CN101965927B

CN101965927B - 一种斑马鱼鱼苗开口饲料

Info

Publication number: CN101965927B
Application number: CN201010514931A
Authority: CN
Inventors: 张勇; 彭恩泽
Original assignee: Hangzhou Hunter Biotechnology Inc
Current assignee: HANGZHOU HUNTER BIOTECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2010-10-21
Filing date: 2010-10-21
Publication date: 2012-09-05
Anticipated expiration: 2030-10-21
Also published as: CN101965927A

Abstract

目前，国内外并没有专门的斑马鱼鱼苗开口饲料，一些国外饲料公司生产的小型鱼鱼苗开口饲料也比较适合用作斑马鱼鱼苗开口饲料，但喂食斑马鱼鱼苗的效果不理想，饲料的适口性不好，斑马鱼鱼苗的进食积极性不高。本发明提供了一种斑马鱼鱼苗开口饲料，其特征在于它含有以下重量百分含量的组分：鱼粉30~35%，虾粉25~30%，玉米粉10~15%，大豆多肽5~10%，猪脑粉3~5%，鱼油5~8%，椰子油3~5%，葵花籽油3~5%，海藻粉2~3%，啤酒花粉0.2~0.3%，磷酸氢钙0.5~1%。使用本发明提供的斑马鱼鱼苗开口饲料，极大地提高了斑马鱼鱼苗的成活率，并降低了斑马鱼的养殖成本。

Description

一种斑马鱼鱼苗开口饲料

技术领域

本发明涉及水产饲料领域，尤其涉及一种斑马鱼鱼苗开口饲料。

背景技术

斑马鱼(Zebrafish)属于鲤科、丹尼属，是一种热带淡水鱼，原产于印度、孟加拉等国，又名蓝条鱼、花条鱼。斑马鱼具有繁殖能力强、体外受精和发育、胚胎透明、性成熟周期短、个体小、易养殖等优点，现在已经成为发育学研究、基因毒性研究、药物筛选、毒理学研究、环境毒性分析等众多研究领域的一个重要模式生物。

斑马鱼体型较小，刚孵化出来的斑马鱼鱼苗体长不足5mm，成鱼体长一般也只有3～5cm。斑马鱼从受精卵开始的发育大致可以分为以下几个阶段：胚胎期(0～48小时)，鱼苗期(3天～20天)，幼鱼期(21天～90天)，成鱼期(90天以后)。斑马鱼一般在第5天就具备了吞咽能力，但前6天不需要进食，因为卵黄囊提供的营养可以满足鱼苗的生长需要；第7天卵黄囊消失，斑马鱼必须通过从外界摄食来获得生长所需的营养物质。一般把鱼苗第一次摄食到开始摄食后一段时间内所吃的饲料叫做开口饲料，鱼苗从依靠体内营养物质到从外界摄食有一个适应过程，只有合适的开口饲料才能符合鱼苗的进食习惯并满足鱼苗生长的营养需要。斑马鱼鱼苗一般在第7～20天需要喂食开口饲料，第21天之后可以喂食成鱼饲料。

目前对斑马鱼的营养需求还缺乏系统、全面的研究，无法得知斑马鱼鱼苗开口饲料中的营养成分应该满足那些指标。结果表明，一般热带淡水鱼饲料中的常规营养成分应该满足以下指标(质量百分比)：粗蛋白≥42％，粗脂肪≥4％，粗纤维≤4％，粗灰分≤12％，水分≤5％，0.8％≤磷≤1.7％，0.9％≤钙≤1.6％.斑马鱼鱼苗生长阶段对营养物质和能量的需求比成鱼要高，因此斑马鱼鱼苗开口饲料中的蛋白和脂肪含量应该高于以上指标，矿物质和维生素也必不可少。

除了营养成分之外，斑马鱼鱼苗开口饲料还必须具备很好的适口性，即符合斑马鱼鱼苗的摄食习惯，这样才能诱使鱼苗进行摄食。饲料大小，首次开口摄食的斑马鱼鱼苗最大口径仅为100μm，其最适的开口饲料大小以30～50μm为宜。饲料的悬浮性，斑马鱼是翘嘴鱼，容易捕食在上层水域中的漂浮食物和悬浮的食物，不易捕食水底的食物，所以其饲料更应具有较好的悬浮性。饲料气味，斑马鱼鱼苗摄食对嗅觉依赖较大，所以饲料应该具有较好的诱食性。

另外，斑马鱼的最适养殖水温在28℃左右，在这种温度下，水体中很容易滋生一些危害斑马鱼健康的微生物和原生动物，这些病菌和寄生虫的生长会导致斑马鱼鱼苗的大量死亡。因此，斑马鱼鱼苗开口饲料必须具备较好抑菌效果并能增强鱼苗的免疫能力。

目前，国内外并没有专门的斑马鱼鱼苗开口饲料，不过有一些国外饲料公司生产的小型鱼鱼苗开口饲料也比较适合用作斑马鱼鱼苗开口饲料，像美国的Argent Laboratories公司生产的Hatchfry Encapsulon Grade O，Zeigler公司的Larval AP100和日本的MiyakoKagaku公司生产的Fry Feed Kyowa N-250等。但这些国外公司的饲料价格很昂贵，像Argent Laboratories公司生产的500g包装的Hatchfry Encapsulon Grade O在美国的售价高达54美元；而且，这些公司的饲料现在在国内都没有销售。美国AHT公司生产的小型鱼鱼苗开口饲料在国内有销售，价格也适中，但该饲料喂食斑马鱼鱼苗的效果不理想，饲料的适口性不好，斑马鱼鱼苗的进食积极性不高。

国内现在的斑马鱼鱼苗开口饲料一般都是养殖者自制的，主要有三种：蛋黄水、草履虫和鱼颗粒饲料粉碎得到的微粒饲料。蛋黄水是普通小型观赏鱼爱好者最常用的开口饲料，来源方便、成本低廉、营养丰富，但用于热带鱼喂养时存在容易污染水质、水体易滋生病菌的问题，鱼苗成活率一般不足10％。草履虫也是一种常见的小型鱼活饵开口饲料，易被斑马鱼鱼苗捕食、容易消化、水质污染小，但草履虫培养过程中容易滋生一些危害鱼苗健康的病菌和原生动物，所以对培养条件要求较高，需要保持较好的无菌条件，收集和清洗也较为麻烦。鱼颗粒饲料粉碎后制得的微粒饲料大小比较适合斑马鱼鱼苗进食，保存方便；但普通饲料的营养成分不能很好地满足斑马鱼鱼苗的生长需要，鱼苗的进食积极性不高，而且容易导致水质变坏，鱼苗成活率一般不高于20％。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种营养均衡、适口性好、安全可靠、水质污染小的斑马鱼鱼苗开口饲料，达到提高斑马鱼鱼苗的成活率、降低斑马鱼养殖成本的目的。

本发明所述的斑马鱼鱼苗开口饲料，其组分和重量配比如下：

鱼粉 30～35％虾粉 25～30％

玉米粉 10～15％大豆多肽 5～10％

猪脑粉 3～5％鱼油 5～8％

椰子油 3～5％葵花籽油 3～5％

海藻粉 2～3％啤酒花粉 0.2～0.3％

磷酸氢钙 0.5～1％辅助成分 0.1～0.2％

其中辅助成分包括复合矿物质、免疫多糖和复合低聚糖，每1000g饲料中的添加量如下：

复合矿物质：FeSO₄·H₂O 90～120mg，CuSO₄·5H₂O 7～10mg，MnSO₄·H₂O 30～50mg，MgSO₄·7H₂O 600～1200mg，ZnSO₄·H₂O 50～80mg，KI 0.5～1.0mg，，Na₂Se₂O₃ 10～15mg；

免疫多糖：β-葡聚糖150～200mg，甘露聚糖80～120mg，果寡糖30～50mg；

复合低聚糖：麦芽低聚糖50～80mg，果糖低聚糖20～35mg。

本发明提供的斑马鱼鱼苗开口饲料营养丰富、安全可靠。

鱼粉和虾粉含有较高的天然粗蛋白，大豆多肽中则含有丰富大豆蛋白水解多肽，能为鱼苗生长提供各种必需氨基酸；粗蛋白和水解多肽的合理搭配既有利于鱼苗对氨基酸的吸收，又不会减弱鱼苗对蛋白的消化能力。玉米粉不仅可以提供鱼苗生长所需的能量，也含有较多的不饱和脂肪酸；鱼油、葵花籽油和椰子油中也含有丰富的饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸和中链脂肪酸，可以完全满足鱼苗生长过程中对脂肪酸的需求。饲料中不仅含有钙、磷、铁等矿物质，也含有锌、硒、钴等微量元素。原料的多样性也保证了饲料含有丰富的维生素。

本发明饲料配方的创新之处在于选择猪脑粉作为主要的磷脂来源。猪脑粉的原料为新鲜猪脑，来源广泛，安全可靠，目前已有商业化产品销售。猪脑中含有较多的脑磷脂，有利于促进鱼苗大脑和脑部神经发育，增强其摄食能力。另外，猪脑中含有多种矿物质、几乎所有种类的氨基酸和除维生素A以外的各种维生素，可以为鱼苗的生长提供丰富的营养；猪脑粉的独特气味也具有较好的诱食性。虽然蛋黄粉和大豆粉作为常见的饲料原料，也都可以作为磷脂来源，但是如果用作鱼苗开口饲料的原料，它们都有明显的不足之处：在蛋鸡的养殖过程中要使用大量的添加剂和抗生素，这使得蛋黄粉作为鱼苗开口饲料的安全性很难得到保证。大豆粉中的磷脂种类齐全但含量较低；另外，与猪脑粉相比，大豆粉的诱食性较差。

本发明饲料配方的另一个创新之处在于添加了一种新的天然抗菌成分：啤酒花粉。啤酒花粉由多年生茎蔓草本植物啤酒花制得，目前国内市场已有成品销售。啤酒花，学名蛇麻花，生长分布广泛，获取方便，是啤酒酿造必不可少的原料之一。啤酒花中所含有的律草酮、蛇麻酮、聚蛇麻酮、香叶烯和律草烯等活性物质具有很好的抑菌效果，研究表明其抑菌效果主要表现在两个方面：一是能有效抑制肠道病菌生长，减少动物消化道疾病；二是对包括结核分支杆菌在内的多数分支杆菌具有明显的抑菌效果，能降低斑马鱼呼吸系统疾病的发病率。斑马鱼养殖中最常见的病菌是分支杆菌，其中的结核分支杆菌对斑马鱼和人都具有致病性；饲料中添加啤酒花不仅有利于催进斑马鱼的健康，也能降低养殖人员感染疾病的风险。另外，斑马鱼没有胃，其消化系统对肠道益生菌的依赖较大；啤酒花可以通过抑制肠道致病菌的生长来维持肠道益生菌群落的稳定，减少斑马鱼肠道疾病的发生。

此外，饲料中添加的椰子油含有丰富的中链脂肪酸，能够有效抑制由细菌、病毒和寄生虫感染引起的多种鱼病；免疫多糖和低聚糖提高人和动物(包括鱼类)的机体免疫能力的作用也已经得到了广泛的证实。因此，本饲料中所含有的天然成分在抑制病菌的同时能增强鱼苗的免疫能力，不仅有效而且安全。

将本发明所提供的饲料采用微囊化工艺进行生产，生产出微粒大小在30μm左右的饲料，即可得到斑马鱼鱼苗开口饲料。微囊饲料具有悬浮性好、防腐性好、水质污染小、营养物质析出少但又不遮蔽气味散发等优点，很符合斑马鱼鱼苗的摄食习惯。饲料的微囊化生产工艺已经较为成熟，在此不做详细阐述，仅在实施例中加以说明。

综上所述，本发明提供的斑马鱼鱼苗开口饲料具有营养丰富、安全可靠、原料易得、不易变质、水质污染小等优点；使用本发明提供的斑马鱼鱼苗开口饲料，极大地提高了斑马鱼鱼苗的成活率，并降低了斑马鱼的养殖成本。

以下通过具体实施例对本发明作进一步阐述。

具体实施方式

实施例1

斑马鱼鱼苗开口饲料的组分和重量配比如下：

鱼粉 30～35％虾粉 25～30％

玉米粉 10～15％大豆多肽 5～10％

猪脑粉 3～5％鱼油 5～8％

椰子油 3～5％葵花籽油 3～5％

海藻粉 2～3％啤酒花粉 0.2～0.3％

磷酸氢钙 0.5～1％辅助成分 0.1～0.2％

复合低聚糖：麦芽低聚糖50～80mg，果糖低聚糖20～35mg。

斑马鱼鱼苗开口饲料的制作步骤如下：

(一)称取鱼粉140g、虾粉100g、玉米粉50g、大豆多肽30g、猪脑粉14g海藻粉10g、啤酒花粉1g，共345g，混合后进行超微粉碎，粉碎粒径：25～30μm。

(二)溶解50g蔗糖酯于1000ml灭菌处理的自来水中，制成5％的蔗糖酯乳化液。

(三)将粉碎后的混合原料345g、鱼油20g、椰子油20g、葵花籽油12g、磷酸氢钙2g、辅助成分0.6g，共计400g饲料原料加入到步骤(二)制得的1000ml蔗糖酯乳化液中，加样的同时进行搅拌，得到原料乳浊液。

(四)称取100g明胶，用冷水浸泡60分钟；将浸泡后的明胶全部加入到1000ml灭菌处理的自来水，同时加入50g麦芽糊精，60℃搅拌溶解，制成15％的水溶胶；冷却至室温备用。

(五)将步骤(三)制得的原料乳浊液加入到步骤(四)制得的水溶胶中，二者的体积比为1∶1，加样的同时进行搅拌；制得2000ml质量浓度比为30％的混合乳浊液，用匀质器充分匀质。

(六)在进料速度为500毫升/小时，进风口温度为195℃，出风口温度为85℃，压缩空气压强为1MPa的条件下将步骤(五)制得的2000ml混合乳浊液进行喷雾干燥。

(七)用分离器收集喷雾干燥得到的饲料，自然冷却后，筛选粒径在25～35μm的颗粒饲料并包装。

上述饲料所用的各原料用量可以根据配方作适当调整。

实施例2 不同饲料投加到水体后的性状变化比较

实验所用饲料包括：鸡蛋黄粉、微粒饲料、开口饲料。鸡蛋黄粉是从市场购买的成品；微粒饲料是将从市场购买的热带鱼颗粒饲料进行超微粉碎所得，粉碎粒径：≤30μm；开口饲料即为本发明提供的斑马鱼鱼苗开口饲料(后面实施例中提到鸡蛋黄粉、微粒饲料、开口饲料与本实施例相同)。

在容积为3L的养鱼缸内加入1L的斑马鱼养殖用水，静置，每个鱼缸内加入约5mg饲料(以饲料扩散后覆盖整个水面为准)。观察水温为28℃时，饲料投加后的沉底时间、水体变混浊时间、鱼缸底部长菌时间。结果见表1。

从表中数据可以看出，与鸡蛋黄粉和微粒饲料相比，开口饲料在漂浮性能、减少水质污染和抑制细菌生长方面都具有明显的优势。

表1 不同饲料投加到水体后的性状变化比较

实施例3 喂食不同饲料时的斑马鱼鱼苗成活率1

斑马鱼鱼苗在第6～7天时需要从外界获取食物，本实验选择在第6天时给鱼苗喂食。从3组不同成鱼(分别记作Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)繁殖的鱼苗中各挑出300尾发育正常斑马鱼，平均分成3组，一共9组(分别记作Ⅰ₁、Ⅰ₂、Ⅰ₃，Ⅱ₁、Ⅱ₂、Ⅱ₃，Ⅲ₁、Ⅲ₂、Ⅲ₃)，每组各有鱼苗100尾。

在容积为3L的养鱼缸内加入600ml(水深约3cm)的斑马鱼养殖用水，一共9缸，将上述9组鱼分别放入其中一缸，水温28℃，静置喂养。从第6天起每天喂食3次(9:00，12:30，16:00)，单个鱼缸每次的喂食量约5mg，其中Ⅰ₁、Ⅱ₁、Ⅲ₁喂食鸡蛋黄粉，Ⅰ₂、Ⅱ₂、Ⅲ₂喂食微粒饲料，Ⅰ₃、Ⅱ₃、Ⅲ₃喂食开口饲料。每天更换鱼缸内约2/3体积的水，从第10天起鱼缸内养殖用水加到1000ml(水深约5cm)，从第15天起鱼缸内养殖用水加到2000ml(水深约10cm)。每天将鱼缸内的死鱼捞出并计数，分别统计各鱼缸内鱼苗在第10天、第15天和第21天的存活率。结果见表2。

表2 喂食不同饲料时的斑马鱼鱼苗成活率1

到第21天时，鸡蛋黄粉实验组鱼苗成活率为0～2％，微粒饲料实验组鱼苗成活率为12～15％，开口饲料实验组鱼苗成活率为54～57％；开口饲料明显优于微粒饲料和鸡蛋黄粉。这是由水质和饲料营养两个因素决定的。即使每天换水，鸡蛋黄粉实验组鱼缸水体仍然较为混浊，鱼缸底部有大量菌体生长；微粒饲料实验组鱼缸水体较为清澈，底部有少量菌体生长；开口饲料实验组鱼缸水体清澈，底部几乎没有菌体生长。第15天时鸡蛋黄粉实验组大部分鱼苗发生躯干弯曲，微粒饲料实验组部分鱼苗发生躯干弯曲，开口饲料实验组鱼苗没有发生躯干弯曲；这种躯干弯曲俗称“塌腰”，是鱼苗发育过程中营养不良的典型症状。

实施例4 喂食不同饲料时的斑马鱼鱼苗成活率2

斑马鱼鱼苗的分组、换水条件以及前9天的喂养条件与实施例3相同。从第10天起，每天中午给鱼苗加喂一次新鲜的丰年虾幼虫。每天将鱼缸内的死鱼捞出并计数，分别统计各鱼缸内鱼苗在第10天、第15天和第21天的成活率，结果见表3。

表3 喂食不同饲料时斑马鱼鱼苗的成活率2

到第21天时，鸡蛋黄粉实验组鱼苗成活率为14～17％，微粒饲料实验组鱼苗成活率为21～26％，开口饲料实验组鱼苗成活率为52～61％.。对比实施例3的实验结果发现，加喂丰年虾幼虫能显著提高鸡蛋黄粉实验组和微粒饲料实验组的鱼苗成活率，但并没有显著提高开口饲料实验组鱼苗成活率。第15天时鸡蛋黄粉实验组鱼苗只有少数发生躯干弯曲，微粒饲料和开口饲料实验组鱼苗没有发生躯干弯曲。实验过程中，各实验组鱼苗均未出现“塌腰”现象。

实施例5 喂食不同饲料时斑马鱼鱼苗成活率和体长比较

从3组不同成鱼(分别记作Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)繁殖的鱼苗中各挑出200尾发育正常、长到第6天的斑马鱼，平均分成2组，一共6组(分别记作Ⅰ₁、Ⅰ₂，Ⅱ₁、Ⅱ₂，Ⅲ₁、Ⅲ₂)，每组各有鱼苗100尾。

在容积为3L的养鱼缸内加入600ml(水深约3cm)的斑马鱼养殖用水，一共6缸，将上述6组鱼分别放入其中一缸，水温28℃，静置喂养。每天喂食3次(9:00，12:30，16:00)，单个鱼缸每次的喂食量约5mg开口饲料(以饲料扩散后覆盖整个水面为准)；Ⅰ₁、Ⅱ₁、Ⅲ₁只喂食开口饲料，Ⅰ₂、Ⅱ₂、Ⅲ₂从第10天起，每天中午加喂一次新鲜的丰年虾幼虫。每3天更换一次鱼缸内的水，每次更换约1/2体积；从第10天起鱼缸内养殖用水加到1000ml(水深约5cm)，从第15天起鱼缸内养殖用水加到2000ml(水深约10cm)。每天将鱼缸内的死鱼捞出并计数，分别统计每个鱼缸内鱼苗在第21天的成活率；并测量第21天时鱼苗的体长，并计算每个鱼缸内鱼苗的平均体长。结果见表4。测量鱼苗体长时必须用麻醉剂将鱼苗麻醉，为了避免使用麻醉剂对后续实验结果造成干扰，本实验没有测量开始喂食时的鱼苗体长(即第6天时鱼苗的体长)。

表4 喂食不同饲料时斑马鱼鱼苗成活率和体长比较

只喂食开口饲料实验组鱼苗的成活率为53～56％，从第10天开始加喂丰年虾幼虫实验组鱼苗的成活率为52～61％；加喂丰年虾幼虫实验组鱼苗的平均成活率比只喂食开口饲料实验组鱼苗的平均成活率高约3.7％，没有明显提高。这一实验结果与实施例4的实验结果一致。只喂食开口饲料实验组鱼苗的平均体长约6.4mm，加喂丰年虾幼虫实验组鱼苗的平均体长约6.7mm；加喂丰年虾幼虫实验组鱼苗的平均体长比只喂食开口饲料实验组鱼苗的平均体长长约4.7％，无明显效果。

以上实施例仅以斑马鱼鱼苗为例进行说明，但本发明提供的饲料不局限于斑马鱼鱼苗，适当调整本发明饲料配方中的原料配比并调整生产工艺参数，亦可将本饲料用于斑马鱼幼鱼和斑马鱼成鱼的养殖。同样，本发明提供的饲料也可用于发育特征和营养需求与斑马鱼相似的其它硬骨鱼，比如青鳉(Medaka)、河豚(Pufferfish)以及波条丹(鱼丹)(Giant Danio)等的养殖。

Claims

1.一种斑马鱼鱼苗开口饲料，其特征在于它由以下重量百分含量的组分和辅助成

分组成：鱼粉30~35%，虾粉 25~30%，玉米粉 10~15%，大豆多肽5~10%，猪脑粉 3~5%，鱼油 5~8%，椰子油 3~5%，葵花籽油 3~5%，海藻粉 2~3%，啤酒花粉 0.2~0.3%，磷酸氢钙 0.5~1%；

所述的辅助成分包括复合矿物质、免疫多糖和复合低聚糖，每1000g饲料中的添加量如下：

复合矿物质：FeSO₄·H₂O 90~120mg，CuSO₄·5H₂O 7~10mg，MnSO₄·H₂O 30~50mg，MgSO₄·7H₂O 600~1200mg，ZnSO₄·H₂O 50~80mg，KI 0.5~1.0mg,，Na₂Se₂O₃ 10~15mg；

免疫多糖：β-葡聚糖 150~200 mg，甘露聚糖 80~120 mg，果寡糖30~50mg；

复合低聚糖：麦芽低聚糖 50~80 mg，果糖低聚糖 20~35 mg；

所述的饲料采用微囊化工艺制成微囊饲料。