过存在于胃肠道中的流体降解活性剂和/或在肝脏中首次通过灭活该可生物降解(可水解的)聚合物载体通常包括粘附到口腔粘膜的湿表面的亲水性(水溶性和遇水膨胀的)聚合物。本文所用的聚合物载体的实例包括

丙烯酸聚合物和共聚物，例如已知为″卡波姆″的那些聚合物(CARBOPOL_，其可得自B。F。goodye，是一种这样的聚合物)。还可以将其它组分掺入本文所述的颊用剂型中，包括但不限于崩解剂，稀释剂，粘合剂，润滑剂，调味剂，着色剂，防腐剂等对于颊或舌下给药，所述组合物任选地采用常规方式配制的片剂，锭剂或凝胶的形式。作为示例，实施例43和44描述了舌下制剂。

通过皮肤给药PIM抑制剂的透皮制剂。本文所述的透皮制剂包括至少三种组分：(1)PIM抑制剂的制剂；(2)渗透增强剂；和(3)水性佐剂。此外，透皮制剂包括诸如但不限于胶凝剂，霜剂和软膏基质的组分等在一些实施方案中，所述透皮制剂还包括用于增强吸收和防止所述透皮制剂从皮肤移除的织造或非织造背衬。在其它实施方案中，本文所述的经皮制剂维持饱和或过饱和状态以促进扩散到皮肤中。

在一些实施方案中，适用于PIM抑制剂的透皮给药的制剂采用透皮递送装置和透皮递送片，并且是亲脂乳液或缓冲的水溶液，溶解和/或分散在聚合物或粘合剂中。此类补片任选地构造成用于连续，脉动或按需递送药剂更进一步地，所述PIM抑制剂的经皮递送任选地通过离子电渗补片等来实现。另外，经皮贴剂提供了PFM抑制剂的受控递送。吸收速率任选地通过使用速率控制膜或通过将PIM抑制剂俘获在聚合物基质或凝胶内而减慢。相反，吸收增强剂用于增加吸收吸收增强剂或载体包括可吸收的药学上可接受的溶剂，以帮助通过皮肤。例如，透皮装置是包括背衬构件的绷带形式，含有PIM抑制剂的贮存器任选地具有载体，任选地速率控制屏障以在延长的时间段内以受控和预定速率将PIM抑制剂递送到宿主的皮肤，以及用于将装置固定到皮肤的装置。

包括适于肌内，皮下或静脉内注射的PFM抑制剂的制剂包括生理上可接受的无菌水性或非水性溶液，分散体，悬浮液或乳液和用于重构为无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末合适的水性和非水性载体，稀释剂，溶剂或载体的实例包括水，乙醇，多元醇(丙二醇，聚乙二醇，甘油，cremophor等)，其合适的混合物，植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯例如，通过使用诸如卵磷脂的涂层，通过在分散体的情况下维持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。适用于皮下注射的制剂还含有任选的添加剂，例如保存，润湿，乳化和分配剂。

对于静脉内注射，在水溶液中任选地配制PIM抑制剂，优选在生理相容的缓冲剂如Hank的溶液中配制PIM抑制剂。林格氏溶液或生理盐水缓冲液。对于经粘膜给药，在制剂中使用适合于被渗透的屏障的渗透剂对于其它肠胃外注射，合适的制剂包括水性或非水性溶液，优选具有生理相容的缓冲剂或赋形剂。肠胃外注射任选地涉及丸剂注射或连续输注。用于注射的制剂任选地以单位剂型呈现，例如在安瓿或多剂量容器中，添加的防腐剂在一些实施方案中，本文所述的药物组合物为适合于肠胃外注射作为无菌悬液，油性或水性载体中的溶液或乳液的形式，并且含有配制试剂，例如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。用于肠胃外给药的药物制剂包括以水溶性形式的PIM抑制剂的水溶液另外，PIM抑制剂的悬浮液任选地制备成合适的油性注射混悬剂。

在一些实施方案中，所述PIM抑制剂局部施用并配制成各种可局部施用的组合物，例如溶液，悬浮液，洗剂，凝胶，糊剂，药棒，香膏，霜剂或软膏。此类药物组合物任选地含有增溶剂，稳定剂，张力增强剂，缓冲剂和防腐剂。

PIM抑制剂也可选地配制在直肠组合物中，例如敌人，直肠凝胶，直肠泡沫，直肠气溶胶，栓剂，果冻栓剂或保持敌敌方，含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯，以及合成聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮，PEG等在所述组合物的栓剂形式中，低熔点蜡，例如但不限于脂肪酸甘油酯的混合物，任选地与可可脂组合被首先熔化。

给药和治疗方案的实例

所述pimb 3抑制剂任选地用于制备用于预防和/或治疗的疾病或病症的药物，所述疾病或病症将至少部分地受益于症状的改善。另外，在需要这种治疗的个体中治疗本文所述的任何疾病或病症的方法涉及施用含有至少一种本文所述的至少一种pde 3抑制剂的药物组合物或其药学上可接受的盐，药学上可接受的N-氧化物，药学活性代谢物，药学上可接受的前药或其药学上可接受的溶剂化物。

在患者的条件不改善的情况下，在医生的决定时，任选地按时间施用p im 3抑制剂的施用，即，持续延长的时间段，包括在患者生命的整个持续时间中，以改善或以其他方式控制或限制患者的疾病或病症的症状。

在患者的状态确实改善的情况下，在医生的判断时，任选地连续给药所述pimb 3抑制剂的给药；可选地，所施用的药物的剂量暂时减少或暂时中止一定的时间长度(即，″药物″)。

节日(holday)。药物节日的长度任选地在2天和1年之间变化，仅以举例的方式包括2天，3天，4天，5天，6天，7天，10天，12天，15天，20天，28天

35天，50天，70天，100天，120天，150天，180天，200天，250天，280天，300天，320天，350天或365天。药物节日期间的剂量减少包括10％-100％，仅以举例的方式包括10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％.60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％或100％。一旦患者的状况的改善已经发生，则如果需要的话，给药维护剂量随后，作为症状的函数，给药的剂量或频率或这两者被减少到改善的疾病，病症或病症被保留的水平。

在一些实施方案中，患者在任何症状复发的基础上需要长期治疗。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物为适合于单次施用精确剂量的单位剂型。在单位剂型中，所述制剂被分成含有适当量的一种或多种PIM抑制剂的单位剂量在一些实施方案中，单位剂量为含有离散量的制剂的包装形式。非限制性实例是包装片剂或胶囊，以及小瓶或安瓿中的粉末。在一些实施方案中，水性悬浮组合物被包装在单剂量非可再封闭容器中。或者，使用多剂量可再封闭容器，在这种情况下典型地包括组合物中的防腐剂仅以举例的方式，用于肠胃外注射的制剂以单位剂型呈现，其包括但不限于安瓿或多剂量容器，添加的防腐剂。适用于pde 3抑制剂的每日剂量为约0.01至约2.5mg kg体重。在较大哺乳动物中指示的日剂量，包括但不限于人类，在约0的范围内5以分开的剂量方便地施用mg至约1000mg，包括但不限于至多四次一天或以延长的释放形式。用于口服给药的合适单位剂型包括约1-约500mg活性成分，约1-约250mg活性成分，或约1-约100mg活性成分上述范围仅仅是暗示性的，因为关于个体治疗方案的变量的数量大，并且来自这些推荐值的相当大的偏移不是不常见的。这些剂量任选地根据变量的数目而改变，不限于所使用的PIM抑制剂的活性，要治疗的疾病或病症，给药模式，个体的要求，所治疗的疾病或病症的严重程度的判断，以及医师的判断。

此类治疗方案的毒性和治疗功效任选地在细胞培养物或实验动物中确定，包括但不限于LD₅₀的确定(剂量致死至群体的50％)和ED₅₀(在50％群体中治疗有效剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是表示为LD₅₀和ED₅₀之间的比率的治疗指数优选表现出高治疗指数的PIM抑制剂。从细胞培养测定和动物研究获得的数据任选地用于配制用于人的剂量范围。此类ρiμ抑制剂的剂量优选在循环的范围内。

包括具有最小毒性的ED₅₀的浓度。所述剂量任选地在该范围内变化，这取决于所采用的剂型和所用给药途径。

鉴定和表征pde 3抑制剂的测定

小分子PIM抑制剂任选地在体外或细胞测定中在高通量中鉴定，例如在美国专利号8,283,356 B2,7 671,063 B2和8,431,589 B2中描述。适用于本文所述方法的PIM抑制剂可从多种来源获得，包括天然的(例如，细菌培养物，土壤或植物提取物)和合成物。例如，候选ρiμ抑制剂与组合文库分离，即，由化学合成或生物合成所产生的多种化学化合物的集合，其通过组合多个化学″构建块″。例如，线性组合化学文库如多肽文库是通过将一组称为氨基酸的化学构建块以给定化合物长度(即，多肽化合物中的氨基酸的数目)结合而形成的根据需要，可以通过化学构建块的这种组合混合来合成数百万种化学化合物。理论上，100个可互换化学构建块的系统，组合混合导致合成100百万四聚化合物或十亿五聚化合物(参见，例如，Gallop，ma等，J。Med。chem，1994，37(9)，1233-1251)。库的每个成员可以是单数和/或可以是混合物的一部分(例如，″压缩库″)。文库可以包含纯化的化合物和/或可以是″脏″(即，含有一定量的杂质)。组合化学文库的制备和筛选是文献记载的方法(参见：caboilly，S。ed，组合肽文库协议，在Molecular Biology，Humana Press，towa，nj，(1998))中组合化学文库包括，但不限于：如乙内酰脲，苯并二氮杂_和二肽的二烯烃，如例如dewit，sh等，Proc Natl Acad Sci USA.1993，90，6909-6913；如Chen，C等，J。Am Chem Soc，1994116，2661-2662中所述的小化合物文库的类似有机合成；如Cho，cy等，Science，1993261，1303-1305中所述的低聚氨基甲酸酯，如Campbell，da中所述，Bermak，jc，J。Org。chem，1994，59，658-660；以及含有例如噻唑烷酮和亚硫氮酮的小有机分子文库(美国专利No。

5，549，974)，吡咯烷(美国专利5,525,735和5,519,134)，苯并二氮杂_(美国专利No.5,288,514)。

用于制备组合文库的装置可商购(参见，例如，357MPS，390MPS，得自AdvancedChem Tech，Louisville，Ky；Symphony from Rainin，Wobum，Mass；433A from AppliedBiosystems，Foster City，ca；和9050Plus from Millipore，Bedford，ma)。许多机器人系统也已被开发用于溶液相化学这些系统包括自动化工作站和自动合成系统，例如由Hamilton，Inc(Reno，Nevada)开发的Microlab NIMBUS，Microlab VANTAGE和Microstar系统，以及由Chemspeed Technologies，Inc(New Brunswick，NT)开发的FLEX ISYNTH系统，以及利用机器人臂(例如，steabli)的许多机器人系统任一上述装置任选地用于生成组合文库，用于识别和表征PIM抑制剂，所述PIM抑制剂模拟由适用于所述方法的小分子PIM抑制剂执行的手动合成操作。

本文中任一上述装置任选地用于鉴定和表征适用于本文所公开的方法的小分子PIM抑制剂。

潜在PIM抑制剂的鉴定通过例如在候选抑制剂存在下测定PIM激酶的体外激酶活性来确定。在这种测定中，通过重组手段产生的ρ im和/或特征PIM片段在含放射性标记磷酸盐的磷酸盐供体(例如ATP)的存在下与基底接触，并且测量PIM依赖性掺入″基底″包括含有合适的羟基部分的任何物质，所述羟基部分可接受来自供体分子如ATP在PIM催化的反应中的y-磷酸基团。所述基质可以是PIM的内源性基质，即天然存在的物质，其在未改性的细胞中通过天然存在的ph 3(例如，，BAD或cdca))或在生理条件下通常不被PIM磷酸化的任何其它物质，但是可以在所采用的条件下被磷酸化。所述基底可以是蛋白质或肽，并且所述膦酰化反应可以发生在所述基底的丝氨酸和/或苏氨酸残基上。例如，这些测定法中常用的特定基质包括，但不限于，组蛋白和髓鞘碱性蛋白在一些实施方案中，使用IMAP_技术或luanascreen技术鉴定pimb 3抑制剂。

对基质的PIM依赖性磷酸化的检测可通过除放射性标记磷酸盐掺入物的测量以外的多种手段来定量。例如，磷酸基团的掺入可影响基底的物理化学性质，例如电泳迁移率，色谱性质，光吸收，荧光和磷光可选地，可以产生单克隆或多克隆抗体，其从非磷酸化形式选择性地识别基底的磷酸化形式，由此允许抗体起到PEVI3激酶活性的指示剂的作用。

可以在例如含有PIM激酶或其活性片段的每个孔的微升板，共价连接到每个孔的基底，P 32放射性标记ATP和潜在PIM抑制剂候选物中进行高通量PIM激酶测定。微量滴定板可含有96孔或1536孔，用于组合文库化合物的大规模筛选。磷酸化反应完成后，将板洗去，留下结合的基质然后通过放射自显影或抗体检测，对所述板进行磷酸基团掺入。通过它们的能力来鉴定候选PIM抑制剂，以与单独的PEvI磷酸转移酶能力相比，在基底上降低p im 3磷酸转移酶能力的量。

潜在的PIM抑制剂的鉴定还可以例如通过体外竞争结合测定，如ATP结合位点和/或基底结合位点，通过体外竞争结合测定来确定。对于ATP结合位点上的结合测定，使用对ATP结合位点具有高亲和力的已知蛋白激酶抑制剂，例如司他孢素。staurosporine被固定并且可以被荧光标记，放射性标记或以允许检测的任何方式被荧光标记，放射性标记或以任何方式被荧光标记，放射性标记或以任何方式被荧光标记，放射性标记将标记的星孢霉素引入重组表达的PIM蛋白或其片段以及潜在的pde 3抑制剂候选物。所述候选物被测试其能够以浓度依赖性的方式与所述固定化的星孢菌素竞争结合到所述PEvI蛋白的能力。staurosporine的量结合的PIM与候选抑制剂对PIM激酶的亲和力成反比。潜在的抑制剂将降低星孢霉素与PIM的可定量的结合(参见，例如faian，ma等，Nat。生物技术.2005，23，329-336)。然后，针对pim3的ATP结合位点从该竞争性结合测定中识别的候选物将进一步筛选以针对PIM激酶特异性针对其它激酶的选择性。

潜在的PIM抑制剂的识别也可以例如通过在抑制剂候选的存在下进行PIM活性的测定来确定。可使用各种细胞系和组织，包括专门设计用于此目的的细胞。在细胞筛选中，抑制剂候选物可通过监测PIM活性的下游效应以及其它细胞响应(例如生长，生长停滞，分化或凋亡)来测定PIM活性。

或者，PIM的下游靶点的PIM介导的磷酸化可以通过首先用PIM抑制剂候选物处理各种细胞系或组织，然后裂解细胞并检测PIM介导的事件来在基于细胞的测定中观察到。在该实验中使用的细胞系(例如，胰腺癌细胞系，例如MIAPaCa-2，PANC-1，pcci 35，p ci 55和pcci 66)可包括专门设计用于此目的的细胞PIM介导的事件包括但不限于PIM介导的下游PIM介质的磷酸化。例如，可以使用特异性识别磷酸化PIM介体但不是未磷酸化形式的抗体来检测下游PIM介质的磷酸化。这些抗体已经在文献中进行了描述，并且已经广泛用于激酶筛选活动。

许多合同研究组织(cro_s)提供PIM激酶测定服务，包括disclox，Inc，(San Diego，California)，反应生物公司(Malvern，pennsyvania)和Cama Biosciences(tookyo，Japan)。

潜在PIM抑制剂的鉴定还可例如通过体内测定法测定，所述体内测定涉及动物模型的使用，所述动物模型包括已被设计成具有特定缺陷或携带标记物的转基因动物，所述特定缺陷或携带标记物可用于测量候选物质到达和/或影响生物体内的不同细胞的能力。例如，小鼠已经被设计为过度表达PIM，从而导致可以用PIM抑制剂治疗的疾病，例如恶性肿瘤。

因此，本发明的化合物潜在地可用于预防或治疗其中PIM抑制起作用，恶性疾病或病症的病症或疾病。本发明的化合物潜在地可用于治疗和/或预防内皮器官的癌症，包括盲肠，肠，胃，胸腺，肝，胰腺，肺，食道，胆囊，甲状腺和前列腺，并且其表现为多种形式，例如食管腺癌，鳞状细胞癌，鼻咽癌，胃癌腺癌，胰腺导管腺癌，肝细胞癌，胆囊腺癌，前列腺腺癌，结肠直肠腺癌，胃肠道基质肿瘤(GIST)，非小细胞肺癌细胞和胃肠癌肿瘤在肿瘤，肿瘤疾病，癌或癌症的情况下，在原始器官或组织中和/或在任何其它位置中的转移可替代地或另外地暗示肿瘤和/或转移的任何位置对于上述用途，所需剂量当然会根据给药模式，要治疗的特定条件和所需的效果而变化。通常，以每体重约0.02至25mgkg的日剂量，全身地获得令人满意的结果。在较大哺乳动物(例如人)中指示的日剂量在约0的范围内2mg至约2g，方便地施用，例如以分剂量高达一天的四次或以延迟形式施用。用于口服给药的合适的单位剂型包括ca.0.1-500mg活性成分。

本发明的化合物可以通过任何常规途径，特别是胃肠外，例如以可注射溶液或悬浮液的形式，例如口服，例如口服，例如以片剂或胶囊的形式，局部地，例如以洗剂，凝胶，软膏或霜剂的形式，或以鼻或栓剂形式给药。局部给药例如皮肤。局部给药的另一种形式是眼部包含与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂相关联的本发明化合物的药物组合物可通过与药学上可接受的载体或稀释剂混合而以常规方式制造。

式I的化合物可以游离形式或药学上可接受的盐形式给药，例如如上所示。这样的盐可以常规方式制备并且表现出与游离化合物相同的活性顺序。

根据前述内容，本发明还提供了：

(1)式(I)或(II)化合物或其药学上可接受的盐作为药物；

(2)式(I)或(II)的化合物或其药学上可接受的盐，用作PIM抑制剂，例如用于上文所述的任何特定指示；

(3)药物组合物，例如用于本文之前的任何指示，包括式(I)或(II)的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体

(4)治疗需要的受试者中所述的任何特定指示的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)或(II)的化合物或其药学上可接受的盐；

(5)式(I)或(II)化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于治疗或预防疾病或病症的药物，其中PEVI3活化起作用或暗示；例如，如上所述。式(I)-(V)的化合物可以作为唯一活性成分或与例如佐剂一起施用，例如作为佐剂在免疫抑制或免疫调节方案或其它抗炎剂中，例如用于治疗或预防脂质或异种移植物急性或慢性排斥或炎性或自身免疫性疾病，化疗剂或抗感染剂，例如抗病毒剂，例如抗逆转录病毒剂或抗生素。例如，式(I)的化合物可以与钙氨酸盐抑制剂组合使用，例如环孢菌素A，ISA 247或FK 506；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素，CC 1779，ABT 578，biolimus-7，biolimus-9，TAFA-93，AP 23573，AP 23464或AP 23841；具有免疫抑制性质的ascom霉素，例如ABT-281，

as 981等；皮质类固醇；组织蛋白酶S抑制剂；环磷酰胺；氮硫嘌呤；甲氨蝶呤；lefunomide；咪唑啉；麦考酚酸；麦考酚酸酯；15-脱氧精子或免疫抑制同源物，类似物或其衍生物；鞘氨醇-1-磷酸盐受体激动剂，例如FTY720或其类似物，例如Y-36018；对白细胞受体的单克隆抗体，例如MHC，CD 2，CD 3，CD 4，CD 7，CDS，CD 11aCD 18，CD 25，CD 27，CD 28，CD 40CD 45，CD 58，CD 80，CD 86，CD 137，ICOS，CD 150(SLAM))，OX 40，4-1 BB或它们的配体，例如CD 154或其拮抗剂；其它免疫调节化合物，例如具有CTLA4或其突变体的胞外结构域的至少一部分的重组结合分子，例如，CTLA 4的至少胞外部分或其突变体，例如CTLA 4Ig(例如，ATCC 68629)或其突变体，例如至少29 Y；粘附分子抑制剂，例如，LFA-1拮抗剂，ICAM-1或-3拮抗剂，VCAM-4拮抗剂或VLA-4拮抗剂，例如natalzumab(.)；或抗趋化因子抗体或抗趋化因子受体抗体或低分子量趋化因子受体拮抗剂，例如抗MCP-1抗体

式(I)和/或(II)的化合物也可与其它抗增殖剂组合使用。此类抗增殖剂包括但不限于：

(i)芳香酶抑制剂，例如类固醇，尤其是外雌激素和福美坦，特别是非类固醇，尤其是氨基葡聚酰亚胺，伏达唑，吡唑，阿那曲唑，特别是曲唑；

(ii)抗雌激素，例如他莫昔芬，氟维司坦，雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬；

(iii)拓扑异构酶I抑制剂，例如拓扑替康，伊立替康，9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148(化合物A1在W 099/17804中)；

(iv)拓扑异构酶II抑制剂，例如阿霉素阿霉素(包括脂质体制剂，例如calyx tm)，表柔比星，伊达比星和线柔比星，蒽醌类米托蒽醌和洛索黄酮，鬼臼毒素依托泊苷和替尼泊苷；

(v)微管活性剂，例如紫杉烷紫杉醇和多西他赛，长春花生物碱例如长春碱，特别是长春碱硫酸盐，长春新碱，特别是长春新碱，和长春瑞滨，椎间盘霉素和埃坡霉素，如埃坡霉素B和D；

(vi)烷基化剂，例如环磷酰胺，ifdma酰胺和美法仑；

(vii)组蛋白脱乙酰酶抑制剂；

(viii)法尼基转移酶抑制剂；

(ix)COX-2抑制剂，例如塞来昔布(ceebrex_)，罗非考昔(viox_)和鲁米考昔(COX189)；

(x)MMP抑制剂；

(xi)mTOR抑制剂；

(xii)抗肿瘤抗代谢物，例如5-氟尿嘧啶，替卡他滨，卡培他滨，克拉屈滨，阿糖胞苷，磷酸氟达拉滨，氟尿苷，吉西他滨，6-巯基嘌呤，羟基脲，甲氨蝶呤，依datarexate和这类化合物的盐，以及ZD 1694(雷替曲xedtm)，LY231514(ALIMTA tm)，LY264618(LOMOTREXOLtm)和OGT 719；

(xiii)铂化合物，例如卡铂，顺铂和奥沙利铂；

(xiv))降低蛋白激酶活性的化合物和进一步的抗血管生成化合物，例如(i)化合物，其降低血管内皮生长因子(VEGF)(b)表皮生长因子(EGF)，c-Src，蛋白激酶c，血小板衍生生长因子(PDGF)，Bcr-Ab1酪氨酸激酶，c-kit，Flt-3和胰岛素样生长因子i受体(IGF-IR)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的活性；(ii)伊马替尼，中性激素，ire压力tm(ZD1839)，CGP 7166，vatalanib，ZD6474，GW2016，CHIR-200131，CEP-7055/CEP-5214，CP-547632和KRN-633；(iii)沙利度胺(菌体id)，塞来昔布(ceebrex)，SU 5416和ZD 6126；

(xv)促性腺激素激动剂，例如abrelix，goselin和goselin乙酸酯；

(xvi)抗雄激素，例如双醛酰胺(cadextm)；

(xvii)硼酰胺；

(xviii)二膦酸盐，例如乙二膦酸，氯膦酸，替鲁膦酸，戊糖醛酸，醛膦酸，伊班膦酸，利糖醛酸和唑来膦酸；

(xix)抗增殖抗体，例如曲妥珠单抗(HERCEPTIN^tm)，曲妥珠单抗-DM1，厄洛替尼(tarceeva^tm)，贝伐单抗(AVASTIN tm)，利妥昔单抗(RITUXAN_)，PR 064553(抗-CD 40)和2C4抗体；

(xx)替莫唑胺

由代码nos，通用或商标名称所标识的活动代理的结构可以从标准组合的实际版本″the Merck Index″或从数据库(例如，专利国际(例如，IMS世界出版物))中取得。

根据前述内容，本发明还提供了进一步的方面。

(6)如上文所定义的方法，其包括联合施用治疗有效量的(a)式(I)或(II)的化合物或其可接受的盐的治疗有效量的(a)式(I)或(II)的化合物或其可接受的盐，和b)第二药物物质，所述第二药物物质例如用于前述的任何特定指示。

(7)包含治疗有效量的PIM激酶抑制剂的组合，例如式(I)和/或(II)的化合物或其药学上可接受的盐，和第二药物物质，所述第二药物物质例如如上所述。当PIM激酶抑制剂，例如式(I)和/或(II)的化合物与其它免疫抑制剂，免疫调节，抗炎或抗肿瘤剂联合给药时，例如如上所述，所施用的药物或药剂的剂量当然会根据所使用的药物或药剂的类型，或所使用的特定药物或药剂，或所治疗的病症等而变化。

无细胞生物合成

在一些实施方案中，用于合成本发明的化合物和组合物的方法和系统，包括PIM抑制剂，是用作平台的体外无细胞生物合成(CFB)系统，以使用细胞酶和代谢机械来生产蛋白质和小分子代谢物，而无活细胞(参见：Hodgman，ce，jewet，M。C，Metab。eng.2012，14(3)，261-269)本文提供的无细胞生物合成系统通过允许天然生物合成基因和途径的快速表达以及通过允许活性筛选而具有许多用于药物发现的应用不需要基于质粒的克隆和体内传播，从而实现快速过程/产品管线(小分子文库的创建)。本文所使用的CFB方法和系统的关键特征是可以通过将资源引导到用户定义的目标来优化对目标化合物的生物合成途径通量，并且因此允许探索大的序列空间中央代谢，氧化磷酸化和蛋白质合成可以由用户共同激活。细胞壁的缺乏还提供了易于筛选毒性代谢物，蛋白质和小分子的能力。涉及体外转录/翻译(TX-TL)的无细胞生物合成方法已被用于产生(1)蛋白质(参见，例如：Carlson，ed等，Biotechnol。adv.2012，30(5)，1185-1194；schwartz，J。等，美国专利No.7，338，789；Goerke，ar等，美国专利号8,715,958)，(2)抗体和抗体类似物(参见，例如：Zimmerman，es等。Bioconjugate Chem，2014，25，351-361；thos，CD。et al，u。S。专利No.2015/0017187A1)和(3)小分子(参见，例如：Kay，J。等，Metabolic Engineering，2015，32，133-142；Goering，aw等，ACS Synth Biol.2017，6(1)，39-44；Blake，wj等，美国专利No.9,469,861)。

CFB方法和系统可用于快速原型新颖的复杂生物电路以及代谢途径。可以执行来自多个DNA片段(包括基于线性和质粒的DNA)的蛋白质表达。所述CFB方法和系统使得能够调节编码个体通路酶的DNA的浓度，并且对代谢产物产生的相关作用进行测试在CFB方法和系统中使用线性DNA表达多酶途径的能力绕过对质粒的体内选择和传播的需要。可以通过等温或黄金门组装技术将线性DNA片段组装在1至3小时(hrs)中，并立即用于CFB反应。CFB反应可以在几个小时内发生，例如大约4-8小时，或者可以长达48小时运行线性DNA的使用提供了用于DN a基因的快速原型库的有价值的平台。在CFB方法和系统中，调节和转录外源到E。coli的机制，例如tet阻遏物和T7 RNA聚合酶，或其它宿主细胞提取物，可以如用户所定义的那样补充以产生和最大化内源性，多样性或生产CFB方法和系统通过修饰包括mRNA和DNA降解速率在内的内源性来进一步增强靶化合物的多样性和生产。在CFB方法和系统中操纵允许回收无机磷酸盐，强抑制剂蛋白质合成的atp再生系统。氧化还原电势，包括例如，NAD NADU，NADP NADPH在CFB中再生，以及用于修饰特定辅因子的氧化还原和可用性的方法，其进而使用户能够选择性地调节CFB系统中的任何反应。

在备选实施方案中，CFB方法和系统使得体外无细胞转录/翻译系统(TX-TL)能够作为快速原型平台，用于从生物合成途径基因合成，修饰和鉴定产物，例如天然产物(np)或天然产物类似物(npa)在可选实施方案中，CFB系统用于天然产物和天然产物类似物的组合生物合成，例如本发明中提供的那些。在可选实施方案中，CFB系统用于快速原型复杂生物合成途径，作为快速评估组合设计用于合成化合物的方法式(I)或(II)。在可选的实施方案中，这些CFB系统被多路复用用于快速原型化天然产物通路基因的高通量自动化，它们编码和合成的天然产物以及天然产物类似物，例如本发明中提供的式(I)或(II)的化合物。在Culler，S。等，PCT申请WO 2017/031399 A1中描述了CFB方法和系统，并且通过引用将其并入本文。

如本文所述，CFB组合物，方法和系统可用于快速产生已知化合物的类似物，例如天然产物类似物和次级代谢结构类似物，例如式(I)或(II)的化合物。因此，CFB方法可用于本文所述的产生产物分集的方法中在一些实施方案中，本文提供的方法包括无细胞(体外)生物合成(CFB)方法，用于制备，合成或改变式(I)或(II)化合物的结构。CFB方法可以在TX-TL提取物或提取物混合物中产生至少两种或多种改变的化合物以产生改变的化合物文库；优选文库是由CFB方法制备，合成或修饰的天然产物模拟文库。

在可供选择的实施方案中，实践本发明包括使用通常用于分子生物学，微生物学和重组DNA的任何常规技术，这在本领域的技术人员内。这些技术是本领域技术人员已知的，并且描述于许多文本和参考作品中(参见例如Sambrook等，″molecular Cloning：ALaboratory Manual″，Second Edition，Cold Spring Harbor，1989；和Ausubel等，″Current Protocols in Molecular Biology，″1987)。除非本文另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。例如，singleon and Sainsbury，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology，2dEd，John Wiley and Sons，NY(1994)；和Hale和Marham，Harper Collins Dictionary ofBiology，Harper Perennial，NY(1991)为本领域技术人员提供了本发明中使用的许多术语的一般字典。尽管与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料可用于本发明的实践中，但本文描述了优选的方法和材料因此，下面通过参考说明书整体更全面地描述下面定义的术语。

除非本文另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料可用于本发明的实践中，但本文描述了优选的方法和材料。因此，下面通过参考说明书整体更全面地描述下面定义的术语。

如本文所使用的，单数术语″一″，″一个″和″该″包括复数引用，除非上下文另有明确指示。除非另有说明，否则核酸从左至右以5′至3′的取向被写入；氨基酸序列分别在氨基至羧基取向上被左向右写入应当理解，本发明不限于所描述的特定方法，协议和试剂，因为这些可以根据本领域技术人员使用的上下文而变化。

合成方法

许多方法可用于合成如式(I)和(II)所示的化合物。这些方法中的一些在Rao，bpc等，strategy to the synthesis of Staurosporine indolocalbazole生物碱及其类似物在来自有机和药物透视，第4章，Intech Publishers；Rijeka，Croatia(EU)，2016的范围内。

还参见：Wilson，li等，美国专利申请No.2007/0249590 al；Kleinschroth，J。等，美国专利No.5,438,050；Kleinschroth，J。等，美国专利No.5,489,608；faull，mm等，美国专利No。5,665877；faull，MM等人的美国专利第5,919,946号；Faul，M。M。等人的美国专利第5,614,647号；faull，MM等人的美国专利第6,037,475号。

方案1

在一个实施方案中，式(I)的化合物可以通过在THF溶剂中存在叔丁醇钾的情况下使吲哚-3-乙酰胺衍生物与甲基吲哚-3-乙二醛反应来制备，如方案2所示，并且如文献中所报道的(参见，例如：faull等，Tetrahedron Lett，1999，40，1109-1112；Faul等，J。Org。chem1998，63，6053-6058；Faul等，J。Org。chem 1999，64，2465-2470)吲哚-3-乙酰胺和吲哚-3-乙醛酸衍生物易于由宽范围的可用取代吲哚制备。最初形成的双吲哚美马来酰亚胺衍生物的环封闭提供式(I)所示的吲哚并[2，3-a]咔唑，其可以用各种氧化剂[O]来实现，包括Pd(OAc)₂，PdCl₂，hv/O₂ or I₂，DDQ，CuCl₂，or Pd(OTf)₂(参见，例如：Faul等，J。Org。chem1999，64，2465-2470)。

方案2

在另一个实施方案中，式(1IT)的化合物可以通过依次反应经取代的吲哚来制备，所述取代的吲哚与Mg或其它金属金属化，其中3，4-二卤代琥珀酰亚胺或其N-保护形式，如方案3(X＝Cl，Br)所示，并且如文献中所述(参见，例如：

Faul等，Synthesis，1995，1511-1516；Gallant等，J。Org。chem 1993，58，343-349)。如上文针对方案2所述，通过氧化制备式(I)的化合物。在方案2和方案3中，可以使用标准试剂(例如硼氢化钠或锌汞齐)将酰亚胺官能度降低到内酰胺官能度。在方案3中，可以通过与吲哚N-H官能团反应(例如，通过烷基化或酰化反应)的标准方法来添加Q和/或R基团。

方案3

在另一个实施方案中，式(I)和(iiia)的化合物可以通过在涉及无细胞生物合成(CFB)的过程中反应色氨酸衍生物来直接制备，如方案4所示。在该生物过程中，酶用于冷凝两个色氨酸分子或色氨酸衍生物以直接产生式(I)的化合物，其中Q和R是氢已经阐明了这些转化所需的酶，并且可以使用来自各种途径的酶来产生吲哚并咔唑衍生物。已知某些酶催化转化并促进途径产生天然吲哚并咔唑这些酶包括例如使用过程CFB-1：viioa(氨基氧化酶)和viiob(苯并吡咯酸合酶)的暴力通路，spo(氨基氧化酶)，sd(吡喃并吡咯酸合酶)，setp(细胞色素P450单加氧酶)，和rebeo(氨基氧化酶)，RebD(苯并吡咯酸合酶)，RebP(细胞色素P450单加氧酶)和rebec(黄素羟化酶)的式(I)或其同系物(参见，例如：Sanchez等，Nat。

Prod。rep.2006，23，1007-1045；Sanchez等，Proc NatlAcad Sci usa，2005 102，461-466；Du等，ACS Synth。biol.2015，4，682-688；Du等，Curr。opin。chem Bio.2016，31，74-81)。类似地，可以使用过程CFB-2，例如，使用酶VioA和viiob，sro和RebD，RebO和RebD，或其同系物，结合甲基arcyriarubin途径或其同系物(参见：Chang，F-Y和Brady，sf)生产式(ii)的化合物，chembichem，2014，15(6)，815-821)。这些酶在本文中用于直接制备式(I)和(III)的化合物，其中A，B，C，D，A′，B′，C，D′，Q和R是氢，并且E，F，G，M，E′，F′，G′，M′是当色氨酸用作前体时的碳。这些酶可用于工程化活细胞中，或可选地用于无细胞过程中，以产生式(I)和式(ii)的化合物。天然产物样化合物的无细胞生物合成描述于Culler，S。等，PCT申请WO 2017/031399 a1中，并在此引入作为参考。

在本发明的一个实施方案中，如方案4中所概述的，在无细胞生物合成过程中使用暴力通路的酶VioA和Vio B，staurosporine途径的StaO，StaD，setp和sabc，和/或rebecamycin途径的rebeo，RebD，rbp和RebC，和/或甲基arcyriarubin途径的MarC，以制备式(I)或(III)的化合物，如方案4所述例如可用于直接生产式(I)的化合物，其中Q，R，Y和Z是氢。可用于直接生产式(I)的化合物，其中Q和R是氢，Y和Z一起形成碳氧双键(C＝O)。

方案4

在本发明的另一个实施方案中，式(I)或(iiia)的化合物，其中Q和R为氢，可通过化学方法转化以引入附连到吲哚N原子的含杂原子的尾，如式(I)所示，其中Q和/或R不是H，式(II)，其中形成大环。

实施例

一般方法

下面描述与本发明相关的示例。在大多数情况下，可使用替代技术。这些实施例旨在是说明性的，而不是对本发明的范围的限制或限制。例如，在按照特定化合物的方案的方案制备另外的化合物的情况下，应当理解的是，条件可以变化，例如，任何溶剂，反应时间，试剂，温度，工作条件或其他反应参数可以变化。使用标准板进行所有分子生物学和无细胞生物合成反应，当与生物分子如DNA，RNA和蛋白质一起工作时，通常采用瓶。除非另有说明，否则所有合成化学在标准实验室玻璃器皿和设备中进行。如所接收的那样使用商业试剂。使用具有可变波长检测器的Agilent 1100仪器来灌注分析HPLCLC MS在具有交替的正和负离子扫描的Applied Biosystems 3200 APCI三重四极质谱仪上进行。使用Thermo FisherQ Exactive MS仪器进行高分辨率质谱分析。使用配备有5973N惰性质量选择性检测器的Agilent 6890 N仪器进行gc-MS。使用Metrohm 940专业IC Vario仪器进行离子色谱分析1在400MHz的Jeol JNM-ECS-400或600MHz的Bruker DRX-600上进行HNMR。使用仪器软件在Biotage引发剂中进行微波反应以控制加热时间和压力。使用市售的催化剂盒在H-立方体上进行氢化反应。使用标准柱或使用来自Waters的预填充的Sep-Pak二氧化硅盒手动进行硅胶层析用在220nm的UV检测和手动收集在Waters 1525/2487上进行制备型HPLC。

分析LC MS方法A：

柱：Zorbax SB-C 8柱4.6mm x 50mm

流速：1.0mLmin

温度：30℃

流动相A：0.1％TFA的水

流动相B：乙腈

注射量：2μl

HPLC梯度：90：10相A：相B 5.0分钟，然后10：90相A：相B1分钟，然后100％相B7分钟

分析LC MS方法B

柱：Zorbax SB-C8柱4.6mm x 50mm

流速：1.0mLmin

温度：30℃

流动相A：0.1％TFA的水

流动相B：乙腈

注射量：2μl

HPLC梯度：40：60阶段A：阶段B：5.0分钟，然后10：90阶段A：阶段B：1分钟，然后100％阶段B持续6分钟

分析LC MS方法C

柱：sounfoire C 18柱；4.6mm xlio mm

流速：1.0mLmin

温度：30℃

流动相A：0.1％TFA的水

流动相B：乙腈

注射量：3μl

HPLC梯度：90：10阶段A：阶段B：6.0分钟，然后10：90阶段A：阶段B：1分钟，然后100％

相B10分钟

Analytical LC/MS Method D

HPLC column：Hypersil Gold C18，3mm x 100mm

Flow rate：0.3uL/min

Mobile Phase A：0.1％Formic acid in water

Mobile Phase B：0.1％Formic acid in Acetonitrile

Injection amount：5μL

HPLC Gradient：20％B 0-0.5min，20％-95％B 0.5-8.5min，95％B 8.5-9.8min，20％B 10-15min Exactive HR MS：ESI in negatiVe and/or positive ionizationmode，XIC±10ppm around exact m/z Compound Synthesis

The general synthetic coupling routes that can enable production ofcompounds of the invention are shown in Schemes 2 and 3.The cell-freebiosynthesis(CFB)process shown in Scheme 4was used for the production ofcompounds of Formula(I)and(III)，as outlined below.

Example 1

Synthesis of 12，13-dihydro-5H-indolo[2，3-a]pyrrolo[3，4-c]carbazole-3，7(6H)-dione(Arcyriaflavin A)Using Cell-Free Biosynthesis(Scheme 4，CFB-1withtryptophan)

在T7启动子(表达sys)之后，合成编码来自lehepatrieria aerosonigenes的蛋白质viia和viib的序列的密码子优化的DNA，来自lehepatrium aerosonigenes的RebC和RebP，以及来自长链霉菌DSM 10189的subc和setp(Thermo Fisher，Carlsbad，CA)，并将其单独克隆到pZE表达载体中。使用或不使用C末端strep标签，使用编码VioA，VioB，RebC，RebP，sc和setp蛋白的所得质粒编码基因通过在大肠杆菌BL 21Star(DE3)细胞提取物(15mg mL总蛋白)中添加vioA，vioB，rebC和rebP DNA质粒(SEQ ED NOs：1-4，15nM)来启动arcyriaflavinA的生产，如Kay，J。等人所述制备的。eng.2015，32，133-142和Sun，Z。Z，J。Vis。exp 2013，79，e 50762，doi：10 3791与含有ATP，GTP，TTP，CTP，氨基酸，t-RNA，谷氨酸镁，谷氨酸钾，磷酸钾和其它盐，NAD+，NADPH和葡萄糖的缓冲液预混合，以达到400μl的总体积。将色氨酸(1.5mM)加入促进生产Arcyriaflavin a，这是通过在22℃下孵育反应18小时来完成的。然后用MeOH(1mL)处理该反应，离心除去沉淀的蛋白质将液体馏分浓缩并通过固相萃取。

(SPE)盒(Sep Pak)，然后使用硅胶色谱进行最终纯化.1HNMR(400MHz，DMSO-d 6)δ(ppm)11.72(br，2H)，10.01(br，1H)，8.99(d，2H)，7.80(d，2H)，7.55(m，2H)，7.35(dd，1H)。lc保留时间7.79分钟(方法d)。因此在无细胞生物合成过程中产生的ms(ESI)mz324.076arcyriaflavin A与购自Santa Cruz biotechnology(Dallas，TX)的天然材料相同。

实施例2

使用无细胞生物合成(方案4，具有色氨酸的CFB-1)合成6，7，12，13-四氢-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5-酮(K25c)。

为了生产K 252c，用基因staC和staP(SEQ ID no：5和SEQ ID no：5)替换雷贝霉素途径的基因rebC和rebP6)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.70(brs，1H)，11.52(brs，1H)，9.20(d，1H)，8.44(brs，1H)，8.04(d，1H)，7.77(d，1H)，7.70(d，1H)，7.48(dt，1H)，7.43(dt，1H)，7.31(dt，1H)，7.22(dt，1H)，4.96(s，2H).13c NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)125.5，125.3，125.2，121 6，119.4，112.2，111.9，45.721c保留时间6.96min(方法D)。因此在无细胞生物合成过程中产生的ms(ESI)mz 310.095k 252c与购自Santa Cruzbiotechnology(Dallas，TX)的天然材料相同。

实施例3

使用无细胞生物合成(方案4，具有5-氟色氨酸的CFB-1)合成3，9-二氟-arcyriaflavin A(129)。

生物合成酶选自具有SEQ ID no：1-4的viia，viib，RebC和RebP的列表，或同源酶，例如在下表2中所示的同源酶的非全面列表中所示的那些，通过合成用于C-末端strep-标记的个体密码子优化的基因承载序列并克隆到pZE表达载体(表达sys)中来生产和分离酶。质粒转化为E大肠杆菌NEB 5a(NewEnglandBioLabs，Ipswich，MA)，将菌株在5L加气发酵罐中培养，通过离心分离细胞质量并使用细胞均质器裂解。使用Strep-Tactin纯化单独的酶。

在制造商的说明书之后的树脂(STREP-TACTIN_SUPERFLOW_高容量盒，IBALifesciences)。

所述生物合成反应如下进行：向4mL Tris缓冲液(0.1mM，pH 8.0)中加入纯化的酶viia(3μm)，VioB(3μm)，RebP(3μm)和RebC(1.5μm)。该反应通过加入5-氟色氨酸(1mM)，连同5mM NADH，1μm Ferredoxin-NADP+还原酶(来自杀霉素(Sigma))和20μm菠菜铁氧还蛋白引发，并且混合物在25℃下温育24小时完成后，用MeOH(4mL)处理反应并离心除去沉淀的蛋白质。将液体馏分浓缩并通过固相萃取(SPE)盒(Sep Pak)，然后使用硅胶色谱进行最终纯化.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.75(br，2H)，10.12(br，1H)，8.81(dd，1H)，7.68(d，2H)，7.42(dd，1H)。LC保留时间8.2min(分析LC方法d)。ms(ESI)mz 360.05916[m-H-]-。

实施例4

使用无细胞生物合成(方案4，具有色氨酸的CFB-2)合成3，4-二(1H-吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮(ArcyriambinA)

在T 7启动子(表达sys)后合成编码来自发色杆菌和来自未捕获的细菌的MarC的序列的密码子优化的DNA(Thermo Fisher，Carlsbad，CA)，并将其单独克隆到pZE表达载体中。所得到的编码VioA，VioB和MarC蛋白的基因的质粒与C-末端strep标签一起使用或不使用C-末端strep标记通过在大肠杆菌BL21 Star(DE3)细胞提取物(15mg mL总蛋白)中加入15nM的每个vioA，vioB和marC DNA质粒(SEQ YD NOs：1，2和14)，启动arcyriarubin A的生产，如Kay，J。等人所述制备的。eng.2015，32，133-142和Sun，Z。Z，J。Vis。exp 2013，79，e50762，doi：103791与含有ATP，GTP，TTP，CTP，氨基酸，t-RNA，谷氨酸镁，谷氨酸钾，磷酸钾和其它盐，NAD+，NADPH和葡萄糖的缓冲液预混合，以达到400μl的总体积。将色氨酸(1.5mM)加入促进生产Arcyriarubin a，这是通过在22℃下孵育反应18小时来完成的。然后用MeOH(1mL)处理该反应，离心除去沉淀的蛋白质将液体馏分浓缩，并通过固相萃取(SPE)滤筒(Sep Pak)，然后使用硅胶色谱进行最终纯化，得到红固体.1H NMR(400MHz，CD 3 OD)δ(ppm)7.62(d，2H)，7.24(d，2H)，6.86(m，2H)，6.75(d，2H)，6.52(t，2H)；LC保留时间7.40min(方法d)。ms(ESI)mz计算值.327.1001 for C20 H13 N3O2，实测值326.0937[m-H]-因此在无细胞生物合成过程中产生的Arcyriarubin A与购自Cayman Chemical(Ann Arbor，MI)的天然材料相同。

实施例5-37

使用与实施例3中所述相同的方法合成如表1中的实施例5-28所示的化合物，用于3，9-二氟-阿魏酸A(129)，但通过添加相应的取代的色氨酸衍生物而不是实施例3中使用的5-氟色氨酸。

实施例29-37通过遵循与实施例4中所述相同的通用程序制备，用于ArcyriarubinA，但是通过添加相应的取代的色氨酸衍生物而不是母体色氨酸前体。通过LC-MS分析所有样品，并表现出与所列化合物一致的预期分子质量。

表1实施例5-37

示例38

12，13-二氢-12-(2-(4-吗啉)乙基)-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(3)的合成。

步骤1：6，12-二(叔丁氧羰基)-12，13-二氢-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮的合成。

根据sser，mj，et al。(Bioorg Med.)所述的方法制备该化合物。chem Lett.2001，11，1993-1995)。在干燥的N，N-二甲基甲酰胺(320μl)中向阿魏酸(32mg，0.085mmol)的溶液中加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体，7.8mg，0.195mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌15分钟至反应混合物中加入二碳酸二叔丁酯(52mg，0)238将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(100μl)，水(100μl)和乙腈(700μl)的混合物稀释。收集沉淀，用水(1mL)洗涤固体，得到黄色结晶固体的标题化合物(34.4mg，0.065mmol，77％)。lcms：88％，tR＝3.588min，mz＝54.1[m-h]-。该材料在没有进一步纯化的情况下使用。

步骤2：12，13-二氢-12-(2-(4-吗啉)乙基)-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(3)。

将步骤1中制备的化合物(16mg，0.031mmol)在干燥的N，N-二甲基甲酰胺(160μl)中的溶液中加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体，1.8mg，0.045mmol)，在室温下搅拌反应混合物15分钟。向反应混合物中加入2-(4-吗啉)乙基溴(15mg，0.077mmol)，在室温下搅拌反应混合物5小时用饱和碳酸氢钠溶液(200μl)和水(200μl)的混合物猝灭反应并收集沉淀物。将固体用水(1mL)洗涤，在空气流下干燥15分钟至粗产物，加入三氟乙酸(700μl)，将反应混合物在室温下搅拌20分钟。蒸发反应混合物，通过制备HPLC纯化残余物，得到2∶1的两种化合物(2.2mg，0)的混合物005mmol，16％)为黄色结晶固体。lcms：92％，tR＝1.167min和1.282min(ca).2∶1混合物)，mz＝439.2[m+H]⁺.1 H NMR数据表明该混合物由两个N-烷基化产物组成，主要产物是酰亚胺-N-烷基化化合物。将该混合物(2.2mg)溶解在200微升DMSO中，并在以下条件下通过制备型HPLC进一步制备，得到0.5mg所需化合物3为浅黄色固体。

用于纯化化合物3的制备型HPLC纯化条件：

流速：4mL min

波长：254nm

柱：Phenomenex Luna 5μC 18(2)Δθin250×10mm(PN：00G-4252-N 0)

梯度：含有0.1％TFA(等度)的35％乙腈

通过冻干浓缩含有两种异构产物的合并级分。分析HPLC数据(图2)显示了两种异构烷基化产物的清洁分离。NMR分析证实了化合物3的结构：¹H NMR(400MHz，1∶1 CD₃OD/DMSO-d₆)δ(ppm)9.21(d，1H)，9.18(d，1H)，7.80(d，1H)，7.74(d，1H)，7.65(t，1H)，7.60(t，1H)，7.41(t，lH)，7.39(t，1H)，3.70(m，4H)，3.25(t(br)，2H)，2.77(m(br)，6H)。

表2具有登录码的VioA，viib，RebC，sc，RebP，setp和MarC的同源酶的实例

激酶测定

用于测定激酶抑制剂活性的两种不同测定用于评估本发明化合物抑制PIM激酶的有效性。一种测定是采用放射性标记的ATP的标准生物化学测定，其中通过定量掺入标准肽基质中的放射性标记的量来测量50％激酶活性(IC 50)的抑制浓度第二测定是基于竞争的测定，其中结合亲和性(Kd)是通过已知亲和性的固定化抑制剂(例如，stanrosporine)的位移测量的，并量化在用感兴趣的抑制剂治疗后保持附着于载体上的激酶的量。竞争结合测定。

抑制剂结合常数(K_d)是通过使用活性位点依赖性竞争结合测定法测定的，基本上如keraman，mw等，Nat所述。生物技术醇.2008，26，127-132)。用含有NF-kB结合位点(50-GGGAATTCCC-30)的嵌合双链DNA标签标记pim激酶，所述嵌合双链DNA标签与用于qPCR读出的扩增子融合，然后克隆到可商购的T 7选择载体和菌株(Novagen)的修饰形式中DNA标记的激酶-T 7噬菌体克隆在大肠杆菌BL 21衍生的菌株中在24-或96孔嵌段中平行生长。将大肠杆菌生长至对数期并且用T7噬菌体从冷冻的原料(多个感染ca)感染.0.1)并在32℃摇匀，直至裂解(ca).90分钟)。将裂解物离心(6000g)并过滤(0.2mm)以除去细胞碎片直接在结合测定中使用提取物，而无需在a&gt处进行任何酶纯化步骤；10，000倍的总储备稀释(最终DNA标记的酶浓度&lt；0.1nM)。

将抗生物素链霉亲和素的磁珠在25℃用生物素化staurosporine处理30分钟，以产生用于激酶测定的亲和树脂。用过量的生物素阻断病毒珠的剩余链霉亲和素位点，并用阻断缓冲液(seeablock(Pierce)，1％BSA，0.05％Tween 20，1mM DTT)洗涤以除去未结合的配体并减少非特异性噬菌体结合将测试化合物(本发明的化合物和阳性对照)制备为DMSO中的1，000x储备溶液，并迅速稀释到含水环境中(0.1％DMSO最终)。加入DMSO(0.1％)以控制缺乏测试化合物的测定。所有反应都是用最终体积为0.1ml的阻断缓冲液预处理的聚苯乙烯96孔板中进行的。

通过在DMSO中组合标记激酶提取物，融合亲和珠和制备为100x原料的测试化合物来组装结合反应。添加DMSO以控制缺乏测试化合物的测定。在384孔板中进行初筛相互作用，而在96孔板中进行K_d测定。将测定板在1x结合缓冲液(20％seeablock，0.17xPBS，0)中温育055％Tween 20，6mMDTT)在25℃振荡1小时，足以建立平衡。用洗涤缓冲液(1xPBS，0.05％Tween 20，1mM DTT)洗涤亲和珠4次以除去未结合的噬菌体/蛋白质。在最终洗涤之后，将珠子重悬于洗脱缓冲液(1xPBS，0.05％Tween 20，2mM非生物素化亲和配体)中，并在25℃下摇动30分钟，以便洗脱结合的激酶通过标准斑块测定和定量PCR分别测定洗脱液中的噬菌体效价和激酶浓度。使用测试化合物的11个连续三倍稀释液和DMSO对照测定kds。对于每个测定，对亲和探针浓度进行优化，以确保测量真实的热力学抑制剂K_d值。基于如faian，ma等，Nat所述的洗脱液中的噬菌体浓度计算结合常数。生物技术醇，2005，23，329-336。

koinmescantm基于竞争结合测定，其定量测量化合物与固定化活性位点定向配体竞争的能力。由keraman，mw等人开发的Nat。生物技术醇.....................。通过DNA标签的定量PCR测定测试化合物与固定配体竞争的能力。

为了进行koinmescan tm激酶测定，在来源于BL 21菌株的大肠杆菌宿主中制备激酶标记的T7噬菌体菌株。将大肠杆菌生长至对数期，用T 7噬菌体感染，并在32℃摇匀，直至裂解。离心并过滤裂解物以除去细胞碎片。用生物素化小分子配体在室温下用生物素化小分子配体处理经链霉亲和素涂布的磁珠，以产生用于激酶测定的亲和树脂用过量的生物素阻断斜向珠粒，并用阻断缓冲液(seeablock(Pierce)，1％BSA，0.05％Tween 20，1mM DTT)洗涤以除去未结合的配体并减少非特异性结合。通过在lx结合缓冲液(20％seeablock，0.25x PBS，0.05％吐温20，6mM DTT)中结合激酶，融合亲和珠和测试化合物来组装结合反应。以100％DMSO中的111x原料制备测试化合物使用具有三个DMSO控制点的11点3倍化合物稀释系列测定K_ds。用于K_d测量的所有化合物通过声传递(非接触点胶，非接触点胶，在100％DMSO中的回波(Echo)550。然后将化合物直接稀释到测定中，使得DMSO的最终浓度为0.9％。在聚丙烯384孔板中进行的所有反应。每种都是0.02ml的最终体积。将测定板在室温孵育1小时，用洗涤缓冲液(1x PBS，0.05％吐温20)洗涤亲和珠。然后将珠子再悬浮于洗脱缓冲液(lx PBS，0.05％Tween 20，0)中5udm非生物素化亲和配体)，室温孵育30分钟。通过qPCR测定洗脱液中的激酶浓度。

使用Hill方程用标准剂量-响应曲线计算结合常数(K_ds)：

将Hill斜率设置为-1。使用与Levenberg-Marquardt算法的非线性最小二乘拟合来拟合曲线。

在涉及PIM激酶的该测定中，本发明的化合物显示在0.1nM至10μm范围内，优选在0.1nM至10nM范围内的K_d值。实施例1的arcyriaflavin a表现出1.9nM的pd 3的K_d。使用该测定法，阳性对照抑制剂staurosporine的K_d为0.51nM对PEVI 3。

在涉及PIM1和PIM2激酶的该测定中，本发明的化合物在10nM至10μm的范围内显示K_d，优选在100nM至&gt的范围内；10μm。实施例1的arcyriaflavin a表现出K_d对于21nM的PEVI 1和19nM的PEVI 2的K_d。实施例3的化合物129显示2.5μm的pd 1的K_d和77nM的PIM 2的K_d。使用该测定，阳性对照抑制剂staurosporine分别具有3.2和1.9nM对PIM 1和PIM2的K_d。

激酶抑制数据：

为了获得激酶抑制信息，化合物arcyriaflavin，122123，128-131，137-139，146和147中的每一个溶解在100％二甲基亚砜(DMSO)中以产生10mM储备。用koinmescan tm技术测定各化合物对PIM激酶的结合亲和力，由eurofin disclox(Fremont，CA)开发的竞争结合激酶测定法。每次测定都重复进行图3示出了由qPCR(信号；y轴)测量的激酶的量与log 10标度(x轴)中的相应化合物浓度的曲线图，其用于计算靶向ph3的化合物122的3nM的Kd。

对于示出环取代如何影响一系列羟基取代的类似物122-123，氟取代的类似物128-131和溴取代的类似物137-139的结合亲和力(K_d)的示例，以及用于PIM激酶的氰基取代的类似物146-147，参见表3。

表3化合物AF，122 123，128-131，137-139，146和147的kd值(nM)

Kd(nM)	PIM1	PIM2	PIM3
				Arcyriaflavin	21	19	1.9
122	11	9	3
				123	130	84	6.4
128	280	260	24
				129	2500	77	27
130	700	150	48
				131	6300	2600	130
137	＞10000	＞10000	＞10000
				138	＞10000	＞10000	＞10000
139	＞3000	＞3000	＞3000
				146	＞10000	＞10000	＞10000
147	＞3000	＞3000	＞3000

生化激酶测定

基本生化测定采用放射性标记的ATP对含酪氨酸的肽基质进行放射性磷的激酶催化转移，反应：底物+[γ-³³P]-ATP→³³P-基底+ADP。

使用在含有10mM MgCl₂，10mM MnCl₂，1mM EGTA，0.02％Brij 35，0.02mg mL BSA，0.1mM Na₃VO₄，2mM DTT，0.02％Brij 35，10μm ATP和20μm肽基底rsrhssypast的pH 7.5下在20mM HEPES中进行的捕获测定，由反应生物公司(Malvern，PA)实施用于pH 3的标准协议。加入DMSO中的抑制剂，使得DMSO的最终浓度不超过1％，并且酶使得ATP的消耗小于10％将试剂合并并在30℃下孵育30分钟，通过加入[γ-³³P]-ATP(10μci mL[γ-³³P]-ATP)并在30℃下孵育2小时来引发反应。然后通过加入第三体积的停止试剂(0.25mM EDTA和33mMATP在d3/40中)终止反应。除去15mL等分，将P-81过滤垫离子交换纸上样，依次用10％(wv)氯乙酸和dH20洗涤除去ATP通过闪烁计数定量结合的33P-肽底物，并且获得的每分钟崩解(dpm)与由pde 3产生的33P-肽的量成正比，用于测定每种化合物的IC₅₀。除了使用PIM 1的肽底物kkrnrtlltk和ρiμ2的rsrhssypagnt之外，类似地进行了对pde 1和pde 2的测定。

在涉及pde 3激酶的该测定中，本发明的化合物在0.1nM至2μm的范围内显示IC₅₀值，优选在0.1nM至10nM的范围内。实施例1的arcyriaflavin A表现出0.13nM的piμ3的IC₅₀。使用该测定，阳性对照抑制剂staurosporine的IC₅₀为0.14nM vs p im3。

在涉及pde 1和pde 2激酶的该测定中，本发明的化合物在10nM至10μm的范围内显示IC₅₀，优选在100nM至&gt的范围内；10μm。实施例1的阿利福拉素A表现出IC₅₀对于2.2nM的pimb 1和使用该测定的21nM的pimb 2。化合物129显示了PIM 1的IC₅₀。阳性对照抑制剂staurosporine具有IC₅₀分别为4.0nM和33nM对p im 1和p im 2的使用。

用放射性同位素过滤器结合测定法测定每个化合物对PIM激酶的抑制活性，在反应生物公司(Maven，PA)可获得一种类型的基底磷酸化测定，以获得表4中列出的IC₅₀值。

表4中示出了arcyriaflavin，ruboidin，式(II)的母体结构和化合物3，122和123的PIM激酶的生化抑制的实例。

表4：arcyriaflavin，rubin，化合物3，122的PIM激酶的生化抑制。

123

IC<sub>50</sub>(nM)	PIM1	PIM2	PIM3
				Arcyriaflavin	2.2	21	0.3
Ruboxistaurin	26	7650	10
				3	1.6	138	0.2
122	0.5	5.4	0.03
				123	3.9	55	0.2

实施例39

用于PIM抑制剂的基于内皮癌细胞的生长抑制和凋亡测定。

用于增殖和凋亡测定的内皮癌细胞系获自商业来源(Creative Bioarray，Shirley，NY；Sigma-Aldrich，St Louis，MO；ATCC，。

根据提供者的指令，将含有10％胎牛血清(Thermo Fisher，Waltham，MA)的RPMI-1640培养基(Sigma-Aldrich，StLouis，MO)储存和维持。用于筛选PIM抑制剂活性的内皮癌细胞系包括：

胰腺：MIA PaCa-2，PANC-1，capa-1，pssn 1和JOPACA-1

结肠直肠癌：Caco-2，COLO 320，DLD-1，HCT-15，HCT-116，HT-29和SW 48

胃：AGS，si-1，si-5，Hs 746T，NCI-N 87，KATO-ii，HGC-27，MNK 28，MNK 45

肝：HepG 2，C 3A，HuH 7，hb 3B，HLE，HLF，SK-Hepl，PLC/PR/5

前列腺：DU-145，PC-3和LNCaP，lapd-4，lapd-9和VCaP

在含有10％胎牛血清(Thermo Fisher，Waltham，MA)的RPMI-1640培养基(Sigma-Aldrich，StLouis，MO)中于37℃，在空气中5％CO₂的气氛中培养胰腺癌细胞系增殖，凋亡和不良磷酸化五个胰腺癌细胞系，MIA PaCa-2，PANC-1，capa-1，PSN 1和JOPACA-1。将细胞悬浮液(3-10x10³细胞/100μl)加入96孔板的孔中，并预培养24小时本发明化合物在RPMI-1640中(10μl，最终DMSO浓度为0.5-2.0％)在第0天分配到孔中，继续孵育72小时。使用衍生自前体WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2H-四唑鎓，单钠盐)(Sigma-Aldrich，StLouis，MO)的水溶性甲氧基染料的直接读出，用细胞计数试剂盒-8测量细胞生长抑制通过向每个孔中加入10μl的WST-8试剂，每天确定细胞活力.37℃孵育2h后，用PHERAstar Plus微板阅读器(BMG Labtech，Germany)在450nm处分光光度监测染料吸光度，并通过与第0天活细胞数的比较确定细胞数的信号强度比，抑制本发明的pim抑制剂化合物人胰腺细胞系的生长范围为10nM-10μm，最多为100μm-5μm。每一独立实验都进行三次。

胰腺癌细胞凋亡测定

来自上述增殖测定的细胞(有和没有添加PIM抑制剂)被胰蛋白酶化，并且在6孔板中镀2x10⁵细胞。在37℃孵育24小时后，将细胞洗涤并重悬于0.5ml PBS，5μl膜联蛋白V-FITC(Invitrogen-Thermo Fisher，Waltham，MA，USA)和1μm碘化丙啶(100μg/m1)中将细胞在冰上孵育30分钟，然后用流式细胞术(巨细胞仪tmfc 500；Beckman Coulter，Miami，FL，USA)进行分析。通过将细胞凋亡细胞的数目除以细胞总数(104细胞的最小值)来估计凋亡分数。使用CXP软件(BeckmanCoulter)使用血细胞计数器FC500分析数据。所有观察在独立实验中至少再现三次。

本发明的化合物用于胰腺，胃，结肠直肠癌，肝和前列腺癌细胞系中的细胞生长抑制和凋亡诱导。本发明的化合物抑制细胞生长相对于不添加抑制剂的对照为20-100％。在观察到抑制的所有情况下，也检测到细胞凋亡，证明PIM抑制通过抑制BAD的磷酸化诱导编程的细胞死亡，如下所述测量。

PIM抑制剂对不良磷酸化的作用

如上所述用本发明的化合物处理内皮癌细胞2小时，然后悬浮冷磷酸盐缓冲盐水，造粒，然后再悬浮在补充有蛋白酶抑制剂(Orbigen，Inc，San Diego，CA)的100-200μl冷昆虫细胞裂解缓冲液中。细胞通过超声处理裂解，并进行微离心。将40μg裂解液装入10％Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺微凝胶中，用于SDS-PAGE分析将蛋白质转移到PVDF膜中，在TBS-T加5％(w v)粉末印迹级乳中阻断1h，然后在4℃用初级P-Bad S 112抗体(细胞信号技术，Danvers，MA)在阻断溶液中以1∶2000稀释反应过夜。使用增强的化学发光试剂ECL加(GEHealthcare，Little Chalfont，UK)开发斑点。使用GS-800密度计(Bio-Rad，Hercules，CA，USA)扫描P-不良带以计算EC₅₀值。

细胞生长抑制数据：

为了获得PIM激酶抑制剂的内皮癌细胞的生长抑制数据，在反应生物公司(Maven，PA)中使用cell效价-GLO_2.0发光细胞活力测定法(Promega Corporation，Madison，WI)对化合物122进行abi-16，HepG2，MIAPaCa-2，SW480，DU 145，HEK-293，PANC-1和THLE-3细胞系进行测试所有细胞系均购自American Type culture Collection(ATCC，massas，VA)，并在10％胎牛血清，100μg mL青霉素和100μg/mL链霉素在37℃在5％CO 2和95％空气存在下保持在推荐培养基中。为了开始生长抑制研究，将化合物122用10-剂量稀释在DMSO溶液中，在开始于50mM的源极板中稀释3倍稀释液在10mM或1 mM 50nL的化合物122或25nL星孢菌素的源极板中用10-剂量和3倍稀释液在DMSO溶液中稀释所述参考化合物staurosporine。

从所述源极板到所述384孔细胞培养板的每一个孔通过声学传递(非接触点胶，回波550，labview)从所述源极板延伸到所述384孔细胞培养板的每个孔。以重复的方式向细胞培养板的每个孔中加入25μl含有2，000个相应细胞的培养基。将细胞培养板中的细胞与化合物在37℃下孵育72小时，在5％CO₂和95％空气的发光气氛中.72小时孵育期后，向各孔中加入25μl细胞滴度Glo 2.0试剂将内容物在轨道振荡器上混合2分钟并在室温下孵育15分钟以稳定发光信号。通过Envision 2104多标签读取器(PerkinElmer，Santa Clara，CA)记录发光。基于每个培养井中存在的ATP的定量确定培养物中活细胞的数目。绘制IC₅₀曲线，并使用基于s形剂量-响应方程的GraphPad Prism 4程序计算IC₅₀值。

图4示出了针对log 10标度(x轴)中的相应化合物浓度(信号；y轴)测量的ATP的量相对于相应化合物浓度(x轴)的曲线图，其用于计算化合物122在di-16和MIA PaCa-2中的IC₅₀值。表5列出了化合物122在被测细胞系中的IC₅₀值。

表5化合物122的IC₅₀值

示例40

通过在动物模型中施用本文公开的PIM抑制剂化合物治疗胰腺癌。

使用动物模型来检查PIM抑制剂改善胰腺癌生长的能力。本发明的PIM抑制剂应用于小鼠中，其中已经通过利用细胞转移到小鼠的腹膜内空间中产生的异种移植物或通过生产人-小鼠胰腺肿瘤异种移植物来诱导胰腺肿瘤。

小鼠.12个雌性BALB c小鼠购自Jackson Laboratory(Bar Harbor，ME，USA)。根据用于实验室动物的护理和使用的指南来维护动物。所有研究方案都由机构动物护理和使用委员会批准。

制备化合物：化合物129，用于在含有0.5％甲基纤维素/0.025％Tween 20(Sigma-Aldrich，St Louis，MO)的PBS车辆(磷酸盐缓冲盐水：thermorfer Scientific Inc，Waltham，MA)中的体内腹膜内施用。

胰腺癌异种移植小鼠

将Mia-PaCa-2人胰腺癌细胞悬浮在Hank平衡盐溶液(HBSS)(2×10⁷细胞/mL)中，将悬浮液(100μl)皮下注射到12只女性的背部BALB c小鼠。在Mia-Paca-2细胞注射后，将小鼠保持15天，然后随机分成两组8个治疗和4个对照小鼠。建立裸鼠异种移植模型后，每隔3天用微米卡尺测量肿瘤尺寸。pim抑制剂129(50mgkg)腹膜内给予这组8只小鼠，而这组4只小鼠每天只接受车辆(qd))持续5个连续天，接着没有注射2天，然后重复循环三次。每天称重小鼠，从Mia-Paca-2细胞注射的日期开始(第0天)。在用Mia-Paca-2细胞皮下接种后43天，通过二氧化碳窒息对小鼠进行安乐死，并在死亡后立即切除所有肿瘤，称重和测量，然后在液氮中快速冷冻。肿瘤体积(TV)由下式计算：TV＝0.5ab²，其中a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度，本发明化合物相对于对照肿瘤的肿瘤大小从0％-88％降低，小鼠体重保持在第0天的10％以内。

异种移植样品中凋亡细胞的免疫荧光分析

对安装在载玻片上的每个冷冻肿瘤获得6个系列(5μm厚)，然后将其固定在1％多聚甲醛中。使用原位BrdU-Red TUNEL测定试剂盒根据制造商的说明书(Abeam，Cambridge，UK)对4个部分进行基于末端脱氧核苷酸转移酶介导的用于凋亡检测的nck端标记的TUNEL测定在没有末端脱氧核苷酸转移酶的情况下加工的两个组织切片作为阴性对照。使用在576次收集的发射的490nm带通滤波器激发荧光染料缀合的抗BrdU-Red抗体。

使用Olympus Eclipse TE 2000-S反相显微镜(Olympus，Melville，NY，USA)上的40x物镜(Zeiss Plan-Neofluar)进行荧光显微术。使用图像-Pro Plus软件版本4.01分析图像。每只动物中的细胞凋亡-阳性细胞数在10个随机选择的场中，在400x放大率下被检查者根据实验程序盲测。分析相同肿瘤的四个部分和每组四个肿瘤参照并行H&a；E部分手动跟踪肿瘤，以从分析中排除边缘和坏死和非恶性组织。通常由离散核片段的簇组成的凋亡核可以使用图像分析标准容易地定义，以便抑制伪影。根据TUNEL阳性像素面积除以总活肿瘤面积的总和来计算表达为比例面积的每个肿瘤中的凋亡程度。

统计分析。针对所测量的所有参数计算平均值和标准偏差。使用配对的学生t检验比较每组之间的小鼠体重和肿瘤重量和体积，并将其报告为平均值±标准偏差。利用SPSS10软件(IBM，Inc，Chicago，IL，USA)进行控制和治疗组之间的比较，并通过单向ANOVA评估统计意义。p值&lt；0.05被认为表明统计学上显著的结果。

制剂实施例

实施例41

肠胃外制剂

为了制备适于通过注射给药的本发明化合物的肠胃外药物组合物，所述化合物可以配制为混合物，并掺入剂量单位形式。作为示例，本发明化合物的典型5mgmL肠胃外制剂除了化合物本身(0.5％)，丙二醇(40％)，乙醇(10％)，苯甲酸钠/苯甲酸(5％)，苯甲醇(1.5％)和水(43％)之外，还按比例含有。

示例42

口服微乳制剂

为了制备适用于口服给药的本发明化合物的药物组合物，所述化合物可以配制为混合物，并掺入剂量单位形式。作为示例，本发明化合物的典型的25mg口服(胶囊)制剂除了化合物本身之外还含有聚氧乙烯40氢化蓖麻油，明胶，聚乙二醇400，甘油85％，脱水醇，玉米油单-二甘油三酯，二氧化钛，维生素E，氧化铁黄，氧化铁红，胭脂红，羟丙甲纤维素2910，丙二醇，纯净水。实施例43。

口服固体剂型

为了制备适用于口服固体剂型(片剂)给药的本发明化合物的药物组合物，所述化合物可以配制为混合物，并掺入剂量单位形式。通过举例的方式，本发明化合物的典型的50mg口服固体剂型可通过造粒和压实成固体混合物来制备，所述固体混合物除了所述化合物本身之外还含有赋形剂，包括改性淀粉，聚乙二醇400，柠檬酸硬脂酯，聚乙烯吡咯烷酮，卵磷脂，甘露醇，山梨醇，鼠尾草提取物，磷酸钙和明胶的粘合剂和填料。

示例44

舌下(硬锭剂)组合物

为了制备用于口腔递送的药物组合物，例如硬锭剂，将100mg本发明化合物与420mg糖粉混合，然后用1.6mL轻质玉米糖浆，2.4mL蒸馏水和0.42mL薄荷提取物混合。轻轻混合所述混合物并倒入模具中以形成适合于颊给药的锭剂。

示例45

快速崩解的舌下片剂。

通过将48.5重量％的本发明化合物的化合物与44.5重量％的微晶纤维素(KG-802)，5重量％的低取代羟丙基纤维素(50克)和2重量％的硬脂酸镁混合而制备快速崩解的舌下片剂该制剂可以通过将式(I)或(IV)-(VI)的化合物的量与微晶纤维素(MCC)的总量和低取代羟丙基纤维素(L-HPC)的数量的三分之二混合来制备。

Bioengineering AG，Switzerland)4.5分钟。在混合结束前30秒加入所有硬脂酸镁(MS)和剩余的1/3数量的L-HPC。通过直接压缩(AAPS Pharma SciTech)制备片剂.2006；7(2)：E 41)。所述压缩片剂的总重量维持在150mg。

Claims (26)

1.式(I)或(II)的化合物，

式(I)

式(II)

或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中：

每个A，B，C和D相同或不同且独立地选自H，卤素，-N₃，-CN，-NO₂，-OH，-OCF₃.-OCH₂F，-OCF₂H，-CF₃，-SR¹，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-OS(＝O)₂F，-OS(＝O)₂(OR²)，-S(＝O)₂(OR²)，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-OC(＝O)R²，-CO₂R³，-OR³，-N(R³)₂，-NR³C(＝O)R²，-NR³C(＝O)OR³，-NR³C(＝O)N(R³)₂，CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂，-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代或未取代的烷基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基或选自例如卤代烷基，烯基，芳基烷基，烷氧基烷基，羟烷基，单烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，酰基氨基烷基，酰氧基烷基，氰基烷基，脒基烷基，羧基烷基，烷氧基羰基烷基，氨基羰基烷基，芳基，烷基芳基，氨基烷基，杂芳基，羰基烷基，氨基硫代烷基，硝基胍基烷基，保护基，糖基糖，氨基糖或烷基糖残基；

每个A’，B’，C和D’相同或不同，并且独立地选自H，卤素，-N₃，-CN，-NO₂，-OH，-OCF₃.-OCH₂F，-OCF₂H，-CF₃，-SR¹，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-OS(＝O)₂F，-OS(＝O)₂(OR²)，-S(＝O)₂(OR²)，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-OC(＝O)R²，-CO₂R³，-N(R³)₂，-OR³，-NR³C(＝O)R²，-NR³C(＝O)OR³，-NR³C(＝O)N(R³)₂，CH₂NH₂，-CH₂N(R³)₂，-CH₂SR¹，-C(＝O)NH₂)-C(＝O)N(R³)₂，-C(＝O)R³，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或选自例如卤代烷基，烯基，芳基烷基，烷氧基烷基的任选取代基，羟烷基，单烷基芳基烷基，二烷基氨基烷基，酰氨基烷基，酰氧基烷基，氰基烷基，脒基烷基，羧基烷基，烷氧基羰基烷基，氨基羰基烷基，芳基，烷基芳基，氨基烷基，杂芳基，羰基烷基，氨基硫代烷基，硝基胍基烷基，保护基，糖基，芳基糖或烷基糖残基；

每个E，F，G和M独立地是C或N；

每个E′，F′，G′和M′独立地为C或N；

Y和Z各自独立地为H，-OH，-OR³，N(R³)₂，卤素，-N₃，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或Y和Z可组合在一起以表示O，N(NR³)，N(OH)或S对应于C＝O，C＝NNR³，C＝NOH，or C＝S基团；

R¹为H或直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；

R²为直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；

每个R³独立地为H，直链或支链取代或未取代的烷基。取代或未取代的烯基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的环烯基，取代或未取代的杂环烷基取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，或取代或未取代的酰基(-C(＝O)R¹)，或两个R³与它们连接的原子一起形成取代或未取代的杂环；

每个Q和R独立地是H，-S(＝O)R²，-S(＝O)₂R²，-NR³S(＝O)₂R²，-S(＝O)₂N(R³)₂，-C(＝O)R²，-CO₂R³，-N(R³)₂，-C(O)N(R³)₂，直链或支链取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基，天然或非天然的取代或未取代的糖，天然或非天然的取代或未取代的糖基糖基，

天然或非天然的取代或未取代的糖基烷基糖基，天然或非天然的取代或未取代的糖，氨基糖或烷基糖，其中Q和R连接，取代或未取代的烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的环烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的环烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的杂环烷基，其中Q和R连接，取代或未取代的芳基，其中Q和R连接，或取代或未取代的杂芳基，其中Q和R连接形成环；

每个U，V，U’和V独立地为H，OH，OR³，N(R³)₂，卤素，-N₃，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基，或取代或未取代的杂芳基，或U和V和/或U’和V可组合在一起以表示O，N(NR³)，N(OH)或对应于C＝O，C＝NNR³，C＝NOH，or C＝S的S；

每个X为H，-OH，-OR³，N(R³)₂，卤素，-N₃，-NO₂，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的杂烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基。

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Y和Z为H。

3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Y和Z一起形成碳氧双键(C＝0)。

4.权利要求1-3之一的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中X是-CH₂N(CH₃)₂和U，V，U’，并且V是H，并且其中a，B，C，D，a’，B’，C’，D’中的至少一个不是氢或至少一个E，F，G，M，E’，G’，F’，M不是碳。

5.权利要求1-4之一的化合物，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Q和/或R是含有至少一个杂原子的烷基或芳烷基链。

6.权利要求1-4之一的化合物，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Q和/或R是2-6个碳的支化或直链，取代或未取代的碳链，其在末端碳连接到含有一个或多个N，S和/或O的杂环。

7.权利要求1-4之一的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Q和/或R是2-6个碳的支化或直链，取代或未取代的碳链，其在末端碳连接到含有一个或多个N的杂环的N。

8.如权利要求1-4之一所述的化合物，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中Q和/或R是2-6个碳的支化或直链，取代或未取代的碳链，其在末端碳连接到哌嗪基或吡咯烷基，哌嗪基或吗啉基或咪唑基或吡唑基。

9.选自图1a-1S的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或N-氧化物，前药或同位素变体。

10.包含权利要求1-9之一的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药，立体异构体，对映异构体，对映异构体混合物，非对映异构体混合物，同位素变体及其代谢物的药物组合物与药学上可接受的赋形剂，载体或粘合剂组合。

11.权利要求1-10之一的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中所述化合物抑制丝氨酸/苏氨酸激酶PIM1，PIM2和/或PIM3的催化活性。

12.权利要求1-11之一的化合物，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中所述化合物选择性地抑制一种或多种PIM激酶的催化活性。

13.权利要求1-12之一的化合物，或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体，其中所述化合物选择性地抑制PIM3激酶的催化活性。

14.本发明涉及抑制或部分抑制PIM激酶活性的方法，包括使PIM激酶与如权利要求1-13之一或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或N-氧化物，前药或同位素变体的化合物接触。

15.根据权利要求1-13之一或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或N-氧化物，前药或同位素变体，选择性抑制一种或多种PIM激酶活性的方法，所述方法包括使所述PIM激酶与化合物接触。

16.如权利要求14-15之一所述的方法，其中所述PIM激酶与所述化合物在体外接触。

17.如权利要求14-15之一所述的方法，其中所述PIM激酶与所述化合物在体内接触。

18.如权利要求14-17之一所述的方法，其中所述接触引起PIM激酶的基本完全抑制。

19.如权利要求14-17之一所述的方法，其中所述接触引起PIM激酶的部分抑制。

20.如权利要求14-19之一所述的方法，其中接触调节癌细胞生长和存活。

21.根据权利要求1-13之一的化合物或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物或N-氧化物，前药或同位素变体抑制或部分抑制PIM激酶活性的方法，相比于PIM1和PIM2选择性抑制PIM3，因子为1.5，10，100，1000或更多，包括在体外或体内与所述三个激酶接触，单独或一起接触所述三个激酶。

22.一种合成式(I)化合物的方法，其中色氨酸或色氨酸衍生物在体外与无细胞提取物和/或包含VioA(SEQ ID NO：1)和Vio B(SEQ ID NO：2)的酶组合在体外接触，所述酶组合包括胱氨酸途径的StaP(SEQ ID NO：5)和StaC(SEQ ID NO：6)，或rebeck途径的RebP(SEQ IDNO：4)，RebC(SEQ ID NO：3)，或其这些酶的同源物各自表示25％序列同一性或相对于个体SEQ ID NOs：1-6更高，并且其中式(I)的Y和Z均为H或一起形成碳氧双键(C＝O)，并且其中Q和R均为H。

23.一种合成式(ii)化合物的方法，其中色氨酸或色氨酸衍生物在体外与无细胞提取物和/或包含VioA(SEQ ID NO：1)和Vio B(SEQ ID NO：2)的酶组合接触，所述酶组合包括相对于个体SEQ ID NO：1，2和7的25％序列同一性或更高的序列同一性或更高，并且由此形成的式(iiia)的化合物随后在化学上反应以引入式(IV)的大环烷基，得到式(II)的化合物。

24.一种治疗患有恶性疾病的患者或个体的方法，包括向需要其的个体施用治疗有效量的化合物权利要求1-13之一或其药学上可接受的盐，溶剂化物，水合物，N-氧化物，前药或同位素变体。

25.权利要求24的方法，其中所述恶性疾病是内皮器官的癌症，包括但不限于盲肠，胰腺，肝，胃，肠，结肠，前列腺，甲状腺，食道，肺和胆囊。

26.权利要求25的方法，其中所述癌症是胰腺癌，肝癌，胃癌，结直肠癌，前列腺癌，食管腺癌，鳞状细胞癌，鼻咽癌，胃癌腺癌，胰腺导管腺癌，肝细胞癌，胆囊腺癌，前列腺腺癌，结肠直肠腺癌，胃肠基质肿瘤(GIST)或胃肠癌肿瘤。

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