CN101852757A - 竹抗寒性鉴定与评价的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种适用于不同竹种离体抗寒性鉴定与评价的技术体系，具体为竹抗寒性鉴定与评价的方法。竹抗寒性鉴定与评价的方法，其特征在于包括以下步骤：a)取同一竹龄且生长一致的30cm枝条对照；b)将处理后的一部分叶片于液氮中速冻30min后保存于-80℃冰箱等竹抗寒性鉴定与评价的方法，其特征在于：a)电导率的测定b)可溶性糖含量的测定；c)可溶性蛋白含量的测定：d)丙二醛(MDA)的测定：e)脯氨酸的测定：f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定：g)过氧化物酶(POD)活性的测定法。

Description

竹抗寒性鉴定与评价的方法

技术领域

本发明涉及一种适用于不同竹种离体抗寒性鉴定与评价的技术体系，具体为竹抗寒性鉴定与评价的方法。

背景技术

以往竹的研究多集中在栽培和推广上，对竹离体抗寒性鉴定和评价技术体系的研究未见报道，由于竹子很难获得种子，对竹子抗寒性的评价主要是针对自然条件下生长的竹子，研究其与抗寒有关的单一生理生化指标，而且个体生长不一致，不能从客观上很好的评价竹子的抗寒性，具有一定的局限性。

发明内容

本发明正是针对以上技术问题，提供一种解决了竹难以应用种子获得生长一致的小竹子进行抗寒性鉴定的竹抗寒性鉴定与评价的方法。

本发明的具体技术方案如下：

竹抗寒性鉴定与评价的方法，包括以下步骤：

a)取同一竹龄且生长一致的30cm枝条为材料，洗净擦干，石蜡封口，在低温条件下处理12h，以未经处理的枝条为对照；

b)将处理后的一部分叶片于液氮中速冻30min后保存于-80℃冰箱，另一部分叶片用于电导率分析，每个样品设置3次重复，测定处理后不同竹种的电导率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性；

c)按照灰色系统理论，以不同竹种的生理生化指标及其抗寒隶属函数均值为数据集合，建立灰色系统，根据关联分析公理计算各生理生化指标与抗寒隶属函数均值间关联系数，并据此对不同生理生化指标对竹抗寒性的作用进行排序。

其中隶属函数值的计算方法如下：

$X_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(1\right)$ $X_{\mathrm{ij}}^{\′}=1-\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(2\right)$

${\stackrel{\‾}{X}}_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{1}{n}\underset{j=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{X}_{\mathrm{ij}}^{\′}---\left(3\right)$

上式中X′_ij表示某竹种相应指标的抗寒隶属函数值；X_ij表示某竹种相应指标的测定值；X_imax和X_imin分别代表相应指标的最大和最小测定值；表示竹种的抗寒隶属函数均值；n为指标数，凡指标与抗寒性正相关则按公式(1)计算，反之按公式(2)计算。

d)采用主成分分析的方法，对与竹子抗寒性密切相关的生理生化指标，可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性，利用SPSS17软件进行主成分分析，得到抗寒性评价的4个主成分后，即第一主成分为丙二醛和可溶性蛋白含量；第二主成分为POD活性和脯氨酸含量；第三主成分为可溶性糖；第四主成分为SOD活性。通过计算主成分与相应的方差贡献率乘积之和得到植株抗寒性的综合评价，评价得分方法表示如下：

F＝0.3345F₁+0.1948F₂+0.1129F₃+0.1011F₄

竹抗寒性鉴定与评价的方法，包括

a)电导率的测定取生长一致的竹叶叶片，用自来水轻轻冲洗除去表面站污物，用蒸馏水漂洗1-2次，再用重蒸水冲洗1-2次，用纸巾轻轻吸干叶片表面水分，避开叶脉，用打孔器打取等量圆片，混匀后称取0.5g，设置三次重复，分别放入装有20ml重蒸水的试管中，浸没样品，用真空泵抽真空10min，25℃、150r·min^-1震荡12h，用电导仪(EUTECH Con51型)测定浸泡液电导率R，再加上试管塞，在水浴锅煮沸10min，将组织全部杀死，冷却至室温后在同样条件下测定溶液的电导率R1，计算出电解质渗出率来表示该样品经低温处理后细胞质膜的透性。相对电导率＝R/R1x100％。

b)可溶性糖含量的测定：采用蒽酮比色法。

c)可溶性蛋白含量的测定：采用考马斯亮蓝G-250染色法。

d)丙二醛(MDA)的测定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法。

e)脯氨酸的测定：采用酸性茚三酮法。

f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定：采用氮蓝四唑(NBT)还原法。

g)过氧化物酶(POD)活性的测定：采用愈创木酚法。

本发明的技术效果表现在：适用于不同竹种离体抗寒性鉴定与评价的技术体系，解决了竹难以应用种子获得生长一致的小竹子进行抗寒性鉴定的难题。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明

实施例：

竹抗寒性鉴定与评价的方法，包括以下步骤：

a)取同一竹龄且生长一致的30cm枝条为材料，洗净擦干，石蜡封口，在低温条件下处理12h，以未经处理的枝条为对照；

b)将处理后的一部分叶片于液氮中速冻30min后保存于-80℃冰箱，另一部分叶片用于电导率分析，每个样品设置3次重复，测定处理后不同竹种的电导率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性；

c)按照灰色系统理论，以不同竹种的生理生化指标及其抗寒隶属函数均值为数据集合，建立灰色系统，根据关联分析公理计算各生理生化指标与抗寒隶属函数均值间关联系数，并据此对不同生理生化指标对竹抗寒性的作用进行排序。

其中隶属函数值的计算方法如下：

$X_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(1\right)$ $X_{\mathrm{ij}}^{\′}=1-\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(2\right)$

${\stackrel{\‾}{X}}_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{1}{n}\underset{j=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{X}_{\mathrm{ij}}^{\′}---\left(3\right)$

上式中X′_ij表示某竹种相应指标的抗寒隶属函数值；X_ij表示某竹种相应指标的测定值；X_imax和X_imin分别代表相应指标的最大和最小测定值；

表示竹种的抗寒隶属函数均值；n为指标数，凡指标与抗寒性正相关则按公式(1)计算，反之按公式(2)计算。

d)采用主成分分析的方法，对与竹子抗寒性密切相关的生理生化指标，可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性，利用SPSS17软件进行主成分分析，得到抗寒性评价的4个主成分后，即第一主成分为丙二醛和可溶性蛋白含量；第二主成分为POD活性和脯氨酸含量；第三主成分为可溶性糖；第四主成分为SOD活性。通过计算主成分与相应的方差贡献率乘积之和得到植株抗寒性的综合评价，评价得分方法表示如下：

F＝0.3345F₁+0.1948F₂+0.1129F₃+0.1011F₄

竹抗寒性鉴定与评价的方法，包括

a)电导率的测定取生长一致的竹叶叶片，用自来水轻轻冲洗除去表面站污物，用蒸馏水漂洗1-2次，再用重蒸水冲洗1-2次，用纸巾轻轻吸干叶片表面水分，避开叶脉，用打孔器打取等量圆片，混匀后称取0.5g，设置三次重复，分别放入装有20ml重蒸水的试管中，浸没样品，用真空泵抽真空10min，25℃、150r·min^-1震荡12h，用电导仪(EUTECH Con51型)测定浸泡液电导率R，再加上试管塞，在水浴锅煮沸10min，将组织全部杀死，冷却至室温后在同样条件下测定溶液的电导率R1，计算出电解质渗出率来表示该样品经低温处理后细胞质膜的透性。相对电导率＝R/R1x100％。

b)可溶性糖含量的测定：采用蒽酮比色法。

c)可溶性蛋白含量的测定：采用考马斯亮蓝G-250染色法。

d)丙二醛(MDA)的测定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法。

e)脯氨酸的测定：采用酸性茚三酮法。

f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定：采用氮蓝四唑(NBT)还原法。

g)过氧化物酶(POD)活性的测定：采用愈创木酚法。

竹抗寒性鉴定与评价的方法适用于不同竹种离体抗寒性鉴定与评价的技术体系，解决了竹难以应用种子获得生长一致的小竹子进行抗寒性鉴定的难题。

Claims (2)

1.竹抗寒性鉴定与评价的方法，其特征在于包括以下步骤：

a)取同一竹龄且生长一致的30cm枝条为材料，洗净擦干，石蜡封口，在低温条件下处理12h，以未经处理的枝条为对照；

b)将处理后的一部分叶片于液氮中速冻30min后保存于-80℃冰箱，另一部分叶片用于电导率分析，每个样品设置3次重复，测定处理后不同竹种的电导率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性；

c)按照灰色系统理论，以不同竹种的生理生化指标及其抗寒隶属函数均值为数据集合，建立灰色系统，根据关联分析公理计算各生理生化指标与抗寒隶属函数均值间关联系数，并据此对不同生理生化指标对竹抗寒性的作用进行排序。

其中隶属函数值的计算方法如下：

$X_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(1\right)$ $X_{\mathrm{ij}}^{\′}=1-\frac{X_{\mathrm{ij}}-X_{i\min }}{X_{i\max }-X_{i\min }}---\left(2\right)$

${\stackrel{\‾}{X}}_{\mathrm{ij}}^{\′}=\frac{1}{n}\underset{j=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{X}_{\mathrm{ij}}^{\′}---\left(3\right)$

上式中X′_ij表示某竹种相应指标的抗寒隶属函数值；X_ij表示某竹种相应指标的测定值；X_imax和X_imin分别代表相应指标的最大和最小测定值；

表示竹种的抗寒隶属函数均值；n为指标数，凡指标与抗寒性正相关则按公式(1)计算，反之按公式(2)计算。

d)采用主成分分析的方法，对与竹子抗寒性密切相关的生理生化指标，可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、丙二醛、脯氨酸、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性，利用SPSS17软件进行主成分分析，得到抗寒性评价的4个主成分后，即第一主成分为丙二醛和可溶性蛋白含量；第二主成分为POD活性和脯氨酸含量；第三主成分为可溶性糖；第四主成分为SOD活性。通过计算主成分与相应的方差贡献率乘积之和得到植株抗寒性的综合评价，评价得分方法表示如下：

F＝0.3345F₁+0.1948F₂+0.1129F₃+0.1011F₄。

2.根据权利要求1所述的竹抗寒性鉴定与评价的方法，其特征在于：

a)电导率的测定取生长一致的竹叶叶片，用自来水轻轻冲洗除去表面站污物，用蒸馏水漂洗1-2次，再用重蒸水冲洗1-2次，用纸巾轻轻吸干叶片表面水分，避开叶脉，用打孔器打取等量圆片，混匀后称取0.5g，设置三次重复，分别放入装有20m1重蒸水的试管中，浸没样品，用真空泵抽真空10min，25℃、150r·min^-1震荡12h，用电导仪(EUTECH Con51型)测定浸泡液电导率R，再加上试管塞，在水浴锅煮沸10min，将组织全部杀死，冷却至室温后在同样条件下测定溶液的电导率R1，计算出电解质渗出率来表示该样品经低温处理后细胞质膜的透性。相对电导率＝R/R1x100％。

b)可溶性糖含量的测定：采用蒽酮比色法。

c)可溶性蛋白含量的测定：采用考马斯亮蓝G-250染色法。

d)丙二醛(MDA)的测定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法。

e)脯氨酸的测定：采用酸性茚三酮法。

f)超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定：采用氮蓝四唑(NBT)还原法。

g)过氧化物酶(POD)活性的测定：采用愈创木酚法。