CN101973935A

CN101973935A - N-取代-3,5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备及应用

Info

Publication number: CN101973935A
Application number: CN 201010264048
Authority: CN
Inventors: 薛思佳; 王静; 倪振杰
Original assignee: Shanghai Normal University
Current assignee: Shanghai Normal University; University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2010-08-24
Filing date: 2010-08-24
Publication date: 2011-02-16
Anticipated expiration: 2030-08-24
Also published as: CN101973935B

Abstract

本发明属于抗白血病K562细胞增殖新药先导化合物，一类能有效抑制白血病K562细胞增殖的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮化合物的制备方法及其应用。本发明制备方法如下：将取代胺与丙烯酸甲酯经过Michael加成反应制成黄色油状物N，N-双(β-丙酸甲酯)取代胺；在醇钠作用下发生Dieckmann缩合，和酸作用下水解脱羧得到黄色油状物N-取代哌啶-4-酮；将所得产物脱水，得通式为(I)的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。本发明的优点是：本发明产品对白血病K562细胞的增殖具有较高的抑制活性；本发明方法工艺简单、生产容易。

Description

N-取代-3,5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备及应用

技术领域

本发明属于抗白血病K562细胞增殖新药先导化合物，具体地说是一类能有效抑制白血病K562细胞增殖的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮化合物的制备及其在抑制白血病K562细胞增殖活性中的应用。

背景技术

白血病是当今世界上死亡率最高的疾病之一，对人类的健康造成了严重的危害，我国白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位。慢性白血病，是临床上起病及发展相对缓慢的白血病，分为慢性髓细胞性白血病和慢性淋巴细胞白血病。慢性髓细胞性白血病，简称慢粒(Chronic Myelognous Leukemia，CML)，慢性髓细胞性白血病中的细胞系K562，因为其自身凋亡的抵抗力比其他细胞系强，因此在白血病的治疗过程中，抑制K562细胞的增殖是非常重要的手段。由于现有技术没有理想的高效抑制K562细胞增殖的药物，慢性髓细胞性白血病难以治愈。因此发明一种具有高效抑制白血病K562细胞增殖活性的新药先导化合物是十分必要的。

本发明制备的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮(I)类化合物，经测定具有高效抑制白血病K562细胞增殖的活性。实施例制备的编号为Ia，Id，Ie，Ig的化合物对白血病K562细胞增殖具有高效抑制活性，其IC₅₀值低于抗癌药5-氟尿嘧啶，具有极大的实用性。

发明内容

本发明目的是为了提供一类能有效抑制白血病K562癌细胞系增殖的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮类新药先导化合物。本发明目的是这样实现的：

N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮，用通式(I)表示：

其中：R¹为氢、甲基、甲氧基、氟、氯、溴中的一种；

R²为苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-溴苯基、4-氟苯基、2-四氢呋喃基、2-呋喃基、2-噻吩基、3-吡啶基、6-氯-3-吡啶基、5-氯-2-噻唑基等五元或六元取代杂环基中的一种；

R³为苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、4-硝基苯基、2-呋喃基中的一种。

N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备方法，步骤如下：

(1)将取代胺与丙烯酸甲酯经过Michael加成反应制成黄色油状物N，N-双(β-丙酸甲酯)取代胺；

(2)将步骤(1)产物在醇钠作用下发生Dieckmann缩合，和酸作用下水解脱羧得到黄色油状物N-取代哌啶-4-酮；

(3)将步骤(2)产物进行脱水反应，得通式为(I)的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。

步骤(1)中用甲醇作为溶剂。

步骤(2)中用甲醇钠作为缩合剂，用质量分数25％的盐酸溶液水解脱羧。

步骤(3)中用10％质量分数的NaOH溶液为反应试剂；用无水乙醇为溶剂，常温搅拌0.5h-2h即得N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。

N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮在抑制白血病K562癌细胞的增殖活性中的应用。

上述制备过程的反应式为：

Ia：R¹＝4-MeC₆H₄，R²＝H，R³＝C₆H₅If： R¹＝4-FC₆H₄，R²＝H，R³＝C₆H₅

Ib：R¹＝4-MeC₆H₄，R²＝H，R³＝4-Me-C₆H₄Ig：R¹＝4-BrC₆H₄，R²＝H，R³＝4-ClC₆H₄

Ic：R¹＝4-MeC₆H₄，R²＝H，R³＝4-OMe-C₆H₄ Ih：R¹＝C₆H₅，R²＝CH₃，R³＝C₄H₃O

Id：R¹＝4-MeC₆H₄，R²＝H，R³＝4-ClC₆H₄ Ii：R¹＝C₆H₅，R²＝CH₃，R³＝4-Me-C₆H₄

Ie：R¹＝4-MeC₆H₄，R²＝H，R³＝4-NO₂C₆H₄ Ij：R¹＝4-OMeC₆H₄，R²＝H，R³＝4-Me-C₆H₄

本发明的要点在于：

本发明制备方法步骤(1)中合成N，N-双(β-丙酸甲酯)取代胺采用甲醇作为溶剂，通过搅拌使反应在均相体系中进行，由于回流温度低，减少了高温副反应的发生，大大加快了反应进程。

本发明制备方法步骤(2)中合成N-取代-4-哌啶酮采用甲醇钠作为缩合剂，用质量分数25％的盐酸溶液将环合产物提取，令其进入水相后水解脱羧。

为了进一步使合成N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮(I)的反应条件得到优化，本发明选用10％质量分数的NaOH溶液代替浓盐酸作为反应试剂，不仅降低了成本，使后处理方便，而且起到了缩短反应时间的作用。

本发明步骤(3)中采用无水乙醇为溶剂，常温下搅拌0.5h-2h制得产物(I)。

本发明以取代胺和丙烯酸甲酯为原料，经过Michael加成，Dieckmann缩合，水解脱羧等反应合成中间体N-取代哌啶-4-酮，再将N-取代哌啶-4-酮与两分子芳香醛发生反应脱去两分子水得相应N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮类化合物，设计合成了通式为(I)的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶 -4-酮新药先导化合物，具有明显的新颖性和创造性；本发明测定了该新药先导化合物对白血病K562癌细胞系增殖的抑制活性，在现代医药生产中具有显著的实用性。

本发明的优点是：

1、本发明N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮对白血病K562细胞的增殖具有较高的抑制活性。

2、本发明方法工艺简单、生产容易。

附图说明

图1为本发明通式(I)化合物对白血病K562细胞系增殖的抑制作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明的技术特点。

含有N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮类的抗白血病K562细胞增殖医药先导化合物，通式为：

其中：R¹为氢、甲基、甲氧基、氟、氯、溴中的一种；R²为苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-溴苯基、4-氟苯基、2-四氢呋喃基、2-呋喃基、2-噻吩基、3-吡啶基、6-氯-3-吡啶基、5-氯-2-噻唑基等五元或六元取代杂环基中的一种；R³为苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、4-硝基苯基、2-呋喃基中的一种。

本发明实例例制备的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮类的抗白血病K562细胞增殖医药先导化合物是：

(Ia)N-(4-甲基苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮；

(Ib)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮；

(Ic)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲氧基苄叉基)哌啶-4-酮；

(Id)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮；

(Ie)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-硝基苄叉基)哌啶-4-酮；

(If)N-(4-氟苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮；

(Ig)N-(4-溴苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮；

(Ih)(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(呋喃亚甲基)哌啶-4-酮；

(Ii)(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮；

(Ij)N-(4-对甲氧基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮；

实施例1：制备(Ia)N-(4-甲基苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。

室温下，向100mL三颈瓶中加入0.16mol丙烯酸甲酯和7mL甲醇，搅拌，将0.04mol对甲基苄胺和4mL甲醇的混合液慢慢加入三颈瓶中，使反应体系温度不超过50℃。滴加完毕后，再加热回流8h，待反应结束后，回收甲醇和未反应的丙烯酸甲酯，减压蒸馏，得到浅黄色油状液体N，N-双(β-丙酸甲酯)对甲基苄胺(2a)。

向250mL干燥的三颈瓶中加入15mL无水甲苯、0.122mol金属钠搅拌加热回流，加入0.2mL无水甲醇，然后慢慢滴加0.04mol N，N-双(β-丙酸甲酯)对甲基苄胺(2a)和20mL无水甲苯混合液。待滴加完毕后，回流6h。反应结束后冷却至室温，加入10mL甲醇除去未反应完的Na，将混合物用120mL质量分数25％的盐酸溶液提取，油浴回流6h。冷却反应混合物，搅拌下加入浓NaOH溶液中和至pH＝8.5，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥，蒸馏回收乙酸乙酯，减压蒸馏剩余物质，得到淡黄色油状液体N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)。

向50mL干燥的圆底瓶中加入0.005mol N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)和0.01mol苯甲醛，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL质量分数为10％的NaOH，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-甲基苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮(Ia)。

Yield：77％；yellow solid，mp 168-170℃；1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.22(s，3H)，4.43(s，2H)，4.56(s，4H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)，7.41(d，J＝7.8Hz，2H)，7.46-7.50(m，10H)，7.92(s，2H)；IR(KBr)：3055，2139，1600，1569，1436，1265，1181，990，818，763cm^-1；Anal.calcd.for C₂₇H₂₅NO C％85.45，H％6.64，N％3.69；Found：C％85.22，H％6.76，N％3.50。

实施例2：制备(Ib)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮。

由实施例1的制备方法得到的N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)，取N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)0.005mmol和0.01mol对甲基苯甲醛混合在50mL干燥的圆底瓶中，加入15mL的无水乙醇，搅拌中加入1mL 10％NaOH，40min后有固体析出。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮(Ib)。

Yield：82％；yellow solid，mp 170-171℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.28(s，3H)，2.36(s，6H)，3.66(s，2H)，3.83(s，4H)，7.04(d，J＝7.8Hz，2H)，7.13(d，J＝7.9Hz，2H)，7.17(d，J＝8.0Hz，4H)，7.25(d，J＝8.1Hz，4H)，7.76(s，2H)；IR (KBr)：2916，2745，1670，1613，1578，1558，1264，1180，1072，813em^-1；Anal.calcd.for C₂₉H₂₉NOC％85.30，H％7.64，N％3.69；Found：C％85.47，H％7.17，N％3.44.

实施例3：制备(Ic)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲氧基苄叉基)哌啶-4-酮。

由实施例1的制备方法得到的N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)，取N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)0.005mmol和0.01mol对甲氧基苯甲醛混合在50mL圆底瓶中，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL质量分数为10％NaOH，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-甲氧基苄叉基)哌啶-4-酮(Ic)。

Yield：87％；yellow solid，mp 172-174℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.28(s，3H)，3.66(s，2H)，3.84(s，4H)，3.91(s，6H)，7.04(d，J＝7.8Hz，2H)，7.13(d，J＝7.9Hz，2H)，7.25(d，J＝8.3Hz，4H)，7.42(d，J＝8.4Hz，4H)，7.80(s，2H)；IR(KBr)：2934，2835，1664，1600，1510，1303，1255，1171，1033，827cm^-1；Anal.calcd.for C₂₉H₂₉NO3C％79.30，H％6.64，N％3.49；Found：C％79.24，H％6.65，N％3.19.

实施例4：制备(Id)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮。

由实施例1的制备方法得到的N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)，取N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)0.005mmol和0.01mol对氯苯甲醛混合在50mL圆底瓶中，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL 10％NaOH(质量分数)，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮(Id)。

Yield：85％；yellow solid，mp 182-184℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.23(s，3H)，3.66(s，2H)，3.79(s，4H)，7.04(d，J＝8.7Hz，2H)，7.13(d，J＝8.7Hz，2H)，7.22(d，J＝8.0Hz，4H)，7.35(d，J＝8.0Hz，4H)，7.72(s，2H)；IR(KBr)：2806，2744，668，1613，1578，1488，1263，1186，1095，821cm^-1；Anal.calcd.for C₂₇H₂₃Cl₂NO C％73.30，H％5.64，N％3.23；Found：C％72.32，H％5.17，N％3.12.

实施例5：制备(Ie)N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-硝基苄叉基)哌啶-4-酮。

由实施例1的制备方法得到的N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)，取N-对甲基苄基哌啶-4-酮(4a)0.005mol和0.01mol对硝基苯甲醛混合在50mL圆底瓶中，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL质量分数10％NaOH，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇重结晶，得到N-(4-甲基苄基)-3，5-双(4-硝基苄叉基)哌啶-4-酮(Ie)。

Yield：70％；yellow solid，mp 190-192℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.23(s，3H)，3.62(s，2H)，3.83(s，4H)，7.06(d，J＝7.8Hz，2H)，7.15(d，J＝7.9Hz，2H)，7.52(d，J＝8.6Hz，4H)，7.91(s，2H)，8.23(d，J＝8.6Hz，4H)，；IR(KBr)：3128，2815，1671，1596，1515，1341，1262，1109，1005，854cm^-1；Anal.calcd.for C₂₇H₂₃N₃O₅.C％69.10，H％4.96，N％8.93；Found：C％69.07，H％4.94，N％8.95.

实施例6：制备(If)N-(4-氟苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。

同实施例1的制备方法，把对甲基苄胺换成对氟苄胺，在相同的条件下得到N-对氟苄基哌啶-4-酮(4f)。

向50mL干燥的圆底瓶中加入0.005mol N-对氟苄基哌啶-4-酮(4f)和0.01mol苯甲醛，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL10％NaOH(质量分数)，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-氟苄基)-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮(If)。

Yield：78％；yellow solid，mp 146-148℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.66(s，2H)，3.85(s，4H)，6.87-6.92(m，2H)，7.18-7.21(m，2H)，7.33-7.41(m，10H)，7.83(s，2H)；IR(KBr)：3128，2993，1669，1615，1508，1268，1222，1193，998，765cm^-1；Anal.calcd.for C₂₆H₂₂FNO.C％81.30，H％5.64，N％3.53；Found：C％81.44，H％5.78，N％3.65.

实施例7：制备(Ig)N-(4-溴苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮。

同实施例1的制备方法，把对甲基苄胺换成对溴苄胺，在相同的条件下得到N-对溴苄基哌啶-4-酮(4g)。

向50mL干燥的圆底瓶中加入0.005mol N-对溴苄基哌啶-4-酮(4g)和0.01mol对氯苯甲醛，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL 10％NaOH(质量分数)，室温搅拌20min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-溴苄基)-3，5-双(4-氯苄叉基)哌啶-4-酮(Ig)。

Yield：79％；yellow solid，mp 186-188℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.65(s，2H)，3.79(s，4H)，7.12(d，J＝8.4Hz，2H)，7.23-7.24(m，2H)，7.26-7.37(m，8H)，7.74(s，2H)；IR(KBr)：2822，1605，1489，1456，1264，1264，1180，1095，1003，817cm^-1；Anal.calcd.forC₂₆H₂₀BrCl₂NO C％60.80，H％3.93，N％2.83；Found：C％60.84，H％3.93，N％2.73.

实施例8：制备(Ih)(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(呋喃亚甲基)哌啶-4-酮。

同实施例1的制备方法，把对甲基苄胺换成(±)-(1-苯乙基)胺，在相同的条件下得到(±)-N-(1-苯乙基)哌啶-4-酮(4h)。

向50mL干燥的圆底瓶中加入0.005mol(±)-N-(1-苯乙基)哌啶-4-酮(4h)和0.01mol糠醛，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL 10％NaOH(质量分数)，室温搅拌20min，有橙色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(呋喃亚甲基)哌啶-4-酮(Ih)。

Yield：87％；orange solid，mp 133-134℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.49(d，J＝6.7Hz，3H)，3.77(q，J＝6.7Hz，1H)，3.98-3.40(m，4H)，6.46-6.48(m，2H)，6.55(d，J＝3.4Hz，2H)，7.21-7.36(m，5H)，7.48-7.53(m，4H)；IR(KBr)：3128，2992，1605，1578，1471，1327，1267，1087，881，762cm^-1；Anal.calcd.for C₂₃H₂₁NO₃.C％76.80，H％5.93，N％3.83；Found：C％76.86，H％5.89，N％3.90.

实施例9：制备(Ii)(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮。

由实施例8制备得到的(±)-N-(1-苯乙基)哌啶-4-酮(4h)，取(±)-N-(1-苯乙基)哌啶-4-酮(4h)0.005mol与0.01mol对甲基苯甲醛，混合物中加入15mL无水乙醇，搅拌加入1mL 10％NaOH(质量分数)，室温搅拌20min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到(±)-N-(1-苯乙基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮(Ii)。

Yield：85％；yellow solid，mp 143-144℃；1H NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.33(d，J＝6.7Hz，3H)，2.37(s，6H)，3.32(q，J＝6.7Hz，1H)，3.86(q，J＝15.2Hz，4H)，7.16-7.26(m，13H)，7.77(s，2H)；IR(KBr)：3128，2992，1672，1615，1580，1509，1262，1180，990，816cm^-1；Anal.calcd.for C₂₉H₂₉NO.C％85.50，H％7.23，N％3.44；Found：C％85.47；H％7.17；N％3.44.

实施例10：制备(Ij)N-(4-对甲氧基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮。

同实施例1的制备方法，把对甲基苄胺换成对甲氧基苄胺，在相同的条件下得到N-对甲氧基哌啶-4-酮(4j)。

向50mL干燥的圆底瓶中加入0.005mol N-对甲氧基哌啶-4-酮(4j)和0.01mol对甲基苯甲醛，加入15mL无水乙醇，搅拌加入1ml 10％NaOH(质量分数)，室温搅拌30min，有黄色固体析出，薄层色谱(TLC)跟踪反应进程。待反应结束后，用乙醇洗固体，用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到N-(4-对甲氧基)-3，5-双(4-甲基苄叉基)哌啶-4-酮(Ij)。

Yield：77％；yellow solid，mp 129-130℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 3.64(s，2H)，3.74(s，3H)，3.84(s，4H)，6.75(d，J＝8.7Hz，2H)，7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，7.31-7.40(m，10H)，7.80(s，2H)；IR(KBr)：2990，2828，1671，1615，1587，1508，1446，1284，939，768cm^-1；Anal.calcd.for C₂₉H₂₉NO₂：C％82.20，H％6.95，N％3.30；Found：C％82.24，H％6.90，N％3.31.

实施例11：

抗白血病K562活性测试。

1.测试药剂及设备：

实验药品与试剂：自制通式化合物(I)，用DMSO配至所需浓度(DMSO浓度≤1‰)，灭菌4℃保存。MTT(四甲基偶氮唑蓝)试剂购自Sigma公司；人白血病K562细胞购于上海中科院细胞库。10％SDS试剂(Sino-AmericanBiotechnology产品)，用含20％小牛血清(FBS)的RPMI-1640(美国GiBCo公司)培养液，其它试剂为市售分析纯。在37℃、5％CO₂、饱和湿度的培养箱中进行传代培养，待细胞处于对数生长期时用于实验。

仪器设备：超净工作台，洁净＜3.5粒/L(＞0.5μm尘粒)，安泰技术有限公司；CO₂细胞培养箱，Thermo公司Forma Scientific，Inc；倒置显微镜，日本尼康(Nikon)公司，型号810818；酶联免疫检测仪，Bio-RAD Model680；96孔平板，美国Costar公司；SK2200H型超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司。

2.试验方法：

实验在96孔板中进行，体系含1×10⁵细胞及不同浓度的目标化合物全培养液。每孔总体积100μL，每组8个复孔，设置药物颜色对照孔(不合细胞)和含细胞与药物的培养孔，分别培养44h后，在各孔中加入MTT(5mg/mL，10μL)，继续培养4h，再加入10％SDS 100μL终止反应，37℃过夜，用酶联免疫检测各孔在570nm的吸光度A值。并依下式计算肿瘤生长抑制率：

3.结果调查

用MTT法测N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮(I)对白血病K562细胞系增殖的影响，抑制率见图1，IC₅₀值见表1。

表1：标题化合物I抑制K562的IC₅₀值

注：b(±)-.

从图1、表1初步抗白血病K562活性测定显示：标题化合物对白血病K562癌细胞增殖具有较好的抑制作用。化合物对白血病K562癌细胞增殖的抑制率随着浓度的升高而升高，如图1所示，大部分目标化合物在100μg/mL时对白血病K562癌细胞的抑制率明显高于同浓度临床抗白血病药物5-氟尿嘧啶(5-FU)，抑制效果达到＞80％。表1所示，目标化合物的IC₅₀在5.8-44.2μg/mL之间并且存在着显著性差异，Ig是系列化合物中最有抗白血病K562潜在活性的化合物，其IC₅₀值为5.8μg/mL，对白血病K562细胞增殖具有较高的抑制活性。

上述本发明的实施例，并不用于限制本发明。对于本领域的技术人员来说，本发明产品的制备方法可以有变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的等同替换，改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims

1.N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮，用通式(I)表示：

其中：R¹为氢、甲基、甲氧基、氟、氯、溴中的一种；

2.N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备方法，步骤如下：

3.根据权利要求2所述的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备方法，其特征在于：步骤(1)中用甲醇作为溶剂。

4.根据权利要求2所述的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备方法，其特征在于：步骤(2)中用甲醇钠作为缩合剂，用质量分数25％的盐酸溶液水解脱羧。

5.根据权利要求2所述的N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮的制备方法，其特征在于：步骤(3)中用10％质量分数的NaOH溶液为反应试剂；用无水乙醇为溶剂，常温搅拌0.5h-2h即得N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮。

6.N-取代-3，5-双苄叉基哌啶-4-酮在抑制白血病K562癌细胞的增殖活性中的应用。