CN101851291A

CN101851291A - 一种抗人baff单克隆抗体的重链和轻链可变区

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Publication number: CN101851291A
Application number: CN201010108437A
Authority: CN
Inventors: 金伯泉; 陈丽华; 肖黎明; 宋朝君; 龚玖瑜
Original assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Current assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Priority date: 2010-02-09
Filing date: 2010-02-09
Publication date: 2010-10-06
Anticipated expiration: 2030-02-09
Also published as: CN101851291B

Abstract

本发明公开了一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区，该抗人BAFF单克隆抗体为FMMU-BAFF-4，其单克隆抗体可变区基因序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；其单克隆抗体可变区氨基酸序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明用重组人BAFF免疫BALB/c小鼠，制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体，克隆并从中筛选出能分泌特异性的人BAFF单克隆抗体FMMU-BAFF-NO.4的杂交瘤细胞株，并克隆该单克隆抗体轻链和重链可变区基因，获得该单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列和氨基酸序列，以及可变区的CDR序列；并确认氨基酸序列和基因序列的惟一性。

Description

一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链可变区

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链可变区，包括其氨基酸序列及其核苷酸序列。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病，是严重危害人类健康的疾病。常见的自身免疫性疾病有系统性红斑狼疮(SLE)、口眼干燥综合征(SS)、类风湿性关节炎(RA)等。针对自身免疫性疾病的治疗手段目前仍处于研究和探索阶段，主要依赖药物如免疫抑制剂、理疗及外科治疗等手段，但是毒副作用较大且无法根治。因此结合基因工程和蛋白质工程技术的靶向抗体药物治疗正成为新兴研究领域，有望为包括系统性红斑狼疮在内的自身免疫性疾病治疗提供新的策略。

B淋巴细胞刺激因子(B cell activating factor，BAFF)是1999年发现的新分子，属于肿瘤坏死因子超家族成员(TNFSF)。BAFF分子在B细胞发育、功能调节和自身免疫性疾病的发病中发挥重要作用，BAFF缺陷或过量表达均能引起机体免疫失衡，从而诱发多种疾病，且可能与某些自身免疫性疾病的发生有关。实验表明(Yoshimoto K et al，Int Immunol.18(7)：1189-96.)，在系统性红斑狼疮、口眼干燥综合征和类风湿性关节炎等病人血清中sBAFF水平明显升高，进一步实验证实了BAFF分子过表达密切参与了系统性红斑狼疮、口眼干燥综合征、类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病的发生和发展。基于对BAFF分子结构及其在生理和病理条件下所起作用的认识，人们已开始尝试以BAFF及其受体作为靶点进而阻断BAFF的生物学活性来合理设计治疗某些相关疾病的新措施，为自身免疫性疾病的治疗提供新方法或新型药物。

目前阻断BAFF生物学活性的制剂主要有抗BAFF抗体和BAFF的可溶型受体两大类，其中抗BAFF抗体包括lymphostat-B、EGFP/scFv F8、anti-BAFFscFv、anti-BAFF scFv-Fc等，但是前三类抗体只能识别游离BAFF，不能识别细胞膜上的BAFF；后一类抗体虽然对游离的BAFF和细胞膜上的BAFF都能识别但是亲和力较低，阻碍其进一步应用。因此制备新型的BAFF治疗性抗体具有十分重要的理论和实际意义。

抗体单体分子是由两条相同的重链(H链)和两条相同的轻链(L链)，通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。H链和L链包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可变区(V区)由高变区/互补决定区(HVR/CDR)和骨架区(FR)组成；靠近C端为恒定区(C区)。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)形成的蛋白质折叠是抗原结合部位，其中的CDR/HVR是抗体与抗原决定基互补结合的部位，C区引发抗原抗体识别后的反应。抗体根据FR/C区不同可分为人源、鼠源等，鼠源性抗体在人体内使用时具有免疫原性，易引起人体的免疫反应，这些免疫反应可引起对鼠源性抗体的清除以及免疫复合物介导的超敏反应。为了克服鼠源性抗体的缺陷，需要构建特异性的嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体等基因工程抗体。

在构建特异性的嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体等基因工程抗体过程中，最为重要的是获得具有良好特异性、亲和力和中和活性的鼠源性亲本抗体，克隆其轻链和重链可变区基因，然后将可变区基因克隆入相应载体构建相应的基因工程抗体重组DNA，进而表达各种类型的基因工程抗体。因此，筛选出特异性的鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆，从中克隆出抗体的重链和轻链可变区基因，分析其氨基酸序列，是进一步构建高亲和力、特异性和具有中和活性的基因工程抗体的前提。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链可变区，包括其基因及其氨基酸序列，为构建高亲和力、特异性和中和活性的抗人BAFF嵌合或人源化基因工程抗体提供支持。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区，轻链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Lys-Ser-Leu-Leu-His-Ser-Asn-Gly-Asn-Thr-Tyr；

CDR2：Arg-Met-Ser；

CDR3：Met-Gln-His-Leu-Glu-Tyr-Pro-Phe-Thr；

重链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Asp；

CDR2：IIe-Ser-Ser-Gly-Gly-Ser-Tyr-Thr；

CDR3：Ala-Ser-Asp-Gly-Val-Trp-Tyr-Ala-Met-Asp-Tyr。

所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的编码轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区应用于以人BAFF分子为靶点的基因工程抗体或疫苗的制备。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

1、本发明所述的抗人BAFF单克隆抗体被命名为FMMU-BAFF-4，该抗体是具有高度特异性的抗人BAFF单克隆抗体；经过间接ELISA检测、流式细胞仪检测证实单克隆抗体FMMU-BAFF-4具有高效价，能够与BAFF分子具有高的亲和力；而且与可溶性的和细胞表面表达的BAFF分子能够特异性的结合。

2、本发明克隆了单克隆抗体FMMU-BAFF-4的轻链、重链可变区基因和氨基酸序列，序列分析证实了该抗体序列的惟一性。

3、分析获得轻链、重链可变区的CDR区，在此基础上为构建高亲和力的抗人BAFF嵌合或人源化基因工程抗体提供支持。

附图说明

图1是单克隆抗体FMMU-BAFF-1～7与sBAFF的间接ELISA检测结果图；

图2是FMMU-BAFF-1～7单克隆抗体与转染BAFF-YFP质粒的293T细胞表面BAFF分子结合的流式细胞术检测结果图，其中，图2a为阴性对照结果图，图2b为空白对照，图2c为单抗检测结果图；

图3是FMMU-BAFF-4单克隆抗体轻链可变区基因同源性序列检测结果图；

图4是FMMU-BAFF-4单克隆抗体重链可变区基因同源性序列检测结果图；

图5是FMMU-BAFF-4单克隆抗体轻链可变区氨基酸同源性序列检测结果图；

图6是FMMU-BAFF-4单克隆抗体重链可变区氨基酸同源性序列检测结果图。

具体实施方式

可变区基因的完整核苷酸序列，尤其是其功能性片段的核苷酸序列(如CDR等)以及抗体可变区的氨基酸序列，是嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体构建的基础。为此，申请人用重组人BAFF免疫BALB/c小鼠，制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体，克隆并从中筛选出能分泌特异性的人BAFF单克隆抗体FMMU-BAFF-NO.4的杂交瘤细胞株，纯化制备了该单克隆抗体并验证了其高亲和性和特异性。

并克隆该单克隆抗体轻链和重链可变区基因，获得该单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列和氨基酸序列，以及可变区的CDR序列；并确认氨基酸序列和基因序列的惟一性。所述的单克隆抗体可变区基因序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示；所述的单克隆抗体可变区氨基酸序列如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示。

下面结合附图对本发明做详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。本发明具体按以下步骤实施：

1、小鼠抗人BAFF分子单克隆抗体的制备

1.1单克隆抗体的制备、纯化

重组人BAFF分子委托武汉三鹰生物技术有限公司制备。

按单克隆抗体制备方法(细胞和分子免疫学实验技术第一版，P9-17)，用重组人BAFF免疫BALB/c小鼠(购自第四军医大学实验动物中心)，初次免疫，使用福氏完全佐剂，后续免疫使用福氏不完全佐剂，每次间隔3周，均为皮下多点注射，共免疫4次。末次免疫7-10天后采血测其效价，检测免疫效果。间隔2-3周后，经静脉注射抗原再加强免疫，3天后处死动物取脾进行细胞融合；

具体过程为：取对数生长的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0计数，同时制备免疫脾细胞悬液。将骨髓瘤细胞与脾细胞按1∶10比例混合，在50ml塑料离心管内用不完全培养液洗一次，1200rpm离心8min，然后弃上清，轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略为松动，在室温下融合，制备杂交瘤细胞株；

融合后细胞悬液加入含有饲养细胞(正常BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞)的96孔板，37℃、5％CO₂孵箱培养；待克隆出现后，间接ELISA检测，挑选阳性克隆。对含有阳性克隆孔的细胞采用有限稀释法进行克隆化，直至获得能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(体外连续培养超过6个月)。在获得能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后，按小鼠腹水制备方法制备包含单克隆抗体的腹水(细胞和分子免疫学实验技术第一版，P9-P17)；腹水经40％饱和硫酸铵沉淀后，采用Protein A亲和层析法纯化。

1.2抗人BAFF单克隆抗体高亲和力测定实验

按照上述单克隆抗体的制备过程，申请人构建了7株能够分泌抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为杂交瘤细胞FMMU-BAFF-1～7，其对应分泌的抗体分别命名为单克隆抗体FMMU-BAFF-1～7；

对于制备的小鼠抗人BAFF单克隆抗体FMMU-BAFF-1～7，用IgG业类检测试剂盒(美国Sigma公司)检测其单克隆抗体的IgG亚类，并用间接ELISA方法测定FMMU-BAFF-1～7杂交瘤细胞株的腹水效价(包被抗原为重组人BAFF蛋白，待测样品为1×10¹～10⁹系列梯度稀释的腹水，检测抗体为羊抗鼠-HRP酶标记抗体，底物使用ABTS)，以筛选对BAFF高亲和力的单抗；具体的腹水效价检测如表1所示，其中，单抗FMMU-BAFF-4效价最高，腹水效价为1×10^-7，而一般采用间接ELISA检测腹水效价达1×10^-5以上的抗体即可使用。

表1鼠源性抗人BAFF单抗单克隆抗体FMMU-BAFF-1～7的特性筛选鉴定

克隆编号	亚类	腹水效价	流式细胞术
克隆编号	亚类	腹水效价	流式细胞术	1	IgG₁(κ)	10^-4	-
2	IgG₁(κ)	10^-5	-	1	IgG₁(κ)	10^-4	-
2	IgG₁(κ)	10^-5	-	3	IgG₁(κ)	10^-5	-
4	IgG₁(κ)	10^-7	++	3	IgG₁(κ)	10^-5	-
4	IgG₁(κ)	10^-7	++	5	IgG₁(κ)	10^-7	-
6	IgG₁(κ)	10^-5	-	5	IgG₁(κ)	10^-7	-
6	IgG₁(κ)	10^-5	-	7	IgG₁/2a(κ)	10^-6	++

1.3抗人BAFF单克隆抗体与sBAFF分子的特异性结合

而对于单抗的特异性结合来说，在具有与抗原高亲和力的基础上，其特异性的识别和结合更为重要，尤其是与细胞表面的活性分子的结合所反应的对抗原的特异性的结合。

本发明首先以hIgG作为对照，在ELISA板孔中直接包被可溶性BAFF(sBAFF)，比较7株抗BAFF抗体与sBAFF的特异性结合；具体操作步骤如下：

1)包被用pH 9.0，0.05M碳酸盐包被缓冲液稀释sBAFF，同时包被hIgG作为阴性对照，包被浓度为5μg/ml，每孔加入0.1ml，4℃过夜；次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min；

2)加样加1∶500稀释的7株抗BAFF抗体于上述已包被的反应孔中，置37℃孵育1h，然后洗涤；

3)加酶标抗体于各反应孔中，加入新鲜稀释(1∶1000)的HRP标记的羊抗小鼠抗体0.1ml，37℃孵育1h，洗涤；

4)加底物液显色于各反应孔中加入新鲜配制的ABTS底物溶液0.1ml，37℃孵育10～30min；

5)终止反应于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml；

6)结果测定在ELISA读数仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。

结果如图1所示，横坐标为7株抗BAFF抗体，纵坐标显示7株抗BAFF抗体与包被分子结合的OD值，反应与sBAFF分子的结合情况；以与hIgG分子的结合作为对照，比较7株单抗与sBAFF分子的特异性结合，通过OD值的变化来体现与sBAFF分子结合的特异性。从图中可以很明显地看出单抗FMMU-BAFF-4与sBAFF分子结合的特异性在所有单抗中最高，能够与sBAFF分子特异性结合。

1.4抗人BAFF单克隆抗体与细胞表面BAFF分子的结合

本发明以IgG1作为阴性对照，用流式细胞术(细胞和分子免疫学实验技术，第一版，P78-89)检测抗人BAFF单克隆抗体FMMU-BAFF-1～7与转染人BAFF-YFP质粒的293T细胞系(Transfecting-293T-cells)细胞表面表达的BAFF分子的结合。

流式细胞术检测结果如图2所示：图2a为IgG1阴性对照，图2b显示BAFF-YFP质粒可高效转染293T细胞，图2c中NO.1～7分别表示单抗FMMU-BAFF-1～7与转染BAFF-YFP质粒的293T细胞表面BAFF分子的特异性结合，横坐标为黄色荧光蛋白荧光强度，表示BAFF-YFP质粒的转染效率；纵坐标为BAFF-PE的荧光强度，表示7株抗体与转染BAFF-YFP质粒的293T细胞表面BAFF分子的特异性结合能力。从图2中可以看出，与其他株单抗相比，NO.4和No.7所示的检测结果在右上角的区域具有明显的荧光强度，这表明单抗FMMU-BAFF-4和FMMU-BAFF-7可特异性识别转染BAFF-YFP质粒的293T细胞系细胞表面BAFF分子，单抗FMMU-BAFF-4和FMMU-BAFF-7具有与细胞表面BAFF分子特异性结合的能力。

通过以上检测表明，单克隆抗体FMMU-BAFF-4具有高效价，能够与BAFF分子具有高的亲和力；而且与可溶性的和细胞表面表达的BAFF分子能够特异性的结合。而对于其他株的单克隆抗体不能同时满足这些条件(如表1所示)。

2、BAFF轻链和重链可变区基因的克隆

2.1分泌FMMU-BAFF-4单抗的杂交瘤细胞的培养

按常规方法复苏(细胞培养，第一版，P88)杂交瘤细胞，用含10％小牛血清的RPMI 1640培养基于37℃，5％CO₂孵箱中培养至对数生长期。

2.2总RNA的提取和cDNA第一链的合成

采用TRIZOL Reagent(购自美国GIBCO公司)提取总RNA，具体操作步骤按说明书进行；cDNA第一链合成试剂盒购自美国GIBCO公司，在得到总RNA后按产品说明书进行反转录合成cDNA第一链。

2.3PCR法扩增V_L和V_H基因

PCR法扩增试剂盒购自Takara公司，以cDNA第一链为模板进行PCR扩增。反应体积50μl，反应条件为：94℃温育5min；94℃变性45s，63℃退火45s，72℃延伸1min，循环30次；72℃延伸10min；V_L、V_H的正、反向引物核苷酸序列为：

V_LF：gatgt gagct cgtga tgacc cagac tcc

V_LB：gcgcc gtcta gaatt aacac tcatt cctgt tgaa

V_HF：tgagg agacg gtgac cgtgg tccct tggcc ccaga ggtgc aactg cagca gtcag

V_HB：aggts marct gcags agtcw gg

(IUB标准兼并碱基代码：s:c/g；m:a/c；r:a/g；w:a/t)

2.4PCR扩增产物的克隆和筛选

PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳，用小量胶回收试剂盒(购自美国Axygen公司)回收抗体重链和轻链可变区片段，用simple pMD18T试剂盒(购自日本Takara公司)将该片段按说明书插入simple pMD18T载体中。转化W.coli XL-10(购自北京中国普通微生物菌种保藏中心)，在Amp抗性LB琼脂培养平皿中37℃培养过夜。

挑取LB琼脂培养平皿中克隆，在Amp抗性LB培养基中37℃摇菌过夜，以1μl菌液为模板，通过上述针对轻链、重链可变区设计的引物，用PCR法筛选重组阳性E.coli克隆；轻链用限制性内切酶Xba I和Sac I，重链用Sal I和EcoR I限制性核酸内切酶(购自Takara公司)消化筛选重组阳性克隆(酶切得到重链片段约375bp，轻链片段约750bp)。

将所获得重组阳性E.coli克隆摇菌，菌体送交南京金斯瑞生物科技有限公司完成基因序列测定，轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

3轻链和重链可变区的氨基酸序列及同源性分析

3.1确定测序无误后，在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB数据库中，进行核苷酸序列同源性分析(Blastn)

分析结果表明，单抗轻链可变区基因与小鼠杂交瘤4-1D2免疫球蛋白轻链基因部分序列同源性最高，同源性为332/336，同源性百分比为98％，(如图3所示)；单抗重链可变区基因与小鼠免疫球蛋白重链可变区部分mRNA(IGHV-A2A1 gene)同源性最高，同源性为305/320，同源性百分比为95％(如图4所示)。

3.2将可变区基因翻译成氨基酸序列，FMMU-BAFF-4单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在non-redundant Genbank CDS translations+PDB+SwissProt+PIR+PRF蛋白质数据库中，进行氨基酸序列同源性分析(Blastp)。

分析结果表明，单抗轻链氨基酸序列与酯水解抗体Ms6-12Fab复合物高清晰度晶体结构A链(pdb|1MJJ|A)、L链(pdb|1MJJ|L)、L链(1.22埃晶体结构pdb|1MJU|L)同源性最高，同源性为106/112，同源性百分比为94％(如图5所示)；单抗重链氨基酸序列与小鼠免疫球蛋白重链可变区

同源性最高，同源性为97/106，同源性百分比为91％(如图6所示)。

编码mAb的轻链和重链可变区的基因核苷酸序列和蛋白质氨基酸序列同源性分析结果表明末发现与本发明相同的序列。

3.3利用IMGT/V-QUEST分析可变区结构，确定CDR区

将测序所得抗体轻链和重链可变区序列，在IMGT/V-QUEST网站(http://imgt.cines.fr/IMGT_vquest/vquest)分析，得出其CDR区。

轻链可变区的3个互补决定区(CDR)序列，如SEQ ID NO.1划线部分所示，具体为：

CDR1：Lys-Ser-Leu-Leu-His-Ser-Asn-Gly-Asn-Thr-Tyr；

CDR2：Arg-Met-Ser；

CDR3：Met-Gln-His-Leu-Glu-Tyr-Pro-Phe-Thr；

重链可变区的3个互补决定区(CDR)序列，如SEQ ID NO.2划线部分所示，具体为：

CDR1：Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Asp；

CDR2：IIe-Ser-Ser-Gly-Gly-Ser-Tyr-Thr；

CDR3：Ala-Ser-Asp-Gly-Val-Trp-Tyr-Ala-Met-Asp-Tyr。

4.基因工程抗体设计

基于抗人BAFF单克隆抗体的克隆、纯化以及序列分析，设计构建以下生物制品

(1)抗人BAFF单链抗体的构建

将本发明的单克隆抗体的轻链和重链可变区基因插入表达载体pCONTAB 5E中，获得的单链抗体基因转化表达菌株，通过诱导该基因的表达，制备对自身免疫性疾病有潜在治疗作用的单链抗体。

(2)人源化抗体的构建

将本发明的单克隆抗体轻链和重链可变区的CDR区移植到人源可变区的FR中，形成CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)也称重构抗体(reshapingantibody)或人源化抗体(humanized antibody)。利用CDR移植技术改造抗体，可以获得保持鼠源性亲本mAb的特异性，同时更加接近人抗体的新型抗体，用于制备对自身免疫性疾病有潜在治疗作用的人源化抗体。

(3)根据本发明的基因序列及其编码的氨基酸序列，制备针对人BAFF功能表位的如人鼠嵌合抗体、Fab抗体、疫苗或其他生物制品。

氨基酸序列及基因序列表

<110>中国人民解放军第四军医大学

<120>一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链可变区

<160>4

<210>1

<211>112

<212>PRT

<213>人工合成

<400>1

Asp Leu Val Met Thr Gln Thr Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser

1 5 10 15 20

Ile Ser Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp

25 30 35 40

Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala

45 50 55 60

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro

85 90 95 100

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

105 110

<210>2

<211>106

<212>PRT

<213>人工合成

<400>2

Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser

1 5 10 15 20

Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ile Ile

25 30 35 40

Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser

45 50 55 60

Arg Asp Gln Asp Lys Gln Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr

65 70 75 80

Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ser Asp Gly Val Trp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

85 90 95 100

Thr Thr Val Thr Val Ser

105

<210>3

<211>336

<212>DNA

<213>人工合成

<400>3

gatattgtga tgacccagac tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60

atctcctgca ggtctactaa gagtctcctg cacagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120

ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180

tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240

agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatcct 300

ttcacgttcg gctcggggac aaagttggaa ataaaa 336

<210>4

<211>319

<212>DNA

<213>人工合成

<400>4

agtgaagcct ggagggtccc tgaaactctc ctgtgcagcc tctggattca ctttcagtag 60

ctatgacatg tcttgggttc gccagactcc agacaagagg ctggagtggg tcgcaataat 120

tagtagtggt ggtagttaca cctactatcc agacagtgtg aaggggcgat tcaccatctc 180

cagagacaat gacaagaaca ccctgtacct gcaaatgagc agtctgaagt ctgaggacac 240

agccatgtat tactgtgcaa gcgacggggt atggtatgct atggactact ggggccaagg 300

gaccacggtc accgtctcc 320

Claims

1.一种抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，轻链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Lys-Ser-Leu-Leu-His-Ser-Asn-Gly-Asn-Thr-Tyr；

CDR2：Arg-Met-Ser；

CDR3：Met-Gln-His-Leu-Glu-Tyr-Pro-Phe-Thr；

重链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Asp；

CDR2：IIe-Ser-Ser-Gly-Gly-Ser-Tyr-Thr；

CDR3：Ala-Ser-Asp-Gly-Val-Trp-Tyr-Ala-Met-Asp-Tyr。

2.如权利要求1所述的抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，编码轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

4.权利要求1或3所述的抗人BAFF单克隆抗体的重链和轻链的可变区应用于以人BAFF分子为靶点的基因工程抗体或疫苗的制备。