CN102010836B - 一种纤维单胞菌da8菌株及其获得方法和应用 - Google Patents

一种纤维单胞菌da8菌株及其获得方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种纤维单胞菌DA8菌株及其获得方法和应用,该菌株具有产果胶酶和半纤维素酶能力,具有亚麻脱胶活性。本发明所筛选的纤维单胞菌菌种具有产酶量大,酶系齐全,无毒性及培养条件粗放等优点;采用该复合脱胶酶液进行亚麻脱胶不仅大大缩短了脱胶周期,降低了成本,而且纤维分裂度提高,脱胶效率达95%;本发明的脱胶方法与现有的温水脱胶所需设备基本相同,因此特别适用于老企业在现有设备基础上进行工艺改进;本发明所筛选的纤维单胞菌菌株可以用于亚麻原茎脱胶、粗纱煮练、亚麻织物生物前处理外,还可用于苎麻、黄麻、大麻等麻类韧皮纤维脱胶和生物前处理。

Description

一种纤维单胞菌DA8菌株及其获得方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于纤维单胞菌菌株及其应用领域,特别涉及一种纤维单胞菌DA8菌株及其获得方法和应用。
背景技术
[0002] 亚麻纺织品由于其具有“绿色保健”的特点,倍受消费者青睐,是国际市场上最受欢迎的纺织商品之一。世界上共有20多个国家和地区种植纤维亚麻。2004年我国纤维亚麻的种植面积已经达到了 16万亩,居世界第一位。黑龙江省是我国纤维用亚麻主要生产基地,种植面积和产量约占全国的70%以上。然而我国亚麻纤维年产量仅有4-5万吨,缺口在 50%以上。亚麻脱胶技术存在的不足使得纤维质量不佳,长麻率和梳成率较低、强度弱、可纺性差是目前制约亚麻纺织不能纺高支纱和生产高档产品的关键问题之一。
[0003] 目前,生产上普遍采用传统的亚麻温水怄麻、雨露怄麻及天然水怄麻等方法,均利用天然微生物及其酶对亚麻的果胶、半纤维素和木质素等胶质进行降解,菌株混杂,难以进行有效的控制,导致脱胶时间长(温水怄麻约为4d ;雨露怄麻为15-20d ;天然水怄麻 5-7d)、综合长麻率低、质量不稳定(束纤维强力低)和环境污染重等诸多问题,严重制约着亚麻产业的大力发展。尽管20世纪以来,不同的亚麻脱胶菌种如黑曲霉、真菌等被分离、纯化并用于亚麻脱胶。尽管将微生物及其产生的酶类应用于亚麻脱胶不仅可以提高纤维的产量和品质,耗能少、使用安全,可减轻对环境的污染,具有良好的前景,但是其产业化一直未能实现。尽管纤维单胞菌株及其水解酶被用于紫杉烷转化(CN2007100U698.9)、分解木质纤维素(CN200910085651. 4)和植物性纤维分解剂(CN200610071920. 8),但却未见其在亚麻等麻类纤维胶质分解中的应用报道。
发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种纤维单胞菌DA8菌株及其获得方法和应用,本发明所筛选的纤维单胞菌菌种具有产酶量大,酶系齐全,无毒性及培养条件粗放等优点;采用该复合脱胶酶液进行亚麻脱胶不仅大大缩短了脱胶周期,降低了成本,而且纤维分裂度提高,脱胶效率达95 % ;本发明的脱胶方法与现有的温水脱胶所需设备基本相同,因此特别适用于老企业在现有设备基础上进行工艺改进。
[0005] 本发明的一种纤维单胞菌DA8菌株(CGMCC No. 3840),其特征在于:该菌株具有产果胶酶和半纤维素酶能力,具有亚麻脱胶活性。
[0006] 本发明的一种纤维单胞菌DA8菌株的获得方法,包括:
[0007] (1)从东海舟山海域取样腐烂海草,先将海草与富集培养基按Ig : 20ml的比例于富集培养基中室温静置培养30天,然后取0. Iml富集培养基涂布于分离培养基,37°C静置培养1〜4天,获得自野生型脱胶优势菌株;
[0008] 其中,富集培养基配方为:亚麻粉5g,无菌水200ml,pH自然;分离培养基配方为:亚麻粉 5g,(NH4)2SO4 5g,K2HPO4 lg,MgSO4 0. 5g, KCl 0. 5g, FeSO4 0. 01,琼脂 20g,/KIOOOmL,用NaOH将pH调节到9 ;
[0009] (2)将步骤(1)中得到的菌株接种到果胶营养培养基中,28°C培养72h,带菌落形成后,加入0. 2%刚果红水溶液染色4h,倒去表面剩余刚果红溶液,加入少量蒸馏水荡去薄层表面刚果红,对光即可见明显的绛红色水解圈,在菌落周围出现绛红色水解圈者即为果胶分解菌(测量果胶琼脂平板上菌周围的透明圈直径和菌落直径,水解圈与菌落直径之比大者一般有较高果胶酶活力);
[0010] 然后将果胶分解菌接种到半纤维素营养培养基中二8°C培养72h,即可见水解圈 (测量水解圈和菌苔大小,并计算二者大小之比,水解圈与菌落直径之比大者一般有较高半纤维素酶活力);
[0011] (3)通过透明圈法从上述培养基中选择出具有产果胶酶和半纤维素酶能力的菌株。所述步骤O)中的果胶营养培养基,其组分包括:
[0012]果胶 2g
[0013] NAN03 3g
[0014] K2HP04 0. 5g
[0015] MgS04 Ig
[0016]琼脂 20g
[0017] 水 IOOOmL
[0018] pH 自然,7.0-7. 2
[0019] 半纤维素营养培养基,其组分包括:
[0020] 半纤维素(自制) 2Og
[0021] NH4N03 2g
[0022] K2HP04 2g
[0023] MgS04 0. 2g
[0024] 酵母膏 5g
[0025]琼脂 20g
[0026] 水 IOOOmL
[0027] pH 7.2。
[0028] 本发明的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻脱胶中的应用,包括:
[0029] (1)纤维单胞菌DA8菌株保存于牛肉膏蛋白胨培养基,37°C 200rpm培养Mh,添加冻存缓冲液;
[0030] (2)在灭菌冷却后的50mL营养肉汤培养基中,接入上述斜面培养24h的菌一环,在转速200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养Mh ;
[0031] (3)将50ml摇瓶培养后培养基接种入亚麻发酵培养基5L,在转速200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养24h得到发酵菌液;其中,亚麻发酵培养基配方为:果胶5g,KCl 0. 05g,磷酸氢二钾 0. lg, MgSO4 0. 05g,FeSO4 0. OOlg, (NH4)2SO4 0. 5g,补水至 IOOml 定容 (5L发酵培养基等同增加各组分用量);
[0032] 将发酵菌液于4°C,8000r/min离心,取上清液即为所得酶液,然后经DNS比色法测定,酶液中果胶酶酶活力为214. 82U/mL,木聚糖酶酶活力为四1. 27U/ml,其在pH6. 5-9. 0, 50°C以下酶活较稳定;[0033] (4)将灭菌后的亚麻原茎与步骤3所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C, 200rpm摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
[0034] 所述步骤(1)中的冻存缓冲液由磷酸二氢钾0. 0627g,磷酸氢二钾0. 0177g,柠檬酸钠0. 0588g,七水合硫酸镁0. 02645g,甘油10ml,加水定容至IOOml制得。
[0035] 本发明的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻纱线前处理中的应用,包括:
[0036] 步骤(1)〜(3)与权利要求4相同;
[0037] (4)将灭菌后的亚麻纱线与步骤3所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C, 200rpm摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶;其中,亚麻纱线为亚麻粗纱或亚麻二粗。
[0038] 本发明的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻织物煮练中的应用,包括:
[0039] 步骤(1)〜(3)与权利要求4相同;
[0040] (4)将灭菌后的亚麻织物与步骤3所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C, 200rpm摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
[0041] 该菌株除可以用于黄麻、大麻等韧皮纤维脱胶及其织物前处理外等。
[0042] 提取菌株的DNA进行PCR扩增后进行测序,测定菌株16S rRNA全序列,根据16sRDNA测序(图1、图2)Blast及聚类分析结果,本发明所筛选菌株与纤维单胞菌 (Cellulomonassp)相似性为99%,结合生理生化试验结果和镜检分析,命名此菌株为纤维单胞菌(Cellulomonas sp)DA8菌株,并于2010年5月17日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)Jia :北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为 CGMCC No. 3840。
[0043] 该菌株具有在适当的培养和发酵条件下,由于其具有高产率产生果胶酶和木聚糖酶的能力,可以有效去除亚麻中的胶质,实现亚麻微生物深层浸没脱胶。该菌株生物学特征如下(附图1、图2):
[0044]
Figure CN102010836BD00061
[0045]
Figure CN102010836BD00062
[0046]
Figure CN102010836BD00063
[0047] 本发明提供的纤维单胞菌(Cellulomonas sp)DA8菌株(CGMCC No. 3840),提取菌株的DNA进行PCR扩增,选用细菌16S rRNA基因通用引物,正向引物BSF8/20, 5,-AGAGTTTGATCCTGGCTAAG-3,(E. coli 对应位置为 8 〜27),反向引物 BSR1541/20, 5‘ -AAGGAGGTGATCCAGCCG-3‘ (E. coli 对应位置为 1541 〜1522);进而测得菌株 16SrRNA 全序列,如下:[0048] GGTTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCATCGGCCACACCGTGGCAAGCGCCCTCCCGAAGGTTGAGC TACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGC AATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACCCCAATCCGAACTGAGACCGGCT TTTTGGGATTCGCTCCACCTTACGGTATCGCAGCCCTTTGTACCGGCCATTGTAGCATGCGTGAAGCCCAAGACATA AGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCCATGAGTCCCCGGCATAA CCCGCTGGCAACATGGGACGAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAA CCATGCACCACCTGTGCACGAGTGTCCAAAGAGACCACCATCTCTGGTGGCTTCTCGTGCATGTCAAGCCTTGGTAA GGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCGCATGCTCCGCCGCTT GTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTA GCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCACTTAATGCGTTTGCTGCGGCACGGAACTCGTGGAATGAGCCCCACAC CTAGTGCCCAACGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCATGCTTTCGCTCCTCAGCGT CAGTTGCGGCCCAGAGACCTGCCTTCGCCATCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTCCACCGCTACACCAGGAAT TCCAGTCTCCCCTACCGCACTCTAGTCTGCCCGTACCCGATGCAAGCTCGAGGTTGAGCCTCGAGTTTTCACACCAG ACGCGACAAACCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTG CTGGCACGTAGTTAGCCGGCGCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTGCGCTTCTTCCCTGCTGAAAGAGGTTTACAAC CCGAAGGCCTTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTTCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTC CCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGGTCGCCCTCTCAGGCCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGG TAGGCCATCACCCCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGAGCCCATCCCTGACCGAAAAACTTTCCAACCACCCCCATGC GAAGGCGGCTCATATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCGAAGTCAAGGGCAGGTTACTCACGTGTTA CTCACCCGTTCGCCACTAATCCGCCCAGCAAGCTGGGCATCATCGTTCGACTTGCATGTGTTAAGCACGCCGCCAGC GTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCT。
[0049] 有益效果
[0050] (1)本发明所筛选的纤维单胞菌菌种具有产酶量大,酶系齐全,无毒性及培养条件粗放等优点,而且该菌株产果胶酶和木聚糖酶活性高,因此其除可以用于亚麻原茎脱胶、粗纱煮练、亚麻织物生物前处理外,还可用于苎麻、黄麻、大麻等麻类韧皮纤维脱胶和生物前处理,不仅可以提高精干麻的制成率和精梳输成率,而且脱胶后纤维蓬松卷曲,纤维的平均长度增加,麻粒、毛羽明显减少,细纱品质指标显著提高;
[0051] (2)采用该复合脱胶酶液进行亚麻脱胶不仅大大缩短了脱胶周期,降低了成本,而且纤维分裂度提高,脱胶效率达95%,菌种不易被污染,处理简单,纤维质量好,脱胶条件温和,抗污染能力强,耐热性能好,由于本发明的脱胶方法与现有的温水脱胶所需设备基本相同,因此特别适用于老企业在现有设备基础上进行工艺改进。
附图说明
[0052] 图1为荚膜染色照片(油镜);
[0053] 图2为电镜照片;
[0054] 图3为发酵实例照片。
具体实施方式
[0055] 下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0056] 实施例1
[0057] 亚麻脱胶菌种的筛选获得
[0058] (1)从东海舟山海域取样腐烂海草,先将海草与富集培养基按Ig : 20ml的比例于富集培养基中室温静置培养30天,然后取0. Iml富集培养基涂布于分离培养基,37°C静置培养1〜4天,获得自野生型脱胶优势菌株;
[0059] 其中,富集培养基配方为:亚麻粉5g,无菌水200ml,pH自然;分离培养基配方为:亚麻粉 5g,(NH4)2SO4 5g,K2HPO4 lg,MgSO4 0. 5g, KCl 0. 5g, FeSO4 0. 01,琼脂 20g,/K IOOOmL,用NaOH将pH调节到9 ;
[0060] (2)将步骤(1)中得到的菌株挑4环接种到果胶营养培养基中(培养皿直径 IOcm),培养72h,带菌落形成后,加入0. 2 %刚果红水溶液染色4h,倒去表面剩余刚果红溶液,加入少量蒸馏水荡去薄层表面刚果红,对光即可见明显的绛红色水解圈,在菌落周围出现绛红色水解圈者即为果胶分解菌(测量果胶琼脂平板上菌周围的透明圈直径和菌落直径,水解圈与菌落直径之比大者一般有较高果胶酶活力);
[0061] 然后将果胶分解菌挑4环接种到半纤维素营养培养基中(培养皿直径10cm),28°C 培养72h,即可见水解圈(测量水解圈和菌苔大小,并计算二者大小之比,水解圈与菌落直
径之比大者一般有较高半纤维素酶活力); [0062] 果胶营养培养基,其组分包括: [0063] 果胶 2g[0064] NAN03 3g[0065] K2HP04 0. 5g[0066] MgS04 Ig[0067] 琼脂 20g[0068] 水 IOOOmL[0069] PH 自然,7· 0-7.2。[0070] 半纤维素营养培养基,其组分包括: [0071] 半纤维素(自制) 20g[0072] NH4N03 2g[0073] K2HP04 2g[0074] MgS04 0. 2g[0075] 酵母膏 5g[0076] 琼脂 20g[0077] (3)通过透明圈法从上述培养基中选择出具有产果胶酶和半纤维素酶能力的菌 株。 [0078] 实施例2 [0079] 为了使该菌株能够保持稳定的高产特性,斜面保藏培养基使用牛肉膏蛋白胨培养
基,培养基原料及制备方法为:牛肉膏0. 5g,蛋白胨lg,氯化钠0. 5g(pH7. 4-7. 6),加水至 IOOml定容,37°C 200rpm培养过夜,添加冻存缓冲液IOOml ;其中,冻存缓冲液由磷酸二氢钾0. 0627g,磷酸氢二钾0. 0177g,柠檬酸钠0. 0588g,七水合硫酸镁0. 02645g,甘油IOml, 加水定容至IOOml制得;将营养肉汤培养基(牛肉膏0. 3g,蛋白胨lg,氯化钠0. 5g,加水至 IOOml定容,pH7.4-7.6)分装于250mL容器中,每个容器中50mL,封口包扎后,于121°C灭菌20min ;冷却后接入斜面培养24h的菌一环,在转速200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养 24h。
[0080] 本发明所使用的发酵培养基为果胶5g,KCl 0. 05g,磷酸氢二钾0. lg,MgSO4 0. 05g, FeSO4 O.OOlg,(NH4)2SO4 0. 5g ;将50ml摇瓶培养后接种入发酵培养基5L,在转速200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养24h得到发酵菌液;再经高速冷冻离心机在4°C, 8000r/min条件下离心菌液,取上清液即为所得脱胶酶液。
[0081] 脱胶酶液的酶活测定
[0082] 为了测定复合脱胶酶液的有效成分,分别测定了果胶酶和木聚糖酶酶活。其中采用DNS比色法测定果胶酶活,酶活测定底物分别为0. 25%的果胶,木聚糖(均用pH8的磷酸缓存液配制)。
[0083] 酶活性测定方法如下:
[0084] (1)取25ml比色管,先加底物1.洳1,再取经8000rpm,4°C离心15min后的发酵液上清液0. anl,加塞摇勻,50°C水浴保温30min,取出;
[0085] (2)加1. 5mlDNS显色液并摇勻,立即置沸水中显色5min,取出流水冷却。加蒸馏水稀释至刻度,摇勻;
[0086] (3)用灭活处理过的酶液作对照,用UNICO VU2100型分光光度计分别在520nm和 540nm波长下,测定果胶酶活力,木聚糖酶。
[0087] 酶液中果胶酶酶活力为214.82U/mL,木聚糖酶酶活力为291. 27U/ml,其在 pH6. 5-9. 0,50°C以下酶活较稳定。
[0088] 实施例3
[0089] 亚麻脱胶工艺如下:
[0090] 将5g亚麻原茎置入250ml三角瓶,以亚麻原茎与发酵菌液按浴比1 : 20分装于三角瓶中,装液量为100ml,在40°C,200rpm摇床中分别脱胶1天、2天和4天;脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
[0091] 通过对脱胶亚麻观察发现,1天后亚麻纤维有明显分散,发酵液颜色变深变浑浊; 脱胶2天后原本成束的亚麻完全分散成纤维状,发酵液明显变稠;脱胶4天后亚麻脱胶率达到90%以上。
[0092] 实施例4
[0093] 亚麻脱胶工艺如下:
[0094] 将5g灭菌后的亚麻纱线(亚麻粗纱或亚麻二粗)置入250ml三角瓶,以亚麻原茎与发酵菌液按浴比1 : 20分装于三角瓶中,装液量为100ml,在40°C,200rpm摇床中分别脱胶1天、2天和4天;脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
[0095] 通过对脱胶亚麻观察发现,1天后亚麻纤维有明显分散,发酵液颜色变深变浑浊; 脱胶2天后原本成束的亚麻完全分散成纤维状,发酵液明显变稠;脱胶4天后亚麻脱胶率达到90%以上。[0096] 实施例5
[0097] 亚麻脱胶工艺如下:
[0098] 将5g灭菌后的亚麻织物置入250ml三角瓶,以亚麻原茎与发酵菌液按浴比1 : 20 分装于三角瓶中,装液量为100ml,在40°C,200rpm摇床中分别脱胶1天、2天和4天;脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
[0099] 通过对脱胶亚麻观察发现,1天后亚麻织物白度、柔软度显著改善,刺痒感显著减低。

Claims (6)

1. 一种纤维单胞菌(Cellulomonas sp)DA8菌株,其保藏编号为CGMCC No. 3840,其特征在于:该菌株具有产果胶酶和半纤维素酶能力,具有亚麻脱胶活性;其16S rRNA序列,如下:GGTTACCTTGTTACGACTTCACCCCAGTCATCGGCCACACCGTGGCAAGCGCCCTCCCGAAGGTTGAGCTACCTGCTTCTGGTGCAACAAACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACCCCAATCCGAACTGAGACCGGCTTTTTGGGATTCGCTCCACCTTACGGTATCGCAGCCCTTTGTACCGGCCATTGTAGCATGCGTGAAGCCCAAGACATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCCATGAGTCCCCGGCATAACCCGCTGGCAACATGGGACGAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTGCACGAGTGTCCAAAGAGACCACCATCTCTGGTGGCTTCTCGTGCATGTCAAGCCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCGCATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCACTTAATGCGTTTGCTGCGGCACGGAACTCGTGGAATGAGCCCCACACCTAGTGCCCAACGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCATGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTGCGGCCCAGAGACCTGCCTTCGCCATCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTCCACCGCTACACCAGGAATTCCAGTCTCCCCTACCGCACTCTAGTCTGCCCGTACCCGATGCAAGCTCGAGGTTGAGCCTCGAGTTTTCACACCAGACGCGACAAACCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGCGCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTGCGCTTCTTCCCTGCTGAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCTTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTTCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGGTCGCCCTCTCAGGCCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTAGGCCATCACCCCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGAGCCCATCCCTGACCGAAAAACTTTCCAACCACCCCCATGCGAAGGCGGCTCATATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCGAAGTCAAGGGCAGGTTACTCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTAATCCGCCCAGCAAGCTGGGCATCATCGTTCGACTTGCATGTGTTAAGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCT。
2.如权利要求1所述的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻脱胶中的应用,包括:(1)纤维单胞菌DA8菌株保存于牛肉膏蛋白胨培养基,37°C 200rpm培养Mh,添加冻存缓冲液;所述的冻存缓冲液由磷酸二氢钾0. 0627g,磷酸氢二钾0.0177g,柠檬酸钠 0. 0588g,七水合硫酸镁0. 02645g,甘油10ml,加水定容至IOOml制得;(2)在灭菌冷却后的50mL营养肉汤培养基中,接入上述斜面培养24h的菌一环,在转速 200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养Mh ;(3)将50ml摇瓶培养后培养基接种入亚麻发酵培养基5L,在转速200r/min、温度40°C 条件下摇瓶培养24h得到发酵菌液;其中,亚麻发酵培养基配方为:果胶5g,KCl 0. 05g,磷酸氢二钾 0. lg, MgSO4O. 05g, FeSO4O. OOlg, (NH4)2SO4O. 5g,补水至 IOOml 定容;(4)将灭菌后的亚麻原茎与步骤C3)所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C,200rpm摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
3.根据权利要求2所述的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻脱胶中的应用,其特征在于:将步骤(3)所得发酵菌液于4°C,8000r/min离心,取上清液即为所得酶液,然后经DNS 比色法测定,酶液中果胶酶酶活力为214. 82U/mL,木聚糖酶酶活力为291.27U/ml,其在 pH6. 5-9. 0,50°C以下酶活较稳定。
4.如权利要求1所述的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻纱线前处理中的应用,包括:(1)纤维单胞菌DA8菌株保存于牛肉膏蛋白胨培养基,37°C 200rpm培养Mh,添加冻存缓冲液;所述的冻存缓冲液由磷酸二氢钾0. 0627g,磷酸氢二钾0.0177g,柠檬酸钠 0. 0588g,七水合硫酸镁0. 02645g,甘油10ml,加水定容至IOOml制得;(2)在灭菌冷却后的50mL营养肉汤培养基中,接入上述斜面培养24h的菌一环,在转速 200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养24h ;(3)将50ml摇瓶培养后培养基接种入亚麻发酵培养基5L,在转速200r/min、温度40°C 条件下摇瓶培养24h得到发酵菌液;其中,亚麻发酵培养基配方为:果胶5g,KCl 0. 05g,磷酸氢二钾 0. lg, MgSO4O. 05g, FeSO4O. OOlg, (NH4)2SO4O. 5g,补水至 IOOml 定容;(4)将灭菌后的亚麻纱线与步骤C3)所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C,200rpm 摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
5.根据权利要求4所述的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻纱线前处理中的应用,其特征在于:所述的亚麻纱线为亚麻粗纱或亚麻二粗。
6.如权利要求1所述的一种纤维单胞菌DA8菌株在亚麻织物煮练中的应用,包括:(1)纤维单胞菌DA8菌株保存于牛肉膏蛋白胨培养基,37°C 200rpm培养Mh,添加冻存缓冲液;所述的冻存缓冲液由磷酸二氢钾0. 0627g,磷酸氢二钾0.0177g,柠檬酸钠 0. 0588g,七水合硫酸镁0. 02645g,甘油10ml,加水定容至IOOml制得;(2)在灭菌冷却后的50mL营养肉汤培养基中,接入上述斜面培养24h的菌一环,在转速 200r/min、温度40°C条件下摇瓶培养Mh ;(3)将50ml摇瓶培养后培养基接种入亚麻发酵培养基5L,在转速200r/min、温度40°C 条件下摇瓶培养24h得到发酵菌液;其中,亚麻发酵培养基配方为:果胶5g,KCl 0. 05g,磷酸氢二钾 0. lg, MgSO4O. 05g, FeSO4O. OOlg, (NH4)2SO4O. 5g,补水至 IOOml 定容;(4)将灭菌后的亚麻织物与步骤C3)所得发酵菌液按浴比1 : 20混合,在40°C,200rpm 摇床中分别脱胶1〜4天,脱胶时间到时,除去脱胶液,在沸水浴中煮沸5min,用自来水冲洗数次以去除亚麻上的细菌,停止脱胶。
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