CN102018996B - 一种表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法，制备步骤为：1)具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备，采用合成或水解方式；2)载药聚酯类高分子聚合物在支架表面的涂覆；3)采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面。本发明的一种表面固定有抗体的药物血管支架，以具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物作为支架载药涂层，获得表面羧基化的药物支架，使支架表面兼具生物相容性和生物活性，其羧基功能化表面为下一步负载有效剂量的抗体提供了丰富的结合位点。该支架同时具有药物携功能和内皮细胞捕获功能，从而使该支架具有优良的治疗再狭窄和促进内皮细胞修复的功能。

Description

一种表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法

技术领域

本发明涉及一种血管支架，尤其涉及一种表面固定有抗体的药物血管支架及其制备方法。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是危害人类健康的重大疾病之一，冠状动脉介入术(PCI)已成为冠心病临床治疗中一种有确切疗效的重要手段。但是在冠状动脉支架置入治疗中存在术后血管再狭窄的问题，在全球所有的支架放置病例中，约有15-30％发生再狭窄，严重限制了治疗的远期效果，迄今仍是临床亟待解决的难题。近年来，药物洗脱支架的出现成为PCI发展史上新的里程碑。药物洗脱支架的广泛应用大大减少了支架内再狭窄的发生，然而在强烈抑制血管平滑肌细胞过度增殖的同时，也不可避免的抑制了支架骨架处功能内皮层的生长，从而干扰了血管损伤处自然愈合的进程。目前普遍认为内皮损伤是再狭窄的始动因素，它激活了再狭窄病理过程的“瀑布反应”。所以在抑制平滑肌细胞增殖的同时，更重要的是加速内皮的修复。随着内皮祖细胞(EPCs)研究进展，通过动员外周血中的内皮祖细胞到置入支架血管局部并修复损伤内皮成为抗再狭窄的新策略之一。内皮祖细胞是一种起源于骨髓的原始细胞，内皮祖细胞能募集、归巢到血管损伤区并分化为内皮细胞。在该理论的基础上，Jiro Aoki等设计了具有内皮祖细胞捕获功能的支架，包埋在支架上的CD₃₄抗体可以捕获循环血液中表面CD₃₄ ⁺的内皮祖细胞，并使其分化为成熟的内皮细胞而加速局部的内皮化，防止血栓的发生，最终达到抑制再狭窄的目的。理论上讲，如果我们能够设计和制造出同时具有内皮祖细胞捕获功能和药物携带功能的支架，那么便可以一方面抑制平滑肌细胞的增殖，另一方面促进内皮的修复进程，这样既保障了药物洗脱支架减少再狭窄，又避免了内皮修复延迟引起的支架内血栓，将从根本上改变目前再狭窄的治疗现状。但是由于抗体结构的特殊性，如何实现抗体在支架材料表面的有效固定(即如何能负载更多的抗体靶分子，同时维持其结构的完整性使负载后的抗体靶分子保持较好的活性)是首先需要解决的问题。

申请号为200710111272.9，公开号为CN101327343A，其公开日为2008年12月24日的中国发明专利申请公开了一种复合药物血管支架及其制备方法，该血管支架包括支架本体和活性药物，其支架本体为带孔洞的具有良好生物相容性的医用材料，选用不锈钢、钴基合金、钛合金、镍钛合金或聚乳酸生物高分子材料；活性药物包括特异捕获内皮祖细胞抗体药物、抗平滑肌细胞增殖药物，所述的带有孔洞的支架本体内表面固定有特异捕获内皮祖细胞抗体药物，外表面涂覆有抗平滑肌细胞增殖药物。其制备方法包括①支架本体表面的预处理、②制备孔洞、③支架本体表面的后处理、④药物的配制、⑤外表面涂覆、⑥内表面固定、⑦低温干燥工艺步骤。能够选择性的吸附内皮祖细胞，促进内皮的修复；并能够有效抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移，持续有效降低新生内膜的形成，有效防治支架内再狭窄，避免迟发性血栓的风险。该血管支架的不足之处是：该支架表面无丰富的抗体结合活性位点，其内皮祖细胞捕获抗体的结合仅限于简单的物理吸附方式，同本发明的化学偶联方式相比抗体结合量少且结合稳定性差。

申请号为200810064508.2，公开号为CN101279111A，公开日为2008年10月8日的中国发明专利申请公开了一种聚酯类药物洗脱性涂层血管支架的制备方法，包括血管支架的清洗；涂层溶液的配制；药物洗脱性涂层的喷涂；药物洗脱性涂层的干燥与消毒等过程。本发明选择聚酯类聚合物为聚合物药物载体，该类聚酯类聚合物在体内经过3-6个月最终被降解为二氧化碳和水，并被人所代谢和排出体外。涂覆有该涂层的支架在保持了降低再狭窄发生的同时，又有效地降低了支架术后亚急性血栓形成和血管瘤的发生，保证了支架术后远期临床的安全性和有效性。在支架的外表面涂携带抗增生药物的聚合物载体，在血管和组织一侧发挥其减少内膜增生的作用。同时，在面向血管腔侧则携带较少药物，起到了促进内皮的愈合的作用。该血管支架的不足之处是：该支架所载药物仅限于抑制平滑肌细胞增殖的药物，不能有选择性的吸附内皮祖细胞促进内皮修复，无法避免由于内皮修复延迟引起的支架内血栓的风险。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种表面固定有抗体的药物血管支架及其制备方法。本发明药物血管支架可以解决目前血管支架在治疗再狭窄的过程中所带来的内皮修复延迟引起的支架内血栓这一心血管治疗领域的难题。

为了解决上述技术问题，本发明一种表面固定有抗体的药物血管支架予以实现的一个技术方案是：支架包括支架本体，所述支架本体上涂覆有载药聚酯类高分子聚合物，在涂覆有载药聚酯类高分子聚合物涂层的支架本体表面固定有抗体，制备所述药物血管支架的步骤包括：具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备；载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备：

所述聚酯类高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

按质量比为1∶5-40的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚酯类高分子聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶5-40∶1-8，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2-4次，在真空度为5-80Pa封管，在100-150℃，反应8-48小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物；

步骤A-2、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1％-30％的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100∶1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

本发明一种表面固定有抗体的药物血管支架予以实现的另一个技术方案是：支架包括支架本体，所述支架本体上涂覆有载药高分子聚合物，在涂覆有载药高分子聚合物涂层的支架表面固定有抗体，制备所述药物血管支架的步骤包括：载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中：

步骤B-1、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

所述聚酯类高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1％-30％的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100∶1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤B-2、支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化

将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.001-10g/L的氢氧化钠溶液中浸泡0.5-24小时后，用蒸馏水清洗2-5次后，将支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时；

步骤B-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明药物血管支架是利用具有羧基功能界面的高分子聚合物药物涂层作为支架界面，并与具有内皮祖细胞捕获功能的抗体共价结合，构建同时具有药物携带功能和内皮祖细胞捕获功能的支架，本发明药物血管支架可以解决目前血管支架在治疗再狭窄的过程中所带来的内皮修复延迟引起的支架内血栓这一心血管治疗领域的难题。

本发明的一种表面固定有抗体的药物血管支架，以具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物作为支架载药涂层，获得表面羧基化的药物支架，使支架表面兼具生物相容性和生物活性，其羧基功能化表面为下一步负载有效剂量的抗体提供了丰富的结合位点。该支架同时具有药物携功能和内皮细胞捕获功能，从而使该支架具有优良的治疗再狭窄和促进内皮细胞修复的功能。

附图说明

图1是本发明表面固定有抗体的药物血管支架的一种制备过程的简图；

图2是本发明表面固定有抗体的药物血管支架的另一种制备过程的简图；

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细地描述。

本发明表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法，其中，支架包括支架本体，所述支架本体上涂覆有载药聚酯类高分子聚合物，在涂覆有载药聚酯类高分子聚合物涂层的支架表面固定有抗体，如图1和图2所示：所述药物血管支架的制备过程可以是其中的一种方法。

按照图1所示的一种制备过程是：

具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备；载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中，具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备采用的合成方式。

上述各步骤具体描述如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备：

所述聚酯类高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

按质量比为1∶5-40的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚酯类高分子聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶5-40∶1-8，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2-4次，在真空度为5-80Pa封管，在100-150℃，反应8-48小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物；

步骤A-2、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1％-30％的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100∶1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

在上述制备过程，具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备和采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面是本技术方案的特点。

按照图2所示的一种制备过程是：

载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中：通过支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化(即水解方式)制备具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物。

上述各步骤具体描述如下：

步骤B-1、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

所述聚酯类高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1％-30％的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100∶1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤B-2、支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化

将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.001-10g/L的氢氧化钠溶液中浸泡0.5-24小时后，用蒸馏水清洗2-5次后，将支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时；

步骤B-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

在上述制备过程，支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化和采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面是本技术方案的特点。

本发明中的所述抗平滑肌细胞增殖药物包括紫杉醇及其衍生物、雷帕霉素、地塞米松、长春新碱及其衍生物及他汀类药物中的一种。

本发明中的所述内皮祖细胞捕获抗体包括：CD34抗体、CD133抗体、CD31抗体和CD45抗体及血管内皮生长因子中的一种。

在制备过程中，至于其中支架本体的材料、聚酯类高分子聚合物、抗平滑肌细胞增殖药物和内皮祖细胞捕获抗体的选取不受限制。可以有多种不同的具体的聚酯类高分子聚合物、抗平滑肌细胞增殖药物和内皮祖细胞捕获抗体的选取方案。下面是几个示意性的实施例，本发明并不局限于这些具体实施方式。

实施例1：

本实施例1中，支架本体的材料为：不锈钢材料；所选取的聚酯类高分子聚合物为：聚丙交酯乙交酯，所选取的抗平滑肌细胞增殖药物为紫杉醇，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD133抗体；一种支架本体表面固定有CD133抗体及紫杉醇的药物血管支架的制备过程如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚丙交酯乙交酯的制备：

按质量比为1∶15的比例，将所述聚丙交酯乙交酯溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚丙交酯乙交酯与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶30∶5，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换3次，在真空度为60Pa封管，在120℃，反应24小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚丙交酯乙交酯；

步骤A-2、载药聚丙交酯乙交酯在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚丙交酯乙交酯：配制混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液：按照重量百分比为15％的比例，将所述聚丙交酯乙交酯溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述紫杉醇，使所述聚丙交酯乙交酯与所述紫杉醇的质量比为100∶20；

将上述配制的混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚丙交酯乙交酯涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在60℃干燥48小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将CD133抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应2小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5.5的醋酸盐缓冲液中；

将CD133抗体溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中制得CD133抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.2g/L的CD133抗体溶液中，反应18小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD133抗体及紫杉醇的药物血管支架。

实施例2：

本实施例2中，支架本体的材料为：不锈钢材料；所选取的聚酯类高分子聚合物为：聚丙交酯，所选取的抗平滑肌细胞增殖药物为雷帕霉素，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD34抗体；一种支架本体表面固定有CD34抗体及雷帕霉素的药物血管支架的制备过程如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚丙交酯的制备：

按质量比为1∶40的比例，将所述聚丙交酯溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚丙交酯与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶40∶8，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换4次，在真空度为80Pa封管，在100℃，反应48小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚丙交酯；

步骤A-2、载药聚丙交酯在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚丙交酯：配制混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液：按照重量百分比为30％的比例，将所述聚丙交酯溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述雷帕霉素，使所述聚丙交酯与所述雷帕霉素的质量比为100∶40；

将上述配制的混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚丙交酯涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20℃干燥72小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将CD34抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH6.5的醋酸盐缓冲液中；

将CD34抗体溶于pH 8的磷酸盐缓冲液中制得CD34抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入1g/L的CD34抗体溶液中，反应6小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD34抗体及雷帕霉素的药物血管支架。

实施例3：

本实施例3中，支架本体的材料为：不锈钢材料；所选取的聚酯类高分子聚合物为：聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物，所选取的抗平滑肌细胞增殖药物为地塞米松，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD31抗体；一种支架本体表面固定有CD31抗体及地塞米松的药物血管支架的制备过程如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物的制备：

按质量比为1∶5-40的比例，将所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶5∶1，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2次，在真空度为5Pa封管，在150℃，反应8小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物；

步骤A-2、载药聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物：配制混有地塞米松的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶液：按照重量百分比为1％的比例，将所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述地塞米松，使所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物与地塞米松的质量比为100∶1；

将上述配制的混有地塞米松的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在80℃干燥0.5小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将C31抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 4.5的醋酸盐缓冲液中；

将CD31抗体溶于pH 5的磷酸盐缓冲液中制得CD31抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应36小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD31抗体及地塞米松的药物血管支架。

实施例4：

本实施例4中，支架本体的材料为：不锈钢材料；所选取的聚酯类高分子聚合物为：聚丙交酯乙交酯，所选取的抗平滑肌细胞增殖药物为长春新碱，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD45抗体；一种支架本体表面固定有CD45抗体及长春新碱的药物血管支架的制备过程如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚丙交酯乙交酯的制备：

按质量比为1∶10的比例，将所述聚丙交酯乙交酯溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶20∶6，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2次，在真空度为40Pa封管，在110℃，反应36小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚丙交酯乙交酯；

步骤A-2、载药聚丙交酯乙交酯在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚丙交酯乙交酯：配制混有长春新碱的聚丙交酯乙交酯溶液：按照重量百分比为10％的比例，将所述聚丙交酯乙交酯溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述长春新碱，使所述聚丙交酯乙交酯与长春新碱的质量比为100∶10；

将上述配制的混有长春新碱的聚丙交酯乙交酯溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚丙交酯乙交酯涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在30℃干燥56小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将C45抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应1小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5的醋酸盐缓冲液中；

将CD45抗体溶于pH 6的磷酸盐缓冲液中制得CD45抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.05g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应24小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD45抗体及长春新碱的药物血管支架。

实施例5：

本实施例5中，支架本体的材料为：不锈钢材料；所选取的聚酯类高分子聚合物为：聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物，所选取的抗平滑肌细胞增殖药物为洛伐他汀，选取的内皮祖细胞捕获抗体为血管内皮细胞生长因子；一种支架本体表面固定有血管内皮细胞生长因子及洛伐他汀的药物血管支架的制备过程如下：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物的制备：

按质量比为1∶20的比例，将所述聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100∶35∶6，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换4次，在真空度为70Pa封管，在130℃，反应12小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物；

步骤A-2、载药聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚乙二醇聚丙交酯嵌段乙交酯聚合物：配制混有洛伐他汀的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶液：按照重量百分比为20％的比例，将所述聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述洛伐他汀，使所述聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物与洛伐他汀的质量比为100∶30；

将上述配制的混有洛伐他汀的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在65℃干燥18小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将血管内皮细胞生长因子固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应4小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 6的醋酸盐缓冲液中；

将血管内皮细胞生长因子溶于pH 7.5的磷酸盐缓冲液中制得血管内皮细胞生长因子溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.5g/L的血管内皮细胞生长因子溶液中，反应12小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有血管内皮细胞生长因子及洛伐他汀的药物血管支架。

实施例6：

本实施例6中选取的聚酯类高分子聚合物为聚丙交酯，选取的抗平滑肌细胞增殖药物为雷帕霉素，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD31抗体，一种支架本体表面固定有CD31抗体及雷帕霉素的药物血管支架的制备过程如下：

步骤B-1、载药聚丙交酯在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚丙交酯：配制混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液：按照重量百分比为20％的比例，将所述聚丙交酯溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述雷帕霉素，使所述聚丙交酯与所述雷帕霉素的质量比为100∶20；

将上述配制的混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚丙交酯涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在60℃干燥48小时固化；

步骤B-2、支架本体上载药聚丙交酯涂层表面的羧基化

将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.4g/L的氢氧化钠溶液中浸泡8小时后，用蒸馏水清洗3次后，将支架本体放入真空干燥箱中，在60℃干燥48小时；

步骤B-3、采用化学偶联方式将CD31抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应2小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5.5的醋酸盐缓冲液中；

将CD31抗体溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中制得CD31抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.2g/L的CD31抗体溶液中，反应18小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD31抗体及雷帕霉素的药物血管支架。

实施例7：

本实施例7中选取的聚酯类高分子聚合物为聚丙交酯乙交酯，选取的抗平滑肌细胞增殖药物为紫杉醇，选取的内皮祖细胞捕获抗体为CD34抗体，一种支架本体表面固定有CD34抗体及紫杉醇的药物血管支架的制备过程如下：

步骤B-1、载药聚丙交酯乙交酯在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚丙交酯乙交酯：配制混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液：按照重量百分比为30％的比例，将所述聚丙交酯乙交酯溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述紫杉醇，使所述聚丙交酯乙交酯与所述紫杉醇的质量比为100∶40；

将上述配制的混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药聚丙交酯乙交酯涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在80℃干燥0.5小时固化；

步骤B-2、支架本体上载药聚丙交酯乙交酯涂层表面的羧基化

将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入10g/L的氢氧化钠溶液中浸泡0.5小时后，用蒸馏水清洗5次后，将支架本体放入真空干燥箱中，在80℃干燥0.5小时；

步骤B-3、采用化学偶联方式将CD34抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 6.5的醋酸盐缓冲液中；

将CD34抗体溶于pH 8的磷酸盐缓冲液中制得CD34抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入1g/L的CD34抗体溶液中，反应36小时。

至此，得到一种支架本体表面固定有CD34抗体及紫杉醇的药物血管支架。

由上述制备方法得到的每一种药物血管支架兼具抗平滑肌细胞增殖功能和内皮祖细胞捕获功能：药物携带功能界面由载药聚酯类高分子聚合物涂层构成；利用载药聚酯类高分子聚合物涂层界面的羧基官能团，可以有效的将内皮祖细胞捕获抗体偶联到支架载药涂层界面。通过在支架载药涂层上携带内皮细胞捕获功能界面，将改善传统药物洗脱支架引起的内皮细胞修复延迟。该支架可以一方面抑制平滑肌细胞的增殖，另一方面促进内皮的修复进程，这样既保障了药物洗脱支架减少再狭窄，又避免了内皮修复延迟引起的支架内血栓，将从根本上改变目前再狭窄的治疗现状。

尽管上面结合图对本发明进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨的情况下，还可以作出很多变形，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (10)

1.一种表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法，其中，支架包括支架本体，所述支架本体上涂覆有载药聚酯类高分子聚合物，在涂覆有载药聚酯类高分子聚合物涂层的支架本体表面固定有抗体，其特征在于：

制备所述药物血管支架的步骤包括：具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备；载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中：

步骤A-1、具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物的制备：

所述聚酯类高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

按质量比为1：5-40的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚酯类高分子聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100：5-40：1-8，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2-4次，在真空度为5-80 Pa封管，在100-150℃，反应8-48小时，冷至室温；将反应产物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一种具有羧基官能团的聚酯类高分子聚合物；

步骤A-2、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1%-30%的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤A-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

2.根据权利要求1所述药物血管支架的制备方法，其中，所述抗平滑肌细胞增殖药物包括紫杉醇、雷帕霉素、地塞米松、长春新碱及他汀类药物中的一种。

3.根据权利要求1所述药物血管支架的制备方法，其中，所述内皮祖细胞捕获抗体包括：CD34抗体、CD133抗体、CD31抗体、CD45抗体及血管内皮生长因子中的一种。

4.根据权利要求1所述药物血管支架的制备方法，其中：

步骤A-1中：按质量比为1：10-20的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚酯类高分子聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100：20-35：3-6，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换2-4次，在真空度为40-70 Pa封管，在110-130℃，反应12-36小时，冷至室温；

步骤A-2中：所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：10-30；

带有载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在30-65℃干燥18-56小时固化；

步骤A-3的支架本体表面的活化过程中：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应1-4小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5-6的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 6-7.5的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.05-0.5g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应12-24小时。

5.根据权利要求1或4所述药物血管支架的制备方法，其中：

步骤A-1中：按质量比为1：15的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于装有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入马来酸酐和过氧化二苯甲酰，所述聚酯类高分子聚合物与马来酸酐及过氧化二苯甲酰的质量比为100：30：5，用真空泵抽去溶剂，抽真空氮气置换3次，在真空度为60 Pa封管，在120℃，反应24小时，冷至室温；

步骤A-2中：所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：20；

带有载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在60℃干燥48小时固化；

步骤A-3的支架本体表面的活化过程中：将经过上述步骤A-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应2小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.2g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应18小时。

6.一种表面固定有抗体的药物血管支架的制备方法，其中，支架包括支架本体，所述支架本体上涂覆有载药高分子聚合物，在涂覆有载药高分子聚合物涂层的支架表面固定有抗体，其特征在于：

制备所述药物血管支架的步骤包括：载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆；支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化；采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面；其中：

步骤B-1、载药聚酯类高分子聚合物在支架本体表面的涂覆：

所述聚酯类高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一种及由以上聚合物通过嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；

制备载药聚酯类高分子聚合物：配制混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液：按照重量百分比为1%-30%的比例，将所述聚酯类高分子聚合物溶于有机溶剂中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌细胞增殖药物，使所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：1-40；

将上述配制的混有抗平滑肌细胞增殖药物的聚酯类高分子聚合物溶液均匀的喷涂或涂覆于所述支架本体表面，再将带有上述载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时固化；

步骤B-2、支架本体上载药聚酯类高分子聚合物涂层表面的羧基化

将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.001-10g/L的氢氧化钠溶液中浸泡0.5-24小时后，用蒸馏水清洗2-5次后，将支架本体放入真空干燥箱中，在20-80℃干燥0.5-72小时；

步骤B-3、采用化学偶联方式将内皮祖细胞捕获功能抗体固定在支架本体表面：

支架本体表面的活化：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应0.5-8小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH4.5-6.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 5-8的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.001-1g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应6-36小时。

7.根据权利要求6所述药物血管支架的制备方法，其中，所述抗平滑肌细胞增殖药物包括紫杉醇、雷帕霉素、地塞米松、长春新碱及他汀类药物中的一种。

8.根据权利要求6所述药物血管支架的制备方法，其中，所述内皮祖细胞捕获抗体包括：CD34抗体、CD133抗体、CD31抗体和CD45抗体及血管内皮生长因子中的一种。

9.根据权利要求6所述药物血管支架的制备方法，其中：

步骤B-1中：所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：10-30；

带有载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在30-65℃干燥18-56小时固化；

步骤B-2中：将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.1-1g/L的氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时后，用蒸馏水清洗2-5次后，将支架本体放入真空干燥箱中，30-65℃干燥18-56小时；

步骤B-3的支架本体表面的活化过程中：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应1-4小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5-6的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 6-7.5的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.05-0.5g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应12-24小时。

10.根据权利要求6所述药物血管支架的制备方法，其中：

步骤B-1中：所述聚酯类高分子聚合物与所述抗平滑肌细胞增殖药物的质量比为100：20；

带有载药高分子聚合物涂层的支架本体放入真空干燥箱中，在60℃干燥48小时固化；

步骤B-2中：将上述步骤B-1处理过的支架本体浸入0.4g/L的氢氧化钠溶液中浸泡8小时后，用蒸馏水清洗3次后，将支架本体放入真空干燥箱中，60℃干燥48小时；

步骤B-3的支架本体表面的活化过程中：将经过上述步骤B-2处理后的支架本体放入含碳化二亚胺类交联剂的溶液中反应2小时进行表面活化，所述含碳化二亚胺类交联剂的溶液是将碳化二亚胺类交联剂溶于pH 5.5的醋酸盐缓冲液中；

将内皮祖细胞捕获抗体溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中制得内皮祖细胞捕获抗体溶液；

偶联抗体：将上述表面活化的支架本体放入0.2g/L的内皮祖细胞捕获抗体溶液中，反应18小时。

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