CN101889588B - 蜡蚧霉黄色无纺布菌剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种蜡蚧霉黄色无纺布菌剂及制备方法，即一种高效防治桔园、茶园刺吸式口器害虫的真菌杀虫剂--蜡蚧霉(原名蜡蚧轮枝菌)黄色无纺布菌剂的生产工艺方法。该方法包括五道生产工序，即菌种的取得、一级斜面菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产和黄色无纺布菌条的接种培养。本发明生产的杀虫剂，对害虫的防治效果持久，对于桔园和茶园中趋黄习性的粉虱、蚜虫、叶蝉类害虫杀虫效果明显且稳定，受天气影响相对较小，工艺稳定，投资少，占地小，生产无三废问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀虫真菌的新剂型生产方法，具体地说是一种分离自粉虱的蜡蚧霉(原名蜡蚧轮枝菌)[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]LFZ0408菌株，能高效防治桔园、茶园刺吸式口器害虫的黄色无纺布菌剂的生产方法。
背景技术
化学杀虫剂以快速作用方式保护作物免受损失的同时也留下了日益严重的后果，引发了一系列环境和社会问题。害虫抗药性迅速增加，防治成本不断抬高，农业生态环境日趋恶化，环境污染日趋严重，形成了越用药越泛滥，越泛滥越用药的恶性循环。因此，发展生物杀虫剂，应用现代生物技术控制害虫是21世纪农业可持续发展的重要课题。
生物制剂中，杀虫真菌制剂作用方式独特，常通过昆虫体壁接触感染致死昆虫。而细菌、病毒等昆虫病原微生物必须经昆虫口器摄入到消化道内才能感染并致死昆虫，因此对一般的咀嚼式口器害虫有效，而无法对作用于将口针插于植物韧皮部吸食汁液的蚜虫类刺吸式口器害虫。由于作用方式独特，杀虫真菌不仅对咀嚼式口器害虫有效，更对刺吸式口器害虫有效。开发和应用真菌生物杀虫剂受到各国的重视。目前世界上开发了蜡蚧霉、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌和拟青霉等真菌杀虫剂，注册生产了20多个产品。
蜡蚧霉是主要侵染蚜虫、介壳虫、蓟马和粉虱等刺吸式口器害虫，多发生于热带和亚热带地区，亦常发生于温带地区的栽培温室。自1981年Hall开发的第一个V.lecanii杀蚜剂产品Vertalec？商品化以来，至今已有多个国家的8种以上的商品分别以Vertalec、Mycotal、Thriptal、Vertisol、AgroBiocontrol Verticillium50、Verticon、Verticillin和Mycolab’s Verticillium lecanii等名称进行生产、销售，用于温室等场所的蚜虫、粉虱和蓟马等害虫防治，该菌制剂产品由于效果较慢，对使用环境有一定要求(如高湿度的要求)；在发展过程中(尤其是在防治蚜虫的应用过程中)，曾受到抗蚜威等专用化学农药的竞争压力影响，导致市场占有率有所下降。我国目前有该菌与化学农药的混合剂的报道(专利200910037998.1“蜡蚧轮枝菌与定虫眯复配的杀虫主剂及杀虫剂”、专利200910037745.4“蜡蚧轮枝菌与吡虫啉复配的杀虫主剂及杀虫剂”、专利200910037747.3“蜡蚧轮枝菌与阿维菌素复配的杀虫主剂及杀虫剂”、专利200910037748.8“蜡蚧轮枝菌与高效氯氰菊酯复配的杀虫主剂及杀虫剂”、专利200910037750.5“蜡蚧轮枝菌与印楝素复配的杀虫主剂及杀虫剂”)，但是这些化学农药在有机茶园和果园中，仍然是禁用的，况且也会杀伤天敌。
发明内容
为了解决上述问题，本发明将生物防治与物理防治结合起来，无纺布菌条与黄色诱虫方法相结合。无纺布作为真菌培养基载体，能保持和满足在无纺布上生长的蜡蚧霉孢子萌发所需的湿度；黄色能引诱害虫，增加与真菌孢子的接触机会，增强侵染，造成害虫流行病的发生，以控制害虫种群。本发明提供一种对于桔园和茶园中具趋黄习性的粉虱、蚜虫、叶蝉类刺吸式口器害虫有良好杀灭效果的蜡蚧霉黄色无纺布菌条生产工艺方法。
本发明的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂菌剂以蜡蚧轮枝菌为有效成分，将蜡蚧轮枝菌经过培养、发酵后后的发酵液中浸入无纺布条，并在无纺布条上培养出孢子得到蜡蚧霉黄色无纺布菌剂。
本发明的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法：制备步骤包括：菌种的取得、一级斜面菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产和无纺布菌条的接种培养。
本发明中所用到的菌种为LFZ0408菌株，该菌株已经于2009年12月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.3521，分离自粉虱的蜡蚧霉[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]，分类命名Lecanicillium lecanii。
该LFZ0408菌株为2004年8月从福州市郊蔬菜上的烟粉虱上分离，通过下分离方法，经分离纯化而获得。
分离方法：在Kenji Kitazawa等(1984)方法上加以改进，即：将罹病烟粉虱虫尸于75％酒精中浸10s左右，取出用无菌水漂洗3次，每次约3min至5min，放置于含2％的青霉素和4％的链霉素的PDA平板中，培养2d后，观察生长状况；若虫尸上已长出白色菌丝，周围有杂菌长出，用手术刀小心地将虫尸从原平板移到新平板中继续培养；若虫尸部分已被杂菌覆盖，用无菌手术刀小心切下白色菌丝于新平板培养；若无杂菌出现，则将虫尸保留在原平板培养。培养至产孢(7天左右)，于新平板划线，挑单斑转接到斜面保存。
Kenji Kitazawa等(1984)方法：Kenji Kitazawa，Ichiro Fujisawa andShun-ichi Imabayashi(1984).Isolation of(Verticillium)lecanii(Zimm.)Viegasaffecting aphids and greenhouse whitefly in Japan.Ann.Phytopath.Soc.Japan，50，574-581。
由于虫生真菌具有可观的扩散效果，较长的土壤宿存能力，独特的体壁侵染方式，以及害虫抗性发展缓慢和容易生产等显著优点，而且毒力测定的结果证明以蜡蚧霉为代表的真菌杀虫剂对桔园、茶园刺吸式口器害虫如各种蚜虫、粉虱、叶蝉等有强大的毒力。只要选择良好的施用方式和正确的剂型，就能取得优于其他生物或化学农药无可比拟的良好效果。
本发明工艺生产的黄极无纺布菌条剂型具有独特的先进性：一是对害虫的防治效果持久。由于无纺布上的真菌孢子生存活性远高于孢子粉，而且，真菌还可以利用无纺布上的营养不断生长产孢，孢子存活力明显加长，有利于杀灭害虫；二是无纺布真菌菌条剂型在田间寿命很长，受天气影响相对较小。无纺布上的孢子主要是靠飘移而接触虫体的，与昆虫接触的机会相对较多；环境中有利因子出现的时间较长，只要条件具备就会侵染害虫，受环境制约的幅度较小；三是黄色引诱害虫，增加无纺布上的孢子与昆虫接触的机会；四是本发明工艺生产的蜡蚧霉菌是条针对桔园、茶园刺吸式口器害虫如各种蚜虫、粉虱、叶蝉，杀虫效果明显且稳定；五是本发明生产工艺不复杂、工艺稳定、易调控、成功率高。六是投资少，占地小、无三废问题，尤其适于甲小企业采用。
具体实施方式
具体制备步骤包括：
A、菌种的取得：
LFZ0408菌株，其保藏号为CGMCC No.3521，分离自粉虱的蜡蚧霉[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]；
B、一级斜面菌种培养：
将所述LFZ0408菌株接种于PDA斜面培养基，放入25℃培养箱，培养7-9天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入摇瓶进行液体种子培养；
C、液体种子培养：
在500ml三角瓶中，装入200ml的液体种子培养基，以1.5pa/kg高压灭菌30min，待冷却至40±1℃，在超净工作台内，从斜面菌种子刮取2支培养好的一级斜面菌种的孢子粉到无菌的体积浓度为0.01％的Tween80水溶液中，刮取试管的规格为180mm×15mm，利用高速分散器使孢子分散均匀，然后将该菌悬浮液接液体培养基中，置于恒温振荡培养箱，23-25℃，140转/分，培养5-7天即可；
D、液体发酵生产：采用三级发酵：
(1)、一级种子罐生产
取50L气升式发酵罐，装入35L液体培养基，温度95℃-100℃，并加入消泡剂(泡敌)10.5ml，在0.15MPa压力下，保压25-40min，消毒冷却后将4瓶步骤(3)培养好的500ml摇瓶种子接入培养，24-26℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.05-0.07MPa，经60-72hr通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；
(2)、二级种子罐生产
取100L气升式发酵罐，装入70L液体培养基，温度95℃-100℃，并加入消泡剂(泡敌)18ml，在0.15MPa压力下，保压25-40min，消毒冷却后将一级种子罐种子35L全部接入二级种子罐培养，温度24-26℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.05-0.07MPa，经60-72hr通气培养，达到对数生长期后，接入三级种子罐；
(3)、三级种子罐生产
取1T气升式发酵罐，装入700L液体培养基液体，pH 6.0-7.2，加入的热水温度95℃-100℃，并加入消泡剂(泡敌)210ml，通入蒸汽加热到121℃，保压30min，冷却至24-26℃，将二级种子罐培养好的液体种子70L全部接入，通气培养，通气量1∶0.4-0.5V/V·min，搅拌转速150r/m，罐压0.05-0.07MPa，培养时间72-96hr；
当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；
E、将黄色无纺布条在1.5Pa/Kg高压灭菌30min后，冷却后按700条无纺布条接入100L发酵液的比例浸入已培养好的发酵液，在20-28℃，湿度为RH93％的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在20-28℃，湿度为RH90％的培养室继续培养3-5天，使菌条上长满大量孢子，风干即可。
PDA斜面培养基包括：马铃薯200g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂20g，水1000ml。
液体种子培养基包括：在1000ml培养基中含40g葡萄糖、20g酵母浸膏、0.5g KH2PO4，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH水溶液调pH至6.50。
气升式发酵罐中的液体培养基培养基包括：6％麸皮煮汁、25.％葡萄糖、2％酵母粉和0.05％K2HPO4，pH6.3。即在1000ml培养基中含20g葡萄糖、20g酵母粉、0.5gKH2PO4，加麸皮煮汁，即在800ml水中加麸皮60g煮30min，一层纱布过滤，去除残渣，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH调pH至6.5。
消泡剂为泡敌，用量为培养液，即发酵液总量的0.03％，即35L中加量为10.5ml，70L培养料中加21ml，700L培养料中加210ml。
无纺布条，颜色为黄色，长60cm，宽5cm，厚0.4cm。
以下为本发明的几个实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
该蜡蚧霉无纺布菌条生产工艺方法，包括五道生产工序：
1、菌种：
LFZ0408菌株，为分离自粉虱的蜡蚧霉(Lecanicillium(Verticillium)lecanii)；
2、一级斜面菌种培养：
将分离纯化的菌种接种于PDA培养基斜面，每1000ml培养基含马铃薯200g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂20g，水1000ml；放入25℃培养箱，培养7天；待菌丝长满斜面并产孢时.即可转入摇瓶培养；
3、液体种子培养：
在500ml三角瓶中，装入200ml的液体种子培养基，1.5pa/kg高压灭菌30min，待冷却至40℃左右，接入斜面菌种，接种量为500ml三角瓶接2支培养好的一级斜面菌种，试管规格1.80mm×15mm。接种后置于恒温振荡培养箱，23-25℃，140转/分，培养5天即可；
4、液体发酵生产：该工序分为三个步骤即采用三级发酵
(1)、一级种子罐生产
取50L气升式发酵罐，装入35L液体培养基，温度大于95℃，并加入消泡剂(泡敌)10.5ml，在0.15MPa压力下，保压25-40min，消毒冷却后将4瓶上述培养好的500ml摇瓶种子接入培养，24-26℃，通气量1∶0.5V/V穖in，保压0.05-0.07MPa，经60-72hr通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；
(2)、二级种子罐生产
取100L气升式发酵罐，以培养70L液体菌种计算(注意扣除消毒过程中的冷凝水30L)；按配方加入原料和水，即装入35L液体培养基，液体培养基配方及其它控制条件同一级种子罐生产；达到对数生长期后，接入三级种子罐。
(3)、三级种子罐生产
三级种子罐生产取1T气升式发酵罐，装入700L液体培养基液体，发酵用培养基配方同一级种子罐生产，pH6.0-7.0。将培养料按比例投入发酵罐中，加入热水，热水温度等于95℃，加入消泡剂(泡敌)210ml，通入蒸汽加热到121℃，保压30min，冷却至24-26℃，将二级种子罐培养好的液体种子70L全部接入(注意培养时体积应控制在发酵罐体积80％，即700L)，通气培养，通气量1∶0.4-0.5V/V穖in，搅拌转速150r/m，罐压0.05-0.07MPa，培养时问80hr；经检验合格，即可放罐。
当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；
5、菌条灭菌及接种培养
将无纺布条剪成长60cm，宽5cm，厚0.4cm的条状，染成黄色后在1.5Pa/Kg高压灭菌30min后，冷却后按700条无纺布条接入100L发酵液的比例接(浸)入已培养好的发酵液，在20-28℃，RH93％的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在20-28℃，RH90％的培养室继续培养3-5天，菌条上长满大量孢子，风干即可。
实施例2
A、菌种的取得：
LFZ0408菌株，其保藏号为CGMCC No.3521，分离自粉虱的蜡蚧霉[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]；
B、一级斜面菌种培养：
将所述LFZ0408菌株接种于PDA斜面培养基，放入25℃培养箱，培养7天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入摇瓶进行液体种子培养；
C、液体种子培养：
在500ml三角瓶中，装入200ml的液体种子培养基，以1.5pa/kg高压灭菌30min，待冷却至40±1℃，在超净工作台内，从斜面菌种子刮取2支培养好的一级斜面菌种的孢子粉到无菌的体积浓度为0.01％的Tween80水溶液中，刮取试管的规格为180mm×15mm，利用高速分散器使孢子分散均匀，然后将该菌悬浮液接液体培养基中，置于恒温振荡培养箱，23℃，140转/分，培养5天即可；
D、液体发酵生产：采用三级发酵：
(1)、一级种子罐生产
取50L气升式发酵罐，装入35L液体培养基，温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)10.5ml，在0.15MPa压力下，保压25min，消毒冷却后将4瓶步骤(3)培养好的500ml摇瓶种子接入培养，24℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.05MPa，经60hr通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；
(2)、二级种子罐生产
取100L气升式发酵罐，装入70L液体培养基，温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)18ml，在0.15MPa压力下，保压25min，消毒冷却后将一级种子罐种子35L全部接入二级种子罐培养，温度24℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.05MPa，经60hr通气培养，达到对数生长期后，接入三级种子罐；
(3)、三级种子罐生产
取1T气升式发酵罐，装入700L液体培养基液体，pH 6.0，加入的热水温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)210ml，通入蒸汽加热到121℃，保压30min，冷却至24℃，将二级种子罐培养好的液体种子70L全部接入，通气培养，通气量1∶0.5V/V·min，搅拌转速150r/m，罐压0.05MPa，培养时间72hr；
当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；
E、将黄色无纺布条在1.5Pa/Kg高压灭菌30min后，冷却后按700条无纺布条接入100L发酵液的比例浸入已培养好的发酵液，在20℃，湿度为RH93％的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在20℃，湿度为RH90％的培养室继续培养3天，使菌条上长满大量孢子，风干即可。
PDA斜面培养基包括：马铃薯200g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂20g，水1000ml。
液体种子培养基包括：在1000ml培养基中含40g葡萄糖、20g酵母浸膏、0.5g KH2PO4，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH水溶液调pH至6.50。
气升式发酵罐中的液体培养基培养基包括：6％麸皮煮汁、25.％葡萄糖、2％酵母粉和0.05％K2HPO4，pH6.3。即在1000ml培养基中含20g葡萄糖、20g酵母粉、0.5gKH2PO4，加麸皮煮汁，即在800ml水中加麸皮60g煮30min，一层纱布过滤，去除残渣，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH调pH至6.5。
消泡剂为泡敌，用量为培养液，即发酵液总量的0.03％，即35L中加量为10.5ml，70L培养料中加21ml，700L培养料中加210ml。
无纺布条，颜色为黄色，长60cm，宽5cm，厚0.4cm。
实施例3
A、菌种的取得：
LFZ0408菌株，其保藏号为CGMCC No.3521，分离自粉虱的蜡蚧霉[Lecanicillium(Verticillium)lecanii]；
B、一级斜面菌种培养：
将所述LFZ0408菌株接种于PDA斜面培养基，放入25℃培养箱，培养9天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入摇瓶进行液体种子培养；
C、液体种子培养：
在500ml三角瓶中，装入200ml的液体种子培养基，以1.5pa/kg高压灭菌30min，待冷却至40±1℃，在超净工作台内，从斜面菌种子刮取2支培养好的一级斜面菌种的孢子粉到无菌的体积浓度为0.01％的Tween80水溶液中，刮取试管的规格为180mm×15mm，利用高速分散器使孢子分散均匀，然后将该菌悬浮液接液体培养基中，置于恒温振荡培养箱，25℃，140转/分，培养7天即可；
D、液体发酵生产：采用三级发酵：
(1)、一级种子罐生产
取50L气升式发酵罐，装入35L液体培养基，温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)10.5ml，在0.15MPa压力下，保压40min，消毒冷却后将4瓶步骤(3)培养好的500ml摇瓶种子接入培养，26℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.07MPa，经72hr通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；
(2)、二级种子罐生产
取100L气升式发酵罐，装入70L液体培养基，温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)18ml，在0.15MPa压力下，保压40min，消毒冷却后将一级种子罐种子35L全部接入二级种子罐培养，温度26℃，通气量1∶0.5V/V·min，保压0.07MPa，经72hr通气培养，达到对数生长期后，接人三级种子罐；
(3)、三级种子罐生产
取1T气升式发酵罐，装入700L液体培养基液体，pH7.2，加入的热水温度95℃，并加入消泡剂(泡敌)210ml，通入蒸汽加热到121℃，保压30min，冷却至26℃，将二级种子罐培养好的液体种子70L全部接入，通气培养，通气量1∶0.5V/V·min，搅拌转速150r/m，罐压0.07MPa，培养时间96hr；
当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；
E、将黄色无纺布条在1.5Pa/Kg高压灭菌30min后，冷却后按700条无纺布条接入100L发酵液的比例浸入已培养好的发酵液，在28℃，湿度为RH93％的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在28℃，湿度为RH90％的培养室继续培养5天，使菌条上长满大量孢子，风干即可。
PDA斜面培养基包括：马铃薯200g，蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂20g，水1000ml。
液体种子培养基包括：在1000ml培养基中含40g葡萄糖、20g酵母浸膏、0.5g KH2PO4，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH水溶液调pH至6.50。
气升式发酵罐中的液体培养基培养基包括：6％麸皮煮汁、25.％葡萄糖、2％酵母粉和0.05％K2HPO4，pH6.3。即在1000ml培养基中含20g葡萄糖、20g酵母粉、0.5gKH2PO4，加麸皮煮汁，即在800ml水中加麸皮60g煮30min，一层纱布过滤，去除残渣，各组分混合后加水补至1000ml，并用饱和NaOH调pH至6.5。
消泡剂为泡敌，用量为培养液，即发酵液总量的0.03％，即35L中加量为10.5ml，70L培养料中加21ml，700L培养料中加210ml。
无纺布条，颜色为黄色，长60cm，宽5cm，厚0.4cm。
使用实施例
蜡蚧轮枝菌LFZ0408无纺布菌剂的使用过程和防治茶蚜的效果
于茶蚜虫口高峰期的6月份，选福建农林大学教学茶场茶园，树龄18年，距1.5m，株距33cm，株高85-90cm，树幅宽110cm。试验设4个处理：
处理1，插放10条黄色无纺布菌；处理2，插放10条白色无纺布菌；处理3，喷LFZ0408菌株孢子悬浮液菌剂，孢子浓度为1.9×107孢子/mL；对照区不作任何处理。每个处理设3个重复，每个重复0.167亩，菌条高出茶园篷面10cm。
3周后，按照五点取样法调查茶蚜虫口密度，以药后虫口减退率计算校正防效，并用新复极差进行显著性测定。
减退率(％)＝[(药前虫口基数处理后虫口数)/药前虫口基数]×100
校正防效(％)＝[(处理区减退率对照区减退率)/(100-对照区减退率)]×100
感染率的估计：按照五点取样法调查茶蚜，带回室内镜检，统计茶蚜死的亡虫数，将死虫移出放于盛有湿吸水纸的培养皿内的载玻片上，25℃保湿培养，以虫体表而长出蜡蚧霉白色菌丝为有效致死，统计有效致死虫数，感染率(％)＝有效致死虫数/柑桔粉虱数亡虫数×100。
上述数据分析与统计使用Systat.10.处理。
表1田间释放蜡蚧轮枝菌LFZ0408菌剂的防治茶蚜效果
*注：后面字母为Duncan多重比较的检验结果，同一列中凡有相同字母者，表示在0.05水平上差异不显著，否者为差异显著。
结果表明，释放黄色无纺布菌条的小区茶蚜密度降到了一个很低水平(降低7.24倍)，虫口退减率达86.18％，防治效果达到81.39％，比白色无纺布菌条的小区防治效果高2.19倍，比喷孢子悬浮液的小区防效高1.42倍。由于黄色对茶蚜的诱集效应增加对菌条孢子的接触机会，感染率大大提高，由38.2％增加64.41％，由从而提高了防治效果；由于无纺布吸收空气中水份，提供了孢子萌发所需的高湿度微环境，感染率大大提高，由46.80％增加64.41％，从而提高了防治效果。
Claims (7)
1.一种蜡蚧霉黄色无纺布菌剂，其特征在于：所述菌剂以蜡蚧轮枝菌为有效成分，将蜡蚧轮枝菌经过培养、发酵后的发酵液中浸入无纺布条，并在无纺布条上培养出孢子得到蜡蚧霉黄色无纺布菌剂；所述的蜡蚧轮枝菌（Lecanicillium lecanii）LFZ0408菌株，其保藏号为CGMCC No.3521。
2.一种如权利要求1所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于：制备步骤包括：菌种的取得、一级斜面菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产和无纺布菌条的接种培养；
A、菌种的取得:
LFZ0408菌株，其保藏号为CGMCC No.3521，分离自粉虱的蜡蚧霉（Lecanicillium lecanii）；
B、一级斜面菌种培养:
将所述LFZ0408菌株接种于PDA斜面培养基，放入25℃培养箱，培养7-9天，待菌丝长满斜面并产孢时，转入摇瓶进行液体种子培养；
C、液体种子培养:
在500m1三角瓶中，装入 200ml的液体种子培养基，以1.5 Pa/kg高压灭菌30min，待冷却至40±1℃，在超净工作台内，从斜面菌种子刮取2环培养好的一级斜面菌种的孢子粉到无菌的体积浓度为0.01%的Tween80水溶液中，刮取试管的规格为 180mm×15mm，利用高速分散器使孢子分散均匀，然后将该菌悬浮液接液体培养基中，置于恒温振荡培养箱，23-25℃, 140转/分，培养5-7天即可；
D、液体发酵生产:采用三级发酵：
(1)、一级种子罐生产
取50L气升式发酵罐，装入35 L液体培养基，温度95℃-100℃，并加入消泡剂10.5m1，在0.15MPa压力下，保压25-40min，消毒冷却后将4瓶步骤C培养好的500m1摇瓶种子接入培养，24-26℃，通气量l∶0.5 V/V·min ，保压0.05-0.07MPa，经60-72 h通气培养，达到对数生长期后，接入二级种子罐；
(2)、二级种子罐生产
取100L气升式发酵罐，装入70L液体培养基，温度95℃-100℃，并加入消泡剂18m1，在0.15MPa压力下，保压25-40min，消毒冷却后将一级种子罐种子35L全部接入二级种子罐培养，温度24-26℃，通气量1:0.5 V/V·min ，保压0.05-0.07MPa，经60-72 h通气培养，达到对数生长期后，接入三级种子罐；
(3)、三级种子罐生产
取1T气升式发酵罐，装入700L液体培养基，pH 6.0-7.2，加入的热水温度95℃-100℃，并加入消泡剂210m1,通入蒸汽加热到121 ℃，保压30min，冷却至24-26 ℃，将二级种子罐培养好的液体种子70L全部接入，通气培养，通气量1:0.4-0.5 V/V·min，搅拌转速150r/m,罐压0.05-0.07MPa，培养时间72-96 h；
当发酵液中出现大量菌丝及液生孢子时，残糖在1%以下，发酵液较粘稠，另外镜检菌丝变细、菌丝体中无明显的液泡，发酵液中无明显断裂的菌丝，可放罐；
E、将黄色无纺布条在1.5Pa/Kg高压灭菌30min后，冷却后按700条无纺布条接入 100L发酵液的比例浸入已培养好的发酵液，在20-28℃，湿度为RH93%的培养室架上平铺培养5天，待菌条上长满菌丝后，移入温度在20-28℃，湿度为RH90%的培养室继续培养3-5天，使菌条上长满大量孢子，风干即可。
3.根据权利要求2所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于：所述的PDA斜面培养基包括：马铃薯200g，蛋白胨10g,葡萄糖40g,琼脂20g，水 1000ml。
4.根据权利要求2所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于:所述的液体种子培养基包括：在1000m1培养基中含40g葡萄糖、20g酵母浸膏、0.5g KH2PO4，各组分混合后加水补至1000m1，并用饱和NaOH水溶液调pH至6.50。
5.根据权利要求2所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于:所述的气升式发酵罐中的液体培养基包括：在1000m1培养基中含20g葡萄糖、20g酵母粉、0.5g KH2PO4，加麸皮煮汁，即在800 ml水中加麸皮60g煮30min，一层纱布过滤，去除残渣，各组分混合后加水补至1000m1，并用饱和NaOH水溶液调pH至6.5。
6.根据权利要求2所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于：所述液体发酵生产步骤中三级发酵过程中采用的消泡剂均为泡敌，用量为培养液，即发酵液总量的0.03%，即35L中加量为10.5m1,70L培养料中加21m1, 700L培养料中加210m1。
7.根据权利要求2所述的蜡蚧霉黄色无纺布菌剂的制备方法，其特征在于：所述的无纺布条，颜色为黄色，长60cm，宽5 cm,厚0.4 cm。
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