CN101915830A - 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用 - Google Patents

一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN101915830A
CN101915830A CN201010234498XA CN201010234498A CN101915830A CN 101915830 A CN101915830 A CN 101915830A CN 201010234498X A CN201010234498X A CN 201010234498XA CN 201010234498 A CN201010234498 A CN 201010234498A CN 101915830 A CN101915830 A CN 101915830A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aptamer
biotin
ochratoxin
streptavidin
test strip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201010234498XA
Other languages
English (en)
Inventor
胥传来
马文蔚
陈伟
王利兵
匡华
刘丽强
胡拥明
彭池方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201010234498XA priority Critical patent/CN101915830A/zh
Publication of CN101915830A publication Critical patent/CN101915830A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Abstract

一种赭曲霉毒素A荧光检测试纸条及其应用，涉及一种量子点标记的适配体的荧光试纸条检测赭曲霉毒素A的方法，属于荧光检测技术领域。本发明试纸条，由下吸水垫(1)，量子点偶联Aptamer①(2)，streptavidin-biotin-Aptamer②(3)，streptavidin-biotin-Aptamer③(4)，上吸水垫(5)，硝酸纤维素膜(6)和底板(7)所组成。本发明应用层析式一步竞争法原理，试纸条的上下比色带来半定量检测样品中赭曲霉毒素A残留量，在15min内，快速准确地检测出样品是否含有赭曲霉毒素A，以确定赭曲霉毒素A是否超标，能够满足食品安全对赭曲霉毒素A残留量检测需求，适用于饲料、屠宰企业及政府检测机构；本发明与现有技术相比，具有使用方便、经济快捷、制作容易、成本低廉的特点。

Description

一种赭曲霉毒素A荧光检测试纸条及其应用
技术领域
一种赭曲霉毒素A荧光检测试纸条及其应用，涉及一种量子点标记的适配体的荧光试纸条检测赭曲霉毒素A的方法，属于荧光检测技术领域。
背景技术
赭曲霉毒素A，英文名称：ochratoxinA(OTA)是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的二次代谢产物，直接危害人类健康。该毒素多发生在30℃以下潮湿地区，体内和体外试验显示OTA具有遗传毒性，引起DNA的损伤，大鼠和小鼠试验能穿透胎盘引起致突变作用。上泌尿管肿瘤的患者，其血液中OTA的水平高于其他人群，因此暂定的每周耐受摄入量(PTWI)100ng/kg。考虑到小麦、大麦和黑麦是摄入OTA主要的食物品种，决定制定这些食物中OTA的限量标准。我国制定标准时参照CAC的指标值，规定赭曲霉毒素A在谷类、豆类中≤5μg/kg，以保护人民健康和调控进出口粮食。
目前检测OTA的主要方法是薄层色谱分析(TLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)，但这些仪器分析方法不仅需要昂贵的仪器设备，对检材的要求也比较高，需要经过复杂的样品前处理才能进行。而荧光试纸条的检测方法具有快速、灵敏度高、操作简单等优点。本发明用量子点与适量的适配体偶联制备荧光试纸条。
发明内容
本发明的目的是提供量子点标记的适配体的荧光试纸条用于检测赭曲霉毒素A，该方法具有快速、灵敏度高、操作简单等优点。
本发明的技术方案：
Aptamer①：3-NH2-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT
CGG ACA AAAAAAAAAAAAAAAAAA
Aptamer②：5-Biotin-TTT TTT TTT TTT TTT TTT
Aptamer③：5-Biotin-CTA GCC CAC ACC CAC CGC ATT TCC CTC GTA
GCC TGT
streptavidin与biotin-Aptamer②反应生成streptavidin-biotin-Aptamer②，streptavidin与biotin-Aptamer③反应生成streptavidin-biotin-Aptamer③，Aptamer①、Aptamer②、Aptamer③、streptavidin-biotin-Aptamer②、streptavidin-biotin-Aptamer③，均购自上海生工生物工程有限公司。
Streptavidin：阿拉丁试剂公司购买
赭曲霉毒素A荧光检测试纸条，由下吸水垫(1)，量子点偶联Aptamer①(2)，streptavidin-biotin-Aptamer②(3)，streptavidin-biotin-Aptamer③(4)，上吸水垫(5)，硝酸纤维素膜(6)和底板(7)所组成；
硝酸纤维素膜(6)固定于底板(7)上，硝酸纤维素膜(6)一端与上吸水垫(5)相联；另一端或者与下吸水垫(1)相联，或者通过固定于硝酸纤维素膜(6)这一端的量子点偶联Aptamer①(2)与下吸水垫(1)相连。
量子点偶联Aptamer①(2)、streptavidin-biotin-Aptamer②(3)、streptavidin-biotin-Aptamer③(4)间隔地顺序与硝酸纤维素膜(6)形成复合层；
其中，以streptavidin-biotin-Aptamer②(3)作为检测带，以streptavidin-biotin-Aptamer③(4)作为参照带。
试纸条宽度不低于3.5mm，且外观平整，材料附着牢固，液体移行速度不低于5mm/min。
所述下吸水垫(1)、量子点偶联Aptamer①(2)及上吸水垫(5)表面有不干胶纸。
本发明检测原理是利用吸水垫形成的毛细管虹吸效应，使被检测物质首先与量子点偶联Aptamer①发生竞争形式的结合，其后果是，当量子点偶联Aptamer①过量时，多余的适配体漂移到检测带，与streptavidin-biotin-Aptamer②结合并显色；而与检测物结合的量子点偶联Aptamer①，其V区结合位点被检测物质占据，只能跨越检测带漂移到参照带以C区位点与streptavidin-biotin-Aptamer③非特异性结合，同检测带进行比色而得到检测结果。
本发明的有益效果：本发明应用层析式一步竞争法原理，试纸条上下带比色来半定量检测样品中赭曲霉毒素A残留量，在15min内，快速准确地检测出样品是否含有赭曲霉毒素A，以确定赭曲霉毒素A是否超标，能够满足食品安全对赭曲霉毒素A残留量检测需求，适用于饲料、屠宰企业及政府检测机构。
本发明与现有技术相比，其效果不言而喻，即具有使用方便、经济快捷、制作容易、成本低廉的特点。
附图说明
图1赭曲霉毒素A荧光检测试纸条的侧视图。1、下吸水垫，2、量子点偶联Aptamer①，3、streptavidin-biotin-Aptamer②，4、streptavidin-biotin-Aptamer③，5、上吸水垫，6、硝酸纤维素膜，7、底板。
具体实施方式
以下结合附图做进一步说明。
1、赭曲霉毒素A荧光检测试纸条，包括：1、下吸水垫，2、量子点偶联Aptamer①，3、streptavidin-biotin-Aptamer②，4、streptavidin-biotin-Aptamer③，5、上吸水垫，6、硝酸纤维素膜，7、底板。
其中，以streptavidin-biotin-Aptamer②作为检测带，以streptavidin-biotin-Aptamer③作为参照带。
膜条宽度不低于3.5mm，且外观平整，材料附着牢固，液体移行速度不低于5mm/min。
2、赭曲霉毒素A荧光检测试纸条的制备
(1)biotin修饰的适配体Aptamer②、Aptamer③分别与streptavidin按摩尔比1∶4在常温下反应1小时，生成streptavidin-biotin-Aptamer②及streptavidin-biotin-Aptamer③。
(2)量子点与氨基修饰的Aptamer①按摩尔比1∶20在常温下反应3小时，生成量子点偶联Aptamer①。
将streptavidin-biotin-Aptamer②(3)、streptavidin-biotin-Aptamer③(4)间隔3-5mm顺序敷于底板(7)中部的的硝酸纤维素膜(6)上，与硝酸纤维素膜(6)表面形成复合层。
3、试纸条要求
(1)阴性参考品符合率
用磷酸盐缓冲液(PBS：0.01mol/L，pH 7.4)配制浓度为100ng/mL的呕吐毒素标准品溶液进行10次平行检测，以正常或矫正目力观察结果，反应时间在10min时观察结果，应为阴性。
用磷酸盐缓冲液(PBS：0.01mol/l，pH 7.4)配制浓度为100ng/mL的伏马毒素标准品溶液进行10次平行检测，以正常或矫正目力观察结果，反应时间在10min时观察结果，应为阴性。
(2)阳性参考品符合率
用磷酸盐缓冲液(PBS：0.01mol/L，pH 7.4)配制浓度为1、5、10、15ng/mL的赭曲霉毒素A标准品进行平行检测，各浓度进行10次平行实验，反应时间在10min时观察结果，不得出现阴性。
(3)最低检出量
用磷酸盐缓冲液(PBS：0.01mol/L，pH 7.4)分别配制浓度为0、1、5、10、15、20、100ng/mL的赭曲霉毒素A标准品溶液，各浓度进行10次平行实验，反应时间在10min时，以正常或矫正目力观察结果，最低检出量不高于10ng/mL。
(4)再现性
用磷酸盐缓冲液(PBS：0.01mol/L，pH 7.4)分别配制浓度为50ng/mL的氯硝西泮标准品溶液，进行10次平行实验，反应时间在10min时，以正常或矫正目力观察结果，结果一致，显色度均一。
(5)稳定性测试
37℃放置10天后，各项指标应符合以上要求。
4、试纸使用方法
(1)样品制备
血清：抽取待检动物血液，离心或静置后取透明上清液使用；若血清有过度溶血现象，应将血清用蒸馏水稀释一倍后再进行实验，否则试纸条红色太深，影响测试结果。
尿液：用尿液直接进行测试，如浑浊，先离心取上清液或用蒸馏水1∶1稀释。
(2)操作
将试纸条箭头端浸泡在待测样本中，不要超过下吸水垫1。浸入30sec取出放平，10min读取结果。
(3)检测结果
阴性：
两条带都显色，且检测带颜色深于参照带颜色，说明检测样品中不含赭曲霉毒素A。
两条带都显色，且检测带颜色与参照带颜色相同或接近，说明检测样品中赭曲霉毒素A含量低于5ppb(5ng/mL)。
阳性：
两条带都显色，但检测带颜色浅于参照带颜色，说明检测样品中赭曲霉毒素A含量超过5ppb(5ng/mL)。
检测带不显色，参照带显色，说明检测样品中的赭曲霉毒素A含量高于20ppb(20ng/mL)。

Claims (2)

1.一种赭曲霉毒素A荧光检测试纸条，其特征在于由下吸水垫(1)，量子点偶联Aptamer①(2)，streptavidin-biotin-Aptamer②(3)，streptavidin-biotin-Aptamer③(4)，上吸水垫(5)，硝酸纤维素膜(6)和底板(7)所组成；
硝酸纤维素膜(6)固定于底板(7)上，硝酸纤维素膜(6)一端与上吸水垫(5)相联；另一端或者与下吸水垫(1)相联，或者与通过固定于硝酸纤维素膜(6)这一端的量子点偶联Aptamer①(2)与下吸水垫(1)相连；
量子点偶联Aptamer①(2)、streptavidin-biotin-Aptamer②(3)、streptavidin-biotin-Aptamer③(4)间隔地顺序与硝酸纤维素膜(6)形成复合层；
其中，以streptavidin-biotin-Aptamer②(3)作为检测带，以streptavidin-biotin-Aptamer③(4)作为参照带；
试纸条宽度不低于3.5mm，且外观平整，材料附着牢固，液体移行速度不低于5mm/min；
所述量子点偶联物的核苷酸为：
Aptamer①：3-NH2-GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG
ACA AAA AAA AAA AAA AAA AAA，
Aptamer②：5-Biotin-TTT TTT TTT TTT TTT TTT，
Aptamer③：5-Biotin-CTA GCC CAC ACC CAC CGC ATT TCC CTC GTA GCC
TGT。
2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A荧光检测试纸条，其特征在于：下吸水垫(1)、量子点偶联Aptamer①(2)及上吸水垫(5)表面有不干胶纸。
CN201010234498XA 2010-07-19 2010-07-19 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用 Pending CN101915830A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010234498XA CN101915830A (zh) 2010-07-19 2010-07-19 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010234498XA CN101915830A (zh) 2010-07-19 2010-07-19 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101915830A true CN101915830A (zh) 2010-12-15

Family

ID=43323391

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201010234498XA Pending CN101915830A (zh) 2010-07-19 2010-07-19 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101915830A (zh)

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102128832A (zh) * 2010-12-27 2011-07-20 江南大学 一种西瓜果斑病毒金标核酸试纸条及其制备和应用
CN102517291A (zh) * 2011-11-25 2012-06-27 国家纳米技术与工程研究院 伏马毒素b1核酸适体及其应用
CN102517288A (zh) * 2011-11-25 2012-06-27 国家纳米技术与工程研究院 赭曲霉毒素a核酸适体及其应用
CN102559686A (zh) * 2011-11-25 2012-07-11 国家纳米技术与工程研究院 脱氧雪腐镰刀菌烯醇核酸适体及其应用
CN103033463A (zh) * 2012-12-26 2013-04-10 江南大学 一种利用适配体识别量子点标记结合流式细胞术同时检测两种致病菌的方法
CN103499691A (zh) * 2013-07-11 2014-01-08 苏州默锐克生物科技有限责任公司 一种her2蛋白表达水平的检测试纸
CN103525927A (zh) * 2013-10-11 2014-01-22 南京师范大学 一种检测赭曲霉毒素a的方法
CN103575713A (zh) * 2013-11-01 2014-02-12 山西大学 基于核酸适配体荧光各向异性检测赭曲霉素a的方法
CN103808701A (zh) * 2013-09-18 2014-05-21 河南省农业科学院 基于核酸嵌合染料荧光淬灭的赭曲霉毒素a均相快速检测方法
CN103808716A (zh) * 2014-01-07 2014-05-21 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 一种便携快速检测赭曲霉毒素a的方法
CN103983622A (zh) * 2014-04-16 2014-08-13 南昌大学 基于两种量子点之间能量转移的赭曲霉毒素a检测方法
CN104178568A (zh) * 2014-07-25 2014-12-03 清华大学 一种基于核酸适配体探针荧光传感分析检测待测样本中的靶标物质的方法
CN105372213A (zh) * 2015-09-29 2016-03-02 江南大学 一种基于上转换发光纳米材料和金纳米棒之间发光共振能量转移检测赭曲霉毒素a的方法
CN105974109A (zh) * 2016-06-14 2016-09-28 中州大学 一种检测赭曲霉毒素a的荧光免疫层析试纸
CN106018794A (zh) * 2016-06-14 2016-10-12 焦作百奥泰科生物科技有限公司 一种检测t-2毒素的荧光免疫层析试纸
CN106066400A (zh) * 2016-06-14 2016-11-02 焦作百奥泰科生物科技有限公司 一种检测玉米赤霉烯酮的荧光免疫层析试纸
CN108196048A (zh) * 2017-09-28 2018-06-22 浙江省产品质量安全检测研究院 一种双酚a荧光检测试纸条、制备方法及应用
CN107446929B (zh) * 2017-08-31 2020-10-13 天津科技大学 特异识别赭曲霉毒素a的核酸适配体及其制备方法
CN111896508A (zh) * 2020-07-08 2020-11-06 西南大学 一种基于核酸染料Genefinder快速检测赭曲霉毒素A的新方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1701164A1 (en) * 1997-07-16 2006-09-13 Charm Sciences Inc. A test device and method for detecting the presence of a residue analyte in a sample
CN101012483A (zh) * 2007-02-02 2007-08-08 浙江大学 含核酸适配子的检测试剂及其制备方法和用途
AT505372A2 (de) * 2007-05-21 2008-12-15 Erber Ag Verfahren zur quantitativen bestimmung von analyten mit einem testelement sowie testsystem und verwendung desselben
CN101358963A (zh) * 2007-08-01 2009-02-04 中国计量学院 一种利用适配子快速检测水产品中孔雀石绿的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1701164A1 (en) * 1997-07-16 2006-09-13 Charm Sciences Inc. A test device and method for detecting the presence of a residue analyte in a sample
CN101012483A (zh) * 2007-02-02 2007-08-08 浙江大学 含核酸适配子的检测试剂及其制备方法和用途
AT505372A2 (de) * 2007-05-21 2008-12-15 Erber Ag Verfahren zur quantitativen bestimmung von analyten mit einem testelement sowie testsystem und verwendung desselben
CN101358963A (zh) * 2007-08-01 2009-02-04 中国计量学院 一种利用适配子快速检测水产品中孔雀石绿的方法

Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102128832A (zh) * 2010-12-27 2011-07-20 江南大学 一种西瓜果斑病毒金标核酸试纸条及其制备和应用
CN102517291A (zh) * 2011-11-25 2012-06-27 国家纳米技术与工程研究院 伏马毒素b1核酸适体及其应用
CN102517288A (zh) * 2011-11-25 2012-06-27 国家纳米技术与工程研究院 赭曲霉毒素a核酸适体及其应用
CN102559686A (zh) * 2011-11-25 2012-07-11 国家纳米技术与工程研究院 脱氧雪腐镰刀菌烯醇核酸适体及其应用
CN103033463A (zh) * 2012-12-26 2013-04-10 江南大学 一种利用适配体识别量子点标记结合流式细胞术同时检测两种致病菌的方法
CN103499691A (zh) * 2013-07-11 2014-01-08 苏州默锐克生物科技有限责任公司 一种her2蛋白表达水平的检测试纸
CN103808701A (zh) * 2013-09-18 2014-05-21 河南省农业科学院 基于核酸嵌合染料荧光淬灭的赭曲霉毒素a均相快速检测方法
CN103808701B (zh) * 2013-09-18 2016-04-13 河南省农业科学院 基于核酸嵌合染料荧光淬灭的赭曲霉毒素a均相快速检测方法
CN103525927A (zh) * 2013-10-11 2014-01-22 南京师范大学 一种检测赭曲霉毒素a的方法
CN103575713A (zh) * 2013-11-01 2014-02-12 山西大学 基于核酸适配体荧光各向异性检测赭曲霉素a的方法
CN103808716A (zh) * 2014-01-07 2014-05-21 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 一种便携快速检测赭曲霉毒素a的方法
CN103808716B (zh) * 2014-01-07 2016-06-08 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 一种便携快速检测赭曲霉毒素a的方法
CN103983622A (zh) * 2014-04-16 2014-08-13 南昌大学 基于两种量子点之间能量转移的赭曲霉毒素a检测方法
CN104178568A (zh) * 2014-07-25 2014-12-03 清华大学 一种基于核酸适配体探针荧光传感分析检测待测样本中的靶标物质的方法
CN104178568B (zh) * 2014-07-25 2016-03-30 清华大学 一种基于核酸适配体探针荧光传感分析检测待测样本中的靶标物质的方法
CN105372213A (zh) * 2015-09-29 2016-03-02 江南大学 一种基于上转换发光纳米材料和金纳米棒之间发光共振能量转移检测赭曲霉毒素a的方法
CN105974109A (zh) * 2016-06-14 2016-09-28 中州大学 一种检测赭曲霉毒素a的荧光免疫层析试纸
CN106018794A (zh) * 2016-06-14 2016-10-12 焦作百奥泰科生物科技有限公司 一种检测t-2毒素的荧光免疫层析试纸
CN106066400A (zh) * 2016-06-14 2016-11-02 焦作百奥泰科生物科技有限公司 一种检测玉米赤霉烯酮的荧光免疫层析试纸
CN105974109B (zh) * 2016-06-14 2017-08-04 中州大学 一种检测赭曲霉毒素a的荧光免疫层析试纸
CN106018794B (zh) * 2016-06-14 2017-08-04 焦作百奥泰科生物科技有限公司 一种检测t‑2毒素的荧光免疫层析试纸
CN107446929B (zh) * 2017-08-31 2020-10-13 天津科技大学 特异识别赭曲霉毒素a的核酸适配体及其制备方法
CN108196048A (zh) * 2017-09-28 2018-06-22 浙江省产品质量安全检测研究院 一种双酚a荧光检测试纸条、制备方法及应用
CN111896508A (zh) * 2020-07-08 2020-11-06 西南大学 一种基于核酸染料Genefinder快速检测赭曲霉毒素A的新方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101915830A (zh) 一种赭曲霉毒素a荧光检测试纸条及其应用
EP0407904B1 (de) Verfahren zur Bestimmung eines Analyten
CA2320418A1 (en) Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells
ATE63167T1 (de) Heterogener spezifischer bindungstest unter verwendung eines anhaeufbaren bindungsreagens.
JP2010500555A (ja) 側方流動分析用試験片
CN111454913A (zh) 一种新型冠状病毒SARS-Cov-2保存液及其制备方法和应用
CN111398593A (zh) 一种快速联合检测卡及其制备方法和应用
Rahbar et al. Sensitive colorimetric detection of interleukin-6 via lateral flow assay incorporated silver amplification method
CN110988365A (zh) 尿胱抑素c、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒
CN110850103A (zh) 一种基于均相化学发光免疫竞争法检测猫血清淀粉样蛋白a的试剂盒
CN113125753B (zh) 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒
DK0381450T3 (da) Assay for basisk phosphatase fra knogler.
CN102128832A (zh) 一种西瓜果斑病毒金标核酸试纸条及其制备和应用
CN101329338A (zh) 一种硝西泮胶体金法检测试纸及制备方法
CN103149357B (zh) 一种利用竞争法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡
CN113671168B (zh) 用于检测黄曲霉毒素b1的酶联免疫试剂盒及其制备方法、以及检测方法
CN111474359B (zh) 一种多联检测胶体金免疫层析试纸条的制备方法及应用
CN101320039B (zh) 一种地西泮胶体金法检测试纸及制备方法
CN112816701A (zh) 胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法及胶体金侧流层析试剂盒
CN1851463B (zh) 间接酶联免疫吸附试验检测马动脉炎病毒的方法
CN200944107Y (zh) 氯霉素胶体金法检测试纸
CN101315365A (zh) 一种氯硝西泮胶体金法检测试纸及制备方法
Megahed et al. Comparative biochemical studies on natural Trypanosoma evansi infection in she-camels
Serebrennikova et al. Gradient lateral flow immunoassay of human chorionic gonadotropin
CN1818658B (zh) 土霉素胶体金法检测试纸及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20101215