CN102415253A - 绣线菊抗寒种类的筛选方法 - Google Patents
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Abstract
绣线菊抗寒种类的筛选方法，涉及园林树木绣线菊抗寒种类筛选方法。本发明提供绣线菊抗寒种类筛选方法，首次领先建立绣线菊抗寒筛选技术体系与方法，填补国内外关于绣线菊抗寒筛选技术空白。方法：一、绣线菊露地自然低温处理；二、绣线菊持续恒低温处理；三、绣线菊露地自然冰冻处理；四、计算抗寒生理指标隶属函数值；五、绣线菊模拟露地低温梯度冰冻处理，计算各绣线菊半致死温度；六、由各绣线菊平均隶属函数值和半致死温度确定各绣线菊的抗寒能力，即完成抗寒种类筛选。本发明方法结合抗寒隶属值与半致死温度双结果，克服抗寒筛选单一性，与其越冬表现高度一致。本发明为北方园林筛选抗寒绣线菊提供技术支撑，应用于绣线菊抗寒筛选领域。
Description
技术领域
本发明涉及绣线菊抗寒种类的筛选方法。
背景技术
绣线菊属(Spiraea L.)是蔷薇科原始的属，其资源丰富，我国分布约有70余种，绣线菊属植物花期持久，花色纯艳，叶型多样，集观花、观彩色叶于一身，园林观赏价值高，具有理想的园林应用前景。我国北方园林绿化资源匮乏，绿化树种单调，园林植物景观不够丰富，绣线菊是良好的绿化素材。但由于北方气候寒冷，并不适宜所有种类绣线菊生长，因此对绣线菊资源进行抗寒能力的研究及其抗寒资源的筛选是其在高寒地区科学应用的关键。
严寒是限制园林绿化素材广泛应用的主要因素，抗寒力强是我国北方地区引进绿化资源的首要要求。为探讨植物的抗寒能力已开展了很多相关研究，大量研究发现多数植物与低温相互作用过程中，逐渐形成了一系列低温适应机制，以增强自身的抗寒力，许多植物经一定时间低温适应后，抗寒能力提高，但抗寒力强弱因植物种类而异。植物的半致死温度(LT50)具有遗传特征，能准确反映其抗寒能力，是衡量植物抗寒力的稳定指标。植物的抗寒性是多种因素共同作用构成的较复杂的综合性状，目前应用最普遍的抗性综合评价方法是隶属函数法，这种方法采用模糊数学中隶属函数法对植物各抗性指标的隶属函数值累加，求取平均数以评价其抗性，这种方法能克服单一指标的片面性，使评价结果全面反映植物的抗寒力。但目前仍然没有将半致死温度与抗寒隶属函数结合的筛选评价植物抗寒力的方法，更没有对丰富的绣线菊资源进行抗寒鉴定与筛选。
发明内容
本发明提供绣线菊抗寒种类的筛选方法，通过确定各绣线菊抗寒生理指标隶属函数值和半致死温度，首次建立绣线菊抗寒筛选技术体系与方法，并筛选抗寒绣线菊资源，其研究结果有科学依据，具一定的领先性与创新突破，并填补国内外关于绣线菊抗寒筛选技术研究的空白。
本发明绣线菊抗寒种类的筛选方法，按以下步骤进行：
一、绣线菊露地自然零上低温处理：秋季露地自然昼夜平均气温达15～5℃，将待测试绣线菊钵苗置于露地中处理3周，之后在露地自然昼夜平均气温达15℃、10℃和5℃时分别取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗继续置于零上温度的露地中自然生长；绣线菊钵苗置于露地中处理期间露地自然昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，每种绣线菊钵苗处理200株；二、绣线菊持续恒低温处理：另取待测试的绣线菊钵苗，将每种绣线菊钵苗置于光照培养箱中，于15℃恒温条件下处理3周，然后取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗置于零上温度的露地中自然生长；15℃恒温条件处理期间培养箱内昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，夜间进行黑暗处理，每种绣线菊钵苗处理200株；三、绣线菊露地自然冰冻处理：将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，当露地自然最低温度达-15℃～-20℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；当露地自然最低温度达-20～-25℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；四、根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值，再将各个抗寒生理指标隶属函数值累加，计算平均值，即得到每种绣线菊抗寒生理指标平均隶属值，根据平均隶属函数值对各绣线菊进行由高到低排序；五、绣线菊人工模拟露地低温梯度冰冻处理：当露地自然最低温度达-15℃时，在冰箱内分别设定-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃的低温，将B组的绣线菊转入冰箱中进行冰冻处理，每级温度处理3d后分别取样，测定枝条在-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃低温下的相对电导率，将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度，根据半致死温度对各种绣线菊进行由低到高排序；六、由各绣线菊平均隶属函数值和半致死温度的高低确定各绣线菊的抗寒能力，平均隶属值越大绣线菊的抗寒力越强，半致死温度越低绣线菊的抗寒力越强，当绣线菊的平均隶属函数值和半致死温度排序不一致时，再结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力，即完成绣线菊抗寒种类的筛选。
目前国内外对绣线菊资源抗寒筛选技术研究尚属空白，本发明是绣线菊抗寒筛选技术研究中的首次尝试，其研究结果具一定的领先性与创新突破，能填补国内外关于绣线菊抗寒筛选技术研究的空白；本发明的绣线菊抗寒筛选技术与方法，从绣线菊资源的收集、抗寒筛选技术流程设计、抗寒筛选方法与手段，到学科交叉等侧面均未见研究报道；本发明筛选的抗寒绣线菊资源为提高绣线菊抗寒能力和培育抗寒绣线菊新品种奠定基础，为实施绣线菊抗寒基因工程和开展绣线菊抗寒分子育种提供实践依据；目前还没有文献报道对丰富的绣线菊资源做系统的抗寒筛选研究。
本发明通过科学严密的低温处理技术，对各绣线菊做低温处理，并据各绣线菊抗寒生理指标和低温处理后的电导率，模拟隶属函数和拟合Logistic方程等数学模型，计算各绣线菊抗寒生理指标隶属函数值和半致死温度，据此建立绣线菊抗寒筛选技术体系与方法，并筛选抗寒绣线菊资源，其研究结果有科学依据，并与各绣线菊露地越冬表现高度一致；本发明提供绣线菊抗寒种类的筛选技术与方法，为北方园林筛选抗寒绣线菊资源提供技术支撑。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式绣线菊抗寒种类的筛选方法，按以下步骤进行：一、绣线菊露地自然零上低温处理：秋季露地自然昼夜平均气温达15～5℃，将待测试绣线菊钵苗置于露地中处理3周，之后在露地自然昼夜平均气温达15℃、10℃和5℃时分别取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗继续置于零上温度的露地中自然生长；绣线菊钵苗置于露地中处理期间露地自然昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，每种绣线菊钵苗处理200株；二、绣线菊持续恒低温处理：另取待测试的绣线菊钵苗，将每种绣线菊钵苗置于光照培养箱中，于15℃恒温条件下处理3周，然后取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗置于零上温度的露地中自然生长；15℃恒温条件处理期间培养箱内昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，夜间进行黑暗处理，每种绣线菊钵苗处理200株；三、绣线菊露地自然冰冻处理：将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，当露地自然最低温度达-15℃～-20℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；当露地自然最低温度达-20～-25℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；四、根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值，再将各个抗寒生理指标隶属函数值累加，计算平均值，即得到每种绣线菊抗寒生理指标平均隶属值，根据平均隶属函数值对各绣线菊进行由高到低排序；五、绣线菊人工模拟露地低温梯度冰冻处理：当露地自然最低温度达-15℃时，在冰箱内分别设定-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃的低温，将B组的绣线菊转入冰箱中进行冰冻处理，每级温度处理3d后分别取样，测定枝条在-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃低温下的相对电导率，将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度，根据半致死温度对各种绣线菊进行由低到高排序；六、由各绣线菊平均隶属函数值和半致死温度的高低确定各绣线菊的抗寒能力，平均隶属值越大绣线菊的抗寒力越强，半致死温度越低绣线菊的抗寒力越强，当绣线菊的平均隶属函数值和半致死温度排序不一致时，再结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力，即完成绣线菊抗寒种类的筛选。
本实施方式所述的处理即指将绣线菊置于所规定的环境中生长。
本实施方式步骤三所述将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，是将每种绣线菊钵苗都平均分配到A、B两组。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一和步骤二中所述绣线菊钵苗的高度为15～20cm，分枝数量为6～8条，叶片数量为20～30枚。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一、步骤二和步骤三中所述抗寒生理指标为供试枝条或叶片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指标。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一和步骤二中所述取叶片，测定相关抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，取枝条形态学上端的第3～8片中长势最佳的叶片，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤三所述取枝条，测定抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤四所述根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值的方法为：采用隶属函数值计算公式：R(Xi)＝(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)，式中Xi为绣线菊某一抗寒生理指标的测定值，Xmin为该抗寒生理指标的最小值，Xmax为该抗寒生理指标的最大值；如果某一抗寒生理指标与其抗寒力呈负相关，则用反隶属函数进行转换，计算公式为：R(Xi)＝1-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)。其它与具体实施方式一相同。
在绣线菊抗寒筛选中，采用模糊数学中的隶属函数法，对绣线菊的各个抗寒生理指标的隶属函数值进行累加，求取平均值以评定其抗寒力，这样可以克服单个指标的片面性，使评定结果更全面的反映各绣线菊的实际抗寒能力。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五所述将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度的方法为：采用Logistic方程回归模型y＝k/(1+ae-bt)，其中y代表各绣线菊相对电解质透出率，t代表处理温度，k为细胞伤害率的饱和容量，a和b为方程参数；通过直线回归的方法求得a，b值及相关系数r，曲线的拐点x＝Lna/b，即为半致死温度(LT50)。其它与具体实施方式一相同。
本实施方式采用改进的数学分析方法(k＝100)求得拐点温度，在此点，低温对电解质的递增效应最大。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤六所述结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力的方法为：各绣线菊露地越冬后，随机选择田间越冬的每种待测绣线菊各50株，调查每种待测绣线菊的枯枝数量、枯枝长度、发芽时间、展叶时间、发芽量、展叶量、全叶期以及从发芽展叶到全叶期所历经的时间，记录各项数据，每项数据取平均值，根据各项平均值进行抗寒力由高到低排序，枯枝数量越少、枯枝长度越短的绣线菊抗寒力越强，发芽展叶时间越早绣线菊抗寒力越强，发芽展叶量越多绣线菊抗寒力越强，全叶期越早绣线菊抗寒力越强，从发芽展叶到全叶期所历经的时间越短绣线菊抗寒力越强，确定每种待测绣线菊的抗寒力。其它与具体实施方式一相同。
当按照各绣线菊的平均隶属函数值和半致死温度排序不一致时，根据各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊抗寒力的强弱。
具体实施方式九：本实施方式对18种绣线菊进行抗寒种类的筛选，绣线菊抗寒种类的筛选方法，按以下步骤进行：一、绣线菊露地自然零上低温处理：秋季露地自然昼夜平均气温达15～5℃时，将待测试的18种绣线菊钵苗置于露地中处理3周，之后在露地自然昼夜平均气温达15℃、10℃和5℃时分别取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗继续置于零上温度的露地中自然生长；绣线菊钵苗置于露地中生长期间露地自然昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，每种绣线菊钵苗处理200株；二、绣线菊持续恒低温处理：另取待测试的18种绣线菊钵苗，将18种绣线菊钵苗置于光照培养箱中，于15℃恒温条件下生长3周，然后取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗置于零上温度的露地中自然生长；15℃恒温条件处理期间培养箱内昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，夜间进行黑暗处理，每种绣线菊钵苗处理200株；三、绣线菊露地自然冰冻处理：将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，当露地自然最低温度达-15℃～-20℃，10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；当露地自然最低温度达-20～-25℃，10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；四、根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值，再将各个抗寒生理指标隶属函数值累加，计算平均值，即得到每种绣线菊抗寒生理指标平均隶属值，根据平均隶属函数值对各绣线菊进行由高到低排序；五、绣线菊人工模拟露地低温梯度冰冻处理：当露地自然最低温度达-15℃时，在冰箱内分别设定-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃的低温，将B组的绣线菊转入冰箱中进行冰冻处理，每级温度处理3d后分别取样，测定枝条在-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃低温下的相对电导率，将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度，根据半致死温度对各绣线菊进行由低到高排序；六、由各绣线菊平均隶属函数值和半致死温度的高低确定各绣线菊的抗寒能力，平均隶属值越大绣线菊的抗寒力越强，半致死温度越低绣线菊的抗寒力越强，当绣线菊的平均隶属函数值和半致死温度排序不一致时，再结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力，即完成绣线菊抗寒种类的筛选。
本实施方式步骤三所述将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，是将18种绣线菊中的每种绣线菊钵苗都平均分配到A、B两组。
步骤一和步骤二中所述绣线菊钵苗的高度为15～20cm，分枝数量为6～8条，叶片数量为20～30枚。
步骤一、步骤二和步骤三中所述相关抗寒生理指标为供试枝条或叶片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指标。
步骤一和步骤二中所述取叶片，测定相关抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，取枝条形态学上端的第3～8片中长势最佳的叶片，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。
步骤三所述取枝条，测定抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。
步骤四所述根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值的方法为：采用隶属函数值计算公式：R(Xi)＝(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)，式中Xi为绣线菊某一抗寒生理指标的测定值，Xmin为该抗寒生理指标的最小值，Xmax为该抗寒生理指标的最大值；如果某一抗寒生理指标与其抗寒力呈负相关，则用反隶属函数进行转换，计算公式为：R(Xi)＝1-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)。
步骤五所述将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度的方法为：采用Logistic方程回归模型y＝k/(1+ae-bt)，其中y代表各绣线菊相对电解质透出率，t代表处理温度，k为细胞伤害率的饱和容量，a和b为方程参数；通过直线回归的方法求得a，b值及相关系数r，曲线的拐点x＝Lna/b，即为半致死温度(LT50)。
平均隶属值越大绣线菊的抗寒力越强，半致死温度越低绣线菊的抗寒力越强，根据18种绣线菊抗寒生理指标的平均隶属函数值和半致死温度，结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力，筛选抗寒绣线菊种类。
本实施方式供试的18种绣线菊的平均隶属值排列顺序如表1所示：
以下7种绣线菊隶属函数值在0.48～0.61间，华北绣线菊＞土庄绣线菊＞绒毛绣线菊＞石蚕叶绣线菊＞绢毛绣线菊＞金丝桃叶绣线菊＞三裂绣线菊，抗寒力强。
以下4种绣线菊隶属函数值在0.32～0.38间，金山绣线菊＞毛果绣线菊＞石棒绣线菊＞金焰绣线菊，抗寒力较强。
以下3种绣线菊隶属函数值在0.301～0.308间，柳叶绣线菊＞楔叶绣线菊＞珍珠绣线菊，抗寒力中等。
以下4种绣线菊隶属函数值在0.25～0.29间，粉花绣线菊＞耧斗菜叶绣线菊＞美丽绣线菊＞曲萼绣线菊，抗寒力弱。
本实施方式供试的18种绣线菊的半致死温度值排列顺序如表2所示：
以下6种绣线菊半致死温度在-28～-32℃间，华北绣线菊＞土庄绣线菊＞绒毛绣线菊＞石蚕叶绣线菊＞绢毛绣线菊＞金丝桃叶绣线菊，抗寒力强，可以在黑龙江省北部高寒地区露地应用。
以下4种绣线菊半致死温度在-26～-27℃间，三裂绣线菊＞毛果绣线菊＞石棒绣线菊＞柳叶绣线菊，抗寒力较强，可以在黑龙江省中部地区露地应用。
以下5种绣线菊半致死温度在-23～-25℃间，楔叶绣线菊＞珍珠绣线菊＞粉花绣线菊＞耧斗菜叶绣线菊＞金焰绣线菊，抗寒力中等，可以在黑龙江省南部地区露地应用。
以下3种绣线菊半致死温度在-19～-20℃间，金山绣线菊＞美丽绣线菊＞曲萼绣线菊，抗寒力弱，不适合在黑龙江省地区露地应用，或者需要经过抗寒驯化后在保护环境条件下可以尝试露地应用。
根据18种绣线菊的半致死温度和平均隶属值综合分析，并结合各绣线菊露地越冬表现进行筛选，华北绣线菊、土庄绣线菊、绒毛绣线菊、石蚕叶绣线菊、绢毛绣线菊、金丝桃叶绣线菊抗寒力最强；三裂绣线菊、毛果绣线菊、石棒绣线菊、柳叶绣线菊抗寒力较强。
Claims (8)
1.绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于绣线菊抗寒种类的筛选方法，按以下步骤进行：一、绣线菊露地自然零上低温处理：秋季露地自然昼夜平均气温达15～5℃，将待测试绣线菊钵苗置于露地中处理3周，之后在露地自然昼夜平均气温达15℃、10℃和5℃时分别取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗继续置于零上温度的露地中自然生长；绣线菊钵苗置于露地中处理期间露地自然昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，每种绣线菊钵苗处理200株；二、绣线菊持续恒低温处理：另取待测试的绣线菊钵苗，将每种绣线菊钵苗置于光照培养箱中，于15℃恒温条件下处理3周，然后取叶片，测定相关抗寒生理指标，然后将每种绣线菊钵苗置于零上温度的露地中自然生长；15℃恒温条件处理期间培养箱内昼夜平均光照为860～1100μmol·m-2·s-1，夜间进行黑暗处理，每种绣线菊钵苗处理200株；三、绣线菊露地自然冰冻处理：将经步骤一处理后的置于露地中自然生长的绣线菊钵苗平均分为A、B两组，当露地自然最低温度达-15℃～-20℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；当露地自然最低温度达-20～-25℃，7～10d后对于A组的绣线菊和经步骤二处理后的置于露地中自然生长的绣线菊取枝条，测定相关抗寒生理指标；四、根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值，再将各个抗寒生理指标隶属函数值累加，计算平均值，即得到每种绣线菊抗寒生理指标平均隶属值，根据平均隶属函数值对各绣线菊进行由高到低排序；五、绣线菊人工模拟露地低温梯度冰冻处理：当露地自然最低温度达-15℃时，在冰箱内分别设定-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃的低温，将B组的绣线菊转入冰箱中进行冰冻处理，每级温度处理3d后分别取样，测定枝条在-15℃、-19℃、-23℃、-27℃、-31℃和-35℃低温下的相对电导率，将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度，根据半致死温度对各种绣线菊进行由低到高排序；六、由各绣线菊平均隶属函数值和半致死温度的高低确定各绣线菊的抗寒能力，平均隶属值越大绣线菊的抗寒力越强，半致死温度越低绣线菊的抗寒力越强，当绣线菊的平均隶属函数值和半致死温度排序不一致时，再结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力，即完成绣线菊抗寒种类的筛选。
2.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤一和步骤二中所述绣线菊钵苗的高度为15～20cm，分枝数量为6～8条，叶片数量为20～30枚。
3.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤一、步骤二和步骤三中所述抗寒生理指标为供试枝条或叶片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指标。
4.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤一和步骤二中所述取叶片，测定相关抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，取枝条形态学上端的第3～8片中长势最佳的叶片，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。
5.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤三所述取枝条，测定抗寒生理指标的方法为：采集每种绣线菊位于中上部的当年生枝条，3次重复随机取样，进行平行样测定，将每一抗寒生理指标的测定结果取平均值。
6.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤四所述根据步骤一、步骤二和步骤三测得的各项抗寒生理指标的值计算每种绣线菊抗寒生理指标隶属函数值的方法为：采用隶属函数值计算公式：R(Xi)＝(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)，式中Xi为绣线菊某一抗寒生理指标的测定值，Xmin为该抗寒生理指标的最小值，Xmax为该抗寒生理指标的最大值；如果某一抗寒生理指标与其抗寒力呈负相关，则用反隶属函数进行转换，计算公式为：R(Xi)＝1-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)。
7.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤五所述将相对电导率拟合Logistic方程计算每种绣线菊半致死温度的方法为：采用Logistic方程回归模型y＝k/(1+ae-bt)，其中y代表各绣线菊相对电解质透出率，t代表处理温度，k为细胞伤害率的饱和容量，a和b为方程参数；通过直线回归的方法求得a，b值及相关系数r，曲线的拐点x＝Lna/b，即为半致死温度。
8.根据权利要求1所述的绣线菊抗寒种类的筛选方法，其特征在于步骤六所述结合各绣线菊露地越冬田间表现，确定各绣线菊的抗寒力的方法为：各绣线菊露地越冬后，随机选择田间越冬的每种待测绣线菊各50株，调查每种待测绣线菊的枯枝数量、枯枝长度、发芽时间、展叶时间、发芽量、展叶量、全叶期以及从发芽展叶到全叶期所历经的时间，记录各项数据，每项数据取平均值，根据各项平均值进行抗寒力由高到低排序，枯枝数量越少、枯枝长度越短的绣线菊抗寒力越强，发芽展叶时间越早绣线菊抗寒力越强，发芽展叶量越多绣线菊抗寒力越强，全叶期越早绣线菊抗寒力越强，从发芽展叶到全叶期所历经的时间越短绣线菊抗寒力越强，确定每种待测绣线菊的抗寒力。
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