CN101857588B

CN101857588B - 4-芳香胺基喹唑啉类衍生物及其用途

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Publication number: CN101857588B
Application number: CN2010101945804A
Authority: CN
Inventors: 吉民; 郑友广; 李丽丽; 郑明�
Original assignee: Southeast University
Current assignee: Southeast University
Priority date: 2010-06-08
Filing date: 2010-06-08
Publication date: 2013-11-27
Anticipated expiration: 2030-06-08
Also published as: CN101857588A

Abstract

本发明公开了一种4-芳香胺基喹唑啉类衍生物及其应用途，其中4-芳香胺基喹唑啉类衍生物具有式(I)结构。药理实验表明，此类化合物或其药学上可接受的盐对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。

其中：A环为苯环、烷基苯环、苯并噻吩环或烷基苯并噻吩环；R₁为氢或烷氧基；n选自1～6的整数；R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自氢、烷基、环烷基、或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为烷基或羟烷基；R₃为酯基、取代或非取代的苯胺基、取代或非取代的吡啶胺基、取代或非取代的嘧啶胺基、取代或非取代的苄基脲基、取代或非取代的吡啶甲基脲基、取代或非取代的嘧啶甲基脲基或取代或非取代的环烷基脲基，其中取代基为卤素、烷基、苯基或吡啶基或嘧啶基，取代基优选为苯基、吡啶基或嘧啶基。

Description

4-芳香胺基喹唑啉类衍生物及其用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种Aurora激酶抑制剂，即4-芳香胺基喹唑啉类衍生物及其用途。

背景技术

蛋白激酶(Protein Kinases)包括蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(STK)和蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinase，PTK)。其中，一种参与有丝分裂的丝氨酸/苏氨酸激酶新家族-Aurora家族被逐渐认识，它们分为3类：Aurora-A、Aurora-B和Aurora-C，主要调节中心体和微管的功能，确保中心体的正确分离和胞浆的完整分裂。

Aurora激酶的功能涉及有丝分裂的各项重要事件，包括中心粒周期、纺锤体变化、染色体分离以及胞质分裂等等。在正常细胞中，Aurora激酶依靠各种形式的调控手段在特异的时间、空间表达和活化，作用于各种底物分子，从而实现不同的生物学功能。近年来，人们在大量的实验中发现很多参与Aurora激酶调控作用的分子，主要包括三类：(1)Aurora激酶的上游调控分子，如TPX2、P53、PP1等，它们或者影响Aurora的激酶活性，或指导Aurora的定位；(2)Aurora激酶的伙伴分子，如INCENP、survivin等，它们既是磷酸化的底物，也是具有反馈性激活作用，Aurora激酶的亚细胞定位依赖其伙伴分子，反之亦然，只有完整的复合物才能执行正常功能；(3)Aurora激酶的下游底物分子，如Eg5、TACC、Damlp、H3、MgcRacGAP、vimentin等，它们可以被Aurora激酶磷酸化，分别调节中心体、纺锤体、染色体或者细胞骨架的变化。

有丝分裂出错是基因组不稳定的原因，和肿瘤发生密切相关。肿瘤细胞中许多有丝分裂调控因子出现了遗传表达，因此这些蛋白家族可以作为药物治疗靶点。其中，Aurora激酶是这类靶点中的一个蛋白家族。Aurora激酶家族是有丝分裂的关键调控因子，用于维持基因组的稳定。在肿瘤中，这种苏氨酸/丝氨酸激酶经常发生过量表达。例如，肿瘤中Aurora A经常发生扩增，表明这种蛋白在肿瘤形成或恶化中具有重要作用。Aurora蛋白激酶调控有丝分裂的多个步骤，包括中心体复制、两极有丝分裂纺锤体的形成、有丝分裂纺锤体染色体排列、和最重要的是精确监控纺锤体检查点本身。

Aurora A基因定位于染色体20q13.2部位内，在人类肿瘤中经常检测出这一染色体部位。实际上，一些研究表明，在许多肿瘤中，均发现Aurora A位点的扩增及伴随Aurora A蛋白的过表达。在小鼠异种移植研究中发现，肿瘤细胞中Aurora A的过表达促进集落形成、中心体扩增及肿瘤生长。然而，在普通细胞中Aurora A的过表达并不能诱导细胞转变，这表明Aurora A还需要额外的致癌因素，例如活化Ras-信号以促进转变。Meraldi等研究表明，紧随着Aurora A过表达的中心体扩增是完成胞质分裂的失败的间接因素，产生有两个中心体的四倍体细胞。目前，还不清楚Aurora A的激酶活化如何在这些过表达效应起着关键作用，因为Aurora A激酶死亡的过表达引起相似数量的四倍体化。在一些研究中也发现四倍体化紧随着野生型Aurora A的过表达，但是，引入侧目的是四倍体化并未发现紧随着Aurora A激酶死亡的过表达。这表示集落形成和肿瘤生长需要Aurora A激酶活化，以及在含有Aurora A扩增的肿瘤中Aurora A的序列分析没有鉴定出任何激酶非活化突变。核苷酸位点19(Phe31Ile)可能调控Aurora A蛋白稳定的多态性并肿瘤敏感性相关。

Aurora B定位于17p13.1基因区域，这一区域在人类细胞中是易变的。Aurora A信使RNA及其自身蛋白在肿瘤中频繁过表达，同时也有报道一些肿瘤类型中蛋白表达和病重之间的相互关系。除了Aurora B与肿瘤之间有直接的联系外，还应注意到CPC蛋白，它与Aurora A相互协调且受Aurora B的调控，此蛋白在肿瘤中也过表达或上调。尽管Aurora B与肿瘤有着较强的联系且在有丝分裂过程中起着十分重要的作用，但是体外研究并未发现其转化且体内也并非广泛致肿瘤。另一重要的例外是在表达p53突变细胞中，当AuroraB过表达时，将增加致肿瘤行为。此研究表明，Aurora B自身不可能成为正式的癌基因，但是可与其他致癌突变协同作用促进致癌过程。于此观念相一致的，Aurora A增强Ras介导转化，当除去Aurora B将抑制Ras转化。Aurora B可作为抗癌靶点可以通过以下研究进一步加强，即除去Aurora B的癌细胞对烷化剂和电离辐射等治疗的细胞毒效应更加敏感。

Aurora激酶抑制剂从结构上可以大致分为以下几大类：嘧啶类(如VX-680)、喹唑啉类(AZD1152)、吡唑-苯并咪唑类(AT-9283)、四氢吡咯并吡唑类(PHA-739358)、苯并氮杂卓类(MLN5237)等。这些抑制剂的结构中都具有一个或多个杂原子氮，并且母核大多为含氮原子杂环以模拟ATP中的腺嘌呤部分。这些化合物中，有些对特异性的Aurora激酶具有专一的抑制作用，而有些则对两个或多个Aurora激酶靶点具有选择性抑制作用。

发明内容

技术问题：本发明的目的是提供一种对肿瘤细胞的增殖具有抑制能力的新的4-芳香胺基喹唑啉类衍生物。

本发明的另一目的是提供一种含有上述4-芳香胺基喹唑啉类衍生物的组合物。

本发明还有一个目的是提供上述4-芳香胺基喹唑啉类衍生物的在医药学上的用途。

技术方案：本发明的4-芳香胺基喹唑啉类衍生物，为式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

A环为苯环、烷基苯环、苯并噻吩环或烷基苯并噻吩环；

R₁为氢或烷氧基；

n选自1～6的整数；

R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自氢、烷基、环烷基、或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为烷基或羟烷基；

R₃为酯基、取代或非取代的苯胺基、取代或非取代的吡啶胺基、取代或非取代的嘧啶胺基、取代或非取代的苄基脲基、取代或非取代的吡啶甲基脲基、取代或非取代的嘧啶甲基脲基或取代或非取代的的环烷基脲基，其中取代基为卤素、烷基、苯基或吡啶基或嘧啶基，取代基优选为苯基、吡啶基或嘧啶基。

所述化合物或其药学上可接受的盐中，

A环为苯环、C1-4烷基苯环、苯并噻吩环或C1-4烷基苯并噻吩环；

R₁为氢或C1-4烷氧基；

n为2～4的整数；

R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自C1-4烷基，或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为C1-4烷基或C1-4羟烷基；

R₃为C2-4酯基、取代或非取代的嘧啶胺基、取代或非取代的苄基脲基、或取代或非取代的的环己烷基脲基，其中取代基为吡啶基或嘧啶基。

所述化合物或其药学上可接受的盐中，

A环为苯环、C1-4烷基苯环或苯并噻吩环；

R₁为氢；

n为2～4的整数；

R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自甲基或乙基，或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为甲基、乙基、羟甲基或羟乙基；

R₃为C2-4酯基、吡啶基嘧啶胺基、苄基脲基或环己烷基脲基。

所述化合物或其药学上可接受的盐中，

A环为苯环、甲基苯环或苯并噻吩环；

R₁为氢；

n为3；

R₂为吗啉基、甲基吗啉基、哌嗪基、甲基哌嗪基、羟甲基哌嗪基、哌啶基、甲基哌啶基、羟甲基哌啶基、二乙胺基、吡咯烷基或甲基吡咯烷基；

R₃为甲酸乙酯基、

所述化合物或其药学上可接受的盐中，

A环为苯环、对甲基苯环或苯并噻吩环；

R₁为氢；

n为3；

R₂为吗啉基、甲基哌嗪基、哌啶基、羟甲基哌啶基、二乙胺基或吡咯烷基；

R₃为甲酸乙酯基、

所述的化合物为选自以下之一：

4-甲基-N¹-[7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺；

4-甲基-N¹-[7-(3-哌啶丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺；

4-甲基-N¹-[7-(3-二乙胺丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺；

4-甲基-N¹-[7-(3-吡咯丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺；

6-[7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-{7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹唑啉-4-氨基}苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-[7-(3-哌啶丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-[7-(3-吡咯丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-{7-[3-(二乙胺基)丙氧基]喹唑啉-4-氨基}苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

N-4-[(7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(4-甲基哌嗪)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(1-吡咯烷)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(二乙基胺基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(4-羟甲基哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

N-4-[(7-[3-(4-甲基哌嗪)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

N-4-[(7-[3-(1-吡咯烷基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

N-4-[(7-[3-(二乙胺基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

或N-4-[(7-[3-(4-羟甲基哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲。

所述化合物或其药学上可接受的盐可为药物组合物以及药学上可接受的稀释剂或载体。

所述的化合物或其药学上可接受的盐应用于制备抗癌药物。

所述的化合物或其药学上可接受的盐应用于所述的癌为白血病、结肠癌、宫颈癌或乳腺癌。

有益效果：本发明提供了一种对肿瘤细胞的增殖具有抑制能力的新的4-芳香胺基喹唑啉类衍生物。提供一种含有上述4-芳香胺基喹唑啉类衍生物的组合物。提供上述4-芳香胺基喹唑啉类衍生物的在医药学上的用途。

对慢性髓细胞白血病(K562)、人急性单核细胞白血病细胞株(U937)的增殖具有显著的抑制作用。上述这些化合物可应用于抗肿瘤药物的制备。

具体实施方式

式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

A环为苯环、烷基苯环、苯并噻吩环或烷基苯并噻吩环；优选为苯环、C1-4烷基苯环、苯并噻吩环或C1-4烷基苯并噻吩环；更优选为苯环、C1-4烷基苯环或苯并噻吩环；进一步优选为苯环、甲基苯环或苯并噻吩环；最优选为苯环、对甲基苯环或苯并噻吩环。

R₁为氢或烷氧基；优选为氢或C1-4烷氧基；最优选为氢。

n选自1～6的整数；优选为2～4的整数；最优选为3。

R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自氢、烷基、环烷基，或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为烷基或羟烷基；R₂优选为-NR₄R₅，R₄或R₅优选独立地选自C1-4烷基，或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基优选为C1-4烷基或C1-4羟烷基；进一步的，R₂为-NR₄R₅，R₄或R₅独立地选自甲基或乙基，或者R₄和R₅合起来形成取代或非取代的杂脂环基，其中取代基为甲基、乙基、羟甲基或羟乙基；R₂更优选为吗啉基、甲基吗啉基、哌嗪基、甲基哌嗪基、羟甲基哌嗪基、哌啶基、甲基哌啶基、羟甲基哌啶基、二乙胺基、吡咯烷基或甲基吡咯烷基；R₂最优选为吗啉基、甲基哌嗪基、哌啶基、羟甲基哌啶基、二乙胺基或吡咯烷基。

R₃为酯基、取代或非取代的苯胺基、取代或非取代的吡啶胺基、取代或非取代的嘧啶胺基、取代或非取代的苄基脲基、取代或非取代的吡啶甲基脲基、取代或非取代的嘧啶甲基脲基或取代或非取代的的环烷基脲基，其中取代基为卤素、烷基、苯基、吡啶基或嘧啶基，取代基优选为苯基、吡啶基或嘧啶基；R₃优选为C2-4酯基、取代或非取代的嘧啶胺基、取代或非取代的苄基脲基、或取代或非取代的的环己烷基脲基，其中取代基为吡啶基或嘧啶基；R₃更优选为C2-4酯基、吡啶基嘧啶胺基、苄基脲基或环己烷基脲基；

R₃最优选为甲酸乙酯基、

在所述的化合物或这些化合物与药学上可以接受的酸所成的盐中，这些化合物选自下面所列特定化合物中的一个或多个：

6-[7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-[7-(3-哌啶丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

6-[7-(3-吡咯丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯；

N-4-[(7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(1-吡咯烷)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲；

N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲；

本发明化合物可应用于制备抗癌药物方面，其中所述的癌如白血病、结肠癌或乳腺癌等实体瘤癌症。

“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：

(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等，优选对甲苯磺酸或盐酸。

(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。

所述的化合物或它们与药学上可以接受的酸所成的盐为原料，制备成临床上可使用的用于治疗白血病等肿瘤的药物。

本发明的又一目的在于提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物包括化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体。

可将本发明的化合物以前药的形式给药。前药是指经过生物体内转化后才具有药理作用的化合物。可使用前药改变本发明化合物的物理化学性质或药物动力学方面性质。当本发明的化合物含有可连接改变性质基团的适当基团或取代基团时，可形成前药。

1.化学

除非另外说明，在说明书和权力要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：

“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-20”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子)。含1-4个碳原子的烷基称为低级烷基。当低级烷基没有取代基时，称其为无取代的低级烷基。更优选的是，烷基是有1-10个碳原子的中等大小的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基为有1-4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。当时取代烷基时，该取代基优选是一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个取代基，它们独立地优选自以下的基团：卤素、羟基、低级烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳环、杂脂环基和酯基。

“环烷基”表示全部为碳的单环或稠合的环(“稠合”环意味着系统中的每个环与系统中的其他环共享毗邻的一对碳原子)基团，含有3-12个碳原子，进一步含有3-9个碳原子，优选5、6或7个碳原子，更优选5或6个碳原子，其中一个或多个环不具有完全连接的π电子系统，任选包含一个或多个双键和/或三键形式的不饱和状态。环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。环烷基可为取代的和未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个各自选自以下的基团，包括：烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷巯基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基和氨基。

“杂脂环基”表示单环或稠合环基团，在环中具有5-18个、优选5-12个，更优选5-9个环原子，其中一个或两个环原子选自N、O或S(O)_m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是C。这些环可以具有一条或多条双键，但这些环不具有完全共轭的π电子系统。未取代的杂脂环基的非限制性实例有吡咯烷基、哌啶子基、吗啉子基、哌嗪子基、硫代吗啉子基、高哌嗪子基等。杂脂环基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个、更优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个，独立地选自以下基团，包括：烷基、三卤烷基、卤素、羟基、烷氧基、巯基、烷基硫基、氰基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基。优选的杂芳基任选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、三卤烷基、氰基、酯基或硝基。

“羟基”表示-OH基团。

“羟烷基”表示具有-OH基取代基的烷基，其中烷基的概念如上述所。

“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)，其中烷基和环烷基定义如上。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。

“酯基”表示-C(O)O-R’基团，其中R’定义同上，但是R’不能是氢。

“卤素”表示氟、氯、溴或碘，优选氟、氯或溴。

“三卤甲基”表示-CX₃基团，其中X是如上所定义的卤素。

“氰基”表示-CN基团。

“氨基”表示-NH₂基团。

“硝基”表示-NO₂基团。

“甲基哌嗪基”是指具有甲基取代基的哌嗪基，“N-甲基哌嗪基”指的是具有以下化学结构的基团。

“哌啶基”指的是具有以下化学结构的基团。

“吗啉基”指的是具有以下化学结构的基团。

“吡咯烷基”指的是具有以下化学结构的基团。

“二乙胺基”指的是具有以下化学结构的基团。

2.一般合成方法

本发明中所提到的化合物总体制备方法为：

以2-氨基-4-氟苯甲酸为原料，以乙二醇-甲醚为溶剂，用醋酸甲脒关环，得喹唑啉酮化合物2，化合物2经O-烃基化得化合物3，然后进行氯代，在异丙醇回流条件下，和不同的芳香胺反应，得重要中间体K-1，2，3，4，最后和脂肪仲胺进行氨解反应，得目标化合物KⅠ和KⅡ和I-1～12。

3.生物评价方法

抑制细胞增殖测定方法采取常用的MTT法：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)还原为难溶的蓝紫色结晶物甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。甲臜的多少可通过酶联免疫检测仪在570nm波长处检测其光吸收值(OD值)，因而为甲臜生成量在通常情况下与活细胞成正比，因此可根据OD值推算出活细胞数量，了解药物抑制或杀伤细胞的能力。

该测定方法可用于测定不同的本发明目标化合物对一种或多种癌细胞增殖的抑制能力，利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。

以下给出下列制备和实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。

合成实施例

实施例1：中间体K-1，2，3，4的合成

7-氟喹唑啉-4(3H)-酮(2)

向500ml三颈瓶内加入2-氨基-4-氟苯甲酸(31.5g，0.203mol)，醋酸甲脒(42.5g，0.360mol)，然后加入乙二醇单甲醚(150ml)，回流反应10h后停止反应。蒸干溶剂，残余物用0.01M的氨水洗涤，最终得到米色固体23.1g，产率69.3％，mp 238℃7-(3-羟基丙氧基(喹唑啉-4(3H)-酮(3)

冰浴下，圆底烧瓶内将NaH(29.2g，1.217mol)悬浮于DMF(100ml)中，0-5℃内滴加1，3-丙二醇(55.6g，0.732mol)的DMF溶液，缓慢升至50℃加热，使之充分反应。分批加入2(20g，0.122mol)，稳定后升至110℃，24h后停止反应。减压蒸除DMF，向残余物内加冰水，冰浴条件下，用冰醋酸调PH＝5.9，析出米色固体，抽滤，烘干，得米色固体24.9g，收率92.8％，mp 190-191℃。

4-氯-7-(3-氯丙氧基)喹唑啉(4)

向250ml三颈瓶内加入3(20g，0.091mol)，SOCl₂(150ml)，DMF(15ml)，回流反应，5h后停止反应。蒸除溶剂，将残余物用CH₂Cl₂溶解，饱和K₂CO₃溶液中和，CH₂Cl₂萃取，合并有机层，有机层分别用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩得黄色油状物19.2g，固化，用乙醚洗，得浅黄色粉末17.9g，收率76.63％，mp 74-76℃。¹H-NMR(CDCl₃-d₆，300MHz)δ(ppm)：2.31-2.39(m，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，3.80(t，J＝6.24Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.36(t，J＝5.91Hz，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.33-7.37(dd，J₁＝2.40Hz，J₂＝2.43Hz，1H，Ar-H)，7.45(d，J＝2.43Hz，1H，Ar-H)，8.19(d，J＝9.24Hz，1H，Ar-H)，8.96(s，1H，Ar-H)；ESI-MSm/z：257.0[M+H]⁺；

N¹-[7-(3-氯丙氧基)喹唑啉-4-基]-4-甲基-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(K-1)

在250mL圆底烧瓶中，投入化合物4(5.12g，20mmOl)和6-甲基-N1-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(5.54g，20mmol)，以150mL异丙醇溶解。回流反应6h。趁热过滤析出的固体，滤饼用冷的异丙醇洗涤，真空干燥，得黄色固体8.82g，收率88.7％，mp 135-137℃。

IR(KBr，cm^-1)：3262.34，1629.07，1570.93，1500.75，1438.60，1414.54，1298.25，1250.13，1214.04，1135.84，1007.52；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：2.26-2.31(t，5H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-and-CH₃)，3.77-3.87(m，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.34(t，J＝5.94Hz，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.34-7.41(m，3H，Ar-H)，7.43-7.52(m，2H，Ar-H)，7.58-7.62(m，1H，Ar-H)，7.98(d，J＝1.89Hz，1H，Ar-H)，8.54(t，J＝5.13Hz，2H，Ar-H)，8.72(t，J＝3.39Hz，1H，Ar-H)，8.85(d，J＝7.29Hz，2H，Ar-H)，9.10(s，1H，Ar-H)，9.31(d，1H，-NH-)，11.49(s，1H，-NH-)；ESI-MS m/z：497.84[M+H]⁺；

6-[7-(3-氯丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(K-2)

具体实验操作同化合物K-1的合成，投入化合物4(7.68g，30mmOl)和6-氨基苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(6.63g，30mmol)，得黄色固体12.25g，收率92.6％，，mp 191-192℃.

IR(KBr，cm^-1)：1707.42，1636.60，1570.34，1533.95，1460.22，1421.74，1370.47，1305.82，1258.61，1219.85，1146.65，1066.15；¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ(ppm)：1.36(t，J＝7.10Hz，3H，-CH₃)，2.26-2.31(m，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，3.86(t，J＝6.45Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.31-4.39(m，4H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-and-CH ₂-CH₃)，7.42(d，J＝2.50Hz，1H，Ar-H)，7.50-7.52(dd，J₁＝2.45Hz，J₂＝2.45Hz，1H，Ar-H)，7.84-7.86(dd，J₁＝2.05Hz，J₂＝2.05Hz，1H，Ar-H)，8.16(d，J＝8.75Hz，1H，Ar-H)，8.24(s，1H，Ar-H)，8.31(d，J＝1.95Hz，1H，Ar-H)，8.86(s，1H，Ar-H)，8.92(d，J＝9.30Hz，2H，Ar-H)，11.79(s，1H，-NH-)，15.01(s，1H，-NH-)；

N-{4-[(7-(3-氯丙氧基)-4-喹唑啉]氨基苯基}-N’-苄基脲(K-3)

体实验操作同化合物K-1的合成，投入化合物4(9g，0.0274mol)，得亮黄色固体K-3(11g，87％)，mp：246-248℃。

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：2.25-2.30(2H，t)，3.83-3.87(2H，m)，4.30-4.32(4H，t)，6.86-6.91(1H，t)，7.22-7.38(6H，m)，7.47-7.52(4H，m)，7.83(1H，s)，8.82-8.88(1H，t)，9.06(1H，s)，11.32(1H，s)，13.5-16.0(1H，s)；MS(m/z)：462.1[M+H]⁺.

N-{4-[(7-(3-氯丙氧基)-4-喹唑啉]氨基苯基}-N’-环己基脲(K-4)

具体实验操作同化合物K-1的合成，投入化合物4(9g，0.0274mol)，得亮黄色固体K-4(10.1g，81.4％)，mp：232-234℃

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.23-1.28(3H，m)，1.30-1.34(2H，m)，1.52-1.55(1H，m)，1.65-1.69(2H，m)，1.79-1.82(2H，m)，2.25-2.30(2H，m)，3.47-3.48(1H，s)，3.83-3.86(2H，t)，4.31-4.33(2H，t)，6.20-6.22(1H，d)，7.26(1H，d)，7.46-7.52(4H，m)，8.60(1H，s)，8.65-8.67(1H，d)，8.80(1H，s)，11.14(1H，s)，13.75-15.25(1H，s)；MS(m/z)：454.3[M+H]⁺。

实施例2：

4-甲基-N¹-[7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(KⅠ-001)

在50mL圆底烧瓶中，投入化合物K-1(0.994g，2mmol)以及催化量的碘化钠，用20mL吗啉溶解，60℃下反应1h。将溶剂真空蒸干，残余物以100mL二氯甲烷溶解，然后有机溶液依次用100mL饱和NaHCO₃溶液、100mL水和100mL饱和实验室洗涤，有机层以无水MgSO4干燥，浓缩，用硅胶层析分离(展开剂为二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)，得类白色固体0.57g，收率52.3％，mp 143℃.

IR(KBr，cm^-1)：3243.73，2958.31，2858.03，1618.01，1577.51，1529.30，1452.16，1419.37，1332.59，1299.81，1224.60，1118.53，1025.96，794.54，649.90；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：1.90-1.97(m，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，2.24(s，3H，-CH₃)，2.40(s，4H，2×morpholine-CH₂)，2.50(d，4H，2×morpoline-CH₂)，3.59(s，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.20(t，J＝6.06Hz，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.14(s，1H，Ar-H)，7.25(t，J＝8.31Hz，2H，Ar-H)，7.41-7.49(m，2H，Ar-H)，7.59(d，J＝8.31Hz，1H，Ar-H)，8.13(s，1H，Ar-H)，8.43(s，2H，Ar-H)，8.52(t，J＝2.91Hz，2H，Ar-H)，8.67(d，J＝3.51Hz，2H，Ar-H)，8.98(s，1H，Ar-H)，9.28(s，1H，-NH-)，9.66(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ(ppm)：17.61，25.52，53.20，54.64，66.01，66.16，107.41，107.51，109.30，117.50，118.71，119.07，123.65，124.68，127.54，129.81，132.12，134.19，137.28，137.63，148.11，151.30，151.94，155.01，157.37，159.39，161.16，161.51，161.88；ESI-MS m/z：549.33[M+H]⁺；

实施例3：

4-甲基-N¹-[7-(3-哌啶丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(KⅠ-002)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-1(0.994g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL哌啶中，得白色固体0.57g，收率52.1％，mp 170℃.

IR(KBr，cm^-1)：3423.08，2944.82，1618.01，1577.51，1523.51，1452.16，1413.59，1334.52，1297.88，1224.60，1132.03，1002.82，804.18，651.83；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：1.50(s，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，1.71(s，4H，2×piperidine-CH₂)，2.24(s，5H，-CH₃andpiperidine-CH₂)，2.95(s，4H，2×piperidine-CH₂)，3.33(s，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.21(s，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.22(d，3H，Ar-H)，7.42-7.56(d，3H，Ar-H)，8.13(s，1H，Ar-H)，8.43-8.51(d，4H，Ar-H)，8.66(s，1H，Ar-H)，8.98(s，1H，Ar-H)，9.28(s，1H，-NH-)，9.70(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ(ppm)：17.61，22.16，23.18，23.91，52.52，53.69，65.70，107.42，107.67，109.43，117.35，118.74，119.10，123.66，124.78，127.58，129.81，132.12，134.20，137.26，137.62，148.11，151.31，151.91，155.05，157.39，159.40，161.16，161.51，161.62；ESI-MS m/z：543.3[M+H]⁺；

实施例4：

4-甲基-N¹-[7-(3-二乙胺丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(KⅠ-003)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-1(0.994g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL二乙胺中，得黄色固体0.28g，收率26.8％，mp 157℃.

IR(KBr，cm^-1)：3384.51，2979.53，2651.68，1618.01，1597.44，1525.44，1452.16，1415.52，1332.59，1295.95，1224.60，1130.10，1004.75，987.39，800.33，707.76，653.76；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：1.89(s，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，1.97-2.04(d，5H，diethylamine-CH₂-CH₃)，2.24(s，3H，-CH₃)，2.78-2.87(t，5H，diethylamine-CH₂-CH₃)，3.98-4.05(m，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.21(s，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.15-7.24(t，J＝7.05Hz，3H，Ar-H)，7.40-7.46(t，J＝4.95Hz，2H，Ar-H)，7.59(d，J＝7.74Hz，1H，Ar-H)，8.14(s，1H，Ar-H)，8.43(s，2H，Ar-H)，8.49-8.57(dd，J₁＝4.80Hz，J₂＝9.18Hz，2H，Ar-H)，8.66(s，1H，Ar-H)，8.99(s，1H，Ar-H)，9.28(s，1H，-NH-)，9.71(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ(ppm)：7.78，9.97，14.04，17.64，20.71，24.51，46.26，48.04，58.56，59.70，65.71，107.43，107.58，109.43，117.53，118.78，119.14，123.68，124.84，127.59，129.82，132.15，134.22，137.21，137.64，148.14，151.33，151.96，155.07，157.42，159.42，161.18，161.53，161.73；ESI-MS m/z：535.34[M+H]⁺；

实施例5：

4-甲基-N¹-[7-(3-吡咯丙氧基)喹唑啉-4-基]-N³-[5-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]苯-1，3-二胺(KⅠ-004)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-1(0.994g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL吡咯烷中，得黄色固体0.33g，收率31.5％，mp 125℃.

IR(KBr，cm^-1)：3423.08，2960.24，2805.96，1618.01，1577.51，1529.30，1454.09，1419.37，1334.52，1297.88，1224.60，1130.10，798.40，705.83，651.83；¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ(ppm)：1.68(s，4H，2×pyrrolidine-CH₂)，1.90-1.98(m，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，2.25(s，3H，-CH₃)，2.46-2.50(m，4H，2×pyrrolidine-CH₂)，2.59(t，J＝7.15Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，417(t，J＝6.35Hz，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.15(d，J＝2.45Hz，1H，Ar-H)，7.20-7.24(m，2H，Ar-H)，7.41(d，J＝5.15Hz，1H，Ar-H)，7.45-7.47(dd，J₁＝4.80Hz，J₂＝4.75Hz，1H，Ar-H)，7.55-7.57(dd，J₁＝2.05Hz，J₂＝2.00Hz，1H，Ar-H)，8.13(s，1H，Ar-H)，8.41-8.44(m，2H，Ar-H)，8.46-8.51(dd，J₁＝9.25Hz，J₂＝5.10Hz，1H，Ar-H)，8.65-8.67(dd，J₁＝1.55Hz，J₂＝1.50Hz，1H，Ar-H)，8.96(s，1H，Ar-H)，9.28(s，1H，-NH-)，9.59(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：17.63，23.06，27.91，52.08，53.55，66.25，107.43，107.52，109.29，117.54，118.68，119.04，123.67，124.58，127.55，129.85，132.14，134.20，137.28，137.67，148.13，151.32，151.96，155.04，157.36，159.41，161.18，161.53，161.93；ESI-MS m/z：533.32[M+H]⁺；

实施例6：6-[7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(KⅡ-001)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-2(0.882g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL吗啉中，得类白色固体0.60g，收率61.3％，mp 145℃.

IR(KBr，cm^-1)：3234.09，2942.89，1664.29，1567.87，1554.37，1403.95，1357.66，1274.74，1201.45，1114.67，958.46，821.54；¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ(ppm)：1.36(t，J＝7.15Hz，3H，-CH₂-CH ₃)，1.93-1.97(dd，J₁＝6.80Hz，J₂＝6.65Hz，2H，-CH ₂-CH₃)，2.38(s，4H，2×morpholine-CH₂)，2.44-2.50(dd，J₁＝7.10Hz，J₂＝12.85Hz，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，3.58(t，J＝4.40Hz，4H，2×morpholine-CH₂)，4.19(t，J＝6.30Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.34-4.38(m，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.18(d，J＝2.25Hz，1H，Ar-H)，7.24-7.26(dd，J₁＝2.00Hz，J₂＝2.00Hz，1H，Ar-H)，7.94-7.96(dd，J₁＝1.60Hz，J₂＝1.50Hz，1H，Ar-H)，8.04(d，J＝8.80Hz，1H，Ar-H)，8.20(s，1H，Ar-H)，8.47-8.53(m，3H，Ar-H)，9.83(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：14.12，25.68，53.33，54.73，61.39，66.18，66.26，107.54，109.29，117.81，118.25，122.69，123.52，124.57，130.74，133.66，136.41，136.97，138.80，152.05，154.52，157.43，161.97，162.05；ESI-MSm/z：493.22[M+H]⁺；

实施例7：6-{7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹唑啉-4-氨基}苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(KⅡ-002)

具体实验操作同化合物AM-001的合成，投入化合物7b(0.888g，3mmol)和N-[4-(4，6-二氯嘧啶-2-硫)苯基]环丙甲酰胺(0.85g，2.5mmol)到10mL DMF中，得白色固体0.25g，收率13.1％。

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-2(0.882g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mLN-甲基哌嗪中，得类白色固体0.24g，收率23.7％，mp 162℃.

IR(KBr，cm^-1)：3274.59，2937.10，1712.51，1619.94，1577.51，1529.30，1450.23，1413.59，1292.09，1230.38，1149.38，1072.24，1014.39，782.97，754.04；¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ(ppm)：1.34(t，J＝8.30Hz，3H，-CH₂-CH ₃)，1.90-1.93(t，J＝6.20，2H，-CH ₂-CH₃)，2.18(s，4H，2×morpholine-CH₂)，2.40-2.49(m，9H，2×morpholine-CH₂，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-and-CH₃)，4.17(d，J＝5.60Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.33-4.37(m，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.15(s，1H，Ar-H)，7.24(d，J＝8.85Hz，1H，Ar-H)，7.97(d，J＝8.55Hz，1H，Ar-H)，8.03(d，J＝8.70Hz，1H，Ar-H)，8.19(s，1H，Ar-H)，8.50-8.53(m，3H，Ar-H)，9.86(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：14.10，25.95，45.31，52.34，54.15，54.45，61.36，66.25，107.50，109.30，117.74，118.20，122.63，123.49，124.63，130.72，133.62，136.38，137.00，138.77，152.03，154.90，157.42，161.95，162.02；ESI-MS m/z：506.26[M+H]⁺；

实施例8：

6-[7-(3-哌啶丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(KⅡ-003)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-2(0.882g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL哌啶中，得类白色固体0.57g，收率57.9％，mp 170-171℃.

IR(KBr，cm^-1)：3390.58，2933.73，1709.27，1619.05，1570.93，1526.82，1454.64，1410.53，1228.07，1127.82，1069.67，1053.63，756.89；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：1.32-1.39(m，5H，-CH ₂ -CH ₃)，1.50(d，4H，2×piperidine-CH₂)，1.93(t，J＝6.96Hz，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，2.34-2.44(m，6H，3×piperidine-CH₂)，4.18(t，J＝6.33Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.32-4.39(m，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，7.17(d，J＝2.37Hz，1H，Ar-H)，7.24-7.27(dd，J₁＝2.37Hz，J₂＝2.37Hz，1H，Ar-H)，7.93-7.97(d，J₁＝1.98Hz，J₂＝1.86Hz，1H，Ar-H)，8.03(d，J＝8.82Hz，1H，Ar-H)，8.21(s，1H，Ar-H)，8.47-8.53(m，3H，Ar-H)，9.85(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：14.11，24.10，25.57，26.10，54.07，55.00，61.38，66.42，107.53，109.26，117.82，118.26，122.69，123.54，124.56，130.74，133.65，136.41，138.79，152.05.154.91，157.42，161.96，162.08；ESI-MS m/z：491.4[M+H]⁺；

实施例9：6-[7-(3-吡咯丙氧基)喹唑啉-4-氨基]苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(KⅡ-004)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-2(0.882g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL吡咯烷中，得类白色固体0.35g，收率36.9％，mp 170℃.

IR(KBr，cm^-1)：3426.94，2964.10，2875.39，2788.61，1618.01，1575.58，1519.66，1456.02，1432.58，1417.45，1338.38，1230.38，1130.10，81.32，717.40，676.90；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：1.85-2.00(m，5H，-CH ₂ -CH ₃)，2.49-2.54(m，4H，2×pyrrolidine-CH₂)，2.65(t，J＝6.93Hz，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，3.51-3.55(t，4H，2×pyrrolidine-CH₂)，3.85(d，J＝6.15Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.20(t，J＝6.27Hz，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.17(d，J＝2.43Hz，1H，Ar-H)，7.23-7.27(dd，J₁＝2.43Hz，J₂＝2.43Hz，1H，Ar-H)，7.81-7.84(dd，J₁＝2.07Hz，J₂＝1.92Hz，1H，Ar-H)，7.96-8.02(dd，J₁＝5.10Hz，J₂＝11.91Hz，2H，Ar-H)，8.49-8.62(m，3H，Ar-H)，10.02(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：22.96，23.51，26.15，27.19，47.25，48.47，51.86，53.45，66.01，107.61，109.37，113.64，117.69，117.87，118.37，122.12，123.11，124.65，125.14，134.80，136.54，139.64，140.58，152.01，154.97，155.60，157.55，160.79，161.92；ESI-MSm/z：477.2[M+H]⁺；

实施例10：

6-{7-[3-(二乙胺基)丙氧基]喹唑啉-4-氨基}苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(KⅡ-005)

具体实验操作同化合物KⅠ-001的合成，投入化合物K-2(0.882g，2mmol)以及催化量的碘化钠到20mL二乙胺中，得类白色固体0.34g，收率35.7％，mp 160℃.

IR(KBr，cm^-1)：3455.87，3025.81，2971.81，2933.24，2802.11，1706.72，1618.01，1577.51，1526.27，1450.23，1409.73，1326.81，1172.53，1149.38，1130.10，1070.32，1020.18，912.18，755.97，674.97；¹H-NMR(DMSO-d₆，300MHz)δ(ppm)：0.89-0.97(m，6H，2×diethylamine-CH₃)，1.28-1.37(m，3H，-CH₂-CH ₃)，1.85-1.91(dd，J₁＝6.54Hz，J₂＝5.12Hz，2H，Cl-CH₂-CH ₂-CH₂-O-)，2.42-2.57(m，6H，2×diethylamine-CH₂and-CH ₂-CH₃)，4.17(t，J＝6.12Hz，2H，Cl-CH ₂-CH₂-CH₂-O-)，4.32-4.39(t，2H，Cl-CH₂-CH₂-CH ₂-O-)，7.16(s，1H，Ar-H)，7.26(d，J＝9.03Hz，1H，Ar-H)，7.97(d，J＝8.91Hz，1H，Ar-H)，8.05(d，J＝8.76Hz，1H，Ar-H)，8.20(s，1H，Ar-H)，8.47-8.53(m，3H，Ar-H)，9.86(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)：11.83，14.09，26.45，46.42，48.57，61.35，66.23，107.46，109.27，117.76，118.20，122.63，123.48，124.56，130.71，133.63，136.38，137.00，138.77，139.36，152.05，154.87，157.41，161.94，162.10；ESI-MS m/z：479.4[M+H]⁺；

实施例11：N-4-[(7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-1)

向50ml三颈瓶内加入K-3(2g，4.34mmol)，吗啉(30ml)，NaI微量，60℃加热，6h后停止反应。冷却，将反应液倒入水中，可析出深黄色固体，用硅胶柱层析分离(展开剂为氯仿∶甲醇＝40∶1)，得米色固体I-1(1.75g，79％)，mp：219-220℃。

IR(KBr)：v 3311.23，2954.46，1619.94，1577.51，1513.87，1457.94，1417.45，1332.59，1309.45，1228.45，1116.60，862.04，700.04cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.94(2H，s)，2.38-2.45(6H，t)，3.58(4H，s)，4.18(2H，s)，4.30-4.31(2H，d)，6.58(1H，t)，7.13-7.42(9H，m)，7.62-7.65(2H，d)，8.40-8.44(2H，m)，8.53(1H，s)，9.54(1H，s)；MS(m/z)：513.2[M+H]⁺.

实施例12：N-4-[(7-[3-(4-甲基哌嗪)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-2)

具体实验操作同化合物I-1的合成，投入化合物K-3(2g，4.34mmol)，得米色固体I-2(2.16g，64％)，mp：104-105℃。

IR(KBr)：v3330.51，2942.89，2807.89，1681.65，1619.94，1587.15，1558.23，1513.87，1457.94，1419.37，1336.45，1313.31，1224.06，1133.96，1002.82，842.75cm^-1；

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.90-1.95(2H，m)，2.15(4H，s)，2.33-2.39(6H，m)，2.45-2.46(3H，t)，4.15-4.17(2H，t)，4.30-4.31(2H，d)，6.56-6.58(1H，t)，7.11-7.12(1H，d)，7.18-7.20(1H，m)，7.23-7.25(1H，m)，7.30-7.35(4H，m)，7.39-7.41(2H，d)，7.63-7.64(2H，d)，8.40-8.42(1H，d)，8.44(1H，s)，8.51(1H，s)，9.52(1H，s)；MS(m/z)：526.3[M+H]⁺.

实施例13：N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-3)

具体实验操作同化合物I-1的合成，投入化合物K-3(2g，4.34mmol)，得米黄色固体I-3(1.61g，73％)，mp：210-211℃。

IR(KBr)：v 3330.51，2942.89，2807.89，1681.65，1619.94，1558.23，1510.78，1457.94，1419.37，1334.52，1226.52，1132.03，1047.17，917.96，840.82cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.39(2H，s)，1.50(4H，s)，1.90-1.94(2H，t)，2.35-2.44(6H，m)，4.14-4.18(2H，t)，4.30-4.32(2H，d)，6.55-6.57(1H，s)，7.11-7.24(3H，m)，7.32-7.34(3H，d)，7.38-7.41(2H，d)，7.62-7.65(2H，d)，7.82(1H，s)，8.39-8.42(1H，s)，8.44(1H，s)，8.51(1H，s)，9.52(1H，s)；MS(m/z)：511.3[M+H]⁺。

实施例14：N-4-[(7-[3-(1-吡咯烷)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-4)

5具体实验操作同化合物I-1的合成，投入化合物K-3(2g，4.34mmol)，得灰色固体I-4(1.31g，61％)，mp：209-210℃。

IR(KBr)：v3376.80，2956.39，2817.53，1675.86，1616.08，1558.23，1513.87，1456.02，1419.37，1334.52，1301.74，1226.52，1132.03，844.68；

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.67-1.70(4H，s)，1.92-1.97(2H，m)，2.46-2.50(4H，m)，2.56-2.59(2H，t)，4.17-4.19(2H，t)，4.30-4.31(2H，d)，6.58(1H，s)，7.12-7.15(1H，d)，7.15-7.19(1H，m)，7.20-7.30(1H，m)，7.30-7.39(4H，m)，7.39-7.41(2H，m)，7.63-7.64(2H，m)，8.40-8.42(1H，d)，8.44-8.47(1H，m)，8.51(1H，s)，9.52(1H，s)；MS(m/z)：497.3[M+H]⁺.

实施例15：N-4-[(7-[3-(二乙基胺基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-5)

封管反应：向50ml三颈瓶内加入K-3(2g，4.34mmol)，二乙胺(30ml)，NaI微量，DMF(5ml)，90℃加热，9h后停止反应。冷却，将反应液倒入水中，可析出棕褐色固体，用硅胶柱层析分离(展开剂为氯仿∶甲醇＝40∶1)，得米色固体I-5(1.56g，72％)，mp：99-100℃。

IR(KBr)：v 3313.16，2967.96，1658.51，1618.01，1579.44，1560.15，1513.87，1456.02，1417.45，1334.52，1226.52，1130.10，1076.10，983.53cm^-1；

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：0.93-0.97(6H，t)，1.81(2H，m)，2.43-2.57(6H，m)，4.14-4.19(2H，t)，4.29-4.31(2H，d)，6.63(1H，t)，7.11-7.12(1H，d)，7.17-7.20(2H，m)，7.32-7.34(4H，m)，7.39-7.42(2H，m)，7.61-7.64(2H，d)，8.39-8.44(2H，m)，8.58(1H，s)，9.53(1H，s).

实施例16：N-4-[(7-[3-(4-羟甲基哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-苄基脲(I-6)

向50ml三颈瓶内加入4-哌啶甲醇(5g，过量)，加热至熔融，然后加入K-3(2g，4.34mmol)，三乙胺(1ml)，NaI微量，100℃加热，6h后停止反应。冷却，将反应液倒入水中，可析出米色固体，用硅胶柱层析分离(展开剂为氯仿∶甲醇＝40∶1)，得米色固体I-6(1.64g，70％)，mp：119-120℃。

I-6：IR(KBr)：v3380.66，2923.60，2786.68，1679.20，1618.01，1579.44，1554.37，1513.87，1457.94，1415.52，1336.45，1309.45，1230.38，1128.17，1041.39，829.07cm^-1；

¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.13-1.23(2H，m)，1.32-1.33(1H，t)，1.62-1.64(2H，d)，1.84-1.89(2H，m)，1.90-1.98(2H，m)，2.42-2.45(2H，t)，2.86-2.88(2H，d)，3.22-3.24(2H，t)，4.15-4.17(2H，t)，4.30-4.31(2H，d)，4.34-4.36(1H，t)，6.55-6.58(1H，t)，7.11-7.12(1H，d)，7.18-7.20(1H，t)，7.23-7.26(2H，m)，7.30-7.35(4H，m)，7.38-7.41(2H，m)，7.63-7.64(2H，t)，8.40-8.42(1H，d)，8.43-8.44(1H，d)，8.50(1H，s)；MS(m/z)：541.49[M+H]⁺.

实施例17：N-4-[(7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-7)

向50ml三颈瓶内加入K-4(2g，4.40mmol)，吗啉(30ml)，NaI微量，60℃加热，6h后停止反应。冷却，将反应液倒入水中，可析出米色固体，用硅胶柱层析分离(展开剂

为氯仿∶甲醇＝40∶1)，得浅黄色固体I-7(1.69g，78％)，mp：276-277℃。

I-7：IR(KBr)：v3338.23，2929.39，2854.18，1648.87，1619.94，1577.51，1556.30，1513.87，1457.94，1417.45，1332.59，1224.60，1128.17，1116.60，1041.39，862.04cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMS0)，δ(ppm)：1.22-1.27(3H，m)，1.28-1.35(2H，m)，1.53-1.55(1H，m)，1.65-1.67(2H，m)，1.79-1.82(2H，m)，1.91-1.97(2H，m)，2.38(4H，s)，2.5(2H，m)，3.28(1H，s)，3.57-3.59(4H，t)，4.17-4.19(2H，t)，6.00-6.02(1H，s)，7.12-7.13(1H，d)，7.18-7.20(1H，m)，7.35-7.37(2H，m)，7.61-7.62(2H，m)，8.25(1H，s)，8.39(1H，s)，8.44(1H，s)，9.51(1H，s)；MS(m/z)：505.3[M+H]⁺。

实施例18：N-4-[(7-[3-(4-甲基哌嗪)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-8)

具体实验操作同化合物I-7的合成，投入化合物K-4(2g，4.40mmol)，得米色固体I-8(1.37g，60％)，mp：115-116℃。

IR(KBr)：v 3334.37，2931.32，2852.25，2807.89，1672.01，1621.87，1579.44，1552.44，1513.87，1419.37，1334.52，1295.95，1224.60，1132.03，838.90，788.76，678.83cm^-1；1HNMR(300MHz，DMSO)δ(ppm)：1.18-1.29(5H，m)，1.64(3H，s)，1.82-1.94(4H，m)，2.14(3H，s)，2.33-2.47(9H，m)，3.5(2H，s)，4.14-4.18(2H，t)，6.01-6.04(1H，d)，7.12(1H，s)，7.17-7.20(1H，d)，7.35-7.38(2H，d)，7.60-7.63(2H，d)，8.26(1H，s)，8.39-8.44(2H，t)，9.52(1H，s)；MS(m/z)：518.3[M+H]⁺。

实施例19：N-4-[(7-[3-(1-哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-9)

具体实验操作同化合物I-7的合成，投入化合物K-4(2g，4.40mmol)，得米黄色固体I-9(1.60g，72％)，mp：172-173℃。

IR(KBr)：v 3318.94，2931.32，2854.18，1675.86，1619.94，1554.3，1577.51，1513.87，1456.02，1417.45，1334.52，1222.67，1132.03，1039.46，987.39，840.82cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：1.15-1.37(7H，m)，1.50-1.64(5H，s)，1.64-1.78(2H，s)，1.78-1.89(2H，d)，1.89-1.94(2H，m)，2.34-2.44(6H，m)，3.45(1H，s)，4.14-4.18(2H，t)，6.02-6.04(1H，d)，7.11-7.12(1H，d)，7.17-7.20(1H，d)，7.35-7.38(2H，d)，7.60-7.63(2H，d)，8.27(1H，s)，8.39-8.44(2H，t)，9.52(1H，s)；MS(m/z)：503.3[M+H]⁺。

实施例20：N-4-[(7-[3-(1-吡咯烷基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-10)

具体实验操作同化合物I-7的合成，投入化合物K-4(2g，4.40mmol)，得灰色固体I-10(1.44g，67％)，mp：131-132℃。

IR(KBr)：v 3315.09，2931.32，2854.18，2811.75，1672.01，1618.01，1577.51，1552.44，1513.87，1457.94，1415.52，1336.45，1222.67，1132.03，1041.39，1018.25，916.04，840.82cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ：1.10-1.27(3H，m)，1.28-1.32(2H，m)，1.53-1.55(1H，m)，1.65-1.70(6H，m)，1.79-1.82(2H，m)，1.92-1.97(2H，m)，2.46-2.50(4H，m)，2.56-2.59(2H，t)，3.46-3.48(1H，t)，4.17-4.19(2H，t)，6.05(1H，s)，7.11-7.15(1H，m)，7.18-7.20(1H，m)，7.31-7.37(2H，m)，7.60-7.62(2H，m)，8.24(1H，s)，8.37-8.39(1H，t)，8.41-8.43(1H，d)，9.5(1H，s)；MS(m/z)：487.2[M-H]⁺。

实施例21：N-4-[(7-[3-(二乙胺基)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-11)

具体实验操作同化合物I-5的合成，投入化合物K-4(2g，4.40mmol)，得米色固体I-11(1.47g，68％)，mp：115-116℃。

IR(KBr)：v 3423.08，3295.80，2967.96，2931.32，2852.25，1618.01，1577.51，1513.87，1456.02，1417.45，1334.52，1224.60，1130.10，1041.60，847.12cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ：0.93-0.97(6H，m)，1.11-1.32(3H，m)，1.55(1H，s)，1.62-1.69(4H，t)，1.77-1.89(4H，m)，2.43-2.45(4H，d)，2.48-2.61(2H，m)，3.45-3.51(1H，t)，4.14-4.18(2H，t)，6.46-6-48(1H，d)，7.10-7.11(1H，d)，7.16-7.20(1H，m)，7.37-7.42(2H，t)，7.58-7.61(2H，d)，8.41-8.44(2H，t)，8.76(1H，s)，9.55(1H，s).

实施例22：N-4-[(7-[3-(4-羟甲基哌啶)丙氧基]-4-喹唑啉]氨基苯基-N’-环己基脲(I-12)

具体实验操作同化合物I-6的合成，投入化合物K-4(2g，4.40mmol)，得米色固体I-12(1.53g，65％)，mp：120-121℃。

IR(KBr)：v 3311.23，2927.46，2852.25，1675.86，1619.94，1579.44，1555.30，1513.87，1457.94，1417.45，1334.52，1224.60，1130.10，1039.46，838.90cm^-1；¹HNMR(300MHz，DMSO)，δ：1.11-1.22(3H，t)，1.28-1.35(3H，m)，1.53-1.55(1H，t)，1.62-1.67(4H，m)，1.79-1.95(4H，m)，2.87-2.90(2H，d)，3.28(2H，m)，4.15-4.17(2H，t)，4.31-4.35(1H，m)，6.01-6.04(1H，t)，7.11-7.12(1H，d)，7.18-7.20(1H，m)，7.35-7.39(2H，m)，7.59-7.63(2H，m)，8.25-8.28(1H，d)，8.39-8.44(1H，t)，8.47-8.52(1H，t)，9.50(1H，s)；MS(m/z)：533.37[M+H]⁺.

生物学实施例

采用下列实验甑别具有最佳程度的所需活性的那些化合物。抑制肿瘤细胞增殖测定方法(MTT法)

测定胺常规采用溴化四氮唑蓝(MTT)法。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性溴化四氮唑蓝还原为难溶的蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。三联裂解液能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映活细胞数量。因而，采用MTT法可测定目标化合物抑制细胞的增殖能力，同时利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。

1试剂和仪器

RPMI 1640培养基(RPMI 1640+10％小牛血清或胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO₃2.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；MTT(Sigma)；胰蛋白酶(Invitrogen)；三联溶解试剂。

CO₂培养箱、无菌操作台、酶标仪、离心机、移液枪、移液管、离心管、96孔板等。

2细胞株

慢性髓细胞白血病(K562)、人急性单核细胞白血病细胞株(U937)

3实验方法

3.1细胞培养

人非小细胞肺癌细胞株(A549)用含10％小牛血清的RPMI 1640培养基，于37℃，5％CO₂的培养箱中培养。人急性单核细胞白血病细胞株(U937)用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基，于37℃，5％CO₂的培养箱中培养。

3.2细胞接种

取处于指数生长期，状态良好的细胞，收集细胞离心，弃上清。用含10％小牛血清的RPMI 1640(或DMEM)培养液配成细胞悬液，然后计数。取细胞悬液接种于96孔板上，100μl/孔(每孔含5000个肿瘤细胞)。将培养板转入恒温CO₂培养箱中，在37℃，5％CO₂及饱和湿度条件下培养24小时。

3.3化合物配制

待测化合物先用DMSO配制成20mmol/L浓度，加入待测化合物，使其终浓度为10^-5mol/L用于初筛，每组设3个复孔，培养基补足至200ul。阴性对照为等体积培养基，同时设相应浓度的DMSO溶媒对照，空白对照不含细胞和药物。共同于37℃，5％CO₂的培养箱中培养72小时。

3.4染色

将5mg/ml的MTT加入96孔板中，20μL/孔，置于培养箱中孵育4小时，再加入含20％SDS的三联裂解液50μL/孔，置于培养箱中过夜。

3.5测定

酶标仪设定波长为570nm，参考波长为630nm，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率，以判断受试药物的抗肿瘤活性。

3.6复筛

在初筛浓度为10^-5mol/L时，3次细胞抑制率≥50％的化合物用于复筛，将20mmol/L再做5个稀释度，孔中终浓度依次为5×10^-5mol/L、2×10^-5mol/L、10^-5mol/L、5×10^-6mol/L和2×10^-6mol/L。培养72小时，同样每组设3个复孔，并按照初筛方法，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率。

3.7细胞生长抑制率以及IC50的计算

同时根据各浓度的生长抑制率，采用GraphPad Prism 5.0软件计算IC₅₀值。

4实验结果

4.1细胞生长抑制率

在浓度为10^-5mol/L时，K系列目标化合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率分别见表1。

表1K系列目标化合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率(10μM)

a：浓度＝10μM

在浓度为10^-5mol/L时，I系列目标化合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率分别见表2。

表2 I系列目标化合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率分别见(10μM)

4.2细胞生长半数抑制浓度(IC₅₀μmol/L)

K系列目标化合物对不同肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC₅₀μmol/L)见表3。

表3K系列目标化合物对不同肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC₅₀μmol/L)

A-IC₅₀＜5.0μmol/L；

B-5.0＜IC₅₀＜10.0μmol/L；

C-10.0＜IC₅₀＜15.0μmol/L；

5.实验结论

本发明实施例中制备的具有式(I)结构的化合物对慢性髓细胞白血病(K562)、人急性单核细胞白血病细胞株(U937)的增殖具有显著的抑制作用。上述这些化合物可应用于抗肿瘤药物的制备。