CN102017910A

CN102017910A - 一种节能减排的大菱鲆养殖方法

Info

Publication number: CN102017910A
Application number: CN2010102710219A
Authority: CN
Inventors: 蔡俊鹏; 何伟杰
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2010-08-31
Filing date: 2010-08-31
Publication date: 2011-04-20
Anticipated expiration: 2030-08-31
Also published as: CN102017910B

Abstract

本发明公开了一种节能减排的大菱鲆养殖方法。该方法包括养殖水源选择，池水的处理，饲料的处理，换水周期的控制，按照养殖水体生态学原理，海洋生物的生长环境要求，生物之间的相互关系及无公害养殖标准，采用生物生态学的方法控制养殖环境。关键技术是在水体中添加蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液，同时饲料也用蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液浸泡，养殖期间可达到40天换掉池水一次。本发明为生物养殖方法，绿色、安全、无污染，效果显著，能够改善水质，促进大菱鲆生长，提高免疫力，并提高成活率，有极好的发展前景。对提高经济效益和食用安全性，保障人类健康具有十分重要的意义。

Description

一种节能减排的大菱鲆养殖方法

技术领域

本发明属于海水鱼类养殖技术领域，特别涉及一种提高大菱鲆免疫力，促进大菱鲆快速生长、改善水质、节水节能、节省人力物力、绿色低碳的大菱鲆养殖方法。

背景技术

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是原产于欧洲的一种名贵鲆鲽类。它性情温驯、体形优美、肌肉丰厚白嫩，鳍条间含有丰富的胶质，近似甲鱼的裙边和海参的风味，营养价值高，是理想的保健和美容食品，深受消费者的喜爱。大菱鲆作为世界驰名养殖良种受到国际养殖界的高度重视，正在不断扩大养殖范围。

我国自1998年突破大菱鲆大批量生产性育苗技术以来，大菱鲆养殖产量成倍增加。目前国内每年的商品鱼产量已超过3000t，成为我国北方海水鱼类的主要养殖种类之一。虽然大菱鲆工厂化养殖发展迅速，但是近年来，由于养殖环境不断恶化，大菱鲆抵抗力逐渐下降，病害日趋严重，生长缓慢，这些已成为制约我国大菱鲆养殖业可持续发展的瓶颈。

“温室大棚+深井水养殖”是目前水产养殖最普遍的生产模式。这种养殖模式需要大量的水循环，配合饲料和化学药物，高投入低产出。地下井水的过度开采使用，不仅浪费资源和能源，导致水资源枯竭，还会严重影响地质概况，为地质灾害埋下隐患。大量的养殖废水排放，也造成海洋水体的严重污染。传统的抗生素和化学药物的使用，具有吸收快，疗效好的优点，但会对大菱鲆产生刺激性，会引发新的炎症。同时长期使用抗生素会使致病菌耐药菌株增加，一些常见的流行病难以彻底根治，反复发作，且大大降低了大菱鲆的抵抗力。此外，抗生素残留会影响鱼的品质，危害人的身体健康、危害生态环境、降低其商业价值，同时也造成养殖户的经济损失。全封闭循环系统，则投资大，难为普通养殖户所接受。因此，促进大菱鲆快速生长、节水节能、节省人力物力、绿色低碳的新型无公害养殖方式成为近年来国家的重大需求，引起水产界的广泛关注。

蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用。单细胞，呈弧形或逗点状，有时呈螺旋状，大小一般(0.2～0.6)×(0.8～1.2)微米，端生鞭毛，多为一根。革兰氏染色呈阴性，可裂解致病或潜在致病菌。蛭弧菌游泳体是指蛭弧菌侵入宿主细菌前的生长形式。蛭弧菌在游泳体阶段，识别并与宿主发生不可逆结合，然后侵入宿主，蛭弧菌游泳体侵入宿主细菌的过程非常快，一般几秒钟内即可完成。蛭弧菌蛭质体是蛭弧菌在特定宿主细菌的周质空间内进行生长繁殖的形式。蛭弧菌进入宿主菌细胞周质空间后，主要通过降解宿主细胞的大分子成为单体，然后摄入用于其生物大分子的合成。

蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合物兼具游泳体起效快，活力强和蛭质体制备、保存容易，杀菌作用时间更久和环境耐受力更强的优点。目前，用蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液来提高大菱鲆的免疫力，促进大菱鲆快速生长和改善水质的养殖方式在国内外均未报道。

已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenz and Hespell(1978)研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.，Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology，1978，119(3)：245-248]。在国内，林茂等(2006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH21 02对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1)：7-11]。

发明内容

为克服上述现有养殖技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种节能减排的大菱鲆养殖方法；该方法通过在饲料和水体中添加蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液实现，具体包括养殖水源选择，池水的处理，饲料的处理，换水周期的控制，其特征按照养殖生态学原理，海洋生物的生长环境要求，生物之间的相互关系及无公害养殖标准，人工创造养殖环境，减少投入成本，改善水质，提高大菱鲆免疫力，促进大菱鲆快速生长，提高经济效益。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：一种节能减排的大菱鲆养殖方法，包括以下操作步骤：

(1)取海域无污染的海水作为养殖用水；养殖用水经砂滤、沉淀后，注入养殖池；在养殖池上方盖遮光布，控制光照强度为150～200lux；

(2)在养殖池中加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液，并加大曝气量，搅拌均匀，使池水中的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体的浓度达10～10⁷pfu/mL；

(3)向养殖池中投放鱼苗；

(4)养殖期间正常曝气，控制水温在15～30℃，日投饵量为鱼体重的质量百分数3～5％，饵料在投入前，用浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液浸泡15～30min；每隔5～40天换掉池水(全池)一次，每次换水后，加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液，使池水中的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体浓度达到10～10⁷pfu/mL。

所述的蛭弧菌蛭质体为蛭弧菌存在于宿主菌内的状态；

所述的蛭弧菌游泳体为蛭弧菌游离在宿主菌外部的状态；

步骤(1)所述养殖池的池底为凹型或平底，养殖池在注入养殖用水之前清洗消毒干净；所述遮光布的遮光率为95％。

步骤(2)和(4)所述加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液的方法为：用养殖池中的池水稀释菌液，均匀泼洒全池。

步骤(2)所述加大曝气的曝气量为90～100L/h/m³；步骤(4)所述正常曝气的曝气量为70～80L/h/m³。

步骤(3)所述投放鱼苗在水温15～30℃时按照以下标准：鱼苗重量为25～50g时，投放密度为300～400尾/m²；鱼苗重量为70～100g时，投放密度为200～300尾/m²；鱼苗重量为100～200g时，投放密度为100～150尾/m²。温度升高时则减少养殖密度。

步骤(4)所述饵料为颗粒饵料；所述饵料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投饵间隔5～6小时，投饵方式为洒遍全池。

步骤(2)和(4)所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于湖北省武汉市珞珈山武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

所述蛭弧菌BDFM05进行负染后于电子显微镜下进行形态观察：BDFM05呈单细胞，椭圆形，大小为1.43×0.53um，端生鞭毛，鞭毛长度至少2um；所述蛭弧菌BDFM05以双层平板法于28℃培养三天可形成直径2～3mm的透明圆形噬菌斑；

所述蛭弧菌BDFM05是由野生型蛭弧菌BDS02经紫外诱变得到；

所述紫外诱变依据申请号“2008100220488.3”，名称为“紫外诱导突变在增强蛭弧菌裂解性能中的应用”的国家发明专利申请中的方法进行；

步骤(2)和(4)所述混合体菌液为蛭弧菌游泳体菌液和蛭弧菌蛭质体菌液按细菌个数1∶1混合而成。

所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，购于广东省微生物所菌种保藏中心，编号GIM1.172)于营养肉汤液体培养基中，26～30℃培养20h，培养液经5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基(营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.2～7.6)中，接入蛭弧菌BDFM05，28℃培养36～48h，培养液经6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清液，沉淀用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到蛭弧菌蛭质体菌液；

所述蛭弧菌游泳体菌液按照以下方法制备得到：将蛭弧菌蛭质体制备方法中的含蛭弧菌游泳体的上清经16000～18000rpm离心15～20min后，沉淀用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到蛭弧菌游泳体菌液。

所述DNB液体培养基是将营养肉汤0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物0.1g溶于1000mL蒸馏水中，调节pH值至7.2～7.6。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

(1)蛭弧菌的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。蛭弧菌游泳体侵入宿主的周质空间的同时失去鞭毛。蛭弧菌游泳体侵入宿主时，在宿主细胞壁上产生一个孔隙，当蛭弧菌侵入到宿主的周质空间后孔隙重新封闭。游泳体失去鞭毛，和宿主细胞一起被称为″蛭质体″。与游泳体相比，蛭质体不仅具有制备、保存更为方便，环境耐受力强，作用时间虽略慢但更久的特点，同时还具有潜在的灭活疫苗功能。当蛭弧菌游泳体入侵宿主细胞后，宿主细胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。蛭弧菌也进入蛭质体状态，开始分泌多种酶，消解宿主细胞的大分子为小分子物质，进而整合为自身的营养物质，使自身生长，变长。最终，长条状的蛭质体分成很多短的节段，长出鞭毛，重新成为游泳体。之后，它们分泌必需的酶类，破壁而出，再次成为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体。在此蛭质体发育期间，蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结构，使原宿主仍具有抗原作用，可刺激生物体，产生免疫应答反应。可有效预防鱼类细菌病的产生，提高养殖成活率等。

本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液兼具有游泳体和蛭质体的共同优点，效果更佳。

(2)本发明采用营养配制、蛭弧菌混合菌液预防和调节、环境调控相结合的方案，达到了提高大菱鲆的免疫力，促进大菱鲆摄食和快速生长，降低生产成本，提高经济效益的效果。

(3)本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液对大多数的水产致病或潜在致病菌有裂解效果，对水质也有一定的净化作用，用蛭弧菌混合菌液浸泡饲料，并在池水中泼洒一定浓度的蛭弧菌混合菌液，既能促进大菱鲆的生长，提高免疫力，又能净化水质，最长可达到40天不换水。从而克服了抗生素滥用带来的副作用和对养殖废水进行处理的高成本，为人类提供安全、绿色、无公害的水产品，提高养殖户的收入。

(4)本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液在大菱鲆的应用中安全性好。蛭弧菌游泳体通过裂解而消除致病或潜在致病菌的方法是生物方法，绿色、安全、无污染。蛭弧菌可侵染、裂解宿主细菌的特性使之适合作为抑止或清除生物体及其环境中致病菌的生物净化因子，且其在裂解完宿主菌后，会因饥饿而自动消亡，现有的研究表明蛭弧菌对鱼类无毒性作用，对人类无致病性。

(5)本发明所述蛭弧菌游泳体和蛭质体混合菌液在大菱鲆的应用中作用效果好，且应用广泛，可推广，用蛭弧菌来促进大菱鲆生长是一种有发展前景的养殖新方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

具体实施地点为山东省某育苗场，实施时间为8个月。试验地海域的水质条件符合中华人民共和国国家标准渔业水质标准(GB11607-89)和农业部《无公害食品海水养殖用水水质》(NY5052-2001)要求。大菱鲆的养殖池建在养殖大棚内，每个水池面积为40m²，水深1.2米，池底呈凹型，有利于排水吸污等操作，也可用平底的。水池上方盖上遮光度为95％的遮光布，避免光照过强。光照强度一般控制在150～200lux。

挑选体质健康、个体大小均匀的大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼，平均体重为28±2.5g，平均体长为11±0.55cm，采用随机区组试验设计，按照300尾/m²的养殖密度投入池中。平均分为A-D 4个试验组，B、C、D每个试验组有8个小组，分别为B1、C1、D1；B2、C2、D2；、B3、C3、D3；B4、C4、D4；B5、C5、D5；B6、C6、D6；B7、C7、D7；B8、C8、B8；B1-D8每小组再分为4组，即B1-1～B1-4…D8-1～D8-4，每组2个重复。试验的处理如下：

A组：正常流水，投喂颗粒饲料(工厂生产的养殖方式)；

B组：在水中泼洒蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，使水体中蛭弧菌混合菌液浓度分别达到10、10³、10⁵、10⁷pfu/mL，投放颗粒饲料；

C组：投喂浓度为10、10³、10⁵、10⁷pfu/mL的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液浸泡后的颗粒饲料；

D组：在水中加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，使菌体浓度分别达到10、10³、10⁵、10⁷pfu/mL，同时分别投喂浓度为10、10³、10⁵、10⁷pfu/mL的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液浸泡后的颗粒饲料；

B1、C1、D1组每5天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B2、C2、D2组每10天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B3、C3、D3组每15天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B4、C4、D4组每20天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B5、C5、D5组每25天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B6、C6、D6组每30天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B7、C7、D7组每35天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B8、C8、D8组每40天换(全池)水一次，换水后重新加菌；

B1-1、C1-1、D1-1…D8-1投放的菌液浓度为10pfu/mL；

B1-2、C1-2、D1-2…D8-2投放的菌液浓度为10³pfu/mL；

B1-3、C1-3、D1-3…D8-3投放的菌液浓度为10⁵pfu/mL；

B1-4、C1-4、D1-4…D8-4投放的菌液浓度为10⁷pfu/mL；

所用颗粒符合中华人民共和国农业行业标准《无公害食品渔用配合饲料安全限量》(NY5072-2002)的规定。试验期间，日投饵量与鱼体重的质量分数为3-5％，每日投喂三次(7:00，12:00，17:00)，每次投喂过程持续30min。试验结束测量鱼的生长指标、免疫指标及水质情况。

(1)、鱼体生长指标的测定方法如下：

每组随机抽取40尾鱼检测生长情况，鱼体长度测定采用精度为1mm的游标卡尺度量，体长为鱼的吻端到脊椎骨最下端之间的距离。体重采用电子天平称量。试验生长指标按如下公式计算：

成活率(％)＝N_t/N_o×100％；

增重率(％)＝(W_t-W_o)W_o×100％；

体长增长率(％)＝(L_t-L_o)/L_o×100％；

肥满度＝W_o/L_i或W_t/L_e；

式中N_o为试验开始时鱼体总尾数；N_t为试验结束时鱼体总尾数；W_o为试验开始时鱼体重；W_t为试验结束时鱼体重；L_o为试验开始时鱼体长；L_t为试验结束时鱼体长；

试验测得的大菱鲆各项生长指标见表一～表四：从表中可以看出，A组成活率、增重率、体长增长率、肥满度分别为81.22％、1800％、55.68％、22.27，与A组相比，B、C、D组的成活率、增重率、体长增长率、肥满度都有明显的提高。说明在常规的养殖方式下，不换水会影响大菱鲆的成活率、增重率、体长增长率、肥满度。在相同的换水周期下，随着蛭弧菌浓度的升高，成活率、增重率、体长增长率、肥满度都在逐渐升高，且都明显高于A组。B1-1～B8-1…D1-4～D8-4之间的成活率、增重率、体长增长率、肥满度无明显差异。说明在水中或者是在饲料中添加浓度为10～10⁷pfu/mL蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，5-40天不换水，均对成活率、增重率、体长增长率、肥满度影响不大，均可促进生长。

因此，无论在水中还是饲料中添加浓度为10～10⁷pfu/mL蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，5-40天换水一次，均可促进大菱鲆的快速生长，且D组效果最好。

表一大菱鲆生长指标的检测

表二大菱鲆生长指标的检测

表三大菱鲆生长指标的检测

表四大菱鲆生长指标的检测

(2)、鱼体免疫指标的测定方法如下：

1、感染试验于预先消毒的盛有1吨砂滤海水(盐度29～30‰)的水池中进行。从实验A组、B1-1、B1-2…D8-3、D8-4共97组中每个组随机取大菱鲆100只，体重500±15g/条。用无菌1mL注射器经大菱鲆腹腔注射0.5mL浓度为10⁸cfu/mL嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，购于广东省微生物所菌种保藏中心，编号GIM1.172)，对大菱鲆进行感染。试验水温保持在18～20℃，流水养殖，每天保持8个水交换量，充气培养。人工感染后，记录大菱鲆的体表变化、运动、摄食及死亡情况。连续观察10天，最终计算成活率，采用相对存活率(Relative Percent Survival，RPS)计算式：

RPS(％)＝(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100％

2、溶菌酶活力测定血清溶菌酶活性通过浊度比色法测定

(Ellis A E.Lysozyme assays.[M]//Stolen J S，Fletcher T C，Anderson D P，etal.Techniques in Fish Immunology I.USA：SOS Publications，1990：101-103.)实验条件下，每mL血清每min吸光值减少0.001为1个酶活性单位(U)。

3、酚氧化酶(PO)活力的测定

酚氧化酶活性测定采用Hernández-López等(Hernández-López J，Gollas-Galvan T.Vargas-Albores F.Activation of the prophenoloxidase system ofthe brown Penaeus californiensis Holmes[J].Comp Biochem Physiol，1996.113C：61-66.)的方法。以实验条件下，每mL血清每min吸光增加0.001，定义为1个酶活性单位(U)。

4、超氧化物歧化酶(SOD)活力

超氧化物歧化酶(SOD)活力按邓碧玉等改进的连苯三酚自氧化法进。(邓碧玉，袁勤生，李文杰.改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法[J].生物化学与生物物理进展，1991，18(2)：163～163)

感染实验的结果显示，A组的相对存活率(Relative Percent Survival，RPS)为0，与A组相比，B、C、D组的相对存活率均有明显提高，从表五可以看出，在相同的换水周期下，随着蛭弧菌混合菌液浓度的升高，相对存活率逐渐升高，且都明显高于工厂生产对照A组，说明采用新型的添加蛭弧菌混合体的方法，能明显提高大菱鲆的相对存活率，即提高对大菱鲆的免疫抵抗力；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组大菱鲆相对存活率没有显著的变化。说明新型养殖方法下，5-40天不换水，蛭弧菌混合菌液都能增强大菱鲆的免疫能力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均能提高大菱鲆的相对存活率，且在水体与饲料中同时添加，效果最佳。

因此，无论在水中还是饲料中添加一定浓度的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，长达40天不换水，都会提高大菱鲆的免疫抵抗力，在水中与饲料中同时添加，效果最好。从而进一步表明蛭弧菌混合体具有潜在的疫苗作用，能够刺激大菱鲆免疫应答反应，抵御气单胞菌的侵害，有助于提高大菱鲆的成活率。

从表七～表九可以看出，A组溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力分别为18.26U/mL、209.98U/mL、5.78U/mL。与A组相比，B、C、D组的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力都有明显的提高。说明在常规的养殖方式下，不换水会影响大菱鲆的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力。在相同的换水周期下，随着蛭弧菌浓度的升高，溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力都在逐渐升高。说明蛭弧菌混合菌液的浓度越高，大菱鲆的免疫力越强。B1-1～B8-1…D1-4～D8-4之间的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力几乎无显著差异。说明在水中或者是在饲料中添加浓度为10～10⁷pfu/mL蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，5-40天之间不换水，对溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力影响不大，均可提高免疫力。

因此B、C、D组的养殖方式能够达到提高鱼的免疫力、促进摄食和快速生长的目的，且D组效果最佳。即：无论在水中还是在饲料中添加浓度为10～10⁷pfu/mL蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，长达40天不换水，均可显著提高大菱鲆的溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力等免疫指标，在水中和饲料中同时添加，效果更佳。

经过测定，A组的细菌总数和弧菌总数分别为3.26×10³cfu/mL和7.32×10²cfu/mL。B、C、D组的细菌总数分别为6.23×10²cfu/mL、7.89×10²cfu/mL、4.21×10²cfu/mL；弧菌总数8.9×10cfu/mL、9.5×10cfu/mL、5.1×10cfu/mL，比A组明显都降低了1个数量级。A、B、C、D组的pH都在7.78～8.12之间。

由此可见，无论在水中还是在饲料中添加浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合菌液，都能够达到提高鱼的免疫力、促进摄食和快速生长的目的，并且能够裂解水中的致病或潜在致病菌菌，从而达到改善水质的效果，节约地下水资源，保护环境，节省成本，提高经济效益，促进养殖业的快速发展。相同的换水周期下，蛭弧菌混合菌液的浓度越高，效果越好。且在水中和饲料同时使用，效果最优。

表五攻毒感染实验相对存活率

表六免疫指标的测定结果

表七免疫指标的测定结果

表八免疫指标的测定结果

表九免疫指标的测定结果

上述实施例中的D组为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(3)向养殖池中投放鱼苗；

(4)养殖期间正常曝气，控制水温在15～30℃，日投饵量为鱼体重的质量百分数3～5％，饵料在投入前，用用浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液浸泡15～30min；每隔5～40天换掉池水一次，每次换水后加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液，使池水中的蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体浓度达到10～10⁷pfu/mL。

2.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(1)所述养殖池的池底为凹型或平底，养殖池在注入养殖用水之前清洗消毒干净；所述遮光布的遮光率为95％。

3.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(2)和(4)所述加入蛭弧菌游泳体和蛭质体的混合体菌液的方法为：用养殖池中的池水稀释菌液后，均匀泼洒全池。

4.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(2)所述加大曝气的曝气量为90～100L/h/m³；步骤(4)所述正常曝气的曝气量为70～80L/h/m³。

5.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(3)所述投放鱼苗在水温15～30℃时按照以下标准：鱼苗重量为25～50g时，投放密度为300～400尾/m²；鱼苗重量为70～100g时，投放密度为200～300尾/m²；鱼苗重量为100～200g时，投放密度为100～150尾/m²。

6.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(4)所述饵料为颗粒饵料；所述饵料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投饵间隔5～6小时，投饵方式为洒遍全池。

7.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(2)和(4)所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

8.根据权利要求1所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：步骤(2)和(4)所述混合体菌液为蛭弧菌游泳体菌液和蛭弧菌蛭质体菌液按细菌个数1∶1混合而成。

9.根据权利要求7所述的一种节能减排的大菱鲆养殖方法，其特征在于：所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)于营养肉汤液体培养基中，26～30℃培养20h，培养液经5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDFM05，28℃培养36～48h，培养液经6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清液，沉淀用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/LpH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到蛭弧菌蛭质体菌液；

10.根据权利要求9所述的一种节能减排的九孔鲍养殖方法，其特征在于：所述DNB液体培养基是将营养肉汤0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物0.1g溶于1000mL蒸馏水中，调节pH值至7.2～7.6。