CN101979656B - 一种蹄甲肽的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蹄甲肽的提取方法，该方法采用健康猪的新鲜蹄甲为原料，经过清洗、烘干、粉碎、配水、升温蒸煮、酶解、灭酶、脱色、膜分离，将得到的滤液经干燥后即获蹄甲肽。本发明方法生产周期短、成本低、收率高（>35%）不产生任何有毒有害物质，而且所得产品安全性高，可广泛应用于食品、药品和保健品等领域。

Description

一种蹄甲肽的提取方法
技术领域
本发明方法涉及猪蹄甲的深加工技术领域，具体涉及一种蹄甲肽的提取方法，是一种以猪蹄甲为原料，通过生物酶解技术提取蹄甲肽的方法。
背景技术
猪蹄甲味咸、平，可以治疗咳嗽喘息、痔疮、白秃、冻疮。猪蹄甲中主要含角蛋白、肽类、氨基酸类、酯类、糖类、甾体化合物及无机盐等化学成分，其中一些成分具有明显的药理活性。对猪蹄甲的止血成分分析表明，其无机成分所含8种元素-钙、镁、磷、硼、铁、铜、锰和硅，均无止血作用；非蛋白质有机成分中的甾体类、酚类、糖类和氨基酸类物质亦无止血作用；而蛋白质成分含胶原蛋白、弹性蛋白和角蛋白，除胶原蛋白外，均与止血作用有关。对猪蹄甲粉酸水解后进行氨基酸及酸性多糖分析证实，猪蹄甲中含17种氨基酸，总含量为93.9％；其中必需氨基酸有7种，占总量27.9％；非必需氨基酸10种，占总量的66％；酸性多糖含量以氨基己糖计为0.85％。而蹄甲肽是猪蹄甲提取物，是角蛋白部分水解生成的多肽。可兴奋子宫，增加子宫收缩的频率和幅度，节律性地兴奋子宫肌，影响内膜的血管，使血管呈扩张和收缩的双相变化，从而改善“功血”的子宫内膜血管血流障碍；本品还可调节内分泌，通过促进肾上腺束状带分泌糖皮质激素，抑制纤维蛋白溶解，减少血管的通透性，稳定溶酶体膜等，从而改善或制止“功血”时出血。同蹄甲多肽相比，蹄甲肽人体能更好吸收，从而增加疗效，具有更加广阔的市场前景。
传统蹄甲肽的生产方法一般是：猪蹄甲清洗、烘干、粉碎、配水、碱提取(两次)、浓缩、烘干、粉碎。此工艺生产时间长，碱溶液使用量过大，操作繁琐，所用的产品分子量大，人体吸收率低，碱提取容易破坏药效成分。
总之，现有技术中提取蹄甲肽的传统工艺存在的问题有：碱用量大、操作繁琐、耗能高和收率偏低等。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供了一种蹄甲肽的提取方法，是一种以简化工艺、提高收率、节能省时和提高产品的安全性为目的的提取方法，该方法有巨大的工业化生产前景。
为了实现上述技术目的，本发明的一种蹄甲肽的提取方法的步骤如下：
1)、称取健康猪的新鲜蹄甲为原料，用35-45℃的水清洗并烘干；
2)、将烘干后的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)、向上述过筛后的粉碎物中加入原料重量的15-20倍的水，升温至95-100℃，蒸煮4-6h，再降温至50-55℃，调pH值为7-8，按原料重量的2-5％加入25U/mg的碱性蛋白酶，50-55℃下搅拌酶解4-6h，酶解过程中保持反应体系的pH值稳定；
4)、将得到的酶解液升温至92-95℃，保温10-20min灭酶；
5)、将酶解液趁热过滤，得上清液；
6)、上清液冷却至45-50℃，再按原料重量的2-2.5％加入粉末状活性炭，45-50℃下搅拌吸附1-1.5h，过滤除去活性炭；
7)、将过滤液用膜分离技术脱盐和浓缩；
8)、将所得浓缩液干燥，即得产品蹄甲肽。
与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效果如下：
1、采用本发明方法生产出来的蹄甲肽的总蛋白中分子量在1000道尔顿以下肽的含量达到95％以上，而小分子量的肽更利于人体吸收，本法所得产品的吸收率达90％以上，完善了传统的蹄甲多肽生产工艺，改善了人体吸收难的问题；
2、本发明方法中采用了活性炭脱色，既避免了有害物质在产品中的残留，又能保证产品的天然洁白度，所得产品为淡黄色均匀粉末；
3、采用本发明的膜分离技术，对液态物料进行分离、浓缩和纯化，均在常温下操作、无相态变化、高效节能，并且生产过程中不产生污染；
4、本发明方法的生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，安全，无毒副作用，可广泛用于食品、药品、保健品和生物合成等领域。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。
实施例1：
一种蹄甲肽的提取方法，其步骤如下：
1)取健康猪的新鲜蹄甲1kg，用40℃温水清洗两次，然后烘干；
2)将烘干的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)向上述过筛后的粉碎物中加入18kg纯水，升温至95℃，蒸煮6h，再降温至54℃，用食品级氢氧化钠调pH值为7-8，加入20g 25U/mg的碱性蛋白酶，54℃恒温搅拌酶解4h，酶解过程中用氢氧化钠保持反应体系的pH值稳定；
4)将得到的酶解液升温至92℃，保温20min灭酶；
5)将酶解液过滤，得上清液；
6)上清液冷却至45℃后加入20g粉末状活性炭，45℃搅拌吸附1.2h，然后过滤除去活性炭；
7)所得滤液经膜孔径为1nm的过滤机过滤以脱盐和浓缩，得浓缩液；
8)浓缩液经喷雾干燥后，得到355g淡黄色蹄甲肽，所得产品的蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的肽含量为95.8％。
所得产品的检测报告见表1。
表1实施例1所得产品的检测报告
  检测项目   标准规定   检测结果
  性状   淡黄色粉末   淡黄色粉末
  干燥失重   ≤10％   3.2％
  灰分   ≤10％   4.3％
  蛋白质含量   ≥80％   91.6％
  铅(以Pb元素计)   ＜1.0ppm   0.2ppm
pH值(10wt％水溶液) 7.0-8.0   7.3
  砷(以As元素计)   ＜0.5ppm   0.1ppm
  菌落总数   ＜1000cfu/g   ＜500cfu/g
  大肠菌群   ＜40MPN/100g   ＜15MPN/100g
  霉菌   ＜25cfu/g   ＜10cfu/g
  酵母菌   ＜25cfu/g   ＜5cfu/g
实施例2：
一种蹄甲肽的提取方法，其步骤如下：
1)取健康猪的新鲜蹄甲2kg，用35℃温水清洗两次，然后烘干；
2)将烘干的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)向上述过筛后的粉碎物中加入35kg纯水，升温至95℃，蒸煮5h，再降温至52℃，用食品级氢氧化钠调pH值为7-8，加入45g 25U/mg的碱性蛋白酶，52℃恒温搅拌酶解5h，酶解过程中用氢氧化钠保持反应体系的pH值稳定；
4)将得到的酶解液升温至95℃，保温10min灭酶；
5)将酶解液过滤，得上清液；
6)上清液冷却至48℃后加入43g粉末状活性炭，48℃搅拌吸附1h，然后过滤除去活性炭；
7)所得滤液经膜孔径为1nm的过滤机过滤以脱盐和浓缩，得浓缩液；
8)浓缩液经喷雾干燥后，得到705g淡黄色蹄甲肽，所得产品的蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的肽含量为95.5％。
所得产品的检测报告见表2。
表2实施例2所得产品的检测报告
  检测项目   标准规定   检测结果
  性状   淡黄色粉末   淡黄色粉末
  干燥失重   ≤10％   3.0％
  灰分   ≤10％   4.5％
  蛋白质含量   ≥80％   91.3％
  铅(以Pb元素计)   ＜1.0ppm   0.21ppm
pH值(10wt％水溶液) 7.0-8.0   7.5
  砷(以As元素计)   ＜0.5ppm   0.12ppm
  菌落总数   ＜1000cfu/g   ＜500cfu/g
  大肠菌群   ＜40MPN/100g   ＜15MPN/100g
  霉菌   ＜25cfu/g   ＜10cfu/g
  酵母菌   ＜25cfu/g   ＜5cfu/g
实施例3：
一种蹄甲肽的提取方法，其步骤如下：
1)取健康猪的新鲜蹄甲10kg，用45℃温水清洗两次，然后烘干；
2)将烘干的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)向上述过筛后的粉碎物中加入150kg纯水，升温至98℃，蒸煮5h，再降温至50℃，用食品级氢氧化钠调pH值为7-8，加入280g 25U/mg的碱性蛋白酶，50℃恒温搅拌酶解6h，酶解过程中用氢氧化钠保持反应体系的pH值稳定；
4)将得到的酶解液升温至93℃，保温18min灭酶；
5)将酶解液过滤，得上清液；
6)上清液冷却至45℃后加入220g粉末状活性炭，45℃搅拌吸附1.5h，然后过滤除去活性炭；
7)所得滤液经膜孔径为1nm的过滤机过滤以脱盐和浓缩，得浓缩液；
8)浓缩液经喷雾干燥后，得到3.55kg淡黄色蹄甲肽，所得产品的蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的肽含量为96.0％。
所得产品的检测报告见表3。
表3实施例3所得产品的检测报告
  检测项目   标准规定   检测结果
  性状   淡黄色粉末   淡黄色粉末
  干燥失重   ≤10％   3.5％
  灰分   ≤10％   4.0％
  蛋白质含量   ≥80％   92.0％
  铅(以Pb元素计)   ＜1.0ppm   0.18ppm
pH值(10wt％水溶液) 7.0-8.0   7.8
  砷(以As元素计)   ＜0.5ppm   0.11ppm
  菌落总数   ＜1000cfu/g   ＜500cfu/g
  大肠菌群   ＜40MPN/100g   ＜15MPN/100g
  霉菌   ＜25cfu/g   ＜10cfu/g
  酵母菌   ＜25cfu/g   ＜5cfu/g
实施例4：
一种蹄甲肽的提取方法，其步骤如下：
1)取健康猪的新鲜蹄甲100kg，用38℃温水清洗两次，然后烘干；
2)将烘干的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)向上述过筛后的粉碎物中加入2000kg纯水，升温至100℃，蒸煮4h，再降温至55℃，用食品级氢氧化钠调pH值为7-8，加入2.5kg 25U/mg的碱性蛋白酶，55℃恒温搅拌酶解4h，酶解过程中用氢氧化钠保持反应体系的pH值稳定；
4)将得到的酶解液升温至95℃，保温16min灭酶；
5)将酶解液过滤，得上清液；
6)上清液冷却至50℃后加入2.3kg粉末状活性炭，50℃搅拌吸附1h，然后过滤除去活性炭；
7)所得滤液经膜孔径为1nm的过滤机过滤以脱盐和浓缩，得浓缩液；
8)浓缩液经喷雾干燥后，得到35.2kg淡黄色蹄甲肽，所得产品的蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的肽含量为95.6％。
所得产品的检测报告见表4。
表4实施例4所得产品的检测报告
  检测项目   标准规定   检测结果
  性状   淡黄色粉末   淡黄色粉末
  干燥失重   ≤10％   3.0％
  灰分   ≤10％   4.2％
  蛋白质含量   ≥80％   91.8％
  铅(以Pb元素计)   ＜1.0ppm   0.19ppm
pH值(10wt％水溶液) 7.0-8.0   7.7
  砷(以As元素计)   ＜0.5ppm   0.12ppm
  菌落总数   ＜1000cfu/g   ＜500cfu/g
  大肠菌群   ＜40MPN/100g   ＜15MPN/100g
  霉菌   ＜25cfu/g   ＜10cfu/g
  酵母菌   ＜25cfu/g   ＜5cfu/g

Claims (2)

1.一种蹄甲肽的提取方法，其特征在于，步骤如下：
1)、称取健康猪的新鲜蹄甲为原料，用35-45℃的水清洗并烘干；
2)、将烘干后的猪蹄甲粉碎至全部过孔径为1.2mm的筛；
3)、向上述过筛后的粉碎物中加入原料重量的15-20倍的水，升温至95-100℃，蒸煮4-6h，再降温至50-55℃，调pH值为7-8，按原料重量的2-5％加入25U/mg的碱性蛋白酶，50-55℃下搅拌酶解4-6h，酶解过程中保持反应体系的pH值稳定；
4)、将得到的酶解液升温至92-95℃，保温10-20min灭酶；
5)、将酶解液趁热过滤，得上清液；
6)、上清液冷却至45-50℃，再按原料重量的2-2.5％加入粉末状活性炭，45-50℃下搅拌吸附1-1.5h，过滤除去活性炭；
7)、将过滤液用膜分离技术脱盐和浓缩；
8)、将所得浓缩液干燥，即得产品蹄甲肽，
所述的膜的孔径为1nm。
2.如权利要求1所述的一种方法，其特征在于：所述的干燥为喷雾干燥。
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