CN101851585A - 一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法 - Google Patents

一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法，属食品保藏技术领域。本发明的操作步骤如下：(1)虎掌菌子实体有效成分的提取；(2)棘托竹荪菌丝体的培养；(3)棘托竹荪菌丝体有效成分的提取；(4)将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：5％-95％∶95％-5％；(5)保鲜剂使用方法。本发明与现有技术相比，保鲜效果稳定，无异味，无残留。可广泛用于生产实践中牛肝菌的保鲜处理。

Description

一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法
技术领域：
本发明涉及一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法，属食品保藏技术领域。
背景技术：
牛肝菌类是云南野生菌市场上重要的种类之一，约占总贸易量的30％。以美味牛肝菌、远东疣柄牛肝菌、砖红绒盖牛肝菌等最为常见。美味牛肝菌也是国际著名的食用菌，在欧洲国家深受欢迎，是出口创汇的重要种类之一。美味牛肝菌(Boletus edulis Ball.ex Fr)属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricases)牛肝菌科(Boletaceae)中的一种。美味牛肝菌不仅具有一定的营养价值，而且具有较高的药用价值，是世界范围内分布的食药兼用经济价值较高的真菌之一。干子实体中粗蛋白占17.89％、粗脂肪占8.41％，粗纤维占9.37％、胞内多糖占7.84％、灰分9.06％、碳水化合物占47.43％。因野生的牛肝菌生长于自然环境，未受到农药、化肥等的污染，是天然无公害的“绿色食品”。但牛肝菌等食用菌含水量高，组织非常细嫩，常温下采后1-2d，菇体内的水分就会大量蒸发散失，菌盖及菌褶开始破膜、开伞、失水、萎缩、褐变甚至腐烂，商品价值下降甚至丧失。一旦因采后造成积压导致品质下降从而达不到出口和加工要求，给产地农民和食品加工出口企业带来了巨大的经济损失。因此，解决好鲜菇的采后保鲜问题，延长其运输和贮藏期限，是野生食用菌产业化发展迫在眉睫的大事。通过添加保鲜剂，来延长食品的保质期是有效的方法。食品生产企业中使用的保鲜剂主要分为化学合成保鲜剂和天然保鲜剂。目前食品工业中常用的保鲜剂以化学合成保鲜剂居多，但是化学合成保鲜剂的副作用也给食品防腐保鲜提出了难题，同时随着社会的发展各国法律都已经开始限制使用某些化学保鲜剂。在化学保鲜剂越来越受到质疑的同时，人们正试图寻找化学防腐剂的替代品。同时天然防腐剂具有抗菌性强、安全无毒、水溶性好、热稳定性好、作用范围广、无副作用等化学合成保鲜剂无法比拟的优点。因此，近年来，天然保鲜剂的研究和开发利用成了食品工业的一个热点。迄今，尚未有以食用菌提取液保鲜牛肝菌的相关报道。
发明内容：
本发明的目的是克服了现有技术的不足，提供了一种牛肝菌的保鲜制剂，具有抗菌性强、安全无毒、水溶性好、热稳定性好、作用范围广、无副作用等优点。
本发明采用的真菌是棘托竹荪Dictyophora echinovolvata D-07#；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所；保藏日期：2009年12月03日；保藏登记入册的编号CGMCC NO.3465。
虎掌菌子实体由市场上购买得到。
本发明实施的技术方案如下：
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取1-4份虎掌菌子实体于提取罐中，加入25-100份蒸馏水，分别加入0.01-0.04份木瓜蛋白酶、0.01-0.04份纤维素酶，通入蒸汽加热至40-50℃，保温0.5-1.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶40-1∶80，升温至65-75℃，保温加热0.5-1.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3-1/5，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为1％-5％葡萄糖；0.1％-0.5％蛋白胨；0.02％-0.1％磷酸二氢钾；0.02％-0.1％硫酸镁；余下为水，pH值自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于18-26℃下培养6-12d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为5％-7％，于21-25℃静置培养24-48h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为5％-7％，置100r·min-1旋转式摇床21-25℃培养4-10d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为100-120r/min；接种量为5％-10％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为22-26℃；通气培养96-144h，获得的菌丝体于55-65℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将1-4份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至40-50℃，调pH值至4.0-5.0，加入0.01-0.04份纤维素酶，酶促反应30-90min，再加入0.01-0.04份木瓜蛋白酶，酶促反应30-90min后，再补水至1∶40-1∶80，升温至65-75℃灭酶并保温浸提0.5-1.5h，降温至45-55℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3-1/5，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：5％-95％∶95％-5％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，1-3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
本发明的有益效果是：在常温通风环境中能保鲜7-8d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜20-30d。该保鲜剂能有效抑制常见食品腐败菌，因而对牛肝菌有明显的保鲜效果。
具体实施方式：
实施例一：美味牛肝菌的保鲜
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取1份虎掌菌子实体于提取罐中，加入25份蒸馏水，分别加入0.01份木瓜蛋白酶、0.01份纤维素酶，通入蒸汽加热至40℃，保温0.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶40，升温至65℃，保温加热0.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为1％葡萄糖；0.1％蛋白胨；0.02％磷酸二氢钾；0.02％硫酸镁；余下为水，pH自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于18℃下培养12d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150mi)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为5％，于21℃静置培养48h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为5％，置100r·min-1旋转式摇床21℃培养10d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为100r/min；接种量为5％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为22℃；通气培养144h，获得的菌丝体于55℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将1份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至40℃，调pH值至4.0，加入0.01份纤维素酶，酶促反应90min，再加入0.01份木瓜蛋白酶，酶促反应90min后，再补水至1∶40，升温至65℃灭酶并保温浸提0.5h，降温至45℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：5％-95％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜美味牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，1min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
经处理后的美味牛肝菌从保鲜液中取出，在常温通风环境中可保鲜4d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜约15d。
实施例二：远东疣柄牛肝菌的保鲜
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取4份虎掌菌子实体于提取罐中，加入100份蒸馏水，分别加入0.04份木瓜蛋白酶、0.04份纤维素酶，通入蒸汽加热至50℃，保温1.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶80，升温至75℃，保温加热1.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/5，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为5％葡萄糖；0.5％蛋白胨；0.1％磷酸二氢钾；0.1％硫酸镁；余下为水，pH自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于26℃下培养6d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为7％，于25℃静置培养24h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为7％，置100r·min-1旋转式摇床25℃培养4d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为120r/min；接种量为10％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为26℃；通气培养96h，获得的菌丝体于65℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将4份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至50℃，调pH值至5.0，加入0.04份纤维素酶，酶促反应90min，再加入0.04份木瓜蛋白酶，酶促反应90min后，再补水至1∶80，升温至75℃灭酶并保温浸提1.5h，降温至55℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/5，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：95％-5％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜远东疣柄牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
经处理后的远东疣柄牛肝菌从保鲜液中取出，在常温通风环境中可保鲜5d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜约20d。
实施例三：砖红绒盖牛肝菌的保鲜
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取3份虎掌菌子实体于提取罐中，加入75份蒸馏水，分别加入0.03份木瓜蛋白酶、0.03份纤维素酶，通入蒸汽加热至45℃，保温1h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶60，升温至70℃，保温加热1h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/4，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为3％葡萄糖；0.3％蛋白胨；0.06％磷酸二氢钾；0.06％硫酸镁；余下为水，pH自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于24℃下培养8d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为6％，于23℃静置培养36h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为6％，置100r·min-1旋转式摇床23℃培养6d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为110r/min；接种量为8％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为24℃；通气培养72h，获得的菌丝体于60℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将3份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至45℃，调pH值至5.0，加入0.03份纤维素酶，酶促反应60min，再加入0.03份木瓜蛋白酶，酶促反应60min后，再补水至1∶60，升温至65℃灭酶并保温浸提1h，降温至50℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/4，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：75％-25％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜砖红绒盖牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
经处理后的砖红绒盖牛肝菌从保鲜液中取出，在常温通风环境中可保鲜8d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜约25d。
实施例四：美味牛肝菌的保鲜
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取4份虎掌菌子实体于提取罐中，加入100份蒸馏水，分别加入0.04份木瓜蛋白酶、0.04份纤维素酶，通入蒸汽加热至50℃，保温1.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶80，升温至75℃，保温加热1.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/5，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为5％葡萄糖；0.5％蛋白胨；0.1％磷酸二氢钾；0.1％硫酸镁；余下为水，pH自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于26℃下培养6d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为7％，于25℃静置培养24h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为7％，置100r·min-1旋转式摇床25℃培养4d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为120r/min；接种量为10％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为26℃；通气培养96h，获得的菌丝体于65℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将4份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至50℃，调pH值至5.0，加入0.04份纤维素酶，酶促反应90min，再加入0.04份木瓜蛋白酶，酶促反应90min后，再补水至1∶80，升温至75℃灭酶并保温浸提1.5h，降温至55℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：95％-5％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜美味牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
经处理后的美味牛肝菌从保鲜液中取出，在常温通风环境中可保鲜6d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜20d。
实施例五：砖红绒盖牛肝菌的保鲜
1、虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取4份虎掌菌子实体于提取罐中，加入100份蒸馏水，分别加入0.04份木瓜蛋白酶、0.04份纤维素酶，通入蒸汽加热至50℃，保温1.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶80，升温至75℃，保温加热1.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温。4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/5，即得虎掌菌子实体酶提液。
2、棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为5％葡萄糖；0.5％蛋白胨；0.1％磷酸二氢钾；0.1％硫酸镁；余下为水，pH自然。
(1)将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于26℃下培养6d，获得试管种。
(2)将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为7％，于25℃静置培养24h；
(3)二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为7％，置100r·min-1旋转式摇床25℃培养4d；
(4)将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为120r/min；接种量为10％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为26℃；通气培养96h，获得的菌丝体于65℃烘箱中烘干后粉碎备用。
3、棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将4份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至50℃，调pH值至5.0，加入0.04份纤维素酶，酶促反应90min，再加入0.04份木瓜蛋白酶，酶促反应90min后，再补水至1∶80，升温至75℃灭酶并保温浸提1.5h，降温至55℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3，即得棘托竹荪菌丝体酶提液。
4、将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：95％-5％。
5、保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜砖红绒盖牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
经处理后的砖红绒盖牛肝菌从保鲜液中取出，在常温通风环境中可保鲜6d，其失重率低于10％，无褐变，无不良气味；如在冷藏环境(1-4℃)中则能保鲜20d。

Claims (2)

1.一种真菌-棘托竹荪，其特征是该真菌(Dictyophora echinovolvata)D-07#；保藏日期：2009年12月03日；保藏登记入册的编号CGMCC NO.3465。
2.一种混合型食用菌提取液保鲜牛肝菌的方法，其操作步骤如下：
(1)虎掌菌子实体有效成分的提取：按重量计称取1-4份虎掌菌子实体于提取罐中，加入25-100份蒸馏水，分别加入0.01-0.04份木瓜蛋白酶、0.01-0.04份纤维素酶，通入蒸汽加热至40-50℃，保温0.5-1.5h，然后加入蒸馏水，使料液比达到1∶40-1∶80，升温至65-75℃，保温加热0.5-1.5h(灭酶)，倒出混合物，自然降温；4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3-1/5，即得虎掌菌子实体酶提液；
(2)棘托竹荪菌丝体的培养：培养方法(以下为重量百分比)：
液体培养基配方为1％-5％葡萄糖；0.1％-0.5％蛋白胨；0.02％-0.1％磷酸二氢钾；0.02％-0.1％硫酸镁；余下为水，pH值自然；
①将D-07#的菌丝体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为PDA培养基，于18-26℃下培养6-12d，获得试管种；
②将试管种接种到250ml三角瓶(每瓶装150ml)液体培养基中，培养基配方为前述液体培养基配方，接种量为5％-7％，于21-25℃静置培养24-48h；
③二级液体菌种培养选用500mL三角瓶，装液体培养基300mL，接种量为5％-7％，置100r·min-1旋转式摇床21-25℃培养4-10d；
④将二级液体菌种接种到25L自动发酵生产线的发酵罐中，通气量为1∶0.8v/(v·min)；搅拌转速为100-120r/min；接种量为5％-10％；罐压：0.04Mpa；起始pH为4.5；温度为22-26℃；通气培养96-144h，获得的菌丝体于55-65℃烘箱中烘干后粉碎备用；
(3)棘托竹荪菌丝体有效成分的提取：按重量计称取将1-4份菌丝体干粉，用适量水浸泡，加热升温至40-50℃，调pH值至4.0-5.0，加入0.01-0.04份纤维素酶，酶促反应30-90min，再加入0.01-0.04份木瓜蛋白酶，酶促反应30-90min后，再补水至1∶40-1∶80，升温至65-75℃灭酶并保温浸提0.5-1.5h，降温至45-55℃，4000r·min-1离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/3-1/5，即得棘托竹荪菌丝体酶提液；
(4)将虎掌菌子实体酶提液与棘托竹荪菌丝体酶提液混合构成牛肝菌保鲜制剂，按重量计其混合比例范围为：5％-95％∶95％-5％；
(5)保鲜剂使用方法：挑选大小较为均匀，无损伤，色泽纯正的新鲜牛肝菌，进行去除根部泥土杂质等处理后，浸入配制好的保鲜剂中，1-3min后取出，晾干，即可进行常温或冷藏保鲜。
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