CN101953861A - 一种用于治疗肝纤维化的中药组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗肝纤维化的中药组合物及制备方法。本发明公开的中药组合物是以赶黄草乙醇提取物、冬虫夏草或发酵冬虫夏草菌丝体为活性成份，添加药用辅料可以制成各种口服制剂。经药效学实验证明，两味药材合用，对肝纤维化的治疗有明显的协同效果，可用于肝纤维化的预防与治疗。

Description

一种用于治疗肝纤维化的中药组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及中药组合物，特别是用于治疗肝纤维化的中药组合物。 

背景技术

在我国的许多慢性疾病中，由于病毒性、酗酒、药物等原因导致的肝炎非常普遍，从病毒感染和酗酒导致的慢性肝损伤经常会引起肝纤维化和肝硬化。考虑到肝组织的生理特征和重要意义，以及治疗和预防肝疾病的重要性，急需开发出治疗和预防肝纤维化的药物。 

肝纤维化为前病理状态，其中在诸如肝炎的慢性肝病中的损伤的肝组织不能修复成正常组织，但是作为体内适应性反应的一部分其能转化成纤维组织如胶原。血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、III型前胶原肽(pIIInp)、I型胶原水平、肝组织中羟脯氨酸含量等是肝纤维化的指标成分，这些成分多寡反映纤维化的轻重；在纤维化过程中，结缔组织生长因子(CTGF)、金属基质蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)等是肝纤维化的重要介质，CTGF升高使纤维化程度加重，TIMP-1降低，可使形成的纤维降解，如能及时调节或阻断之，则肝纤维化可以逆转；谷丙转氨酶(GPT)活性反映肝损伤的程度。 

多种中药包括单味药在体内和体外表现出肝保护功能，比如红花、三七、赤芍、桃仁、丹参等。赶黄草、冬虫夏草即为其中之一，赶黄草为虎耳草科扯根菜属植物扯根菜(Penthorumchinense Pursh)的干燥地上部分，为苗族民间的草药，主要分布于四川、贵州、湖南等地。赶黄草具有清热利湿、活血散瘀、平肝健脾之功效，广泛用于治疗各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等疾病。冬虫夏草具有补虚损、益精气，在动物实验中显示具有肝保护和治疗肝纤维化作用。 

但到目前为止，还没有任何一个单味药作为预防和治疗肝纤维化的药物上市，虽然市场上有一些预防和治疗肝纤维化的药物中成药，但大都是至少包含6味以上药材的大处方，比如复方鳖甲软肝片含有11味药材。大处方有诸多的弊端，比如药味过多致所含化学成分复杂，含量控制与药效关联度差，浪费资源等。 

在现有技术中，赶黄草与冬虫夏草没有合用的文献报道，更没有赶黄草提取物与冬虫夏草合用可以预防治疗肝纤维化的报道。本发明是基于发现了赶黄草提取物和冬虫夏草合用具有协同效果而完成。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗肝纤维化的中药组合物。 

本发明公开了一种药物组合物，含有赶黄草提取物、冬虫夏草。 

中医本无肝纤维化一病，根据其临床表现，多归属于“胁痛”“积聚”“瘀血”“痞证”范畴。中医认为肝纤维化病因多因湿邪、疫毒等外邪侵袭，损伤肝脏，着而不去，其基本病机为“血瘀阻络、湿热内蕴、肝肾不足”，因此补肝益肾，除湿化瘀即为肝纤维化的治疗原则。 赶黄草清热除湿化瘀，冬虫夏草扶正益肾，二者合用体现了中医治病必求于本的精神。 

在本发明中，赶黄草采用其茎、叶的乙醇提取物。赶黄草提取物是将赶黄草茎切段，与其叶，按质量体积比，加6-10倍浓度为20-95％的乙醇，提取2-3次，每次0.5-2小时，提取液浓缩，喷雾干燥所得。 

在本发明中，应将冬虫夏草干燥后经粉碎成粉末状后使用；出于环保、降低成本及工业化的角度出发，更适宜于选择发酵冬虫草夏菌丝体来代替天然冬虫夏草，发酵冬虫草夏菌丝体为中国冬虫夏草菌(拉丁学名为Cordyceps sinensis(Berkeley)Sacc)的无性型-中国被毛孢(拉丁学名为Hirsutella sinensis)采用工业化发酵生产的冬虫夏草菌丝体，比如杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌丝体，为了方便于后续工艺，可将菌丝体干燥后粉碎成粉末状(以下简称虫草粉)。 

为了提高药效，可优选粉末粒径分布在75μ以下，平均粒径15μ以下的发酵冬虫夏草菌丝体微粉(以下简称虫草微粉)，微粉加工工艺可以通过常规微粉工艺微粉化而得到，比如采用机械冲击式超微粉碎机、气流超碎机。 

本发明公开的药物组合物中，所述的赶黄草提取物和冬虫夏草的质量比为1.2-1.7∶1，以1.25∶1为优。若采用发酵冬虫夏草菌丝体代替冬虫夏草，赶黄草提取物与其的质量比为1.2-1.7∶1，以1.25∶1为优。 

本发明所公开的药物组合物，还可以根据辩证施治增加其他中药，如枸杞、丹参、三七等，以添加枸杞和/或丹参为佳。 

本发明还公开了药物组合物的制备方法，包括赶黄草提取物的制备：赶黄草茎切段，与其叶，按质量体积比，加6-10倍浓度为20-95％的乙醇，提取2-3次，每次0.5-2小时，提取液浓缩，喷雾干燥所得；若还含有其他中药材，可与赶黄草的茎、叶一起进行提取后使用；冬虫草夏或发酵冬虫草夏菌丝体可通过常规的生产设备和生产工艺粉碎成粉状，两者混合。 

本发明所公开的药物组合物，与可药用载体或赋形剂，制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。可以选择常规辅料，以常规制剂方法制备成片剂、胶囊剂或颗粒剂。 

本发明还公开了这种药物组合物在制备预防及治疗肝纤维化药物中的应用。 

经动物实验证明，将赶黄草提取物与冬虫夏草或其替代品发酵冬虫夏草菌丝体配伍用于二甲基亚硝胺(DMN)导致的肝纤维化动物，可显著降低血中GPT、透明质酸、I型胶原、层粘蛋白水平，降低肝脏羟脯氨酸含量。而且二者有协同作用。同样，将赶黄草提取物与冬虫夏草或其替代品发酵冬虫夏草菌丝体配伍用于酒精导致的肝纤维化动物，也可显著降低血中CTGF、TIMP-1、LN水平，降低肝脏羟脯氨酸含量，而且二者有协同作用。本发明基于上述发现得以完成。 

为了证明将赶黄草提取物与冬虫夏草或其替代品发酵冬虫夏草菌丝体配伍合用治疗肝纤维化具有显著的协用效果，本发明在两种动物模型上进行药效学研究，其中模型一是利用二甲基亚硝胺(DMN)损伤肝脏形成纤维化，此模型病理特点相当于中医主要证候病机为湿热、瘀热内蕴，并兼气虚型。模型二是利用酒精导致的肝纤维化。中医认为酒毒伤人，损伤人体正气，形成湿热内蕴，是导致脏腑亏虚之始因。故赶黄草提取物和发酵虫草菌丝体补虚损， 清湿热切合两种动物模型病机，可较好反映药物疗效。 

本发明提供的中药组合物，处方简单，经药效试验，两者配伍的协同效果确切，对肝纤维化有很好的治疗作用。 

具体实施方式

下面的实施例用于进一步说明本发明，但不意味着对本发明的任何限制。 

实施例1 

胶囊剂制备1 

取60目以下杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌丝体粉，用QLM-150KA型流化床对撞式气流粉碎机，调频范围为50HZ，频率设为32HZ，将虫草粉粉碎成粒径分布在75μ以下，平均粒径15μ以下的微粉。 

将赶黄草的茎(切段)与叶，共1000g，加6000ml，浓度为80％的乙醇提取2次，每次1小时，提取液浓缩，喷雾干燥。 

取按以上制得的虫草微粉200克，赶黄草提取物250克，加入庶糖酯47克、硬酯酸镁3克混合、填充入硬胶囊、制成1000粒(0.5g/粒)，即得。 

实施例2 

胶囊剂制备2 

以赶黄草和冬虫夏草或发酵冬虫夏草菌丝体为基本处方，在此基础上可按中医辨证扩展组方，如对于血瘀症明显者，可加用丹参。 

赶黄草茎(切段)与叶共750g，丹参450g，加7500毫升，浓度为95％的乙醇提取1次，每次1小时，提取液浓缩，喷雾干燥。 

取60目以下杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌粉85克；赶黄草丹参的提取物140克，混匀，加入25克微粉硅胶，填充入硬胶囊，制成1000粒(0.25g/粒)，即得。 

实施例3 

颗粒剂制备 

将赶黄草茎(切段)与其叶共1200g，加1200ml浓度为20％的乙醇提取3次，每次2小时，提取液浓缩，喷雾干燥。 

天然冬虫夏草，干燥后，打粉过60目筛。 

取赶黄草提取物1000g和天然冬虫夏草粉800g，加入甜菊糖3g，胶体微晶纤维素60g，玉米淀粉1137g混合均匀、制粒、干燥、分装，制成1000袋，3g/袋，即得。 

实施例4 

片剂制备 

取60目以下杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌丝体，用TC-30型流化超音速气流粉碎分级机，将虫草粉粉碎成粒径分布在75μ以下，平均粒径10μ以下的微粉。 

将赶黄草茎(切段)与其叶共1000g，加8000ml，浓度为90％的乙醇提取2次，每次0.5小时，提取液浓缩，喷雾干燥。 

取赶黄草提取物270g和虫草微粉180g，加入崩解剂交联羧甲基纤维素25g、微晶纤维素25g，混合均匀、制粒、压片，制成1000片(0.5g/片)，即得。 

协同作用的实施例：以下的实施例5，实施例6是两个有关与赶黄草提取物和发酵冬虫夏草菌丝体协同作用的动物试验。 

本发明采用CHOU-TALALAY联合指数法(combination index，CI)对药物联合应用的效果进行判定，根据公式计算联合用药指数(CI)，判定联合用药的交互作用： 

公式：CI＝D1 combined/D1 alone+D2 combined/D2 alone+(D1 combined)*(D2combined)/D1 alone*D2 alone。 

公式中D1 combined是联合用药中药物1的剂量；D1 alone是单一用药中疗效与联合用药相当的药物1的剂量；D2 combined是联合用药中药物2的剂量；D2 alone是单一用药中疗效与联合用药相当的药物2的剂量。 

当CI＜1提示两药有协同作用，值越小协同作用越强；CI＝1提示两药有相加作用；CI＞1则说明两药有拈抗作用，值越大拈抗作用越强。 

实施例5 

赶黄草提取物和虫草微粉组合物对DMN导致的肝纤维化大鼠的治疗作用。 

样品：取按实施例1所制备的赶黄草提取物和虫草微粉，用蒸馏水为溶媒配制，各组动物灌胃给予。空白对照组和模型组用蒸馏水给予。 

实验动物：浙江省医学科学院实验动物中心提供。 

实验方法：体重160-170g的大鼠，按0.2mL/100g的剂量腹腔内注射0.5％DMN，第1、2、3周每天1次，连续3天，第4周隔日1次，连续3次。对照动物同法注射生理盐水。于第28天造模结束后，将大鼠随机分组，设为对照组，模型组，模型+赶黄草组(给药：400mg/kg赶黄草提取物)，模型+虫草组(给药：虫草微粉400mg/kg)，模型+赶黄草、虫草组合组(给药：赶黄草提取物、虫草微粉各100mg/kg)；以上各组用药均1次/d，口服连续用药30d后结束，以2％戊巴比妥钠按2ml/kg体重腹腔注射麻醉，后腔静脉采血，采用ELISA试剂盒测试血清HA，LN，I型前胶原肽，血清GPT和肝组织羟脯氨酸含量测定采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。结果见表1。 

表1不同药物组合对DMN处理大鼠肝纤维化相关因子的影响 

**与模型组比较P＜0.01，*与模型组相比P＜0.05 

上表说明：从上表可看出，赶黄草在肝细胞损伤方面有较好作用(GPT)，虫草则在肝纤维化方面有优势，且赶黄草、虫草微粉合用有协同作用(CI＜1)。 

实施例6 

赶黄草提取物和虫草粉的组合物对酒精导致的肝纤维化大鼠的治疗作用。 

样品：取按实施例1所制备的赶黄草提取物，取60目以下杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌丝体粉，用蒸馏水为溶媒配制，各组动物灌胃给予。空白对照组和模型组用蒸馏水给予。 

实验动物：浙江省医学科学院实验动物中心提供。 

实验方法：体重160-180g的大鼠，按0.8-1.2mL/100g的剂量每日早8时灌胃56度白酒，第一周0.8ml，第二周1.0ml，第三周1.2mL/100g，此后维持此剂量，持续6周。对照动物同法给予自来水。造模动物每晚禁食。于第8周造模结束后，将大鼠随机分组，设为对照组，模型组，模型+虫草组(给药：虫草粉400mg/kg)，模型+赶黄草(给药：400mg/kg赶黄草提取物)、模型+虫草组合组(给药：赶黄草提取物、虫草粉各100mg/kg)；以上各组用药均1次/d，口服连续用药30d后结束，眼眶静脉丛采血，采用ELISA试剂盒测试血清CTGF，TIMP-1，LN水平，结果见表2。 

同时取肝组织作病理切片，MASSON染色，motic6.0图象处理软件分析纤维化面积，另取肝组织0.1g，精密称定，加2ml6MHCl消化，用约40mg活性炭处理，取上清100ul挥干，1ml0.4MpH10.5硼酸缓冲液复溶，再加250ulFMOC(1.4mg/ml)衍生反应，乙醚萃去有机层，水层进行HPLC分析羟脯氨酸含量。结果见表3。 

表2：不同药物组合对酒精处理大鼠血清肝纤维化相关因子的影响 

组别	CTGF(ng/ml)	TIMP-1(ng/ml)	LN(ng/ml)
				对照组	19.49±4.32*	14.14±9.31*	78.8±13.05*
模型组	23.41±3.24	27.67±16.49	92.98±14.29
				赶黄草组	20.10±3.16*	13.69±8.86*	85.48±25.39
虫草组	18.62±3.72*	15.96±8.76*	79.62±19.02*
				赶黄草+虫草组	17.46±8.41*	9.89±8.21**	76.29±15.33**
联合用药指数CI	0.56	0.56	0.56

**与模型组比较P＜0.01，*与模型组相比P＜0.05 

表3：不同药物组合对酒精处理大鼠肝脏纤维化程度的影响 

组别	羟脯氨酸含量(ug/mg)	病理切片纤维化面积(mm2)
			对照组	35.57±9.85**	158.68±5.84**
模型组	87.17±34.64	348.09±5.66
			赶黄草组	62.39±25.12	233.51±9.13*
虫草组	62.44±20.83*	219.65±10.47*
			赶黄草+虫草组	57.48±26.02*	194.79±6.27**
联合用药指数CI	0.56	0.56

**与模型组比较P＜0.01，*与模型组相比P＜0.05 

通过实施例5、6，可以看到，赶黄草提取物和虫草粉具有显著的协同效果。 

实施例7 

赶黄草提取物和虫草微粉组合物的最佳配比。 

样品：赶黄草生药，按实施例1制备所得的虫草微粉。 

赶黄草生药3个剂量：12克，25克，50克；虫草微粉3个剂量：1克，2克，3克，两两配伍，共9个配方。 

制法：以上两味，赶黄草生药粉碎成80目的粉末，按处方配伍比例与虫草微粉混匀，得9个受试物。 

实验动物：浙江省医学科学院实验动物中心提供。 

实验方法：大鼠用猪血清腹腔注射，0.5ml/只，每周两次，中间间隔两天，共13周。将造模成功后大鼠(造模约8周后)，随机化分9组，每组6只大鼠，并开始给药。经灌胃给药(4.8g/kg)，每天上午给药1次，连续给药5周。给药结束后，次日处死动物。于处死前12h禁食不禁水，处死前眼眶后静脉丛取血，低温离心，取上清液分装后冷冻保存。采用夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒测定基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和III型前胶原N端肽(pIIInp)的含量。结果：见表4、表5。 

表4不同处方对猪血清免疫性肝损伤大鼠血清中TIMP-1含量的影响(ng/ml) 

TIMP-1含量的合计值(n＝6) 

方差分析表 

变异来源	自由度	SS总	MS	F	P
						总变异	53	8170.7
赶黄草主效应	2	808.7	404.4	5.09	＜0.05
						虫草主效应	2	2763.4	1381.7	17.42	＜0.01
两药交互	4	1029.0	257.3	3.24	＜0.01
						误差	45	3569.6	79.3

结果表明，赶黄草生药和虫草微粉不同剂量对TIMP-1影响显著不同，虫草微粉影响极显著，且两药有交互作用，赶黄草生药25克和虫草微粉2克时，TIMP-1水平最低。 

表5不同处方对猪血清免疫性肝损伤大鼠血清中pIIInp含量的影响(pg/ml) 

pIIInp含量的合计值(n＝6) 

方差分析表 

变异来源	自由度	SS总	MS	F	P
						总变异	53	33539.1
赶黄草主效应	2	4819.2	2409.6	5.6	＜0.01
						虫草主效应	2	3098.7	1549.3	3.6	＜0.05
两药交互	4	6185.4	1546.4	3.6	＜0.05
						误差	45	19435.8	431.9

结果表明，赶黄草和虫草微粉不同剂量对pIIInp影响显著不同，赶黄草影响极显著，且两药有交互作用。赶黄草生药25克和虫草微粉2克时，pIIInp水平最低。 

此实施例说明：赶黄草生药25克和虫草微粉2克的配伍时，药效最好。赶黄草乙醇提取得率一般为10％，因此赶黄草提取物与虫草微粉以1.25∶1的质量比进行配伍为最佳。 

Claims (10)

1.一种药物组合物，含有赶黄草提取物，冬虫草夏，其中所述的赶黄草提取物为赶黄草茎切段，与其叶,按质量体积比，加6-10倍浓度为20-95%的乙醇，提取2-3次，每次0.5-2小时，提取液浓缩，喷雾干燥所得。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征是所述的冬虫草夏为发酵冬虫草夏菌丝体。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征是所述的发酵冬虫草夏菌丝体为粉末状。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征是所述的发酵冬虫草夏菌丝体粉，是粒径分布在75微米以下，平均粒径15微米以下的微粉。

5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的药物组合物，所述的药物组合物，其特征是所述的赶黄草提取物与冬虫草夏或发酵冬虫草夏菌丝体的质量比为1.2-1.7：1。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征是所述的赶黄草提取物与冬虫草夏或发酵冬虫草夏菌丝体的质量比为1.25：1。

7.根据权利要求1-4任一权利要求所述的药物组合物，还含有枸杞或/和丹参。

8.制备如权利要求1-4任一权利要求所述的药物组合物的方法，制备赶黄草提取物：赶黄草茎切段，与其叶,按质量体积比，加6-10倍浓度为20-95%的乙醇，提取2-3次，每次0.5-2小时，提取液浓缩，喷雾干燥所得；常规设备、工艺粉碎冬虫草夏或发酵冬虫草夏菌丝体。

9.根据权利要求1-4任一权利要求所述的药物组合物，与可药用载体或赋形剂制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。

10.、根据权利要求l-4任一权利要求所述的药物组合物在制备预防及治疗肝纤维化药物中的应用。