CN102017907B

CN102017907B - 一种节能型九孔鲍养殖方法

Info

Publication number: CN102017907B
Application number: CN201010271005XA
Authority: CN
Inventors: 蔡俊鹏; 陈小红
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2010-08-31
Filing date: 2010-08-31
Publication date: 2013-10-30
Anticipated expiration: 2030-08-31
Also published as: CN102017907A

Abstract

本发明公开了一种节能型九孔鲍养殖方法。该方法包括以下步骤：取海域无污染的深海水作为养殖用水；选取健康且状态良好的九孔鲍稚鲍投入养殖池中；向养殖池中喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的浓度达10～10⁷pfu/mL；每天投饵一次，每次饵料投放量控制在九孔鲍体重的5％～15％；饵料在投入前用浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡；每隔5～30天换掉池水一次，每次换水后喷洒蛭弧菌蛭质体菌液。本发明养殖方法对九孔鲍的生长有明显促进作用，提高了九孔鲍的免疫力和存活率，改善了养殖环境的水质。由于蛭弧菌蛭质体对鲍鱼无毒副作用，适合于鲍鱼大规模工厂化养殖。

Description

一种节能型九孔鲍养殖方法

技术领域

本发明属于海水贝类养殖技术领域，特别涉及一种节能型九孔鲍（Haliotisdiversicolor aquatilis）养殖新方法。

背景技术

鲍为我国的八大海珍之一，具有很高的经济和药用价值。我国的鲍养殖起始于20世纪70年代开始起步，到80年代中期已形成规模化生产，此后更是发展迅猛，沿海各地的养鲍业都形成了较大的规模。然而随着环境污染的加剧、养殖规模的扩大和集约化程度的提高，鲍的病害也相继发生，并且有逐年加重的趋势，已经对我国养鲍业的发展构成严重威胁。尤其是九孔鲍，近几年来鲍养殖中出现病害问题频繁，严重影响了鲍养殖生产，致使许多养殖户放弃养殖九孔鲍。因此，探寻九孔鲍的新的养殖方法，提高其存活率和生长率，在九孔鲍的生产技术乃至鲍养殖业中都具有十分重要的意义。

在鲍的养殖过程中，使用抗生素对抑制病原微生物的繁殖，减少其代谢毒素对鲍的毒害作用等方面起到了积极的作用，但是长期使用抗生素，特别是滥用抗生素，其种种弊端也逐渐显露出来。如导致鲍的胃肠道正常菌群失调，对鲍的机体免疫力产生不良影响，产生耐药性和药物残留等副作用，给养殖业的良性发展和人类的健康都带来了潜在的危害。另外，目前我国工厂化陆基鲍鱼养殖中，主要采用抽取外海水经过沙滤沉淀后进入养殖池，或抽取砂井水进行流水养殖，废水经管道直接排入海区，这种直抽直排方式存在能耗高，对海区污染大的缺点，不仅加重养殖成本，还成为鲍日后发生病害的一大隐患。

蛭弧菌是寄生于其他细菌，并能导致宿主细菌裂解的一类细菌；比一般细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用；革兰氏染色呈阴性，可以裂解包括副溶血弧菌、溶藻弧菌等引发鲍病害的潜在致病菌。蛭弧菌的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。游泳体蛭弧菌侵入宿主的周质空间的同时失去鞭毛，宿主细胞和蛭弧菌一起，成为"蛭质体"。与游泳体相比，蛭质体不仅具有制备、保存更为方便，环境耐受力强，作用时间虽略慢但更久的特点，同时还具有潜在的灭活疫苗功能。当游泳体蛭弧菌入侵宿主细胞后，宿主细胞的呼吸作用（respiration）很快被停止。蛭弧菌也进入蛭质体状态，开始分泌多种酶，消解宿主细胞的大分子为小分子物质，进而整合为自身的营养物质，使自身生长，变长。最终，长条状的蛭质体分成很多短的节段，长出鞭毛，重新成为游泳体。之后，它们分泌必需的酶类，破壁而出，再次成为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体。在此蛭质体发育期间，蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结构，使原宿主仍具有免疫原性，可刺激生物体，产生免疫应答反应。这一潜在功能使得应用蛭弧菌蛭质体于九孔鲍养成中，可有效预防九孔鲍细菌病的产生，提高其成活率。

已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在（海洋）水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如：在国外，Lenz and Hespell（1978）研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.,Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology,1978,119(3):245-248]。在国内，林茂等（2006）研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH2102对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1):7-11]。

另外，本发明中新养成方法采用的是周期换水，如此不仅减少养殖用水量和废水排放，更是减少能耗，降低了养殖成本；和全封闭循环养殖法相比，投入少，更易推广。因此，该方法是一种便利可行、绿色、低碳、节能环保的养殖方式。

发明内容

为克服上述现有养殖技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种新型、绿色、环保和节能减排的九孔鲍养殖方法。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：一种节能型九孔鲍养殖方法，包括以下操作步骤：

（1）取海域无污染的深海水作为养殖用水；养殖用水经砂滤、沉淀和消毒后，注入养殖池；在养殖池上方盖遮光布以控制光照强度在500～2000lux之间；在养殖池的池底骑叠式摆放四脚砖；

（2）选取健康且状态良好的九孔鲍稚鲍投入养殖池中，稚鲍的壳长为1～4cm，投放密度为300～1000只/m²；

（3）向养殖池中喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的浓度达10～10⁷pfu/mL；

（4）日投饵量控制在九孔鲍体重的5%～15%；饵料在投入前用浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15～45min；每隔5～30天换掉池水一次，每次换水后喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的浓度达到10～10⁷pfu/mL；

（5）养殖期间按照曝气量70～100L/h/m³进行曝气，每天吸污1～2次，并及时清理出死鲍。

步骤（1）所述养殖用水的水源水质符合中华人民共和国国家标准渔业水质标准（GB11607-89）要求，符合农业部《无公害食品海水养殖用水水质》（NY5052-2001）要求。

步骤（1）所述养殖池在注入养殖用水之前用淡水浸泡，消毒后冲洗干净；所述养殖用水注入养殖池前，在养殖池进水管口包扎一个200目的网袋，防止养殖用水中的细沙入池。

步骤（1）所述遮光布的遮光率为80～95%。

步骤（2）所述九孔鲍稚鲍遵循有机水产养殖原则培养出来。

步骤（4）所述饵料为新鲜切碎的江蓠、海带和裙带菜中的至少一种，或鲍鱼人工配合饲料；每天投饵一次，投饵的时间为16:00～18:00pm之间。

步骤（3）和（4）所述蛭弧菌为蛭弧菌（Bdellovibrio sp.）BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于湖北省武汉市珞珈山武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M209172。

所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种宿主于营养肉汤液体培养基中，在35℃和200rpm摇床培养12h，培养液经4℃，5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDFM05，在温度25～35℃下，以150～300rpm摇床培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液在4℃温度下以6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即为蛭弧菌蛭质体；将蛭弧菌蛭质体用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol／L pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10⁶～10⁹pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液；

所述宿主为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）。

所述DNB液体培养基是将营养肉汤0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物0.1g溶于1000mL蒸馏水中，调节pH值至7.2～7.6。

单独采用向初始养殖池水和换水之后的养殖池中喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，或者单独采用将饵料在投入前用浓度为10～10⁷pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡的方式，或者采用两者结合的方式，来达到添加蛭弧菌蛭质体的目的，均可以达到本发明技术效果。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

（1）蛭弧菌蛭质体对大多数的水产致病菌有较强的裂解力，而且蛭弧菌蛭质体本身能改善养殖生物肠道环境，促进生长，提高鲍鱼免疫力。因此，与其他的微生物制剂相比，本发明中的蛭弧菌蛭质体具有提高鲍自身的免疫力，加快鲍的生长等特点。

（2）与蛭弧菌游泳体相比，蛭弧菌蛭质体不仅具有制备、保存更为方便，环境耐受力强，作用时间虽略慢但更久的特点，同时还具有潜在的灭活疫苗功能。在蛭质体发育期间，蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结构，使原宿主仍具有免疫原性，可刺激生物体，产生免疫应答反应。因此，可有效预防九孔鲍细菌性疾病的发生，提高养殖成活率。

（3）现有的九孔鲍育苗技术采用的是换水或流水的方式，不仅耗费了大量的人力、物力、财力，还会对环境造成一定的污染。而利用该蛭弧菌蛭质体的九孔鲍育苗方法可以减少了供水量的需求，很大程度上节约了生产成本，而且不会对环境造成不良影响，对鲍业及其他水产养殖的可持续发展有着重要的意义。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

实施例1

（1）用于九孔鲍（Haliotis diversicolor aquatilis）养成的蛭弧菌蛭质体菌液的制备

在一个装有100mL营养肉汤液体培养基（蛋白胨10g，牛肉膏粉3g，氯化钠5g，pH7.4±0.2）的锥形瓶中接种0.5mL10⁷cfu/mL嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，菌种编号：GIM1.172，来源于广东省微生物菌种保藏中心），200rpm、35℃摇床培养12小时，培养液于4℃、5000rpm离心15min，弃上清。用5mL生理盐水悬浮沉淀菌体，之后加入到一个装有100mL DNB液体培养基（营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.2～7.6）的锥形瓶中，再接入1mL含10³pfu/mL的的蛭弧菌BDFM05(CCTCC M209172)。恒温摇床250rpm、28℃培养36h。培养液于4℃6000rpm离心20min，去除含蛭弧菌游泳体的上清，保留沉淀（即蛭弧菌蛭质体），加入10mL DNB液体培养基（营养肉汤0.8g，酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物0.1g，溶于1000mL蒸馏水中，pH值为7.2～7.6）重新悬浮蛭弧菌蛭质体，即得到浓度为10⁹pfu/mL的浮蛭弧菌蛭质体菌液。

（2）应用蛭弧菌蛭质体进行九孔鲍养成的效果

实施地为福建某鲍鱼养殖场。实施地海域的水源水质符合中华人民共和国国家标准渔业水质标准（GB11607-89）要求，符合农业部《无公害食品海水养殖用水水质》（NY5052-2001）要求。海水经过砂滤、沉淀处理，并在进入养殖池前，在池进水管口包扎一个200目的网袋，防止细砂入池。

鲍鱼养殖池建在养殖大棚内，每个水池底面积为20m²，高1.0m，池底共放200块四脚砖，分两侧放置。四脚砖横向骑叠式放置，每排10块（两侧各5块），共20列。稚鲍放置前，各池均用淡水浸泡半个月，反复冲洗干净待用。水池上方盖上遮光度为85%的遮光布，避免光照过强。每个水池水深40cm，每个水池投放壳长约2.5cm（均重2.19g）的九孔鲍，每池10000只。本发明设置一个生产对照组，将其编为A组，两个平行，采用正常流水，日换水量为池水量的3倍，每天早上7:00用高压水冲洗池子，正常投饵，期间不加蛭弧菌蛭质体，完全的工厂养成方式。其他组具体编排方案如下：

1）在养殖水体中添加蛭弧菌蛭质体菌液，但饵料中不添加

共需要48口水池，分别为B-1、B-2、B-3、B-4；C-1、C-2、C-3、C-4；D-1、D-2、D-3、D-4；E-1、E-2、E-3、E-4；F-1、F-2、F-3、F-4；G-1、G-2、G-3、G-4，每组2个平行。

B组（B-1、B-2、B-3、B-4）：5天换（全池）水一次；

C组（C-1、C-2、C-3、C-4）：10天换（全池）水一次；

D组（D-1、D-2、D-3、D-4）：15天换（全池）水一次；

E组（E-1、E-2、E-3、E-4）：20天换（全池）水一次；

F组（F-1、F-2、F-3、F-4）：25天换（全池）水一次；

G组（G-1、G-2、G-3、G-4）：30换（全池）水一次；

B-1、C-1、D-1、E-1、F-1、G-1组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10¹pfu/mL；

B-2、C-2、D-2、E-2、F-2、G-2组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10³pfu/mL；

B-3、C-3、D-3、E-3、F-3、G-3组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10⁵pfu/mL；

B-4、C-4、D-4，E-4、F-4、G-4组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10⁷pfu/mL；

2）在饵料中添加蛭弧菌蛭质体菌液，但在养殖水体中不添加

每次投饵前用蛭弧菌蛭质体菌液浸泡饵料半小时，而每次换水后养殖水体都不加蛭弧菌蛭质体菌液。所需48口水池分为b-1、b-2、b-3、b-4；c-1、c-2、c-3、c-4；d-1、d-2、d-3、d-4；e-1、e-2、e-3、e-4；f-1、f-2、f-3、f-4；g-1、g-2、g-3、g-4，每组2个平行。

b组（b-1、b-2、b-3、b-4）：5天换（全池）水一次；

c组（c-1、c-2、c-3、c-4）：10天换（全池）水一次；

d组（d-1、d-2、d-3、d-4）：15天换（全池）水一次；

e组（e-1、e-2、e-3、e-4）：20天换（全池）水一次；

f组（f-1、f-2、f-3、f-4）：25天换（全池）水一次；

g组（g-1、g-2、g-3、g-4）：30天换（全池）水一次；

b-1、c-1、d-1、e-1、f-1、g-1组为投的饵料为经过浓度为10¹pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡过的饵料；

b-2、c-2、d-2、e-2、f-2、g-2组为投的饵料为经过浓度为10³pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡过的饵料；

b-3、c-3、d-3、e-3、f-3、g-3组为投的饵料为经过浓度为10⁵pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡过的饵料；

b-4、c-4、d-4、e-4、f-4、g-4组为投的饵料为经过浓度为10⁷pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡过的饵料；

3）在养殖水体和饵料中均添加蛭弧菌蛭质体菌液

每次投饵前饵料用蛭弧菌蛭质体菌液浸泡半小时，每次换水后养殖水体也添加蛭弧菌蛭质体菌液。共需48口水池，分为Bb-1、Bb-2、Bb-3、Bb-4；Cc-1、Cc-2、Cc-3、Cc-4；Dd-1、Dd-2、Dd-3、Dd-4；Ee-1、Ee-2、Ee-3、Ee-4；Ff-1、Ff-2、Ff-3、Ff-4；Gg-1、Gg-2、Gg-3、Gg-4每组2个平行。

Bb组（Bb-1、Bb-2、Bb-3、Bb-4）：5天换（全池）水一次；

Cc组（Cc-1、Cc-2、Cc-3、Cc-4）：10天换（全池）水一次；

Dd组（Dd-1、Dd-2、Dd-3、Dd-4）：15天换（全池）水一次；

Ee组（Ee-1、Ee-2、Ee-3、Ee-4）：20天换（全池）水一次；

Ff组（Ff-1、Ff-2、Ff-3、Ff-4）：25天换（全池）水一次；

Gg组（Gg-1、Gg-2、Gg-3、Gg-4）：30天换（全池）水一次；

Bb-1、Cc-1、Dd-1、Ee-1、Ff-1、Gg-1组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10¹pfu/mL，同时，每次投放的饵料用浓度为10¹pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡半小时；

Bb-2、Cc-2、Dd-2、Ee-2、Ff-2、Gg-2组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10³pfu/mL，同时，每次投放的饵料用浓度为10³pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡半小时；

Bb-3、Cc-3、Dd-3、Ee-3、Ff-3、Gg-3组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10⁵pfu/mL，同时，每次投放的饵料用浓度为10⁵pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡半小时；

Bb-4、Cc-4、Dd-4、Ee-4、Ff-4、Gg-4组为每次换水后立即往水池中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体菌体浓度达到10⁷pfu/mL，同时，每次投放的饵料用浓度为10⁷pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡半小时。

各组在养殖过程中，每天18：00pm进行投饵，饵料为鲍鱼人工配合饲料，投放量控制在鲍体重的12%。养殖过程中水池的曝气量控制在100L/h/m³，每天采用虹吸法进行池底的吸污，并清理出死鲍，记录数据。

（3）九孔鲍养成的生长情况

历经7个月后，统计最终每口池子所存活的鲍鱼数目，分别从每口池子各随机抽取100只九孔鲍，用尺子测量其壳长（cm），电子天平测其重量（g），计算以下参数：

1）增重率(%)=(W_t-W_o)/W_o×100%；

2）壳长增长率(%)=(L_t-L_o)/L_o×100%；

3）壳长日平均增长量（μm）=（最终壳长-2.5）/210×10000

4）重量平均日增长量（mg）=（最终重量-2.19）/210×1000

5）存活率=存活数/10000×100%

（4）鲍鱼免疫指标测定

试验结束后，每组各取5只九孔鲍，分别检测其免疫指标。用1mL注射器，5号针头插入鲍的心脏取血，由于血量太少，再用刀片将鲍的腹足从中间切开，吸取渗出的蓝色血液。将吸取的血液置于小离心管中于4℃过夜，然后将析出的蓝色血清直接倾出，进行各项测定。

1）超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定

连苯三酚自氧化速率的测定，在25℃下，于4.5mL50mmol/L,Ph=8.30的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液中加入10μL50mmol/L连苯三酚，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，在325nm波长下每隔30s测A值一次，要求自氧化速率在0.070OD/min左右。酶活性测定，在加入连苯三酚前，加入待测SOD样，测得数据，按下式计算酶活性：

酶活性=（0.070-A_325nm）/min×100%×反应液总体积×样液稀释倍数/（0.070×50%×样液体积）

酶活单位定义：每毫升反应液中，每分钟抑制连苯三酚自氧化速率达50%的酶量定义为一个酶活单位（U/mL）。

2）溶菌酶活力测定

以溶壁微球菌冻干粉为底物。用0.1mol/L，pH=6.4的磷酸盐缓冲液配成底物悬液（OD_570nm≈0.3），取3.0mL该悬液于试管内置冰浴中，再加入50μL待测血清，混合，测A₀值。然后将试液移入37℃温浴中置30min，取出后再置于冰浴中10min，以终止反应，测其A值。溶菌活力U_L按（A₀-A）/A式计算。

（5）攻毒实验

实验结束后，从对照组（A组）和各个实验组（B-G组、b-g组、Bb-Gg组）分别随机抽取100只鲍鱼，壳长6.2～6.8cm。每只鲍注射50μL浓度为1×10⁸嗜水气单胞菌菌液。于鲍腹足部注射细菌后，按不同组别分别正常养殖。实验期间流水式养殖，日换水量会水体的4倍，正常投饵，以50L/h/m³连续曝气，水温为20℃，pH控制在7.2。3d后记录各组死亡数目，最终计算成活率，采用相对存活率(Relative Percent Survival，RPS)计算式：

RPS(%)=(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100%

实验结果由表1-12所示。其中，表1-6分别指不同的换水周期下（5天、10天、15天、20天、25天、30天），通过三种方式添加蛭弧菌蛭质体菌液，其对九孔鲍养成中鲍生长情况的影响。可见，在相同的换水周期下，随着浓度的升高（10¹、10³、10⁵、10⁷pfu/mL），九孔鲍的壳长、重量以及存活率都有一定程度的增加或提高；并且，无论采用何种换水周期，添加有蛭弧菌蛭质体菌液的实验组均比对照组（A组）能更好地促进九孔鲍的生长。从表中可以看出，三种不同的蛭弧菌蛭质体菌液添加方式中，直接水体添加的效果优于饵料浸泡，而两者都加的效果最优。

表7-12分别指在不同的换水周期下，通过三种方式添加蛭弧菌蛭质体菌液，其对九孔鲍免疫力的影响。表中可以看出，添加了蛭弧菌蛭质体菌液的实验组的超氧化物歧化酶(SOD)活性和溶菌酶活性均比对照组高。可见，无论是在水体，还是在饵料，抑或两者中都添加蛭弧菌蛭质体菌液，都能显著地增强鲍鱼的免疫力。

表13指攻毒实验中各组的相对存活率。结果表明，A组的相对存活率为0，而其他实验组的鲍鱼均有较高的相对存活率，均达到8%以上。在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体浓度的升高，相对存活率也逐渐升高；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组对虾相对存活率没有显著的变化。三种不同的蛭弧菌蛭质体添加方式中，直接水体添加的效果优于饵料浸泡，而两者都加的效果最优。这间接说明蛭弧菌蛭质体能够发挥一个潜在疫苗的作用，增强九孔鲍的免疫力。

水质方面，氨态氮用次溴酸纳氧化法测定（GB12763.4-91）；亚硝酸盐氮用重氮-偶氮光度法测定（GB12763.4-91）。经过测定，A组水池中的各项水质测定值均高于试验组。其中，A组氨态氮的检测结果为0.084mg/L，高于5天换水周期组（B组、b组、Bb组）的0.073—0.075mg/L，10天换水周期组（C组、c组、Cc组）的0.074—0.076mg/L，15天换水周期组（D组、d组、Dd组）的0.074—0.078mg/L，20天换水周期组（E组、e组、Ee组）的0.075—0.079mg/L，25天换水周期组（F组、f组、Ff组）的0.076—0.081mg/L，30天换水周期组（G组、g组、Gg组）的0.078—0.081mg/L;A组亚硝酸盐氮的检测结果为0.011mg/L，高于5天换水周期组（B组、b组、Bb组）的0.006—0.008mg/L，10天换水周期组（C组、c组、Cc组）的0.006—0.008mg/L，15天换水周期组（D组、d组、Dd组）的0.006—0.009mg/L，20天换水周期组（E组、e组、Ee组）的0.007—0.009mg/L，25天换水周期组（F组、f组、Ff组）的0.008—0.010mg/L，30天换水周期组（G组、g组、Gg组）的0.008—0.011mg/L。结果表明，无论是在水体，还是在饵料，抑或两者中都添加蛭弧菌蛭质体，都能明显的改善水质，达到节水节能的良好效果。

另外，细菌总数和弧菌总数检测方面，分别采用涂布营养肉汤平板法和TCBS平板法检测。结果显示，A组水体中的细菌总数和弧菌总数分别达到10⁵和10³的数量级（cfu/mL），添加蛭弧菌蛭质体菌液的实验组的细菌总数和弧菌总数分别为10²～10³和10¹～10²的数量级（cfu/mL），比对照组低，说明蛭弧菌蛭质体能有效控制水体的细菌数目。

综合各方面结果，添加蛭弧菌蛭质体菌液，能明显的提高鲍鱼的生长速度，提高成活率，增强免疫力，而且能够改善水质，达到节水节能的良好效果。

表15天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表210天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表315天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表420天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表525天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表630天换水周期对九孔鲍生长情况的影响

表中数据均为两组平行的平均值

表75天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表810天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表915天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表1020天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表1125天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表1230天换水周期对九孔鲍免疫力的影响

表13各组的攻毒实验结果

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种节能型九孔鲍养殖方法，其特征在于包括以下操作步骤：

（1）取海域无污染的深海水作为养殖用水；养殖用水经砂滤、沉淀和消毒后，注入养殖池；在养殖池上方盖遮光布以控制光照强度在500～2000 lux之间；在养殖池的池底骑叠式摆放四脚砖；

（2）选取健康且状态良好的九孔鲍稚鲍投入养殖池中，稚鲍的壳长为1～4 cm，投放密度为300～1000只/m²；

（4）日投饵量控制在九孔鲍体重的5%～15%；饵料在投入前用浓度为10～10⁷ pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15～45 min；每隔5～30天换掉池水一次，每次换水后喷洒蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的浓度达到10～10⁷ pfu/mL；

（5）养殖期间按照曝气量70～100 L/h/m³进行曝气，每天吸污1～2次，并及时清理出死鲍；

所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到：接种宿主于营养肉汤液体培养基中，在35℃和200rpm摇床培养12h，培养液经4℃，5000～8000rpm离心10～20min后，沉淀加入至DNB液体培养基中，接入蛭弧菌BDFM05，在温度25～35℃下，以150～300 rpm摇床培养36～48h，得到含蛭弧菌蛭质体和蛭弧菌游泳体的培养液，培养液在4℃温度下以6000～8000rpm离心15～20min后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，得到的沉淀即为蛭弧菌蛭质体；将蛭弧菌蛭质体用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol／L 且pH值为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液悬浮，得到浓度为10⁶～10⁹pfu/mL的蛭弧菌蛭质体菌液；

所述宿主为嗜水气单胞菌；所述DNB液体培养基是将营养肉汤 0.8g、酪蛋白酸水解物 0.5g和酵母精提物 0.1g溶于1000ml蒸馏水中，调节pH值至7.2～7.6；

所述蛭弧菌BDFM05于2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 209172。

2.根据权利要求1所述的一种节能型九孔鲍养殖方法，其特征在于：步骤（1）所述养殖池在注入养殖用水之前用淡水浸泡，消毒后冲洗干净；所述养殖用水注入养殖池前，在养殖池进水管口包扎一个200目的网袋，防止养殖用水中的细沙入池。

3.根据权利要求1所述的一种节能型九孔鲍养殖方法，其特征在于：步骤（1）所述遮光布的遮光率为80～95%。

4.根据权利要求1所述的一种节能型九孔鲍养殖方法，其特征在于：步骤（4）所述饵料为新鲜切碎的江蓠、海带和裙带菜中的至少一种，或鲍鱼人工配合饲料；每天投饵一次，投饵的时间为16:00～18:00 pm之间。