CN101850050A - 一种富含ctp、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺 - Google Patents
一种富含ctp、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺,它是将瘦牛肉和带皮、带鳞甲鲤鱼作原料,经过四级发酵,再经过过滤、灭菌、消毒处理而得。本发明添加了动植物蛋白酶以强化原料水解,同时外源性补充氮气、氧气、二氧化碳气,加速、加强了原料发酵中生化反应,不仅不需要提纯菌种和酶,而且还提高了产品中CTP的相对含量,同时还产生了较高含量的钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM),改变了国际上仅能用萃取法生产钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)的现状;在微生物学领域中有很明显的效果,具有极其重要的生物学意义、生产科研价值和明显的经济效益和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及的生产工艺,是一种富含高能量物质CTP和细胞代谢调控综合剂钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)水溶液的生产工艺,属于生物工程技术领域。
背景技术
专利说明书ZL95116139.3公开了一种含有高能量营养物质和能促进人体生理代谢的富含CTP水溶液的生产工艺,虽然采用了“天然多菌种和酶联合分阶段连贯式发酵的独特工艺,不需要提纯菌种和酶;”但该专利生产流程中由于发酵温度偏高,发酵时间短,畜、禽肠腺菌酶混合悬液中酶的浓度不够,发酵中产生的氮气、二氧化碳、氧气的含量较低,不够大肠杆菌合成CTP的产物循环的需要,导致发酵不够充分,催化CTP合成生化反应的效率不高,产品的浓度较低,CTP等生化反应的终端产品的相对含量较低,不利于该技术的推广、应用;同时,现有国际上采用萃取法生产钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM),与本发明相比较,具有原料选择单一、严格(仅能使用鲤鱼皮)、原料与成品的转化效率低、原料及生产费用高昂,导致终端产品价格昂贵、很难应用推广。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)水溶液的生产工艺,解决原有技术的工艺弊端。
本发明的技术方案为:
①、一级发酵处理:选瘦牛肉和鲤鱼为主要原料,天然大豆根瘤类菌体为菌种,高温灭菌大豆浆制备培养基;
将大豆根瘤类菌体的根瘤颗粒,经清洗、外膜消毒,粉碎后制成悬液,按1:10的比例将悬液注入大豆浆培养液中,在PH5、30℃条件下发酵4小时,制成一级菌种;从一级菌种开始,在同样条件下,同样按1:10的比例加上高温灭菌大豆浆,再重复做第二次、第三次,制成三级菌种;将30%的瘦牛肉浆与70%的带皮、带鳞甲鲤鱼浆制成一份混合肉浆,在高温高压条件下,作灭菌、变性处理,注入等量的大豆根瘤菌三级菌种,每公斤加入20克富含动植物蛋白酶浆液,在PH5、30℃条件下发酵12小时,然后高温高压灭活20分钟,冷却待用;
②、二级发酵处理:将畜、禽十二指肠、小肠、经清洗、外部消毒后,提取肠膜和肠液制成悬液,即得畜、禽肠腺菌酶混合悬液,再按上述大豆根瘤类菌体悬液制备三级菌种的同样方法,制得畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种;
按未经煮熟无杂菌污染的大豆浆1份:经高温灭菌的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:经高温灭菌的天门冬浆2份的比例制成混合培养基,倒入经高温灭菌后冷却的一级发酵物中;
再将畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种按0.5:1的比例注入高温灭菌后冷却的混合肉浆一级发酵物中,再按每公斤用10毫克的比例加入VB6,每公斤用2毫克的比例加入VB2,每公斤用20克的比例加入富含动植物蛋白酶浆液,在PH5.6、温度30℃的条件下发酵6个小时;
③、三级发酵处理:将未经煮熟的无杂菌污染的大豆浆1份:将未经煮熟无杂菌污染的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:未经煮熟的无杂菌污染的天门冬浆1份:未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉浆一份,制成混合培养基;将此混合培养基6份与二级发酵物18份混合,并按每公斤的量加入2毫克VB2,按每公斤的量加入20克富含动植物蛋白酶浆液,再加入10%含量为10×106个/克的高浓度大肠杆菌菌液,及原料量5%的高温灭菌黄芪浆,在PH5、37℃条件下发酵1小时,发酵的同时充入1个小时的氮气和二氧化碳气体,然后在不充上述气体的情况下,继续发酵5小时,按着在上述三级混合发酵液中加入10%的富含PRPP的水溶液,10%富含尿嘧啶和胞嘧啶的水溶液,再加入原料量5%的高温灭菌黄芪浆,并按每公斤的量加入8毫克VB2在PH6、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时的氧气,然后在不充氧气的情况下再继续发酵1个半小时;
④、四级发酵处理:按三级发酵物中瘦牛肉浆的量加入比例为3:7的未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉和带皮、带鳞甲鲤鱼肉混合肉浆;再按10%的比例加入含量为10×106个/克的大肠杆菌菌液,再将0.14%畜、禽肠腺菌酶混合悬液加入混合发酵物中,再按发酵物每公斤的量加入10毫克VB6,每公斤的量加入20克富含动植物蛋白酶浆液,再加入原料量5%的高温灭菌黄芪浆,在PH5、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时氮气;然后在不充氮气的情况下继续发酵4个半小时;接着再升温至45℃发酵3个小时,然后将全部四级发酵物放入冰柜中冷冻36个小时,将畜、禽肠腺菌酶混合悬液中的酵母菌在发酵中扩繁后的酵母菌群,在低温条件下继续分解原料发酵水解后残留的淀粉、多糖,转变为单糖;最后将全部发酵物在高温高压条件下加热15分钟,杀灭全部微生物,冷却后过滤去渣,再在126.8℃、1.4公斤/厘米2的高温高压条件下,破坏掉微生物繁殖中所产生的全部外毒素与内毒素,即得富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)水溶液的成品。
高温高压条件为:温度>80℃;压力>0.5公斤/厘米2。
动植物蛋白酶包括:菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、猪或其它的动物的胃蛋白酶,动物胰蛋白酶。
与现有技术相比,本发明采用新的工艺,降低了发酵温度,延长发酵时间,充入外源性氮气、二氧化碳、氧气,添加了廉价的动植物蛋白酶等措施,提高了催化CTP合成生化反应的效率,增加了CTP的相对含量和溶液浓度,有利于该技术的推广、应用;此外大幅度调整了原料,使用带皮、带鳞甲鲤鱼肉代替原有工艺中的豌豆和部分瘦牛肉,能够同时大量生产出比萃取法生产的钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)廉价得多的富含钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)水溶液,使钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)能大范围地配制生物激活剂应用、推广成为可能,从而具有极其明显的经济效益和社会效益。
具体实施方式
实施例:用原有工艺加上充氮气、二氧化碳气、氧气及菠萝蛋白酶的新生产工艺为例:
菌种和酶:
a、用大豆根瘤制成根瘤类菌体菌种;
b、用鸡的十二指肠、小肠的粘膜和肠液制成肠腺菌酶混合菌种;
c、用菠萝制成富含菠萝蛋白酶溶液,浓度为10%;
d、高浓度大肠杆菌菌液,含量为10×106个/克;
原料:瘦牛肉浆、带皮及鳞甲鲤鱼肉浆,富含PRPP水溶液(即5-磷酸核糖焦磷酸),富含尿嘧啶、胞嘧啶的水溶液;
培养基:大豆浆、天门冬浆;
催化剂:VB6、黄芪浆、VB2;
1、菌种和酶的制作:
用六倍以上放大镜,挑选出包膜无破损的大豆根瘤100g,用灭菌水(冷开水等)清洗三次,洗净根瘤表面泥沙;用95度酒精浸泡大豆根瘤三分钟;用蒸馏水冲清酒精浸泡过的大豆根瘤三次;用研钵将冲洗净的大豆根瘤研磨成浆状;在浆状大豆根瘤中加入10倍蒸馏水,然后倒入2个500毫升容积的三角烧瓶中,摇动15分钟,静置三分钟即制成大豆根瘤类菌体1公斤菌体悬液,待用。
②肠腺菌酶混合菌种悬液的制作:用液化气喷火器喷出1200℃的超高温蓝色火焰,用干热消毒法,消毒包括恒温箱发酵罐等在内的全部发酵及加工工具和容器。
选取健康母鸡四只,开肠破肚后去下十二指肠和小肠;去掉肠壁外附肠油,并挤干净消化及未消化食物;用棉线扎死肠两端断口,用灭菌水(冷开水等)冲洗三次肠外壁,达到洁净无油脂;用95度酒精浸泡肠外壁三分钟;用蒸馏水冲洗肠外壁三次;用医疗手术器械取下肠粘膜及肠液;取肠粘膜及肠液0.05克,稀释四倍后,在1000倍以上显微镜下镜检,看是否按肠激酶、肠肽酶、肠淀粉酶、非病源性大肠杆菌、酵母的菌群组合,是否有鸡的各种致病菌、寄生虫及寄生虫卵污染;将符合要求(上述菌酶组合)而又无污染的肠粘膜及肠液,置入三角烧瓶中,加上20倍蒸馏水,摇动15分钟,静置三分钟即制成2公斤肠腺酶混合菌悬液,待用。
③富含菠萝蛋白酶浆液的制作:取2.4公斤新鲜成熟的菠萝,用经高温消毒的工具,连菠萝皮切成1-2厘米3左右大小的碎块,加入21.6公斤灭菌水(冷开水等),再加入48克氯化钠(食盐),放入冰柜中冷冻至全部结冰;然后将已结冰带食盐水的菠萝碎块,在冰冻状况下,用经过液化气喷火器消毒过的打浆机打成细冰浆装入经高温消毒过的容器中,在冰柜中冷藏,即制成24公斤富含菠萝蛋白酶水溶液,待用。
④高浓度大肠杆菌菌液的制作:本工艺流程开始运行前六天,取46.5克葡萄糖粉剂,加5倍水,制成232.5克溶液,经高温灭菌后注入经高温灭菌的容器中,冷却后加入77.5克高温灭菌后的黄茋浆,再加入93克肠腺菌酶混合悬液,接着加入0.43克硫酸镁、0.03克硫酸锌、0.04克硫酸锰、0.03克硼酸,在PH8.5、37℃条件下培养48小时;再取465克葡萄糖粉剂,加10倍水,制成4650克溶液,经高温灭菌冷却后,倒入第一次培养的菌液中,加入1550克高温灭菌后的黄芪浆,再加入0.87克硫酸镁、0.06克硫酸锌、0.07克硫酸锰、0.06克硼酸,在PH8.5、37℃条件下再继续培养48小时;最后再取9.3公斤葡萄糖粉剂,加10倍水,制成88公斤溶液,经高温灭菌冷却后,倒入第二次培养的菌液中,加入29.4公斤高温灭菌后的黄芪浆,接着再加入1.74克硫酸镁、0.12克硫酸锌、0.15克硫酸锰、0.12克硼酸,在PH8.5、37℃条件下再培养48小时,其间每隔24小时将PH值调整至PH8.5,待液面长出乳白色菌膜时,即制成124公斤高浓度(10×106个/克)大肠杆菌菌液。
2、原料的制备:
① 瘦牛肉浆的制备:用24.25公斤瘦牛肉经灭菌水(冷开水等)洗
净,加入1倍灭菌水,用经高温消毒后的打浆机打成细牛肉浆48、5公斤,将其中16公斤,在100℃条件下灭菌,冷却后待用。
② 带皮、带鳞甲鲤鱼浆的制备:用139.25公斤鲜活鲤鱼用灭菌
水(冷开水等)冲洗,宰杀时去掉鳃及内脏(保留鱼卵及鱼脂肪),加入1倍灭菌水,用经高温消毒后的打浆机打成278.5公斤带皮、带鳞甲鲤鱼肉浆,将其中36公斤,在100℃条件下灭菌,冷却后待用。
③ 富含PRPP水溶液的制备:本工艺开始前两天用42.8公斤白糖
汁,加入1.65公斤鸡肠腺菌酶混合悬液(另外制备,方法同上述鸡肠腺菌酶混合悬液的制备),8.9公斤含水50%的未经煮熟的瘦牛肉浆(制备方法同上),1.65公斤高温灭菌后的黄芪浆(另制备),在PH5、30℃条件下发酵48小时,再将发酵液在蒸汽压力1.4公斤/厘米2,126.8℃条件下加热30分钟,即得55公斤富含PRPP水溶液。
④ 富含尿嘧啶、胞嘧啶水溶液的制备:本工艺开始前三天,取53.4
公斤高温灭菌大豆浆(另制备),1.2公斤大豆根瘤类菌体悬液(另外制备,方法“大豆根瘤类菌体菌种的制作”),和400克酵母粉在PH4及30℃条件下发酵72小时,然后用126.8℃、1.4公斤/厘米2压力蒸汽灭菌,并破坏掉酵母细胞膜,即制得55公斤该种水溶液。(制原料的工具及容器必须用液化气喷火器灭菌、消毒,方能使用。)
3、培养基的制备:
a、大豆浆:用12.6公斤大豆,加上10倍水,用灭菌后的工具,磨成126公斤大豆浆;将其中51公斤大豆浆在100℃条件下灭菌十分钟,制成灭菌大豆浆,冷却后待用。
b、天门冬浆:将中药材天门冬12.5公斤,用清水洗干净,再用10倍60℃温度灭菌水浸泡四个小时,在用灭菌后的工具,磨成125公斤天门冬浆;将其中100公斤天门冬浆在100℃条件下灭菌十分钟,冷却后待用。
4、催化剂的制备:
a、VB6、VB2:用医药部门出售的产品,用灭菌后的工具按所需要的量粉碎成粉末状,待用。
b、黄芪浆:将中药黄芪(以一年生的为标准)9.5公斤,加10倍水,在100℃条件下熬煮半小时,并始终保持10%的浓度,待纤维质松软后,用工具磨成细浆状,然后在126.8℃、1.4公斤/厘米2条件下灭菌,冷却后制成95公斤灭菌黄芪浆,冷却后待用。
5、四级连贯式发酵制成成品
①一级发酵处理:将制备好的大豆根瘤类菌体悬液1公斤,注入1公斤灭菌大豆浆中,在PH5、30℃-40℃条件下发酵2小时,制成一级菌种;将一级菌种注入3公斤灭菌大豆浆中,在同样条件下制成二级菌种;将二级菌种注入47公斤灭菌大豆浆中,在同样条件下制成52公斤三级菌种;将16公斤灭菌、变性瘦牛肉浆与36公斤灭菌、变性带皮、带鳞甲鲤鱼浆,注入52公斤大豆根瘤菌三级菌种,加入1040克富含菠萝蛋白酶浆液,在PH5、30℃条件下发酵12小时,然后高温高压灭活20分钟,冷却待用。
②二级发酵处理:用制备好的鸡肠腺菌酶混合悬液1公斤,注入1公斤灭菌大豆浆中,在PH5、30℃条件下发酵4小时,制成一级菌种,将一级菌种注入3公斤灭菌大豆浆中,在同样条件下制成二级菌种;将二级菌种注入47.52公斤灭菌大豆浆中,在同样条件下制成52.5公斤三级菌种;
按未经煮熟无杂菌污染的大豆浆50公斤、经高温灭菌的带皮和带鳞甲的鲤鱼肉浆150公斤、经高温灭菌的天门冬浆100公斤制成混合培养基,倒入经高温灭菌后冷却的一级发酵物中;
再将52.5公斤(0.5:1)的比例注入经高温灭菌后冷却的一级发酵物中,再按每公斤用10毫克的比例加入4050毫克VB6,每公斤用2毫克的比例加入810毫克VB2,再按每公斤用20克的比例加入8.1公斤富含菠萝蛋白酶浆液,在PH5.6、温度30℃的条件下发酵6个小时。
③三级发酵处理:将未经煮熟无杂菌污染的大豆浆25公斤、未经煮熟无杂菌污染的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆75公斤、未经煮熟的无杂菌污染的天门冬浆25公斤和未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉浆25公斤制成混合培养基;将此混合培养基6份共150公斤与二级发酵物400公斤混合,并按每公斤的量用2毫克的比例加入1100毫克VB2;按每公斤的量用20克的比例加入11公斤富含菠萝蛋白酶浆液。再加入10%,计55公斤含量为10×106个/克的高浓度大肠杆菌菌液;5%高温灭菌黄芪浆,计27.5公斤;在PH5、37℃条件下发酵1小时,发酵的同时充入1个小时的氮气和二氧化碳气体,然后在不充上述气体的情况下继续发酵5小时,接着在上述三级混合发酵液中加入10%的富含PRPP的水溶液,计55公斤;10%富含尿嘧啶和胞嘧啶的水溶液,计55公斤;再加入原料量5%的高温,灭菌黄芪浆,计33公斤;并按每公斤的量加入8毫克VB2(计5280毫克VB2);在PH6、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时的氧气,然后在不充氧气的情况下再继续发酵1个半小时。
④四级发酵处理:按三级发酵物中瘦牛肉浆的量加入25公斤未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉、鲤鱼肉混合肉浆(其中瘦牛肉浆为7.5公斤、带皮、带鳞甲鲤鱼浆为17.5公斤),再按10%的比例加入含量为10×106个/克的大肠杆菌菌液69公斤,再将0.14%(996克)畜、禽肠腺菌酶混合悬液加入690公斤混合发酵物中,再按发酵物每公斤的量加入10毫克VB6(计6900毫克VB6),每公斤的量加入20克富含菠萝蛋白酶浆液(共计13.8公斤);原料5%的量加入34.5公斤高温灭菌黄芪浆,在PH5、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时的氧气;然后在不充氧气的情况下继续发酵4个半小时;接着再升温至45℃发酵3个小时,然后将全部四级发酵物(共计1035.5公斤)放入冰柜中冷冻36个小时,让畜、禽肠腺菌酶混合悬液中的酵母菌在发酵中扩繁后的酵母菌群,在低温条件下继续分解原料发酵水解后残留的淀粉、多糖,转变为单糖。最后将全部发酵物在高温高压下加热15分钟,杀灭全部微生物,用高速离心机过滤去渣,将无渣发酵物浓液在126.8℃、1.4公斤/厘米2压力蒸汽条件下(高压消毒器),采用间隙消毒法,连同容器一起作两次消毒,破坏掉微生物繁殖中所产生的全部外毒素与内毒素,即制成富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物(Ca2+·CaM)水溶液的原液。
Claims (3)
1.一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺
,它是将瘦牛肉、鲤鱼和天门冬经四级发酵,再经过滤,灭菌、消毒处理而得,其特征在于:
①、一级发酵处理:选瘦牛肉和鲤鱼为主要原料,天然大豆根瘤类菌体为菌种,高温灭菌大豆浆作培养基;
将大豆根瘤类菌体的根瘤颗粒,经清洗、外膜消毒,粉碎后制成悬液,按1:10的比例将悬液注入大豆浆培养液中,在PH5、30℃条件下发酵4小时,制成一级菌种;从一级菌种开始,在同样条件下,同样按1:10的比例加上高温灭菌大豆浆,再重复做第二次、第三次,制成三级菌种;将30%的瘦牛肉浆与70%的带皮、带鳞甲鲤鱼浆制成一份混合肉浆,在高温高压条件下,作灭菌、变性处理,注入等量的大豆根瘤菌三级菌种,每公斤加入20克富含动植物蛋白酶浆液,在PH5、30℃条件下发酵12小时,然后高温高压灭活20分钟,冷却待用;
②、二级发酵处理:将畜、禽十二指肠、小肠、经清洗、外部消毒后,提取肠膜和肠液制成悬液,即得畜、禽肠腺菌酶混合悬液,再按上述大豆根瘤类菌体悬液制备三级菌种的同样方法,制得畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种;
按未经煮熟无杂菌污染的大豆浆1份:经高温灭菌的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:经高温灭菌的天门冬浆2份的比例,制成混合培养基,倒入经高温灭菌后冷却的一级发酵物中;
再将畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种按0.5:1的比例注入高温灭菌后冷却的混合肉浆一级发酵物中,再按每公斤用10毫克的比例加入VB6,每公斤用2毫克的比例加入VB2,每公斤用20克的比例加入富含动植物蛋白酶浆液,在PH5.6、温度30℃的条件下发酵6个小时;
③、三级发酵处理:将未经煮熟的无杂菌污染的大豆浆1份:将未经煮熟无杂菌污染的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:未经煮熟的无杂菌污染的天门冬浆1份:未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉浆一份,制成混合培养基;将此混合培养基6份与二级发酵物18份混合,并按每公斤的量加入2毫克VB2,按每公斤的量加入20克富含动植物蛋白酶浆液,再加入10%含量为10×106个/克的高浓度大肠杆菌菌液,及原料量5%的高温灭菌黄芪浆,在PH5、37℃条件下发酵1小时,发酵的同时充入1个小时的氮气和二氧化碳气体,然后在不充上述气体的情况下,继续发酵5小时,按着在上述三级混合发酵液中加入10%的富含PRPP的水溶液,10%富含尿嘧啶和胞嘧啶的水溶液,再加入原料量5%的高温灭菌黄芪浆,并按每公斤的量加入8毫克VB2在PH6、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时的氧气,然后在不充氧气的情况下再继续发酵1个半小时;
④、四级发酵处理:按三级发酵物中瘦牛肉浆的量加入比例为3:7的未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉和带皮、带鳞甲鲤鱼肉混合肉浆;再按10%的比例加入含量为10×106个/克的大肠杆菌菌液,再将0.14%畜、禽肠腺菌酶混合悬液加入混合发酵物中,再按发酵物每公斤的量加入10毫克VB6,每公斤的量加入20克富含动植物蛋白酶浆液,再加入原料量5%的高温灭菌黄芪浆,在PH5、37℃条件下发酵1个半小时,发酵的同时充入1个半小时氮气;然后在不充氮气的情况下继续发酵4个半小时;接着再升温至45℃发酵3个小时,然后将全部四级发酵物放入冰柜中冷冻36个小时,将畜、禽肠腺菌酶混合悬液中的酵母菌在发酵中扩繁后的酵母菌群,在低温条件下继续分解原料发酵水解后残留的淀粉、多糖,转变为单糖;最后将全部发酵物在高温高压条件下加热15分钟,杀灭全部微生物,冷却后过滤去渣,再在126.8℃、1.4公斤/厘米2的高温高压条件下,破坏掉微生物繁殖中所产生的全部外毒素与内毒素,即得富含CTP和Ca2+·CaM水溶液的成品。
2.根据权利要求1所述一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺,其特征在于:高温高压条件为:温度>80℃;压力>0.5公斤/厘米2。
3.根据权利要求1所述一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺,其特征在于:动植物蛋白酶包括:菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、猪或其它的动物的胃蛋白酶、动物胰蛋白酶。
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- 2010-07-02 CN CN2010102162619A patent/CN101850050B/zh active Active
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