CN101965178A - 含有植物的新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有植物的新芽提取物的组合物，含有从红杉新芽、越桔新芽、桃新芽、发芽白菜、发芽花椰菜、发芽向日葵和发芽羽衣甘蓝中提取的新芽提取物作为有效成分。上述组合物通过促进皮肤细胞的增殖，使皮肤干细胞的生存和增殖增强，从而使得延迟和改善皮肤老化的功能良好。

Description

含有植物的新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物
技术领域
本发明涉及含有植物的新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，具体地，涉及含有从红杉新芽、越桔新芽、桃新芽、发芽白菜、发芽花椰菜、发芽向日葵以及发芽羽衣甘蓝中提取的新芽提取物作为有效成分的用于抑制皮肤老化的组合物。
背景技术
皮肤中存在的成体干细胞的代表性的细胞为表皮干细胞。位于皮肤的表皮与真皮的边界部位的表皮干细胞分裂为两个，一个作为表皮干细胞残留，另一个再次继续分裂并分化成表皮细胞。因此，在坯胎学方面，在成体中所保持的表皮与真皮的边界部因内因性老化和光老化而变得平坦，且其面积减少，其结果是，观察到表皮干细胞的一部分消失。
众所周知，以上述消失的部分为中心而产生皱纹，且伤口的治愈能力下降。当然并非是表皮干细胞的数量减少或者活性降低以至于无法执行人体所具有的皮肤的功能，但是从美容学方面来看，可以引发如忧虑的程度的问题。在此，已知表皮细胞对作为其下存在的真皮细胞即成纤维细胞也给予影响，促进胶原的生成(E1.Ghalbzouri、et al.、J Invest Dermatol.124：79-86(2005))，但是消失了的表皮干细胞阻碍了真皮层的胶原纤维和弹性纤维的生产。
上述胶原是占人体的蛋白质总质量的约25％的重要的纤维性蛋白质，在细胞外基质的重要的组成成分中，占有结缔组织的大半。另外，胶原占干燥皮肤重量的约75％，占真皮纤维成分的约90％，执行细胞间基质的作用、结构的支撑体功能以及皮肤的抗拉强度的提供等重要的功能。据报道，在不能进行这样的胶原的生成和分解的适合的调节时，作为皮肤的弹力减少、皱纹产生等皮肤老化的主要的原因而起作用(M.Tzaphlidou、Micron35：173(2004))。由此可以判断，如果可以适当地调节作为结缔组织的组成成分的胶原的生物合成，就可以期待相当的水平的皮肤老化的改善。
如上所述，对皮肤的再生起重要作用的皮肤表皮干细胞表达特征的蛋白质，作为其中的代表性的蛋白质，已知有p63、a6-整合素(integrin)、b1-整合素以及端粒酶(Telomerase)等。这样的蛋白质的表达度高的意思是：存在许多表皮干细胞，保持有干细胞性(stemness)，换言之，意思是：皮肤的再生能力强。
因此，在本发明中，使用各种新芽提取物，通过各种实验试着确认该提取物是否能对人体的皮肤细胞给予肯定的影响。
发明内容
本申请的发明人，在继续深入的研究和各种实验后，发现了如下事实：通过含有从红杉新芽、越桔新芽、桃新芽、发芽白菜、发芽花椰菜、发芽向日葵、以及发芽羽衣甘蓝中提取的新芽提取物作为有效成分的皮肤组合物来促进皮肤的再生和增殖，能够抑制或改善皮肤老化，从而完成了本发明。
本发明的一个实施例涉及的用于抑制皮肤老化的组合物为含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物、以及羽衣甘蓝新芽提取物作为有效成分的组合物。
本发明的另一个实施例涉及的用于抑制皮肤老化的组合物为必须含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物、以及羽衣甘蓝新芽提取物作为有效成分、进一步附加地含有选自由越桔(Bilberry)新芽提取物、桃(Peach)新芽提取物、白菜新芽提取物、以及花椰菜新芽提取物组成的组中的一种以上的新芽提取物的组合物。
本发明的另一个实施例涉及的用于抑制皮肤老化的组合物为必须含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物、以及羽衣甘蓝新芽提取物作为有效成分的、进一步附加地含有选自由越桔(Bilberry)新芽提取物、桃(Peach)新芽提取物、白菜新芽提取物、以及花椰菜新芽提取物组成的组中的一种以上的新芽提取物的组合物，上述新芽提取物为以1～5∶1～5∶1～5的重量比含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物、以及羽衣甘蓝新芽提取物的组合物。在此，在上述重量比以内将新芽提取物组合使用时，能最大限度地提高将老化延迟以及改善的效果。
本发明的另一个实施例涉及的用于抑制皮肤老化的组合物为含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物、羽衣甘蓝新芽提取物、越桔(Bilberry)新芽提取物、桃(Peach)新芽提取物、白菜新芽提取物、以及花椰菜新芽提取物的全部作为有效成分的组合物。此时，提取物之间的重量比为1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5即可。在此，在上述重量比以内将新芽提取物组合使用时，能最大限度地提高将老化延迟以及改善的效果。这样，在将7种新芽提取物全部组合使用时，能最大限度地提高将老化延迟以及改善的效果。
可以认定本发明涉及的含有新芽提取物的组合物不仅使皮肤表皮干细胞的活性增强、促进皮肤细胞的增值，而且具有提高抗氧化能力的效果，从而对皮肤老化的抑制和改善有帮助。
附图说明
图1是表示对本发明涉及的7种新芽提取物的抗氧化能力进行比较试验而得到的结果的图表。
图2是表示角质形成细胞中的通过7种新芽提取物而使得表达增加的生长因子的图。
图3是表示在利用了无毛小鼠的光老化动物模型中7种新芽提取物的混合物抑制由紫外线引起的胶原分解并使皮肤内胶原量增加的图表。
具体实施方式
因此，本发明涉及的含有新芽提取物的组合物含有从红杉新芽、越桔新芽、桃新芽、发芽白菜、发芽花椰菜、发芽向日葵、以及发芽羽衣甘蓝中提取的新芽提取物作为有效成分。
一般地，新芽可以称为植物的干细胞。植物与动物不同，植物体全体具有成为干细胞的可能性。这是由于植物体只具有组织，未被分化为器官的缘故。植物的代表性的成体干细胞为在根或茎末端的生长点的细胞，种子等可以说与动物的胚胎干细胞相对应。由此可以看出，根、茎或叶部分有时也成为在规定的条件下不断分裂的干细胞，尤其是在新芽中富含生长所必需的多种物质。
因此，在本发明中，提供一种含有新芽提取物的组合物，该组合物不仅使皮肤表皮干细胞活化且促进皮肤细胞的生长，而且使对皮肤的再生和皮肤老化的延迟给予影响的各种生长因子的表达增加的效果优异。
如果对本发明涉及的组合物中作为有效成分所含有的7种新芽进行具体的说明，则如下上述。
首先，红杉(Sequoia)为杉科红杉属的一属一种，是原产地为加州的高大的树。生命力非常强，可以生长到树龄3000年以上，另外，还报道有树高超过150米的个体。红杉的厚皮中有虫不能接近的蛋白，树中所含有的生长素是能使树长期生长的给予生机和韧性的天然物质。部分报道了含有从红杉木自身中提取的提取液而成的化妆品，但是，利用红杉新芽的提取物适用于皮肤的例子还未被报道。
越桔(Bilberry)是药草的一种，具有非常强的抗氧化剂的作用。具有使毛细管壁增强且柔软的效果，并可以认定使红细胞壁柔软且使红细胞通过毛细管时不会破坏的效果。另外，已知通过对成为身体的组织的胶原进行强化并抑制细菌的增殖，可以起到抗炎症效果，具有抑制老化和抗癌效果。也有一部分利用越桔新芽提取物来制备化妆品原料的例子，但是实情是，在相关专利中关于皮肤美容的内容未被特别提及。
已知桃(Peach)含有多酚类、苦杏仁苷、山奈酚、β-胡萝卜素、以及维生素C等，它们起着抗氧化作用、抗癌、利尿作用、神经稳定作用、便秘预防以及免疫功能增强等效果。与皮肤相关，例如，在韩国注册专利第2007-079467号中，公开了关于利用了桃的果肉的美白活性的内容，在韩国专利申请公开第2004-039042号中，部分提及了关于利用了桃花的痤疮治疗效果，但是关于将桃的新芽提取物适用于皮肤的情况还未被报道。
已知白菜不仅具有对肠胃好且清神、消渴的效果，而且通过润滑大小肠而对便秘有效。白菜含有胱氨酸、维生素C、苏打、氯、以及乳酸等，其中称作胱氨酸的氨基酸具有缓解疲劳的效果，维生素C、苏打、氯以及乳酸等具有强健肠胃且使头脑清醒的效果。另外，已知白菜能去火、减轻喉咙的干渴，因而在夏季是特别好的食品，还具有使排便顺利而治疗便秘的效果。尤其是关于发芽白菜，在韩国专利申请公开第2006-02630号中部分公开了关于使用发芽白菜提取物而成的化妆品的内容，但是未提供具体的关于皮肤老化的效果。
已知发芽花椰菜含有大量的称作莱菔硫烷(sulforaphane)的抗癌物质，对预防癌症和抑制癌细胞有效。除此之外，含有β-胡萝卜素、维生素B、C等。
发芽向日葵含有钙从而对骨骼和牙齿有好处，脂肪和碳水化合物对肌肉组织的状态和神经系统有好处。除此之外，含有钙、铁、碘。有关于利用了向日葵、特别是种子的油黄土面膜的制造方法的相关专利，但是，关于利用了发芽向日葵提取物的皮肤美容的专利未被报道。
最后，羽衣甘蓝为已知具有预防癌症效果的十字花科蔬菜，含有大量的维生素、无机物、叶绿素以及膳食纤维等。有关于利用了羽衣甘蓝的美容面膜或美白化妆品的专利，但是没有利用了发芽羽衣甘蓝提取物的美容相关专利。
作为获得本发明涉及的新芽提取物的方法，没有特别的限制，优选可以使用由该树的芽得到的方法或使该种子发芽来得到的方法等。
在一个实施例中，上述红杉、越桔及桃从各自的树的芽中获得新芽提取物，白菜、花椰菜、向日葵及羽衣甘蓝可以使各自的种子发芽来获得新芽提取物。
在上述红杉、越桔及桃的情况下，一年中从新芽较多地生长的春天到夏天收获，为了防止由酶反应等引起的褐变，只要立即对其进行干燥或冷冻，优选在零下20℃至零下30℃之间进行冷冻保存即可。
在上述白菜、花椰菜、向日葵及羽衣甘蓝的情况下，不要求其它方法的广泛的栽培面积，水栽培是可能的。首先，将选择出来的种子浸渍在水中6～10小时左右后，在欲进行培养的容器中装入水，同时铺上棉花或棉质材料的布，不重叠地均匀撒上种子后，在发芽前以使得棉花或布不变干的方式供给水。此时，用黑色的布或薄片(foil)来覆盖种子直到芽发出2/3左右，之后，放置在日照好的地方。一天用喷雾器洒水1～3次，而且经过3～7天左右后收获。收获后，直接进行干燥或冷冻保存，优选在零下20℃至零下30℃之间冷冻保存。
可以直接使用用上述方法准备的新芽，或者将其粉碎，通过用溶剂进行提取而获得必要的提取物。作为此时使用的溶剂，选择在从植物提取该植物的成分时一般使用的溶剂即可，没有特别的限定。
作为使用的溶剂，可举出例如热水或水；甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇等低级醇；丙二醇、1，3-丁二醇等多元醇；这些醇类的含水物；正己烷、甲苯等烃系溶剂等，但是优选将甲醇或乙醇等低级醇作为提取溶剂使用。在使用上述低级醇作为提取溶剂的情况下，可以将获得的提取物直接配合在本发明涉及的组合物中，但也可以在将提取溶剂蒸馏除去后，根据需要进行干燥后进行配合。
在本发明涉及的一个实施例中，含有上述新芽提取物的组合物若基于试管实验和生物体内(in vivo)实验，则可以以相对于组合物的总重量为0.001～10重量％、优选为0.01～5重量％的量含有上述新芽提取物。
另外，本发明涉及的组合物还可以制备成各种形态的剂型。
在一个实施例中，本发明涉及的组合物为口服用组合物即可。另外，本发明涉及的组合物也可以为化妆品组合物、保健食品组合物或医药组合物。
在一个实施例中，本发明涉及的组合物可以为具有柔软化妆水、营养化妆水、按摩霜、滋养霜、面膜、凝胶或者皮肤粘着型化妆品的剂型的化妆品组合物即可。
另外，在另一个优选的实施例中，上述组合物还可以制备成乳液(lotion)、软膏、凝胶、霜、粘贴剂或者喷雾剂等经皮给予型的剂型。
在上述各种剂型的组合物中，除了上述必须组成成分以外，还可以参照具有该技术领域中的通常的知识的人员的技术水平，没有特别的限制地根据外用剂的剂型或者使用目的等来选定各种物质并进行配合。
在本发明涉及的组合物适用于医药品的情况下，可以将上述提取物作为有效成分，在其中加入常用的无机或有机的载体，作为具有固体状、半固体状或液体状的形态的口服剂或非口服剂而制剂化。
作为用于上述口服的制剂，可举出片剂、丸剂、颗粒剂、软/硬胶囊剂、散剂、细粒剂、粉剂、乳浊剂、糖浆剂、微丸(pellet)剂等。另外，作为用于非口服的制剂，可举出注射剂、点滴剂、软膏、乳液、喷雾剂、悬浊剂、乳剂、栓剂等。为了将本发明的有效成分制剂化，只要是通过常规方法实施，就能够容易地制剂化，只要适当使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、调味品、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浊剂、其它常用的助剂即可。
本发明涉及的上述药学组合物可以通过经口、非经口、直肠、局部、经皮、静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下等来给予。
另外，上述有效成分的给予量可以根据接收治疗的对象的年龄、性别、体重和治疗的特定疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重程度、给予路径以及处方者的判断而变化。基于这样的因素的给予量的确定在本领域技术人员的水平内，一般给予量为0.001mg/kg/日至大约2000mg/kg/日的范围，更优选的给予量为0.5mg/kg/日至大约2.5mg/kg/日。
本发明还提供了一种含有上述提取物的功能性食品或食品添加剂。还可以加工成包含含五倍子发酵物的组合物的发酵乳、奶酪、酸奶、果汁、活菌制剂、以及健康辅助食品等，除此之外，还可以以各种食品添加剂的方式使用。含有上述提取物的功能性食品或者食品添加剂可以起到皮肤状态的改善、炎症的抑制、抗氧化、以及抗老化等各种效果。
一个实施例中，上述组合物可以在不影响作为本发明的目的的主要的效果的范围内含有能够提供与主要的效果协同效果的其它成分等。例如，为了改善物性，还可以含有香料、色素、杀菌剂、抗氧剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、无机盐类、乳化剂以及合成高分子物质等添加剂。除此之外，还可以含有水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖以及海藻提取物等辅助成分。可以根据剂型或使用目的，本领域技术人员能够容易地适当选定并配合上述成分，其添加量在不影响本发明的目的和效果的范围内进行选择即可。例如，以组合物的总重量为基准，上述成分的添加量为0.01～5重量％、更具体地为0.01～3重量％的范围即可。
另外，本发明涉及的组合物的剂型还可以为溶液、乳化物、粘性型混合物、片剂、粉末等各种形态，其可以通过单独饮用、注射给予、喷雾方式或者挤压方式等各种方法进行给予。
以下通过实施例和实验例对本发明进行更详细的说明，但是下述的实施例等是用于例示本发明的，本发明的范围并不仅限定于这些。
[实施例1]含有作为有效成分的新芽提取液的皮肤外用剂组合物
1-1.新芽提取液的制备
本实施例涉及对红杉、越桔、桃、白菜、花椰菜、向日葵、以及羽衣甘蓝的新芽或者发芽了的植物的有效成分进行有效洗脱。
首先，从红杉、越桔、桃的树在春天到夏天收获新芽，为了防止由酶反应等引起的褐变而在零下20℃至零下30℃之间冷冻保存。
接着，在白菜、花椰菜、向日葵、以及羽衣甘蓝的情况下，将选择出来的种子在水中浸渍6～10小时左右后，在培养容器中铺上棉花，不重叠地均匀撒上种子后，在发芽前以使棉花不变干的方式供给水。用黑色的布来覆盖种子直到芽发出2/3左右，之后，放置在日照好的地方。一天用喷雾器洒水1～3次，经过3～7天后收获，在零下20℃至零下30℃下冷冻保存。
将通过上述过程准备的新芽粉碎后，利用甲醇作为溶剂进行提取。从获得的提取物中蒸馏并除去溶剂，准备好了各植物的新芽提取液。
1-2.含有新芽提取液的外用剂组合物的制备
在上述实施例1-1中制备的新芽提取液100g中相对于其干燥重量添加95％的含水乙醇100ml。为了防止有效成分蒸发，在安装有冷却冷凝器的状态下，在50～100℃的温度下加热10小时，提取有效成分。将提取得到的成分过滤并减压浓缩后，将其干燥，得到5g的新芽提取物。
利用得到的新芽提取物，以下述表1的组成来制备皮肤外用剂组合物。
具体地，首先将下述表1的原料1至6混合，在70℃下溶解而形成水相后，在70℃下将原料7至14溶解而形成油相。然后，在水相中添加上述油相，用均质机(日本Tokushu Kika公司制)搅拌进行一次乳化，添加原料15，使其增稠。除去气泡后，在室温下冷却而制得组合物。
表1
[比较例1]
与上述实施例1-2相比较，除了未添加新芽提取物，用相同方法来制备外用剂组合物。
[实验例1]皮肤表皮干细胞的活性增加观察
在24孔平板培养器中以2×105个的浓度注入从人体表皮分离出的角质形成细胞后，用注入有2％胎牛血清的DMEM培养基进行培养。之后，更换到分别以50、500ppm的浓度含有上述实施例1中制得的新芽提取物的培养基中，培养48小时。阴性对照组为未在上述培养基中注入任何的新芽提取物的组，将在上述培养基中注入10％胎牛血清来代替2％胎牛血清而得到的组作为阳性对照组。除去上清液，用磷酸缓冲溶液实施两次洗涤后，添加50ul的细胞溶解缓冲液(Cell lysis buffer；20mM Tris-HCl(pH7.4)、250mM NaCl、1％Triton X-100)，放置30分钟。再用磷酸缓冲溶液实施两次洗涤后，利用真空装置，以一定的量附着在硝酸纤维素膜的表面上。
在附着有上述蛋白质的表面上用封闭液(Blocking solution)反应2小时以上后，将表皮干细胞的代表性的蛋白质标记物即p63的一次抗体在封闭液中以1∶500悬浊处理1小时，实施免疫印迹。
与未注入新芽提取液的阴性对照组比较，测定相对的p63蛋白质的表达量，表示在下述表2中。
表2
  试验组   浓度(ppm)   相对的表达量(％)
  阴性对照组   100
  阳性对照组   120
  红杉新芽   50   105.24
  500   101.3
  越桔新芽   50   98.68
  500   103.84
  桃新芽   50   102.31
  500   103.22
  发芽白菜   50   99.52
  500   106.6
  发芽花椰菜   50   114.59
  500   97.5
  发芽向日葵   50   99.68
  500   107.34
  发芽羽衣甘蓝   50   89.11
  500   84.68
参照上述表2，可以确认在发芽羽衣甘蓝的情况下，表达量多少减少，但是根据7种新芽提取物，在其大部分中，p63蛋白质的表达量增加。这意味着通过本发明涉及的新芽提取物，增加了表皮干细胞的活性，表示新芽提取物能够使表皮的干细胞能力增强。
[实验例2]由新芽提取物带来的皮肤细胞的增殖增加观察
2-1.角质形成细胞的增殖
在96孔平板培养器中以每个孔5000个的浓度添加从人体表皮分离出的角质形成细胞，用KGM(keratinocyte growth medium(角质形成细胞生长培养基)、Lonza)培养基培养24小时。之后，更换到分别以50、500ppm的浓度含有上述实施例1中制得的新芽提取物的KBM(keratinocyte basalmedium(角质形成细胞基础培养基))培养基中，然后培养48小时。以1/10倍在其中注入WST-1溶液(Roche)后，在37℃下在培养箱内反应2小时。对培养结束后的平板培养器测定在450nm下的显色程度，对细胞的增殖程度进行定量。其结果表示在下述的表3中。
表3
Figure BPA00001211585600111
参照上述表3可以看出，在7种提取物各自中，角质形成细胞的增殖被促进。确认与各个新芽提取物一起，以大致105～180％的范围使角质形成细胞的增殖增加。
2-2.成纤维细胞的增殖
在96孔平板培养器中以每个孔5000个的浓度分别培养从人体表皮分离出的成纤维细胞24小时后，用注入有10％胎牛血清的DMEM培养基(Welgene)培养24小时。之后，更换到分别以50、500ppm的浓度含有新芽提取物的注入有1％胎牛血清的DMEM培养基中，然后培养48小时。以1/10倍在其中注入WST-1溶液(Roche)后，在37℃下在培养箱内反应2小时。对培养结束后的平板培养器测定在450nm下的显色程度，对细胞的增殖程度进行定量。其结果表示在下述的表4中。
表4
参照上述表4可以看出，在除了越桔新芽以外的6种提取物各自中，成纤维细胞的增殖被促进了。确认通过上述新芽提取物，成纤维细胞的增殖以大致105～130％的范围增加了。
2-3.新芽提取物复合物的成纤维细胞的增殖协同效果确认
使用与上述实验例2-2相同的方法来准备细胞。之后，更换到下述的注入有1％胎牛血清的DMEM培养基中，然后培养48小时，其中所述DMEM培养基将新芽提取物中的羽衣甘蓝、向日葵及红杉提取物各自以10ppm的浓度单独或以3种提取物的组合物(重量比为1∶1∶1)的形式含有、或者将在上述实验例2-2中使用的7种提取物的组合物(重量比为1∶1∶1∶1∶1∶1∶1)分别以10ppm的浓度含有。阴性对照组的意思是1％胎牛血清，作为阳性对照组，使用了10％胎牛血清。胎牛血清为细胞培养时必须注入的物质，包含含各种生长因子的对生长给予影响的物质，显示出对细胞的增殖极其良好的效果。一般，在必须使细胞增殖的条件下使用10％胎牛血清。以1/10倍在其中注入WST-1溶液(Roche)后，在37℃下在培养箱内反应2小时。对培养结束后的平板培养器测定在450nm下的显色程度，对细胞的增殖程度进行定量。其结果表示在下述的表5中。
表5
Figure BPA00001211585600121
参照上述表5，可以确认，与单独使用了新芽提取物时相比，将3种或7种新芽提取物一起进行处理时的成纤维细胞的增殖大幅度增加。尤其可以看出，将新芽提取物组合使用时，在将羽衣甘蓝、向日葵、红杉这3种混合使用时，与各自单独使用的情况相比，其效果远要优良。即，将3种新芽提取物混合使用时的细胞增殖的效果显示出比作为非常优良的阳性对照组的胎牛血清更良好的效果。另外，可以看出，在使用了7种新芽提取物的情况下，显示出比使用了3种新芽提取物的情况更良好的效果，可以确认与单独使用新芽提取物相比，在使用3种或7种新芽提取物时具有协同效果。
[实验例3]新芽提取物的抗氧化能力测定
对于利用上述实施例1的方法制备的7种的新芽提取物，将干燥重量100g以10％的浓度溶解在DMSO中来进行准备。作为阳性对照组，将维生素C以1％浓度溶解在水中来进行准备。将DPPH(1，1-二苯基-2-苦基肼)溶解在乙醇中，形成100μM的浓度。用乙醇将准备的新芽提取物溶液和维生素C溶液进行1/2连续稀释(serial dilution)，制作具有5个浓度的溶液后，将各个溶液10ul与DPPH溶液190ul混合，在37℃下培养30分钟。测定在540nm下的OD值，测定的结果表示在图1中。
参照图1可以确认，以越桔新芽、发芽向日葵、红杉新芽、发芽羽衣甘蓝、发芽白菜的顺序显示出良好的抗氧化效果。
[实验例4]在角质形成细胞中的各种生长因子的表达增加观察
用与上述实施例2相同的方法对角质形成细胞和新芽提取物实施处理。对于48小时培养后的培养基，在细胞因子芯片(cytokine array kit、#AAH-GF-1：Ray Biotech)用的膜上至少撒上1ml，在4℃下培养13小时。之后，更换到1x洗涤缓冲液I(cytokine array kit、# AAH-GF-1：Ray Biotech)中后，每次5分钟洗涤3次后，用洗涤缓冲液II(cytokine array kit、#AAH-GF-1：Ray Biotech)对膜进行每次5分钟的2次洗涤。在这样准备的膜上注入含有1次抗体(Biotin-conjugated anti-cytokine antibody，生物素标记的抗细胞因子抗体)的封闭液，在常温下反应2小时。反应结束的膜与上述的方法同样地用洗涤缓冲液进行洗涤。洗涤结束的膜更换到利用1x封闭缓冲液(cytokine array kit、# AAH-GF-1：Ray Biotech)稀释了1000倍的2次抗体缓冲液中，在常温下反应2小时。再重复一次刚实施的洗涤过程后，撒上2ml的ECL plus试剂，利用发射光谱仪确认结果。
在本实验中使用的细胞因子芯片(cytokine array；Ray Biotech)的图显示在下述的表6中(细胞因子芯片的图(ray biotech))。另外，实验结果表示在图2中，其结果总结在下述的表7中。
表6
  A   B   C   D   E   F   G   H   I   J   K   L
  1   POS   POS   NEG   NEG   AR   bFGF   b-NGF   EGF   EGFR   FGF-4   FGF-6   FGF-7
  2   POS   POS   NEG   NEG   AR   bFGF   b-NGF   EGF   EGFR   FGF-4   FGF-6   FGF-7
  3   GCSF   GDNF   GM-CSF   HB-EGF   HGF   IGFBP-1   IGFBP-2   IGFBP-3   IGFBP-4   IGFBP-6   IGF-I   IGF-I SR
  4   GCSF   GDNF   GM-CSF   HB-EGF   HGF   IGFBP-1   IGFBP-2   IGFBP-3   IGFBP-4   IGFBP-6   IGF-I   IGF-I SR
  5   IGF-II   M-CSF   M-CSF R   NT-3   NT-4   PDGF R a   POGF R b   PDGF-AA   PDGF-AB   PDGF-BB   PIGF   SCF
  6   IGF-II   M-CSF   M-CSF R   NT-3   NT-4   PDGF R a   PDGF R b   PDGF-AA   PDGF-AB   PDGF-BB   PIGF   SCF
  7   SCF R   TGF-a   TGF-b   TGF-b2   TGF-b3   VEGF   VEGF R2   VEGF R3   VEGF-D   BLANK   BLANK   POS
  8   SCF R   TGF-a   TGF-b   TGF-b2   TGF-b3   VEGF   VEGF R2   VEGF R3   VEGF-D   BLANK   BLANK   POS
表7
  新芽提取物的种类  表达增加了的生长因子
  红杉新芽  bFGF、EGF、PDGF-AB、TGFb、TGFb2、VEGF
  发芽向日葵  EGF、FGF4、IGFBP-6、PDGF-rb.PIGF
  桃新芽  bFGF、EGF、FGF4
  发芽羽衣甘蓝  FGF4、IGFBP-2、PDGF-AA，
  发芽花椰菜  FGF4
  越桔新芽  EGF、TGFb-2
  发芽白菜  IGF-II
参照图2和表7可以确认，主要由各个新芽提取物表达的生长因子以黑色斑点的形态表现。可以看出，各个新芽提取物使互相不同的生长因子的表达增加，其结果是，诱导角质形成细胞的增殖。
[实验例5]利用了无毛小鼠的光老化动物模型的抑制胶原减少的确认
实际上为了调查由紫外线引起的皮肤皱纹胶原分解的抑制效果，利用约7周龄的无毛小鼠(SKH-1 female hairless mouse)实施了涂布试验。如上述的表1中所示，制备复合地含有7种新芽提取物的实施例1和比较例1，在无毛小鼠的背部照射紫外线，同时涂布11周。紫外线的照射隔日进行，物质涂布每日进行，物质涂布结束后，对无毛小鼠的背部的皮肤进行生物检查而得到蛋白质后，实施对于胶原的免疫印迹实验，确认对由紫外线引起的胶原较少的抑制效果，其结果表示在图3中。
从图3可以确认，在将7种新芽提取物一起复合地处理的情况下，与对照组(比较例)相比，由紫外线引起的皮肤内胶原的减少恢复。
综合上述实验例1～5的结果，含有本发明涉及的新芽提取物的组合物具有使皮肤表皮干细胞的活性增加、增进表皮的角质形成细胞和真皮的成纤维细胞的细胞增殖的效果。另外，可以认定作为防止老化的一种机理的抗氧化效能，可以确认复合使用7种新芽提取物时，胶原的分解延迟。这样的皮肤细胞的增殖和干细胞活性的增强显示出根据皮肤皱纹产生的抑制和皮肤弹性的改善效果，上述提取物可以用作对皮肤老化的防止或改善有效的物质。

Claims (9)

1.一种用于抑制皮肤老化的组合物，其含有红杉(Sequoia)新芽提取物、向日葵新芽提取物和羽衣甘蓝新芽提取物作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，所述用于抑制皮肤老化的组合物还含有选自由越桔(Bilberry)新芽提取物、桃(Peach)新芽提取物、白菜新芽提取物和花椰菜新芽提取物组成的组中的一种以上的新芽提取物。
3.根据权利要求1或2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，所述新芽提取物以1～5∶1～5∶1～5的重量比含有红杉新芽提取物、向日葵新芽提取物和羽衣甘蓝新芽提取物。
4.根据权利要求1或2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，相对于组合物的总重量，含有0.001～10重量％的所述新芽提取物。
5.根据权利要求4所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，相对于组合物的总重量，含有0.01～5重量％的所述新芽提取物。
6.根据权利要求1或2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，所述新芽提取物是在热水、低级醇或者它们的混合溶剂中通过热浸进行提取、并过滤、减压浓缩而制得的。
7.根据权利要求2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，在所述新芽提取物中，红杉、越桔和桃从各自的树的新芽中提取出，白菜、花椰菜、向日葵和羽衣甘蓝通过使各自的种子发芽并提取出。
8.根据权利要求1或2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，所述组合物为柔软化妆水、营养化妆水、按摩霜、滋养霜、面膜、凝胶或者皮肤粘着型化妆品的剂型。
9.根据权利要求1或2所述的含有新芽提取物的用于抑制皮肤老化的组合物，其特征在于，所述组合物为乳液、软膏、凝胶、霜、粘贴剂或者喷雾剂。
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